Semi-synthetic methods and novel compounds

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

本発明は合成法に関し、特に本発明は半合成法に関する。

【０００２】

【従来の技術】

欧州特許出願第309,477号は、エクテイナシジン729, 743 745 759A, 759B及び
770に関する。 エクテイナシジン化合物は、殺菌特性及び他の有用な特性を有することが開示されている。 エクテイナシジン743は、抗腫瘍剤として現在臨床試験に付されている。 エクテイナシジン743は、下式（I）の複雑なトリス(テトラヒドロイソキノリンフェノール)構造を有する：

【０００３】

【化１８】

【０００４】 それは現在、海洋尾索類Ecteinascidin turbinataの抽出物から単離することにより調製されている。 収率は低く、代替的な調製方法が求められている。 エクテイナシジン化合物を生産する合成法は、米国特許第5,271,362号に記載されている。 クレームされた方法は長く複雑であり、エクテイナシジン743に到達する合成の流れにおける各工程を記載するのに３８の実施例が存在する。 米国特許第5,721,362号の請求項２５は、我々が中間体11またはInt-11と名付けた所定の式(11)の中間体フェノール化合物に向けられている。 それは以下の、
ビス(テトラヒドロイソキノリンフェノール)構造（II）を有する：

【０００５】

【化１９】

【０００６】 式中、MOMはメトキシメチル置換基であり、TBDPSは3,5-t-ブチルジフェニルシリル置換基である。

【０００７】 中間体11から、別の興味深い抗腫瘍剤、フタラシジンを合成することが可能である。 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 3496-3501, 1999参照。 フタラシジンは、下式（III）のビス(テトラヒドロイソキノリンフェノール)誘導体である：

【０００８】

【化２０】

【０００９】 エクテイナシジン743において、1,4架橋は下式（IV）の構造を有する：

【００１０】

【化２１】

【００１１】 他の周知のエクテイナシジンは、異なって架橋された環式システムを有する化合物を含み、エクテイナシジン722及び736では、架橋は下式(V)の構有し：

【００１２】

【化２２】

【００１３】 エクテイナシジン583及び597では、架橋は下式(VI)の構造を有し：

【００１４】

【化２３】

【００１５】 エクテイナシジン594及び596では、架橋は下式(VII)の構造を有する：

【００１６】

【化２４】

【００１７】 これら及び関連化合物の複雑な構造は、J. Am. Chem. Soc. (1996) 118, 9017
-9023に示されている。 この文献は参考として取り込まれる。

【００１８】 架橋された環式システムを欠いたさらなる化合物が周知である。 それらはビス
(テトラヒドロイソキノリンキノン)抗腫瘍−抗微生物抗生物質サフラシン及びサフラマイシン、並びに培養微生物または海綿から単離された海洋天然産物レニエラマイシン及びゼストマイシンを含む。 それらは全て、共通のダイマー状テトラヒドロイソキノリン炭素骨格を有する。 これらの化合物は、芳香環の酸化パターンを参考にして、I型からIV型の４種の型に分類できる。 I型はダイマー状イソキノリンキノンであり、このクラスの化合物で最も一般的な下式(VIII)のシステムを有する。 以下の表１参照。

【００１９】

【化２５】

【００２０】

【表１】

【００２１】

【化２６】

【００２２】 I型芳香環は、微量構成成分としてStreptomyces lavendulaeから単離されるサフラマイシンA、B及びC；G及びH；及びSで見られる。 シアノキノンアミドと称されるサフラマイシンAのシアノ誘導体は、日本国特許公表公報JP-A2 59/225189及び60/084288から周知である。 サフラマイシンY ₃ 、Yd ₁ 、Ad ₁及びYd ₂は、培養培地の適切な補給を使用して配向的な生合成によりS. Lavendulaeによって生産された。 その他のC-14に対して一つの単位のC-25で窒素原子を結合することによって形成されたサフラマイシンY _2b及びY _2b-dダイマーもまた、S. Lavendulaeの補給された培養培地において生産されている。 サフラマイシンAR ₁ (=AH ₂ )は、Rhodoco
ccus amidophilusによって生産されるC-25でのサフラマイシンAの微生物還元産物であり、エピマーの1:1混合物として水素化ホウ素ナトリウムによるサフラマイシンAの非立体選択的化学的還元、引き続きクロマトグラフィー分離[他のアイソマーAH ₁はあまり極性ではない]によって調製される。 さらなる還元産物サフラマイシンAR3、21-デシアノ-25-ジヒドロ-サフラマイシンA(=25-ジヒドロサフラマイシンB)は、同様の微生物変換によって生産された。 Nocardia種を使用するサフラマイシンAの微生物変換の別のタイプによりサフラマイシンBが生産され、My
cobacterium社によるさらなる還元によりサフラマイシンAH ¹ Acが生産された。 サフラマイシンAH ₂とAH ₁の25-O-酢酸塩もまた、生物学的研究のため化学的に調製されている。 下式(X)のI型化合物はまた、海洋海綿から単離されている。 表２参照。

【００２３】

【化２７】

【００２４】

【表２】

【００２５】 レニエラマイシンADは、生物学的に関連するモノマーイソキノリンレニエロンと関連化合物と共に、メキシコで収集された海綿、Renisra種の抗菌抽出物から単離された。 レニエラマイシンAの構造は、C-3、C-11及びC-13での逆の立体化学で最初に登録された。 しかしながら、Palauで収集された同じ海綿から単離された、新規な関連化合物レニエラマイシンE及びFについての¹ H NMRデータの注意深い試験により、レニエラマイシンの環接合部がサフラマイシンのものと同一であることが明らかとなった。 この結果は、レニエラマイシンAからDについて以前に登録された立体化学が、サフラマイシンものと同一であるに違いないという結論を導いた。 ゼストマイシンは、Sri Lancan水から収集された海綿、Xestospongia種から見出された。

【００２６】 還元ヒドロキノン環を有する下式(XI)のII型化合物は、S.lavendulaeから単離されたサフラマイシンD及びF、並びにMyxococcus Xanthusから単離されたサフラマイシンMx-1及びMx-2を含む。 表３参照。

【００２７】

【化２８】

【００２８】

【表３】

【００２９】 III型骨格は、培養Pseudomonas fluorescensから単離されたサフラシンA及びB
で見出される。 下式(XII)のこれらの構成物質は、テトラヒドロイソキノリン−
キノンサブユニットとテトラヒドロイソキノリンフェノールサブユニットより成る。

【００３０】

【化２９】

【００３１】 式中、R ²¹は、サフラシンAでは-Hであり、サフラシンBでは-OHである。

【００３２】 サフラマイシンRは、IV型骨格に分類される唯一の化合物であり、これもS. la
vendulaeから単離された。 下式(XIII)のこの化合物は、フェノール性酸素の一つでグリコールエステル側鎖を有するヒドロキノン環より成り、その穏やかな毒性のため、おそらくサフラマイシンAのプロドラッグである。

【００３３】

【化３０】

【００３４】 これらの全ての周知の化合物は、下式(XIV)の構造に示されるように、５個の環(A)から(E)の融合システムを有する：

【００３５】

【化３１】

【００３６】 環A及びEは、エクテイナシジン及びいくつかの他の化合物においてフェノール性であり、他の化合物、特にサフラマイシンにおいては、環A及びEはキノン性である。 周知の化合物として、環B及びDはテトラヒドロであり、環Cはパーヒドロである。

【００３７】

【発明が解決しようとする課題】

周知の化合物の５個の環システムを有する新規な活性化合物に対する必要性、
並びにエクテイナシジン化合物及び関連化合物に対する代替的な合成経路に対する必要性が残っている。 上記合成経路は、周知の抗腫瘍剤に対するより経済的な活路、並びに新規な活性化合物の調製の可能性を提供するであろう。

【００３８】

【課題を解決するための手段】

一つの特徴点として、本発明は、半合成的合成における、キノンアミドとも称される周知の化合物、サフラシンBの使用に向けられる。

【００３９】 より一般的には本発明は、天然のビス(テトラヒドロイソキノリン)アルカノイドから開始する、エクテイナシジンまたは他のテトラヒドロイソキノリンフェノール化合物の中間体、誘導体及び関連構造の形成のための半合成方法に関する。
上記半合成方法のための適切な開始物質は、異なる培養ブロスから入手可能なサフラマイシン及びサフラシン抗生物質のクラス、さらに買いよう海綿から入手可能なレイネラマイシン及びゼストマイシン化合物のクラスを含む。 開始化合物についての一般式(XV)は、以下の通りである：

【００４０】

【化３２】

【００４１】 式中、 R ¹は-CH ₂ -NH-CO-R ^25a R ^25b R ^25c （式中R ^25a及びR ^25bケト基を形成し、または一方は-OH、-NH ₂若しくは-OCOCH ₃であって、他方は-CH ₂ COCH ₃ 、-H、-OHまたは-OCICH ₃であり、但しR ^25aが-OH若しくは-NH ₂である場合、R ^25bは-OHではなく、並びにR ^25cは-H、-CH ₃若しくは-CH ₂ CH ₃である）のようなアミドメチレン基であり、またはR ¹は-CH ₂ -O-CO-R（式中RはC(CH ₃ )=CH-CH ₃若しくは-CH ₃である）のようなアシルオキシメチレン基である； R ⁵及びR ⁸は独立に-H、-OHまたは-OCOCH ₂ OHから選択され、またはR ⁵及びR ⁸は両方ケトであり、環Aはp-ベンゾキノン環である； R ^14a及びR ^14bは両方-Hであり、または一方が-Hで他方が-OH、-OCH ₃若しくは-OCH ₂ CH ₃であり、またはR ^14a及びR ^14bは共にケト基を形成する； R ¹⁵及びR ¹⁸は独立に-H若しくは-OHから選択され、またはR ⁵及びR ⁸は両方ケトであり、環Aはp-ベンゾキノン環である； R ²¹は-OHまたは-CNである。

【００４２】 これらのクラスの化合物のより一般的な式は、以下に提供される：

【００４３】

【化３３】

【００４４】 式中、R ₁ 、R ₂ 、R ₃ 、R ₄ 、R ₅ 、R ₆ 、R ₇ 、R ₈ 、R ₉ 、R ₁₀によって定義される置換基は、それぞれ独立にH、OH、OCH ₃ 、CN、=O、CH ₃より成る群から選択される；式中X
は上述の天然産物において含まれる別個のアミドまたはエステル官能性である；
式中各点線の円は、一つ、二つまたは三つの任意の二重結合を表す。 かくして本発明に従って、我々はここで、中間体11を含む中間体の生産のための、並びにかくしてエクテイナシジン化合物、及びフタラシジンとさらなる化合物の生産のための半合成経路を提供する。 本発明の半合成経路はそれぞれ、所望の産物に到達するための数多くの可逆的工程を含む。 各工程自体が、本発明に従った方法である。 本発明は、例示される経路に制限されず、例えば適切なように可逆的工程の順序を変えた別の経路も提供されるであろう。

【００４５】 特に本発明は、以下の一般式(XVI)の21-シアノ開始物質の提供に関する。

【００４６】

【化３４】

【００４７】 式中、R ¹ 、R ⁵ 、R ⁸ 、R ^14a 、R ¹⁵及びR ¹⁸は定義された通りである。

【００４８】 21位で別の置換基を有する式(XVI)の他の化合物も、考え得る開始物質を表す。 一般的に、R21がヒドロキシ基である式(XV)の化合物の21-ヒドロキシ基の求核置換によって生産可能ないずれかの誘導体が候補である。 適切な21置換基の例として、制限されることなく以下のものが含まれる： メルカプト基； アルキルチオール基（１から６の炭素原子を有するアルキル基）； アリールチオール基（６から１０の炭素原子を有し、例えば１から６の炭素原子を有するアルキル基、１から６の炭素原子を有するアルコキシ基、ハロゲン原子、メルカプト基、及びニトロ基で置換されたまたは置換されているアリール基）
； アミノ基； モノまたはジアルキルアミノ基（１から６の炭素原子を有するアルキル基または各アルキル基）； モノまたはジアリールアミノ基（アリールチオ基に関して上述のものであるアリール基または各アリール基）； 式-C(R ^a )(R ^b )-C(=O)R ^cのα-カルボニルアルキル基、式中、R ^a及びR ^bは水素原子、１から２０の炭素原子を有するアルキル基、アリール基（アリールチオ基に関して上述の通り）、及びアラルキル基（ここで１から４の炭素原子を有するアルキル基が、アリールチオ基に関して上述のアリール基によって置換されている）
から選択され、但しR ^a及びR ^bの一方は水素原子である； R ^cは水素原子、１から２０の炭素原子を有するアルキル基、アリール基（アリールチオ基に関して上述の通り）、アラルキル基（ここで１から４の炭素原子を有するアルキル基が、アリールチオ基に関して上述のアリール基によって置換されている）、１から６の炭素原子を有するアルコキシ基、アミノ基、または上述のモノまたはジアルキルアミノ基から選択される。 かくしてより一般的な特徴点として、本発明は、第一の区邸が求核試薬を使用して21誘導体を形成することである方法に関する。 我々は上記化合物を21-Nuc化合物と称する。 21-シアノ基の存在は、最終産物のいくつか、特にエクテイナシジン770及びフタラシジンについて必要であり、他の最終産物については、エクテイナシジン74
3または21-ヒドロキシフタラシジンの21-ヒドロキシ基のように、それは別の置換基に容易に変換され得る保護基として機能する。 開始材料としての21-シアノ化合物の適用は、任意に取り出されるまで、確定した合成工程の間で分子を効率的に安定化する。 他の21-Nuc化合物が、この及び他の利点を提供できる。

【００４９】 一つの重要な特徴点として、本発明は、ビスまたはトリス(テトラヒドロイソキノリンフェノール)化合物の調製における、一般式(XVI)の21-シアノ化合物の使用より成る。 調製できる産物は、中間体11のような中間体、及びエクテイナシジン及びフタラシジン、並びに関連構造の新規な及び周知の化合物を含む。 好ましい開始物質は、R ^14a及びR ^14bが共に水素である式(XV)または(XVI)の化合物を含む。 好ましい開始物質はまた、R ¹⁵が水素である式(XV)または(XVI)の化合物を含む。 さらに、好ましい開始材料は、環Eがフェノール環である式(XV)または(XVI)の化合物を含む。 好ましい化合物はさらに、R ⁵ 、R ⁸ 、R ¹⁵及びR ¹⁸の少なくとも一つ、より好ましくは少なくとも二つが水素ではない式(XV)または(XVI
)の化合物を含む。 本発明のための適切な開始物質の例は、サフラマイシンA、サフラマイシンB、
サフラマイシンC、サフラマイシンG、サフラマイシンH、サフラマイシンS、サフラマイシンY ₃ 、サフラマイシンYd ₁ 、サフラマイシンAd ₁ 、サフラマイシンYd ₂ 、
サフラマイシンAH ₂ 、サフラマイシンAH ₂ Ac、サフラマイシンAH ₁ 、サフラマイシンAH ₁ Ac、サフラマイシンAR ₃ 、レニエラマイシンA、レニエラマイシンB、レニエラマイシンC、レニエラマイシンD、レニエラマイシンE、レニエラマイシンF、ゼストマイシン、サフラマイシンD、サフラマイシンF、サフラマイシンMx-1、サフラマイシンMx-2、サフラシンA、サフラシンB、及びサフラシンRを含む。 好ましい開始物質は、R ²¹基である21位においてシアノ基を有する。

