咪唑并（4,3－E）,1,2,4－三唑并（1,5－C）嘧啶类化合物作为腺苷A2a受体拮抗剂

技术领域

本发明是有关经取代之5-氨基-咪唑并(imidazdo)-[4，3-e]- 1，2，4-三唑并[1，5-c]嘧啶腺苷A2a受体拮抗剂，该化合物在治疗中枢 神经系统疾病中的用途，特别是帕金森病，及含有该化合物之医药组 合物.

腺苷已知是许多生理功能的内源性调控剂.在心血管系统水平， 腺苷是一种强的血管扩张剂及心脏抑制剂.在中枢神经系统，腺苷可 诱生镇静，解焦虑及抗癫痫作用.在呼吸系统，腺苷可诱生支气管收 缩作用.在肾脏水平，其展现出二相作用，在低浓度时诱生支气管收 缩作用及在高剂量下之血管扩张作用.腺苷可在脂质细胞上充作脂质 溶解抑制剂，及在血小板上充作抗凝集作用.

腺苷作用系经由与不同的膜特异受体交互作用而调介，其属于与G 蛋白质偶合之受体族.生化及药理研究，加上在分子生物学上之进展， 已可鉴定出至少四种腺苷受体亚型：A1，A2a，A2b及A3.A1及A3具高亲 和力，可抑制酵素腺苷酸环化酶之活性，且A2a及A2b具低亲和力，可 刺激相同酵素之活性.可如拮抗剂般与A1，A2a，A2b及A3受体交互作用 之腺苷同系物也已鉴定出来.

A2a受体之选择性拮抗剂特别具有药理兴趣，因其副作用较低.在 中枢神经系统中，A2a拮抗剂具有抗抑郁特性，且可刺激认知力功能. 而且，数据已显示A2a受体以高密度存在於基础神经节，已知在移动之 控制上十分重要.因此，A2a拮抗剂可改进因神经退化性疾病所致之运 动损伤，如巴金森氏病，老年性痴呆如阿尔茨海默氏症，及器质性之 精神病.

已发现某些与黄嘌呤有关之化合物是A1受体的选择性拮抗剂，且 黄嘌呤及非黄嘌呤化合物已发现与不同程度之A2a有高的A2a亲和力， 相对於A1选择性.先前已揭示在7-位置上有不同取代作用之三唑并- 嘧啶腺苷A2a受体拮抗剂，如在：WO 95/01356；US 5,565,460；WO 97/05138；WO 98/52568及US临时申请60/334,342.吡唑并-取代之 三唑并-嘧啶腺苷A2a受体拮抗剂揭示於WO 01/92264.

发明要点

本发明涉及下列结构式I所代表的化合物，

或其药学上可接受之盐，其中

R是R1-杂芳基，R10-苯基，C4-C6环烯基，-C(＝CH2)CH3，

-C≡C-CH3，-C≡C-CH2-OR2，-CH＝C(CH3)2，或

X是C1-C6亚烷基，-C(O)CH2-或-C(O)N(R2)CH2-；

Y是-N(R2)CH2CH2N(R3)-，-OCH2CH2N(R2)-，-O-，-S-，-CH2S-， -(CH2)2-3-N(R2)-，R5-二价杂芳基，

及

Z是R5-苯基，R5-苯基(C1-C6)烷基，R5-杂芳基，R5-二环杂芳基， R5-苯并稠合的杂芳基，二苯基甲基或R6-C(O)-；

或当Y是

Z也是R6-SO2-，R7-N(R8)-C(O)-，R7-N(R8)-C(S)-或R6OC(O)-；

或当Q是，Z也是苯基氨基或吡啶基氨基；

或Z及Y一起是

或Y及Z一起形成哌啶基或吡咯烷基环稠合至单环或二环芳基或 单环或二环杂芳基环，其中X粘附至哌啶基或吡咯烷基环之N原子；

R1是1至3个取代基，其独立选自氢，C1-C6烷基，-CF3，卤素， -NO2，-NR12R13，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，C1-C6烷基亚磺酰基，C1- C6烷基磺酰基，-COOR7或-C(O)NR2R3；

