大环类似物及其使用和制备的方法

                        背景

本发明涉及药用活性大环内酯。软海绵素B是一种有效的抗癌 剂，最初从海洋海绵Halichondria okadai中分离出，随后在种名待定 的小轴海绵(Axinella sp.)、Phakellia carteri和种名待定的扁矛海绵 (Lissondendryx sp.)中发现。

1992年公布了软海绵素B的全合成(Aicher，T.D.等，J.Am.Chem. Soc.114：3162-3164)。已经证明软海绵素B在体外抑制微管蛋白聚合、 微管的装配、βs-微管蛋白交联、GTP和长春花碱与微管蛋白的结合以 及依赖于微管蛋白的GTP水解，并已经显示出体外和体内抗癌特性。

                      发明概述

本发明提供具有药用活性的软海绵素类似物，所述药用活性诸如 抗癌活性或抗有丝分裂(阻断有丝分裂)活性。这些化合物比软海绵素B 小得多。本发明的特征在于具有式(I)的化合物：

                          式(I)

在式(I)中，A为C1-6饱和或C2-6不饱和烃骨架，所述骨架为未取 代的，或具有1-13个取代基，最好具有1-10个取代基，例如至少一个 选自氰基、卤基、叠氮基、Q1和氧代的取代基。每个Q1独立地选自 OR1、SR1、SO2R1、OSO2R1、NR2R1、NR2(CO)R1、 NR2(CO)(CO)R1、NR4(CO)NR2R1、NR2(CO)OR1、(CO)OR1、 O(CO)R1、(CO)NR2R1和O(CO)NR2R1。取代基的数目可以例如为1- 6、1-8、2-5或1-4。在整个说明书中，数字范围应理解为包括所述 数字在内。

R1、R2、R4、R5和R6中的每个都独立地选自H、C1-6烷基、 C1-6卤代烷基、C1-6羟烷基、C1-6氨烷基、C6-10芳基、C6-10卤代芳基 (例如对氟苯基或对氯苯基)、C6-10羟芳基、C1-4烷氧基-C6芳基(例如 对甲氧基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、对乙氧基苯基或3，5-二乙氧基苯 基)、C6-10芳基-C1-6烷基(例如苄基或苯乙基)、C1-6烷基-C6-10芳基、 C6-10卤代芳基-C1-6烷基、C1-6烷基-C1-10卤代芳基、(C1-3烷氧基-C6芳 基)-C1-3烷基、C2-9杂环基、C2-9杂环基-C1-6烷基、C2-9杂芳基和C2-9 杂芳基-C1-6烷基。如果A被两个不同烷氧基(OR1)诸如丁氧基和2-氨 基乙氧基取代，则可以例如有一个以上的R1。

A的实例包括2，3-二羟丙基、2-羟乙基、3-羟基-4-全氟丁基、 2，4，5-三羟基戊基、3-氨基-2-羟丙基、1，2-二羟基乙基、2，3-二羟基-4- 全氟丁基、3-氰基-2-羟丙基、2-氨基-1-羟乙基、3-叠氮基-2-羟丙 基、3，3-二氟-2，4-二羟基丁基、2，4-二羟基丁基、2-羟基-2-(对氟苯 基)-乙基、-CH2(CO)(取代的或未取代的芳基)、-CH2(CO)(烷基或取代 的烷基，诸如卤代烷基或羟烷基)和3，3-二氟-2-羟基戊-4-烯基。

Q1的实例包括-NH(CO)(CO)-(杂环基或杂芳基)、-OSO2-(芳基或取 代的芳基)、-O(CO)NH-(芳基或取代的芳基)、氨烷基、羟烷基、- NH(CO)(CO)-(芳基或取代的芳基)、-NH(CO)(烷基)(杂芳基或杂环基)、 O(取代的或未取代的烷基)(取代的或未取代的芳基)和-NH(CO)(烷 基)(芳基或取代的芳基)。

D和D’中的每一个独立地选自R3和OR3，其中R3为H、C1-3 烷氧基或C1-3卤代烷基。D和D’的实例为甲氧基、甲基、乙氧基和乙 基。在某些实施方案中，D和D’之一为H。

n的值为1，最好为0，由此形成或者6元环或5元环。该环可 以是未取代的或是取代的，例如，其中E为R5或OR5，并且可以是杂 环基或环烷基，例如G为S、CH2、NR6，或最好为O。

J和J’中的每一个独立地为H、C1-6烷氧基或C1-6烷基；或J和J’ 结合在一起为＝CH2或-O-(直链或支链C1-5亚烷基或(1，1)亚烷基)-O-， 诸如环外亚甲基(exocyclic methylidene)、亚异丙基、亚甲基或亚乙基。 Q为C1-3烷基，最好为甲基。T为亚乙基或亚乙烯基，任选地用 (CO)OR7取代，其中R7为H或C1-6烷基。U和U’中的每一个独立地 为H、C1-6烷氧基或C1-6烷基；或U和U’结合在一起为＝CH2或-O-(直 链或支链C1-5亚烷基或(1，1)亚烷基)-O-。X为H或C1-6烷氧基。Y和 Y’中的每一个独立地为H或C1-6烷氧基；或Y和Y’结合在一起为＝O、 ＝CH2或-O-(直链或支链C1-5亚烷基或(1，1)亚烷基)-O-。Z和Z’中的每 一个独立地为H或C1-6烷氧基；或Z或Z’结合在一起为＝O、＝CH2或 -O-(直链或支链C1-5亚烷基或(1，1)亚烷基)-O-。

本发明的特征在于足够稳定以适于研制药物的化合物。本发明的 特征也在于所公开的化合物的药学上可接受的盐、公开的新合成的中 间体、含有一种或多种所公开化合物的药用组合物、制备所公开的化 合物或中间体的方法、所公开的化合物或组合物的使用方法。使用方 法包括可逆或不可逆地抑制细胞有丝分裂的方法以及体外、体内或在 患者体内抑制癌或肿瘤生长的方法。本发明的特征也在于鉴定诸如可 逆或不可逆(最好是不可逆)药剂的抗有丝分裂或抗癌剂的方法。

                      发明详述

A.定义

B.软海绵素类似物

C.软海绵素类似物的合成

D.药理学活性

E.应用

A.定义

以下部分定义以下术语，并根据本文的用法定义所述术语。 烃骨架含有碳原子和氢原子，可以为线性、支链或环状。不饱和 烃包括1、2、3或更多的C-C双键(sp2)或C-C三键(sp)。不饱和烃 基的实例包括乙炔基、2-丙炔基、1-丙烯基、2-丁烯基、1，3-丁二烯 基、2-戊烯基、乙烯基、烯丙基和异丙烯基。二价不饱和烃基的实例 包括亚烯基和亚烷基，诸如次甲基、亚乙基、次乙基、亚乙烯基和亚 异丙基。一般而言，本发明的化合物具有取代了的的烃骨架(式(I)中的 “A”)，例如被羟基、氨基、氰基、叠氮基、杂芳基、芳基和本文描 述的其它部分取代。烃骨架的成对的氢原子可以被二价羰基氧原子- 氧代基(＝O)取代，或被环形成取代基取代，所述环形成取代基诸如- O-(直链或支链亚烷基或(1，1)亚烷基)-O-，以形成缩醛或缩酮。

C1-6烷基包括线性、支链和环状烃，诸如甲基、乙基、丙基、异 丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、新 戊基、叔戊基、环戊基、己基、异己基、仲己基、环己基、2-甲基戊 基、叔己基、2，3-二甲基丁基、3，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基和 2，3-二甲基丁-2-基。烷氧基(-OR)、烷硫基(-SR)和其它烷基衍生部分(取 代的、不饱和或二价)类似于烷基(R)。烷基和烷基衍生基团诸如代表 性烷氧基、卤代烷基、羟烷基、烯基、(1，1)亚烷基和亚烷基可以是C2-6、 C3-6、C1-3或C2-4。

用卤基、羟基、氨基、氰基、叠氮基等取代的烷基可以具有1、 2、3、4、5或更多个取代基，所述取代基独立地选择(可以相同或 可以不同)，并且可以在相同或不同碳原子上取代。例如，卤代烷基为 用至少一个选自氟、氯、溴和碘的取代基取代的烷基。卤代烷基可以 具有两个或两个以上的卤基取代基，所述取代基可以是相同或不同的 卤素，可以在相同或不同碳原子上取代。实例包括氯甲基、全碘甲基、 3，3-二氯丙基、1，3-二氟丁基和1-溴-2-氯丙基。

杂环基和杂芳基包括呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、 占吨基、吩恶噻吩基、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基(例如1-、2-或4- 咪唑基)、吡唑基、异噻唑基、异恶唑基、吡啶基(例如1-、2-或3-吡 啶基)、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、中氮茚基、异吲哚基、3H-吲哚基、 吲哚基(例如1-、2-或3-吲哚基)、吲唑基、嘌呤基、4H-quinolixinyl、 异喹啉基、喹啉基、2，3-二氮杂萘基、1，5-二氮杂萘基、喹喔啉基、 噌啉基、喋啶基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡唑 啉基、哌啶基、哌嗪基、二氢吲哚基、异二氢氮茚基和吗啉基。杂环 基和杂芳基可以于沿环的任何位置连接至该分子的其余部分。杂环基 和杂芳基可以是C2-9或更窄，诸如C3-6、C2-5或C3-7。

芳基包括苯基、苄基、萘基、甲苯基、米基、二甲苯基和枯烯基。

应该理解，“杂环基”、“芳基”和“杂芳基”包括那些具有1、 2、3、4或更多的取代基的基团，所述取代基独立地选自低级烷基、 低级烷氧基、氨基、卤基、氰基、硝基、叠氮基和羟基。杂环基、杂 芳基和芳基也可以是式(I)中烃骨架“A”的二价取代基。

B.软海绵素类似物

关于概述一节中的式(I)，本发明的实施方案包括这样的化合物， 其中n为0；其中D和D’中的每个独立地选自R3、C1-3烷氧基和C1-3 卤代烷氧基；其中R5选自H、C2-6烷基、C1-6卤代烷基、C1-6羟烷基、 C1-6氨烷基、C6-10芳基、C6-10卤代芳基、C6-10羟芳基、C1-3烷氧基- C6芳基、C6-10芳基-C1-6烷基、C1-6烷基-C6-10芳基、C6-10卤代芳基-C1-6 烷基、C1-6烷基-C6-10卤代芳基、(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基、C2-9 杂环基、C2-9杂环基-C1-6烷基、C2-9杂芳基和C2-9杂芳基-C1-6烷基； 和它们的组合。

其它实施方案包括具有一个或多个以下特征的化合物：(a)其中A 为C1-6饱和或C2-6不饱和烃骨架，所述骨架具有至少一个选自氰基、 卤基、叠氮基、Q1和氧代的取代基；(b)每个Q1独立地选自OR1、 SR1、SO2R1、OSO2R1、NR2R1、NR2(CO)R1、NR2(CO)R1和 O(CO)NR2R1；(c)Z和Z’结合在一起为＝O或＝CH2；(d)其中每个Q1 独立地选自OR1、SR1、SO2R1、OSO2R1、NH(CO)R1、 NH(CO)(CO)R1和O(CO)NHR1；(e)每个R1独立地选自C1-6烷基、C1-6 卤代烷基、C6芳基、C6卤代芳基、C1-3烷氧基-C6芳基、C6芳基-C 1- 3烷基、C1-3烷基-C6芳基、C6卤代芳基-C1-3烷基、C1-3烷基-C6卤代 芳基、(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基、C2-9杂环基、C2-9杂芳基和C2-9 杂芳基-C1-6烷基；(f)D和D’中的一个是甲基或甲氧基，而另一个是H； (g)n为0；(h)G为O；(i)J和J’结合在一起为＝CH2；(j)Q为甲基； (k)T为亚乙基；(l)U和U’结合在一起为＝CH2；(m)X为H；(n)Y和 Y’中的每个为H；且(o)Z和Z’结合在一起为＝O。组合的实例为(h)-(m) 的组合、(a)和(b)的组合、(f)和(h)的组合以及(h)和其中D和D’之一为 甲基、而另一个为H的组合。两个特别优选的化合物为B1793和 B1939。

另一实施方案包括这样的化合物，其中Q1独立地选自OR1、 SR1、SO2R1和OSO2R1；其中每个R1独立地选自C1-6烷基、C1-6卤 代烷基、C6芳基、C6卤代芳基、C1-3烷氧基-C6芳基、C6芳基-C1-3 烷基、C1-3烷基-C6芳基、C6卤代芳基-C1-3烷基、C1-3烷基-C6卤代芳 基和(C1-3烷氧基-C6芳基)-C1-3烷基。其它实施方案包括这样的化合物， 其中：D和D’中的一个是烷基或烷氧基，其中n为1；(f)如上，其中 n为1；E为烷氧基，其中n为1；n为0，其中D和D’中的一个为 羟基，而另一个为H；和(f)如上，其中n为1，而E为甲基。

本发明的特征也在于这样的化合物，其中：(1)A具有至少一个选 自羟基、氨基、叠氮基、卤基和氧代的取代基；(2)A为饱和烃骨架， 具有至少一个选自羟基、氨基和叠氮基的取代基(例如B1793、 B1939、B2042、B1794和B1922)；(3)A具有至少两个独立地选自 以下羟基、氨基和叠氮基的取代基(例如B2090和B2136)；(4)A具有 至少两个独立地选自羟基和氨基的取代基(例如B2042和B2090)；(5)A 具有至少一个羟基取代基和至少一个氨基取代基(例如B1939和 B2136)；(6)A具有至少两个羟基取代基(例如B1793和B1794)；(7)A 为被取代的C2-4烃骨架(例如B2004、B2037、B1920、B2039、 B2070、B2090和B2043)；(8)A为被取代的C3烃骨架(例如B1793、 B1920、B1984、B1988、B1939、B1940、B2014)；(9)A在相对 于将A连接至含G环的碳原子的α位碳原子上具有(S)-羟基(例如 B1793、B1939或B1920)或(R)-羟基(例如B2102、B2013、B2042)； 和(10)A为C1-6饱和烃骨架，具有至少一个选自羟基和氰基的取代基 (例如B2013、B2037、B2102、B2086和B2091)。(S)-羟基是指具有 羟基的碳原子的构型为(S)。本发明的实施方案也包括在相对于将A连 接至含G环的碳原子的(1)α和γ，(2)β和γ或最好是(3)α和β碳原子 上具有至少两个取代基的化合物。α、β和γ碳原子可以具有(R)或(S) 构型。

本发明还提供具有以下显示的式(1)-A的优选化合物，其中所述取 代基与上述定义的取代基相同。

                     式1-A

本发明的特征还在于具有式(II)的单糖中间体：

                     式(II)

其中R为甲基或甲氧基，P1、P2和P3中的每个独立地选自H和伯 醇保护基。最好是，二醇侧链在环平面之下，而OP2在环平面之上。 伯醇保护基包括酯、醚、甲硅烷基醚、烷基醚和烷氧基烷基醚。

酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、碳酸酯和磺酸酯。具体实例包括 甲酸酯、苯甲酰甲酸酯、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三 苯基甲氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸 酯、4，4-(亚乙基二硫基)戊酸酯、新戊酸酯、巴豆酸酯、4-甲氧基巴豆 酸酯、苯甲酸酯、对苯基苯甲酸酯、2，4，6-三甲基苯甲酸酯、碳酸酯， 诸如甲酯、9-芴基甲酯、乙酯、2，2，2-三氯乙酯、2-(三甲基甲硅烷基) 乙酯、2-(苯基磺酰)乙酯、乙烯酯、烯丙酯和对硝基苄酯。