【００５０】 特に好ましい特徴点として、本発明は、可逆的工程がサフラシンBに適用される半合成方法を含む：

【００５１】

【化３５】

【００５２】 サフラシンBは、エクテイナシジンと非常に関連する環システムを提供する。
この化合物は、環Eである右側の芳香環において、同じ五環構造と同じ置換基パターンを有する。 またサフラシンBは、ET-743の全合成における合成中間体のいくつか、特に中間体11と非常に緊密な相同性を提供する。 上記中間体は、十分に確立された方法を使用してET-743に転換できる。 それ故、中間体11へのサフラシンBの合成的転換は、ET-743を得るための半合成方法を提供するであろう。 かくして我々は、この化合物サフラシンBから生産された中間体11、及び中間体11から由来する化合物、特にエクテイナシジン化合物を提供する。 我々はさらに、サフラシンBから調製されたフタラシジンを提供する。 本発明はまた、中間体11、フタラシジン、エクテイナシジン化合物、及び本発明の他の中間体の生産における、サフラシンBの使用に関する。 本発明はまた、他の示唆された開始物質から由来するここに記載された化合物、及び上記化合物の生産における当該化合物の使用に関する。

【００５３】 本発明のより好ましい開始物質は、21-シアノ基を有する。 本発明の現在最も好ましい化合物は、下記式２の化合物である。 この化合物は、サフラシンBから直接得られ、半合成方法におけるキーとなる中間体である。

【００５４】

【化３６】

【００５５】 関連する特徴点として、我々は、Pseudomonas fluorescensのサフラシンB生産株の発酵と、シアン化物イオンを使用する培養ブロスの操作によるシアノサフラシンBを提供する。 Pseudomonas fluorescensの好ましい株は、A2-2,FERM BP-14
株であり、それはEP 055,299の方法において使用される。 シアン化物イオンの適切なソースは、シアン化カリウムである。 典型的な操作において、ブロスが濾過されて、過剰なシアン化物イオンが加えられる。 １時間といった適切な間隔の攪拌の後、pHをアルカリ性、いわばpH9.5にし、有機抽出を粗抽出物に与え、それをさらに生成してシアノサフラシンBを得る。

【００５６】 疑いを避けるため、この特許明細書で示される立体化学は、天然の産物の正確な立体化学の我々の理解に基づく。 エラーが指定された立体化学において発見される範囲で、この特許明細書を通じて示された式に適切な補正がなされる必要がある。 さらに、合成が変更できる範囲で、本発明は立体異性体に及ぶ。

【００５７】 本発明の産物は、典型的に下式(XVIIa)：

【００５８】

【化３７】

【００５９】 または下式(XVIIb)を有する：

【００６０】

【化３８】

【００６１】 式中、 R ¹は、任意に保護または誘導化されたアミノメチレン基、任意に保護または誘導化されたヒドロキシメチレン基であり、例えばR ¹基は、式(XV)に定義される； R ⁴は-Hである； または R ¹及びR ⁴は共に下式(IV)、(V)、(VI)または(VII)の基を形成する：

【００６２】

【化３９】

【００６３】 R ⁵は-Hまたは-OHである； R ⁷は-OCH ₃でありR ⁸は-OHである、またはR ⁷及びR ⁸は共に-O-CH ₂ -O-基を形成する； R ^14a及びR ^14bは両者が-Hであり、または一方が-Hで他方が-OH、-OCH ₃若しくは-O
CH ₂ CH ₃であり、またはR ^14a及びR ^14bは共にケト基を形成する；並びに R ¹⁵は-Hまたは-OHである； R ²¹は-H、-OHまたは-CNである； 並びに特にR ⁵がアセチルオキシまたは４までの炭素原子の他のアシルオキシ基であるこれらのアシル誘導体を含む誘導体、及び12位での-NCH ₃ -基が-NH-または-N
CH ₂ CH ₃ -によって置換された誘導体、及び式(VI)の化合物における-NH ₂基が任意に誘導化されている誘導体が含まれる。

【００６４】 式(XVIIa)または(XVIIb)において、R ¹は典型的にアミノメチレン、アミドメチレンであり、またはR ¹とR ⁴で(IV)または(V)基を形成する。 適切なアミドメチレン基は、アラニンから由来する-CH ₂ -NH-CO-CHCH ₃ -NH ₂の式のもの、及び他のアミノ酸、特にD及びL型の両者の、グリシン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、システイン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、リジン、アルギニン、プロリン、セリン、スレオニン、ヒスチジン、及びヒドロキシプロリンから由来する同種の基を含む。 R ¹基についての一般式は、-CH ₂ -NH-aaであり、ここでaaはアシルアミノ酸基を示す。

【００６５】 R ¹基は-NH ₂基でアシル化でき、例えばN-アシル誘導体が-CH ₂ NH ₂及び-CH ₂ -NH-a
a基から形成できる。 アシル誘導体は、N-アシルまたはN-チオアシル誘導体、並びに環状アミドであることもできる。 アシル基は、例えばアルカノイル、ハロアルカノイル、アリールアルカノイル、アルケノイル、ヘテロシクリルアシル、アロイル、アリールアロイル、ハロアロイル、ニトロアロイル、または他のアシル基であることができる。 アシル基は、-CO-R ^aの式で表すことができ、ここでR ^aはアルキル、アルコキシ、アルキレン、アリールアルキル、アリールアルキレン、
アミノ酸アシル、またはヘテロシクリルのような各種の基であっても良く、またはこれらがハロ、シアノ、ニトロ、カルボキシアルキル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、アルキル、アミノ、または置換アミノで置換されたものでも良い。 他のアシル化剤には、アリールイソチオシアナート、特にフェニルイソシアナートのようなイソチオシアナートが含まれる。 R ^aのアルキル、アルコキシ、またはアルキレン基は適切には、１から６または１２の炭素原子を有し、直鎖状、分枝状または環状であっても良い。
アリール基は典型的には、フェニル、ビフェニル、またはナフチルである。 ヘテロシクリル基は、芳香族、または部分的に若しくは完全に不飽和化したものであっても良く、適切には、窒素、硫黄及び酸素から選択された一つ以上のヘテロ原子を有する、４から８の環原子、より好ましくは５または６の環原子を有する。

【００６６】 網羅的なものではないが、典型的なR ^a基は、アルキル、ハロアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシアルキル、アリールアルキレン、ハロアルキルアリールアルキレン、アシル、ハロアシル、アリールアルキル、アルケニル、及びアミノ酸を含む。 例えばR ^a -CO-は、アセチル、トリフルオロアセチル、2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル、イソバレリルカルボニル、trans-3-(トリフルオロメチル)シンナモイルカルボニル、ヘプタフルオロブチリルカルボニル、デカノイルカルボニル、trans-シンナモイルカルボニル、ブチリルカルボニル、3-クロロプロピオニルカルボニル、シンナモイルカルボニル、4-メチルシンナモイルカルボニル、ヒドロシンナモイルカルボニル、若しくはtrans-ヘキセノイルカルボニル、またはアラニル、アルギニル、アスパルチル、アスパラギル、シスチル、グルタミル、グルタミニル、グリシル、ヒスチジル、ヒドロキシプロリル、イソロイシル、ロイシル、リジル、メチオニル、フェニルアラニル、プロリル、セリル、スレオニル、チロニル、トリプトフィル、チロシル、バリル、並びに他のより一般的でないアミノ酸アシル基、並びにフタルイミド及び他の環状アミドであっても良い。 他の例は、掲載された保護基の中で見出されても良い。

【００６７】 -CO-R ^aがアミノ酸から由来し、アミノ基を含む化合物は、それ自体がアシル誘導体を形成できる。 適切なN-アシル化合物は、N-アシル誘導体から形成できるジペプチドを含む。

【００６８】 中間体産物に関する一つの変形例として、環Aは、以下に議論される式(XX)または(XXI)で示される構造を取り込むように修飾される。 中間体に関する別の変形例として、R ¹基は式(XIX)の化合物から誘導される-CH ₂ O-CO-Cfu-CH ₂ -S-Prot ³であっても良く、式中Prot ³及びFuは示された意味を有する。 上記の場合、R ⁷及びR ⁸はオキシメチレンオキシ基を形成する。 R ¹⁸基は通常保護される。 R ²¹は通常シアノである。 好ましくはR ^14a及びR ^14bは水素である。 好ましくはR ¹⁵は水素である。 O-アシル誘導体は適切には脂肪族O-アシル誘導体であり、特に１から４の炭素原子のアシル誘導体であり、典型的には特に5位置でO-アセチル基を有する。

【００６９】 フェノール及びヒドロキシ基のための適切な保護基は、エーテル及びエステルを含み、例えばアルキル、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキル、アルコキシアルコキシアルキル、アルキルシリルアルコキシアルキル、アルキルチオアルキル、アリールチオアルキル、アジドアルキル、シアノアルキル、クロロアルキル、ヘテロシクリック、アリールアシル、ハロアリールアシル、シクロアルキルアルキル、アルケニル、シクロアルキル、アルキルアリールアルキル、アルコキシアリールアルキル、ニトロアリールアルキル、ハロアリールアルキル、アルキルアミノカルボニルアリールアルキル、アルキルスルフィニルアリールアルキル、アルキルシリル、及び他のエーテル、並びにアリールアシル、アリールアルキルカルボナート、脂肪族カルボナート、アルキルスルフィニルアリールアルキルカルボナート、アルキルカルボナート、アリールハロアルキルカルボナート、アリールアルケニルカルボナート、アリールカルバマート、アルキルホスフィニル、アルキルホスフィノチオニル、アリールホスフィノチオニル、アリールアルキルスルホナート、及び他のエステルを含む。 上記の基は、R ¹において上述された基で任意に置換されても良い。

【００７０】 アミンについての適切な保護基は、カルバマート、アミド、及び他の保護基を含み、例えばアルキル、アリールアルキル、スルホ−またはハロ−アリールアルキル、ハロアルキル、アルキルシリルアルキル、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、アルキルアリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、ニトロアリールアルキル、アシルアミノアルキル、ニトロアリールジチオアリールアルキル、ジシクロアルキルカルボキシアミドアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリールアルケニル、ニトロアリールアルケニル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリル、ヒドロキシヘテロシクリル、アルキルジチオ、アルコキシ−
またはハロ−またはアルキルスルフィニルアリールアルキル、ヘテロシクリルアシル、及び他のカルバマート、並びにアルカノイル、ハロアルカノイル、アリールアルカノイル、アルケノイル、ヘテロシクリルアシル、アロイル、アリールアロイル、ハロアロイル、ニトロアロイル、及び他のアミド、並びにアルキル、アルケニル、アルキルシリルアルコキシアルキル、アルコキシアルキル、シアノアルキル、ヘテロシクリル、アルコキシアリールアルキル、シクロアルキル、ニトロアリール、アリールアルキル、アルコキシ−またはヒドロキシ−アリールアルキル、及び多くの他の基を含む上記の基は、R ¹において上述された基で任意に置換されても良い。

【００７１】 上記保護基の例は、以下の表に示される。

【００７２】

【表４】

【００７３】

【表５】

【００７４】

【表６】

【００７５】 サフラシンBは、アラニル側鎖を含む、本発明の一つの特徴点として、我々は、Boc基での遊離アミン基の保護が強力な利点を与えることができることを見出した。

【００７６】 本発明の特定のエクテイナシジン産物は、下式(XVIII)の化合物を含む：

【００７７】

【化４０】

【００７８】 式中、R ¹及びR ⁴は下式(IV)、(V)、(VI)または(VII)の基を形成する：

【００７９】

【化４１】

【００８０】 とりわけ(IV)または(V)基を形成する； R21は-H、-OHまたは-CNであり、とりわけ-OHまたは-CNである； 及びこれらのアシル誘導体、とりわけ5-アセチル誘導体を含む5-アシル誘導体を含む。

【００８１】

【発明の実施の形態】

エクテイナシジン743及び関連化合物の形成 一般的に、21-シアノ開始化合物の、例えば式(XVIII)のエクテイナシジン産物への変換は、以下の工程を含む： a)必要であれば、環Eについてのキノンシステムをフェノールシステムに変換する工程； b)必要であれば、環Aについてのキノンシステムをフェノールシステムに変換する工程； c)環Aについてのフェノールシステムをメチレンジオキシフェノール環に変換する工程； d)環Bにおける１位及び４位を通じて、式(IV)、(VI)または(VII)の架橋スピロシステムを形成する工程；及び e)アシル化のように適切に誘導化する工程。

【００８２】 工程a)の必要であれば、環Eについてのキノンシステムをフェノールシステムに変換する工程は、従来の還元法によって達成できる。 適切な試薬システムは、
パラジウム−炭素触媒を使用する水素であるが、他の還元システムも使用できる。 工程b)の必要であれば、環Aについてのキノンシステムをフェノールシステムに変換する工程は、工程a)と同様であり、詳細には記載しない。 工程c)の環Aについてのフェノールシステムをメチレンジオキシフェノール環に変換する工程は、可能であれば工程b)と共に、いくつかの方法で達成できる。
例えば、キノン環Aは７位でメトキシ置換基において脱メチル化でき、ジヒドロキノンに還元でき、CH2Br2、BrCH2Cl、またはメチレンジオキシ環システムを直接生ずる同様な二価試薬のような適切な求核試薬で、または所望の環に変換できる置換されたメチレンジオキシ環システムを生ずるチオカルボニルジイミダゾールのような二価試薬でトラップできる。 工程d)は、所望の架橋の形成を補助でき、４位でエクセンドキノンメチドを形成し、メチドを1-置換基と反応させ、架橋構造を生ずることが可能な架橋試薬で、１位での適切な置換によって典型的に達成される。 好ましい架橋試薬は下式(X
IX)のものである：

【００８３】

【化４２】

【００８４】 式中、Fuは-NHProt ^4aまたはOProt ^4bのような保護された官能基を示し、Prot ³
は保護基であり、点線は任意の二重結合を示す。

【００８５】 適切にはメチドは、環A及びBの結合部で１０位でヒドロキシ基を初めに導入することによって形成され、下式(XX)の部分構造を与える：

【００８６】

【化４３】

【００８７】 またはより好ましくは下式(XXI)の部分構造を与える：

【００８８】

【化４４】

【００８９】 式中、R”基は、式(IV)、(V)、(VI)または(VII)の所望の基について選択される。上記の初めの二つの基については、R”基は典型的に-CHFu-CH ₂ -Sprot ³から得られる。 次いで保護基が除去され、適切なように修飾され、所望の化合物が得られる。

