眼部病症的治疗专利检索-杂环化合物含有两个氮原子作为仅有的杂环原子的环与C07D 229/00至C07D 245/00中1个以上的组相应的专利检索查询-专利查询网

眼部病症的治疗
申请号	CN201380063931.X	申请日	2013-10-07	公开(公告)号	CN105101996A	公开(公告)日	2015-11-25
申请人	卡德门企业有限公司;			发明人	M.博克塞尔; J.赖安; J.佟拉;
摘要	本发明提供了治疗包括具有血管生成组分的眼部疾病的眼部病症的方法。在某些实施方案中，所述治疗包括施用ROCK2 抑制剂和血管生成抑制剂。在某些实施方案中，ROCK2抑制剂是ROCK2选择性的。在某些实施方案中，血管生成抑制剂是VEGF拮抗剂，例如，VEGFR2 抗体。
权利要求	1.一种治疗受试者中具有血管生成组分的眼部病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的rho激酶抑制剂和血管生成抑制剂。 2.如权利要求1所述的方法，其中所述眼部病症是年龄相关性黄斑变性(AMD)、脉络膜新生血管形成(CNV)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、虹膜新血管形成、葡萄膜炎、新生血管性青光眼或早产儿视网膜炎(ROP)。 3.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是ROCK2选择性的。 4.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XVI化合物：或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中： 13 14 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 13 14 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选被1 至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 2 R选自H和卤素； 3 4 每个R和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6 31 32 31 32 31 烷基 )-O-(C1-C6烷基 )、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH 2)aNR R 、-NR -(CH2) 33 34 31 3 aNR R 、-NR -(CH2)aOR、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)的取代基取代； 31 32 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； 31 32 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被 1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； 33 34 R 和R 独立地选自由H和C1-C8烷基组成的组； a选自0至6； 5 R选自H和C1-C6烷基； 6 R选自由H、卤素和C1-C6烷基组成的组。 5.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XVII化合物：或其药学上可接受的盐，其中： X选自由-NH-C(＝O)-CHR13R14；-NH-C(＝O)-(CH2)b-NR13R14；-C(＝O)-NR13R14组成的组； R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代；每个R3和R4独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR31R32、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR31R32、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； a选自0至6； b选自0至1。 6.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XVIII化合物：或其药学上可接受的盐，其中： 3 4 每个R和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6 31 32 31 32 烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； 31 32 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； a选自0至6； 15 R 选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷 31 基)、-C(＝O)-O-C(R)3 、C1-C3全氟烷基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； x选自1至3； y选自0至3； z选自0至3；其中独立地选择y或z并且其中之一至少为1。 7.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XIX化合物：或其药学上可接受的盐，其中： 13 14 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 13 14 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1 至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 31 32 Y选自由S、CH2和-CR R -组成的组 2 R选自H和卤素； 3 4 每个R和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6 31 32 31 32 31 烷基 )-O-(C1-C6烷基 )、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH 2)aNR R 、-NR -(CH2) 33 34 31 33 aNR R 、-NR -(CH2)aOR 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)的取代基取代； 31 32 R 和R 独立地选自由H、卤素、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； 31 32 或R 和R 可以合起来一起形成三至十二元环烷基或具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； 33 34 R 和R 独立地选自由H和C1-C8烷基组成的组； a选自0至6。 8.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XX化合物：或其药学上可接受的盐，其中： 13 14 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 13 14 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1 至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 4 R选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷 31 32 31 32 基)、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； 31 32 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； 31 32 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被 1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； 5 R选自H和C1-C6烷基。 9.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XXI化合物：或其药学上可接受的盐，其中： R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代；或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； R4选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR31R32、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR31R32、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组；或R31和R32可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被 1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； a选自0至6。 10.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XXII化合物：或其药学上可接受的盐，其中： 13 14 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 13 14 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1 至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 3 R是H； 4 R选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷 31 32 31 32 基)、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； 31 32 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； 31 32 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被 1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； a选自0至6。 11.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XXIII化合物：或其药学上可接受的盐，其中： R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代；或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； x选自0至1； R2选自由环己基吡啶、1H-吡唑和吡啶组成的组； X选自N或CR3； Y选自N或CR3； Z选自N或CR4；其中X、Y、Z中的至少一个为N； R4选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR31R32、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR31R32、-NR31-(CH2)aNR33R34、-NR31-(CH2)aOR33、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)的取代基取代； R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组；或R31和R32可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被 1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； a选自0至6； Q选自基团NR5和O； R5选自H和C1-C6烷基。 12.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XXIV化合物：或其药学上可接受的盐，其中： 12 R 选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、氨基、 31 32 NR R 、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； x选自0至2； 3 4 每个R和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6 31 32 31 32 烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； 31 32 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C7环烷基和C3-C7环烷基-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； 31 32 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被 1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； a选自1至6。 13.如权利要求1所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是式XXV化合物：或其药学上可接受的盐，其中： 13 14 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 13 14 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1 至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； x选自0至3； 15 R 选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、杂芳基、杂环和C3-C7环烷基组成的组； 3 4 每个R和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6 31 32 31 32 烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； 31 32 R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； 31 32 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被 1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； a选自1至6。 14.如权利要求1所述的方法，其中所述血管生成抑制剂是VEGR拮抗剂。 15.如权利要求1所述的方法，其中所述血管生成抑制剂是结合到VEGFR2的抗体或其抗原结合片段。 16.如权利要求15所述的方法，其中所述VEGFR2抗体阻断配体结合。 17.如权利要求15所述的方法，其中所述VEGR2抗体抑制VEGFR2活化。 18.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含CDR-1H、CDR-2H和CDR-3H序列，其中： (i)所述CDR-1H序列是GFTFSWYX1MX2(SEQ ID NO：185)，其中X1是V或I，X2是G或L，(ii)所述CDR-2H序列是SIX1X2SGGX3TX4YADSVKG(SEQ ID NO：186)，其中X1是Y或G，X2是P或S，X3是A或F，X4是N或D，并且 (iii)所述CDR-3H序列是GNYFDY(SEQ ID NO：3)或GLAAPRS(SEQ ID NO：11)。 19.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含CDR-1L、CDR-2L和CDR-3L，其中 (i)所述CDR-1L序列是X1GX2X3LX4X5X6X7X8S(SEQ ID NO：187)，其中X1是S、Q或T，X2是D、E或Q，X3是K、S、N、I或A，X4是G或R，X5是D、S、H、E或N，X6是E、Y、Q、R或N，X7是Y、F或S，并且X8是A或S或SGSX1SNX2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO：188)，其中X1是S或T，X2是I或L，X3是E或G，X4是T、S或N，X5是N或Y，X6是T.P、A或Y，X7是V或L，并且X8是N、I或Y或X1GX2SX3DX4GX5YDYVS(SEQ ID NO：189)，其中X1是A或T，X2是S或T，X3是H、S或N，X4是I或V，并且X5是S或A， (ii)所述CDR-2L序列是X1X2X3X4X5PS(SEQ ID NO：190)，其中X1是Q、D、T、Y、S或A，X2是D、N、S、T、V或V，X3是D、N、S、T或Y，X4是Q、K、N或L，并且X5是R或L，并且(iii)所述CDR-3L序列是QX1WX2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO：191)，其中X1是A或T，X2是D或G，X3是R或无氨基酸，X4是S、F或N，X5是S、T或N，X6是S、T或P，X7是A、V、L、I或Y，并且X8是V或L或AX1WDDX2LX3X4X5X6(SEQ ID NO：192)，其中X1是A、S或T，X2是N或S，X3是N、I或G，X4是G或S，X5是P、W或V，并且X6是V或L或MYSTITX1LL(SEQ ID NO：193)，其中X1是A或T。 