R2及R3独立选自氢及C1-C6烷基；

m及n独立地为2-3；

p及q独立地为0-2；

Q及Q1独立选自下列基团：

限制条件为Q及Q1至少一个是或

R4是1-2个取代基，其独立选自下列基团：氢，C1-C6烷基，R1-芳 基及R1-杂芳基，或二个R4取代基在相同碳上可形成＝O；

R5是1至5个取代基，其独立选自下列基团：氢，卤素，C1-C6烷 基，羟基，C1-C6烷氧基，-CN，二-((C1-C6)烷基)氨基，-CF3，-OCF3， 乙酰基，-NO2，羟基(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)-烷氧基(C1-C6)烷氧基， 二-((C1-C6)-烷氧基)(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)-烷氧基(C1-C6)烷氧基- (C1-C6)-烷氧基，羧基(C1-C6)-烷氧基，(C1-C6)-烷氧羰基(C1-C6)烷氧 基，(C3-C6)环烷基(C1-C6)烷氧基，二-((C1-C6)烷基)氨基(C1-C6)烷氧 基，吗啉基，(C1-C6)烷基-SO2-，(C1-C6)烷基-SO2-(C1-C6)烷氧基，四 氢吡喃基氧基，(C1-C6)烷基羰基(C1-C6)-烷氧基，(C1-C6)-烷氧羰基， (C1-C6)烷基羰基氧基(C1-C6)-烷氧基，-SO2NH2，苯氧基，

(R2O)2-P(O)-CH2-O-及(R2O)2-P(O)-；或相邻的R5取代基一起为-O- CH2-O-，-O-CH2CH2-O-，-O-CF2-O-或-O-CF2CF2-O-及与和之粘附之碳 原子一起形成环；

R6是(C1-C6)烷基，R5-苯基，R5-苯基(C1-C6)烷基，噻吩基，吡啶 基，(C3-C6)-环烷基，(C1-C6)烷基-OC(O)-NH-(C1-C6)烷基，二-((C1-C6) 烷基)氨甲基，或

R7是(C1-C6)烷基，R5-苯基或R5-苯基(C1-C6)烷基；

R8是氢或C1-C6烷基；或R7及R8一起为-(CH2)p-A-(CH2)q，其中p 及q独立地是2或3，且A是一键，-CH2-，-S-或-O-，且可与和之粘 附之氮形成一环；

R9是1-2个取代基，其独立选自下列基团：氢，C1-C6烷基，羟基， C1-C6烷氧基，卤素，-CF3，及(C1-C6)烷氧基-(C1-C6)烷氧基；

R10是1至5个取代基，其独立选自下列基团：氢，卤素，C1-C6烷 基，羟基，C1-C6烷氧基，-CN，-NH2，C1-C6烷基氨基，二-((C1-C6)烷 基)氨基，-CF3，-OCF3，-S(O)0-2(C1-C6)烷基及-CH2-SO2-苯基；

R11是H，C1-C6烷基，苯基，苄基，C2-C6烯基，C1-C6烷氧基(C1-C6) 烷基，二-((C1-C6)烷基)氨基(C1-C6)烷基，吡咯烷基(C1-C6)烷基或哌 啶子基(C1-C6)烷基；

R12是H或C1-C6烷基；

R13是H，(C1-C6)烷基-C(O)-，或(C1-C6)烷基-SO2-；

R14是H，卤素，C1-C6烷基，羟基(C1-C6)烷基，C1-C6烷氧基(C1-C6) 烷基，硫(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷硫基(C1-C6)烷基或NR2R3-(C1-C6)烷 基；且

R15是H，卤素，C1-C6烷基或C1-C6烷氧基.

本发明另一方面是一种医药组合物，其含有治疗有效剂量之式I 化合物，於药学上可接受之载体中.

本发明又另一方面是治疗中枢神经系统疾病之方法，如抑郁，认 识力疾病及神经退化性疾病，如帕金森病，老年性疾呆或器质性精神 病，或中风，此方法包括对需此疗法之哺乳动物给药式I化合物。特 别地，本发明涉及治疗帕金森病的方法，其包含给需要所述治疗的哺 乳动物给药式I化合物.

本发明又另一方面是利用式I化合物组合以治疗帕金森病的一种 或多种作用物，以治疗帕金森病之方法，此类作用物包括如：多巴胺； 多巴胺能激动剂；B型单胺氧化酶(MAO-B)之抑制剂；DOPA脱羧酶抑制 剂(DCI)；或儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)抑制剂.本发明也要求保护 医药组合物，其中含有式I化合物及一种或多种已知可用于治疗帕金 森病之作用物，於药学上可接受之载体中.