【００９０】 工程d)の典型的な方法は、米国特許第5,721,362号において提供され、上記特許は参考として取り込まれる。 特定の参照は、上記米国特許の第８欄、工程(1)
及び実施例３３での記載と関連する記載に存する。 工程e)の誘導化は、例えばR ^a -CO-基でのアシル化、並びに12-NCH ₃基の12-NHまたは12-NCH ₂ -CH ₃への変換を含んでも良い。 上記変換は、利用可能な方法を使用して他の工程の前後で達成できる。

【００９１】 説明として、上述の方法より短く単純なET-743を作成する方法を生ずる、式２
のシアノサフラシンB化合物のET-743への変換が実行可能である。 シアノサフラシンBは、中間体25に転換できる；

【００９２】

【化４５】

【００９３】 そしてこの誘導体から、Et-743に後に転換可能な数多くのシステイン誘導体を導入することが可能である。 好ましいシステイン誘導体は、以下の二つの化合物によって例示される：

【００９４】

【化４６】

【００９５】 化合物29を使用するET-743を調製するレトロ合成分析は、スキームIにおいて表される：

【００９６】

【化４７】

【００９７】 スキームI 上述のスキーム１に引き続き、21の直接的な工程でET-743を得ることが可能である。 この方法は、以下の連続的な反応を通じてシアノサフラシンBを中間体25
に変換する；(1)環Aに配置されたメトキシ基の除去；(2)環Aの還元と一つのポットにおけるメチレン−ジオキシ基の形成；(3)炭素１に配置されたアミン官能基の加水分解；(4)生成アミン基のヒドロキシル基への転換。 さらに上記方法は、
システイン残基29を直接使用して化合物25の環Bにおける位置１で第一級アルコール官能基の保護及び脱保護を避け、中間体27を形成する。 システイン誘導体29
は、β-β-β-トリクロロエトキシカルボニル保護基でアミン基を保護し、存在するアリル及びMOM基と適合性を有させる。 中間体27は直接酸化され環状化される。 後の合成の段階における異なる脱保護ストラテジーと共にこれらの環境は、
反応経路を新規で、米国特許第5,271,362号の方法より産業上の開発に改良的なものとする。

【００９８】 2-シアノ化合物の中間体25への変換は、通常以下の工程を含む（スキームII参照）： tert-ブトキシカルボニルアンヒドリドで２を反応することによる、式14の保護化合物を形成； アセトニトリルにおけるブロモメチルメチルエーテルとジイソプロピルエチルアミンでの反応による、式15の二重保護化合物への14の変換； 水酸化ナトリウムのメタノールセイヨウ液での反応による、15におけるキノンのメトキシ基の選択的な除去での、式16の化合物の取得； 以下の好ましい流れを使用することによる、式18のメチレン−ジオキシ化合物への16の変換：(1)化合物16のキノン基を、水素環境下で10%Pd/Cで還元する；(2)
水素環境下でブロモクロロメタンと炭酸セシウムで反応することにより、ヒドロキノン中間体を、式17のメチレンジオキシ化合物に変換する；(3)遊離ヒドロキシル基をOCH ₂ R基として保護することにより、式18の化合物に変換する。 この反応は、BrCH2R及び炭酸セシウムで実施され、ここでRはアリール、CH=CH2、OR-等であっても良い； ジオキサンにおけるHClの溶液での反応による、18のtert-ブトキシカルボニル及びメチルオキシメチル保護基の除去で、式19の化合物の取得。 この反応は、ジクロロメタンにおけるトリフルオロ酢酸の溶液と18を混合することによって達成される； フェニルイソチオシアネートと19を反応することにより、式20のチオウレア化合物の形成； ジオキサンにおける塩化水素の溶液との反応による、式21のアミン化合物への式
20の化合物の変換； トリクロロエチルクロロホルマートとピリジンでの反応による、N-Troc誘導体22
への式21の化合物の変換； ブロモメチルメチルエーテルとジイソプロピルエチルアミンでの22の反応による、式23の保護化ヒドロキシ化合物の形成； 酢酸と亜鉛での反応による、NH誘導体24への式23の化合物の変換； 酢酸における亜硝酸ナトリウムでの反応による、式25のヒドロキシ化合物への式
24の化合物の変換。 別法として、酢酸とアセトニトリルの混合物における四酸化窒素を使用でき、その後水酸化ナトリウムでの処理が可能である。 また酢酸無水物−酢酸の混合物を亜硝酸ナトリウムで使用でき、その後水酸化ナトリウムで処理する。

【００９９】

【化４８】

【０１００】

【化４９】

【０１０１】 スキームII システイン誘導体29を使用するET-743への中間体25化合物の変換は、以下の工程を含む（スキームIII参照）： (S)-N-2,2,2-トリクロロエトキシカルボニル-S-(9H-フルオレン-9-イルメチル)
システイン29での第一級ヒドロキシル官能基の保護による、誘導体30への式24の化合物の変換； トルブチルチンヒドリド及びジクロロパラジウム-ビス(トリフェニルホスフィン
)でのアリル基の切断による、フェノール誘導体31への式30の保護化化合物の変換； 低温でのベンゼンセレン酸無水物での酸化による、式32の化合物への式31のフェノール化合物の変換； 以下の工程による、ラクトン33への式32のヒドロキシ化合物の変換：(1)２等量のトリフリックアンヒドロイドと５等量のDNSOと、式32の化合物を反応させる工程；(2)引き続き８等量のジイソプロピルエチルアミンと反応させる工程；(3)引き続き４等量のt-ブチルアルコールと反応させる工程；(4)引き続き７等量の2-t
ert-ブチル-1,1,3,3-テトラメチルグアニジンと反応させる工程；(5)引き続き１
０等量の酢酸無水物と反応させる工程； TMSIでのMOM保護基の除去による、ヒドロキシル可能物へのラクトン化合物33の変換； Zn/AcOHでの反応による、化合物35への式34の化合物のN-トリクロロエトキシカルボニル基の切断； N-メチルピリジニウムカルボキサルデヒドクロリド、引き続きDBUでの反応による、アミン化合物35の対応するα-ケトラクトン化合物への変換； 3-ヒドロキシ-4-メトキシフェニルエチルアミンで式36の化合物を反応させることによる、ET-770の形成； can/H ₂ Oの混合物における硝酸銀での反応による、ET-770のET-743への変換。

【０１０２】

【化５０】

【０１０３】

【化５１】

【０１０４】 スキームIII 中間体25をET-743に変換する上述の経路は、例えば2-メトキシメチルオキシ-3
-(9H-フルオレン-9-イルメチル)-チオ-プロペン酸の名称を有する化合物37といった他のシステイン誘導体を使用して、従来通り変更できる。 この化合物は、エノールエーテルの形態でケト基をすでに取り込んでいる一方、他のシステイン類似体においては、55-60%の穏やかな収率でのトランスアミン化反応を通じて、ケト基に後に変換されるアミノが存在する。 それ故化合物37の使用は、トランスアミン化工程が避けられるため、直鎖状合成の収率を実質的に増大可能である。

【０１０５】 システイン誘導体37を使用した中間体化合物25のET-743への変換は、変換(f)
と(g)を除いてシステイン誘導体29と同じ態様で、同じ試薬で実施できる。 反応系列は、以下のスキームで例示される（スキーム４）。

【０１０６】

【化５２】

【０１０７】 スキームIV 化合物38は、米国特許第N 5,721,362号に記載された中間体12を反応させることによって形成でき、中間体37は当該特許に記載された経路の改良を提供する。

【０１０８】 フタラシジン及び関連化合物の形成 本発明において、キーとなるクラスの産物はフタラシジンを含み、以下の一般式(XX)を有する：

【０１０９】

【化５３】

【０１１０】 式中、R ¹はアミドメチレン基であり；R ⁵は小さいオキシ側鎖であり；及びR ²¹はシアノ基またはヒドロキシ基である。 フタラシジンについては、R ¹はフタルイミドメチレン基であり；R ⁵はアセトキシ基であり；及びR ²¹はシアノ基である。 R ¹
についての他の基には、モノ及びジ-N-置換アミドメチレン、並びに他の環状アミドメチレンが含まれ、R ⁵についての他の基には、さらにC ₁ -C ₄アシル基、並びにC ₁ -C ₄アルキル基が含まれる。

【０１１１】 21-シアノ化合物の、式(XX)のフタラシジンまたは関連産物への変換は、通常以下の工程を含む： a) 必要であれば、環Eについてのキノンシステムのフェノールシステムへの変換； b) 環Aにおける５位での-R ⁵基の形成； c) 環Bにおける１位でのR ¹基の形成； d) 必要であれば、環Aについてのキノンシステムのフェノールシステムへの変換； e) 環Aについてのフェノールシステムのメチレンジオキシフェノール環への変換。 これらの工程は、エクテイナシジンの形成で示された工程と多くの類似性を有する。 工程c)は典型的に１位で-CH ₂ NH ₂基の形成とそのアシル化を含む。

【０１１２】 フタラシジンは、シアノサフラシンBの中間体25への変換において記載された中間体を使用して調製できる。 例えば中間体21及び17は、フタラシジンの調製のための適切な開始物質である。

【０１１３】 スキームVで上記示されたように、中間体21から開始するフタラシジンの合成形成の方法は、以下の連続的な工程を含む： ジクロロメタン及びカルボニルジイミダゾールにおけるフタル酸無水物での反応による、式27の化合物への21の変換； トリブチルチン及びジクロロパラジウムビス(トリフェニルホスフィン)または塩基性媒体での反応、引き続きアセチルクロリドでの反応による、フタラシジンへの27の変換。

【０１１４】

【化５４】

【０１１５】 スキームV スキームVIで上記示されたように、中間体17から開始するフタラシジンの合成形成の方法は、以下の連続的な工程を含む： アセチルクロリドとピリジンでの式17の化合物のヒドロキシル基のアセチル化による、式42のアセチル化中間体化合物の取得； ジオキサンにおけるHClでの反応による、42のtert-ブトキシカルボニル及びメチルオキシメチル保護基の除去による、式43の化合物の取得。 この反応はまた、ジクロロメタンにおけるトリフルオロ酢酸の溶液との42の混合によっても達成される； フェニルイソチオシアネートでの43の反応による、式44のチオウレア化合物の形成； ジオキサンにおける塩化水素の溶液での反応による、式45のアミン化合物への式
44の化合物の変換； ジクロロメタン及びカルボニルジイミダゾールにおけるフタル酸無水物の反応による、フタラシジンへの45の変換。

【０１１６】

【化５５】

【０１１７】 スキームVI 中間体11及び関連中間体の形成 レトロ合成分析は、以下の工程に記載される。

【０１１８】

【化５６】

【０１１９】 本発明において、キーとなるクラスの中間体は中間体11を含み、以下の一般式
(XXI)を有する：

【０１２０】

【化５７】

【０１２１】 式中、Prot ¹及びProt ²は、ヒドロキシ保護基であり、好ましくは異なる。 Prot ¹
はより一般化されたものから選択される、Prot ²はより一般化されたものから選択される。 中間体11自体について、Prot ¹はメトキシメチル基であり、Prot ²はt-
ブチルジフェニルシリル基である。 21-シアノ化合物の式(XXI)の中間体11または関連中間体への変換は、以下の工程を通常含む： a) 必要であれば、環Eについてのキノンシステムのフェノールシステムへの変換； b) 環Eにおける１８位での-OProt ¹基の形成； c) 環Bにおける１位での-CH2-OProt ²基の形成；及び d) 必要であれば、環Aについてのキノンシステムのフェノールシステムへの変換； e) 環Aについてのフェノールシステムのメチレンジオキシフェノール環への変換。

【０１２２】 工程b)の環Eにおける１８位での-OProt ¹基の形成は、典型的にフェノール基に対する保護反応であり、特別なコメントはなす必要がない。 適切な条件は、保護基の性質に依存して選択される。 他の工程は、他の反応と同様である。 工程b)の環Bにおける１位での-CH2-OProt ²基の形成は、通常１位での-CH ₂ -NH ₂基の形成、及びアミン官能基のヒドロキシ官能基への変換、及び保護化によって実施される。 かくして、開始物質が-CH ₂ -NH-CO-CR ^25a R ^25b R ^25cであるR ¹基を有する場合、それはN-アシル基を除去することが重要である。 開始物質が-CH ₂ -O-CO-
RであるR ¹基を有する場合、置換基R ¹が同じであるエクテイナシジン産物に対する変化は必要でない。 他の産物については、O-アシル基を除去することが重要である。 各種の方法は、上記脱アシル化のために利用可能である。 一つの変形例として、脱アシルか及びヒドロキシ官能基への変換は、一つの工程で実施される。
その後、ヒドロキシ基はアシル化されまたは変換されて、適切なR ¹基が得られる。

【０１２３】 米国特許第5,721,362号は、長く多数の工程の合成を通じてET-743を調製する合成法を記載する。 この合成の中間体の一つが中間体11である。 開始物質としてシアノサフラシンBを使用して中間体11に到達することが可能であり、上記中間体を調製するずっと短い態様を提供し、そのためET-743を調製する方法を改良する。

【０１２４】 シアノサフラシンBは、上述の方法により中間体25に変換されても良い。 中間体25から、以下の工程を使用して中間体11に到達することが可能である（スキームVII参照）。 塩基の存在下でtert-ブチルジフェニルシリルクロリドで25を反応することによる、式26の保護化ヒドロキシ化合物の形成； 26におけるトリブチルチンヒドリドとジクロロパラジウム-ビス(トリフェニルホスフィン)でのアリル基の最終切断による、中間体11の形成が導かれる。

【０１２５】

【化５８】

【０１２６】 スキームVII サフラシンBを中間体11に変換する本発明の合成法の一つの実施態様は、スキームVIIIの修正と伸長であり、以下の連続的な工程を含む： 酸性媒体におけるKCNでの反応により、OHをCNで選択的に置換し、式２の化合物への式１（サフラシンB）の化合物の立体特異的変換； フェニルイソチオシアネートでの式２の化合物の反応により、式３のチオウレア化合物の形成； 酸性媒体における加水分解、引き続き酢酸無水物の付加により、式５のアセタミドへの式３のチオウレア化合物の変換；式４の中間体アミン化合物を、二炭酸ナトリウムでの酸性媒体における加水分解の停止によって単離できるが、この中間体は高度に不安定であり、化合物６と名付けられた５員環イミンに迅速に変換する； ジクロロメタンにおけるブロモメチルメチルエーテルとジイソプロピルエチルアミンでの反応による、式７の保護化化合物の形成； 水酸化ナトリウムのメタン性溶液での反応による、式８の化合物への式７の化合物のキノンシステムのメトキシ基の選択的脱メチル化； 好ましくは以下の順序による、式９のメチレンジオキシ化合物への式８の化合物の変換：(1)化合物８のキノン基を、水素環境下で10%Pd/Cで還元する；(2)水素環境下でのブロモクロロメタンと炭酸セシウムでの反応により、ヒドロキノン中間体を、式９のメチレン−ジオキシ化合物へ変換する；(3)BrCH ₂ R（式中、Rはアリール、CH=CH ₂ 、OR ^-等である）及び炭酸セシウムでの反応により、遊離ヒドロキシル基をOCH ₂ Rとして保護することにより、式９の化合物を、式１０の化合物に変換する； 酢酸及び酢酸アセタートの混合物における四酸化窒素での反応、引き続き水酸化ナトリウムでの処理による、式１０の化合物のアセタミド基の、式１１の対応するヒドロキシル基への変換；別法として酢酸無水物及び酢酸の混合物における亜硝酸ナトリウムを使用でき、引き続き水酸化ナトリウムで処理できる； 別法として、式１０の化合物のアセタミド基は、ヒドラジンまたはBoc ₂ O、DMAP
引き続きヒドラジンでの反応によって、第一級アミン基に変換できる；上記第一級アミンは、対応するヒドロキシル基（式１１の化合物）に変換でき、例えば第一級アミンの対応するアルデヒドへの酸化的変換は、4-ホルミル-1-メチルピリジニウムベンゼンスルホナートまたは他のピリジニウムイオン、引き続きDBUまたは他の塩基での処理、さらに加水分解、引き続きリチウムアルミニウムヒドリドまたは他の還元剤での対応するヒドロキシル基へのアルデヒドの還元によって実施できる； ジクロロメタンにおけるt-ブチルジフェニルシリルクロリド及びジメチルアミノピリジンでの反応による、式２６の保護化化合物の形成； 還元条件または酸性条件での反応による、OCH ₂ R保護基の脱保護による、中間体1
1への式２６のシリル化化合物の変換。 典型的な方法は、水素環境でのパラジウムブラックの使用、または水性TFA、
またはトリブチルチンヒドリド及びジクロロビス(トリフェニルホスフィンパラジウム)の使用である。