20.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含CDR-1L、CDR-2L和CDR-3L，其中 (i)所述CDR-1L序列是RASX1X2X3X4X5X6X7YX8X9(SEQ ID NO：194)，其中X1是Q、E或H，X2是S、R或N，X3是V、I或L，X4是S、R、G或N，X5是S或N，X6是S、N、W或D，X7是G或无氨基酸，X8是L或F，并且X9是A、G、M或S， (ii)所述CDR-2L序列是GASX1RAT(SEQ ID NO：195)，其中X1是S、T、I或N，并且 (iii)所述CDR-3L序列是QQX1X2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO：196)，其中X1是F或Y，X2是D、G或Y，X3是S、T或N，X4是S、L或W，X5是P或无氨基酸，X6是P或T，X7是L、I、V、P、W或Y，并且X8是T或S。 21.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：1的CDR-1H、具有SEQ ID NO：2的CDR-2L和具有SEQ ID NO：3的CDR-3L。 22.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：5的CDR-1L、具有SEQ ID NO：6的CDR-2L和具有SEQ ID NO：7的CDR-3L。 23.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：4的重链可变域。 24.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：8的轻链可变域。 25.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：9的CDR-1H、具有SEQ ID NO：10的CDR-2L和具有SEQ ID NO：11的CDR-3L。 26.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：13的CDR-1L、具有SEQ ID NO：14的CDR-2L和具有SEQ ID NO：15的CDR-3L。 27.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：12的重链可变域。 28.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：16的轻链可变域。 29.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：25的CDR-1L、具有SEQ ID NO：26的CDR-2L和具有SEQ ID NO：27的CDR-3L。 30.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：28的轻链可变域。 31.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：29的CDR-1L、具有SEQ ID NO：30的CDR-2L和具有SEQ ID NO：31的CDR-3L。 32.如权利要求15所述的方法，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：32的轻链可变域。 33.如权利要求1所述的方法，其进一步包括施用TGF-β拮抗剂。 34.一种治疗受试者中具有血管生成组分的病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的rho激酶抑制剂和血管生成抑制剂。 35.如权利要求34所述的方法，其中所述病症是动脉粥样硬化、类风湿关节炎(RA)、血管瘤、血管纤维瘤、牛皮癣、角膜移植排斥、胰岛素依赖型糖尿病、多发性硬化症、重症肌无力、克罗恩氏病、自身免疫性肾炎、原发性胆汁性肝硬化、急性胰腺炎、同种异体移植排斥、过敏性炎症、接触性皮炎、迟发性超敏反应、炎性肠道疾病、败血性休克、骨质疏松症、骨关节炎、神经元炎症、Osler-Weber综合征、再狭窄或真菌、寄生虫或病毒感染。 36.如权利要求34所述的方法，其中所述rho激酶抑制剂是ROCK2选择性的。
说明书全文	眼部病症的治疗发明领域 [0001] 本发明涉及眼部病症(包括具有血管生成组分的眼部病症)的治疗。在某些实施方案中，所述治疗包括施用ROCK2抑制剂和血管生成抑制剂。在某些实施方案中，所述血管生成抑制剂是VEGF拮抗剂。在某些实施方案中，所述血管生成抑制剂是VEGFR2抗体。本发明进一步提供了新颖的ROCK抑制剂和新颖的VEGFR2抗体。 [0002] 相关申请的交叉引用 [0003] 本申请要求2012年10月5日提交的美国申请第61/710,467号的优先权，通过引用将其全部内容并入本文。 [0004] 发明背景 [0005] Rho相关的蛋白激酶(ROCK)是细胞骨架动力学和细胞运动的关键细胞内介质。Rho激酶通过磷酸化介导了RhoA的许多下游靶，包括例如肌球蛋白轻链，结合亚基和LIM-激酶2的肌球蛋白轻链磷酸酶。这些底物介导了肌动蛋白丝组织和收缩力。在平滑肌细胞中，Rho激酶介导了钙致敏和平滑肌收缩。Rho激酶的抑制阻断了5-HT和苯肾上腺素激动剂诱导的肌肉收缩。当被引入至非平滑肌细胞中时，Rho激酶诱导了应激纤维形成并且对于通过RhoA介导的细胞转化是必需的。Rho激酶参与了多个细胞过程，包括但不限于细胞粘附、细胞运动和迁移、生长控制、细胞收缩和胞质分裂。Rho激酶还参与Na/H交换转运系统活化、应激纤维形成、内收蛋白活化和诸如血管收缩、支气管平滑肌收缩、血管平滑肌和内皮细胞增殖、血小板聚集和其他的生理过程中。 [0006] 动物模型中的Rho激酶活性的抑制已经证明了Rho激酶抑制用于治疗人疾病的许多益处。这些包括心血管疾病，例如高血压、动脉粥样硬化、再狭窄、心脏肥大、高眼压症、脑缺血、脑血管痉挛、阴茎勃起功能障碍、中枢神经系统疾病，例如神经元变性和脊髓损伤，以及瘤形成中的模型。Rho激酶活性的抑制已被证明抑制肿瘤细胞的生长和转移、血管生成、动脉血栓形成疾病，例如血小板聚集和白细胞聚集、哮喘、眼内压力调节和骨吸收。患者中的Rho激酶活性的抑制具有用于控制脑血管痉挛和缺血蛛网膜下腔出血、减少眼内压力、通过小梁网组织的松弛增加了眼房水外流、改善向视神经的血液流动和保护健康神经节细胞的益处。 [0007] 在哺乳动物中，Rho 激酶由两个同种型：ROCK1(ROCKβ；p160-ROCK) 和ROCK2(ROCKα)组成。ROCK1和ROCK2被差异表达，并在特定组织中被介导。例如，ROCK1普遍以相对高的水平表达，而ROCK2优选被表达在心脏和脑和骨骼肌中。所述同种型也被表达在一些组织中并以发育阶段特异性方式表达。ROCK1是凋亡过程中用于半胱天冬酶-3切割的底物，而ROCK2不是。平滑肌特异性碱性调宁蛋白仅由ROCK2磷酸化。 [0008] 血管生成是发育新血管的高度复杂的过程，其涉及来自预先存在的血管的毛细血管内皮细胞的增殖和迁移以及通过所述细胞的组织浸润、向管状结构的细胞结集、新形成的管状组件结合到闭路式血管系统以及新形成的毛细血管的成熟。 [0009] 血管生成在包括胚胎发育、卵泡生长和伤口愈合的正常生理过程中是重要的。过度的血管生成也导致肿瘤疾病以及非肿瘤疾病中的新血管形成，例如年龄相关性黄斑变性、糖尿病性视网膜病和新生血管性青光眼。已证明采用雷珠单抗(Lucentis)靶向血管内皮细胞生长因子(VEGF)的抗血管生成治疗在延缓AMD的进展中是有效的。然而，新血管形成是复杂的而且多种血管生成机制可能做出了贡献。但仍然需要开发出用于治疗与新血管形成相关的疾病的药剂和疗法。 [0010] 青光眼与高于正常的眼内压力(高眼压)相关联，并且如果不加控制，则首先导致周边视野的损失，并最终可能导致失明。青光眼的两种主要类型是慢性或原发性开角型青光眼(POAG)和急性闭角型青光眼，这两者的特点是高眼内压(IOP)。正常眼压性青光眼导致由于视神经损伤引起的视敏力损失，但其特点是正常IOP。其原因被认为是向视神经的血液流动不畅。色素性青光眼的特点是由已经从虹膜碎散并堵塞了排出角的色素引起的从眼睛的流出减少。继发性青光眼发展自眼睛受伤、感染、炎症、肿瘤或因白内障引起的晶状体扩大。最终，先天性青光眼由导致眼睛的缺陷性流出的缺陷、典型地窄角引起。 [0011] 概述 [0012] 本发明涉及治疗具有血管生成组分的病症。在某些实施方案中，所述病症是眼部病症。根据本发明，采用ROCK2抑制剂治疗这样的病症，所述ROCK2抑制剂可以是非选择性“泛ROCK”抑制剂或选择性ROCK2抑制剂。在某些这样的实施方案中，还施用了血管生成抑制剂。本发明还涉及采用ROCK抑制剂治疗无血管生成组分的眼部病症，如某些青光眼。本发明提供了用于所述疗法中的药剂。 [0013] 血管生成发生在眼部疾病中，如黄斑变性(AMD)、脉络膜新生血管形成(CNV)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、虹膜新血管形成、葡萄膜炎、新生血管性青光眼或早产儿(ROP)视网膜炎。血管生成也出现在诸如癌症、类风湿关节炎、牛皮癣和多于70种的其他病况的疾病。在这些病况中，新血管供养病变组织，破坏正常组织，并且在癌症的情况下，新血管允许肿瘤细胞逃逸进入循环并驻扎在其他器官中(肿瘤转移)。当病变细胞产生大量异常的血管生长因子时出现了过多的血管生成，压倒了天然血管生成抑制剂的作用。 [0014] 因此，本发明提供了治疗受试者中具有血管生成组分的眼部病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用抑制ROCK2的有效量的rho激酶抑制剂和血管生成抑制剂。本发明还提供了治疗具有血管生成组分的某些非眼部病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的抑制ROCK2的rho激酶抑制剂和血管生成抑制剂。在本发明的一个实施方案中，ROCK2抑制剂是ROCK2选择性的。根据本发明使用的ROCK2抑制剂包括但不限于由本文所述的式I-XXV表示的化合物。其他ROCK2抑制剂由式XXXI-XXXVI表示，包括采用了ROCK2选择性的化合物SLx-2119。 [0015] 还提供了血管生成抑制剂，而且包括但不限于VEGF拮抗剂，例如本文所述的VEGFR2抗体。在一些实施方案中，所述VEGF拮抗剂是VEGF特异性的，包括但不限于Avastin和Lucentis。 [0016] 在某些本发明的疗法中，所述治疗方法进一步包括施用TGF-β拮抗剂。 [0017] 本发明的某些化合物具有式I： [0018] [0019] 或其药学上可接受的盐，其中： [0020] X选自N或C-R1； [0021] Y选自N或C-R5； [0022] Z选自N或C-R3； [0023] R1选自由H、低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0024] R2是具有式-A-R10的基团； [0025] A选自由共价键、芳基、杂芳基、环烷基和杂环基组成的组； [0026] R10选自由H、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基、C1-C10烷基、C2-C10烯基和-(M)x-(CH2)y-R11组成的组； [0027] M选自由N-R20、CR21R22和C＝O组成的组； [0028] x是0或1； [0029] R20选自H和C1-5烷基； [0030] R21和R22独立地选自由H、卤素和低级烷基组成的组，或者R21和R22可以与它们连接的原子合起来一起形成C3-6环烷基； [0031] y为0、1、2、3、4、5或6； [0032] R11选自由H、C1-6烷基、任选取代的C3-6环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基组成的组，其中任选的取代基选自由低级烷基、C1-6环烷基、氧代、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0033] 可选地R11选自由-NR13R14、-C(＝O)NR13R14和-C(＝O)R12和-CO2R12组成的组；12 [0034] R 选自由C1-C10烷基、芳基、杂芳基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳烷基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、羟基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； 13 14 [0035] R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C6环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代；13 14 [0036] 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、氧代、羟基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0037] R3选自由H、低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0038] R5选自由H、低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0039] R6选自由H、低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0040] R7选自由H和低级烷基组成的组；并且 [0041] R8是含氮杂环系统环，其可以包含选自N、O和S的0-2个另外的环杂原子，并且可以未被取代或可以被1至3个选自卤素、CN、氧代、羟基、氨基、低级烷基、全氟低级烷基和低级烷氧基的取代基取代。 [0042] 本发明的其他化合物在下文中示出。 [0043] 本发明包括包含本发明的化合物和药学上可接受的载体和/或稀释剂的药物组合物。 [0044] 本发明还提供了用于治疗具有血管生成组分的病症的血管生成抑制剂，所述血管生成抑制剂包含新颖的抗-VEGFR2抗体，编码此类抗体的核酸和包含此类抗体的组合物。在一个实施方案中，本发明提供了包含CDR-1H、CDR-2H和CDR-3H序列的分离的重链可变域，其中： [0045] (i)所述CDR-1H序列是GFTFSWYX1MX2(SEQ ID NO：185)，其中X1是V或I，X2是G或L， [0046] (ii)所述CDR-2H序列是SIX1X2SGGX3TX4YADSVKG(SEQ ID NO：186)，其中X1是Y或G，X2是P或S，X3是A或F，X4是N或D，并且 [0047] (iii)所述CDR-3H序列是GNYFDY(SEQ ID NO：3)或GLAAPRS(SEQ ID NO：11)。 [0048] 在一个实施方案中，本发明提供了包含CDR-1L、CDR-2L和CDR-3L的分离的轻链可变域，其中 [0049] (i)所述CDR-1L序列是X1GX2X3LX4X5X6X7X8S(SEQ ID NO：187)，其中X1是S、Q或T，X2是D、E或Q，X3是K、S、N、I或A，X4是G或R，X5是D、S、H、E或N，X6是E、Y、Q、R或N，X7是Y、F或S，并且X8是A或S或SGSX1SNX2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO：188)，其中X1是S或T，X2是I或L，X3是E或G，X4是T、S或N，X5是N或Y，X6是T.P、A或Y，X7是V或L，并且X8是N、I或Y或X1GX2SX3DX4GX5YDYVS(SEQ ID NO：189)，其中X1是A或T，X2是S或T，X3是H、S或N，X4是I或V，并且X5是S或A， [0050] (ii)所述CDR-2L序列是X1X2X3X4X5PS(SEQ ID NO：190)，其中X1是Q、D、T、Y、S或A，X2是D、N、S、T、V或V，X3是D、N、S、T或Y，X4是Q、K、N或L，并且X5是R或L，并且[0051] (iii)其中所述CDR-3L序列是QX1WX2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO：191)，其中X1是A或T，X2是D或G，X3是R或无氨基酸，X4是S、F或N，X5是S、T或N，X6是S、T或P，X7是A、V、L、I或Y，并且X8是V或L或AX1WDDX2LX3X4X5X6(SEQ ID NO：192)，其中X1是A、S或T，X2是N或S，X3是N、I或G，X4是G或S，X5是P、W或V，并且X6是V或L或MYSTITX1LL(SEQ ID NO：193)，其中X1是A或T。 [0052] 在一个实施方案中，本发明提供了包含CDR-1L、CDR-2L和CDR-3L的分离的轻链可变域，其中 [0053] (i)所述CDR-1L序列是RASX1X2X3X4X5X6X7YX8X9(SEQ ID NO：194)，其中X1是Q、E或H，X2是S、R或N，X3是V、I或L，X4是S、R、G或N，X5是S或N，X6是S、N、W或D，X7是G或无氨基酸，X8是L或F，并且X9是A、G、M或S， [0054] (ii)所述CDR-2L序列是GASX1RAT(SEQ ID NO：195)，其中X1是S、T、I或N，并且[0055] (iii)所述CDR-3L序列是QQX1X2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO：196)，其中X1是F或Y，X2是D、G或Y，X3是S、T或N，X4是S、L或W，X5是P或无氨基酸，X6是P或T，X7是L、I、V、P、W或Y，并且X8是T或S。 [0056] 在本发明的一个实施方案中，提供了包含重链可变域的抗体，所述重链可变域包含如上所述的轻链可变域和重链可变域CDR序列中的一个、两个、三个、四个、五个或六个。本文中提供了这样的抗体的实例。 [0057] 本发明还提供了治疗青光眼的方法，所述方法包括施用有效量的rho激酶抑制剂。待治疗的青光眼的类型包括但不限于，两个主要类型：慢性或原发性开角型青光眼(POAG)和急性闭角型青光眼，以及正常眼压性青光眼、色素性青光眼、发展自眼睛受伤、感染、炎症、肿瘤或因白内障引起的晶状体扩大的继发性青光眼、和先天性青光眼。 [0058] 本发明还涉及具有血管生成组分的非眼部病症。因此，本发明提供了治疗受试者中具有血管生成组分的病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的rho激酶抑制剂和血管生成抑制剂。非限制性的实例包括动脉粥样硬化、类风湿关节炎(RA)、血管瘤、血管纤维瘤、牛皮癣、角膜移植排斥、胰岛素依赖型糖尿病、多发性硬化症、重症肌无力、克罗恩氏病(Chron's disease)、自身免疫性肾炎、原发性胆汁性肝硬化、急性胰腺炎、同种异体移植排斥反应、变应性炎症、接触性皮炎、迟发性超敏反应、炎性肠道疾病、败血性休克、骨质疏松症、骨关节炎、神经元炎症、Osler-Weber综合征、再狭窄或真菌、寄生虫或病毒感染。附图说明 [0059] 图1示出了本发明的化合物。 [0060] 图2示出了本发明的化合物。 [0061] 图3示出了本发明的化合物。 [0062] 图4示出了本发明的化合物。 [0063] 图5示出了针对ROCK1对ROCK2的抑制的剂量反应曲线。化合物对应于本文中的实施方案，具体如下：K100-5，实施例12；KD-25，SLx-2119；3272，实施例28；K100-04，实施例14；K100-16，实施例43；K100-21；实施例38；K100-23，实施例52；K100-24，实施例111；K100-25，实施例56；K100-26，实施例13；3266，实施例26。 [0064] 图6比较了在实施方案43、48和118的化合物中ROCK1和ROCK2的抑制。 [0065] 图7示出了ROCK2选择性抑制剂KD025(SLx 2119)体外抑制了人CD4+T细胞中的IL-17/IL-21分泌(A)和增殖(B)。 [0066] 图8示出了ROCK2siRNA，但不是ROCK1siRNA，抑制了IL-17和IL-21分泌。 [0067] 图9示出了KD025(SLx 2119)抑制了STAT3磷酸化。(A)用KD025预处理T细胞，随后通过抗-CD3/CD28抗体刺激。(B)在Th17-时滞条件下细胞培养5天，随后用KD025处理3小时。 [0068] 图10示出了ROCK2选择性抑制剂KD025抑制了在来自RA患者的CD3/CD28刺激的+CD4T细胞中的IL-17、IL-21和IFN-γ的离体产生。图(A)表示响应于TCR刺激的IL-17、IL-21和IFN-γ的减少的分泌。图(B)表示通过细胞内染色表明的IL-17和IFN-γ产生细胞这两者的减少的频率。 [0069] 图11A-C分别示出了通过噬菌体展示鉴别的抗-VEGFR2抗体的人重链、λ轻链和κ轻链可变域序列。 [0070] 图12示出了本发明的抗体结合到hVEGFR2(上)和含有hVEGFR2的域2和3的构建体(中)。底部图示出了配体(VEGF165)阻断。 [0071] 图13示出了本发明的Mab 101和102抑制了过表达KDR(人VEGFR2)的猪主动脉内皮(PAE)细胞中的VEGFR2、AKT和MAPK的VEGFA刺激的磷酸化。 [0072] 图14示出了通过Mab 104、105、106和108结合到hVEGFR2和VEGF165配体阻断。在独立的实验中对于Mab 103、107、109和110获得了类似的结果。这些Mab包含与不同轻链可变域重组的Mab 101的重链可变域。 [0073] 图15示出了本发明的Mab 105和106抑制了过表达KDR(人VEGFR2)的猪主动脉内皮(PAE)细胞中的VEGFR2、AKT和MAPK的VEGFA刺激的磷酸化。 [0074] 发明详述 [0075] 本发明涉及治疗具有血管生成组分的病症。在某些实施方案中，所述病症是眼部病症。根据本发明，采用ROCK2抑制剂治疗这样的病症，所述ROCK2抑制剂可以是非选择性“泛ROCK”抑制剂或选择性ROCK2抑制剂。在某些这样的实施方案中，还施用了血管生成抑制剂。本发明还涉及采用ROCK抑制剂治疗无血管生成组分的眼部病症，如某些青光眼。 [0076] 在一个方面，本发明提供了是Rho激酶抑制剂的式I化合物。Rho激酶(ROCK)，一种丝氨酸/苏氨酸激酶，作为小GTP结合蛋白Rho的靶蛋白，并且是许多细胞功能，包括焦2+ 点粘连、运动、平滑肌收缩和胞质分裂的重要介质。在平滑肌中，ROCK在Ca 致敏和血管张力的控制中起重要作用。它调制球蛋白II的肌球蛋白II轻链的磷酸化水平，主要是通过 2+ 肌球蛋白磷酸酶的抑制，并有助于平滑肌收缩中的激动剂诱导的Ca 致敏。在某些实施方案中，式I化合物选择性地抑制ROCK2。 [0077] 根据本发明的可用化合物包括具有式I的那些： [0078] [0079] 其中： [0080] X选自N或C-R1； [0081] Y选自N或C-R5； [0082] Z选自N或C-R3； [0083] R1选自由H、低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0084] R2是具有式-A-R10的基团； [0085] A选自由共价键、芳基、杂芳基、环烷基和杂环基组成的组； [0086] R10选自由H、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基、C1-C10烷基、C2-C10烯基和-(M)x-(CH2)y-R11组成的组； [0087] M选自由N-R20、CR21R22和C＝O组成的组中； [0088] x是0或1； [0089] R20选自H和C1-5烷基； [0090] R21和R22独立地选自由H、卤素和低级烷基组成的组，或者R21和R22可以与它们连接的原子合起来一起形成C3-6环烷基； [0091] y为0、1、2、3、4、5或6； [0092] R11选自由H、C1-6烷基、任选取代的C3-6环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基组成的组，其中任选的取代基选自由低级烷基、C1-6环烷基、氧代、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0093] 可选地R11选自由-NR13R14、-C(＝O)NR13R14和-C(＝O)R12和-CO2R12组成的组； [0094] R12选自由C1-C10烷基、芳基、杂芳基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳烷基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、羟基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0095] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C6环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0096] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、氧代、羟基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0097] R3选自由H、低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0098] R5选自由H、低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0099] R6选自由H、低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基、全氟低级烷基和(低级烷基)-O-(低级烷基)组成的组； [0100] R7选自由H和低级烷基组成的组；并且 [0101] R8是含氮杂环系统环，其可以包含选自N、O和S的0-2个另外的环杂原子，并且可以未被取代或可以被1至3个选自卤素、CN、氧代、羟基、氨基、低级烷基、全氟低级烷基和低级烷氧基的取代基取代。 [0102] 在本发明的某些实施方案中，R8的环系统是饱和的，包含一个或多个双键，或者是芳族的。包含R8的环系统优选为具有4至10个环原子的单环或双环系统。在本发明的某些方面中，R8选自： [0103] [0104] 其中R9选自H、卤素和低级烷基。 [0105] 在某些实施方案中，R2是取代的芳基并优选为取代的苯基。 [0106] 在本发明的某些方面，根据本发明的可用化合物包括具有式II、III或IV的那些： [0107] [0108] 其中R2、R6、R7、X和Z如上文对式I所定义。 [0109] 在本发明的其他方面，根据本发明的可用化合物包括具有式V或VI的那些： [0110] [0111] 其中R6、R7、X、Z和R10如上文对式I所定义。 [0112] 在本发明的其他方面，根据本发明的可用化合物包括具有式VII的那些： [0113] [0114] 其中R6、R7、X、Z和R10如上文对式I所定义。 [0115] 在本发明的其他方面，根据本发明的可用化合物包括具有式IX的那些： [0116] [0117] 其中R6、R7、X和Z如上文对式I所定义，并且T是-(CH2)y-R11，其中y和R11如上文对式I所定义。 [0118] 在本发明的其他方面，根据本发明的可用化合物包括具有式X的那些： [0119] [0120] 其中R6、R7、X和Z如上文对式I所定义，并且R’是如上文对式I所定义的R13。 [0121] 在本发明的其他方面，根据本发明的可用化合物包括具有式XI的那些： [0122] [0123] 其中R6、R7、X和Z如上文对式I所定义，并且T1是如上文对式I所定义的R12。 [0124] 在本发明的其他方面，根据本发明的可用化合物包括具有式XII的那些： [0125] [0126] 其中R6、R7、X和Z如上文对式I所定义，并且T1是如上文对式I所定义的R12。 [0127] 在本发明的其他方面，根据本发明的可用化合物包括具有式XIII的那些： [0128] [0129] 其中R6、R7、X和Z如上文对式I所定义，A是如上文对式I所定义的M并且W是如上文对式I所定义的R12。 [0130] 在本发明的其他方面，根据本发明的可用化合物包括具有式XIV的那些： [0131] [0132] 其中X、Z和R13如上文对式I所定义。 [0133] 在本发明的某些方面，对于上面描述的每种化合物，部分 [0134] [0135] 可选自杂芳基，使得Y为N。在本发明的其他方面，Y和X两者都是N，并且在另外其他方面，X、Y和Z各自是N。在本发明的优选方面，此杂芳基选自下列基团中的任何一个： [0136] [0137] 在本发明的其他方面，根据本发明的可用化合物包括具有式XVI的那些： [0138] [0139] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中： [0140] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0141] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0142] R2选自H和卤素； [0143] 每个R3和R4独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷31 32 31 32 31- 基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR R 、-NR (CH2) 33 34 31 3 aNR R 、-NR -(CH2)aOR、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)的取代基取代； [0144] R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； [0145] 或R31和R32可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0146] R33和R34独立地选自由H和C1-C8烷基组成的组； [0147] a选自0至6； [0148] R5选自H和C1-C6烷基； [0149] R6选自由H、卤素和C1-C6烷基组成的组。 [0150] 在本发明的一个实施方案中，R13选自由C1-C8烷基、C3-C7环烷基和三至十二元杂13 环组成的组。在本发明的另一实施方案中，R 选自由异丙基、环烷基、N-吗啉代和3-吡啶 14 2 组成的组。在本发明的一个实施方案中，R 是H。在本发明的一个实施方案中，R 是H。在 2 3 本发明的另一个实施方案中，R是F。在本发明的一个实施方案中，R 选自由H、C1-C8烷基 3 和C1-C3全氟烷基组成的组。在本发明的另一实施方案中，R 选自由H、CH3和CF3组成的组。 4 在本发明的一个实施方案中，R选自由H、C1-C8烷基、C1-C3全氟烷基和三至十二元杂环组 4 成的组。在本发明的另一实施方案中，R选自由H、CH3、CF3、哌嗪基和N-吗啉代组成的组。 [0151] 在本发明的方面，根据本发明可用的化合物包括具有式XVII的那些： [0152] [0153] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中： [0154] X选自由-NH-C(＝O)-CHR13R14；-NH-C(＝O)-(CH2)b-NR13R14；-C(＝O)-NR13R14组成的组； [0155] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0156] 每个R3和R4独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷31 32 31 32 基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0157] R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； [0158] a选自0至6； [0159] b选自0至1。 [0160] 在本发明的实施方案中，R13是三至十二元杂环。在本发明的另一实施方案中，R13选自由异丙基、环烷基、N-吗啉代、3-吡啶基、四氢吡喃基、哌啶基和四氢硫吡喃二氧化物13 组成的组中。在本发明的另一实施方案中，R 选自由以下组成的组： [0161] 在本发明的一个实施方案14 3 4 中，R 是H。在本发明的实施方案中，R 和R 各自为H。 [0162] 在本发明的另一方面，根据本发明可用的化合物包括具有式XVIII的那些： [0163] [0164] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中： [0165] 每个R3和R4独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷31 32 31 32 基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR R 、CF3、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0166] R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； [0167] a选自0至6； [0168] R15选自由 H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基 )、-O-(C1-C6烷31 基)-O-(C1-C6烷基)、-C(＝O)-O-C(R)3 、CF3、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0169] x选自1至3； [0170] y选自0至3； [0171] z选自0至3； [0172] 其中独立地选择y或z并且其中之一至少为1。 [0173] 在本发明的方面，根据本发明可用的化合物包括具有式XIX的那些： [0174] [0175] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：13 14 [0176] R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代；13 14 [0177] 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代；31 32 [0178] Y选自由S、CH2和-CR R -组成的组2 [0179] R选自H和卤素；3 4 [0180] 每个R和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷31 32 基 )、-O-(C1-C6烷基 )-O-(C 1-C6烷基 )、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH 2) 31 32 31 33 34 31 33 aNR R 、-NR -(CH2)aNR R 、-NR -(CH2)aOR 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)的取代基取代； 31 32 [0181] R 和R 独立地选自由H、卤素、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组；31 32 [0182] 或R 和R 可以合起来一起形成三至十二元环烷基或具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代；33 34 [0183] R 和R 独立地选自由H和C1-C8烷基组成的组； [0184] a选自0至6。 [0185] 在本发明的实施方案中，Y形成三元环烷烃。在本发明的另一实施方案中，Y是氟。 [0186] 在本发明的另一方面，根据本发明可用的化合物包括具有式XX的那些： [0187] [0188] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中： [0189] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0190] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0191] R4选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR31R32、CF3、-O-(CH2)aNR31R32、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0192] R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； [0193] 或R31和R32可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0194] R5选自H和C1-C6烷基。 [0195] 在本发明的另一方面，根据本发明可用的化合物包括具有式XXI的那些： [0196] [0197] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中： [0198] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0199] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0200] R4选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C631 32 31 32 烷基)、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0201] R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； [0202] 或R31和R32可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0203] a选自0至6。 [0204] 在本发明的另一方面，根据本发明可用的化合物包括具有式XXII的那些： [0205] [0206] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中： [0207] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0208] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0209] R3是H； [0210] R4选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C631 32 31 32 烷基)、-NR R 、C1-C3全氟烷基、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0211] R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； [0212] 或R31和R32可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0213] a选自0至6。 [0214] 在本发明的另一方面，根据本发明可用的化合物包括具有式XXIII的那些： [0215] [0216] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：13 14 [0217] R 和R 独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代；13 14 [0218] 或R 和R 可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0219] x选自0至1；2 [0220] R选自由环己基吡啶、1H-吡唑和吡啶组成的组； [0221] [0222] X选自N或CR3； [0223] Y选自N或CR3； [0224] Z选自N或CR4； [0225] 其中X、Y、Z中的至少一个为N； [0226] R4选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C631 32 31 32 31 33 34 31 33 烷基)、-NR R 、CF3、-O-(CH2)aNR R 、NR -(CH2)aNR R 、-NR -(CH2)aOR 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)的取代基取代； [0227] R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； [0228] 或R31和R32可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0229] a选自0至6； [0230] Q选自基团NR5和O； [0231] R5选自H和C1-C6烷基。 [0232] 在本发明的另一方面，根据本发明可用的化合物包括具有式XXIV的那些： [0233] [0234] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中： [0235] R12选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、31 32 氨基、NR R 、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0236] x选自0至2； [0237] 每个R3和R4独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷31 32 31 32 基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR R 、CF3、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0238] R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C3-C7环烷基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； [0239] 或R31和R32可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0240] a选自1至6。 [0241] 在本发明的另一方面，根据本发明可用的化合物包括具有式XXV的那些： [0242] [0243] 或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中： [0244] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环或芳族环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、氧代、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0245] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、-OH、-NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0246] x选自0至3； [0247] R15选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、芳基、杂芳基、杂环和C3-C7环烷基组成的组； [0248] 每个R3和R4独立地选自由H、C1-C8烷基、-CN、卤素、-OH、-O-(C1-C6烷31 32 31 32 基)、-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-NR R 、CF3、-O-(CH2)aNR R 、芳基、C3-C7环烷基、具有多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0249] R31和R32独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组； [0250] 或R31和R32可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素和C1-C6烷基的取代基取代； [0251] a选自1至6。 [0252] 在本发明的其他方面，所述ROCK2抑制剂化合物可以选自2006年3月27日提交的PCT/US2006/011271中公开的ROCK2化合物，通过引用将其全部内容并入本文。因此，所述ROCK2抑制化合物可具有式XXXI： [0253] [0254] 或其药学上可接受的盐，其中： [0255] R1选自由 -O-(CH 2)y-CO2R12、-(CH2)y-C( ＝ O)NR13R14、-O-(CH2)y-杂芳13 14 13 14 基、-O-(CH2)y-环烷基、-O-C(＝O)-(CH2)y-NR R 、-O-(CH2)z-NR R 、-NH-C(＝O)-(CH2) 13 14 15 13 14 y-NR R 、-NH-C(＝O)-X-R 、-NH-(CH2)y-NR R 组成的组； [0256] R12选自由 C 1-C6烷基、-(C 1-C6烷基 )-O-(C 1-C6烷基 )、-(C 1-C6烷16 17 16 17 基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个在一个或多个碳原子处可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0257] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C616 17 16 17 烷基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至 3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0258] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、OH、NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0259] X选自共价键、O、NH和C1-C6烷基； [0260] R15选自由杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、OH、NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0261] 或R15选自-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-(C1-C6烷基)-NR16R17、 [0262] -CO2R18、-O-(CH2)x-CO2R18和-C(＝O)NR16R17； [0263] R16和R17独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C1-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、OH、NH2、CN和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0264] 或R16和R17可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0265] R18选自由H、芳烷基、杂芳基、C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-(C1-C616 17 烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0266] x选自0至6； [0267] y选自0至6； [0268] z选自2至6； [0269] 每个R2独立地选自由低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基和全氟低级烷基组成的组； [0270] 每个R3独立地选自由低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基和全氟低级烷基组成的组； [0271] R4选自 -(CH 2)a-NR43R44、-Y-R42、-O-(CH2)a-CO2R42、-O-(CH2)a-C( ＝ O)43 44 43 44 NR R 、-O-(CH2)a-杂芳基、-O-(CH2)a- 环烷基、-O-C( ＝O)-(CH2)a-NR R 、-O-(CH2) 43 44 43 44 45 43 44 c-NR R 、-NH-C(＝O)-(CH2)a-NR R 、-NH-C(＝O)-Y-R 、-NH-C(＝O)-(CH2)a-NR R ； [0272] R42选自由 C 1-C6烷基、-(C 1-C6烷基 )-O-(C 1-C6烷基 )、-(C 1-C6烷46 47 46 47 基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组，其中的每一个在一个或多个碳原子处可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0273] R43和R44独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C1-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C646 47 46 47 烷基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至 3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0274] 或R43和R44可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0275] Y选自共价键、O、NH和C1-C6烷基； [0276] R45选自由 H、芳基、-(C 1-C6烷基 )-O-(C 1-C6烷基 )、-(C 1-C6烷46 47 48 48 46 47 基)-NR R 、-CO2R 、-O-(CH2)b-CO2R 和-C(＝O)NR R 组成的组， [0277] R46和R47独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C1-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0278] 或R46和R47可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0279] R48选自由H、芳基、芳烷基、杂芳基、C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷46 47 基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0280] a选自0至6； [0281] b选自0至6； [0282] c选自2至6； [0283] R5选自由H、C1-C6烷基、-(CH2)a-C(＝O)-NR53R54、-C(＝O)-(CH2)a-NR53R54、-C(＝55 53 54 O)-X-R 和-C(＝O)-(CH2)a-NR R 组成的组； [0284] R53和R54独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C656 57 56 57 烷基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至 3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0285] 或R53和R54可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0286] R55选自由 H、芳基、-(C 1-C6烷基 )-O-(C 1-C6烷基 )、-(C 1-C6烷56 57 58 58 56 57 基)-NR R 、-CO2R 、-O-(CH2)e-CO2R 和-C(＝O)NR R 组成的组， [0287] R56和R57独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C1-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0288] 或R56和R57可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0289] R58选自由H、芳基、芳烷基、杂芳基、C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷56 57 基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0290] d选自0至6； [0291] e选自0至6； [0292] R6选自由H、C1-C6烷基、-(CH2)r-C(＝O)-NR63R64、-C(＝O)-(CH2)r-NR63R64、-C(＝65 63 64 O)-X-R 和-C(＝O)-(CH2)r-NR R 组成的组； [0293] R63和R64独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C666 67 66 67 烷基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至 3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0294] 或R63和R64可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0295] R65选自由 H、芳基、-(C 1-C6烷基 )-O-(C 1-C6烷基 )、-(C 1-C6烷66 67 68 68 66 67 基)-NR R 、-CO2R 、-O-(CH2)s-CO2R 和-C(＝O)NR R 组成的组， [0296] R66和R67独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C1-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0297] 或R66和R67可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0298] R68选自由H、芳基、芳烷基、杂芳基、C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷66 67 基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0299] r选自0至6； [0300] s选自0至6； [0301] n选自0至4； [0302] m选自0至3；并且 [0303] p选自0至1。 [0304] 在式XXXI的一个实施方案中，R4和R5独立地选自H和C1-C6烷基。在另一个实施4 5 方案中，R和R 是H。 [0305] 在本发明的一个实施方案中，所述式XXXI化合物具有式XXXII： [0306] [0307] 或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、R3、n和m与式I化合物情况相同。 [0308] 在本发明的一个实施方案中，所述式XXXI化合物具有式XXXIII： [0309]1 2 3 [0310] 或其药学上可接受的盐，其中R、R、R、n和m与式I化合物情况相同。 [0311] 在本发明的一个实施方案中，所述式XXXI化合物具有式XXXIV： [0312] [0313] 或其药学上可接受的盐，其中： [0314] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C616 17 16 17 烷基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至 3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0315] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0316] X选自共价键、O、NH和C1-C6烷基； [0317] R16和R17独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0318] 或R16和R17可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0319] 每个R2独立地选自由低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基和全氟低级烷基组成的组； [0320] 每个R3独立地选自由低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基和全氟低级烷基组成的组； [0321] n选自0至4；并且 [0322] m选自0至3。 [0323] 在本发明的一个实施方案中，所述式XXXI化合物具有式XXXIVa： [0324] [0325] 或其药学上可接受的盐，其中： [0326] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C616 17 16 17 烷基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至 3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0327] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代： [0328] R16和R17独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代： [0329] 或R16和R17可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代。 [0330] 在本发明的一个实施方案中，所述式XXXI化合物具有式XXXV： [0331] [0332] 或其药学上可接受的盐，其中： [0333] R12选自由 C 1-C6烷基、-(C 1-C6烷基 )-O-(C 1-C6烷基 )、-(C 1-C6烷16 17 16 17 基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个在一个或多个碳原子处可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代： [0334] 每个R2独立地选自由低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基和全氟低级烷基组成的组； [0335] 每个R3独立地选自由低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基和全氟低级烷基组成的组； [0336] n选自0至4；并且 [0337] m选自0至3。 [0338] 在本发明的一个实施方案中，所述式XXXI化合物具有式XXXVa： [0339] [0340] 或其药学上可接受的盐，其中： [0341] R12选自由 C 1-C6烷基、-(C 1-C6烷基 )-O-(C 1-C6烷基 )、-(C 1-C6烷基)-NR16R17、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR16R17、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个在一个或多个碳原子处可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代。 [0342] 在本发明的另一实施方案中，所述rho激酶抑制剂具有XXXVI： [0343] [0344] 或其药学上可接受的盐，其中： [0345] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C616 17 16 17 烷基)、-(C1-C6烷基)-NR R 、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR R 、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至 3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0346] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0347] R16和R17独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0348] 或R16和R17可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0349] 每个R2独立地选自由低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基和全氟低级烷基组成的组； [0350] 每个R3独立地选自由低级烷基、CN、卤素、羟基、低级烷氧基、氨基和全氟低级烷基组成的组； [0351] n选自0至4；并且 [0352] m选自0至3。 [0353] 在本发明的一个实施方案中，所述式XXXVI化合物具有式XXXVIa： [0354] [0355] 或其药学上可接受的盐，其中： [0356] R13和R14独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、-(C1-C6烷基)-NR16R17、-(C1-C6烷基)-C(＝O)NR16R17、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C7环烷基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0357] 或R13和R14可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、C3-C7环烷基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0358] R16和R17独立地选自由H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、-(C1-C6烷基)-O-(C1-C6烷基)、芳基、芳烷基、杂芳基、C3-C7环烷基、包含多达3个杂原子的三至十二元杂环组成的组，其中的每一个可以任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代； [0359] 或R16和R17可以合起来一起形成具有多达3个杂原子的三至十二元杂环，其任选地被1至3个独立地选自卤素、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、氧代、羟基、氨基、氰基和C1-C3全氟烷基的取代基取代。 [0360] 在本发明的进一步方面，所述式XXXI化合物是SLx-2119： [0361] [0362] 在本发明的进一步方面，所述rho激酶抑制剂选自由以下组成的组： [0363] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺， [0364] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-(2-甲氧基乙基)乙酰胺， [0365] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-(吡啶-3-基)乙酰胺， [0366] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮， [0367] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-1-吗啉代乙酮， [0368] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-甲基乙酰胺， [0369] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-((R)-吡咯烷-3-基)乙酰胺， [0370] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-((S)-吡咯烷-3-基)乙酰胺， [0371] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-((R)-四氢呋喃-3-基)乙酰胺， [0372] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-1-(哌啶-1-基)乙酮， [0373] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-叔丁基乙酰胺， [0374] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-乙基乙酰胺， [0375] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-(氰基甲基)乙酰胺， [0376] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-环丁基乙酰胺， [0377] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-异丁基乙酰胺， [0378] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-(2，2，2-三氟乙基)乙酰胺， [0379] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-环己基乙酰胺， [0380] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-新戊基乙酰胺， [0381] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯氧基)-N-(丙-2-炔基)乙酰胺， [0382] N-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-4-甲基哌嗪-1-甲酰胺，[0383] 3-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-1，1-二甲基脲， [0384] N-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-2-甲氧基乙酰胺， [0385] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯基氨基)-2-氧代乙酸甲酯，[0386] 1-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-3-(2-(二甲基氨基)乙基)脲， [0387] N-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-2-吗啉代乙酰胺，N-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙酰胺，N-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)喹唑啉-2-基)苯基)哌啶-4-甲酰胺，和N-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)-6-(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-2-基)苯基)丁酰胺。 [0388] 在本发明的进一步方面，所述rho激酶抑制剂是： [0389] [0390] [0391] 如本文所使用的术语“杂原子”指除碳或氢以外的任何元素的原子。优选的杂原子是氮、氧和硫。 [0392] 术语“烷基”是指饱和脂族基的基团，包括直链烷基和支链烷基。在优选的实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有10个或更少的碳原子(例如，对于直链而言C1-C10，对于支链而言C3-C10)。类似地，优选的环烷基在其环结构中具有3-10个碳原子，并且更优选在所述环结构中具有3至6个碳原子。 [0393] 除非对碳原子的数量另有指定，如本文中使用的“低级烷基”是指如上定义的烷基，但具有一到六个碳原子，并且更优选一至四个碳原子。类似地，“低级烯基”和“低级炔基”具有类似的链长度(C2-C6)。优选的烷基是低级烷基。在优选的实施方案中，本文中指定的作为烷基的取代基是低级烷基。 [0394] 术语“环烷基”是指在环内具有3至7个碳原子的饱和碳环基。优选的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。 [0395] 如本文中使用的术语“芳烷基”是指被芳基(例如，芳族或杂芳族基)取代的烷基。 [0396] 术语“烯基”和“炔基”是指在长度和可能的取代基上与上述烷基类似的不饱和脂族基，但分别包含至少一个双键或三键。 [0397] 如本文中使用的术语“芳基”包括5-和6-元单环芳族基团，其可以包括零到四个杂原子，例如苯、芘、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等等。在环结构中具有杂原子的那些芳基也可被称为“芳基杂环”、“杂芳族”或“杂芳基”。芳族环可在一个或多个环位置处被如上所述的取代基取代，这样的取代基例如卤素、叠氮化物、烷基、芳烷基、烯基、炔基、环烷基、羟基、烷氧基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰氨基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷硫基、磺酰基、磺酰氨基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN等等。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多元环系统，其中两个邻接环(所述环是“稠合环”)共有两个或更多个碳，其中所述环中的至少一个是芳族的，例如其他环可以是环烷基、环烯基、芳基和/或杂环基。 [0398] 术语“杂环基(heterocyclyl)”或“杂环基(heterocyclic group)”是指3-至10-元环结构，更优选5-或6-元环，其环结构包括一到四个杂原子。杂环也可以是多元环。杂环基包括，例如噻吩、噻蒽、呋喃、吡喃、异苯并呋喃、色烯、呫吨、吩噁嗪、吡咯、咪唑、吡唑、异噻唑、异噁唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲嗪、异吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、嘧啶、菲咯啉、吩嗪、吩砷嗪、吩噻嗪、呋咱、吩噁嗪、吡咯烷、氧杂环戊烷、硫杂环戊烷、噁唑、哌啶、哌嗪、吗啉、内酯、内酰胺如氮杂环丁酮和吡咯烷酮、磺内酰胺、磺内酯等等。所述杂环可以在一个或多个位置处被如上所述的取代基取代，这样的取代基例如卤素、烷基、芳烷基、烯基、炔基、环烷基、羟基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰氨基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷硫基、磺酰基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN等等。 [0399] 术语“多环基(polycyclyl)”或“多环基(polycyclic group)”是指两个或更多个环(例如，环烷基、环烯基、芳基和/或杂环基)，其中两个邻接环共有两个或更多个碳，例如，所述环是“稠合环”。通过非毗连原子结合的环被称为“桥连”环。所述多环基的每个环可以被如上所述的取代基取代，这样的取代基例如卤素、烷基、芳烷基、烯基、炔基、环烷基、羟基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰氨基、膦酸酯、次膦酸酯、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷硫基、磺酰基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN等等。 [0400] 如本文中使用的术语“硝基”是指-NO2。术语“卤素(halogen)”或“卤素(halogen)”表示-F、-Cl、-Br或-I。术语“羟基”是指-OH。 [0401] 术语“胺”和“氨基”是指未取代和取代的胺，例如，可以由以下通式表示的部分： [0402] [0403] 其中R、R′和R″各自独立地代表H、烷基、烯基、炔基、芳烷基、芳基和杂环基，并且最优选H或低级烷基。 [0404] 如本文中使用的术语“烷氧基(alkoxyl)”或“烷氧基(alkoxy)”是指具有连接的氧基的如上定义的烷基。代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。术语低级烷氧基是指具有1至6个碳原子的烷氧基。 [0405] 如本文中使用的术语“氧代”是指具有与另一个原子、特别是与碳或硫的双键的氧原子。 [0406] 如本文所用，每个表述的定义，例如烷基、m、n、R等，当它在任何结构中出现一次以上时，旨在独立于它另外在相同结构中的定义。 [0407] 应该理解的是，“取代的”、“取代”或“被......取代”包括这样的取代是根据被取代原子和取代基所允许的化合价的暗含条件，并且该取代产生稳定的化合物，例如，不会自发地进行转化例如重排、环化、消除等。 [0408] 如本文所用，术语“取代的”被设想包括有机化合物的所有允许的取代基。在一个广泛的方面，允许的取代基包括有机化合物的非环状和环状、支链和非支链、碳环和杂环、芳族和非芳族的取代基。示例性的取代基包括，例如，如上文所述的那些。 [0409] 本发明的某些化合物可以特定的几何或立体异构形式存在。本发明涵盖所有这样的化合物，包括其顺式和反式异构体、R-和S-对映体、非对映体、其外消旋混合物及它们的其他混合物，均落入本发明的范围之内。另外的不对称碳原子可存在于取代基中，如烷基。所有这样的异构体以及它们的混合物都包括在本发明中。 [0410] 本发明化合物的某些实施方案可含有碱性官能团，如氨基或烷氨基，并因此能够形成具有药学上可接受的酸的药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”在上下文中是指本发明化合物的相对无毒的无机和有机酸加成盐。代表性的盐包括HCl盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐(napthylate)和甲磺酸盐等。(参见，例如，Berge等人，“Pharmaceutical Salts”，J.Pharm.Sci.(1977)66：1-19，其通过引用并入本文)。 [0411] 在其他情况下，本发明的化合物可含有一个或多个酸性官能团，并因此能够形成具有药学上可接受的碱的药学上可接受的盐。代表性的盐包括碱金属或碱土金属盐，例如锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐等。可用于碱加成盐的形成的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。(参见，例如，Berge等人，同上)。 [0412] 在一个方面，本发明提供了是Rho激酶抑制剂的式I化合物。Rho激酶(ROCK)，一种丝氨酸/苏氨酸激酶，作为小GTP结合蛋白Rho的靶蛋白，并且是许多细胞功能，包括焦2+ 点粘连、运动、平滑肌收缩和胞质分裂的重要介质。在平滑肌中，ROCK在Ca 致敏和血管张力的控制中起重要作用。它调制球蛋白II的肌球蛋白II轻链的磷酸化水平，主要是通过 2+ 肌球蛋白磷酸酶的抑制，并有助于平滑肌收缩中的激动剂诱导的Ca 致敏。 [0413] Rho激酶以两种形式：ROCK 1(ROCKβ；p160-ROCK)和ROCK2(ROCKα)存在。在一些实施方案中，式I化合物选择性地抑制ROCK1。在一些实施方案中，式I化合物选择性地抑制ROCK2。在一些实施方案中，式I化合物相对于ROCK1和ROCK2的抑制无选择性。 [0414] 确定激酶抑制的方法是现有技术中公知的。例如，酶的激酶活性和试验化合物的抑制能力可通过测定底物的酶特异性磷酸化来确定。可使用商业测定和试剂盒。例如，激酶抑制可使用测定(Molecular Devices)来确定。该测定方法包括使用荧光标记的肽底物。通过目标激酶使该标记的肽磷酸化有助于经由磷酸基团和三价金属之间的特定的高亲和相互作用将所述肽结合到基于所述三价金属的纳米颗粒。与纳米颗粒的接近导致增加的荧光偏振。通过激酶抑制剂抑制该激酶防止了底物的磷酸化，从而限制了荧光标记的底物结合到纳米颗粒。这样的测定可以与微孔测定形式相容，实现了同时确定多种化合物的IC50。 [0415] 在另一方面，本发明提供了用于疾病治疗的血管生成抑制剂。在某些实施方案中，采用了新颖的VEGFR2抗体或这种抗体的抗原结合片段，其可有效地抑制VEGFR2依赖性信号转导。如本文所用，“抑制受体”是指使用于转导信号的受体的内在激酶活性减少和/或失活。用于VEGFR2抑制的可靠测定是受体磷酸化的减少。 [0416] 本发明不受VEGFR2抑制的任何特定机制的限制。一种抗体所遵循的机制不一定与另一种抗体所遵循的基质相同。一些可能的机制包括防止VEGF配体结合到VEGFR2的细胞外结合域，以及防止受体的二聚或低聚。但是，不可能排除其他机制。 [0417] 抗体是识别并结合到特定的抗原或物质的蛋白质。在优选的实施方案中，本发明的抗体至少如天然配体般有力地结合KDR。亲和力，由抗原与抗体的解离平衡常数(Kd)表示，衡量着抗原决定簇和抗体结合位点之间的结合强度。亲合力是抗体与其抗原之间的结合强度的量度。亲合力既与抗体决定簇和抗体上的抗原结合位点之间的亲和力有关，又和每个抗体的结合位点的数量(化合价)有关。例如，一价抗体具有对特定表位的一个结合5 11 4 位点。K(解离常数Kd的倒数)的典型值是10 -10 升/mol。任何低于10 升/mol的K被认为是表示非特异性结合。 [0418] 本发明的抗体抑制VEGFR2的活化。VEGFR2抑制的一个衡量是受体的酪氨酸激酶活性降低。酪氨酸激酶抑制可使用公知的方法，例如测量受体的自磷酸化水平来确定。VEGFR2的抑制还可以通过天然或合成的VEGFR2底物和VEGFR2信号转导通路的其他组分的磷酸化事件的抑制或调节来观察。可以检测磷酸化，例如，在ELISA测定中或蛋白质印迹上使用特异于磷酸酪氨酸的抗体。一些用于酪氨酸激酶活性的测定被描述在Panek等人，J.Pharmacol.Exp.Thera.，283：1433-44(1997)以及Batley等人，Life Sci.，62： 143-50(1998)中。 [0419] 还可以使用体内测定。例如，受体酪氨酸激酶抑制可以在存在和不存在抑制剂下通过使用被受体配体刺激的细胞系的有丝分裂测定来观察。例如，被VEGF刺激的HUVEC细胞(ATCC)可用于测定VEGFR抑制。另一种方法涉及测试表达VEGF的肿瘤细胞的生长抑制，使用例如被注射到小鼠中的人肿瘤细胞。参见美国专利第6,365,157号(Rockwell等人)。 [0420] 本发明提供了抗-VEGFR2抗体，包括编码此类抗体的核酸和包含此类抗体的组合物。在一个实施方案中，本发明提供了包含CDR-1H、CDR-2H和CDR-3H序列的分离的抗体重链可变域，其中： [0421] (i)所述CDR-1H序列是GFTFSWYX1MX2(SEQ ID NO：185)，其中X1是V或I，X2是G或L， [0422] (ii)所述CDR-2H序列是SIX1X2SGGX3TX4YADSVKG(SEQ ID NO：186)，其中X1是Y或G，X2是P或S，X3是A或F，X4是N或D，并且 [0423] (iii)所述CDR-3H序列是GNYFDY(SEQ ID NO：3)或GLAAPRS(SEQ ID NO：11)。 [0424] 在一个实施方案中，本发明提供了包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的分离的轻链可变域，其中 [0425] (i)所述CDR-L1序列是X1GX2X3LX4X5X6X7X8S(SEQ ID NO：187)，其中X1是S、Q或T，X2是D、E或Q，X3是K、S、N、I或A，X4是G或R，X5是D、S、H、E或N，X6是E、Y、Q、R或N，X7是Y、F或S，并且X8是A或S或SGSX1SNX2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO：188)，其中X1是S或T，X2是I或L，X3是E或G，X4是T、S或N，X5是N或Y，X6是T、P、A或Y，X7是V或L，并且X8是N、I或Y或X1GX2SX3DX4GX5YDYVS(SEQ ID NO：189)，其中X1是A或T，X2是S或T，X3是H、S或N，X4是I或V，并且X5是S或A， [0426] (ii)所述CDR-L2序列是X1X2X3X4X5PS(SEQ ID NO：190)，其中X1是Q、D、T、Y、S或A，X2是D、N、S、T或V，X3是D、N、S、T或Y，X4是Q、K、N或L，并且X5是R或L，并且[0427] (iii)其中所述CDR-L3序列是QX1WX2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO：191)，其中X1是A或T，X2是D或G，X3是R或无氨基酸，X4是S、F或N，X5是S、T或N，X6是S、T或P，X7是A、V、L、I或Y，并且X8是V或L或AX1WDDX2LX3X4X5X6(SEQ ID NO：192)，其中X1是A、S或T，X2是N或S，X3是N、I或G，X4是G或S，X5是P、W或V，并且X6是V或L或MYSTITX1LL(SEQ ID NO：193)，其中X1是A或T。 [0428] 在一个实施方案中，本发明提供了包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的分离的轻链可变域，其中 [0429] (i)所述CDR-L1序列是RASX1X2X3X4X5X6X7YX8X9(SEQ ID NO：194)，其中X1是Q、E或H，X2是S、R或N，X3是V、I或L，X4是S、R、G或N，X5是S或N，X6是S、N、W或D，X7是G或无氨基酸，X8是L或F，并且X9是A、G、M或S， [0430] (ii)所述CDR-L2序列是GASX1RAT(SEQ ID NO：195)，其中X1是S、T、I或N，并且[0431] (iii)所述CDR-L3序列是QQX1X2X3X4X5X6X7X8(SEQ ID NO：196)，其中X1是F或Y，X2是D、G或Y，X3是S、T或N，X4是S、L或W，X5是P或无氨基酸，X6是P或T，X7是L、I、V、P、W或Y，并且X8是T或S。 [0432] 在本发明的一个实施方案中，提供了包含重链可变域的抗体，所述重链可变域包含如上所述的轻链可变域和重链可变域CDR序列中的一个、两个、三个、四个、五个或六个。 [0433] 提供了VEGFR2结合抗体序列的非限制性实例。如本文所述，从人Fab噬菌体展示文库，鉴定出两种中和抗体结合到人VEGFR2，阻断配体VEGFA到hVEGFR2的结合，并抑制由VEGFA刺激的VEGFR2磷酸化和下游信号转导。表1表示所述抗体的CDR氨基酸序列和抗体可变域。Mab 101和Mab 102的Kd分别为约6.6mM和1.7nM。 [0434] [0435] Mab 101的重链通过κ轻链基因(κ-文库)和λ轻链基因(λ-文库)重组。通过针对人VEGFR2和小鼠VEGFR2两者来淘选λ-文库发现20个独特的λ轻链变体。通过针对人VEGFR2和小鼠VEGFR2两者来淘选κ-文库发现22个独特的κ轻链变体。表2指示CDR的氨基酸序列和轻链的可变域。Mab 105、106和107的KD增加了约10倍(分别为0.24nM、0.22nM和0.12nM)。 [0436] [0437] 本发明提供了分离的VEGFR2抗体和其VEGFR2结合片段，所述抗体包含选自于表1和表2中所列序列的一个、两个或三个重链CDR和一个、两个或三个轻链CDR。在本发明的抗体中，当多于一个的CDR选自表1和表2中所示的序列时，不同的CDR无需选自那些表中所示的相同单克隆抗体，但可以选自表中所示的两个或更多个抗体可变域。具体实施方案包括，但不限于下面的内容。在本发明的一个实施方案中，所述分离的VEGFR2抗体包含一个、两个或三个具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的重链CDR。在本发明的一个实施方案中，所述抗体包含一个、两个或三个具有SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7的轻链CDR。在另一个实施方案中，所述抗体包含一个、两个或三个具有表1或表 2中所示序列的轻链CDR。非限制性实例包括轻链可变域，所述轻链可变域包含SEQ ID NO： 25、SEQ ID NO：26和SEQ ID NO：27中的一个或多个，SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30和SEQ ID NO：31中的一个或多个，或SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34和SEQ ID NO：35中的一个或多个。在某些实施方案中，所述VEGFR2抗体包含重链可变域，所述重链可变域包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：12。在某些实施方案中，所述VEGFR2抗体包含轻链可变域，所述轻链可变域包含SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：31或SEQ ID NO：35。在某些实施方案中，所述抗体包含上述重链可变域之一和上述轻链可变域之一。在某些实施方案中，所述VEGFR2抗体或其结合片段包含一个或多个CDR或一个或多个具有与所述CDR和列于表1或表2中的可变域序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列的可变域。 [0438] “同一性”是指考虑到空位数和每个空位的长度时，由两个氨基酸或核酸序列共享的相同位置的数量或百分比，其需要被引入用于所述两个序列的最佳比对。“基本上同一的”是指一种氨基酸序列，其差别仅在于保守性氨基酸置换，例如，一个氨基酸置换另一个相同类别的氨基酸(例如，缬氨酸置换甘氨酸，精氨酸置换赖氨酸，等等)，或一个或多个非保守性置换、缺失或设在不破坏蛋白质的功能的氨基酸序列的位置处的插入。优选地，所述氨基酸序列与另一氨基酸序列具有至少80％、更优选至少85％、并且最优选至少90％的相似性。