详细说明

关於上述式I化合物，优选之式I化合物为其中R是R1-呋喃基， R1-噻吩基，R1-吡咯基，R1-吡啶基或R10-苯基，更优选R1-呋喃基或R10- 苯基的那些.R1优选是氢或卤素.R10较好是氢，卤素，烷基或-CF3. 另一组较佳化合物是其中X是亚烷基，较好是亚乙基.Y较好是

其中Q是或而Q较好是氮.较好，m及n各自是2，且R4 是H.Z之较佳定义是R5-苯基或R5-杂芳基.R5较好是H，卤素，烷基， 烷氧基，羟基烷氧基，或烷氧基烷氧基.R6较好是R5-苯基.R14较好是 氢.

当Y及Z一起形成哌啶基或吡咯啶基环，稠合至单环或二环芳基 或杂芳基环，较好稠合的环结构是

其中A1是且A2及A3各自是-C(R16)(R17)-或

A1及A3各自是-C(R16)(R17)-，且A2是或

A1及A2各自是-C(R16)(R17)-，且A3是

A4是-C(R16)(R17)-；

J1，J2，J3及J4选自-N＝及-C(R18)-，限制条件为J1，J2，J3或J4 有0-2个是-N＝，其余为-C(R18)-；

J5是-N(R17)-，-O-，-S-，或-C(R16)(R17)-；

J6是-N＝或-C(R18)-；

J7是-N＝或-C(R18)-；

t是0或1；

各R16独立选自下列基团：氢，C1-C6-烷基，C1-C6-烷氧基，-CF3， 卤素，-OH及NO2；

各R17独立选自下列基团：氢及C1-C6烷基；且

各R18独立选自下列基团：氢，C1-C6-烷基，CF3，卤素，NO2，C1- C6-烷氧基，-O-C(O)-(C1-C6-烷基)，-NH2，-NH(C1-C6-烷基)，-N(C1- C6-烷基)2，-NH-C(O)-(C1-C6-烷基)，-NH-SO2-(C1-C6-烷基)，- SO2NH(C1-C6烷基)，-SO2N(C1-C6-烷基)2，-SO2NH2及-OH.

在以上结构中，当A1，A2或A3是时，二丁键为环的一部份， 且第三键粘接环至变数X.

在Q及Q1定义中，″Q及Q1中至少一个是或表示Q及Q1 之一可为氮，且另一者选自其余基团，二者均为氮，二者均为CH，或 一者是CH，另一者选自其余基团.

如本文中所用的，术语烷基包括直链或分支链.亚烷基，指二价 烷基，类似地指直链或分支链.亚环烷基(cycloalkylene)指二价环 烷基.环烯基指C4-C6环烷基环，其含有一个双键.

芳基表示苯基或萘基.

杂芳基表示5至6个原子之单环杂芳族基，其含有2至5个碳原 子及1至3个杂原子，后者独立地选自N，O及S，限制条件为环不包 括相邻的氧及/或硫原子.单环杂芳基之实例有吡啶基，恶唑基，异恶 唑基，恶二唑基，呋喃基，吡咯基，噻吩基，咪唑基，吡唑基，噻唑 基，异噻唑基，噻二唑基，吡嗪基，嘧啶基，哒嗪基及三唑基。二环 杂芳基表示5至10个原子之二环杂芳族基，含有1至9个碳原子及1 至3个杂原子，其独立地选自N，O及S，限制条件为环不包括相邻的 氧及/或硫原子。二环杂芳基之实例有：萘啶基(如1，5或1，7)，咪 唑并吡啶基，吡啶并[2，3]咪唑基，吡啶并嘧啶基及7-吖吲哚基.苯 并稠和的杂芳基二环基，包括如上文定义之杂芳基环，其在相邻碳原 子上稠和至苯基环。苯并稠和的杂芳基实例有如：吲哚基，喹啉基， 异喹啉基，2，3-二氮杂萘基，苯并噻吩基(即硫茚基)，苯并咪唑基， 苯并呋喃基，苯并恶唑基及苯并呋咱基.所有位置异构物均包括，如 2-吡啶基，3-吡啶基及4-吡啶基.也包括针对所有杂芳基之环氮之N- 氧化物.R5-取代之杂芳基指这样的基团，其中可取代的环碳原子具有 如上文定义之取代基.

二价杂芳基表示杂芳基环键结至二个不同基团.在本发明内容 中，当Y是二价R5-杂芳基时，一个环成员粘附至变数X，且另一环成 员系黏附至变数Z；R5取代基粘附至其余的环成员.二价杂芳基由加″ 二基″至环名称后而命名，如，吡啶二基环如下所示：

本发明某些化合物可以不同的立体异构型式存在(如，对映体、非 对映立体异构物及构型异构物).本发明包括所有此种立体异构体，纯 型式及掺和物均有，包括外消旋混合物.