【０１２７】 さらに別の好ましい変形例として、式２のシアノ化合物は、さらなる以下の工程を含むスキームIIの伸長を使用して中間体11に変換できる： 塩基の存在下でのtert-ブチルジフェニルシリルクロリドでの25の反応による、
式26の保護化ヒドロキシ化合物の形成； 26におけるトリブチルチンヒドリド及びジクロロパラジウム−ビス(トリフェニルホスフィン)での、アリル基の最終切断により、中間体11の形成が導かれる。

【０１２８】 活性化合物の形成 シアノサフラシンBを、潜在的な抗腫瘍治療活性を有する数多くの中間体及び誘導体に変換することが可能である。 これらの中間体は、上述の化合物から開始して、または別の経路を使用して調製できる。 ここに記載される中間体は、化合物47、及び化合物45または43を使用して調製された数多くのアミド誘導体を含む。

【０１２９】 スキームVIIIにおいて、以下の順序を使用して化合物47の形成が記載される： フェニルイソチオシアネートでの式２の化合物の反応による、式３のチオウレア化合物の形成； 酸性媒体における加水分解、引き続き酢酸無水物の付加による、式５のアセタミドへの式３のチオウレア化合物の変換；式４の中間体アミン化合物を、二炭酸ナトリウムでの酸性媒体における加水分解の停止によって単離できるが、この中間体は高度に不安定であり、化合物６と名付けられた５員環イミンに迅速に変換する； ジクロロメタンにおけるブロモメチルメチルエーテルとジイソプロピルエチルアミンでの反応による、式７の保護化化合物の形成； 水酸化ナトリウムのメタン性溶液での反応による、式８の化合物への式７の化合物のキノンシステムのメトキシ基の選択的脱メチル化； 好ましは以下の順序による、式１０のメチレンジオキシ化合物への式８の化合物の変換；(1)化合物８のキノン基を、水素環境下で10%Pd/Cで還元する；(2) 水素環境下でのブロモクロロメタンと炭酸セシウムでの反応により、ヒドロキノン中間体を、式９のメチレン−ジオキシ化合物へ変換する；(3)アリルブロミド及び炭酸セシウムでの反応により、遊離ヒドロキシル基をアリルオキシ基として保護することによって、式１０の化合物に変換する； ピリジンにおけるアセチルクロリドでの反応による、アセチル誘導体４６への式９の化合物の変換； ジオキサンにおける塩酸での反応による、脱保護化化合物４７への式４６の化合物の変換。

【０１３０】

【化５９】

【０１３１】 スキームVIII 他の有用なアミド中間体誘導体は、次のスキームを使用してすでに記載された中間体45から開始して調製できる：

【０１３２】

【化６０】

【０１３３】 第二の工程は任意である。 この方法は、特にR基が上述のR ^a基である場合、本発明の重要な部分である。 さらにスキームVIIIは、産物に対して直接企図される基、または除去可能若しくは所望の基を与えるように修飾可能な基である、５位で異なる基を有する開始材料を含めることによって、式(XXII)の化合物の調製を可能にするように容易に広げることができる。

【０１３４】 スキームIX 化合物45から、以下の順序を通じて類似体の郡を調製できる： 広範囲のアシル誘導体による、式45の化合物のアミノ基におけるアシル化により、対応するアミンを生産し、ここで好ましいアシル基は、アセチル、シンナモイルクロリド、p-トリフルオロシンナモイルクロリド、イソバレリルクロリドフェニルイソチオシアネート、またはアミノ酸、またはR ^a CO-基について上記示された他の例である。 AcN/H ₂ Oの混合物における硝酸銀での反応による、CN基のOH基への変換；

【０１３５】 他の有用なアミド中間体誘導体は、以下のスキームを使用してすでに記載した中間体43から開始して調製できる：

【０１３６】

【化６１】

【０１３７】 スキームX 化合物43から、以下の順序を使用して興味深い誘導体の別の群を得ることができる： (a) 広範囲のアシル誘導体による、式43の化合物のアミノ基のアシル化により、対応するアミドを取得し、ここで好ましいアシル基は、アセチル、シンナモイルクロリド、p-トリフルオロシンナモイルクロリド、イソバレリルクロリドフェニルイソチオシアネート、またはアミノ酸、またはR ^a CO-基について上記示された他の例である。 (b) AcN/H ₂ Oの混合物における硝酸銀での反応による、CN基のOH基への変換。

【０１３８】 新規な中間体化合物 上述の説明に照らして、本発明は新規な中間体化合物を提供することが見いだせる。 環Aに依存して、中間体化合物は、下式(XXIIa)を有する：

【０１３９】

【化６２】

【０１４０】 または下式(XXIIB)を有する：

【０１４１】

【化６３】

【０１４２】 式中、 R ¹は-CH ₂ NH ₂若しくは-CH ₂ OH、または上記の基の保護化若しくは誘導化基であり、R ⁴は-Hである；または R ^1a及びR ⁴は共に、下式(IV)、(VI)または(VII)の基を形成する：

【０１４３】

【化６４】

【０１４４】 R ⁵は-OHまたは上記基の保護化若しくは誘導化基である； R ^14a及びR ^14bは両者が-Hであるか、一方が-Hで他方が-OHであるか、上記基の保護化若しくは誘導化基であるか、-OCH ₃若しくは-OCH ₂ CH ₃であるか、またはR ^14a
及びR ^14bは共にケト基を形成する； R ¹²は、-NH-、-NCH ₃ -若しくは-NCH ₂ CH ₃ -である； R ¹⁵は、-OHまたは上記基の保護化若しくは誘導化基である；及び R ¹⁸は、-OHまたは上記基の保護化若しくは誘導化基である。

【０１４５】 一つの実施態様として、好ましくは少なくともR ¹ 、R ⁵ 、R ^14a 、R ¹⁵またはR ¹⁸は、保護化若しくは誘導化基である。 本発明の一つの変形例として、R ¹基は3,5-t-ブチルジフェニルシリル置換基ではなく、及び／またはR ¹⁸基はメトキシメチル基ではない。

【０１４６】 好ましくはR ¹は-CH ₂ NH ₂若しくは-CH ₂ OHであり、または上記基の保護化若しくは誘導化基であり、R ⁴は-Hである； または R ^1a及びR ⁴は共に以下の基を形成する：

【０１４７】

【化６５】

【０１４８】 好ましくはR ^14a及びR ^14bは共に-Hである。

【０１４９】 一つの好ましいクラスの中間体は、下式の化合物25として同定される化合物を含む：

【０１５０】

【化６６】

【０１５１】 かくして好ましいクラスは、基MOMがいずれかの他の保護基で置換された上記一般式を有する。 一つの好ましい中間体は、化合物45及び47として同定される化合物を含む。 他のN-アシル誘導体は、化合物45から容易に調製でき、本発明の重要な部分である。 適切なアシル基は、上述のものを含む。 対応する21-ヒドロキシ化合物もまた有用であり、見出された活性化合物の中にある。

【０１５２】 新規な活性化合物 さらに我々は、中間体として初めに調製された本発明の化合物の特定のものが、白血病、肺ガン、大腸願、腎臓ガン、及びメラノーマのようなガンの治療において優れた活性を有することを見出した。 かくして、本発明は、ガンに罹患したいずれかの哺乳動物、特にヒトの治療方法を提供し、上記方法は、本発明の化合物またはその製薬組成物の治療上の有効量を罹患した患者に投与することを含む。

【０１５３】 本発明はまた、活性成分として本発明の化合物を含む製薬調製物に関し、並びにその調製方法に関する。 製薬組成物の例として、適切な組成物を有するまたは経口、局所的若しくは全身性の投与のための、固体（錠剤、ピル、カプセル、顆粒等）または液体（溶液、懸濁液またはエマルション）が含まれ、それらは純粋な化合物として、またはいずれかのキャリアー若しくは他の薬理学的活性化合物と組み合わせて含んでも良い。 これらの組成物は、全身性で投与される場合滅菌される必要があっても良い。 本発明の化合物または組成物の投与は、静脈点滴、経口調製物、腹膜内及び静脈内での投与のような、適切な方法によって実施されても良い。 ２４時間、好ましくは２−１２時間、より好ましくは２−６時間までの点滴時間を使用することが好ましい。 病院での一晩の宿泊を必要としないで治療が実施される短い点滴時間が特に望ましい。 しかしながら、もし必要であれば点滴は１２から２４時間またはそれ以上でも良い。 本発明の化合物を含む製薬組成物は、持続補王出処方において、リポソーム若しくはナノスフェアによって、または他の標準的な輸送手段によって輸送されても良い。 化合物の正確な投与量は、特定の処方、適用態様、及び治療される患者及び腫瘍の特定の状態に従って変化するであろう。 年齢、体重、性別、食餌、投与時間、排泄の割合、患者の状態、薬剤の組み合わせ、反応感度、及び疾患のひどさのような他の因子は、考慮される必要があろう。 投与は、最大の耐性量内で連続的にまたは定期的に実施できる。

【０１５４】 本発明の化合物及び組成物は、コンビネーション治療を提供する他の薬剤と共に使用されても良い。 他の薬剤は同じ組成物の一部を形成しても良く、または同時に若しくは異時に投与するための別個の組成物として提供されてもよい。 他の薬剤の同定は特に制限されず、適切な候補は以下のものを含む： a) 抗マイトーシス効果を有する薬剤、特に細胞骨格エレメントを標的とするもの、例えばテキサン薬剤（タクソノール、パクリタキシル、タクソテレ、ドセタキセル）、ポドフィロトキシン、またはビンカアルカノイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン）のような微小管調節剤を含む； b) 代謝拮抗剤、例えば5-フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン、
ペントスタチンのようなプリン類似体、メトトレキセート； c) アルキル化剤、例えば窒素マスタード（シクロホスファミドまたはイフォスファミド） d) DNAを標的とする薬剤、例えばアントラサイクリン薬剤、アドリアマイシン、ドクソルビシン、ファルモルビシン、またはエピルビシン； e) エトポシドのようなトポイソメラーゼを標的とする薬剤； f) ホルモン及びホルモンアゴニストまたはアンタゴニスト、例えばエストロゲン、抗エストロゲン（タモキシフェン及び関連化合物）及びアンドロゲン、
フルタミド、ロイプロレリン、ゴセレリン、シプロトロンまたはオクトレオチド； g) 腫瘍細胞におけるシグナル伝達を標的とする薬剤、例えばヘルセプチンのような抗体誘導体； h) アルキル化剤、例えば白金薬剤（シスプラチン、カルボンプラチン、オキサリプラチン、パラプラチン）またはニトルソウレア； i) 腫瘍の細胞分裂に影響する可能性のある薬剤、例えばマトリックスメタロプロテイナーゼインヒビター； j) 遺伝子治療及びアンチセンス薬剤； k) 抗体治療薬； l) 海洋起源の他の生活性化合物、特にアプリジンのようなジデムニン； m) ステロイド類似体、特にデキサメタゾン； n) 抗炎症剤、とくにデキサメタゾン；及び o) 抗嘔吐剤、特にデキサメタゾン。 本発明はまた、治療方法における使用のための本発明の化合物、並びにガンの治療のための組成物の調製における化合物の使用に関する。

【０１５５】 細胞毒性活性 細胞培養物：細胞を、Earle's Balanced Salts、20mM L-グルタミン、非必須アミノ酸を補い、炭酸ナトリウムを含まないEagle's Minimum Essential Medium
(EMEM/neaa)でログ期の増殖を維持した；上記培地には、10% Fetal Calf Serum
(FCS)、10-2Mの炭酸ナトリウム及び0.1g/lのペニシリン-G＋硫酸ストレプトマイシンを補った。 Bergeron等(1984)によって記載された方法の応用形態を使用する、単純なクリーニング方法が、これらの化合物の抗腫瘍活性を測定し比較するために実施されている。 使用される腫瘍細胞系は、P-388(DBA/2マウスから得たリンパ新生物の懸濁培養物)、A-549（ヒト胚カルシノーマの単一層培養物）、HT-29（ヒト大腸カルシノーマの単一層培養物）、及びMEL-28（ヒトメラノーマの単一層培養物）
であった。 P-388細胞を、示された濃度の薬剤を含むMEM 5FCSの1ml等量物にウェル当たり１×１０ ⁴細胞で16mmウェルに蒔いた。 薬剤を含まない別のセットの培養物を、
コントロール増殖として蒔き、対数増殖期で細胞を維持した。 全ての測定は二重で実施した。 ３７℃、10%CO ₂ 、98%湿度環境での３日間のインキュベーションの後、およそのIC ₅₀を、コントロールウェルでの増殖に対する薬剤を有するウェルでの増殖を比較することによって測定した。 A-549、HT-29及びMEL-28を、示された濃度の薬剤を含むMEM 10FCSの1ml等量物にウェル当たり２×１０ ⁴細胞で16mmウェルに蒔いた。 薬剤を含まない別のセットの培養物を、コントロール増殖として蒔き、対数増殖期で細胞を維持した。 全ての測定は二重で実施した。 ３７℃、10%CO ₂ 、98%湿度環境での３日間のインキュベーションの後、ウェルを0.1%Crystal Violetで染色した。 およそのIC ₅₀を、
コントロールウェルでの増殖に対する薬剤を有するウェルでの増殖を比較することによって測定した。

