一种加米霉素降解杂质的制备方法 |
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| 申请号 | CN202310605133.0 | 申请日 | 2023-05-26 | 公开(公告)号 | CN116789722A | 公开(公告)日 | 2023-09-22 |
| 申请人 | 浙江国邦药业有限公司; | 发明人 | 夏文文; 朱庆国; 邱财运; 蔡一凡; 林志浩; 单继雷; 周志奎; | ||||
| 摘要 | 本 申请 提供一种加米霉素降解杂质的制备方法，属于糖类衍 生物 技术领域。以钯 碳 等作为催化剂，加米霉素的醇溶液在40～70℃反应后，过滤，滤液浓缩至干，加入乙酸乙酯/正庚烷结晶得到粗品，粗品过柱分离，再浓缩至干，即得降解杂质JM‑6。JM‑6加入酰化 试剂 （ 甲酸 甲酯或甲酸乙酯），有机 碱 反应，经浓缩、中和、结晶后分离出固体，即为杂质JM‑7。将上述降解杂质作为标准品使用，可以有效实现加米霉素 质量 的监控。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种加米霉素降解杂质的制备方法，其特征在于，催化剂存在情况下，加米霉素的醇溶液在40～70℃反应后，过滤，滤液浓缩至干，加入乙酸乙酯/正庚烷结晶得到粗品，粗品过柱分离，再浓缩至干，即得降解杂质，降解杂质结构式如下： |
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| 说明书全文 | 一种加米霉素降解杂质的制备方法技术领域背景技术[0002] 加米霉素是一种新型的半合成MALs(大环内酯类抗生素)兽用抗生素，通过抑制敏感菌RNA依赖性蛋白合成而起到杀菌作用。该药分别于2007年、2010和2011年被欧洲药品局(EMA)、加拿大保健产品与食品管理局(HPFB)和美国食与药品管理局(FDA)批准用于防治因巴氏杆菌、支原体、睡眠嗜组织菌、溶血性曼氏杆菌等引起的牛呼吸道疾病(BRD)。加米霉素作为新一代大环类脂类抗菌药，具有给药吸收快、肺部药物浓度高、抗菌活性强、毒性低以及动物可食性组织残留少等优点，具有广阔的临床应用前景。 [0003] 其结构为： [0004] [0005] 原研梅里亚公司在专利US8314218B2中披露了加米霉素的合成路线，由(Z)‑红霉素A肟在磺酰化试剂中重排生成亚胺醚，再在极性非质子溶剂中，铂或钯的催化剂作用下，氢化还原成去丙基加米霉素(本文简称加米胺)，然后加米胺与丙醛缩合，在钯、铑或铂的催化剂作用下，加氢还原生成加米霉素。该专利中主要罗列了一些加米霉素合成中的中间体的专属性分离，但对主要降解杂质未作介绍。 [0006] CN201510087675.9介绍了一种加米霉素的一种降解杂质，与普遍的大环内酯化合物性质相近，加米霉素在酸性条件下容易出现主环3位脱克拉定糖的杂质。其制备方法也主要是将加米霉素放入高压釜，氮气保护下，加酸(控制pH0.5～5)后反应，再经后处理及提纯，得到相应的脱克拉定糖的杂质。 [0007] CN201710831919.9介绍一种加米霉素有关物质的检测方法，其中专属性研究包含的主要是加米霉素合成中的各中间体及一些脱糖、主环脱甲基等杂质。 [0008] 上述专利中均未公开加米霉素与稳定性研究关联的杂质，这对于产品质量控制存在较大风险；由浙江国邦药业有限公司申请的专利CN202210196369.9在相应杂质专属性实验中，披露了杂质JM‑6、JM‑7的结构，但未对杂质JM‑6、JM‑7的产生来源及制备方法进行介绍，无法实现杂质JM‑6及JM‑7的定量监控。