某些化合物本质上可以是酸性，如具有羧基或酚系羟基之化合 物.这些化合物可形成药学上可接受之盐.此盐之实例可以包括钠， 钾，钙，铝，金及银盐.也包括与药学上可接受胺所形成之盐，如氨， 烷基胺类，羟基烷胺类，N-甲基葡糖胺等.

某些碱性化合物也可形成药学上可接受之盐，如酸加成盐.如， 吡啶并-氮原子可与强酸形成盐，而具有碱性取代基之化合物，如氨 基，也可与较弱的酸形成盐.用於形成盐之适合的酸实例有：氢氯酸， 硫酸，磷酸，醋酸，柠檬酸，草酸，丙二酸，水杨酸，苹果酸，延胡 索酸，丁二酸，抗坏血酸，马来酸，甲烷磺酸及其他本领域技术人员 公知的无机酸及羧酸.盐之制备是将游离碱形式与足量所需酸接触， 以传统方式产生盐.游离碱形式之再生是将盐以适合的稀碱水溶液处 理，如稀的NaOH水溶液，碳酸钾水溶液，氨及碳酸氢钠水溶液.游离 碱形式与其个别之盐型多少在某些物理特性上有异，如於极性溶剂中 之溶解度，但就本发明目的而言，酸及碱盐在其他方面相当於其个别 的游离碱形式.

在本发明范围之内，所有此种酸及碱盐均为药学上可接受的盐， 且就本发明目的而言，所有的酸及碱盐被视为相当於相应化合物之游 离型式.

式I化合物以本领域中已知之方法制备.较好，式I化合物以下 列反应流程中所示之方法制备.

在反应流程及以下实施例中，使用以下缩写：Ts(甲苯磺酰基)； Bn(苄基)；Me(甲基)；Et(乙基)；及Ac(乙酰基).

于流程1，式II 5-氨基-咪唑并[4，3-e]-[1，2，4]-三唑并[1，5- c]嘧啶之烷基化作用可用来制备式I化合物：

流程1：

式II起始物可与烷基二醇二甲苯磺酸盐及碱(如NaH)反应，於惰 性溶剂中如二甲替甲酰胺(DMF)，或与氯-溴-或二溴-烷基化合物在类 似条件下反应，可得IIIa及IIIb之7-及9-烷基-取代之中间物.式 IIIa化合物再与式Z-Y-H之胺反应，在惰性溶剂中，如DMF，於高温 下可得式Ia化合物，即式I化合物，其中X是亚烷基.

另外，式II起始物可与式Z-Y-X-Cl化合物及碱(如NaH)於惰性 溶剂中(如DMF)反应，可得式I的7-取代化合物与相应的9-取代化合 物之混合物.

式II化合物可利用流程2所述之一般步骤制备：

流程2：

市售之2-氨基-6-溴嘌呤或2-氨基-6-氯嘌呤可与相应的酰肼在 丁醇中反应，於提高之温度下产生置换产物，其可以N，O-双(三甲基硅 烷基)乙酰胺处理产生式II.

为制备式I化合物，其中Y是哌嗪基且Z是R6-C(O)-，R6-SO2-， R6-OC(O)-，R7-N(R8)-C(O)-或R7-N(R8)-C(S)-，将式I化合物，其中 Z-Y是4-叔丁氧羰基-1-哌嗪基可去保护，如利用与酸(如HCl)反应. 生成之游离的哌嗪基化合物，IV，依本领域熟知之步骤处理可得所需 化合物。以下流程3综合这些步骤：

流程3：

另一制备式I化合物之方法示於流程4：

流程4：

在此步骤中，氯咪唑并-嘧啶V，其中R20如上文所定义，与式Z- Y-X-Cl化合物反应，方式类似流程1之烷基化步骤，且生成之中间物 与式H2N-NH-C(O)-R之酰肼反应(或与水合肼，再与式C1-C(O)-R之化 合物反应).生成之酰肼进行去氢化(dehydrative)重排，如以N，O- 双-(三甲基硅烷基)乙酰胺(BSA)或BSA及六甲基二硅氮烷(HMDS)处 理，在提高之温度下.

起始物是已知的，或可以本领域中已知之方法制备.