【０１５６】

【参考文献１】

【０１５７】

【表７】

【０１５８】 この活性データ及び他の考慮から、本発明の活性化合物は、以下の一般式(XXI
I)の化合物の好ましいクラスを含むことが見出される：

【０１５９】

【化６７】

【０１６０】 式中、 R ¹は式(XVIIb)で以前に定義されており、好ましくは穏やかな量の誘導化アミノメチレン基である； R ⁵は式(XVIIb)で以前に定義されており、好ましくは定量の誘導化ヒドロキシ基である； R ¹²は以前に記載された通りであり、好ましくは-NCH ₃ -である；及び R ²¹はヒドロキシまたはシアノ基である。

【０１６１】 R ¹は適切には疎水性基であり、遊離アミノ、ヒドロキシ、または他の親水性官能基を欠く。 典型的にはR ¹は-CH ₂ -NH ₂ -CO-R ^aであり、ここでR ^aは定義された通りであるが、好ましくは２０未満の原子、より好ましくは１５または１０未満の長さの原子の直鎖状鎖を有し、ここで1,4-フェニルは４の原子の鎖長として計算され、同様な考慮が他の環状基（例えば1,2-シクロヘキシルは２の長さの鎖である）に適用され、１０，１５または２０原子未満の鎖長はそれ自体置換されても良い。 特に、上記データは、上記のR ^a -CO-基を有さないものと、大きいかさのある基を有するものの間で達成されるバランスが存在することを示唆する。

【０１６２】 一つの変形例として、R ¹は環状基を含まない、特に芳香族基を含まないことが好ましい。 関連する変形例として、本発明は、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96
, 3496-3501, 1999の文献に記載された化合物を調製せず、上記文献は参考として取り込まれる。 R ¹として我々が好ましいと考える基は、上記文献の表１に示された対応する置換基CH2R2を排除し、特にR ²についてA,B,C及びD群を排除する。 R ⁵は好ましくはアセチル基である。

【０１６３】 特に好ましい化合物として、R ¹は−NH ₂基でアシル化され、例えばN-アシル誘導体は-CH ₂ NH ₂及び-CH ₂ -NH-aaから形成できる。 アシル基は式-CO-R ^aを有しても良く、ここでR ^aは上述の通りであり、示された基準に適合するように選択される。 適切なアシル基は、アラニル、アルギニル、アスパルチル、アスパラギル、シスチル、グルタミル、グルタミニル、グリシル、ヒスチジル、ヒドロキシプロリル、イソロイシル、ロイシル、リジル、メチオニル、フェニルアラニル、プロリル、セリル、スレオニル、チロニル、トリプトフィル、チロシル、バリル、並びに他のアミノ酸アシル基を含む。 上記アミノ酸アシル基は、疎水性を与えるためアミノ基で好ましくは誘導化される。 変形例として、R ¹基は、誘導化ヒドロキシメチレン基である。 同様な考慮は、
誘導化アミノメチレン基でも適用される。

【０１６４】 活性化合物を反映して、本発明に従った重要な方法は以下のものである：

【０１６５】

【化６８】

【０１６６】 式中、最終産物についてのR ⁵は、化合物(XXXII)について定義されたものと同様であり、開始材料において異なっても良く、方法の一部としてそれに変換されても良い； R ¹⁸は最終産物においてヒドロキシ基であるが、開始材料において保護されたヒドロキシ基でも良く、方法の一部としてそれに変換されても良い； 最終産物についてのR ¹²は開始物質と同じでも良く、または方法の一部としてそれに変換されても良い； 最終産物についてのR ²¹は定義された通りであり、方法の一部としてヒドロキシ基がシアノ基から形成されても良い； R ^aは定義された通りであり、方法の一部としてさらにアシル化されても良く、議論されたアシル化R ^a基を有する最終産物を与えても良い。 R ⁵は好ましくは、開始物質においてアセチルまたは他の小さいアシル基であり、反応において変化しない。 R ¹⁸は好ましくは、開始物質においてヒドロキシ基であり、反応において変化しない。 R ¹²は好ましくは、開始物質において-NCH ₃ -
であり、反応において変化しない。 R ²¹最終産物は定義された通りであり、ヒドロキシ基は方法の一部としてシアノ基から形成されても良い。 R ^aは最終産物中に存在し、好ましくは式(XXIII)の化合物に関して定義された通りである。

【０１６７】 本発明の別の重要な方法は、以下の反応を含む：

【０１６８】

【化６９】

【０１６９】 本発明の別の重要な方法は、以下の反応を含む：

【０１７０】

【化７０】

【０１７１】 本発明の別の重要な反応は、アミノメチレンであるR ¹基が、ヒドロキシメチレン基に変換される反応を含む。 本発明の別の重要な方法は、ヒドロキシメチレンであるR ¹基を有する化合物が、下式(XIX)の試薬と反応する反応を含む。

【０１７２】

【化７１】

【０１７３】 式中、Fuは保護された官能基を表し、Prot ³は保護基であり、点線は任意に二重結合を示す。 本発明の別の重要な方法は、式(XVI)の21-シアノ化合物を調製するための反応を含み、この方法は下式(XV)の化合物を反応させることを含む：

【０１７４】

【化７２】

¹ 、R

⁵ 、R

⁸ 、R

^14a 、R

^14b 、R

¹⁵及びR

¹⁸は定義された通りであり、R

²¹はヒドロキシ基であり、シアニドイオンのソースで所望の21-シアノ化合物を得る。

【０１７５】 さらに、他の求核含有化合物を使用して、21位が別の求核基で保護された21-N
uc基を有する式(XVI)の同様な化合物を生産する方法も考慮される。 例えば、21
位でアルキルアミノ置換基を有する式(XVI)の21-Nuc化合物は、R21がヒドロキシ基である式(XV)の化合物を適切なアルキルアミンと反応させることによって生産できる。 21位でアルキルチオ置換基を有する式(XVI)の21-Nuc化合物もまた、R21
がヒドロキシ基である式(XV)の化合物を適切なアルカンチオールで反応することによって生産できる。 別法として、21位でα-カルボニルアルキル置換基を有する式(XVI)の21-Nuc化合物が、典型的に塩基の存在下で、R21がヒドロキシ基である式(XV)の化合物を適切なカルボニル化合物で反応させることによって生産できる。 他の合成経路は、他の21-Nuc化合物について利用可能である。

【０１７６】 本発明の別の重要な反応は、21-ヒドロキシ化合物を形成するための、本発明の21-シアノ産物の処理を含む。 適切な化合物は、興味深いin vivoでの特性を有する。

【０１７７】

【実施例】

（実施例１）

【０１７８】

【化７３】

【０１７９】 エタノール（２００ml）中の２（２１．５３g、３９．１７ml）の溶液に、ter
t-ブトキシカルボニル無水物（７．７g、３５．２５ml）を添加し、混合物を２
３℃にて７時間に亘り撹拌した。 その後、反応物を真空中で濃縮し、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝６：４）によって精製し、黄色固体として１４（２０．６g、８１％）を得た。

【０１８０】

【数１】

【０１８１】 （実施例２）

【０１８２】

【化７４】

【０１８３】 ＣＨ ₃ ＣＮ（１５９ml）中の１４（２０．６g、３１．７５ml）の撹拌した溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（８２．９６ml、４７６．２ml）、メトキシメチレンブロミド（２５．９ml、３１７．５ml）及びジメチルアミノピリジン（１
５５mg、１．２７ml）を０． ℃にて添加した。 該混合物を２３℃にて２４時間撹拌した。 反応を、０℃にて水性０．１Ｎ HCｌ（７５０ml）（ｐH=５）でクエンチし、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２×４００ml）で抽出した。 有機相を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Si
O ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝４：１からヘキサン：酢酸エチル＝３：２への傾斜）によって精製し、黄色固体として１５（１７．６g、８３％）を得た。

【０１８４】

【数２】

【０１８５】 （実施例３）

【０１８６】

【化７５】

【０１８７】 メタノール（１．６l）中の１５（８g、１．５ml）を収容したフラスコに、１
Ｍの水酸化ナトリウムの水溶液（３．２l）を０℃にて添加した。 反応物をこの温度にて２時間撹拌した後、６ＭのＨＣｌにてクエンチし、ｐＨ＝５とした。 該混合物を酢酸エチルにて抽出し（３×１l）、混合した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ＣＨＣｌ ₃からＣＨＣｌ ₃ ：酢酸エチル＝２：１への傾斜）によって精製し、１６（５．３mg、６８％）を得た。

【０１８８】

【数３】

【０１８９】 （実施例４）

【０１９０】

【化７６】

【０１９１】 ＤＭＦ（２２１ml）中の化合物１６（１．８g、２．６４ml）の脱気溶液に、
１０％のPd/C（３６０mg）を添加し、Ｈ ₂下（常圧）にて４５分間撹拌した。 反応物を、無水Cs ₂ CO ₃ （２．５８g、７．９２ml）を収容したフラスコにつながるアルゴン雰囲気下でセライト濾過した。 その後、ブロモクロロメタン（３．４０
ml ５２．８ml）を添加し、管を密閉して１００℃にて２時間撹拌した。 反応物を冷却し、セライトのパッドで濾過してＣＨ ₂ Ｃｌ ₂で洗浄した。 有機層を濃縮して乾燥させ（硫酸ナトリウム）、褐色オイルとして１７を得た。 これを、更なる精製を行わずに次の工程に用いた。

【０１９２】

【数４】

【０１９３】 （実施例５）

【０１９４】

【化７７】

【０１９５】 ＤＭＦ（１３ml）中の１７（１．８３g、２．６５ml）の溶液を収容したフラスコに、Cs ₂ CO ₃ （２．６g、７．９７ml）及びアリルブロミド（１．１５ml、１
３．２８ml）を０℃にて添加した。 得られた混合物を２３℃にて１時間撹拌した。 反応物をセライトパッドで濾過しＣＨ ₂ Ｃｌ ₂で洗浄した。 有機層を乾燥させ（
硫酸ナトリウム）、濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（
SiO ₂ 、ＣＨＣｌ ₃ ：酢酸エチル＝１：４）によって精製し、白色固体として１８
（１．０８mg、５６％）を得た。

【０１９６】

【数５】

【０１９７】 （実施例６）

【０１９８】

【化７８】

【０１９９】 ジオキサン（２ml）中の１８（０．１g、０．１３７ml）の溶液に、４．２Ｍ
のＨＣｌ／ジオキサン（１．４６ml）を添加し、混合物を２３℃にて１．２時間撹拌した。 反応を０℃にて飽和重炭酸ナトリウム水溶液（６０ml）でクエンチし、酢酸エチル（２×７０ml）で抽出した。 有機層を乾燥させて（硫酸ナトリウム）真空中で濃縮し、白色固体として１９を得た（２６７mg、９５％）。 これを、
更なる精製を行わずに次の工程に用いた。

【０２００】

【数６】

【０２０１】 （実施例７）

【０２０２】

【化７９】

【０２０３】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１．５ml）中の１９（２５０mg、０．４２ml）の溶液に、フェニルイソチオシアネート（０．３ml、２．５１ml）を添加し、混合物を２３℃にて１時間撹拌した。 反応物を真空中で濃縮し、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサンから５：１のヘキサン：酢酸エチルへの傾斜）によって精製し、白色固体として２０（２７０mg、８７％）を得た。

【０２０４】

【数７】

【０２０５】 （実施例８）

【０２０６】

【化８０】

【０２０７】 ジオキサン（１ml）中の２０（２７０mg、０．３７ml）の溶液に、４．２ＮのＨＣｌ／ジオキサン（３．５ml）を添加し、混合物を２３℃にて３０分間撹拌した。 その後、酢酸エチル（２０ml）及びＨ ₂ Ｏ（２０ml）を添加して有機層をデカントした。 水相を０℃にて飽和重炭酸ナトリウム水溶液（６０ml）（ｐH＝８
）で塩基性化した後、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂で抽出した（２×５０ml）。 混合した有機抽出物を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、酢酸エチル：メタノール＝５：１）によって精製し、白色固体として２１（１５８mg、８２％）を得た。

【０２０８】

【数８】

【０２０９】 （実施例９）

【０２１０】

【化８１】

【０２１１】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （６．１３ml）中の２１（０．６４g、１．２２ml）の溶液に、ピリジン（０．１０４ml、１．２８ml）及び２，２，２-トリクロロエチルクロロフォルメート（０．１７７ml、１．２８ml）を−１０℃にて添加した。 該混合物をこの温度にて１４時間撹拌した後、０．１ＮのＨＣｌ（１０ml）の添加によって該反応をクエンチし、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂で抽出した（２×１０ml）。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）によって精製し、白色起泡固体として２２（０．８４g、９８％）を得た。

【０２１２】

【数９】

【０２１３】 （実施例１０）

【０２１４】

【化８２】

【０２１５】 ＣＨ ₃ ＣＮ（２．３３ml）中の２２（０．３２g、０．４６ml）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１．６２ml、９．３４ml）、ブロモメチルメチルエーテル（０．５７ml、７．０ml）、及びジメチルアミノピリジン（６mg、０．０４
６ml）を０℃にて添加した。 該混合物を３０℃にて１０時間加熱した。 その後反応物をジクロロメタン（３０ml）で希釈し、ｐH＝５のHCｌ水溶液（１０ml）に注入した。 有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去して残留物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）によって精製し、白色起泡固体として２３（０．３０４g、８８％
）を得た。

【０２１６】

【数１０】

【０２１７】 （実施例１１）

【０２１８】

【化８３】

【０２１９】 ９０％酢酸水溶液（４ml）中の２３（０．３０４g、０．４１ml）の懸濁液に、粉末亜鉛（０．２g、６．１７ml）を添加し、反応物を２３℃にて７時間撹拌した。 混合物をセライトのパッドで濾過し、これをＣＨ ₂ Ｃｌ ₂で洗浄した。 （２
×４００ml）抽出した。 有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（ｐH＝９）（１
５ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。 溶媒を減圧下で除去して、白色固体として２４（０．１９１g、８３％）を得た。

【０２２０】

【数１１】

【０２２１】 （実施例１２）

【０２２２】

【化８４】

【０２２３】 Ｈ ₂ Ｏ（０．７ml）及びＴＨＦ（０．７ml）中の２４（２０mg、０．０３５ml
）の溶液に、ＮａＮＯ ₂ （１２mg、０．１７ml）及びＡｃＯＨの９０％水溶液（
０．０６ml）を０℃にて添加し、該混合物を０℃にて３時間撹拌した。 ＣＨ ₂ Ｃ
ｌ ₂ （５ml）で希釈した後、有機層を水（１ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Si
O ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）によって精製し、白色固体として２５（９
． ８mg、５０％）を得た。

【０２２４】

【数１２】

【０２２５】 （実施例１３）

【０２２６】

【化８５】

【０２２７】 出発物質（２．０g、５．９０ml）をＴＨＦ（４０ml）中の水酸化ナトリウム（３５４mg、８．８６ml）の懸濁液に、該懸濁液をアリルクロロホルメート（１
． １３５ml、８．２５ml）で２３℃にて処理した後に、２３℃にて添加し、３時間還流させた。 懸濁液を冷却し、濾過紙、固体を酢酸エチル（１００ml）で洗浄し、濾液を濃縮した。 クルードのオイルをヘキサン（１００ml）と共に粉砕し、
一晩４℃に維持した。 その後、溶媒をデカントし、明黄色のスラリーをＣＨ ₂ Ｃ
ｌ ₂ （２０ml）で処理し、ヘキサン（１００ml）で沈殿させた。 １０分後、溶媒を再度デカントした。 操作を、白色固体が得られるまで反復した。 白色固体を濾過し、乾燥させて、化合物２９（１．８０g、６５％）を白色固体として得た。