甲硅烷基醚的实例包括三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、 叔丁基二甲基甲硅烷基醚、叔丁基二苯基甲硅烷基醚、三异丙基甲硅 烷基醚和其它的三烷基甲硅烷基醚。烷基醚包括甲基醚、苄基醚、对 甲氧基苄基醚、3，4-二甲氧基苄基醚、三苯甲基醚、叔丁基醚、烯丙 基醚和烯丙氧羰基醚或衍生物。烷氧基烷基醚包括缩醛，诸如甲氧基 甲基醚、甲硫基甲基醚、(2-甲氧基乙氧基)甲基醚、苄氧基甲基醚、β-(三 甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚和四氢吡喃基醚。苄基醚的实例包括对 甲氧基苄基醚(MPM)、3，4-二甲氧基苄基醚、O-硝基苄基醚、对硝基 苄基醚、对卤基苄基醚、2，6-二氯苄基醚、对氰基苄基醚、2-和4-吡 啶甲基醚。P1和P2中的每个最好为TBS，且P3为MPM(参见以下 的醇19)。一方面，可以修改式(II)，使得羟乙基侧链也可以是受保护 的羟基、-CH2CH2O-P4，其中P4独立地从P1的值选择。一种相关的 中间体为醇17，其中所述羟乙基侧链为羟甲基侧链。可以相似地制备 相应的羟丙基侧链或氨烷基侧链。

P1和P2结合在一起可以是二醇保护基，诸如环缩醛和缩酮(亚甲 基、亚乙基、亚苄基、异亚丙基、亚环己基和亚环戊基)；亚甲硅基衍 生物，诸如二叔丁基亚甲硅基和1，1，3，3-四异丙基二亚硅氧烷基衍生 物；环碳酸酯和环硼酸酯。

加入和去除这类羟基保护基和其它保护基的方法是本领域众所 周知的，并且可得自例如P.J.Kocienski， Protecting Groups，Thieme，1994 和T.W.Greene和P.G.M.Wuts， Protective Groups in Organic Synthesis， 第2版，John Wiley & Sons，1992。

下一小节提供式(II)中间体和式(I)软海绵素类似物的代表性合 成。

C.软海绵素类似物的合成

以下提供概述，然后提供合成流程1-16和几种详细的方案。

可以用流程1中概述的途径制备通式4的化合物。可以按照Kishi 等的方法(软海绵素B和去甲软海绵素(norhalichondrin)B的全合成， Aicher，T.D.；Buszek，K.R.；Fang，F.G.；Forsyth，C.J.；Jung，S.H.；Kishi，Y.； Matelich，M.C.；Scola，.M.；Spero，D.M.；Yoon，S.K.J.Am.Chem.Soc. 1992，114，3162-4)，制备实例为碘代乙烯化合物X2的关键片段F-2。

碘代乙烯X2

按照Stamos等的方法制备相应的甲酯XF3，通过DIBALH还原相应 的甲酯XF3可以获得关键片段F-3(流程2)。[对软海绵素的合成研究： C.1-C.13片段的实际合成。Stamos，D.P.；Kishi，Y.Tetrahedron Lett. 1996，37，8643-8646]。可以如流程3或流程4中所述，进行实例为化 合物20的关键片段F-1的合成。

采用B1793作为代表性实例，如流程5中概述进行所述三个片段 的偶合：片段20和X2 Nozaki-Hiyama-Kishi偶合，然后进行分子内 Williamson醚形成，得到四氢吡喃B2318。如流程5或者流程6中所 述的保护基的改性，提供伯碘化物B2313。卤素-金属交换反应和与关 键片段F-3的偶合，得到非对映体醇B2308的混合物。另外的保护基 操作和氧化，然后进行分子内Nozaki-Hiyama-Kishi反应，得到一种中 间体，该中间体当氧化并用TBAF处理时，进行分子内异-Michael (hetero-Michael)环合反应。PPTs间介的缩醛形成，得到B1793。

如流程7例举的，可以将芳基引入C32侧链(例如B2043)。将中 间体B2318去保护，将所得的二醇氧化性切割，得到相应的醛。用格 氏试剂(例如p-F-PhMgBr)处理，分离所得的非对映体并甲硅烷化，得 到204，将其以流程6中所述的类似方式转化为终产物。

通过用合适的烷化剂处理，可以由B1793制备醚类似物(例如流程 8)。同样，可以通过用活化羰基组分处理，由B1793制备磺酸酯、酯、 氨基甲酸酯等。氧化性二醇切割和还原或选择性羟基氧化，分别提供 诸如B2037和B1934的衍生物。

或者，可以将一个或多个羟基转化为相应氨基，随后与活化羰基 组分偶合(流程9)。也可以容易地实现用碳或杂原子亲核体代替对磺酰 中间体(例如B1920)(流程10)。

可以如流程11所概述制备C31甲基类似物。溴代烯丙酯(allyl bromide ester)与2，3-O-(3-异亚丙基)-D-甘油醛的铟间介偶合，得到内酯 103。异Michael加成、内酯还原、Wittig偶合和分子内Michael加成， 得到四氢呋喃107。Pummerer重排、保护基调节和DIBALH还原， 得到关键片段1(例如114)，以流程6中所述方法的类似方式将其转化 为最终化合物。

可以如流程12-14所述引入氟原子。以合适的四氢呋喃中间体开 始，获得氟化关键片段1，并以流程6中所述方法的相似方式将其转 化为最终化合物。

可以同样由所述四氢呋喃中间体制备三醇衍生物。例如，如流程 15中概述，将烯丙基三丁基锡烷与醛X32加成，得到高烯丙醇33， 以流程6中所述方法的相似方式将其转化为最终化合物。如流程6中 例举的，可以将这些三醇进一步改性。

可以由先前描述的中间体制备1，3-二醇衍生物。例如，可以将 B2086氧化性切割并还原，得到1，3-二醇B2091(流程16)。

流程1

流程2

流程3

流程4

流程5

流程6

流程7

流程8

流程9

流程10

流程11

流程12

流程13

流程14

流程15

流程16

试验部分

关键片段F-3的合成：

关键片段F-3.将DIBALH(1M甲苯溶液，3.86ml)于-78℃加入 XF-3(1.46g，1.93mmol)的甲苯(37ml)溶液中。搅拌10分钟后，通过 小心加入MeOH(0.46ml)和水(0.21ml)猝灭反应，温至室温并搅拌15 分钟。白色悬浮液通过Celite过滤，用1∶1二氯甲烷/乙醚洗涤。将滤 液浓缩，并经色谱柱纯化(10％EtOAc-己烷)，得到油状物的关键片段 F-3(1.34g，96％)。

B1793的合成：

三醇1.将TBDPSCl(444ml，1.7mol)的DMF(0.5L)溶液分3份加 入L-阿拉伯糖(250.0g，1.66mol)、咪唑(231.4g，3.40mol)和DMF(2.5L) 的悬浮液中。每份的加入需1.5h，分别以30分钟和15小时的间隔分 开加入第二份和第三份。将产生的溶液搅拌3小时，浓缩并经快速色 谱纯化(5％-33％EtOAc-己烷)，得到三醇1(394g，61％)。

三乙酸酯2.在1.5h内将乙酸酐(6.06mol)于15℃下加入三醇1 (1.01mol)的吡啶(1.0L)溶液中。将溶液搅拌1小时，浓缩并经快速色 谱纯化(15％-25％EtOAc-己烷)，得到三乙酸酯2(518g，97％)。

二乙酸酯3.在1.5小时内将烯丙基三甲基甲硅烷(1.11mol)继之 以BF3·Oet2(1.11mmol)于0℃加入三乙酸酯2(164g，0.32mol)的甲苯 (1.5L)溶液中。将橙色溶液于0℃搅拌1小时，然后于室温下搅拌2 小时。于0℃将混合物缓慢倾至饱和碳酸氢钠水溶液(1.7L)中，然后 搅拌30分钟。分离的水层用EtOAc萃取(3×600ml)，合并的有机层 经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(5％-10％EtOAc-己烷)，得到二 乙酸酯3的混合物(108g，69％)。

二醇4a.将固体碳酸钾(72mmol)于室温下加入二乙酸酯3(108g， 218mmol)的MeOH(0.5L)溶液中。将悬浮液搅拌2.5小时，然后浓缩。 将橙色残余物悬浮于饱和氯化铵水溶液(150ml)中，用EtOAc萃取(3 ×150ml)，合并的有机层经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化 (15％-50％EtOAc-己烷)，得到α-异构体4a(33.86g，37％)和β-异构体4b (58g，63％)。

醇5.将咪唑(16.75g，246mmol)和TBSCl(16.08g，107mmol)于0 ℃下加入二醇4a(33.86g，82mmol)的二氯甲烷(250ml)溶液中。于0 ℃18小时和于室温下5小时后，反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液 (250ml)稀释，搅拌30分钟，让各层分离。水层用EtOAc萃取(3×250 ml)，合并的有机层经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(2％-50％ EtOAc-己烷)，得到醇5(36.0g，83％)。

甲基醚6.将碘甲烷(16.5ml，265mmol)和NaH(60％矿物油溶液， 5.28g，132mmol)于0℃下加入醇5(34.93g，66mmol)、THF(320ml) 和DMF(80ml)的溶液中。于0℃19小时后，用饱和氯化铵水溶液和 饱和Na2S2O3水溶液猝灭反应。将产生的混合物搅拌20分钟，让各层 分离。水相用EtOAc萃取(3×200ml)，合并的有机层经硫酸钠干燥， 浓缩并经快速色谱纯化(3％-50％EtOAc-己烷)，得到甲基醚6(34.23g， 96％)。

二醇7.于室温下将Hcl(37％水溶液，12.75ml，153mmol)加入甲 基醚6(32.93g，61mmol)的MeOH(110ml)溶液中。17小时后，将碳 酸氢钠(17g)加入反应混合物中。将混合物搅拌30分钟，浓缩，悬浮 于EtOAc中并过滤。将滤液浓缩并经快速色谱纯化(50％EtOAc-己烷 至EtOAc)，得到二醇7(10.0g，87％)。

醇8.将新戊酰氯(8.4ml，67mmol)的吡啶(50ml)溶液在15小时内 于0℃加入二醇7(12.24g，65mmol)的吡啶(100ml)溶液中。于0℃1 小时和于室温下18小时后，混合物用饱和氯化铵水溶液稀释，用EtOAc萃取(3×800ml)。合并的有机层经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯 化(50％EtOAc-己烷)，得到醇8(16.9g，96％)。

烯烃9.将苄基溴(62ml，521mmol)和Bu4NHSO4(10.6g，31mmol) 于0℃加入醇8(16.9g，62mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中。将NaOH(9.95g，248mmol)的水(10ml)溶液在15分钟内加入反应混合物中。于 0℃30分钟和于室温下18小时后，反应混合物用饱和氯化铵水溶液 稀释，用二氯甲烷萃取(3×100ml)。合并的有机层经硫酸钠干燥，浓 缩并经快速色谱纯化(己烷至30％EtOAc-己烷)，得到烯烃9(22.1g， 98％)。

二醇10.于0℃下将OsO4(0.1M甲苯溶液，7.3ml，0.73mmol)和 烯烃9(24.9g，69mmol)的t-BuOH(165ml)溶液加入碳酸钾(31.2g，161 mmol)、K3Fe(CN)6(74.4g，161mmol)、(DHQ)2PYR(1.33g，1.50 mmol)、水(500ml)和t-BuOH(330ml)的溶液中。于0℃3小时后，加 入Na2S2O5·5H2O(37.3g，150ml)。将反应混合物温至室温，搅拌1小 时，用EtOAc萃取(3×300ml)。合并的有机层经硫酸钠干燥，浓缩并 经快速色谱纯化(5％异丙醇-二氯甲烷)，得到二醇10(17.98g，75％)。

甲硅烷基醚11.将咪唑(21g，308mmol)和TBSCl(26.5g，176mmol) 于室温下加入二醇10(17.4g，44mmol)的DMF(90ml)溶液中。18小 时后，反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(250ml)稀释，搅拌1小时， 用二氯甲烷萃取(3×100ml)。合并的有机层经硫酸钠干燥，浓缩并经 快速色谱纯化(3％EtOAc-己烷)，得到甲硅烷基醚11(25.7g，94％)。

醇12.于室温、1个大气压氢气下，将甲硅烷基醚11(21.2g，33.8 mmol)、Pd(OH)2(20％，4.7g，33.8mml)和EtOAc(200ml)的混合物搅拌 3小时。将混合物通过Celite过滤，浓缩并经快速色谱纯化(10％-20％ EtOAc-己烷)，得到醇12(17.4g，96％)。

烯烃13.于0℃将4-甲基吗啉N-氧化物(7.66g，65mmool)和TPAP (1.15g，3.26mmol)在20分钟内分4次加入醇12(17.4g，32.5mmol)的 二氯甲烷(145ml)溶液中。20分钟后，反应混合物用Et2O(50ml)和饱 和Na2S2O3水溶液(50ml)稀释，并通过Celite过滤。分离有机层，用饱 和CuSO4水溶液-盐水(1∶1)和盐水依次洗涤，经硫酸钠干燥，通过Celite 过滤并浓缩，得到所需的粗制酮。

通过将双(环戊二烯基)钛(11.36g，45.6mmol)和Me3Al(2.0M甲苯 溶液，45.6ml，91.2mmol)于室温下搅拌4天，制备Tebbe试剂。将该材 料冷却至-25℃，加入粗制酮的THF(150ml)溶液。将反应混合物温至 0℃，搅拌30分钟，通过缓慢加入0.1N NaOH(3.5ml)猝灭，然后于 室温下再搅拌20分钟。混合物用Et2O稀释，通过Celite过滤并浓缩。 将残余物溶于二氯甲烷中，通过碱性氧化铝过滤，浓缩并经快速色谱 纯化(5％EtOAc-己烷)，得到烯烃13(12.8g，两步的收率为74％)。

醇14.于0℃下将9-BBN(0.5M THF溶液，165ml，83mmol)加入 烯烃13(12.78g，24mmol)的THF(280ml)溶液中。于室温下搅拌5小 时后，将反应混合物再冷却至0℃，此时加入水(200ml)、THF(100ml) 和NaBO3·4H2O(75g)。将混合物温至室温，搅拌16小时，然后浓缩。 水性残余物用EtOAc萃取(4×300ml)，合并的有机层经硫酸钠干燥。 浓缩并经快速色谱纯化(20％-35％EtOAc-己烷)，得到醇14(12.05g， 91％)。

醇15  将DMSO(9ml，127mmol)于-78℃下加入草酰氯(5.6ml， 64mmol)的二氯甲烷(350ml)溶液中。搅拌15分钟后，加入醇14(11.7 g，0.021mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液，继续搅拌1小时，此后加入Et3N(26.7ml，192mmol)。将反应混合物温至0℃，搅拌15分钟，用饱和 氯化铵水溶液稀释，用二氯甲烷萃取(3×200ml)。合并的有机层经硫 酸钠干燥并浓缩，得到所需的粗制醛。

将该材料溶于二氯甲烷(200ml)中，用Et3N(20ml)于室温下处 理。搅拌过夜后，反应混合物用饱和氯化铵水溶液稀释，用二氯甲烷 萃取(3×200ml)。合并的有机层经硫酸钠干燥、浓缩并通过短SiO2柱过滤(20％EtOAc-己烷)，得到粗制差向异构化产物。

将该醛溶于Et2O-EtOH(1∶1，100ml)中，冷却至0℃，并用硼氢化 钠(1.21g，32mmol)处理。将混合物搅拌20分钟，小心地用饱和氯化 铵水溶液稀释，于室温下搅拌30分钟，并用二氯甲烷萃取(3×150 ml)。合并的萃取液经硫酸钠干燥、浓缩并经快速色谱纯化(20％EtOAc- 己烷)，得到醇15(9.95g，三步的收率为85％)。

