一种长春西汀的有关物质的定量方法 |
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| 申请号 | CN202011358499.5 | 申请日 | 2020-11-27 | 公开(公告)号 | CN112326843A | 公开(公告)日 | 2021-02-05 |
| 申请人 | 北京康立生医药技术开发有限公司; | 发明人 | 程刚; | ||||
| 摘要 | 本 发明 涉及一种长春西汀的有关物质的定量方法，属于药物分析领域，其在Cu/K‑α源得X‑射线粉末衍射图谱中在2θ值为11.32，12.60，17.68，19.20，23.01，23.88，24.94，29.64，36.74等处具有特征吸收峰。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种长春西汀的有关物质的定量方法： |
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| 说明书全文 | 一种长春西汀的有关物质的定量方法技术领域[0001] 本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种长春西汀的有关物质的定量方法。 背景技术[0002] 长春西汀(Vinpocetine)是一种吲哚类生物碱，1975年匈牙利化学家CsabaSzántay首次从植物中分离出长春西汀。1978年由匈牙利制药公司Richter Gedeon开始批量生产。长春西汀为脑血管扩张药，能抑制磷酸二酯酶活性，增加血管平滑肌松弛的信使C-GMP的作用，选择性地增加脑血流量，此外还能抑制血小板凝集，降低人体血液粘度，增强红细胞变形力，改善血液流动性和微循环，促进脑组织摄取葡萄糖。增加脑耗氧量，改善脑代谢。其适应症为改善脑梗死后遗症、脑出血后遗症、脑动脉硬化症等诱发的各种症状。 [0003] 通过良好的有关物质的定性和定量是获得良好的长春西汀的必经道路，但是，目前为止，针对一种长春西汀的有关物质的定量方法报道较少，因此，本发明所要解决的问题是：长春西汀的有关物质的定量方法问题，我公司创新了有关物质的控制方法，在此基础上从而得到收率较高、残留溶剂毒性较小、制剂性能更好的长春西汀。 发明内容[0004] 本发明涉及一种长春西汀的有关物质的定量方法： [0005] 本发明涉及的长春西汀的有关物质的结构如下： [0006] [0007] 该有关物质涉及长春西汀或其新晶型。 [0008] 本发明涉及一种长春西汀的有关物质的定量方法，其色谱条件与系统适用性为： [0011] 检测波长：248nm [0012] 流速：1.0ml/min [0013] 柱温：30℃ [0014] 进样量：20μl [0015] 系统适用性溶液：分别称取有关物质对照品适量，加无水乙醇适量振摇使溶解，并用无水乙醇定量稀释成每1ml中约含有关物质10μg的混合溶液，作为有关物质贮备液； [0016] 精密称取长春西汀对照品10mg置10ml量瓶中，精密加入上述有关物质贮备液1ml，振摇使溶解，并用正己烷定量稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。 [0017] 取系统适用性溶液10μl注入高效液相色谱仪，长春西汀峰与有关物质对照品的分离度大于等于2.0。 [0018] 有关物质对照品为化合物B。 [0019] 溶液的配制： [0020] 供试品溶液：取重结晶后样品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加无水甲醇1ml振摇使溶解，并用正己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 [0021] 对照溶液：精密量称定对照品约10mg，置100ml量瓶中，加甲醇适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 [0022] 长春西汀粗品中有关物质的合成： [0023] [0024] 取长春西汀粗品，加入体积为长春西汀粗品重量5倍的四氢呋喃和1倍质量的水，加入1倍质量的氢氧化锂，加热至50℃，体系搅拌保温30分钟后，停止搅拌，加入乙酸乙酯进行萃取，分液，有机相用水洗两次，旋干后得到化合物B。 [0025] 本发明涉及一种长春西汀的有关物质的定量方法，用于分析一种长春西汀新晶型，长春西汀新晶型特征在于，其在Cu/K-α源得X-射线粉末衍射图谱中在2θ值为11.32，12.60，17.68，19.20，23.01，23.88，24.94，29.64，36.74等处具有特征吸收峰。 [0026] 本发明涉及一种长春西汀的有关物质的定量方法，其特征在于：用于分析一种长春西汀新晶型，长春西汀新晶型特征在于，其熔点范围在149.1-152.5℃ [0027] 本发明涉及一种长春西汀的有关物质的定量方法，其特征在于：用于分析一种长春西汀的组合物，含有长春西汀或其新晶型、GABA。 [0028] 本发明涉及一种长春西汀的有关物质的定量方法，其特征在于：用于分析一种长春西汀的组合物：含有长春西汀或其新晶型50-200重量份、GABA5-100重量份。 [0029] 本发明提供一种有利于制备长春西汀的晶型方法，尤其是可获得高纯度该晶型，允许在商业规模内以低技术支出和高产率的制备该晶型的稳定工艺。 [0030] 长春西汀新晶型及制备方法 [0031] 乙醇加热溶解后，静置析晶，XRD图谱为图1，XRD特征峰2θ°如下： [0032] 11.32，12.60，17.68，19.20，23.01，23.88，24.94，29.64，36.74。 [0033] 一种制备长春西汀新晶型的方法：取长春西汀粗品，加入体积为长春西汀粗品重量12-15倍体积乙酸乙酯、丙酮、或、乙醇，体系搅拌加热至回流，体系澄清后，降温至10-20℃，静置析晶10-12小时，过滤，收集滤饼，在40-50℃鼓风干燥得到产品。 [0034] 使用乙醇重结晶后，对于长春西汀纯度提升明显，杂质(有关物质)的含量明显下降，从而提高了长春西汀产品质量。 [0035] [0036] 本发明涉及一种长春西汀的组合物，含有长春西汀或其新晶型、GABA。 [0037] 本发明涉及一种长春西汀的组合物，含有长春西汀或其新晶型50-200重量份、GABA5-100重量份。 [0038] 本发明的长春西汀的晶型在制备抗冠心病、心梗药物上的应用。 [0039] 本发明的长春西汀的组合物在制备抗冠心病、心梗药物上的应用。 [0041] 图1：重结晶溶剂为乙醇 [0042] 图2：长春西汀粗品HPLC图谱 [0043] 图3：长春西汀粗品精制后样品HPLC图谱 [0044] 图4：长春西汀粗品中杂质(有关物质)(化合物B)的合成： [0045] 具体实施实例 [0046] 实施例一： [0047] 取长春西汀粗品，加入体积为长春西汀粗品重量12倍的乙醇，加热至85℃，体系搅拌保温30分钟后，停止搅拌，自然降温至25℃析晶，10小时后，过滤，收集滤饼，在50℃鼓风干燥得到产品。 [0048] 实施例二： [0049] 取长春西汀粗品，加入体积为长春西汀粗品重量15倍的乙醇，加热至85℃，体系搅拌保温30分钟后，停止搅拌，冰水冷却至10℃，15小时后，过滤，收集滤饼，在40℃鼓风干燥得到产品。 [0050] 取本品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 [0051] 取长春西汀对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 [0052] 照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(YMC-Pack Pro C18 5μm 4.6*250mm或效能相当的色谱柱)；磷酸盐缓冲液(取磷酸0.5g与磷酸二氢钠0.8g，加水1000ml，振摇使溶解，用磷酸调节pH值至2.5)-甲醇(30:70)为流动相，流速为每分钟1.0ml，检测波长为248nm，柱温为30℃。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 [0053] 长春西汀粗品HPLC图谱： [0054] [0055] 长春西汀粗品精制后样品HPLC图谱： [0056] [0057] 在保留时间21.245min杂质，去除效果明显，并对其进行研究。 [0058] 实施例三： [0059] 长春西汀粗品中杂质(有关物质化合物B)的合成： [0060] 取长春西汀粗品，加入体积为长春西汀粗品重量5倍的四氢呋喃和1倍质量的水，加入1倍质量的氢氧化锂，加热至50℃，体系搅拌保温30分钟后，停止搅拌，加入乙酸乙酯进行萃取，分液，有机相用水洗两次，旋干后得到化合物B。 [0061] H-NMR进行检测： [0062] 1H-NMR(DMSO,500MHz),δ1.342～1.409(t H,H-4),δ4.333～4.452(d,1H,J＝7.5Hz,H-3),δ6.100(d,1H,J＝7.5Hz,H-1),δ0.931～1.012(m,3H,H-2,6,8),δ1.448～ 1.496(m 1H,H-7),δ1.341～1.377(m 2H,J＝7.5Hz,H-5,9),δ1.631～1.719(m 1H,J＝ 7.5Hz,H-1),δ2.551～2.579(m,3H,H-2,6,8),δ2.932～2.987(m,1H,H-7),δ7.068～7.145(d,2H,J＝7.5Hz,H-5,9),δ7.228～7.248(m,3H,H-2,6,8)。 [0063] 实施例四：产品的稳定性实验 [0064] 在长期三个月稳定考察期间，该新样品稳定性良好，未出现新增杂质。分别取实施例1、实施例2产品各5g，置于表面皿中，敞口置于恒温恒湿箱中，在30℃、60％RH条件，存放90天，取出，观察外观，分别测定杂质(有关物质)，数据记录如下： [0065] [0067] 实施例五：产品的配伍试验 [0068] 长春西汀片的制备：取长春西汀100g，加入β环糊精适量，湿法制粒，真空干燥，得到长春西汀颗粒。长春西汀颗粒2g、交联聚维酮17.9g、硬脂酸镁0.1g混合均匀，干燥8小时；将干颗粒过200目筛；整粒，压片。崩解时限：符合规定。 [0069] 长春西汀组合物1产品的制备：取实施例1的长春西汀50g，取GABA50g，加入β环糊精适量，包合，湿法制粒，真空干燥，得到长春西汀组合物1颗粒。长春西汀组合物1颗粒2g、交联聚维酮17.9g、硬脂酸镁0.1g混合均匀，干燥8小时；将干颗粒过200目筛；整粒，压片。崩解时限：符合规定。 [0070] 长春西汀组合物2产品的制备：取实施例2的长春西汀50g，取GABA5 g，加入β环糊精适量，包合，湿法制粒，真空干燥，得到长春西汀组合物1颗粒。长春西汀组合物1颗粒2g、交联聚维酮17.9g、硬脂酸镁0.1g混合均匀，干燥8小时；将干颗粒过200目筛；整粒，压片。崩解时限：符合规定。 [0071] 本发明的GABA是4－氨基丁酸(γ-aminobutyric acid)的简称。 [0072] 实施例六：产品的含量分析 [0073] 取实施例五的长春西汀片、长春西汀组合物1产品、长春西汀组合物2产品各200mg，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 [0074] 取长春西汀对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 [0075] 照高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(YMC-Pack Pro-C18：5μm 4.6*250mm或效能相当的色谱柱)；磷酸盐缓冲液(取磷酸0.5g与磷酸二氢钠0.8g，加水1000ml，振摇使溶解，用磷酸调节pH值至2.5)-甲醇(30:70)为流动相，流速为每分钟1.0ml，检测波长为248nm，柱温为30℃。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 [0076] 实施例七：组合物产品的抗心梗的药效实验 [0077] (1)药物剂量设置及分组： [0078] 将SD大鼠分为6组，每组10只(n＝10)： [0080] 第二组：阳性对照组(缬沙坦)：结扎冠状动脉左前降支，缺血45分钟，再灌注2h。造模前灌胃给药10mg/kg缬沙坦三天0.5％CMC-Na三天，早晚各一次。 [0081] 第三组：A组，开胸，结扎冠状动脉左前降支，缺血45分钟，再灌注2h。造模前灌胃给药10mg/kg(长春西汀片)0.5％CMC-Na溶液三天，早晚各一次。 [0082] 第四组：B组，开胸，结扎冠状动脉左前降支，缺血45分钟，再灌注2h。造模前灌胃给药10mg/kg(长春西汀组合物1产品)0.5％CMC-Na溶液三天，早晚各一次。 [0083] 第五组：C组，开胸，结扎冠状动脉左前降支，缺血45分钟，再灌注2h。造模前灌胃给药10mg/kg(长春西汀组合物2产品)0.5％CMC-Na溶液三天，早晚各一次。 [0084] 第六组：D组，开胸，结扎冠状动脉左前降支，缺血45分钟，再灌注2h。造模前灌胃给药40mg/kg(GABA)0.5％CMC-Na溶液三天，早晚各一次。 [0085] 观察再灌注12小时后大鼠的生存情况。 [0086] 再灌注12h后，麻醉大鼠，股动脉取血。将心脏取出，去除血管和其周围的残留组织，以生理盐水冲洗，双层滤纸吸干水分，电子天平准确称量全心湿重，测定心脏指数。心脏湿质量与末次大鼠体质量的比值的百分比为心脏指数。 [0087] 放入-80℃中5min后取出，从心尖开始，沿结扎方向，横切心脏，1-2mm厚度的切片10个。10个切片放入1％的四氮唑红溶液中，37℃水浴加热12min，中性福尔马林固定，室温下，静置24小时，拍相片，测单一切片心肌梗死面积，Image-Pro plus7.0图像分析软件，计算心肌梗死比例＝梗死区面积/左心面积。 [0088] [0090] 与空白给药组比较，第三、四、五组血清VEGF吸光度明显增高(P＜0.01)。 |
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