【０２２８】

【数１３】

【０２２９】 （実施例１４）

【０２３０】

【化８６】

【０２３１】 化合物２５（５８５mg、１．０３ml）と化合物２９（１．４７mg、３．１１ml
）との混合物を、無水トルエン（３×１０ml）と共に共沸させた。 無水ＣＨ ₂ Ｃ
ｌ ₂ （４０ml）中の２５及び２９の溶液に、ＤＭＡＰ（６３３mg、５．１８ml）
及びＥＤＣ・ＨＣｌ（９９４mg、５．１８ml）を２３℃にて添加した。 反応混合物を２３℃にて３時間撹拌した。 混合物を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（５０
ml）と共に分配したところ、層が分離した。 水相をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５０ml）で洗浄した。 混合有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。 クルードをフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１：３）で精製し、淡黄色固体として３０（１．００g、９５％）を得た。

【０２３２】

【数１４】

【０２３３】 （実施例１５）

【０２３４】

【化８７】

【０２３５】 無水ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２０ml）中、２３℃の３０（８４５mg、０．８２ml）、酢酸（５００mg、８．２８ml）、及び（ＰＰｈ ₃ ） ₂ ＰｄＣｌ ₂ （２９mg、０．０４ml
）の溶液に、Ｂｕ ₃ ＳｎＨ（６５０mg、２．２３ml）を滴々と添加した。 反応混合物を室温にて１５分間通気しつつ撹拌した。 クルードを水（５０ml）でクエンチし、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （３×５０ml）で抽出した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。 クルードをフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１：５から１：３への傾斜）によって精製し、淡黄色固体として３１（７３０mg、９０％）を得た。

【０２３６】

【数１５】

【０２３７】 （実施例１６）

【０２３８】

【化８８】

【０２３９】 無水ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２０ml）中、−１０℃の３１（３１０mg、０．３２ml）の溶液に、無水ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （７ml）中の無水ベンゼンセレン酸（benzenseleninic an
hydride）の７０％（１６５mg、０．３２ml）溶液をカニューレから添加し、温度を−１０℃に維持した。 反応混合物を−１０℃にて５分間撹拌した。 炭酸水素ナトリウムの飽和溶液（３０ml）をこの温度にて添加した。 水相を、さらなるＣ
Ｈ ₂ Ｃｌ ₂ （４０ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、
濃縮した。 クルードをフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン１：５から１：１への傾斜）によって精製し、淡黄色固体として３２（２８
７mg、９１％、ＨＰＬＣ：９１．３％）を得た。 これは二つの異性体の混合物（
６５：３５）であり、次の段階に使用した。

【０２４０】

【数１６】

【０２４１】 （実施例１７）

【０２４２】

【化８９】

【０２４３】 反応フラスコを二度火炎処理し（flamed）、真空／アルゴンで数回パージして、反応のためにアルゴン雰囲気下に維持した。 無水ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （４．５ml）中のＤＭＳＯ（３９．１ml、０．５５ml、５当量）の溶液に、無水トリフリック酸（
triflic anhydride）(３７．３ml、０．２２ml、２当量)を−７８℃にて添加した。 反応混合物を−７８℃にて２０分間撹拌した後、無水ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （主として添加用に１ml、洗浄用に０．５ml）中の３２（１１０mg、０．１１ml、ＨＰＬＣ
：９１．３％）溶液を−７８℃にてカニューレから添加した。 添加の間、いずれのフラスコにおいても温度を−７８℃に維持したところ色が黄色から褐色に変化した。 反応混合物を−４０℃にて３５分間撹拌した。 この期間、溶液が黄色から暗緑色に変化した。 この時間後、Ｐｒ ₂ ＮＥｔ（１５３ml、０．８８ml、８当量）を滴々と添加して反応混合物を４５分間０℃に維持したところ、この時間に該溶液の色は褐色に変化した。 その後ｔ-ブタノール（４１．６ml、０．４４ml、
４当量）及び２-ブチル-１，１，３，３-テトラメチルグアニジン（１３２．８m
l、０．７７ml、７当量）を滴々と添加して反応混合物を２３℃にて４０分間撹拌した。 この時間後、無水酢酸（１０４．３ml、１．１０ml、１０当量）を滴々と添加し、反応混合物を２３℃に１時間以上維持した。 その後反応混合物をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２０ml）で希釈し、ＮＨ ₄ Ｃｌ（５０ml）、重炭酸ナトリウム（５０ml
）、及び塩化ナトリウム（５０ml）の飽和水溶液で洗浄した。 混合有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮した。 残留物をフラッシュクロマトグラフィー（溶離剤：酢酸エチル／ヘキサン＝１：３から１：２への傾斜）で精製し、
淡黄色固体として化合物３３（５４mg、５８％）を得た。

【０２４４】

【数１７】

【０２４５】 （実施例１８）

【０２４６】

【化９０】

【０２４７】 無水ジクロロメタン（１．２ml）及びＨＰＬＣ等級のアセトニトリル（１．２
ml）中の３３（１２mg、０．０１４ml）の溶液に、２３℃にてヨウ化ナトリウム（２１mg、０．１４ml）及び新たに蒸留（常圧にて水素化カルシウムによる）したトリメチルシリルクロリド（１５．４mg、０．１４ml）を添加した。 反応今後物は橙色に変化した。 １５分後に該溶液をジクロロメタン（１０ml）で希釈し、
新たなＮａ ₂ Ｓ ₂ Ｏ ₄飽和水溶液で洗浄した（３×１０ml）。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮した。 化合物３４（１３mg、定量）が淡黄色固体として得られ、これを更なる精製をせずに使用した。

【０２４８】

【数１８】

【０２４９】 （実施例１９）

【０２５０】

【化９１】

【０２５１】 酢酸／Ｈ ₂ Ｏ（９０：１０、１０ml）の混合物中の３４（１３mg、０．０１６m
l）の溶液に、粉末亜鉛（５．３mg、０．０８１ml）を２３℃にて添加した。 反応混合物を７０℃に６時間加熱した。 この時間の後、２３℃に冷却し、ＣＨ ₂ Ｃ
ｌ ₂ （２０ml）で希釈し、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（１５ml）及びＥｔ ₃ Ｎ
の水溶液（１５ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、
濃縮した。 残留物をシリカ-ＮＨ ₂のフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離剤：酢酸エチル／ヘキサン＝０：１００から５０：５０への傾斜）によって精製し、淡黄色固体として３５（６．８mg、二工程について７７％）を得た。

【０２５２】

【数１９】

【０２５３】 （実施例２０）

【０２５４】

【化９２】

【０２５５】 エタノール（２．５ml）中の３６（４９mg、０．０８ml）及び２-[３-ヒドロキシ-４-メトキシフェニル]エチルアミン（４６．２mg、０．２７ml）の溶液に、シリカゲル１０５（mg）を２３℃にて添加した。 反応混合物を２３℃にて１４
時間撹拌した。 これをヘキサンで希釈し、クロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサンの１／３から１／１）のカラムに注入してＥｔ-７７０（５５mg、９０％
）を淡黄色固体として得た。

【０２５６】

【数２０】

【０２５７】 （実施例２２）

【０２５８】

【化９３】

【０２５９】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．８ml）中の２１（２２mg、０．０４２ml）の溶液に、無水フタル酸（６．４４mg、０．０４２ml）を添加し、反応混合物を２３℃にて２時間撹拌した。 その後、カルボニルジイミダゾール（１mg、０．００６ml）を添加し、混合物を２３℃にて７時間撹拌した。 その後カルボニルジイミダゾール（５．
８６mg、０．０３５ml）を添加し、反応物を２３℃にて更に１７時間撹拌した。
有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。 溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝
２：１）で精製し、白色固体として２７（２６．４mg、９６％）を得た。

【０２６０】

【数２１】

【０２６１】 （実施例２３）

【０２６２】

【化９４】

【０２６３】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１１ml）中の２７（２６mg、０．０４１ml）の溶液に酢酸（１
１ml）、（ＰＰｈ ₃ ） ₂ ＰｄＣｌ ₂ （３６mg）、及びＢｕ ₃ ＳｎＨ（２８ml、０．１
０ml）を２３℃にて添加した。 この温度にて２時間撹拌した後、反応物をフラッシュカラム（SiO ₂ 、ヘキサンからヘキサン：酢酸エチル＝２：１への傾斜）のパッドに注入し、白色固体として２８（２４．７mg、９９％）を得た。

【０２６４】

【数２２】

【０２６５】 （実施例２４）

【０２６６】

【化９５】

【０２６７】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （３ml）中の２８（３５７mg、０．０５８ml）の溶液に、アセチルクロリド（４１．５８ml、０．５８ml）及びピリジン（４７．３ml、０．５８ml
）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （
１５ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（１５ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８、ＣＨ ₃ ＣＮ：Ｈ ₂ Ｏ６０：４０）によって精製し、白色固体としてフタラシジン（phthalascidin）（３５４mg、９４％）を得た。

【０２６８】

【数２３】

【０２６９】 （実施例２５）

【０２７０】

【化９６】

【０２７１】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２ml）中の１７（３００mg、０．４３２ml）の溶液に、アセチルクロリド（３０．７ml、０．４３２ml）及びピリジン（３４．９ml、０．４３２
ml）を０℃にて添加した。 反応混合物をこの温度にて２時間撹拌した後、該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１５ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（１５ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去し、白色固体として４２（３１８mg、１００％）を得た。 これを更に精製することなく続く反応に使用した。

【０２７２】

【数２４】

【０２７３】 （実施例２６）

【０２７４】

【化９７】

【０２７５】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２．１６ml）中の４２（３１８mg、０．４３２ml）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１．３３ml、１７．３０ml）を添加し、反応混合物を２３℃にて３．５時間撹拌した。 反応を、０℃にて飽和重炭酸水素ナトリウム溶液（６０
ml）でクエンチし、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２×７０ml）で抽出した。 混合有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、酢酸エチル：メタノール＝２０：１）によって精製し、白色固体として４３（１５４mg、６０％）を得た。

【０２７６】

【数２５】

【０２７７】 （実施例２７）

【０２７８】

【化９８】

【０２７９】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１．３ml）中の４３（１５４mg、０．２６ml）の溶液に、フェニルイソチオシアネート（１８６ml、１．５６ml）を添加し、混合物を２３℃にて２時間撹拌した。 反応を真空中で濃縮し、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサンからヘキサン：酢酸エチル＝１：１）によって精製し、白色固体として４４（１２０mg、６３％）を得た。

【０２８０】

【数２６】

【０２８１】 （実施例２８）

【０２８２】

【化９９】

【０２８３】 ジオキサン（０．９ml）中の４４（１２０mg、０．１６５ml）の溶液に、５．
３ＮのＨＣｌ／ジオキサン（１．８ml）を添加し、反応物を２３℃にて２．５時間撹拌した。 その後、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１０ml）及びＨ ₂ Ｏ（１．８ml）をこの反応物に添加し、有機層をデカントした。 水相を０℃の飽和重炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ml）（ｐH＝８）で塩基性化した後、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２×１５ml）で抽出した。 混合有機抽出物を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、真空中で濃縮して、白色固体として４５（７５mg、８７％）を得た。 これを更に精製することなく続く反応に使用した。

【０２８４】

【数２７】

【０２８５】 （実施例２９）

【０２８６】

【化１００】

【０２８７】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．４ml）中の４５（１０ｍｇ、０．０２ml）の溶液に無水フタル酸（２．８４mg、０．０２ml）を添加し、反応混合物を２３℃にて２時間撹拌した。 その後、カルボニルジイミダゾール（０．５mg、０．００３ml）を該混合物に添加し、２３℃にて７時間撹拌した。 その後、カルボニルジイミダゾール（
２．６１mg、０．０１６ml）を添加して反応物を２３℃にて更に１７時間撹拌した。 該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１０ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（５ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去した。
残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８、ＣＨ ₃ ＣＮ：Ｈ ₂ Ｏ
＝６０：４０）によって精製し、白色固体としてフタラシジン（１１．７mg、９
３％）を得た。

【０２８８】

【数２８】

【０２８９】 （実施例３０）

【０２９０】

【化１０１】

【０２９１】 ＤＭＦ（０．０５ml）中の２５（１８mg、０．０３２ml）の溶液に、cat.ＤＭ
ＡＰ（０．５mg、０．００４ml）、イミダゾール（５mg、０．０８ml）、及びte
rt-ブチルジフェニルシリルクロリド（１２．５ml、０．０４８ml）を０℃にて添加し、反応混合物を２３℃にて６時間撹拌した。 水（１０ml）を０℃にて添加し、水相をヘキサン：酢酸エチル１：１０で抽出した（２×１０ml）。 有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 クルードをフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）によって精製し、白色固体として２６（２７mg、８８％）を得た。

【０２９２】

【数２９】

【０２９３】 （実施例３１）

【０２９４】

【化１０２】

【０２９５】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．１５ml）中の２６（７mg、０．００８７ml）の溶液に酢酸（
２．５ml、０．０４４ml）、（ＰＰｈ ₃ ） ₂ ＰｄＣｌ ₂ （０．５mg、６．９６×１
０ ^-4 ml）、及びＢｕ ₃ ＳｎＨ（３．５ml、０．０１３ml）を２３℃にて添加した。 反応混合物を室温にて１時間撹拌した。 溶液をヘキサン：酢酸エチル＝５：１
の混合物（０．５ml）で希釈し、フラッシュカラムのパッド（ＳｉＯ ₂ 、５：１
から１：１のヘキサン：酢酸エチル傾斜）に注入し、白色固体としてＥＴ−１１
（５mg、７５％）を得た。

【０２９６】

【数３０】

【０２９７】 （実施例３２）

【０２９８】

【化１０３】

【０２９９】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２７ml）中の２（３．０g、５．４６ml）及びフェニルイソチオシアネート（３．９２mL、３２．７６ml）の溶液を、２３℃にて１．５時間撹拌した。 反応混合物を、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１０ml）とＨ ₂ Ｏ（５ml）とで分配した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過して濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ ₂ 、ヘキサンから２：３のヘキサン：酢酸エチルへの傾斜）で精製し、黄色固体として３（３．２９g、８８％）を得た。

【０３００】

【数３１】

【０３０１】 （実施例３３）

【０３０２】

【化１０４】

【０３０３】 ６．５ＭのＨＣｌ／ジオキサン（１５０ml）中の３（０．１４３g、０．２０
８ml）の溶液を、２３℃にて６時間撹拌した。 その後、トルエン（３ml）をこの反応物に添加し、有機層をデカントした。 残留物を飽和重炭酸水素ナトリウム水溶液（３ml）とＣＨＣｌ ₃ （３×３ml）とで分配した。 有機層を乾燥させて濃縮し、表題化合物を４と６との混合物として得た（４：６ ９０：１０）。 これを静置したところ、ゆっくりと結晶化して６になった。