制备式I化合物之另一方法於以下流程5中说明：

流程5：

和流程1类似，氯化物V转化成烷基化的化合物XII，且此进一步 与XIV反应，其中R′较好是叔丁基或苄基，以得衍生物XIII.溶剂如 DMF可在60-120℃下应用.此再如流程1所述般反应以完成XV.接下 来移去R′基，如以HCl或三氟醋酸(TFA)移去叔丁基，完成肼XVI.XVI 之酰化可完成XVII，其如上述接受去氢环化作用，以生成所需之Ia. 另外，XII可与酰肼XVIII反应，以得XIX，其可转化成XVII，类似 XV之制备.

式IIa化合物之制备，其中R14非氢，可使用以下步骤：

流程6：

式XIX之酰胺，其制备是将式XVIII之嘧啶与酰氯或酐在碱存在 下(如NaOH)反应，且式XIX化合物再利用如POCl3之试剂环化，以得 式Va之氯咪唑并-嘧啶.式Va之化合物与酰肼如流程2所述般反应， 以得中间物IIa，其可如流程1所述般用来制备式I化合物.化合物 XVIII，酰氯及肼类系已知的，或可以本领域中已知之过程制备.

流程7至10示出制备化合物用起始物之步骤，其中Y及Z一起形 成芳基-或杂芳基-稠合的哌啶基或吡咯烷基.生成的Y-Z部份可与式 IIIa化合物如流程1所述般反应，以得所需之式I化合物.稠合环基 之芳族部份可为独立选自R18基所取代，在流程中命名为R18′，R18″及 R18′″.

流程7：

苄基哌啶酮以氨基丙烯醛(式XX)环化以形成式XXI之苄基保护之 四氢萘啶，继之氢解以得式XXII化合物。

流程8：

式XXIII萘啶之季化作用，继以还原作用可生成式XXIa之苄基保 护的四氢萘啶.氢解作用可生成式XXIIa的所需产物.

流程9：

式XXIV二炔与式XXV之乙炔的[2+2+2]环化作用，可生成式XXVI 之苄基保护之异二氢吲哚，氢解作用可生成式XXVII的所需化合物。

流程10：

式XXVIII苯乙胺之Pictet-Spengler环化作用，可生成式XXIX 经取代之四氢异喹啉.

利用以上步骤，可制备下列化合物.

制备1

步骤1：2-氨基-6-溴嘌呤(1.0克，4.7毫摩尔)及2-糠酸酰肼 (0.88克，7.0毫摩尔)在120℃之丁醇中(10毫升)加热一夜.以过滤 收集固体，以CH3OH洗涤，再於真空烘箱中乾燥固体以产生白色固体. MS(ESI)：M+1＝260.1.PMR(DMSO)δ6.71(d，J＝1.6Hz，1H)，7.32 (s，1H)，7.41(bs，2H)，7.96(s，1H)，8.19(s，1H).10.40(bs， 1H)，10.86(s，1H).

步骤2：将步骤1产物(1.3克，5毫摩尔)於N，O-双(三甲基硅烷 基)乙酰胺(6.10克，30毫摩尔)在100℃下加热一夜.反应混合物冷 却，再倒入冰水中并搅拌4小时.以过滤收集固体，并以CH3OH，Et2O 洗涤，并乾燥产生白色固体.

MS(ESI)：M+1＝242.PMR(DMSO)δ6.71(dd，J＝1.7 & 3.4Hz， 1H)，7.21(d，J＝2.9Hz，1H)，7.67(s，1H)，7.92(s，1H)，7.99 (s，1H).

步骤3：混合步骤2产物(5.0克，20.7毫摩尔)及乙二醇二甲苯 磺酸酯(8.45克，22.8毫摩尔)於无水DMF(30毫升).反应混合物冷 却至0℃，於N2下.分次加入NaH(60％於油，0.91克，22.8毫摩尔)， 内部温度保持在0℃.反应混合物温热至室温，并搅拌一夜.反应混合 物倒入冰/水中，并搅拌4小时.以过滤收集固体，再於硅胶上层析产 生标题化合物.

MS(ESI)：M+1＝440.10.PMR(DMSO)δ1.98(s，3H)，4.38(d， J＝4.3Hz，2H)，4.47(t，J＝4.4Hz，2H)，6.72(dd，J＝1.7 & 3.4 Hz，1H)，6.96(d，J＝8.1Hz，2H)，7.25(m，1H)，7.32(d，J＝8.2 Hz，2H)，7.73(s，2H)，7.93(s，1H)，7.94(d，J＝0.8Hz，2H).