MPM-醚16  将BF3·OEt2(0.1M二氯甲烷溶液，1.8ml，0.18mmol) 于0℃加入醇15(9.87g，18mmol)、MPM-三氯亚氨酸酯 (trichloroimidate)(4.9ml，27mmol)和二氯甲烷(175ml)的溶液中。40分 钟后，将第二份BF3·OEt2(0.1M二氯甲烷溶液，0.9ml，0.09mmol)加入 反应混合物中。20分钟后，用饱和氯化铵水溶液猝灭反应，于室温下 搅拌1小时，并用Et2O(600ml)稀释。分离有机层，水层用Et2O(150ml) 萃取。合并的有机萃取液用0.1N NaOH水溶液、饱和碳酸氢钠水溶 液、盐水顺序洗涤，经硫酸钠干燥、浓缩并经快速色谱纯化(20％EtOAc- 己烷)，得到MPM-醚16(10.20g，85％)。

醇17  将LAH(1M THF溶液，22.5ml，22.5mmol)于0℃加入 MPM-醚16(10.05g，15mmol)的Et2O(1.0L)溶液中。30分钟后，小心 地用水(1.3ml)和1N NaOH水溶液(1.3ml)猝灭反应。于室温下搅拌1 小时后，悬浮液通过Celite过滤，浓缩并经快速色谱纯化(20％EtOAc- 己烷)，得到醇17(8.18g，93％)。

烯烃18  将DMSO(5.8ml，82.4mmol)于-78℃加入草酰氯(3.6ml， 41.2mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液中。15分钟后，将醇17(7.94g，13.5 mmol)的二氯甲烷(35ml)溶液加入反应混合物中。搅拌1小时后，加入 Et3N(17ml，122mmol)，将混合物温至0℃，搅拌20分钟，用饱和氯 化铵水溶液稀释，然后用二氯甲烷(3×100ml)萃取。合并的有机萃取 液经硫酸钠干燥、浓缩并通过短SiO2柱过滤(20％EtOAc-己烷)，得到 所需的粗制醛。

将n-BuLi(1.6M，20ml，30mmol)于0℃下滴加至CH3PPh3Br(10.1 g，30mmol)在THF(350ml)和DMSO(100ml)中的溶液中。1小时后， 加入粗制醛的THF(50ml)溶液。将反应混合物温至室温并搅拌3小 时。加入饱和氯化铵水溶液，混合物用EtOAc萃取(3×500ml)。合并 的萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩，并经快速色谱纯化(7％ EtOAc-己烷)，得到烯烃18(5.57g，两步的收率为71％)。

醇19  将9-BBN(0.5M THF溶液，65ml，33mmol于0℃下加入 烯烃18(5.56g，9.6mmol)的THF(85ml)溶液中。将混合物于室温下搅 拌5小时，然后再冷却至0℃。顺序加入水(200ml)、THF(100ml)和 NaBO3·4H2O(30g)。于室温下搅拌过夜后，减压去除有机挥发物。水 性残余物用EtOAc萃取(3×200ml)，合并的有机层经硫酸钠干燥，浓 缩并经快速色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得到醇19(12.05g，92％)。

醛20  将DMSO(1.36ml，19.2mmol)于-78℃下在4分钟内滴加 至草酰氯(1.26ml，14.4mmol)的二氯甲烷(120ml)溶液中。搅拌10分钟 后，通过导管加入醇19(5.76g，9.61mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。通 过用额外的二氯甲烷冲洗(2×5ml)完成转移。搅拌20分钟后，混合 物用Et3N(5.36ml，38.4mmol)处理，于-78℃下搅拌10分钟，于0℃ 搅拌30分钟，并于室温下搅拌10分钟。将反应混合物倾至饱和碳酸 氢钠水溶液(200ml)中，分离的水层用二氯甲烷萃取(3×)，然后用 EtOAc(100ml)萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯 化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到油状物的醛化合物20(5.28g，92％)。

B2318  于室温下，在手套箱中将0.1％NiCl2/CrCl2(w/w，3.21g) 和1％NiCl2/CrCl2(w/w，4.31g)加入醛20(3.73g，6.25mmol)、实例为 碘代乙烯X2的关键片段F-2(5.10g，9.16mmol)、THF(85ml)和DMF (21ml)溶液中。将反应混合物搅拌24小时，从手套箱中取出，冷却至 0℃，用EtOAc(100ml)稀释，用饱和氯化铵(200ml)猝灭并搅拌30分 钟。分离的水相用EtOAc萃取(6×)，合并的有机层经硫酸钠干燥，浓 缩并经柱色谱纯化(20％-30％)，得到污染紧密洗脱的杂质的B2318(～3 g)和未环化中间体(4.61g)。将后者(4.61g，4.48mmol)溶于THF(150ml) 中，冷却至0℃并在2分钟内用KHMDS(0.5M甲苯溶液，14ml，7.0 mmol)处理。于0℃下搅拌15分钟后，反应物用饱和氯化铵水溶液(150 ml)猝灭并温至室温。分离的水层用EtOAc萃取(3×)，合并的有机相 经硫酸钠干燥、浓缩并与以上获得的部分纯化的产物混合。柱色谱 (10％EtOAc-己烷)，得到不可分离的～3∶1 C27非对映体混合物的B2318 (3.17g，55％)。

B2317.于室温下，将DDQ(1.45g，6.42mmol)在30分钟内分次 加入搅拌的B2318(3.12g，3.35mmol)在二氯甲烷(50ml)和pH7磷酸缓 冲液(5ml)中的溶液中。用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)猝灭反应，搅拌 5分钟，用额外的饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)和水(200ml)稀释，并用 Et2O(5×)萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥、浓缩并经柱色谱纯化 (15％-30％EtOAc-己烷)，得到回收的B2318(1.40g)和C27异构体产物 的混合物。回收的B2318再经过上述反应条件，获得额外的产物。回 收的原材料再通过去保护条件循环。合并所有所需材料并经MPLC分 离，得到B2317(1.65g，61％)。

B2316.将TsCl(0.63g，3.30mmol)于室温下加入B2317(1.60g， 1.97mmol)在二氯甲烷(8ml)和吡啶(2ml)中的溶液中。搅拌29小时后， 用饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)和水(10ml)猝灭反应。分离的水层用 Et2O萃取，合并的有机层经硫酸钠干燥、浓缩并经柱色谱纯化(15％- 30％EtOAc-己烷)，得到油状物的B2316(2.01g，92％)以及回收的 B2317(92mg，5.8％)。

B2315.于0℃下，将LAH(1M THF溶液，2.61ml，2.61mmol)在 1分钟内加入B2316(1.68g，1.74mmol)的Et2O(80ml)溶液中。搅拌7 分钟后，通过小心加入MeOH(0.42ml，10.4mmol)和水(0.19ml，10 mmol)猝灭反应，将反应物温至室温并搅拌20分钟。通过Celite过滤 用1∶1二氯甲烷-Et2O冲洗，浓缩并经柱色谱纯化(30％-40％EtOAc-己 烷)，得到油状物的B2315(1.38g，90％)。

B2314.将MMTrCl(0.70g，2.26mmol)于室温下加入B2315(1.33 g，1.51mmol)在二氯甲烷(25ml)和iPr2NEt(0.79ml，4.53mmol)中的溶 液中。将所得的混合物搅拌1小时，然后倾至饱和碳酸氢钠水溶液(20 ml)、水(10ml)和Et2O(50ml)的混合物中。分离的水层用Et2O萃取(3 ×)。合并的有机相经硫酸钠干燥、浓缩并经柱色谱纯化(二氯甲烷， 然后15％-30％EtOAc-己烷)，得到固体泡沫状物的B2314(1.65g， 95％)。

B2313.将B2314(1.60g，1.39mmol)和NaI(3.10g，20.8mmol)在 丙酮(50ml)中的混合物于回流下加热13小时。冷却至室温后，反应混 合物用EtOAc稀释并浓缩。加入水(5ml)、盐水(20ml)和Na2S2O3(200 mg)，所得的混合物用Et2O萃取(4×)。合并的萃取液经硫酸钠干燥、 浓缩并经柱色谱纯化(10％EtOAc-己烷)，得到油状物的B2313(1.50g， 97％)。

B2308.于-78℃下，将叔丁基锂(1.7M戊烷溶液，1.00ml，1.7 mmol)在1分钟内加入B2313(0.90g，0.81mmol)的Et2O(14ml)溶液 中。搅拌9分钟后，将混合物在4分钟内通过导管转移至关键片段F- 3(0.83g，1.14mmol)的Et2O(4ml)溶液中。通过用额外的Et2O(2ml) 冲洗完成转移。将所得的混合物于-78℃搅拌5分钟，然后于0℃搅拌 10分钟，用饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)猝灭，并温至室温。分离的水 层用Et2O萃取(3×)，合并的有机层经硫酸钠干燥并浓缩。残余物与 其它2批残余物(相当于0.11g和0.44g B2313)混合，并经柱色谱纯化 (10％-20％EtOAc-己烷)，得到固体泡沫状物的B2307和B2308的混合 物(1.86g，83％)。尽管可以经制备型TLC分离所述异构体(20％EtOAc- 己烷)，但将它们作为混合物进入下一步反应。

B2305和B2306.将B2307/B2308的混合物(1.80g，1.05mmol)溶 于EtOH(20ml)中，用PPTS(10.0mg，0.04mmol)处理，于室温下搅拌 11小时并用碳酸氢钠(20.0mg，0.24mmol)猝灭。搅拌15分钟后，将混 合物浓缩，与甲苯(15ml)共沸，并经柱色谱纯化(20％-30％EtOAc-己 烷)，得到固体泡沫状物的B2305和B2306的混合物(1.22g，81％)。尽 管可以经制备型TLC分离所述异构体(20％EtOAc-己烷)，但将它们作 为混合物进入下一步反应。

B2304.将B2305/B2306的混合物(1.16g，0.68mmol)和Dess- Martin periodinane(0.61g，1.44mmol)的二氯甲烷(35ml)溶液于室温下 搅拌1小时。将额外的Dess-Martin periodinane(0.54g，1.27mmol)加入 混合物中，并再继续搅拌1小时。混合物用Et2O(100ml)稀释，搅拌 20分钟，并通过Celite过滤，用Et2O冲洗。无色的滤液用饱和碳酸氢 钠水溶液(100ml)洗涤，分离的水层用Et2O萃取(3×)。合并的有机层 经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到固 体泡沫状物的B2304(0.98g，84％)。

或者，可以如下制备B2304，事实上下述的合成优于上述合成。

向2.4mg的所述醇的29ml二氯甲烷溶液中加入770mg三氟乙酸 酐(triflic anhgdride)。将混合物搅拌15分钟，用饱和碳酸氢钠萃取，干 燥并经色谱，得到2.737g，100％。

向所述甲磺酸酯(405mg)的DMF(0.06ml)溶液中加入二异丙基乙 胺(0.130ml)，然后加入苯硫醇(0.061ml)。4小时和22小时后，加入 额外的胺(0.03ml)和苯硫醇(0.015ml)。24小时后，混合物用5％乙酸 乙酯/己烷(1ml)稀释并经色谱分离，得到409mg。

向所述硫化物(1.97g)的乙腈(16ml)溶液中加入氧化N-甲基吗啉 (NMO)，然后加入过钌酸(VII)四丙基铵(1.02g)、(TPAP)(38mg)的乙 腈(1ml)溶液中。于室温下3.5小时后，将混合物加热至40℃达1小时。 将混合物冷却，加入饱和硫代硫酸钠水溶液，将混合物分配于水和乙 酸乙酯之间。常规处理得到1.567g褐色油状物。

于-78℃下，向所述新戊酸酯(1.567g)的二氯甲烷(11.2ml)溶液中 加入2.5ml 1M DIBAL的甲苯溶液。15分钟后，加入额外的DIBAL (0.8ml)。再经5分钟后，缓慢加入0.46ml甲醇，然后缓慢加入0.2ml 水。混合物通过Celite过滤并经色谱分离，得到1.386g油状物。

于-40℃下，向所述砜(36mg)的DME(1ml)溶液中加入正丁基锂 (2.8相当量)。35分钟后，加入所述醛(42mg)的DME(0.5ml)溶液。 40分钟后，加入饱和氯化铵水溶液并用乙酸乙酯萃取该混合物。常规 处理，然后经色谱分离，得到52mg油状物。

向所述醇(42mg)的二氯甲烷(2ml)溶液中加入Dess Martin试剂 (36.4mg)。将混合物搅拌30分钟，然后加入乙醚。混合物通过Celite 过滤，用饱和碳酸氢钠、饱和硫代硫酸钠洗涤，以常规方式进行处理 并经色谱分离，得到38mg油状物。

SmI2溶液的制备

将1，2-二碘乙烷的THF(10ml)溶液加入Sm(0.16g)的THF(1ml) 悬浮液中。将混合物搅拌1小时。

于-78℃将0.03ml等份的该溶液加入到所述砜的THF溶液中。5 分钟后，加入额外的SmI试剂(0.05ml)。再经数分钟后，再加入0.25ml 试剂。去除冷却浴，加入3ml饱和碳酸氢钠水溶液。将混合物分配于 乙醚和水之间，常规处理得到9.1mg油状物(81％)。

B2302和B2303.在手套箱中，将NiCl2/CrCl2(1％w/w，1.09g， 8.86mmol)于室温下加入B2304(1.01g，0.70mmol)的THF(600ml)和 DMF(150ml)溶液中。搅拌2天后，从手套箱中取出反应混合物，冷 却至0℃，用饱和氯化铵水溶液(300ml)猝灭，并于0℃下搅拌20分 钟。加入水(100ml)后，分离两层，水层用EtOAc萃取(5×)。合并的 有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥、浓缩并经柱色谱纯化(15％EtOAc- 己烷)，得到固体泡沫状物的B2302和B2303的混合物(0.84g，92％)。 尽管可以经制备型TLC分离(20％EtOAc-己烷)所述异构体，但将它们 作为混合物进入下一步反应中。

B2301.将B2302/B233的混合物(0.79g，0.60mmol)和Dess- Martin periodinane(0.26g，0.60mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液于室温下 搅拌30分钟。将额外的Dess-Martin periodinane(0.26g，0.60mmol)加 入混合物中并再继续搅拌1.5小时。然后混合物用Et2O(100ml)稀释， 搅拌15分钟并通过Celite过滤。滤液用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)洗 涤，分离的水层用Et2O萃取(3×)。合并的有机相经硫酸钠干燥、浓 缩并经柱色谱纯化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到油状物的B2301(0.67 g，85％)。

B1793.于室温下将TBAF(1M THF溶液，含0.5M盐酸咪唑， 4.60ml，4.60mmol)在2分钟内加入B2301(0.62g，0.48mmol)的THF (29ml)溶液中，将所得的混合物搅拌18小时。用己烷(10ml)稀释后， 将反应混合物直接上样至用50％EtOAc-己烷填充的SiO2柱中，用50％ EtOAc-己烷(1L)洗脱，然后用10％MeOH/EtOAc洗脱，收集中间体混 合物。去除溶剂后，将残余物溶于二氯甲烷(15ml)中并用PPTS(645mg) 处理。于室温下搅拌1小时后，加入额外的PPTS(414mg)，将所得的 白色悬浮液搅拌4.5小时。然后将反应混合物直接上样至用70％ EtOAc-己烷填充的SiO2柱中，用70％EtOAc-己烷(0.5L)、EtOAc(1L) 洗脱。用5％-10％MeOH/EtOAc洗脱，得到纯的B1793(181mg)，用 15％MeOH/EtOAc洗脱，得到额外的半纯产物，该半纯产物经制备型 TLC纯化(10％MeOH-EtOAc)后，得到额外的纯的B1793(42mg)。获 得白色固体的B1793(总共223mg，64％)。HRMS：C40H58O12+Na的计算值：753.3826。实测值：753.3808。