【０３０４】

【数３２】

【０３０５】 （実施例３４）

【０３０６】

【化１０５】

【０３０７】 ６．５ＭのＨＣｌ／ジオキサン（１５０ml）中の３（０．１４３g、０．２０８m
l）の溶液を、２３℃にて１時間撹拌した。 溶媒の蒸発により残留物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール／トリエチルアミン １００：２５：０．１）によって精製し、黄色固体として６（８０mg、
８３％）を得た。

【０３０８】

【数３３】

【０３０９】 （実施例３５）

【０３１０】

【化１０６】

【０３１１】 ジオキサン（５ml）中の３（２．３８g、３．４７ml）の溶液に、ジオキサン（３４ml）中、５．３ＭのＨＣｌを添加し、反応物を２３℃にて４５分間撹拌した。 その後、Ａｃ ₂ Ｏ（５１ml、５３９．５ml）を添加し、該混合物を４時間撹拌した。 反応物を０℃に冷却し、水性飽和Ｎａ ₂ ＣＯ ₃ （３００ml）と酢酸エチル（３００ml）とで、この温度にて分配した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ ₂
、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂からＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ ：酢酸エチル＝１：２）で精製し、黄色固体として５（１．７５g、９７％）を得た。

【０３１２】

【数３４】

【０３１３】 （実施例３６）

【０３１４】

【化１０７】

【０３１５】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１７ml）中の５（１．７５g、３．３６ml）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（１１．７１ml、６７．２３ml）、ＤＭＡＰ（２０mg、0.17
ml）、及びブロモメチルメチルエーテル（４．１１ml、５０．４２ml）を０℃にて添加した。 ２３℃にて６時間後、反応物をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５０ml）と飽和重炭酸水素ナトリウム水溶液（２５ml）とで分配した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。 クルードを、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８、ＣＨ ₃ ＣＮ／Ｈ ₂ Ｏ＝１：１）で精製し、黄色固体として７（
１．３２g、７０％）を得た。

【０３１６】

【数３５】

【０３１７】 （実施例３７）

【０３１８】

【化１０８】

【０３１９】 メタノール（７４ml）中、０℃の７（０．３７g、０．６５ml）の溶液に、１
Ｍの水酸化ナトリウム（１３０ml）を添加した。 反応物を１５分間撹拌し、０℃
にて６ＭのＨＣｌでクエンチし、ｐＨ＝５とした。 該混合物を酢酸エチルで抽出し（３×５０ml）、混合有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８、ＣＨ ₃ ＣＮ／Ｈ ₂ Ｏ＝１：１）で精製し、黄色オイルとして８（２３２mg、６５％）を得た。

【０３２０】

【数３６】

【０３２１】 （実施例３８）

【０３２２】

【化１０９】

【０３２３】 ＤＭＦ（３０ml）中の８（２４０mg、０．４３５ml）の脱気溶液に、１０％の
Pd/C（４８mg）を添加し、反応物をＨ ₂下（常圧）で１時間撹拌した。 反応物をシュレンク管から導入されるアルゴン雰囲気下で、無水Cs ₂ CO ₃ （２４０mg、０．
７３９ml）を含む無色の溶液として、セライトのパッドを用いて濾過した。 その後、ブロモクロロメタン（０．５６６ml、８．７１ml）を添加した。 管を密閉し、９０℃にて３時間撹拌した。 反応物を冷却し、セライトで濾過してＣＨ ₂ Ｃｌ ₂で洗浄した。 有機層を濃縮して乾燥させ（硫酸ナトリウム）、褐色オイルとして９を得た。 これを、更なる精製を行わずに次の工程に用いた。

【０３２４】

【数３７】

【０３２５】 （実施例３９）

【０３２６】

【化１１０】

【０３２７】 ＤＭＦ（４ml）中の９（２４５mg、０．４３５ml）を収容したフラスコに、炭酸セシウム（４２５mg、１．３０ml）及びアリルブロミド（３７６ml、４．３５
ml）を０℃にて添加し、該混合物を２３℃にて１時間撹拌した。 反応物をセライトパッドで濾過し、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２５ml）とＨ ₂ Ｏ（１０ml）で分配した。 有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、減圧下で濃縮して、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ＣＨＣｌ ₃ ：酢酸エチル＝１：２）によって精製し、黄色オイルとして１０（１１３mg、４３％）を得た。

【０３２８】

【数３８】

【０３２９】 （実施例４０）

【０３３０】

【化１１１】

【０３３１】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．２ml）中の９（２２mg、０．０３９ml）の溶液に、アセチルクロリド（２．７９ml、０．０３９ml）及びピリジン（３．２ml、０．０３９ml
）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１
０ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（５ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、白色固体として４６（２２mg
、９３％）を得た。

【０３３２】

【数３９】

【０３３３】 （実施例４１）

【０３３４】

【化１１２】

【０３３５】 ジオキサン（０．１ml）中の４６（８mg、０．０１３ml）の溶液に、５．３Ｍ
のＨＣｌ／ジオキサン（０．５ml）を添加し、反応物を２３℃にて１時間撹拌した。 次に、該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（３ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去して、白色固体として４７を得た（５mg、７０％）。

【０３３６】

【数４０】

【０３３７】 （実施例４２）

【０３３８】

【化１１３】

【０３３９】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．３ml）中の４５（１０mg、０．０１９２ml）の溶液に、イソバレリルクロリド（２．３４ml、０．０１９２ml）及びピリジン（１．５５ml、
０．０１９２ml）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（３ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）によって精製し、白色固体として４８（１１mg、９５％）を得た。

【０３４０】

【数４１】

【０３４１】 （実施例４３）

【０３４２】

【化１１４】

【０３４３】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．３ml）中の４５（１０mg、０．０１９２ml）の溶液に、イソバレリルクロリド（３．９８ml、０．０１９２ml）及びピリジン（１．５５ml、
０．０１９２ml）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（３ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）によって精製し、白色固体として４９（１２．４mg、９６％）を得た。

【０３４４】

【数４２】

【０３４５】 （実施例４４）

【０３４６】

【化１１５】

【０３４７】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．３ml）中の４５（１４．５mg、０．０２７８ml）の溶液に、
trans-３-トリフルオロメチルシンナモイルクロリド（４．７６ml、０．０２７
８ml）及びピリジン（２．２５ml、０．０２７８ml）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５ml）で希釈し、０．１ＮのＨ
Ｃｌ（３ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）によって精製し、白色固体として５０（１８．７mg
、９４％）を得た。

【０３４８】

【数４３】

【０３４９】 （実施例４５）

【０３５０】

【化１１６】

【０３５１】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．４ml）中の４３（３３mg、０．０５５７ml）の溶液に、イソバレリルクロリド（６．７９ml、０．０５５７ml）及びピリジン（４．５ml、０
． ０５５７ml）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（３ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）によって精製し、白色固体として５１（３４mg、９１％）を得た。

【０３５２】

【数４４】

【０３５３】 （実施例４６）

【０３５４】

【化１１７】

【０３５５】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．４ml）中の４３（３３mg、０．０５５７ml）の溶液に、tran
s-３-トリフルオロメチルシンナモイルクロリド（９．５２ml、０．０５５７ml
）及びピリジン（４．５ml、０．０５５７ml）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（
３ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサン：
酢酸エチル＝１：２）によって精製し、白色固体として５２（４０mg、９２％）
を得た。

【０３５６】

【数４５】

【０３５７】 （実施例４７）

【０３５８】

【化１１８】

【０３５９】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．２ml）中の４３（１０mg、０．０１６９ml）の溶液に、無水トリフルオロ酢酸（２．３８μl、０．０１６９ml）を２３℃にて添加した。 反応混合物を５時間撹拌した後、該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５ml）で希釈し、０．１Ｎ
のＨＣｌ（３ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、
ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）によって精製し、白色固体として５３（１０．
７mg、９３％）を得た。

【０３６０】

【数４６】

【０３６１】 （実施例４８）

【０３６２】

【化１１９】

【０３６３】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．２ml）中の１９（１１mg、０．０１６９ml）の溶液に、無水トリフルオロ酢酸（２．３８μl、０．０１６９ml）を２３℃にて添加した。 反応混合物を５時間撹拌した後、該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （５ml）で希釈し、０．１Ｎ
のＨＣｌ（３ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、
ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）によって精製し、白色固体として５４（１０．
７mg、９３％）を得た。

【０３６４】

【数４７】

【０３６５】 （実施例４９）

【０３６６】

【化１２０】

【０３６７】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．２ml）中の５４（１００mg、０．４１５ml）の溶液に、酢酸（４０ml）、（ＰＰｈ ₃ ） ₂ ＰｄＣｌ ₂ （８．４mg、０．０１２ml）、及びＢｕ ₃ Ｓ
ｎＨ（１５７mg、０．５６ml）を２３℃にて添加した。 この温度にて２時間撹拌した後、反応物をフラッシュカラム（SiO ₂ 、ヘキサンからヘキサン：酢酸エチル＝２：１への傾斜）のパッドに注入し、白色固体として５５（９０mg、９６％）
を得た。

【０３６８】

【数４８】

【０３６９】 （実施例５０）

【０３７０】

【化１２１】

【０３７１】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１．４４ml）中の１７（２００mg、０．２８８ml）の溶液に、トリフルオロ酢酸（８８８ml、１１．５３ml）を添加し、反応混合物を２３℃にて４時間撹拌した。 反応を０℃にて飽和重炭酸水素ナトリウム水溶液（６０ml）でクエンチし、酢酸エチルで抽出した（２×７０ml）。 混合有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、真空中で濃縮して、白色固体として５６（１４７mg、９３％）
を得た。 これを更に精製することなく続く反応に使用した。

【０３７２】

【数４９】

【０３７３】 （実施例５１）

【０３７４】

【化１２２】

【０３７５】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．４ml）中の５６（１０mg、０．０１８ml）の溶液に、フェニルイソチオシアネート（１３ml、０．１０９ml）を添加し、反応物を２３℃にて１．５時間撹拌した。 該混合物を真空中で濃縮し、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ヘキサンから１：１のヘキサン：酢酸エチルへの傾斜）によって精製し、白色固体として５７（８mg、６５％）を得た。

【０３７６】

【数５０】

【０３７７】 （実施例５２）

【０３７８】

【化１２３】

【０３７９】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．５ml）中の５７（４５mg、０．０６５ml）の溶液に、アセチルクロリド（４．６７ml、０．０６５ml）及びピリジン（５．３ml、０．０６５
ml）を０℃にて添加した。 反応混合物を３時間撹拌した後、該溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１０ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（５ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＲＰ−１８、ＣＨ ₃ ＣＮ：Ｈ ₂ Ｏ＝４０：６０）によって精製し、白色固体として５８（１４mg、２８％）を得た。

【０３８０】

【数５１】

【０３８１】 （実施例５３）

【０３８２】

【化１２４】

【０３８３】 ジオキサン（１ml）中の５７（１３０mg、０．１８９ml）の溶液に、５．３Ｎ
のＨＣｌ／ジオキサン（１．８７ml）を添加し、反応物を２３℃にて４時間撹拌した。 その後、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１５ml）及びＨ ₂ Ｏ（１０ml）をこの反応物に添加し、有機層をデカントした。 水相を０℃の飽和重炭酸水素ナトリウム水溶液（６
０ml）（ｐH＝８）で塩基性化した後、酢酸エチル（２×５０ml）で抽出した。
混合有機抽出物を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、真空中で濃縮して、白色固体として５９（６３mg、７０％）を得た。

【０３８４】

【数５２】

【０３８５】 （実施例５４）

【０３８６】

【化１２５】

【０３８７】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．３ml）中の４３（２０mg、０．０３３８mmol）の溶液に、シンナモイルクロリド（５．６３mg、０．０３３８mmol）及びピリジン（２．７３
ml、０．０３３８mmol）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、
溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１０ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（５ml）で洗浄した。
有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝２０：
１）によって精製し、白色固体として６０（２２mg、９０％）を得た。

【０３８８】

【数５３】

【０３８９】 （実施例５５）

【０３９０】

【化１２６】

【０３９１】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．３ml）中の４５（１９mg、０．０３６４mmol）の溶液に、ヘプタフルオロブチリルクロリド（５．４４mg、０．０３６４mmol）及びピリジン（２．９５ml、０．０３６４mmol）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１０ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（５ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯ
Ｈ＝２０：１）によって精製し、白色固体として６１（１１．７mg、４５％）を得た。

【０３９２】

【数５４】

【０３９３】 （実施例５６）

【０３９４】

【化１２７】

【０３９５】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．３ml）中の４３（２４mg、０．０４mmol）の溶液に、ブチリルクロリド（４．１５ml、０．０４mmol）及びピリジン（３．２８ml、０．０４
mmol）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１０ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（５ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝２０：１）によって精製し、白色固体として６２（２４mg、９０％）を得た。

【０３９６】

【数５５】

【０３９７】 （実施例５７）

【０３９８】

【化１２８】

【０３９９】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．３ml）中の４３（１９mg、０．０３６４mmol）の溶液に、シンナモイルクロリド（６．０６mg、０．０３６４mmol）、及びピリジン（２．９
５ml、０．０３６４mmol）を０℃にて添加した。 反応混合物を１時間撹拌した後、溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （１０ml）で希釈し、０．１ＮのＨＣｌ（５ml）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（SiO ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ＝２０
：１）によって精製し、白色固体として６３（２０．１mg、８５％）を得た。

【０４００】

【数５６】

【０４０１】 実施例５８

【０４０２】

【化１２９】

【０４０３】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．３ｍｌ）中の４３の溶液（２０ｍｇ、０．０３３８ｍｍｏｌ
）に、３−クロロプロピニルクロリド（３．２２ｍｌ、０．０３３８ｍｍｏｌ）
及びピリジン（２．７３ｍｌ、０．０３８８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。 反応混合物を、１時間攪拌した後、溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂で（１０ｍｌ）希釈し、０．１
Ｎ ＨＣｌ（５ｍｌ）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで（
ＳｉＯ ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ ２０：１）によって生成し、白色固体として６４を得た（２０．５ｍｇ、８９％）。

【０４０４】

【数５７】

【０４０５】 実施例５９

【０４０６】

【化１３０】

【０４０７】 ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （０．３ｍｌ）中の４３の溶液（１９ｍｇ、０．０３６４ｍｍｏｌ
）に、ブチリルクロリド（３．７８ｍｌ、０．０３６４ｍｍｏｌ）及びピリジン（２．９５ｍｌ、０．０３６４ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。 反応混合物を、１
時間攪拌した後、溶液をＣＨ ₂ Ｃｌ ₂で（１０ｍｌ）希釈し、０．１Ｎ ＨＣｌ（
５ｍｌ）で洗浄した。 有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで（ＳｉＯ ₂ 、Ｅ
ｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ ２０：１）によって生成し、白色固体として６４を得た（
１９ｍｇ、８７％）。