以类似制备1之方式，但应用相应的酰肼，可制备以下化合物：

实施例1

混合制备1产物(0.17克，0.39毫摩尔)及1-(4-甲氧基)苯基 哌嗪(0.18克，0.77毫摩尔)於DMF，并在90℃下加热20小时.浓缩 并以快速管柱层析纯化，以得标题化合物呈白色固体.MS(ESI)， M+1＝430.1.

以类似方式，利用适当取代的哌嗪，可制备以下化合物：

实施例2

混合制备1A产物及1-(2，4-二氟苯基)哌嗪於DMF，并在80℃下 加热20小时。浓缩并以快速管柱层析纯化，可得标题化合物，呈白色 固体.质谱(ESI)，M+1＝476.1.

以类似方式，可制备以下化合物：

利用1-(4-甲氧基)苯基哌嗪及实施例1步骤中制备1之适合的甲 苯磺酸盐，可制备以下化合物：

实施例3

实施例4

实施例5

实施例6

实施例7

利用适合的哌嗪及以实施例1步骤中制备1类似的方法制成之适 合的甲苯磺酸盐，可制备标题化合物.质谱(ESI)M+1＝547.1 (C28H33FN9O2)。

实施例8

利用适合的哌嗪及实例1步骤中制备1E之氯化物，可制备标题化 合物.

质谱(ESI)M+1＝528.1(C26H30N10O2).

因为其腺苷A2a受体拮抗剂活性，本发明化合物可用於治疗抑郁， 认识力功能疾病及神经退化性疾病，如帕金森病，老年性痴呆如阿尔 茨海默氏症中的，及器质性精神病.特言之，本发明化合物可改善因 神经退化性疾病(如帕金森病)所致之运动-损伤.

可与式I化合物组合投药以治疗帕金森病之其他已知作用物包 括：L-DOPA；多巴胺能激动剂如：奎皮尼洛(quinpirole)，洛匹尼洛 (ropinirole)，普拉克索(pramipexole)，硫丙麦角林(pergolide) 及溴麦角隐亭(bromocriptine)；MAO-B抑制剂，如丙炔苯丙胺 (deprenyl)及司来吉兰(selegiline)；DOPA脱羧酶抑制剂，如：卡比 多巴(carbidopa)及苄丝肼(benserazide)；及COMT抑制剂，如托卡 朋(tolcapone)及安托卡朋(entacapone).一至三种其他作用物可与 式I化合物组合使用，但以一种为较佳.

本发明化合物之药理活性，可由以下侦测A2a受体活性之体外及活 体内分析法来测定.

人类腺苷A2a及A1受体竞争结合分析法之策略。

膜的来源：

A2a：人类A2a腺苷受体膜，批号#RB-HA2a，Receptor Biology，Inc.， Beltsville，MD.在膜稀释缓冲溶液中(见下文)稀释成17微克/100 微升.

分析用缓冲溶液：

膜稀释缓冲溶液：Dulbecco′s磷酸盐缓冲食盐水(Gibco/BRL)+10 mM MgCl2.

化合物稀释缓冲溶液：Dulbecco′s磷酸盐缓冲食盐水 (Gibco/BRL)+10mM MgCl2添加1.6毫克/毫升甲基纤维素及16％ DMSO.每天新鲜制备.

配体：

A2a：[3H]-SCH 58261，custom synthesis，AmershamPharmacia Biotech，Piscataway，NJ，贮液制备在膜稀释缓冲溶液中，1nM. 最终分析浓度是0.5nM.

A1：[3H]-DPCPX，AmershamPharmacia Biotech，Piscataway， NJ.贮液以2nM制备在膜稀释缓冲溶液.最终分析浓度是1nM.

非-特异结合：

A2a：为测定非特异结合，加入100nM CGS 15923(RBI，Natick， MA).操作贮液以400nM制备在化合物稀释缓冲溶液中.

A1：为测定非特异结合，加入100μM NECA(RBI，Natick，MA). 操作贮液以400μM制备在化合物稀释缓冲溶液.

化合物稀释：

化合物1mM贮液制备在100％DMSO中.化合物稀释在稀释缓冲溶 液中.在3μM至30pM之10个浓度下测试.操作溶液以4X最终浓 度制备在化合物稀释缓冲溶液中.