用于确定序列相似性的方法和计算机程序是公开可用的，包括但不限于GCG程序包(Devereux等人，Nucleic Acids Research 12：387，1984)，BLASTP，BLASTN，FASTA(Altschul等人，J.Mol.Biol.215：403(1990)，和ALIGN程序(版本2.0)。众所周知的Smith Waterman 算法也可以用于确定相似性。BLAST程序可从NCBI和其他来源中公众可得(BLAST Manual，Altschul等人，NCBI NLM NIH，Bethesda，Md.20894；http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/中的BLAST 2.0)。在比较序列中，这些方法解释了各种置换、缺失和其他修饰。保守性置换通常包括在以下组内的置换：甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；以及苯丙氨酸、酪氨酸。 [0439] 本发明的某些实施方案涉及使用VEGFR2结合抗体片段。Fv是包含包括全部六个高变环(CDR)的完整的重链和轻链可变域的最小片段。因缺乏恒定域，故所述可变域为非共价相关联。可使用允许VH和VL域缔合以形成抗原结合位点的连接子将所述重链和轻链连接成单个多肽链(“单链Fv”或“scFv”)。在本发明的一个实施方案中，所述连接子是(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)3。因为scFv片段缺乏完整抗体的恒定域，所以它们比完整抗体要小得多。scFv片段也不含与其他生物分子的正常重链恒定域的相互作用，这可能在某些实施方案中是不希望的。 [0440] 也可使用含有VH、VL和任选的CL、CHl或其他恒定域的抗体片段。由木瓜蛋白酶消化产生的抗体的一价片段被称为Fab并缺乏重链铰链区。通过胃蛋白酶消化产生的片段被称为的F(ab′)2，保留了所述重链铰链并且是二价的。这样的片段也可重组产生。许多其他有用的抗原结合抗体片段是本领域已知的，并且包括但不限于双链抗体、三链抗体、单域抗体以及其他一价和多价形式。 [0441] 本发明还提供了多价抗原结合蛋白，其可以是但不限于抗体、抗体的抗原结合片段以及含有抗体的全部或一部分抗原结合部分的蛋白质的形式。多价抗原结合蛋白可以是单特异性、双特异性或多特异性的。术语特异性是指特定的分子可以结合的不同类型的抗原决定簇的数量。如果免疫球蛋白分子结合于仅一种类型的抗原决定簇，则所述免疫球蛋白分子是单特异性的。如果免疫球蛋白分子结合于不同类型的抗原决定簇，则所述免疫球蛋白分子是多特异性的。 [0442] 例如，双特异性多价单链抗体实现了两种不同类型的表位的识别。两个表位可以在相同的抗原(例如，VEGFR2)上。或者，一个表位可以在一种抗原(例如，VEGFR2)上，并且第二表位在不同的抗原上。 [0443] 在一个实施方案中，多价单链抗体包括连接到可变重链片段(类似于scFv)的可变轻链片段，所述可变重链片段进一步通过另一肽连接子连接到至少一个其他抗原结合域。典型地，所述肽连接子由约15个氨基酸残基组成。在一个优选的实施方案中，VL域和VH域的数量是相同的。例如，二价单链抗体可以按如下表示：VL-L1-VH-L2-VL-L3-VH或VL-L1-VH-L2-VH-L3-VL或VH-L1-VL-L2-VH-L3-VL或VH-L1-VL-L2-VL-L3-VH。为三价或更高价的多价单链抗体具有一个或多个通过另外的肽连接子连接到二价单链抗体的抗体片段。三价单链抗体的一个实例是：VL-L1-VH-L2-VL-LI-VH-L2-VL-LI-VH。 [0444] 可以将两个单链抗体组合以形成双链抗体，也称为二价二聚体。双链抗体具有两条链。所述双链抗体的每条链包括通过具有约5-10个氨基酸残基的短连接子连接到VL域的VH域，例如(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)、(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)2。这样的连接子短至足以防止相同链上的域之间的链内配对，从而驱动不同链上的互补域之间的链间配对，并重新创建两个抗原结合位点。双链抗体结构是刚性且紧凑的，其中抗原结合位点位于分子的两个相对末端。双链抗体可能是单特异性或双特异性的。 [0445] 可以将三个单链抗体结合以形成三链抗体，也被称为三价三聚体。在一些实施方案中，采用直接融合至VH或VL域的氨基末端的VH或VL域的羧基末端构建三链抗体，即，无任何连接子序列。所述三链抗体具有三个Fv头，其中多肽被排列成环状、头对尾的模式。所述三链抗体分子的可能构象是平面的，其中三个结合位点以彼此呈120度的角度位于一个平面中。三链抗体可以是单特异性、双特异性或三特异性的。 [0446] 应当理解，本发明的抗-VEGFR2抗体，其中为了预防或治疗的目的而用于哺乳动物，将以另外包含药学上可接受的载体的组合物的形式施用。合适的药学上可接受的载体包括，例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等中的一种或多种合，以及它们的组合。药学上可接受的载体可以进一步包括少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增强了抗体的货架期或效力。 [0447] 在本发明的方法中，向需要其的哺乳动物施用治疗有效量的本发明的抗体。本文所用的术语“施用”是指通过可实现所寻求结果的任何方法将本发明的抗体递送至哺乳动物。它们可以例如静脉内或肌内施用。尽管本发明的人抗体对于施用于人是特别有用的，但是它们也可被施用于其他哺乳动物。如本文所用的术语“哺乳动物”是指包括但不限于人、实验动物、家庭宠物和农场动物。“治疗有效量”是指当本发明的抗体被施用于哺乳动物时，有效地产生期望的治疗效果，例如抑制激酶活性的本发明的抗体的量。 [0448] 本发明的化合物可以有利地与第二药剂一起施用于需要其的患者。例如，在某些实施方案中，本发明的rho激酶抑制剂与血管生成抑制剂一起施用。在某些实施方案中，VEGFR2抑制剂与抗炎剂或免疫抑制剂一起施用。在某些实施方案中，VEGFR2抑制剂与抗肿瘤剂一起施用。 [0449] 在某些实施方案中，Rho激酶抑制剂和血管生成抑制剂被施用于需要其的受试者。在某些实施方案中，所述Rho激酶抑制剂是式I化合物。在一些实施方案中，相比于ROCK2，所述Rho激酶抑制剂对于ROCK1是选择性的。在某些实施方案中，相比于ROCK1，所述Rho激酶抑制剂是ROCK2选择性的。在一些实施方案中，所述ROCK2选择性抑制剂是 [0450] [0451] 血管生成抑制剂包括抑制新血管生长的任何物质。例如，血管生成抑制剂包括VEGF、PlGF的拮抗剂和VEGF受体，以及本文公开的抗体。抑制剂是指生物过程的抑制剂或靶的抑制剂。在这方面，血管生成抑制剂是减少血管生成的药剂。Rho激酶抑制剂是一种诸如ATP结合的竞争性抑制剂的药剂，其抑制Rho激酶的活性或阻断Rho激酶的相互作用。拮抗剂是指降低或抑制与靶相关联的细胞中的活性或功能的物质。例如，VEGF拮抗剂降低或阻断与VEGF相关联的细胞中的功能。VEGF拮抗剂可作用于VEGF，通过结合到VEGF以及阻断至其受体的结合，或可作用于参与了VEGF介导的信号转导的另一细胞组分。类似地，VEGFR2拮抗剂是一种药剂，其通过结合到VEGFR2和阻断配体结合或与VEGFR2底物的相互作用降低或阻断VEGF2介导的信号转导，或作用于另一细胞组分以减少或阻断VEGFR2介导的信号转导。因此，血管生成抑制剂包括本发明的新颖的抗-VEGFR2抗体和但不限于VEGF、VEGFR1、VEGFR2、PDGF、PDGFR-β、神经毡蛋白-1(NRP1)的拮抗剂和补体。 [0452] 抗肿瘤剂包括细胞毒性化学治疗剂，靶向小分子和生物分子，和辐射。在本发明的某些实施方案中，本发明的抗-VEGFR2抗体与伊立替康、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、紫杉醇或放疗一起施用。 [0453] 抗炎剂和免疫抑制剂包括类固醇药物，如糖皮质激素(例如，地塞米松)、FK506(他克莫司)、环孢素、芬戈莫德、干扰素如IFNβ或IFNγ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)结合蛋白如英夫利昔单抗(Remicade)、依那西普(Enbrel)或阿达木单抗(Humira)和霉酚酸。 [0454] 当rho激酶抑制剂与第二药剂一起施用时，所述rho激酶抑制剂和所述第二药剂可以依次或伴随地施用。依次地意味着将一种药剂施用一段时间，然后施用第二药剂，在此之后可以施用所述第一药剂。当药剂被依次施用时，水平或一种药剂可能在施用所述第二药剂时未被保持在治疗有效水平，反之亦然。伴随地意味着所述第一药剂和第二药剂根据使两种药剂保持在基本上治疗有效的水平的方案施用，即使不是同时施用所述药剂。每个药剂可以按单次或多次剂量施用，并且所述剂量可以按任何方案施用，所述方案包括但不限于每日两次、每日一次、每周一次、每两周一次和每月一次。 [0455] 本发明还包括辅助施用。辅助施用意味着除了已被施用以治疗疾病或疾病症状的第一药剂之外，将第二药剂施用于患者。在一些实施方案中，辅助施用包括将第二药剂施用于患者，其中所述第一药剂的施用没有治疗或没有足够地治疗，所述疾病或疾病症状。在其他实施方案中，辅助施用包括将所述第二药剂施用于患者，所述患者的疾病已经通过第一药剂的施用得到了有效治疗。 [0456] 任一药剂都可以辅助地施用。在某些实施方案中，将rho激酶抑制剂施用于已接收第二药剂的患者。在其他实施方案中，将第二药剂施用于已接收rho激酶抑制剂的患者。在一些实施方案中，将VEGF拮抗剂与第二药剂一起施用。在一些实施方案中，施用所述第一药剂和第二药剂的效果是协同的。在一些实施方案中，相比于单独的药剂的施用，所述第一药剂和第二药剂的施用防止了复发或延长了复发之前的时间。在一些实施方案中，所述第一药剂和第二药剂的施用允许减少剂量和/或减少所述第一药剂和第二药剂的施用频率。在其他实施方案中，将第二药剂施用于已接收所述VEGF拮抗剂的患者。 [0457] 本发明提供了用于治疗眼部病症的方法和化合物。在某些实施方案中，所述眼部病症的特征为具有血管生成组分。过多的血管生成出现在诸如癌症、糖尿病性失明、年龄相关性黄斑变性、类风湿关节炎、牛皮癣和多于70种的其他病况的疾病中。在这些病况中，新血管供养病变组织，破坏正常组织，并且在癌症的情况下，新血管允许肿瘤细胞逃逸进入循环并驻扎在其他器官中(肿瘤转移)。当病变细胞产生大量异常的血管生长因子时出现了过多的血管生成，压倒了天然血管生成抑制剂的作用。根据本发明，通过施用Rho激酶抑制剂、优选ROCK2选择性Rho激酶抑制剂和血管生成抑制剂来治疗这样的病症。 [0458] 在一个实施方案中，本发明提供了治疗以“干”和“湿”的形式出现的年龄相关性黄斑变性(AMD)的方法。“湿”形式的AMD导致因异常血管生长(新血管形成)产生的视敏力损失。来自这些视网膜血管的出血、渗漏以及疤痕形成最终导致受光体的不可逆损伤。干形式由所述视网膜色素上皮细胞层的萎缩引起，这通过眼睛的中心部分中的受光体(视杆细胞和视锥细胞)的损失导致了视敏力损失。在另一个实施方案中，本发明提供了治疗脉络膜新生血管形成(CNV)的方法。脉络膜新生血管形成是一个其中新血管穿过布鲁赫(Bruch)膜在脉络膜中生长并侵入视网膜下的空间的过程，并且是一种除其他原因以外的年龄相关性黄斑变性、近视和眼外伤的症状。在另一个实施方案中，本发明提供了治疗糖尿病性黄斑水肿(DME)的方法。在另一个实施方案中，本发明提供了治疗继发于视网膜分支静脉阻塞(BRVO)或视网膜中央静脉阻塞(CRVO)的黄斑水肿的方法。在其他实施方案中，所述待治疗的疾病包括但不限于感染性和非感染性的视网膜新生血管形成、感染性和非感染性的角膜新生血管形成、虹膜新血管形成、葡萄膜炎、新生血管性青光眼和早产儿视网膜炎(ROP)。治疗方法可以是预防性的，从而在角膜移植后避免角膜新生血管，或调节小梁切除术中的伤口愈合过程。 [0459] 在一个这样的实施方案中，疾病或病症是AMD，并向需要治疗AMD的受试者施用对治疗AMD有效的量的ROCK2抑制剂。在另一个实施方案中，向所述受试者施用对治疗AMD有效的量的ROCK2抑制剂和血管生成抑制剂。在一些实施方案中，所述血管生成抑制剂是VEGFR2拮抗剂。在某些这样的实施方案中，VEGFR2拮抗剂结合到VEGF。在其他这样的实施方案中，所述VEGFR2拮抗剂结合到VEGFR2。这样的VEGFR2结合抑制剂包括结合到VEGFR2的细胞内域的药剂，包括但不限于抗体和其VEGFR2结合片段，以及与VEGFR2的细胞外域相互作用并阻断VEGFR2依赖性信号转导的活化的药剂。VEGFR2拮抗剂还包括与其他细胞组分相互作用以阻断VEGFR2依赖性信号转导的药剂。在本发明的其他实施方案中，上面指出的眼部疾病和病症被类似地处理。 [0460] 根据本发明，将ROCK抑制剂和血管生成抑制剂以对治疗或预防特征为过多血管生成有效的量施用于受试者。这样的病况，涉及例如血管形成和/或炎症，包括动脉粥样硬化、类风湿关节炎(RA)、血管瘤、血管纤维瘤和牛皮癣。血管生成疾病的其他非限制性实例是早产儿视网膜炎(晶状体后纤维组织形成)、角膜移植片排斥、角膜新生血管形成相关的屈光手术的并发症、角膜新生血管形成相关的隐形眼镜并发症、角膜新生血管形成相关的翼状胬肉和复发性翼状胬肉、角膜溃疡病和非特异性眼表疾病、胰岛素依赖型糖尿病、多发性硬化症、重症肌无力、克罗恩氏病、自身免疫性肾炎、原发性胆汁性肝硬化、急性胰腺炎、同种异体移植排斥反应、变应性炎症、接触性皮炎和迟发性超敏反应、炎性肠道疾病、败血性休克、骨质疏松症、骨关节炎、由神经元炎症引起的认知缺陷、Osler-Weber综合征、再狭窄和真菌、寄生虫或病毒感染，包括巨细胞病毒感染。 [0461] VEGF结合剂的非限制性实例包括VEGF抗体和VEGF陷阱(即，VEGF受体的配体结合域)。抗体的两个实例(包括VEGF结合抗体片段)是贝伐单抗(Avastin)(一种结合到VEGF-A的抗体)和兰尼单抗(Lucentis)(一种来自于贝伐单抗的Fab)。在一般情况下，VEGF陷阱是包含一种或多种VEGF受体蛋白的VEGF结合域的蛋白质。VEGF-陷阱包括但不限于可溶性VEGFR-1、可溶性神经毡蛋白-1(NRP1)、可溶性VEGFR-3(其结合VEGF-C和VEGF-D)和阿柏西普(Zaltrap；Eyelea；VEGF陷阱R1R2)，包括融合至人IgG1的恒定域(Fc)的人血管内皮生长因子受体VEGFR1和VEGFR2的细胞外域的片段。康柏西普(KH902)是包含融合至人IgG1的Fc部分的VEGFR-1(Flt-1)的细胞外域2和VEGFR-2(KDR)的细胞外域3、4的融合蛋白。包含各种组合的KDR和FLT-1Ig-样域的若干个VEGF陷阱被描述在美国专利8,216,575中。DARPin(为设计的锚蛋白重复蛋白(designed ankyrin repeat protein)的首字母缩写)是通常表现出高度特异性和高亲和力的靶蛋白结合的被遗传工程化的抗体模拟蛋白质。 MP0112是一种血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂，并已进入用于治疗湿黄斑变性和糖尿病性黄斑水肿的临床试验。 [0462] 根据本发明，VEGF表达可被靶向。例如，VEGF抑制剂PTC299通过选择性结合VEGF信使RNA(mRNA)的5′-和3′-非翻译区(UTR)后转录地靶向VEGF，从而防止VEGF的翻译。哌加他尼(Macugen)是一种针对VEGF-165的RNA适体。 [0463] 结合到VEGFR2的细胞外域的药剂的非限制性实例包括本文所公开的新颖的VEGFR2抗体和VEGFR2结合片段。其他实例是雷莫卢单抗(IMC-1121B)、IMC-1C11和CDP791(一种工程化的抗体片段，其包含人源化抗体的两个抗原结合片段(二-Fab)在它们的铰链域处共价交联以及连接至交联剂的聚乙二醇。 [0464] 胎盘生长因子(PlGF的)已牵涉病理性血管生成。PlGF结构上与VEGF相关并且也是用于VEGFR-1的配体。因此，包括VEGFR1的细胞外域(参见上文)的VEGF陷阱可用于靶向PlGF。 [0465] PDGF由四条形成同型二聚体PDGF-AA、BB、CC和DD以及异型二聚体PDGF-AB的多肽链组成。所述PDGF受体(PDGFR)-α和-β介导PDGF功能。具体地讲，PDGFRα结合到PDGF-AA、-BB、-AB和-CC，而PDGFRβ与-BB和-DD相互作用。PDGF结合剂的非限制性实例TM包括抗-PDGF抗体和PDGF陷阱。靶向PDGF的药剂包括Fovista (E10030，Ophthotech)、聚乙二醇化的适体靶向PDGF-B和AX102(Sennino等人，2007，Cancer Res.75(15)：7359-67)、结合PDGF-B的DNA寡核苷酸适体。 [0466] 靶向PDGF受体的药剂包括雷莫卢单抗(IMC-3G3，人IgG1)(一种抗PDGFRα抗体)、克莱拉尼(crenolanib)(CP-868596)(一种PDGFRα(IC50＝0.9nM)和PDGFRβ(IC50＝1.8nM)的选择性抑制剂)和尼罗替尼( )(一种PDGFRα和PDGFRβ以及其他酪氨酸激酶的抑制剂)。 [0467] 血管生成抑制剂包括阻断由例如VEGF、PDGF、VEGF或PDGF受体的配体或补体介导的信号转导的细胞内药剂。抑制血管生成抑制剂的细胞内药剂包括以下内容，但不限于此。舒尼替尼(Sutent；SU11248)是VEGFR1-VEGFR3、PDGFRα和PDGFRβ、干细胞因子受体(cKIT)、Flt-3和集落刺激因子-1受体(CsF-1R)的泛特异性小分子抑制剂。阿西替尼(AG013736；Inlyta)是另一种抑制VEGFR-1-VEGFR-3、PDGFR和cKIT的小分子酪氨酸激酶抑制剂。西地尼布(AZD2171)是VEGFR-1-VEGFR-3、PDGFRβ和cKIT的抑制剂。