B1794的合成：

B1794.除了立体化学和保护基不同(流程3和5)外，以类似于用 于B1793的方式(参见流程4和5)，将阿拉伯糖转化为B1794。 HRMS：C40H58O12+Na的计算值：753.3826。实测值：753.3856。 代表性B1793类似物的合成：

B1920和B1921.将TsCl(9.9mg，0.052mmol)于室温下加入二醇 B1793(7.6mg，0.010mmol)的二氯甲烷(1ml)和吡啶(0.1ml)溶液中。 48小时后，反应物用饱和碳酸氢钠水溶液-盐水的1∶4混合物猝灭，用 二氯甲烷萃取(4×)。合并的萃取液经硫酸钠干燥并浓缩。经制备型 TLC纯化(80％EtOAc-己烷)，得到单甲苯磺酸酯B1920(6.0mg，67％) 和二甲苯磺酸酯B1921(1.8mg，18％)。

B2294.于0℃下，将MsCl(0.3M二氯甲烷溶液，98μl，0.030mmol) 在40分钟内滴加至可力丁(7μl，0.054mmol)、B1793(20.8mg，0.028 mmol)和二氯甲烷(1ml)的混合物中。于4℃76小时后，用饱和碳酸氢 钠水溶液-盐水的1∶4混合物猝灭反应，用二氯甲烷萃取(4×)。合并的 萃取液经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物溶于甲苯(3ml)中，浓缩并经 制备型TLC纯化(1.5％MeOH-EtOAc)，得到甲磺酸酯B2294(21.4mg， 95％)。

B2014和B2015.将0.016M的4-氟苄基溴的Et2O(800μl，13 μmol)溶液和Ag2O(10mg，43μmol)分别分3份以1小时的间隔，加入 于室温下的B1793(1.7mg，2.3μmol)的Et2O(1.2ml)溶液中。使混合物 避光，搅拌7小时，然后通过Celite过滤。浓缩并经制备型TLC纯化 (EtOAc)，得到伯醚B2014(1.1mg，56％)和仲醚B2015(0.6mg，31％)。 HRMS(FAB)：C47H63FO12+Na的计算值：861.4201。实测值：B2014 为861.4178，B2015为861.4160。

通用方法.将B1793(1mg，1.37微摩尔)、Et3N(10微升，72微摩 尔)和ArNCO(2-4相当量)在二氯甲烷(0.2ml)中的混合物于室温下搅拌 4小时至过夜，直至经TLC判断反应完成。反应混合物用饱和碳酸氢 钠(3ml)稀释，用二氯甲烷(3×)和EtOAc(2×)萃取，经硫酸钠干燥并 经制备型TLC纯化(5％MeOH-二氯甲烷)，得到下述产物：

B1984.(1.0mg，86％)HRMS(FAB)：C47H63NO13+Na的计算值： 872.4197。实测值：872.4214。

B1990.(1.1mg，92％)HRMS(FAB)：C47H62ClNO13+Na的计算 值：906.3807。实测值：906.3826。

B1992.(1.0mg，83％)HRMS(FAB)：C48H65NO14+Na的计算值： 902.4303。实测值：902.4269。

B2042.将DEAD(0.4M乙醚溶液，50μl，19μmol)于室温下加入 B1793(2.0mg，2.7μmol)、三苯膦(5mg，19μmol)、4-硝基苯甲酸(3.2 mg，19μmol)和Et2O(500μl)的溶液中。22小时后，将反应混合物直接 上样至制备型TLC板上，用60％EtOAc-己烷洗脱，得到中间体二酯(3.0 mg)。将该材料溶于MeOH(300μl)中，用碳酸钾(约1mg)处理。于室 温下搅拌30分钟后，反应混合物用盐水稀释并用二氯甲烷萃取(5×)。 合并的萃取液经硫酸钠干燥，浓缩并经制备型TLC纯化(5％ MeOH-EtOAc)，得到B2042(1.2mg，两步的收率为60％)。HRMS(FAB)： C40H58O12+Na的计算值：753.3826。实测值：753.3810。

B1896和B1897.将NaBH4(3mg，0.08mmol)于室温下加入 B1793(2.30mg，3.15μmol)的1∶1二氯甲烷-MeOH(0.2ml)溶液中。浓 缩反应混合物并经制备型TLC纯化(8％MeOH-EtOAc)，得到B1896 (0.80mg，35％)和B1897(2∶1混合物，0.15mg，6.5％)。B1896的HRMS (FAB)：C40H60O12+Na的计算值：755.3983。实测值：753.3969。

B1918.将B1793(2.0mg，2.74μmol)、NaIO4(35mg，0.16 mmol)、MeOH(0.8ml)和水(0.2ml)的混合物于室温下搅拌40分钟。 反应混合物用水(1ml)稀释，用二氯甲烷萃取(6×)，经硫酸钠干燥， 浓缩并经柱色谱纯化(5％MeOH-二氯甲烷)，得到B1918(1.9mg， 100％)。

B2037.将0.034M NaBH4的EtOH溶液(0.1ml，3.4μmol)于-78 ℃至室温下分次加入B1918(1.9mg，2.72μmol)的MeOH(0.8ml)和二 氯甲烷(0.2ml)的溶液中，直至经TLC判断反应完成。于-78℃下反应 物用饱和氯化铵水溶液(2ml)猝灭，温至室温，用二氯甲烷萃取(6×)， 经硫酸钠干燥并经制备型TLC纯化(5％MeOH-二氯甲烷)，得到B2037 (1.7mg，89％)。HRMS(FAB)：C39H56FO11+Na的计算值：723.3720。 实测值：723.3749。

B2035

将NaIO4(35mg，0.16mmol)加入B1793(1.7mg，0.0023mmol)、 MeOH(800μl)和水(200μl)的溶液中，15分钟后，混合物用水稀释并 用二氯甲烷萃取(5×)。有机萃取液经硫酸钠干燥、浓缩，将中间体醛 立即溶于DMF(300μl)中。加入3-溴-3，3-二氟丙烯(3μl，0.023mmol) 和铟粉(3mg，0.23mmol)，24小时后加入额外的3-溴-3，3-二氟丙烯(1 μl，0.008mmol)。18小时后，加入水，混合物用EtOAc萃取(3×)。合 并的有机萃取液用水和盐水顺序洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经制备 型TLC纯化(80％EtOAc-己烷)，得到作为异构体混合物的B2035(0.74 mg，两步的收率为41％)。HRMS(FAB)：C42H58F2O11+Na的计算值： 799.3845。实测值：799.3883。

B2008，B2011

将NaBH4(2mg，0.05mmol)于室温下加入B1793(2.2mg，0.003 mmol)的1∶1二氯甲烷-MeOH(200μl)溶液中。15分钟后，加入饱和氯 化铵水溶液和水，混合物用二氯甲烷(6×)和EtOAc(2×)萃取。合并 的有机萃取液经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(10％ MeOH-EtOAc)，得到中间体三醇，将其溶于MeOH(800μl)和水(200μl)中。 加入NaIO4(35mg，0.16mmol)，20分钟后，混合物用水稀释并用二氯 甲烷萃取(6×)。有机萃取液经硫酸钠干燥，浓缩，将中间体醛立即溶 于THF(500μl)中。加入4-氟苯基溴化镁(2M Et2O溶液，12μl，0.024 mmol)，20分钟后用饱和氯化铵水溶液猝灭反应。混合物用二氯甲烷 萃取(6×)，合并的有机萃取液经硫酸钠干燥并浓缩。经制备型TLC 纯化(EtOAc)，得到作为4种异构体混合物的所需产物(1.32mg，3步的 收率为55％)。

将Dess-Martin periodinane(～3mg，0.007mmol)加入上述产物(0.95 mg，0.0012mmol)的二氯甲烷(300μl)溶液中，于室温下将混合物搅拌 20分钟。加入额外的Dess-Martin periodinane(～3mg，0.007mmol)和二 氯甲烷(300μl)，再经40分钟后，加入Et2O、饱和碳酸氢钠水溶液(4ml) 和饱和Na2S2O3水溶液(1ml)。混合物用Et2O萃取(3×)，合并的萃取 液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％EtOAc-己 烷)，得到B2008(0.58mg，61％)。HRMS(FAB)：C45H57FO11+Na的 计算值：815.3783。实测值：815.3758。

B2011.以相似方式，将B1793(1.9mg，0.003mmol)转化为B2011 (0.87mg，4步的收率为42％)。HRMS(FAB)：C45H58O11+Na的计算 值：797.3877。实测值：797.3877。

B2013

将B1920(1.4mg，0.0016mmol)、KCN(1mg，0.016mmol)和 DMSO(500μl)的溶液于60℃加热8小时。冷却至室温后，加入水， 混合物用EtOAc萃取(3×)。合并的有机萃取液顺序用水和盐水洗涤， 经硫酸钠干燥，浓缩并经制备型TLC纯化(80％EtOAc-己烷)，得到 B2013(0.78mg，67％)。HRMS(FAB)：C42H57NO11+Na的计算值： 762.3829。实测值：762.3848。

X1920

将B1920(1.3mg，1.47mmol)、NaI(30mg，过量)和丙酮(1ml)的 混合物于60℃加热3.5小时。冷却至室温后，反应混合物用饱和碳酸 氢钠水溶液(3ml)稀释，用二氯甲烷(5×)和EtOAc萃取，经硫酸钠干 燥，并经柱色谱纯化(50％EtOAc-二氯甲烷至80％EtOAc-己烷)，得到 碘化物X1920(1.3mg，100％)。

X1920            B1998：Ar＝p-Cl-Ph

                 B2010：Ar＝p-MeO-Ph

                 B2019：Ar＝2-咪唑

通用方法.于室温下搅拌碘化物X1920(1.0相当量)、iPr2EtN(11-22相当量)和ArSH(9-46相当量)和DMF(0.3ml)的混合物，直至经 TLC判断反应完成(通常为24-48小时)。反应混合物用饱和碳酸氢钠水 溶液(2ml)稀释，用二氯甲烷和EtOAc萃取，经硫酸钠干燥并经制备 型TLC纯化(80％EtOAc-己烷或5％MeOH-二氯甲烷)，得到下述产 物：

B1998.(1.3mg得到1.1mg，85％)HRMS(FAB)：C46H61ClO11S+ Na的计算值：897.3521。实测值：897.3533。

B2010.(1.1mg得到0.7mg，59％)HRMS(FAB)：C47H64O12S+ Na的计算值：875.4016。实测值：875.4057。

B2019.(1.1mg得到0.7mg，61％)HRMS(FAB)：M+Na

B1998：Ar＝p-Cl-Ph     B2016：Ar＝p-Cl-Ph

B2010：Ar＝p-MeO-Ph    B2030：Ar＝p-MeO-Ph

通用方法.将0.01M mCPBA(1.2相当量)的二氯甲烷溶液于0 ℃加入硫化物(1.0相当量)的二氯甲烷(0.5ml)溶液中达30分钟。反应 混合物用饱和碳酸氢钠(2ml)稀释，用二氯甲烷和EtOAc萃取，经硫 酸钠干燥并经制备型TLC纯化(80％EtOAc-己烷或EtOAc)，得到下述 产物：

B2016.(0.9mg得到0.7mg，74％)

B2030.(1.0mg得到0.6mg，61％)HRMS(FAB)：C47H64O14S+ Na的计算值：907.3914。实测值：907.3950。

B1934.将TBDPSCl(3.0μl，12μmol)于室温下加入B1793(1.3 mg，1.78μmol)、咪唑(10mg，166μmol)和DMF(0.10ml)的溶液中。搅 拌1小时后，反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(2ml)稀释，用二氯甲 烷(3×)和EtOAc(2×)萃取，经硫酸钠干燥，并经制备型TLC纯化(5％ MeOH-二氯甲烷)，得到中间体甲硅烷基醚(1.3mg，77％)。

将该材料溶于二氯甲烷(0.5ml)中并用Dess-Martin periodinane(10 mg，24μmol)于室温下处理1.5小时，用Et2O稀释，并通过Celite过滤。 将滤液浓缩并经制备型TLC纯化(50％EtOAc-己烷)，得到二酮中间体 (1.0mg，77％)，将其溶于THF(0.5ml)中并用含0.01M盐酸咪唑的0.02 M TBAF(THF溶液，75μl，1.5μmol)于室温下处理15分钟。反应混合 物通过SiO2柱洗脱(50％EtOAc-己烷至5％MeOH-二氯甲烷)，得到 B1934(0.75mg，100％)。HRMS(FAB)：C40H56FO12+Na的计算值： 751.3669。实测值：751.3690。

B1939的合成：

B1922  将叠氮化四正丁基铵(0.2M DMF溶液，0.5ml，0.10mmol) 于室温下加入甲磺酸酯B2294(21.4mg，0.026mmol)的DMF(2ml)溶液 中。于83℃3.5小时后，将反应混合物冷却至室温，用甲苯稀释，浓 缩并经制备型TLC纯化(80％乙酸乙酯-己烷)，得到B1922(18mg， 92％)。

B1939  将Me3P(1M THF溶液)和水(0.8ml)于室温下顺序加入 叠氮化物B1922(24.6mg，0.032mmol)的THF(3.2ml)溶液中。将混合 物搅拌22小时，用甲苯稀释，浓缩并经快速色谱纯化[阶梯式梯度，10％ MeOH-EtOAc，然后MeOH-EtOAc-30％氢氧化铵水溶液(9∶86∶5)]，得 到所需的伯胺(23.3mg)，其经1H-NMR检测含有～1％氧化三甲基膦。 从苯中冻干并在高度真空下静置2天，得到B1939(20.3mg，87％)。

代表性B1939类似物的合成：

B1930，B1940，B1973，B1987，B1988，B1991，B2003，B2004

B1930  将Me3P(1M THF溶液，13μl，0.013mmol)于室温下加入 B1922(1.6mg，2.1μmol)、THF(400μl)和水(100μl)的溶液中。将混合 物搅拌22小时，用甲苯稀释，浓缩并与甲苯共沸干燥(2×)，得到粗 制胺，将其直接用于下一步。

将EDC(0.06M二氯甲烷溶液，100μl，11μmol)于室温下加入所述 粗制胺、苯甲酰甲酸(0.8mg，5.3μmol)和二氯甲烷(200μl)的溶液中。 30分钟后，反应物用饱和碳酸氢钠水溶液-盐水的1∶4混合物猝灭，并 用二氯甲烷萃取(5×)。合并的萃取液经硫酸钠干燥，浓缩并经制备型 TLC纯化(EtOAc)，得到B1930(1.5mg，两步的收率为83％)。HRMS (FAB)：C48H63NO13+Na的计算值：884.4197。实测值：884.4166。

B1940  采用上述用于B1930的方法，将B1922还原，与3-吡啶 乙酸盐酸盐偶合，并经制备型TLC纯化[(MeOH-EtOAc-30％氢氧化铵 水溶液(9∶86∶5)]，得到B1940(0.8mg，两步的收率为67％)。HRMS (FAB)：C47H64N2O12+Na的计算值：871.4357。实测值：871.4362。