发明内容 [0009] 有鉴于此，本申请提供一种加米霉素降解杂质的制备方法，基于提升产品质量、降低API或药物成分降解的风险，以加米霉素稳定性实验中存在的两种杂质JM‑6、JM‑7为目标，对杂质JM‑6、JM‑7进行制备合成，从而确定上述杂质的来源，实现加米霉素质量的精准管控。 [0010] 具体地，本申请是通过以下方案实现的： [0011] 一种加米霉素降解杂质的制备方法，将加米霉素溶于低级醇溶剂中，加入催化剂，通入压缩空气，升温至40～70℃进行反应，待反应毕，过滤，滤液浓缩至干，加乙酸乙酯/正庚烷结晶，得JM‑6粗品，经硅胶柱分离后浓缩至干，得到杂质4N’‑脱甲基杂质(德胺糖N‑脱甲基)，记作杂质JM‑6，杂质JM‑6的结构式如下： [0012] [0013] 上述方法以加米霉素的醇溶液为反应底物，氧化N‑脱甲基得到JM‑6，该杂质主要来源于加米霉素在氧化条件(主要氧自由基进攻)下发生N‑脱甲基，，经反应、结晶、柱分离后得到杂质JM‑6，纯度较高，HPLC可以达到94％以上，将其作为对照品使用，可以有效控制加米霉素的质量。 [0014] 进一步的，作为优选： [0015] 所述低级醇为C1～C4醇，更优选的，所述低级醇为异丙醇或仲丁醇。 [0017] 所述通入压缩空气的压力为，使反应在密闭的高压反应中进行。 [0018] 所述过柱分离的洗脱溶剂为丙酮/乙酸甲酯，实现固体纯化。 [0019] 将所述杂质JM‑6进行酰化反应：杂质JM‑6溶于杂质中，再加入加入酰化试剂、有机碱，升温至40～120℃，密闭反应至JM‑6基本转化完全后，回收低沸点溶剂，用冰乙酸等中和所剩的碱以调节pH，再加水析晶，过滤洗涤，烘干，得到淡黄色固体粉末，主要成分为4N’‑脱甲基甲酰化杂质(德胺糖N‑脱甲基甲酰化)，记作杂质JM‑7，固体粉末中JM‑7含量＞90％。 [0020] 杂质JM‑7的结构式为： [0021] [0022] 上述反应优选在高压釜中密闭中进行，酰化反应反应温度为40～120℃，优选90～110℃。溶剂采用极性较高的试剂，如DMF。酰化试剂选用甲酸甲酯或甲酸乙酯。有机碱选用脂肪叔胺、醇钠或醇钾等，优选三乙胺或二异丙基乙胺。 [0023] 上述过程可以采用下述反应式表述： [0024] [0025] 本案通过化学合成直接高效地制备化合物杂质JM‑6，再在JM‑6的基础上进一步酰化合成杂质JM‑7，该方案提供两种纯度较高的杂质，可以满足对照品/标准品的要求，也填补了加米霉素杂质研究的空白，降低用药风险。 [0027] 图1为实施例1中所制备JM‑6的MS离子碎片图； [0028] 图2为实施例1中所制备JM‑6的1H‑NMR图谱； [0029] 图3为实施例1中所制备JM‑6的13C‑NMR图(f1在8‑23ppm区间)； [0030] 图4为实施例1中所制备JM‑6的13C‑NMR图(f1在56‑80ppm区间)； [0031] 图5为实施例3中所制备JM‑7的MS离子碎片图； [0032] 图6为实施例3中所制备JM‑7的1H‑NMR图谱； [0033] 图7为实施例3中所制备JM‑7的13C‑NMR图。 具体实施方式[0034] 实施例1 [0035] 本实施例进行杂质JM‑6的制备，制备过程如下： [0036] 在反应瓶中加入加米霉素30g、异丙醇300mL，搅拌溶解，再加入10％钯碳3.2g，升温至55℃，搅拌，向反应瓶中持续鼓入压缩空气5h，鼓气期间隔1h补加异丙醇100ml，通气毕，继续保温10h，反应结束。