2,3－亚甲二氧基二苯并[a,g]喹嗪鎓盐酸盐及制备抗糖尿病药物的制药用途

                         技术领域

本发明涉及一种药，特别涉及化合物2，3-亚甲二氧基二苯并〔a，g〕喹 嗪鎓盐酸盐及其制备抗糖尿病药物的制药用途。

                         背景技术

糖尿病是(DM)是一种常见的有遗传倾向的内分泌-代谢病，其病理改 变是胰岛素分泌绝对或相对不足，引起糖、脂肪、蛋白质和继发的维生素、 水、电解质代谢紊乱，异常高血凝状态，表现为血糖、尿糖升高，病人表现 多饮、多食、多尿、口干及全身无力等症状及心血管疾病、失明等多种并发 症。

全世界大约有1.9亿糖尿病患者，且具有日渐增高的趋势，它与癌症、 心脑血管疾病被称为世界性三大疾病。抗糖尿病药物的研究一直是药物研究 领域的热点之一。糖尿病分为胰岛素依赖型(I型，IDDM)和非胰岛素依赖型 (II型，NIDDM)两类，其中II型糖尿病占90％之多。临床上用于治疗糖尿病 的药物主要分为(1)胰岛素分泌促进剂：包括磺酰脲类和非磺酰脲类，(2) 改善胰岛素敏感性药物，如噻唑烷二酮类，(3)影响碳水化合物吸收的药物， 如双胍类等。这些药物疗效肯定，但长期使用需逐渐加量，大多具有不同的 不良反应，且不能有效控制并发症，而中医治疗糖尿病，有疗效稳定，不良 反应少，有效防治并发症等优点，因此，采用先进的技术与方法从中药中发 现筛选先导化合物，具有极大的潜力和广阔的前景。多种传统消渴方剂中都 含有黄连或黄柏，亦有文献报道黄连素具有降血糖活性，但由于其抗菌活性 会导致菌群失调、便秘等副作用而无法长期使用。

                         发明内容

本发明以细胞膜色谱为体外筛选模型，结合高血糖动物模型，以小黄连 素为先导物，通过化学结构的改变，从小檗碱衍生物中发现无抗菌活性的化 合物2，3一亚甲二氧基二苯并〔a，g〕喹嗪鎓盐酸盐，其结构式为：

该化合物具有降血糖作用，可以用于制备抗糖尿病药物的制药用途。

                       具体实施方式

以下结合发明人给出的该化合物的合成及其体外抑菌实验，证明该化合 物的降血糖作用。

一、小檗碱衍生物的合成

以下述两条途径分别合成小檗碱衍生物。

小檗碱

1 R＝H

2 R＝-CH3

3

2，3-亚甲二氧基二苯并〔a，g〕喹嗪鎓盐的制备

胡椒乙胺5.0g、苯甲醛4.0mL，110℃油浴加热1小时。减压抽去生成的 水分，冷却，溶于50mL甲醇中，滴加二乙胺至pH8.5左右，分批加入硼氢 化钠3.5g，室温搅拌反应2小时，减压蒸去甲醇，加入100mL水和15mL丙 酮分解未反应的硼氢化钠，并以乙醚(50mL×3次)萃取，水洗醚液(50mL×3 次)，无水硫酸镁干燥，蒸除乙醚，所得产物用50％硫酸酸化至pH2，析出大 量白色结晶，抽滤，乙醇洗涤，得N-苄基胡椒乙胺白色结晶5.7g，产率62.5％， mp 175-179℃。