B1973  采用上述方法，将B1922(0.9mg，1.2μmol)还原，与苯 乙酸偶合，并经制备型TLC纯化(5％MeOH-EtOAc)，得到B1973(0.44 mg，两步的收率为44％)。HRMS(FAB)：C48H65NO12+Na的计算值： 870.4404。实测值：870.4447。

B1987  采用上述方法，将B1922(0.9mg，1.2μmol)还原，与3- 吲哚基二羟乙酸偶合，并经制备型TLC纯化(3％MeOH-EtOAc)，得到 B1987(0.8mg，两步的收率为75％)。HRMS(FAB)：C50H64N2O12+ Na的计算值：923.4306。实测值：923.4338。

B1991  采用上述方法，将B1922(1.0mg，1.3μmol)还原，与4- 氯苯甲酸偶合，并经制备型TLC纯化(3％MeOH-EtOAc)，得到B1991 (0.8mg，两步的收率为70％)。HRMS(FAB)：C47H62ClNO12+Na的 计算值：890.3858。实测值：890.3843。

B2003  采用上述方法，将B1922(1.0mg，1.3μmol)还原，与3，4，5- 三甲氧基苯甲酰甲酸偶合，并经制备型TLC纯化(EtOAc)，得到B2003 (0.7mg，两步的收率为56％)。HRMS(FAB)：C51H69NO16+Na的计 算值：974.4514。实测值：974.4525。

B2004  采用上述方法，将B1922(1.0mg，1.3μmol)还原，与3，4，5- 三甲氧基苯甲酸偶合，并经制备型TLC纯化(5％MeOH-EtOAc)，得到 B2004(0.7mg，两步的收率为58％)。HRMS(FAB)：C49H65NO13+Na的计算值：946.4565。实测值：946.4599。

B1988  将Dess-Martin periodinane(1mg，2.3μmol)于室温下加入 B1930(0.80mg，0.93μmol)的二氯甲烷(500μl)溶液中。1小时后，反应 物用Et2O稀释并通过Celite过滤。滤液顺序用饱和碳酸氢钠水溶液- Na2S2O3的1∶9混合物和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经制备型 TLC纯化(80％EtOAc-己烷)，得到B1988(0.45mg，56％)。HRMS (FAB)：C48H61NO13+Na的计算值：882.4041。实测值：884.4012。

B2090的合成：

化合物103.将铟粉(1.35g，11.8mmol)于室温下加入102(3.38g， 17.6mmol)的DMF(20ml)溶液中。搅拌30分钟后，将反应混合物冷却 至0℃。然后加入纯醛101(3.72g，28.6mmol)，将混合物搅拌过夜， 同时让温度温至室温。将反应混合物再冷却至0℃，然后小心地用饱 和氯化铵水溶液(100ml)猝灭。搅拌30分钟后，得到的混合物用Et2O萃取(3×)，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(10％-20％EtOAc-己 烷)，得到纯晶体103(2.20g，59％)。

化合物104.将Et3N(72μl，0.51μmol)加入103(1.09g，5.13mmol) 和苯硫酚(0.63ml，7.16mmol)的二氯甲烷溶液中，将所得的混合物于0 ℃搅拌1小时。通过SiO2过滤，得到104和105的混合物，该混合物 在MPLC(15％-20％EtOAc-己烷)后，得到104(0.53g，32％)和105(0.92 g，56％)。

化合物106.将DIBALH(1M甲苯溶液，3.28ml，3.28mmol)于-78 ℃下加入104(0.53g，1.64mmol)的甲苯(10ml)溶液中，将混合物于-78 ℃下搅拌10分钟。通过小心地加入MeOH(0.40ml，9.84mmol)和水 (0.17ml，9.84mmol)猝灭反应，温至室温并搅拌20分钟。白色的悬浮 液通过Celite和SiO2的混合物过滤，用1∶1二氯甲烷-Et2O冲洗，浓缩， 得到油状物的106(0.53g，100％)。

化合物107.将106(0.53g，1.64mmol)和(三苯基亚膦基 (triphenylphosphoranylidene))乙酸乙酯(1.15g，3.29mmol)在甲苯(10ml) 中的混合物加热至80℃达15小时。将混合物冷却至室温，并引入DBU (25μl，0.16mmol)。将混合物加热至80℃达1.5小时，冷却至室温， 浓缩并经柱色谱纯化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到油状物的107(0.54g， 83％)(α∶β异构体为3∶1)。

化合物108.将mCPBA溶液(～55％，450mg溶于4.5ml二氯甲烷 中，1.44mmol)于-78℃下加入107(0.54g，1.36mmol)的二氯甲烷(10ml) 溶液中。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)、水(10ml)和Et2O(60ml)稀释，然后温至室温。分离的水层用EtOAc萃取(4×)，合并的 有机相经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(50％EtOAc-己烷)，得到 油状物的108(0.51g，92％)。

化合物109.将108(0.51g，1.24mmol)和NaOAc(1.00g，12.4 mmol)在Ac2O(10ml)中的混合物于140℃下搅拌12小时，冷却至室 温，然后浓缩。将残余物分配于饱和碳酸氢钠水溶液(20ml)和Et2O(30 ml)之间，于室温下剧烈搅拌30分钟。分离的水层用Et2O萃取(2×)， 合并的有机相经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(5％-15％EtOAc-己 烷)，得到油状物的109(0.41g，73％)。

化合物110.将109(0.41g，0.91mmol)和碳酸钾(44.3mg，0.32 mmol)在EtOH(5ml)中的混合物加热至60-70℃达1小时。冷却至室温 后，将反应混合物浓缩并通过SiO2柱洗脱(10％-20％EtOAc-己烷)，得 到部分纯化的醛中间体。将该材料溶于EtOH(2.5ml)中，用NaBH4(50 mg，1.32mmol)处理，并于室温下搅拌30分钟。将混合物浓缩并经柱 色谱纯化(40％EtOAc-己烷)，得到110(181mg，66％)。

化合物111.将BF3·OEt2(0.05M二氯甲烷溶液，175μl，8.75μmol) 于0℃下加入110(181mg，0.60mmol)和2，2，2-三氯乙酰亚氨酸 (trichloroacetimidate)对甲氧基苄酯(0.50ml，1.80mmol)的二氯甲烷(5ml) 溶液中。将所得的混合物于0℃搅拌1.5小时，于室温搅拌2小时， 直至反应完成。混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(25ml)猝灭，用Et2O萃 取(5×)。合并的有机相经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(二氯甲 烷，然后20％EtOAc-己烷)，得到油状物的半纯111(0.37g，＞100％)。

化合物112.将111(0.37g，最大＝0.60mmol)和TsOH·H2O(36 mg)在EtOH(5ml)中的混合物最初于室温下搅拌过夜，然后于60℃搅 拌1小时。于室温下加入额外的TsOH·H2O(31mg)，将反应混合物于 室温下搅拌1小时。然后浓缩混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭并 用EtOAc萃取(5×)。合并的有机相经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯 化(20％-50％EtOAc-己烷，然后5％MeOH-二氯甲烷)，得到油状物的 112(121mg，53％)和回收的111(49mg，21％)。

化合物113.将TBSOTf(250μl，1.09mmol)于0℃下加入112(121 mg，0.32mmol)和Et3N(176μl，1.26mmol)的二氯甲烷溶液中，将所得 的混合物搅拌25分钟。反应物用饱和碳酸氢钠水溶液(15ml)猝灭，分 离的水层用乙醚萃取(3×)。合并的有机相经硫酸钠干燥，浓缩并经柱 色谱纯化(5％-10％EtOAc-己烷)，得到油状物的113(165mg，85％)。

化合物114.将DIBALH(1M甲苯溶液，0.54ml，0.54mmol)于-78 ℃下加入113(165mg，0.27mmol)的甲苯(5ml)溶液中，将所得的混合 物于-78℃搅拌10分钟。通过小心地加入MeOH(65μl，0.81mmol)和 水(29μl，0.81mmol)猝灭反应物，将其温至室温并搅拌25分钟。白色 的悬浮液通过Celite过滤，用1∶1二氯甲烷-Et2O洗涤。浓缩并经柱色 谱纯化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到油状物的114(153mg，100％)。

B2090.以类似于流程6中用于合成B1794的方式，将中间体114 转化为B2090。HRMS(FAB)：C39H56O11+Na的计算值：723.3720。 实测值：723.3731。

B2136.以类似于用于B1939的方式，将B2090转化为B2136。 HRMS(FAB)：C39H57NO10+Na的计算值：722.3880。实测值： 722.3907。

B2039/B2043的合成：

二醇201.将TBAF(1M THF溶液，383μl，0.383mmol)加入 X2318(350-LS-218)(80.0mg，0.0765mmol)的THF(7ml)溶液中，并于 室温下搅拌16小时。部分浓缩后，将残余物直接上样至用30％EtOAc- 己烷填充的SiO2柱。梯度洗脱(30％EtOAc-己烷至EtOAc)，得到二醇 201(49.7mg，92％)。

醛202.将二醇201(49.7mh，0.0707mmol)、NaIO4(100mg，0.47 mmol)、MeOH(10ml)和水(2.5ml)的混合物于室温下搅拌30分钟。加 入水，混合物用二氯甲烷萃取(4×)。合并的有机萃取液经硫酸钠干 燥，浓缩并经柱色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得到醛202(41.7mg， 88％)。

醇203  将4-氟苯基溴化镁(2M Et2O溶液，155μl，0.31mmol)加 入醛202(41.7mg，0.062mmol)的THF(6ml)溶液中。于室温下15分钟 后，反应物用饱和氯化铵水溶液猝灭，并用二氯甲烷萃取(4×)。合并 的有机萃取液经硫酸钠干燥，浓缩并经制备型TLC纯化(40％EtOAc- 己烷)，得到作为C34异构体1∶1混合物的醇203(32.4mg，68％)。在此 阶段分离出少量不想要的C27异构体，从其中也分离出C34异构体的 1∶1混合物(8.4mg，18％)。

醚204  将Et3N(18μl，0.13mmol)和TBSOTf(15μl，0.063mmol) 于0℃下加入醇203(32.4mg，0.042mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中。 20分钟后，通过加入饱和氯化铵水溶液猝灭反应物，并用二氯甲烷萃 取(3×)。合并的有机萃取液经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％ EtOAc-己烷)，得到醚204(33.1mg，89％)。

醇205  将LAH(1M THF溶液，113μl，0.113mmol)于0℃下滴加 至醚204(33.1mg，0.0375mmol)的Et2O(10ml)溶液中。20分钟后，加 入水和1M NaOH，将混合物于室温下搅拌10分钟。通过Celite过滤， 浓缩并经柱色谱纯化(40％EtOAc-己烷)，得到醇205(28.4mg，95％)。

醚206  将二异丙基乙胺(31μl，0.18mmol)和MMTrCl(22mg， 0.071mmol)于0℃加入醇205(28.4mg，0.0356mmol)的二氯甲烷(4ml) 溶液中。于室温下15分钟后加入水，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。 合并的萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经制备型TLC纯化 (40％EtOAc-己烷)，得到作为C34差向异构体～1.5∶1混合物的醚206(45 mg，定量)，该混合物含有少量紧密洗脱的杂质。

醇207  将DDQ(40mg，0.18mmol)于0℃下加入醚206(37mg， 0.034mmol)在二氯甲烷(4ml)和tBuOH∶pH7磷酸缓冲液的1∶10混合物 (2ml)中的溶液中。将混合物在黑暗中剧烈搅拌15分钟。以10分钟的 间隔再加入3份DDQ(40mg，0.18mmol)，然后反应物用饱和碳酸氢钠 水溶液稀释并用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤， 经硫酸钠干燥，浓缩并经制备型TLC纯化(30％EtOAc-己烷)，得到醇 207(19.2mg，59％)以及回收的醚206(9.7mg，26％)。

甲磺酸酯208A和208B  将Et3N(19μl，0.13mmol)和Ms2O(10 mg，0.056mmol)于0℃下顺序加入醇207(21.3mg，0.022mmol)的二氯 甲烷(6ml)溶液中。30分钟后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，混合物用 二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥， 浓缩并经制备型TLC纯化(30％EtOAc-己烷)，得到作为单一C34异构 体的甲磺酸酯208A(11.7mg，51％)和208B(6.5mg，28％)。

B2039和B2043.类似于流程6中用于合成B1794的方式，将 非对映体208A和208B独立地转化为B2039和B2043。HRMS(FAB)： C45H59FO11+Na的计算值：817.3939。实测值：B2039为817.3896，B2043 为817.3910。

B2086、B2088、B2091.的合成：

醇X-20  将NaIO4(1.16g，5.4mmol)于0℃下加入二醇10a，b(1.19 g，3.0mmol)的MeOH-H2O(4∶1，75ml)溶液中。让反应混合物温至室 温。搅拌40分钟后，混合物用EtOAc稀释，通过Celite过滤，浓缩并 分配于盐水和二氯甲烷之间。分离的水层用二氯甲烷萃取(2×)。合并 的有机层经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗制醛中间体。

将NaBH4(228mg，6.0mmol)于0℃下加入所述醛的MeOH-Et2O(1∶1，40ml)溶液中。将混合物搅拌30分钟，小心地用饱和氯化铵水溶 液猝灭，于室温下搅拌20分钟，并用二氯甲烷萃取(3×)。合并的萃 取液经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(40％-50％EtOAc-己烷)， 得到醇X-20(1.02g，两步的收率为93％)。

甲硅烷基醚21将咪唑(0.94g，13.9mmol)和TBSCl(0.59g，3.89 mmol)于室温下顺序加入醇X-20(1.02g，2.78mmol)的DMF(10ml)溶 液中。14小时后，反应混合物用饱和氯化铵水溶液稀释并用EtOAc萃取(3×)。合并的有机萃取液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩 并经快速色谱纯化(5％-15％EtOAc-己烷)，得到甲硅烷基醚21(1.3g， 98％)。

醇22  将Pd(OH)2(20％，0.8g)、甲硅烷基醚21(1.3g，2.70mmol) 和EtOAc(30ml)的混合物在1个大气压的氢气、室温下搅拌1小时， 通过Celite过滤，浓缩并经快速色谱纯化(20％-40％EtOAc-己烷)，得 到醇22(0.96g，91％)。

醇25  将N-氧化4-甲基吗啉(980mg，8.4mmol)和TPAP(131 mg，3.26mmol)于室温下顺序加入醇22(1.78g，4.6mmol)的二氯甲烷 (45ml)溶液中。为了控制放热必需冷却浴。20分钟后，反应混合物用 己烷稀释，通过短SiO2柱过滤(15％EtOAc-己烷)并浓缩，得到粗制酮。

于0℃下将Tebbe试剂(14.9ml，9.0mmol)在10分钟内加入粗制酮 的THF(60ml)溶液中。20分钟后，将反应混合物倾至预冷却至-78℃ 的Et2O(100ml)中，通过缓慢加入水(30ml)猝灭，温至室温，搅拌30 分钟，并用Et2O萃取(4×)。合并的萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干 燥，浓缩并经快速色谱纯化(10％EtOAc-己烷)，得到污染有偕二甲基 产物的所需烯烃(1.07g)。将该混合物直接用于下一步中。

将9-BBN(0.5M THF溶液，11.6ml，5.8mmol)于0℃下加入所述 烯烃的THF(15ml)溶液中。让反应混合物温至室温，搅拌5小时，然 后再冷却至0℃。加入水(60ml)、THF(60ml)和NaBO3·4H2O(5.7g)。 于室温下搅拌5小时后，减压去除THF，水性残余物用EtOAc萃取(4 ×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色 谱纯化(20％-40％EtOAc-己烷)，得到醇25(605mg，3步的收率为 18％)。