【０４０８】

【数５８】

【０４０９】 実施例６０

【０４１０】

【化１３１】

【０４１１】 ＣＨ ₃ ＣＮ／Ｈ ₂ Ｏ（１．５ｍｌ／０．５ｍｌ）中の５０の溶液（３１．７ｍｇ
、０．０４４ｍｍｏｌ）に、ＡｇＮＯ ₃ （２２５ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、２３℃１７時間攪拌した。 ついで、食塩水（１０ｍｌ）と飽和ＮａＨＣＯ ₃水（１０ｍｌ）を０℃で添加し、混合物を１５分間攪拌し、セライトのパッドを通して濾過し、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２０ｍｌ）で洗浄した。 溶液をデカンタし、有機層を乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで（ＳｉＯ ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ ５：１）によって生成し、白色固体として６６を得た（１６ｍｇ、５１％）。

【０４１２】

【数５９】

【０４１３】 実施例６１

【０４１４】

【化１３２】

【０４１５】 ＣＨ ₃ ＣＮ／Ｈ ₂ Ｏ（１．５ｍｌ／０．５ｍｌ）中の５３の溶液（５７ｍｇ、０
． ０８２８ｍｍｏｌ）に、ＡｇＮＯ ₃ （６５０ｍｇ、３．８１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、２３℃２４時間攪拌した。 ついで、食塩水（１０ｍｌ）と飽和ＮａＨＣＯ ₃水（１０ｍｌ）を０℃で添加し、混合物を１５分間攪拌し、セライトのパッドを通して濾過し、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２０ｍｌ）で洗浄した。 溶液をデカンタし、有機層を乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで（ＳｉＯ ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ ５：１）によって生成し、白色固体として６７を得た（２８ｍｇ、５０％）。

【０４１６】

【数６０】

【０４１７】 実施例６２

【０４１８】

【化１３３】

【０４１９】 ＣＨ ₃ ＣＮ／Ｈ ₂ Ｏ（１．５ｍｌ／０．５ｍｌ）中の４８の溶液（３２ｍｇ、０
． ０５２９ｍｍｏｌ）に、ＡｇＮＯ ₃ （２７０ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、２３℃２４時間攪拌した。 ついで、食塩水（１０ｍｌ）と飽和ＮａＨＣＯ ₃水（１０ｍｌ）を０℃で添加し、混合物を１５分間攪拌し、セライトのパッドを通して濾過し、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２０ｍｌ）で洗浄した。 溶液をデカンタし、有機層を乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで（ＳｉＯ ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ ５：１）によって生成し、白色固体として６８を得た（１８ｍｇ、５６％）。

【０４２０】

【数６１】

【０４２１】 実施例６３

【０４２２】

【化１３４】

【０４２３】 ＣＨ ₃ ＣＮ／Ｈ ₂ Ｏ（１．５ｍｌ／０．５ｍｌ）中の５１の溶液（２７ｍｇ、０
． ０４ｍｍｏｌ）に、ＡｇＮＯ ₃ （２０４ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を添加し、
反応混合物を、２３℃２４時間攪拌した。 ついで、食塩水（１０ｍｌ）と飽和Ｎ
ａＨＣＯ ₃水（１０ｍｌ）を０℃で添加し、混合物を１５分間攪拌し、セライトのパッドを通して濾過し、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２０ｍｌ）で洗浄した。 溶液をデカンタし、有機層を乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで（ＳｉＯ ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ ５：１）によって生成し、白色固体として６９を得た（１０ｍｇ、３８％）。

【０４２４】

【数６２】

【０４２５】 実施例６４

【０４２６】

【化１３５】

【０４２７】 ＣＨ ₃ ＣＮ／Ｈ ₂ Ｏ（１．５ｍｌ／０．５ｍｌ）中の６３の溶液（１５ｍｇ、０
． ０２３ｍｍｏｌ）に、ＡｇＮＯ ₃ （１１８ｍｇ、０．６９１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、２３℃２４時間攪拌した。 ついで、食塩水（１０ｍｌ）と飽和ＮａＨＣＯ ₃水（１０ｍｌ）を０℃で添加し、混合物を１５分間攪拌し、セライトのパッドを通して濾過し、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２０ｍｌ）で洗浄した。 溶液をデカンタし、有機層を乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで（ＳｉＯ ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ ５：１）によって生成し、白色固体として７０を得た（２０．１ｍｇ、８５％）。

【０４２８】

【数６３】

【０４２９】 実施例６５

【０４３０】

【化１３６】

【０４３１】 ＣＨ ₃ ＣＮ／Ｈ ₂ Ｏ（１．５ｍｌ／０．５ｍｌ）中の６５の溶液（２５ｍｇ、０
． ０４２ｍｍｏｌ）に、ＡｇＮＯ ₃ （２１５．５６ｍｇ、１．２６９ｍｍｏｌ）
を添加し、反応混合物を、２３℃２４時間攪拌した。 ついで、食塩水（１０ｍｌ
）と飽和ＮａＨＣＯ ₃水（１０ｍｌ）を０℃で添加し、混合物を１５分間攪拌し、セライトのパッドを通して濾過し、ＣＨ ₂ Ｃｌ ₂ （２０ｍｌ）で洗浄した。 溶液をデカンタし、有機層を乾燥させ、真空中で濃縮した。 残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで（ＳｉＯ ₂ 、ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ ５：２）によって生成し、白色固体として７１を得た（１６ｍｇ、６５％）。

【０４３２】

【数６４】

【０４３３】 醗酵方法 実施例Ａ １％グルコース；０．２５％ウシ抽出物；０．５％バクトペプトン；０．２５
％ＮａＣｌ；０．８％ＣａＣＯ ₃を含むシード培地ＹＭＰ３に、０．１％の凍結された増殖可能な微生物Pseudomonas FluorescensのＡ２−２株のストックを接種し、回転振とう機（２５０ｒｐｍ）で２７℃でインキュベートした。 ３０時間のインキュベーション後、シード培養を、２％デキストロース；４％マンニトール、２％乾燥ビール酵母（Vitalevor（登録商標） Biolux、ベルギー）；１％（
ＮＨ ₄ ） ₂ ＳＯ ₄ ；０．０４％Ｋ ₂ ＨＰＯ ₄ ；０．８ＫＣｌ；０．００１％ＦｅＣｌ ₃ ；０．１％Ｌ−Ｔｙｒ；０．８％ＣＯ ₃ Ｃａ；０．０５％ＰＰＧ−２０００；０
． ２％消泡シリコーン（ＡＳＳＡＦ−１００、ＲＨＯＤＩＡ 英国）からなる生産培地の入った攪拌容器ファーメンターへ添加した。 滅菌を１２２℃で３０分間行なった。 接種容量は、２％（ｖ／ｖ）であった。 温度は２７℃（０乃至１６時間）及び１６時間から最終プロセス（４１時間）まで２４℃であった。 溶解酸素圧力は２５％までであった。 ｐＨは、希硫酸で、２８時間から最終プロセスまで６．０に制御した。 過圧力は０．５barであった。 １％マンニトール又はソルビトールを１６時間から最終プロセスまで（２日間のランニング）添加し、３日間の醗酵プロセスの間２％を添加した。 ４１又は６４時間後、醗酵ブロスは、safracin B回収、又は、safracin B-シアノの回収のために清澄化ブロスでのKCN処理のため、抽出されなければならない。

【０４３４】 実施例Ｂ 粗抽出物からのsafracin Bシアノの取得 ｐＨ６での醗酵ブロスからの清澄化又は濾過は固形を除く。 清澄化ブロスは、
希水酸化ナトリウムでｐＨ９．５に調整し、２：１（ｖ／ｖ）酢酸エチル、メチレンクロリド、酢酸ブチルで二度抽出した。 ２０'の間、攪拌溶液内で抽出を行ない、混合物の温度を８乃至１０℃に保持した。 ２つの相を、液−液遠心分離で分離した。 有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、又は凍結させ、ついで氷を除去するために濾過した。 この有機相（酢酸エチル層）を蒸発させ、油−粗抽出物を得た。

【０４３５】 清澄化ブロスからのsafracin Bの取得 ｐＨ６での醗酵ブロスからの清澄化又は濾過は固形を除く。 清澄化ブロスは、
濃酢酸でｐＨ３．９に調整し、清澄化ブロスへKCNを1リットル当たり０．５グラム添加し、攪拌しながら１時間２０℃でインキュベートした。 ついで、温度を１
５度に下げｐHを希水酸化ナトリウムで９．５に調整し、２：１．５（ｖ／ｖ）
酢酸エチルで抽出した。 ２０分間、攪拌溶液内で抽出を行ない、混合物の温度を８乃至１０℃に保持した。 ２つの相を、液−液遠心分離で分離した。 有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。 この有機相（酢酸エチル層）を蒸発させ、油−
粗抽出物を得た。 この抽出物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーで（SiO ₂ 、勾配２０：１から１０：から５：１ 酢酸エチル：メタノール）精製し、定量的に化合物２を淡黄色固体として得た。

【０４３６】

【数６５】

【０４３７】 実施例Ｄ デキストロース（２％）、マンニトール（４％）、乾燥ビール酵母（２％）、
硫酸アンモニウム（１％）、第２リン酸カリウム（０．０４％）、塩化カリウム（０．８％）、塩化鉄（III）６水和物（０．００１％）、L-チロシン（０．１
％）、炭酸カルシウム（０．８％）、ポリ（プロピレングリコール）−２０００
（０．０５％）、消泡ＡＳＳＡＦ−１０００（０．２％）からなる培地（５０ｌ
）を、全容量７５ｌのジャーファーメンターに注ぎ、滅菌後、Ａ２−２株（ＦＥ
ＲＭＢＰ−１４）のシード培養（２％）を接種し、攪拌しながら通気培養し、２
７℃乃至２４℃で６４時間行なった（１分間に７５ｌの通気及び３５０乃至５０
０ｒｐｍの攪拌）。 ｐＨは、２７時間から最終プロセスまで、希硫酸の自動フィードにより制御した。 ２％マンニトールを１６時間から最終プロセスまで添加した。 こうして得られた培養した培地（４５ｌ）を、遠心分離により細胞を除去した後に、希水酸化ナトリウムでｐＨ９．５に調整し、２５リットルの酢酸エチルで２度抽出した。 混合を攪拌容器内で８℃２０分間行なった。 ２つの相を、液−
液遠心分離で分離した。 有機相を−２０℃で凍結し、氷を除去するために濾過し、氷を蒸発させ、４０ｇの油−濃色粗抽出物を得た。 シアニド基の導入と精製の後、３．０グラムのsafracin Bシアノを得た。

【０４３８】 実施例Ｅ デキストロース（２％）、マンニトール（４％）、乾燥ビール酵母（２％）、
硫酸アンモニウム（１％）、第２リン酸カリウム（０．０２％）、塩化カリウム（０．２％）、塩化鉄（III）６水和物（０．００１％）、L-チロシン（０．１
％）、炭酸カルシウム（０．８％）、ポリ（プロピレングリコール）−２０００
（０．０５％）、消泡ＡＳＳＡＦ−１０００（０．２％）からなる培地（５０ｌ
）を、全容量７５ｌのジャーファーメンターに注ぎ、滅菌後、Ａ２−２株（ＦＥ
ＲＭＢＰ−１４）のシード培養（２％）を接種し、攪拌しながら通気培養し、２
７℃乃至２４℃で４１時間行なった（１分間に７５ｌの通気及び３５０乃至５０
０ｒｐｍの攪拌）。 ｐＨは、２８時間から最終プロセスまで、希硫酸の自動フィードにより制御した。 １％マンニトールを１６時間から最終プロセスまで添加した。 こうして得られた培養した培地（４５ｌ）を、遠心分離により細胞を除去した後に、２００ｍｌの濃酢酸でｐＨ３．９に調整し、２５グラムのシアン化カリウム９７％を添加し、２０℃１時間攪拌後、１５００ｍｌの１０％水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを９．５に調整した。 ついで３５リットルの酢酸エチルで抽出した。 混合を攪拌容器内で８℃２０分間行なった。 ２つの相を、液−液遠心分離で分離した。 有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて６０ｇの油−
濃色粗抽出物を得た。 クロマトグラフィーの後、４．９グラムのsafracin Bシアノを得た。

【０４３９】

【参考文献２】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl. ⁷識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 515/22 Ｃ０７Ｄ 515/22 (31)優先権主張番号 ９９２３６３２．５ (32)優先日 平成11年10月６日(1999．10．6) (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） (31)優先権主張番号 ０００１０６３．７ (32)優先日 平成12年１月17日(2000．1．17) (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ， ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，Ｓ Ｇ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 マルタ・ペレス スペイン・Ｅ−28760・マドリード・トレ ス・カントス・ポリゴノ・インデュストリ アル・デ・トレス・カントス・カージェ・ デ・ラ・カレラ・３・ファルマ・マール・ ソシエダード・アノニマ (72)発明者 アンドレス・フランセス スペイン・Ｅ−28760・マドリード・トレ ス・カントス・ポリゴノ・インデュストリ アル・デ・トレス・カントス・カージェ・ デ・ラ・カレラ・３・ファルマ・マール・ ソシエダード・アノニマ (72)発明者 カロリナ・フェルナンデス スペイン・Ｅ−28760・マドリード・トレ ス・カントス・ポリゴノ・インデュストリ アル・デ・トレス・カントス・カージェ・ デ・ラ・カレラ・３・ファルマ・マール・ ソシエダード・アノニマ (72)発明者 ホセ・ルイス・チチャーロ スペイン・Ｅ−28760・マドリード・トレ ス・カントス・ポリゴノ・インデュストリ アル・デ・トレス・カントス・カージェ・ デ・ラ・カレラ・３・ファルマ・マール・ ソシエダード・アノニマ (72)発明者 ピラール・ガジェーゴ スペイン・Ｅ−28760・マドリード・トレ ス・カントス・ポリゴノ・インデュストリ アル・デ・トレス・カントス・カージェ・ デ・ラ・カレラ・３・ファルマ・マール・ ソシエダード・アノニマ (72)発明者 マリア・サルスエロ スペイン・Ｅ−28760・マドリード・トレ ス・カントス・ポリゴノ・インデュストリ アル・デ・トレス・カントス・カージェ・ デ・ラ・カレラ・３・ファルマ・マール・ ソシエダード・アノニマ (72)発明者 フェルナンド・デ・ラ・カージェ スペイン・Ｅ−28760・マドリード・トレ ス・カントス・ポリゴノ・インデュストリ アル・デ・トレス・カントス・カージェ・ デ・ラ・カレラ・３・ファルマ・マール・ ソシエダード・アノニマ (72)発明者 イグナシオ・マンサナーレス スペイン・Ｅ−28760・マドリード・トレ ス・カントス・ポリゴノ・インデュストリ アル・デ・トレス・カントス・カージェ・ デ・ラ・カレラ・３・ファルマ・マール・ ソシエダード・アノニマ Ｆターム(参考） 4C050 AA03 AA07 BB08 CC07 DD02 EE02 FF03 GG03 HH01 HH04 4C086 AA01 AA04 CB09 CB22 CB31 MA01 MA04 NA20 ZB26 ZB35