分析步骤：

分析在深孔洞之96孔洞盘中进行.分析之总体积是200微升.加 入50微升化合物稀释缓冲溶液(总配体结合)或50微升CGS 15923操 作溶液(A2a非特异结合)或50微升NECA操作溶液(A1非特异结合)或 50微升药物操作溶液.加50微升配体贮液([3H]-SCH 58261於A2a， [3H]-DPCPX於A1).加100微升含有适合受体之经稀释的膜.混合. 在室温下培育90分钟.利用Brandel细胞回收器在Packard GF/B过 滤盘上回收.加入45微升Microscint 20(Packard)，并利用Packard TopCount Microscintillation Counter计数.将置换曲线以反覆曲 线配合程式(Excel)拟合可求出IC50值.利用Cheng-Prusoff程式可 决定Ki值.

大鼠之由氟呱啶醇(Haloperidol)-诱生之昏厥(catalepsy)

使用体重约175-200克之雄性的Sprague-Dawley大鼠(Charles River，Calco，Italy).皮下投予多巴胺受体拮抗剂-氟呱啶醇(1毫 克/公斤，sc)以诱生昏厥状态，此系在测试动物前90分钟，采用直立 栅格试验.於此试验中，大鼠置於25×43塑胶玻璃槛之铁丝网盖上， 与工作台之角度呈约70℃.大鼠在栅格上，其四只脚外展延伸(″青蛙 姿态″).针对昏厥的此种试验特异性，此种异常姿态是必要的.将脚 放上到一脚第一次完全移开之时间距离(有礼貌的潜伏期)测出最长为 120秒.

在评估下将选择性A2a腺苷拮抗剂口服投药，剂量范围在0.3及3 毫克/公斤之间，於对动物打分数前1及4小时时投药.

在分别的实验中，也测定参考化合物-L-DOPA(25，50及100毫 克/公斤，ip)之抗昏厥作用.

大鼠中前脑束之6-OHDA损伤

在所有实验中使用重275-300克之成年雄性的Sprague-Dowley 大鼠(Charles River，Calco，Como，Italy).老鼠每个槛中关一组 4只，可自由取用食物及饮水，在控温及12小时白天/黑夜循环之下. 手术前日，大鼠禁食一夜只自由给饮水.

进行中前脑束单侧6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤，依Ungerstedt et al，Brian Research，24(1970)，p.485-493及Ungerstedt，Eur. J.Pharmacol.，5(1968)，p.107-110之方法，但略有变化.简言 之，动物以水合氯醛(400毫克/公斤，ip)麻醉，再以去郁敏 (desipramine)(10mpk，ip)处理，30分钟後注入6-OHDA以阻断去 甲肾上腺素能末端对毒素之吸收.之後动物置趋异体性支架中.可反 映出头骨上之皮肤，并依据Pellegrino等人之寰椎取趋异体性座标， 距前窗後方-2.2(AP)，距前窗侧面+1.5(ML)，距硬膜腹面7.8(DV). (Pollegrino L.J.，Pellegrino A.S.and Cushman A.J.，A. Stereotaxic Atlas of the Rat Brain，1979，New Yrok：Plenum Press).在骨颅之伤处上方再钻一孔，并将接上Hamilton注射器之针 头下降至左MFB.之後8微克6-OHDA-HCl溶於4微升食盐水，并以 0.05％抗坏血酸为抗氧化剂，以1微升/1分钟之固定流速，在利用输 液泵之下注入.再5分钟後抽出针头，缝合手术伤口，令动物恢复2 周.

伤害後2周，大鼠投以L-DOPA(50毫克/公斤，ip)加上苄丝肼 (Benserazide)(25毫克/公斤，ip)，之後利用自动旋转流速计，在2 小时之测试期间以完全对侧旋转次数为基础而定量之(启动试验).在 此研究中，任何未於2小时内示出至少200次完全旋转之大鼠则不纳 入其中.

在启动试验後3天，选出之大鼠接受测试药物(最大多巴胺受体超 敏感性).新的A2A受体拮抗剂以介於0.1及3毫克/公斤之剂量水平口 服，於不同的时间点(即1，6，12小时)，之後注射阀值下剂量之L- DOPA(4mpk，ip)加上苄丝肼(4mpk，ip)，再进行旋转行为之评估.

利用上述试验步骤，针对本发明较佳及/或代表性化合物可得以下 结果.

在本发明化合物上之结合分析结果显示0.3-1000nM之A2a Ki值， 而较佳化合物示出0.3及50nM间之Ki值.

将A1受体之Ki值除以A2a受体之Ki可测定出选择性.本发明较佳 化合物之选择性范围由约100至约2000.