醇26  采用先前描述的方法，将醇25(604mg，1.49mmol)按顺 序氧化、异构化和还原。经快速色谱纯化(20％-40％EtOAc-己烷)，得 到醇26(550mg，3步的收率为91％)。

MPM-醚27  将BF3·OEt2(0.05M二氯甲烷溶液，270μl，0.013 mmol)于0℃下加入醇26(545mg，1.35mmol)和MPM-三氯亚氨酸酯 (1.14g，4.0mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中。1小时后反应物用饱和碳 酸氢钠水溶液猝灭，用二氯甲烷萃取，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速 色谱纯化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到MPM-醚27(580mg，82％)。

醇28  将LAH(1M THF溶液，1.9ml，1.9mmol)于0℃下加入 MPM-醚27(580mg，1.11mmol)的Et2O(100ml)溶液中。30分钟后， 小心用水(0.5ml)和1N NaOH水溶液(0.5ml)猝灭反应物，于室温下搅 拌1小时，通过Celite过滤，浓缩经快速色谱纯化(30％-50％EtOAc- 己烷)，得到醇28(460mg，95％)。

烯烃29  于-78℃下将DMSO(441μl，6.23mmol)加入草酰氯(272 μl，3.12mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中。15分钟后，将醇28(458mg， 1.04mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液加入反应混合物中。于-78℃下搅拌 1小时后，加入Et3N(1.3ml，9.35mmol)。将反应混合物温至0℃，搅 拌10分钟，用饱和氯化铵水溶液稀释并用二氯甲烷萃取(3×)。合并 的有机萃取液经硫酸钠干燥，浓缩并通过短SiO3柱过滤(20％-30％ EtOAc-己烷)，得到粗制醛。

于0℃下将n-BuLi(1.63M，1.4ml，2.28mmol)滴加至CH3PPh3Br(815mg，2.28mmol)、THF(20ml)和DMSO(7.5ml)的溶液中。1小时 后，加入所述醛的THF(10ml)溶液。将反应混合物温至室温并搅拌3 小时。加入饱和氯化铵水溶液，混合物用EtOAc萃取(4×)。合并的有 机萃取液用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化 (10％-15％EtOAc-己烷)，得到烯烃29(380mg，两步的收率为95％)。

化合物31  于0℃将9-BBN(0.5M THF溶液，6ml，3mmol)加入 到烯烃29(370mg，0.85mmol)的THF(7ml)溶液中。使混合物温至室温 并搅拌1小时。再冷却至0℃后，加入水(30ml)、THF(20ml)和 NaBO3·4H2O(2.8g)。于室温搅拌3小时后，减压除去THF。用EtOAc萃取水性残余物(4×)，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(25％- 50％EtOAc-己烷)，得到醇30，将其直接用于下一步。

于室温下将新戊酰氯(157μl，1.27mmol)加入到醇30的二氯甲烷- 吡啶(1∶1混合物，10ml)溶液中。18小时后，加入另外的新戊酰氯(100 μl，0.81mmol)。1小时后，将反应混合物冷却至0℃，用MeOH(0.5ml) 猝灭，浓缩，用盐水稀释并用二氯甲烷萃取(4×)。合并的有机萃取液 经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(10％-15％EtOAc-己烷)，得到 化合物31(410mg，两步的收率为90％)。

醇32  于室温下将TBAF(1M THF溶液，1.14ml，1.14mmol)加 入31(410mg，0.761mmol)的THF(5ml)溶液中。1.5小时后，将反应 混合物浓缩并经快速色谱纯化(40％EtOAc-己烷至100％EtOAc)，得到 醇32(320mg，100％)。

醇33a和33b  于室温下将Dess-Martin periodinane(925mg，2.18 mmol)加入醇32(309mg，0.727mmol)的二氯甲烷(19ml)溶液中。1小 时后，反应物用Et2O稀释并通过Celite过滤。滤液顺序用饱和碳酸氢 钠水溶液-Na2S2O3的1∶9混合物和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并 经快速色谱纯化(20％-30％EtOAc-己烷)得到所需醛，将其立即用于下 一步。

于-78℃下，将BF3·OEt2(135μl，1.1mmol)加入所述粗制醛、三正 丁基烯丙基锡(337μl，1.08mmol)和二氯甲烷(16ml)的溶液中。1小时 后，反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，用二氯甲烷萃取(3×)。合并 的有机萃取液经硫酸钠干燥，浓缩并经MPLC纯化(25％-30％EtOAc- 己烷)，得到主要的极性较强的醇33a(165mg，两步的收率为49％)和 次要的极性较弱的产物33b(90mg，两步的收率为27％)。

化合物34  于0℃下将TBSOTf(163μl，0.710mmol)加入醇33a (165mg，0.355mmol)、Et3N(247μl，1.78mmol)和二氯甲烷(5ml)的溶 液中。25分钟后，反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，用二氯甲烷萃 取(3×)，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(15％-20％EtOAc-己 烷)，得到化合物34(200mg，98％)。

二醇35a和35b  于0℃下将OsO4(0.1M甲苯溶液，32μl，3.2 μmol)加入碳酸钾(168mg，1.22mmol)、K3Fe(CN)6(400mg，1.22 mmol)、(DHQ)2PYR(11mg，12μmol)、水(3.2ml)和t-BuOH(2.2ml)的 溶液中。然后将烯烃34(200mg，0.345mmol)的t-BuOH(1ml)溶液加入 反应混合物中。于0℃5小时后，加入Na2S3O5·5H2O(200mg)。将反 应混合物温至室温，搅拌30分钟，并用二氯甲烷萃取(5×)。合并的 有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经制备型TLC纯化 (70％EtOAc-己烷)，得到主要的极性较低的二醇35a(118mg，56％)和 次要的极性较强的非对映体产物35b(74mg，35％)。各种非对映体分别 用于随后的反应中。

化合物36  于0℃下将TBSOTf(177μl，0.77mmol)加入二醇 35a(118mg，0.192mmol)、Et3N(267μl，1.92mmol)和二氯甲烷(5ml) 的溶液中。25分钟后，反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，用二氯甲 烷萃取(3×)，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(10％-15％EtOAc- 己烷)，得到化合物36(161mg，100％)。

醇37  采用上述用于制备醇28的方法，由化合物36(161mg， 0.192mmol)开始，在经快速色谱纯化(20％-40％EtOAc-己烷)后，得到 醇37(135mg，93％)。

醛38  将Dess-Martin periodinane(227mg，0.535mmol)于室温 下加入醇37(135mg，0.178mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中。1小时 后，反应混合物用Et2O稀释并通过Celite过滤。滤液顺序用饱和碳酸 氢钠水溶液-Na2S2O3的1∶9混合物和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩 并经快速色谱纯化(10％-20％EtOAc-己烷)，得到醛38(127mg，95％)。

B2086，B2102.以类似于流程6中用于B1794所述方法的方式， 将上述获得的每种非对映体分别转化为终产物。由非对映体35a得到 B2086。由非对映体35b得到B2102。

B2088  将NaIO4于室温下加入B2086(1mg，1.29μmol)的 MeOH-水(4∶1，1ml)溶液中。30分钟后，反应混合物用水稀释，用二 氯甲烷萃取(6×)，经硫酸钠干燥并浓缩，得到B2088(1.2mg)。

B2091  于-78℃下，将NaBH4(0.013M EtOH溶液，20μl，0.27 μmol)加入B2088(1mg，1.29μmol)的MeOH-二氯甲烷(4∶1，0.5ml)溶液 中。定期加入额外的NaBH4，同时经TLC监测反应(总共需要220μl NaBH4溶液)。反应混合物于0℃用饱和氯化铵水溶液猝灭，于室温下 搅拌20分钟，并用二氯甲烷萃取(6×)。合并的萃取液经硫酸钠干燥， 浓缩并经制备型TLC纯化(7％MeOH-EtOAc)，得到B2091(0.40mg， 50％)。

B1933的合成：

醇303  于0℃下，将9-BBN(0.5M THF溶液，23ml，0.012mol) 在30分钟内滴加至链烯302(1.51g，0.00386mol)的THF(40ml)溶液 中。于室温下搅拌80分钟后，将混合物冷却至0℃，小心加入水(80 ml)，然后加入NaBO3·4H2O(4.2g，0.027mol)。将混合物于室温下剧 烈搅拌2.3小时，用EtOAc萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤， 经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(50％EtOAc-己烷)，得到醇303 (1.37g，87％)。

醛304  于-78℃下，将草酰氯(88μl，1.00mmol)滴加至DMSO (142μl，2.00mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。30分钟后，加入醇303 (137mg，0.335mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液，并于-78℃搅拌1小时。 加入Et3N(420μl，3.01mmol)，10分钟后，将反应物于0℃下搅拌10 分钟，此时加入饱和氯化铵水溶液，所得的混合物用二氯甲烷萃取(3 ×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色 谱纯化(50％EtOAc-己烷)，得到中间体醛304(0.114g，84％)，将其立 即用于下一步。

醇305  于0℃下将TBAF(1M THF溶液，5μl，0.005mmol)加入 醛304(0.114g，0.27mmol)的CF3TMS(0.5M THF溶液，1.1ml，0.54 mmol)溶液中。20分钟后，加入第二份TBAF(1M THF溶液，100μl， 0.1mmol)，将混合物搅拌10分钟，此时滴加过量的TBAF(1M THF 溶液，270μl，0.27mmol)以切割所述中间体甲硅烷基醚。30分钟后， 混合物用水稀释并用EtOAc萃取(3×)。有机萃取液用水、盐水洗涤， 经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(50％EtOAc-己烷)，得到作为不 可分离的1∶1异构体混合物的醇305(123mg，95％)。

甲硅烷基醚306  于0℃下，将TBSOTf(265μl，1.16mmol)加 入醇305(123mg，0.257mmol)和Et3N(430μl，3.08mmol)的二氯甲烷(8 ml)溶液中。于室温下搅拌20分钟后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，混 合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠 干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％EtOAc-己烷)，得到甲硅烷基醚306 (148mg，97％)。

醇307  于0℃下，将LAH(1M THF溶液，220μl，0.22mmol)滴 加至甲硅烷基醚306(131mg，0.22mmol)的Et2O(5ml)溶液中。20分 钟后，小心地加入水和1M NaOH。将混合物于室温下搅拌30分钟， 通过玻璃棉过滤，浓缩并经柱色谱纯化(50％EtOAc-己烷)，得到醇307 (112mg，定量)。

链烯309  于-78℃下，将草酰氯(58μl，0.66mmol)滴加至DMSO (94μl，1.3mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中。30分钟后，加入醇307 (112mg，0.22mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液。1小时后，加入Et3N(276 μl，1.98mmol)，于-78℃下10分钟后，将反应物于0℃搅拌10分钟。 加入饱和氯化铵水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃 取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(50％EtOAc- 己烷)，得到醛308(101mg，91％)，将其立即用于下一步。

于0℃下将nBuLi(1.63M THF溶液，200μl，0.33mmol)滴加至 CH3PPh3Br(118mg，0.33mmol)的THF(3ml)和DMSO(1.2ml)溶液 中。70分钟后，加入醛308(101mg，0.20mmol)的THF(3ml)溶液， 于0℃10分钟后，将反应物于室温下搅拌1小时。加入饱和氯化铵水 溶液，混合物用EtOAc萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤，经 硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％EtOAc-己烷)，得到链烯309 (90.9mg，90％)。

醇310  于0℃下，将9-BBN(0.5M THF溶液，17ml，8.45mmol) 滴加至链烯309(1.06g，2.11mmol)的THF(30ml)溶液中。于室温下搅 拌2.5小时后，将反应物冷却至0℃，小心加入水(80ml)，然后小心加 入NaBO3·4H2O(3.25g，21.1mmol)。将混合物于室温下剧烈搅拌2小 时，然后用水稀释并用EtOAc萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗 涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％-30％EtOAc-己烷)，得 到醇310(0.920g，84％)。

新戊酸酯(pivaloate)311  将醇310(65.8mg，0.0126mmol)、吡啶 (61μl，0.76mmol)和PvCl(23μl，0.189mmol)在二氯甲烷(3ml)中的混合 物于室温下搅拌5小时。在相似条件下进行利用醇310(0.92g，1.76 mmol)的第二个反应，在以下处理期间合并两个反应物：加入饱和氯化 铵水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗 涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％EtOAc-己烷)，得到新 戊酸酯311(1.08g，定量)。

醇312  将醚311(0.811g，1.33mmol)、DDQ(6.1g，27mmol)和 tBuOH∶pH7磷酸缓冲液的10∶1混合物(42ml)在二氯甲烷(84ml)中的 混合物在黑暗中于室温下剧烈搅拌1.5小时，此时加入额外的DDQ(1.0 g，4.4mmol)。1小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，混合物用二氯甲 烷萃取(4×)。合并的有机萃取液用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水顺序洗 涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％EtOAc-己烷)，得到醇 312(0.56g，87％)以及回收的原材料311(97mg，12％)。

酮313  将草酰氯(21μl，0.12mmol)于-78℃下滴加至DMSO(23 μl，0.48mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中。1小时后，加入醇312(39.4mg， 0.081mmol)的二氯甲烷(1.5ml)溶液，将混合物搅拌1.5小时。加入Et3N(100μl，0.73mmol)，10分钟后将混合物温至0℃。加入饱和氯化铵水 溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤， 经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得到酮313 (36.6mg，93％)，将其立即用于下一步。

链烯314  于0℃下，将Tebbe试剂(～0.65M甲苯溶液，720μl， 0.47mmol)滴加至酮313(151mg，0.31mmol)的THF(5ml)溶液中。15 分钟后，小心地加入水，混合物用EtOAc萃取(3×)。合并的有机萃取 液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(10％EtOAc-己 烷)，得到链烯314(139mg，93％)。

醇315  于0℃下，将9-BBN(0.5M THF溶液，6.0ml，2.9mmol) 滴加至链烯314(468mg，0.97mmol)的THF(10ml)溶液中。将混合物 于室温下搅拌2小时，此时加入额外的9-BBN(0.5M THF溶液，500μl， 0.25mmol)。2.5小时后，将反应物冷却至0℃，小心加入水(10ml)， 然后小心地加入NaBO3·4H2O(1.5g，9.7mmol)。将混合物于室温下剧 烈搅拌5小时，用水稀释并用EtOAc萃取(3×)。合并的有机萃取液用 盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(梯度20％-30％EtOAc- 己烷)，得到醇315(0.47g，97％)。

醇316  将草酰氯(246μl，2.82mmol)于-78℃下滴加至DMSO (400μl，5.64mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中。1小时后，加入醇315 (0.47g，0.94mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液，将混合物搅拌1小时。加 入Et3N(1.2ml，8.5mmol)，10分钟后将混合物温至0℃并搅拌10分 钟。加入饱和氯化铵水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有 机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。于室温下将粗制醛在二 氯甲烷(20ml)和Et3N(2ml)中剧烈搅拌过夜。加入饱和氯化铵水溶液， 混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸 钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得到差向异构化 醛，将其立即溶于1∶1 EtO∶EtOH(10ml)中并冷却至0℃。加入NaBH4(35mg，0.94mmol)，10分钟后反应物用饱和氯化铵水溶液猝灭。混合 物用EtOAc萃取(3×)，合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干 燥，浓缩并经柱色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得到醇316(0.410g，3步 的收率为87％)。

醚317  于0℃下，将醇316(60.7mg，0.12mmol)和MPMOTCI (0.10g，0.36mmol)混合，从甲苯中共沸(3×)，并在高度真空下干燥过 夜。加入二氯甲烷(3ml)，将混合物冷却至0℃。加入BF3·OEt2(约1μl， 0.01mmol)，搅拌10分钟后，反应物用饱和氯化铵水溶液猝灭。混合 物用二氯甲烷萃取(3×)，合并的有机萃取液经硫酸钠干燥，浓缩并经 制备型TLC纯化(30％EtOAc-己烷)，得到醚317(55.4mg，74％)。