将反应液过滤去除钯碳，滤液减压浓缩至得到油状物，向油状物中加30ml乙酸乙酯、80ml正庚烷，搅拌分散结晶2h，过滤，滤饼减压烘干至恒重，得淡黄色固体15.24g。 [0037] 将上步制备的淡黄色固体5g溶于30ml丙酮中，通过硅胶柱(200目的硅胶作固定相)分离，先用100ml的丙酮洗脱，空白液去除，再用丙酮/乙酸甲酯＝1:1(V/V)的混合溶剂进行洗脱，每隔20ml收集一个组份，HPLC检测，将JM‑6有关物质含量＞90％的组份合并，40℃浓缩至少量液体，再经冻干至恒重，得到白色粉末固体，收集约2.8g，HPLC为94.4％，对产物进行性能测试，结果如图1‑4所示，正离子模式准分子离子峰m/z＝763.6。 [0038] 实施例2 [0039] 本实施例与实施例1的设置相同，区别在于，制备过程中： [0040] 高压釜中投入加米霉素20g、仲丁醇160ml，10％钯碳3.0g，通入压缩空气至反应釜内压力0.4Mpa，升温至60℃，反应12h，排空泄压。将反应液取出过滤，滤液浓缩至少量液体，加150ml乙酸乙酯/正庚烷的混合溶液(乙酸乙酯与正庚烷的体积比V/V＝1：4)，搅拌、析晶，降温到10℃保温2h，过滤，减压烘干，得灰白色JM‑6粗品16.84g。 [0041] 将制得的JM‑6粗品进行柱分离，以丙酮/乙酸甲酯＝1:1(V/V)的混合溶剂进行洗脱，收集JM‑6有关物质＞90％的洗脱组份进行浓缩至油状物，加乙酸甲酯浆化分散，过滤，滤饼减压烘干，得JM‑6的对照品，HPLC含量96.8％。 [0042] 实施例1与实施例2分别在常压和密闭高压的容器中反应，底物均有较多比例转化成杂质JM‑6，由于JM‑6与加米霉素性质接近，通过常规方式不能有效分离，粗品纯度达不到标准品使用要求，需进一步经柱分离纯化后得到目标结构，并达到对照品的纯度要求。 [0043] 实施例3 [0044] 本实施例进行杂质JM‑7的制备，制备过程如下： [0045] 取10g按实施例1方案制备的JM‑6至反应瓶，加50mlDMF，搅拌溶清，加入30g的甲酸甲酯、10g三乙胺，升温至50℃，保温反应10h，在50℃下减压浓缩掉低沸点组份，降温至20℃，加100ml去离子水，乙酸调节pH至9.8，搅拌2h，过滤，滤饼用去离子水洗涤，减压烘干至恒重，得淡黄色固体7.56g，HPLC含量95.6％，对产物进行性能测试，结果如图5‑7所示，正离子模式准分子离子峰m/z＝791.6。 [0046] 实施例4 [0047] 本实施例进行杂质JM‑7的制备，制备过程如下： [0048] 取10g按实施例1方案制备的JM‑6至高压釜中，加50mlDMF，搅拌溶清，加入10g二异丙基乙胺、20g甲酸乙酯，密闭，升温至96℃，保温5h，降温，放空。在45℃下减压浓缩至体系基本无馏分，降温至10℃，滴加3％的冰乙酸水溶液100g，测定pH约为10，搅拌2h，过滤，滤饼用去离子水洗涤，减压烘干至恒重，得类白色固体8.62g，HPLC含量96.8％。 [0049] 通过实施例3和例4的制备方法，所得杂质JM‑7的含量＞95％，可以作为对照品使用；与实施例1、2的相同条件(常压、高压)方法相比，本案纯度更高、杂质含量在95％以上。 |
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