圆底烧瓶中加入冰醋酸55mL、无水硫酸铜6.0g、氯化钠4.5g和40％乙 二醛4.0g，55-60℃搅拌30分钟，加入N-苄基胡椒乙胺5.7g，于90℃搅拌 反应6小时。减压回收冰醋酸，黑色残留物加水并加热至90℃，放冷后抽滤， 并水洗一次。固状物加入4-5％氯化钠水溶液250mL，加热至90℃，固状物全 溶，得棕黄色液体。降温至约50℃时，有黑色油状黏稠物析出，抽滤得黄色 液体。用1∶1盐酸调PH至2-3，滤液放冷后析出大量黄色粉末状固体，5％ 氯化钠水溶液重结晶得产物(9)3.1g，产率52.9％，mp 210-213℃，1HNMR (CDCl3)6：3.23(t，2H，5-H)，4.71(t，2H，6-H)，6.08(s，2H，-OCH2O 一)，6.97～8.21(m，6H，ArH)，8.56(s，1H)9.43(s，1H)。

二、体外抑菌实验

采用液体试管法，首先将待测药品用无菌蒸馏水配制成浓度为8‰的待 测药液，取灭菌小试管21支，各放入灭菌培养液1mL，在无菌条件下吸待测 药液1mL放入第1中混匀；吸出1mL加至第2管.....，如此稀释至第7 管，弃去1mL。最后1管作空白对照，这样药物浓度分别为4‰、2‰、1‰、 0.5‰、0.25‰、0.125‰，各管加入0.1mL稀释10-3的新鲜菌液，于38℃ 培养18小时，观察有无细菌生长。细菌不生长的最高药物稀释度，即为该药 的最低抑菌浓度(MIC)。结果显示，BR的最低抑菌浓度(MIC)为0.5‰， 而其他化合物在浓度4‰时仍无抑菌活性，即为BR MIC的8倍时，仍无明显 的抑菌活性，因此可以认为，与BR的抑菌活性相比较，结构改变后所得的衍 生物均无抗菌活性。

三、胰岛细胞膜色谱筛选

1.胰岛细胞膜色谱柱的制备：将兔胰岛细胞经消化处理后的细胞膜，固 定于硅胶表面制备成胰岛细胞膜色普柱。

2.色普条件为：流动相：25mmol/L PH7.4(NH4)2SO4缓冲液；流速： 0.5mL/min；检测波长：262nm；灵敏度：0.2AUFS；柱温：37℃。

3.细胞膜色谱筛选：将上述化合物用甲醇溶解，按照方法2的色谱条件 进行筛选，以化合物在细胞膜色谱上的相对保留因子k表示其体外活性。结 果显示，化合物5和化合物7与胰岛细胞膜有良好的结合，其余化合物在细 胞膜色谱模型上无保留，见表1。

表1 小檗碱衍生物在胰岛细胞膜色谱模型上的保留因子k   化合物   5   7   BR   其它化合物   均无保留   k   6.6   10.2   11.0

四、降血糖药理实验

取雄性昆明小白鼠110只，随即取10只作为正常对照组，余者当晚禁 食过夜，第二天尾静脉注射四氧嘧啶(sigma com.)75mg/Kg，36h后造模鼠 禁食(不禁水)12h，眼眶采血，用中生北控生物科技公司的血糖盒测定血糖， 血糖＞30mmol/L，体重接近的小鼠90只作为糖尿病模型鼠，随机分为7 组，分别为模型组和6个给药组(其中化合物IV2由于毒性未包括在内)，分 别给予待测药液和等容积生理盐水灌胃，每日1次，连续灌胃14d，末次给 药前动物禁食12h，末次给药后2h经眼眶取血，测血糖值。结果表明，化 合物I4和IV具有明显的降糖活性，见表2。

表2 小檗碱衍生物对四氧嘧啶高血糖小鼠血糖水平的影响( x±s)   组别       剂量   (mg/kg)  例数       药前       药后     血糖值(mmol/L)          差值     (药后-药前)   正常组   10   6.8±1.3   6.1±1.1   -0.8±1.3   模型组   13   32.2±8.6   31.0±7.1   -1.2±7.51)   小檗碱     200     14     31.8±9.4     28.4±10.5     -3.4±6.12)   5   200   14   31.6±4.8   30.2±2.9   -1.4±3.6   7     200     13     31.0±2.5     22.9±5.4     -8.1±3.22)  

注：1)与正常组比较：p＜0.012)与模型组比较：p＜0.05