醇318  于0℃下，将LAH(1M THF溶液，104μl，0.104mmol) 滴加至醚317(54mg，0.087mmol)的Et2O(5ml)溶液中。30分钟后， 小心地加入水和1M NaOH。将混合物于室温下搅拌10分钟，通过玻 璃棉过滤，浓缩并经柱色谱纯化(30％-50％EtOAc-己烷)，得到醇318 (45.5mg，98％)。

醛319  将草酰氯(11μl，0.13mmol)于-78℃下滴加至DMSO(18 μl，0.25mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中。1.8小时后，加入醇318(22.6 mg，0.042mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液，将混合物搅拌1小时。加入Et3N(53μl，0.38mmol)，10分钟后将混合物温至0℃并搅拌10分钟。加入 饱和氯化铵水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取液 用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(20％EtOAc-己 烷)，得到醛319(21.7mg，97％)。

B1933.类似于流程6中用于合成B1794的方式，将中间体319 转化为B1933。HRMS(FAB)：C41H57F3O11+H的计算值：783.3931。 实测值：783.3940。

B1942.将B1897(2mg，2.73μmol)、NaIO4(35mg，0.16mmol)、 MeOH(0.8ml)和水(0.2ml)的混合物于室温下搅拌30分钟。然后反应 混合物用水(3ml)稀释，并用二氯甲烷(6×)和EtOAc(2×)萃取。合并 的有机相经硫酸钠干燥并经柱色谱纯化(5％MeOH-二氯甲烷)，得到所 需醛。

将该材料溶于THF(0.1ml)中，冷却至0℃，并用0.5M CF3TMS的THF(30μl，15mmol)溶液处理，然后用0.05M TBAF的THF(5ml， 0.025mmol)溶液处理。搅拌30分钟后，反应混合物用饱和碳酸氢钠水 溶液(2ml)和水(1ml)稀释，用EtOAc萃取(6×)，经硫酸钠干燥，过滤 并浓缩，得到粗制双TMS醚。

将该材料溶于THF(5ml)中并用含有0.5M盐酸咪唑(8μl，8μmol) 的1M TBAF的THF溶液于室温下处理30分钟。反应混合物通过SiO2柱洗脱(50％EtOAc-己烷至EtAOc)，得到二醇中间体。

将该产物和Dess-Martin periodinane(10mg，24mmol)在二氯甲烷 (0.5ml)中的混合物于室温下搅拌1小时，用Et2O(5ml)稀释并通过 Celite过滤。将滤液浓缩并经制备型TLC纯化(50％EtOAc-己烷)，得 到B1942(1.5mg，5步的收率为72％)。HRMS(FAB)：C40H55F3O11+H 的计算值：767.3516。实测值：767.3542。

B2070/2073的合成：

醇401  将NaIO4(375mg，1.74mmol)、X400(674mg，1.58 mmol)、MeOH(16ml)和水(4ml)的混合物于室温下搅拌1小时。用水 稀释后，混合物用二氯甲烷萃取(4×)，合并的有机萃取液经硫酸钠干 燥，浓缩并经快速色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得到中间体醛(570 mg)，将其立即溶于DMF(15ml)中。加入铟(275mg，2.4mmol)和3-溴 -3，3-二氟丙烯(240μl，2.4mmol)，于室温下搅拌17小时后加入水和0.1 M HCl。混合物用EtOAc萃取(3×)，合并的有机萃取液顺序用水和 盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(20％-30％EtOAc- 己烷)，得到作为C34异构体的1∶1混合物的醇401(605mg，两步的收 率为81％)。

二醇402  将OsO4(1个晶体)、醇401(605mg，1.28mmol)、N- 氧化4-甲基-吗啉(0.45g，3.84mmol)、丙酮(30ml)和水(6ml)的混合物 于室温下搅拌29小时。加入额外的OsO4(3个晶体)和N-氧化4-甲基 吗啉(0.1g，0.8mmol)，2天后加入饱和Na2S2O3水溶液。混合物用二 氯甲烷萃取(6×)，合并的有机萃取液经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制中 间体三醇立即溶于4∶1 MeOH∶水(25ml)中并加入NaIO4(0.41g，1.9 mmol)。于室温下剧烈搅拌2小时后，混合物用水稀释，用二氯甲烷萃 取(3×)，合并的有机萃取液经硫酸钠干燥并浓缩，得到中间体醛，将 其立即溶于1∶1 EtOH-Et2O(30ml)中，并冷却至0℃。加入NaBH4(48 mg，1.3mmol)，20分钟后，反应物用水猝灭并用二氯甲烷萃取(4×)。 合并的有机萃取液经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(50％EtOAc- 己烷)，得到二醇402(485mg，3步的收率为80％)。

甲硅烷基醚403  将TBSOTf(2.3ml，10mmol)于0℃下滴加至 二醇402(485mg，1.0mmol)、Et3N(2.8ml，20mmol)和二氯甲烷(30ml) 的混合物中。于室温下搅拌1小时后，加入饱和氯化铵水溶液，混合 物用二氧甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干 燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％EtOAc-己烷)，得到甲硅烷基醚403(668 mg，95％)。

醇404  于0℃将LAH(1M THF溶液，2.8ml，2.8mml)滴加至甲 硅烷基醚403(668mg，0.948mmol)的Et2O(60ml)溶液中。15分钟 后，小心地加入水和1M NaOH。将混合物于室温下搅拌20分钟，通 过玻璃棉过滤，浓缩并经柱色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得到醇404 (500mg，85％)。

醛405  将草酰氯(210μl，2.42mmol)于-78℃下滴加至DMSO (345μl，4.84mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中。1小时后，加入醇404 (500mg，0.806mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。40分钟后加入Et3N(1.0 ml，7.2mmol)。于-78℃下搅拌10分钟后，将反应混合物温至0℃并再 搅拌10分钟。加入饱和氯化铵水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。 合并的有机萃取液顺序用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。经快 速色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得到醛405(486mg，98％)，将其立即 用于下一步。

链烯406  于0℃下将nBuLi(1.63M，860μl，1.4mmol)滴加至 CH3PPh3Br(500mg，1.4mmol)的THF(15ml)和DMSO(6ml)溶液中。1 小时后，加入醛405(486mg)的THF(15ml)溶液。将反应混合物温至 室温并搅拌30分钟。加入饱和氯化铵水溶液，混合物用EtOAc萃取(3 ×)，合并的萃取液顺序用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱 色谱纯化(20％EtOAc-己烷)，得到链烯406(450mg，93％)。

酯407  于0℃下，将9-BBN(0.5M THF溶液，9.0ml，4.5mmol) 滴加至链烯406(0.460g，0.746mmol)的THF(10ml)溶液中。温至室温 后，将混合物搅拌3小时，以30分钟的间隔加入另2份9-BBN(0.5M THF溶液，3.0ml，1.5mmol)。将反应物再冷却至0℃，此时小心加入 THF(10ml)、水(10ml)和NaBO3·4H2O(1.72g，11.2mmol)。将混合物 于室温下剧烈搅拌1.5小时，加入额外的NaBO3·4H2O(1.0g，6.5 mmol)。2小时后混合物用水稀释并用EtOAc萃取(3×)。合并的萃取 液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％-30％EtOAc- 己烷)，得到中间体醇(509mg)，将其立即溶于二氯甲烷(10ml)中，并 用吡啶(600μl，7.5mmol)和PvCl(275μl，2.2mmol)处理。6小时后，加 入饱和氯化铵水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取 液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％-30％EtOAc- 己烷)，得到酯407(423mg，两步的收率为79％)。

醇408  于室温下，在氢气氛围下，将酯407(11mg，0.015mmol) 和Pd(OH)2/C(10mg)在EtOAc(500μl)中的混合物剧烈搅拌6小时。将 混合物通过Celite过滤，浓缩并经柱色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得 到醇408(9.4mg，定量)。

链烯409  于-78℃、氮气下将草酰氯(7μl，0.075mmol)滴加至 DMSO(11μl，0.15mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中。40分钟后，加入醇 408(15.2mg，0.025mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液，将反应物于-78℃ 下搅拌1小时。加入Et3N(31μl，0.22mmol)，搅拌10分钟后，将混合 物温至0℃。10分钟后，反应混合物用饱和氯化铵水溶液猝灭并用二 氯甲烷萃取(3×)。合并的萃取液顺序用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥 并浓缩。快速色谱(30％EtOAc-己烷)后，将中间体酮(13mg)立即溶于 THF(500μl)中，并用Tebbe试剂(～0.65M甲苯溶液，62μl，0.040mmol) 于0℃处理。1.5小时后加入另外的Tebbe试剂(～0.65M甲苯溶液， 62μl，0.040mmol)，10分钟后，小心地加入水，然后小心地加入盐水。 混合物用EtOAc萃取(3×)，合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠 干燥，浓缩并经柱色谱纯化(10％EtOAc-己烷)，得到链烯409(11.9mg， 两步的收率为80％)。

醇410  于0℃下，将9-BBN(0.5M THF溶液，1.5ml，0.72mmol) 滴加至链烯409(0.144g，0.242mmol)的THF(2ml)溶液中。温至室温 后，将混合物搅拌3小时。将反应混合物再冷却至0℃，此时小心地 加入THF(2ml)、水(2ml)和NaBO3·4H2O(0.38g，2.4mmol)。将混合 物于室温下剧烈搅拌4小时，用水稀释并用EtOAc萃取(3×)。合并的 萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％EtOAc- 己烷)，得到醇410(0.140g，94％)。

醇411  将草酰氯(26μl，0.30mmol)于-78℃下滴加至DMSO(43 μl，0.60mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中。1小时后，加入醇410(57mg， 0.093mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液。45分钟后，加入Et3N(125μl，0.90 mmol)。于-78℃下搅拌10分钟后将混合物温至0℃并再搅拌10分钟。 加入饱和氯化铵水溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃 取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗制产物溶于二氯甲烷(4ml) 中，用Et3N(400μl)处理并于室温下搅拌15小时。加入饱和氯化铵水 溶液，混合物用二氯甲烷萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤， 经硫酸钠干燥，浓缩并经快速色谱纯化(30％EtOAc-己烷)，得到中间 体醛(48mg)，将其立即溶于1∶1 Et2O∶EtOH(4ml)中，冷却至0℃并用 固体NaBH4(～4mg，0.09mmol)处理。搅拌15分钟后，小心地加入饱 和氯化铵水溶液，混合物用EtOAc萃取(3×)。合并的萃取液用盐水洗 涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经柱色谱纯化(20％-30％EtOAc-己烷)，得 到醇411(45.6mg，3步的收率为80％)。

412A和412B  将醇411(120mg，0.196mmol)和MPMOTCI(0.17 g，0.59mmol)混合，从甲苯中共沸(3×)并在高度真空下干燥1小时。 加入二氯甲烷(9ml)并将混合物冷却至0℃。滴加BF3·OEt2(0.016M二 氯甲烷溶液，125μl，0.002mmol)，搅拌20分钟后，反应物用饱和氯化 铵水溶液猝灭。混合物用二氯甲烷萃取(3×)，合并的萃取液用盐水洗 涤，经硫酸钠干燥，浓缩并经制备型TLC纯化(20％EtOAc-己烷)，得 到中间体MPM醚，其含有某些紧密洗脱的杂质。将该材料立即溶于 Et2O(10ml)中，于0℃下用LAH(1M THF溶液，300μl，0.300mmol) 处理。10分钟后，加入水和1M NaOH，于室温下搅拌10分钟后， 将混合物通过Celite过滤，浓缩并经制备型TLC纯化(35％EtOAc-己 烷)，得到作为单一C34异构体的412A(49mg，两步的收率为39％)和 作为C34异构体的约9∶1混合物的412B(46mg，两步的收率为36％)。

B2070和B2073.类似于流程4和6中用于合成B1794的方式， 将中间体412A和412B分别转化为B2070和B2073。对于B2070： HRMS(FAB)：C41H58F2O12+Na的计算值：803.3794。实测值： 803.3801。对于B2073：HRMS(FAB)：C41H58F2O12+Na的计算值： 803.3793。实测值：803.3781。

B1963的合成：

二醇501(64)  将饱和碳酸氢钠水溶液(21ml)和KBr(89mg， 0.75mmol)加入二醇10(1.35g，3.4mmol)的二氯甲烷(34ml)溶液中。将 混合物冷却至0℃，顺序加入4-甲氧基-2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基(0.05 M二氯甲烷溶液，7.45ml，0.37mmol)和NaOCl(0.07M水溶液，5.6ml， 0.39mmol)。1小时后，反应混合物用饱和Na2S2O3水溶液猝灭，用饱 和碳酸氢钠水溶液稀释，并用二氯甲烷萃取(3×)。合并的萃取液经硫 酸钠干燥，浓缩并溶于THF(21ml)中。

冷却至0℃后，顺序加入CF3TMS(1.5g，10.5mmol)和TBAF(0.1 M THF溶液，680μl，0.068mmol)。搅拌40分钟后，加入额外的TBAF (1M THF溶液，8.3ml，8.3mmol)。30分钟后，反应物用水猝灭并用 EtAOc萃取(3×)。合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓 缩并经快速色谱纯化(30％、40％、50％EtOAc-己烷，然后EtOAc)， 得到2∶1的二醇混合物(553mg，35％)。经MPLC分离(1.5％MeOH-二 氯甲烷)，得到主要的极性较强的异构体501(64)(340mg，22％)和次要 的极性较低的异构体(152mg，10％)。

B1963.以类似于流程4和6中描述的用于B1794合成的方 式，将中间体501转化为B1963。

B2320和相关类似物的合成

通过在诸如甲醇的溶剂中用合适的胺处理B2294数小时至数天， 制备这些化合物。通过薄层色谱监测反应进程。本领域技术人员众所 周知的一种标准处理方法提供所需的化合物。以下方法制备 ER803868；然而，该方法是通用的，并且可以用来制备任何所需的类 似物。

ER803868的合成

向B2294(1.2mg)的甲醇(0.5ml)溶液中加入吗啉(0.012ml)。将化 合物搅拌10天，在第1、2、3、4和8天加入额外的吗啉(0.012ml)。 然后将混合物色谱分离，得到1.4mg所需化合物。

B2320           R＝N，N-二甲氨基

B2330           R＝N-异丙基氨基

B2336           R＝N-甲基氨基

B2339           R＝N-叔丁基氨基

B2417           R＝N-2-羟乙基氨基

B2418           R＝N-哌嗪基

B2489           R＝N，N-双-(2-羟乙基)氨基

B2490           R＝N-1，3-二羟基-2-丙氨基

B2491           R＝N-苄氨基

ER803834        R＝N-哌啶基

ER803835        R＝N-吡咯烷基

ER803836        R＝N-3-(R)-羟基吡咯烷基

ER803843        R＝N-高哌啶基

ER803845        R＝N-对甲氧基苄氨基

ER803846        R＝N-苯乙氨基

ER803851        R＝N-2-(S-羟甲基)吡咯烷基

ER803852        R＝N-2-(R-羟甲基)吡咯烷基

ER803868        R＝N-吗啉基

ER803869        R＝N-乙氨基

ER803870        R＝N-咪唑基(imidazoyl)