当针对大鼠之抗-昏厥活性，以1-3毫克/公斤口服测试时，较佳 化合物在礼貌潜伏期中显示约50-75％之减少.

自本发明所述化合物中制备医药组合物时，惰性，药学上可接受 之载体可为固体或液体.固型制剂包括散剂，片剂，可分散颗粒剂， 胶囊剂，扁囊剂及栓剂.散剂及锭剂可由约5至约70％活性组份组成. 适合的固体载体为本领域中已知的，如：碳酸镁，硬脂酸镁，滑石， 糖，乳糖.片剂，散剂，扁囊剂及胶囊剂可以作为适合口服之固体剂 型使用.

於制备栓剂时，可先熔化低融点蜡质，如脂肪酸甘油酯或可可油 脂之混合物，且活性组份以搅拌均匀分散於其中.已熔化之均匀混合 物再倒入合宜大小之模具，令其冷却且由是固化.

液体型式制剂包括溶液剂，悬液剂及乳剂.至於可提及之实例如 用於制备胃肠外注射剂之水或水-丙二醇溶液.

液体型式制剂也包括用於鼻内投药之溶液剂.

适於吸入之气雾剂制剂可包括溶液剂及呈粉末型式之固体，其可 组合以药学上可接受之载体，如惰性可压缩气体.

也包括固型型式制剂，其在就使用前可转化成液体型式制剂，用 於口服或胃肠外投药.此种液体型式包括溶液剂，悬液剂及乳剂.

本发明化合物也可穿皮递送.穿皮组合物可呈霜剂，洗剂，气雾 剂及/或乳剂型式，且可包括在基质或贮存型式之穿皮贴剂中，如针对 此目的的本领域中传统型式.

较好化合物采口服型式.

较好，药学制剂呈单位剂型.在此型式中，制剂可再细分成含有 适量活性组份之单位剂型，如有效剂量以达到欲求目的.

在单位剂型的制剂中式I活性化合物之量可有所变化，或由约0.1 毫克调整至1000毫克，较好由约1毫克至300毫克，依特殊应用而定.

所应用之确实剂量依病人之需求及所治疗之状况严重度而定.针 对特殊状况之适合剂量之决定，系在本领域之技术范围内.一般而言， 治疗先以较小剂量开始，此较化合物之最佳剂量还小.之後，剂量小 幅度增加，直到在状况下达到最佳作用为止.为方便起见，每天之总 剂量可细分，并在必要之日子时分批投药.

本发明化合物及其药学上可接受盐之投予剂量及频率，可依主治 医师之判断而调整，考虑的因素如病人之年龄，病情及大小，以及接 受治疗之症状严重度.式I化合物典型建议之剂量疗程是口服10毫克 至2000毫克/天，较好10至1000毫克/天，以2至4次分次剂量提供 中枢神经系统疾病之舒缓，如，帕金森病.在此剂量范围内投药时化 合物是无毒的.

多巴胺能作用物之剂量及剂量疗程，可由主治医师基於包装内容 物之建议剂量及剂量疗程而定，考虑因素包括病人的年龄，性别及病 情，及疾病之严重度.可预期，当投予式I化合物及多巴胺能作用物 之组合时，与采单一疗法组分投药之剂量比较下，较低剂量之组份即 有效.

以下为含有本发明化合物之医药剂型实施例.本领域技术人员可 确认，剂型可予以变化以含有式I化合物及多巴胺能作用物.本发明 范围在其医药组合物方面不为所提出之实施例所限制.

医药剂型实施例

实施例A-片剂

制备方法

在适合的混合器中将第1及2项混合10-15分钟.以第3项将混 合物制粒.将润滑之颗粒经由粗筛辗磨(如1/4″，0.63公分)，此为必 要时进行.将润滑之颗粒乾燥.必要时将已乾燥之颗粒过筛，并与第4 项混合，混合10-15分钟.加入第5项，并混合1-3分钟.压缩混合 物至适合大小，再於适合的制片机上称重.

实施例B-胶囊剂

制备方法

在适合的拌合机中混合第1，2及3项，整合10-15分钟.加入第 4项，并混合1-3分钟.混合物充填至适合的二片式硬明胶胶囊，利用 适合之包胶机器.

虽然本发明已配合上示具体实施方式予以说明，但其许多变化， 修饰及变异对本领域普通技术人员而言仍是显而易见的.所有此种变 化，修饰及变异均属本发明精义及范畴之内.