ER803883        R＝N，N-二乙氨基

ER803884        R＝N-对氯苄氨基

D.药理学活性

测试许多所述各个公开的药物的体外和体内活性(参见以下表 1)。筛选方法包括在96孔微量滴定板形式中采用DLD-1人结肠癌细 胞(ATCC保藏号CCL 221)的标准的体外细胞生长抑制测定(Finlay，G.J. 等Analytical Biochemistry 139：272-277，1984)、U397(ATCC保藏号 CRL 1593)有丝分裂阻断可逆性测定(下述的)和在某些情况下采用 LOX人黑素瘤肿瘤异种移植物体内生长抑制测定(参见表1)。也检查 了抗酯酶降解的化学稳定性。

U937有丝分裂阻断可逆性测定

将U937人组织细胞性淋巴瘤细胞以2.5×106细胞加入75cm2 组织培养瓶的含有10％胎牛血清的22.5ml RPMI培养基1640中。在 含5％CO2的潮湿氛围中，在37℃下36小时培养期间让细胞适应培 养。然后将每种试验药物以2.5ml 10×终浓度加入瓶中。达到的终浓 度为0.1-1000nM，以半对数增加，总共10个浓度阶梯，包括接受2.5 ml培养基的无药物对照瓶。在含5％CO2的潮湿氛围中，在37℃下将 细胞与药物一起温育12小时的预处理期。

取出每瓶的内容物，于室温下以300×g离心10分钟，此后从细 胞沉淀中去除含药物的培养基。将细胞再悬浮于25ml温的无药物培 养基中并于室温下以300×g离心10分钟。从细胞沉淀中去除培养基 后，将细胞再悬浮于35ml温的无药物培养基中，转移至新培养瓶中， 立即从每个培养瓶中取出10ml细胞样品，立即如下所述进行处理， 并贮存用于以后的细胞周期分析(药物洗出的0小时)。

将剩余的无药物培养基中含有的25ml细胞再培养10小时。从每 个培养瓶中取出10ml细胞样品，立即处理并贮存用于以后的细胞周 期分析(药物洗出的10小时)，并将10ml新鲜更换培养基加入每个培 养瓶中。将无药物培养基中的细胞继续培养5天。第2天，从每个培 养瓶中取出20ml培养基和细胞，用20ml新鲜培养基取代。5天后， 采用血细胞计数器，通过锥虫蓝排除技术定量测量细胞存活率。

采用Becton Dickinson Immunocytometry Systems原始资料1.11节 中公开的方法(由悬浮液制备醇固定的全细胞用于DNA分析)的修改方 法，进行细胞的细胞周期分析。简而言之，于药物洗出0小时和10小 时，从培养瓶中取出每种细胞样品10ml，分别以300×g离心10分 钟。去除细胞沉淀的培养基后，将细胞再悬浮于3ml冷盐水中。在剧 烈涡旋搅拌下缓慢加入7毫升冷100％乙醇。将得自化合物洗出期0 小时和10小时的乙醇处理的细胞样品于4℃贮存过夜。将乙醇处理的 细胞以300×g离心10分钟，去除乙醇，然后将细胞在10ml磷酸缓 冲盐溶液(PBS)中洗涤。将细胞重悬浮于0.5ml 0.2mg/ml核糖核酸酶A (Sigma No.R-5503)的PBS溶液中，并在37℃水浴中温育30分钟。

将细胞转移至合适的流式细胞仪试管中，每个试管加入0.5ml 10 mg/ml碘化丙锭(propidium iodide)(PI)(Sigma No.P4170)的PBS溶液。 在用流式细胞仪(Becton Dickison FACScan流式细胞仪或等同物)分析 之前，将细胞与PI一起于室温、黑暗中温育至少15分钟。应当在1 小时内分析细胞并将细胞保持在4℃、黑暗中，直至准备就绪。在0 小时和10小时，用流式细胞仪测量细胞荧光强度，进行细胞周期分 析。在线性放大的规模上测量每个细胞的碘化丙锭荧光，采用双峰鉴 别法忽略双峰事件。根据分析15,000个细胞获得的结果以直方图显 示，在X轴上为增加的荧光强度，而在y轴上为特定强度水平的细胞 数。

PI染色的强度取决于细胞中DNA的量，因此鉴别处于细胞周期 的不同时期的细胞是可能的，所述细胞诸如由于最后的有丝分裂而尚 未合成DNA(G1期)的细胞、处于DNA合成中期(S期)的细胞和具有加 倍的DNA互补物且准备进行分裂(G2期)的细胞。与G1期细胞相比， 在细胞周期的有丝分裂期被阻断的细胞也具有双倍的DNA量。如果所 有的细胞均在有丝分裂中被阻断，则没有G1期细胞，但如果当去除化 合物时阻断被解除，则细胞完成有丝分裂并再出现于G1期中。如此再 出现于G1期或S期中的细胞数目因此成为最近已经完成有丝分裂的细 胞数目的测量手段。对于去除化合物后0小时和10小时的每种样品， 定量测定完成有丝分裂的细胞百分比(作为再出现于G1期中的细胞的 数目)，并作为在12小时预处理期间使用的化合物的原始浓度的函数 作图。将在药物洗出后5天仍存活的细胞百分比叠加在同一图中。可 以测定在0小时在有丝分裂中完全阻断所有细胞所需的化合物浓度和 在去除化合物后10小时保持阻断所需的浓度之间的比率。将其作为化 合物可逆性测量的方法，接近或等于1的比率表示可能是有效的体内 抗肿瘤化合物(参见表1的4-6栏)。

                                                                                   表1

                                                                             体外抑制和可逆性数据     DLD-1*     完全有丝分裂阻断 0小时nM**    10小时nM     可逆性     比率 平均IC50，nm     SE     0.93     0.04     3     44     14.7     12.20     0.72     1.27     0.12     2.00     0.15     24.00     1.15     0.53     0.01     3     30     10.0     0.87     0.03     0.79     0.16     1.05     0.21     3     30     10.0     19.34     2.36     12     12     1.0 化合物 B1793 B1794 B1918 B1920 B1921     B1922    B1930   B1933 B1934 B1939

    5.43     0.62     0.60     0.03     3     30     10.0     0.56     0.04     3     20     6.7     1.15     0.24     1.01     0.15     1.82     0.21     2.67     1.02     1.30     0.06     0.69     0.03     0.86     0.07     1.23     0.13     1.21     0.12     0.63     0.04     2.63     0.63     0.71     0.12     1.81     0.52     0.49     0.07     2     30     15.0     0.87     0.09     2.78     0.23     0.66     0.06     0.82     0.07     0.76     0.09     0.66     0.11     0.91     0.08     1.93     0.11     3     100     33.3     1.70     0.06     0.64     0.09     3     30     10.0     0.89     0.15     11.17     1.96     1.23     0.12     0.52     0.04     2     10     5.0     1.36     0.07     3     30     10.0     3.47     0.22     5.23     1.04     3     3     1.0     0.80     0.01     1.20     0.17     1     10     10.0     4.40     0.42     7     7     1.0   B1940 B1942 B1963 B1973 B1984 B1987 B1988 B1990 B1991 B1992 B1998 B2003 B2004 B2008 B2010 B2011 B2013 B2014 B2015 B2016 B2019     B2035   B2037 B2039 B2042 B2043 B2070 B2073 B2086 B2088 B2090 B2091 B2102 B2136 B2294 B2320 B2330

    3.33     0.09     10     10     1.0     4.30     0.21     3     3     1.0     12.67     0.33     10     10     1.0     3.63     0.17     10     10     1.0     14.67     2.03     10     10     1.0     35.67     3.33     100     100     1.0     0.92     0.14     2     10     6.7     0.47     0.08     1     10     10.0     15.33     0.33     10     10     1.0     1.97     0.12     3     10     3.3     0.49     0.05     1     10     10.0     1.50     0.20     3     10     3.3     1.16     0.10     1     10     10.0     3.33     0.26     3     3     1.0     3.03     0.50     3     10     3.3     0.43     0.03     3     10     3.3     4.13     0.64     3     3     1.0     1.27     0.12     3     30     10.0     1.02     0.04     1     10     10.0     0.59     0.03     1     10     10.0   B2336 B2339   B2417 B2418   B2489 B2490 B2491 ER803834   ER803835 ER803836 ER803843   ER803845 ER803846 ER803851   ER803852 ER803868   ER803869 ER803870   ER803883 ER803884

*＝体外细胞生长抑制    **＝在洗出前    ＝在洗出后

本发明的特征也在于一种鉴定药物的方法，所述药物在将细胞短 暂暴露于药物后，在该细胞中诱导持续阻断有丝分裂。本发明的特征 在于如下所述通过使步骤(d)的测量与步骤(f)的测量相关，测定试验化 合物的相对可逆性。该测定可以是一种比率，或例如是算术差。一方 面，该方法包括：

(a)将第一细胞样品与预定浓度的试验化合物一起温育一段时间 间隔，所述间隔介于足以排空G1期群体的时间和相当于1个细胞周期 的时间之间(例如通常为8-16小时，或约12小时)；

(b)将所述试验化合物与所述第一细胞样品大致分离(例如通过洗 出或更换培养基)；

(c)将所述第一样品在无试验化合物的培养基中培养一段时间间 隔，所述间隔足以让从高度可逆性有丝分裂抑制剂诱导的有丝分裂阻 断中释放的至少80％(例如85％、90％和最好95％、98％或99％)的细 胞完成有丝分裂并回到G1期(例如通常为6-14小时，或分离步骤(b)后 约10小时)；和

(d)测量来自步骤(c)的短暂暴露的细胞已经完成有丝分裂并回到 G1期的百分比(例如测量细胞周期标记，诸如依赖于DNA的PI荧光)。

该筛选方法的一个方面包括以下其它步骤：

(e)将第二细胞样品与浓度不高于步骤(a)中所用浓度的所述试验 化合物一起温育一段时间间隔，所述间隔介于足以排空G1期群体的时 间和相当于1个细胞周期的时间之间；

(f)测量来自步骤(e)的细胞已经完成有丝分裂并回到G1期的百分 比；和

(g)测定所述试验化合物的可逆性比率。

在该方法的一个实施方案中，所述第一和第二细胞样品为选自例 如人白血病、人淋巴瘤、鼠白血病和鼠淋巴瘤细胞的悬浮培养细胞。 所述第一和第二细胞样品可以同时温育(步骤(a)和(e))或以单独的部分 温育。其它实施方案在步骤(a)之前还包括步骤(i)：估计将所述第一细 胞样品与可逆性有丝分裂阻断剂(或者所述试验化合物)一起温育的理 想的时间间隔，以达到令人满意的大部分的收集到的细胞的有丝分裂 均被阻断；并且其中步骤(a)的温育时间为在步骤(i)中估计的时间间 隔。该方法的另一实施方案在步骤(c)之前还包括步骤(ii)：估计步骤(c) 的无所述试验化合物温育的理想的时间间隔，所述步骤(ii)包括确定该 时间间隔，在此间隔之后用高度可逆性抗有丝分裂剂预处理的细胞的 至少80％完成有丝分裂并再进入G1期；并且其中步骤(c)的温育时间为 在步骤(ii)中确定的时间间隔。该方法的另一实施方案利用非悬浮培养 细胞，例如通过任何合适的方法于细胞培养瓶脱附的人或鼠的贴壁癌 细胞。

该方法的一个方面还包括采用多种相对浓度的试验化合物重复 步骤(a)-(f)，以测定哪两种基本上最低浓度的所述试验化合物分别在步 骤(d)和步骤(f)中达到大致完全阻断有丝分裂。这些足够的最低浓度之 比为可逆性指标(参见详述的用于制备示例性剂量反应曲线的U937方 案)。通过外推细胞百分比(来自步骤(d)和(f)的细胞)随浓度而变的曲线 (例如通过仅测试几种浓度，诸如3种或更少)，或通过凭借经验测试全 范围的浓度，可以确定这些浓度。

上述方法可用于鉴定抑制有丝分裂的药物(试验化合物)，用于鉴 定在去除后大致保持其有丝分裂阻断效力的有丝分裂阻断剂，以及用 于预测例如有丝分裂阻断剂的IC50或IC95。当与相对可逆性抗有丝分 裂剂相比时，大致不可逆的抗有丝分裂剂(换句话说，为在仅短暂暴露 于所述药物的细胞中继续阻断有丝分裂的药物)可能在体内可能更有 效，在体内多个天然过程，包括多种药物抗性(MDR)泵和代谢途径或 其它降解途径，防止暴露时间延长。相对可逆性抗有丝分裂剂的效力 可以取决于持续暴露的时间。

从研制药物的成本的观点来看，如上所述测定可逆性比率的经济 优势是相当大的。上述方法例如可以用来预定具有良好体外活性的试 验化合物是否在体内有效，诸如在临床试验中是否有效。预计相对可 逆性药物的性能不可能与不可逆药物一样好。例如通过对比两种已知 化合物即相对不可逆性抗有丝分裂剂长春新碱和高度可逆性抗有丝分 裂剂长春花碱的数据，表明这一点。

                            表2

               长春花碱和长春新碱的可逆性特征   化合物     完全阻断有丝分裂   所需的药物浓度，nM 可逆性比率   解释   0小时 (在洗出前)   10小时 (在洗出后)   长春花碱   长春新碱     10     10     600     10     60     1 高度可逆 不可逆

抗有丝分裂剂长春花碱和长春新碱在U937有丝分裂阻断可逆性 测定中的分析表明，尽管诱导初始有丝分裂阻断的效力(0小时值)相 同，但这两种药物在药物洗出后持续10小时诱导有丝分裂阻断的能力 (10小时值)非常不同：长春新碱诱导不可逆性有丝分裂阻断，而长春 花碱诱导的有丝分裂阻断是高度可逆的。

抗有丝分裂剂长春花碱和长春新碱在无免疫应答小鼠(裸鼠)中抗 皮下生长的COLO 205人结肠癌异种移植物的体内抗癌活性分析表 明，在相同的剂量1mg/kg下，长春新碱表现出相当大的癌生长抑制 活性，而长春花碱无活性。在较低剂量0.3mg/kg下，长春新碱仍产生 中等生长抑制，而长春花碱却再次无活性。长春新碱的体内活性较大 与其相对于长春花碱的高度可逆性的不可逆性相关。

E.应用

所公开的化合物具有药理学活性，如以上D节中证明的，包括抗 肿瘤活性和抗有丝分裂活性。肿瘤的实例包括黑素瘤、纤维肉瘤、单 核细胞性白血病、结肠癌、卵巢癌、乳癌、骨肉瘤、前列腺癌、肺癌 和ras转化的成纤维细胞。

本发明的特征在于药用组合物，所述组合物包括式(I)化合物和一 种药学上可接受的载体。组合物也可以包括所公开的化合物的组合， 或一种或多种所公开化合物和其它药用活性药物的组合，其它药用活 性药物诸如抗肿瘤药、免疫刺激剂、干扰素、细胞因子、抗MDR药 或抗血管生成剂。组合物可以配制用于经口、局部、胃肠外、静脉内 或肌内给药，或通过注射或吸入给药。也可以制备用于控释的制品， 包括经皮贴剂。

抑制患者的肿瘤生长的方法包括给予所述患者有效抗肿瘤量的 所公开的化合物或组合物的步骤。本发明也设想了联合疗法，包括在 给予另一药用活性药物之前、期间或之后共同给予式(I)化合物。给药 方法可以相同或不同。对肿瘤生长的抑制包括暴露于所述试验化合物 的细胞或组织的生长比对照生长(无已知抑制剂或试验化合物)低至少 20％、最好30％、50％或75％。

                     其它实施方案

根据以上描述和以下的权利要求书，可以容易地了解本发明的基 本特征。根据完整的说明书，在不偏离权利要求书和说明书的精神和 范围的情况下，可以设计并改变本发明的所公开的化合物和方法的变 化形式。本文描述的参考文献和出版物的全部内容均通过引用结合到 本文中。