索拉非尼(Nexavar)是另一种包括VEGFR、PDGFR和Raf激酶在内的若干种酪氨酸蛋白激酶的小分子抑制剂。帕唑帕尼(Votrient；(GW786034)抑制VEGFR-1、-2和-3、cKIT和PDGFR。Foretinib(GSK1363089；XL880)抑制VEGFR2和MET。CP-547632是一种作为VEGFR-2和碱性成纤维细胞生长因子(FGF)激酶的强效抑制剂。E-3810((6-(7-((1-氨基环丙基)甲氧基)-6-甲氧基喹啉-4-基氧基)-N-甲基-1-萘甲酰胺)抑制纳mol范围内的VEGFR-1、-2和-3及FGFR-1和-2激酶。布立尼布(BMS-582664)是一种也抑制FGF受体信号传导的VEGFR-2抑制剂。CT-322(Adnectin)是一种基于人纤连蛋白域并结合到且抑制VEGFR2的活化的小蛋白。凡德他尼(Caprelas；Zactima；ZD6474)是VEGFR2、EGFR和RET酪氨酸激酶的抑制剂。X-82(Xcovery)是一种通过生长因子受体VEGFR和PDGFR信号传导的小分子吲哚酮抑制剂。 [0468] 在另一个实施方案中，眼部疾病为青光眼。存在可以被治疗的若干种类型的青光眼，包括但不限于下列类型。最常见的两种，原发性开角型青光眼和急性闭角型青光眼的特征是高眼压。色素性青光眼、新生血管性青光眼和先天性青光眼的特征也是减少的流体流出和高眼内压(IOP)。正常眼压性青光眼被认为是因另一种机制引起，尤其是向视神经的血液流动不畅。继发性青光眼可能由损伤、感染、炎症、肿瘤或白内障引起，并且还与长期使用类固醇、全身性高血压、糖尿病性视网膜病和视网膜中央静脉阻塞有关。 [0469] 本发明提供了一种治疗青光眼的方法，所述方法包括向需要其的患者施用有效量的Rho激酶抑制剂。在某些实施方案中，所述Rho激酶抑制剂是式I-XXV中任何一项的化合物。所述Rho激酶抑制剂可以是相对于ROCK1和ROCK2非选择性的，或者可以是选择性ROCK1抑制剂或选择性ROCK2抑制剂。通常，优选所述抑制剂抑制ROCK1，即，抑制ROCK1和ROCK2两者或对ROCK1为选择性的。在本发明的上下文中，选择性是指，所述抑制剂表现出针对一种Rho激酶的IC50比针对另一种Rho激酶的IC50低至少2倍、5倍、10倍或25倍。如上所述，存在若干种类型的青光眼，对ROCK1或ROCK2为选择性的化合物可以有利于治疗某些类型。另外，具有新血管组分的某些青光眼可以受益于除了ROCK抑制剂之外的血管生成抑制剂的施用。 [0470] 根据本发明，可以在相同的药物组合物或在单独的药物组合物中将ROCK2抑制剂和所述血管生成抑制剂施用于受试者。可以通过相同或不同的施用途径将所述药剂施用于受试者。 [0471] 在本发明的一个实施方案中，所述ROCK2抑制剂和血管生成抑制剂都是小分子并通过口服施用。在一个优选的实施方案中，将所述药剂每天施用一次。当所述药剂按相同的方案施用时，所述ROCK2抑制剂和血管生成抑制剂可以在相同的剂型中进行组合，从而使得它们被共同施用。 [0472] 在本发明的一个实施方案中，所述血管生成抑制剂是抗体或其抗原结合片段，其通过注射、优选玻璃体内注射施用，并且所述ROCK2抑制剂是口服施用的小分子。在一个这样的实施方案中，将所述血管生成抑制剂每周施用或每月施用一次或两次，并且将所述ROCK2抑制剂每天施用。 [0473] 在一些本文描述的治疗方法中，本发明包括TGF-β拮抗剂的施用。TGF-β在疤痕形成中起着重要的作用，包括但不限于，与黄斑变性、视网膜脱落以及青光眼的手术干预有关的视网膜疤痕形成。在三种在哺乳动物中表达的TGF-β中，TGF-β2被认为是对视网膜疤痕形成最重要的同种型，并且在TGF-β2的表达水平和视网膜瘢疤形成的严重性之间存在显著的相关性。 [0474] 根据本发明，当ROCK抑制剂或VEGF拮抗剂或ROCK抑制剂和VEGF拮抗剂被施用于受试者以治疗眼部疾病时，可以将TGF-β拮抗剂施用于所述受试者，以减少或防止疤痕形成。例如，在本发明的实施方案中，当施用ROCK抑制剂以治疗眼部病症时，还施用了TGF-β拮抗剂。在另一个实施方案中，当VEGF拮抗剂被施用于受试者以治疗眼部病症时，还施用了TGF-β拮抗剂。在本发明的另一个实施方案，当ROCK抑制剂和VEGF拮抗剂被施用于受试者以治疗眼病症时，还施用了TGF-β拮抗剂。在涉及新血管形成的眼部疾病中，疤痕(例如，盘状(discaform)疤痕)形成出现在新血管的渗漏之后。本发明包括向受试者施用TGF-β拮抗剂以及VEGF拮抗剂和ROCK2抑制剂以治疗眼部疾病中的新生血管形成。 [0475] 可用的TGF-β拮抗剂包括但不限于如下：(i)抗-TGF-β抗体和其抗原结合片段，例如泛TGF-β抗体GC-1008(Genzyme)、抗-TGF-β1抗体美替木单抗(CAT-192)(Cambridge Antibody Technology)和那些抗体的抗原结合片段，(ii)可溶的TGF-β受体或其配体结合片段，如P144，包括来自TGF-βIII型受体(Esparza-López等人，2001，J.Biol.Chem.276(18)：14588-96)的膜近侧配体结合域的氨基酸730-743的合成肽，和TGF-βII型受体-Fc(IgG1)融合(Smith，J.等人，1999，Circulation Res.84： 1212-22)，(iii)结合到阻断TGF-β的一个或多个同种型的TGF-β受体的多肽，如来自由Huang等人，1997，J.Biol.Chem.272：27155-59公开的TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3的25个氨基酸肽，其结合到TGF-β受体，和(iv)抑制TGF-β合成的反义药剂，如 trabedersen(Antisense Pharma GmbH)(一种抑制TGF-β2的合成的寡核苷酸)。另外的拮抗剂披露于WO2006/052568、WO 02/094833、WO 04/048382、WO 04/048381、WO 04/050659、WO 04/021989、WO 04/026871和WO 04/026307中。 [0476] Th17细胞是分泌IL-17、IL-21和IL-22的辅助CD4+T细胞的新子集。Th17细胞的促炎活性可以对感染期间的宿主是有益的，但不加控制的Th17功能已被相关于到并积极地涉及了若干个自身免疫病理学和急性移植物抗宿主病(GVHD)(一种特征在于对由存在于干细胞或骨髓接种中的成熟T细胞介导的靶器官的选择性上皮损伤的疾病)的发展。事实上，与滑膜组织和疾病活动性的破坏相关的高水平的IL-17在类风湿关节炎(RA)和系统性红斑狼疮(SLE)患者的血清和活检物中被检测到。关节炎关节中的IL-17病理作用与其促炎性细胞因子产生的刺激和相关联，并且T细胞和先天免疫细胞的增加的募集。此外，在采用抗-CD3/CD28抗体离体刺激之后，Th17细胞的数量在RA患者的外周血中显著增加，并且IL-17的升高的浓度可见于它们的PBMC的上清液中。此外，在多发性硬化症(MS)患者中，还富集了髓鞘反应性Th17细胞并产生大量的IL-22和IFN-γ。此外，相比于具有克+ 罗恩氏病(CD)的相同的受试者的健康区域，显著更高数量的IL-17细胞在感染疾病的肠区域中被检测到。 [0477] 根据本发明，通过rho激酶抑制靶向Th17(分泌IL-17)细胞提供了一种用于治疗Th17细胞介导的疾病的方法，所述疾病包括但不限于自身免疫性疾病，例如RA、MS、SLE、牛皮癣和克罗恩氏病，以及人中的GVHD。在本发明的一个实施方案中，所述Rho激酶抑制剂是式I化合物。在一些实施方案中，所述rho激酶抑制剂抑制ROCK1和ROCK2。在一些实施方案中，所述rho激酶抑制剂选择性地抑制ROCK2。在一些实施方案中，ROCK2的选择性抑制减少或预防了与ROCK活性的完全抑制相关的毒性。 [0478] Th17细胞的发育和功能取决于特异性细胞内信号传导通路的活化。类固醇受体型核受体RORγt选择性地表达在Th17细胞并似乎对IL-17产生是所需的。已经观察到RORγt的诱导经由STAT3依赖性机制由IL-6、IL-21和IL-23介导。STAT3也直接结合到所述IL-17与IL-21启动子。除了RORγt和STAT3之外，干扰素调节因子4(IRF4)对Th17细胞的分化是所需的，原因是IRF4KO小鼠无法挂接Th17细胞响应并对自身免疫响应的发展有抗性。最近的研究已经表明，通过Rho激酶2(ROCK2)的对IRF4的磷酸化调节了小鼠中的IL-17和IL-21产生和自身免疫的发展。 [0479] 在某些实施方案中，将一定剂量的化合物或组合物每天、每隔一天、每两天、每隔三天、每周一次、每周两次、每周三次或每两周一次地施用于受试者。在其他实施方案中，将两个、三个或四个剂量的化合物或组合物每天、每两天、每隔三天、每周一次或每两周一次地施用于受试者。在一些实施方案中，将一定剂量的化合物或组合物施用2天、3天、5天、7天、14天或21天。在某些实施方案中，将一定剂量的化合物或组合物施用1个月、1.5个月、2个月、2.5个月、3个月、4个月、5个月、6个月或更长。 [0480] 施用方法包括但不限于肠胃外、皮内、玻璃体内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、口服、舌下、鼻内、脑内、阴道内、经皮、经粘膜、直肠、通过吸入或特别是对耳、鼻、眼或皮肤的局部施用。施用的模式有待医师的酌处。在大多数情况下，施用将导致化合物释放到血流中。对于眼部疾病的治疗而言，优选生物药剂的玻璃体内施用。 [0481] 在具体的实施方案中，可能期望局部施用化合物。这可以实现，例如而不是通过限制的方式，通过局部输注、局部应用、通过注射、通过导管或通过植入物，所述植入物为多孔、无孔或凝胶状材料，包括膜，如硅橡胶膜或纤维。在这样的情况下，施用可以在无化合物的实质释放进入血液下选择性地靶向局部组织。 [0482] 也可以采用肺施用，例如通过使用吸入器或喷雾器，和具有雾化剂的制剂，或经由碳氟化合物或合成的肺表面活性剂中的灌注。在某些实施方案中，化合物被配制为栓剂，使用传统的粘合剂和载体，例如甘油三酸酯。 [0483] 在另一个实施方案中，化合物被递送至囊泡中，特别是脂质体(参见Langer，1990，Science 249：1527-1533；Treat等人，在Liposomes in the Therapy of Infectious Disease和Bacterial infection中，Lopez-Berestein和Fidler(编辑)，Liss，New York， 353-365页(1989)；Lopez Berestein，同上，317-327页；通常参见同上)。 [0484] 在另一个实施方案中，化合物被递送至控释系统中(参见，例如，Goodson，在Medical Applications of Controlled Release中，同上，第2卷，115-138页(1984))。控释系统的实例在由Langer，1990，Science249：1527-1533的综述中讨论。在一个实施方案中，泵可被使用(参见Langer，同上；Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14： 201；Buchwald等人，1980，Surgery 88：507；Saudek等人，1989，N.Engl.J.Med.321：574)。在另一个实施方案中，可以使用聚合材料(参见Medical Applications of Controlled Release，Langer和Wise(eds.)，CRC Pres.，Boca Raton，Florida(1974)；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design和Performance，Smolen和Ball(编辑)，Wiley，New York(1984)；Ranger和Peppas，1983，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23：61；还参见Levy等人，1985，Science 228：190；During等人，1989，Ann.Neurol.25：351；Howard等人，1989，J.Neurosurg.71：105)。 [0485] 上述的施用方案仅出于说明目的被提供，并不应被认为是限制性的。本领域的普通技术人员将容易理解所有剂量都在本发明的范围内。 [0486] 应当理解和预期本领域的技术人员可以作出本文所公开的本发明的原理中的变型，并且其旨在表示这样的修改都将包括在本发明的范围内。 [0487] 在本申请中，引用了各种出版物。这些出版物在此通过引用全部并入本申请中，以更充分地描述本发明涉及的本领域的状态。下面的实施例进一步说明本发明，但不应该被解释为以任何方式限制本发明的范围。实施例 [0488] 在下列实施例和制备中使用的缩写包括： [0489] Ac2O 乙酸酐 [0490] AcOH 乙酸 [0491] Bn 苄基 [0492] 硅藻土 [0493] DCM 二氯甲烷 [0494] DIEA 二异丙基乙胺 [0495] DMAP 4-二甲氨基吡啶 [0496] DME 1，2-二甲氧基乙烷 [0497] DMF 二甲基甲酰胺 [0498] DMSO 二甲基亚砜 [0499] EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐 [0500] EtOAc 乙酸乙酯 [0501] EtOH 乙基醇或乙醇 [0502] Et2O 乙醚 [0503] Et3N 三乙胺 [0504] g 克 [0505] HOBt 1-羟基苯并三唑 [0506] HPLC 高压液相色谱 [0507] h 小时 [0508] MeCN 乙腈 [0509] min 分钟 [0510] MeOH 甲基醇或甲醇 [0511] mL 毫升 [0512] mmol 毫摩尔 [0513] MS 质谱 [0514] NMR 核磁共振 [0515] iPrOH 异丙醇 [0516] 磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基 [0517] rt 室温 [0518] s 单峰 [0519] t 三重峰 [0520] THF 四氢呋喃 [0521] 由SynPep Co.，6905的Ct.Dublin，CA 94568实施质谱，或采用Waters ZQ2000单四极杆MS检测器将其记录在LC-MS：Waters 2695分离模块上。除非另有说明，在ESI模式1 下运行所有质谱。使用Mercury 软件将 H NMR光谱记录于Varian 400MHz仪器上。在这个范围内，未在这样的实施例中明确地描述本发明化合物的下列实施例的合成，一般而言所述合成如本文所述，并且可以容易地选择适当的起始原料用于合成实施例的化合物。 [0522] 实施例1 [0523] 2-溴-N-异丙基乙酰胺 [0524] [0525] 将异丙胺(5.0g，7.20mL，84.6mmol)在63mL的DCM中的溶液冷却至-10℃。向该溶液加入溴乙酰溴(8.53g，3.68mL，42.3mmol)在10.5mL DCM中的溶液。将反应混合物搅拌10分钟。从混合物中过滤出异丙基氢溴酸铵，然后将滤液真空浓缩以得到为白色固体的标题化合物(5.30g，70％)。 [0526] 实施例2 [0527] N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺 [0528] [0529] 将3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(0.50g，2.27mmol)、2-溴-N-异丙基乙酰胺(0.61g，3.41mmol)和K2CO3(0.47g，3.41mmol)在DMF(3mL)中的混合物在室温下搅拌，随后加入冰水。将沉淀物过滤并用水洗涤并干燥以提供标题化合物(0.32g，44％)。 [0530] 实施例3 [0531] 5-((2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0532] [0533] 将2，4-二氯嘧啶(1.99g，13.4mmol)、5-氨基-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(3.4g，14.7mmol)、DIEA(3mL)和DMF(13mL)的混合物于65℃搅拌7小时、真空浓缩并用Et2O滴定。将沉淀物过滤并用IPA洗涤并干燥以提供标题化合物(1.83g，40％)。 [0534] 实施例4 [0535] 5-((2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0536] [0537] 将5-((2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.29mmol)、N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(130mg，0.41mmol)、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(20mg，0.02mmol)和K2CO3(80mg，0.58mmol)在二噁烷/水(10和2mL)中的混合物在微波中加热30分钟。将反应进行后处理并通过色谱纯化以提供标题化合物(176mg，35％)。 [0538] 实施例5 [0539] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺HCl盐 [0540] [0541] 将5-((2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯溶解在二噁烷中的4M HCl中并在室温下搅拌2小时。在 1 真空中除去挥发物，以得到为HCl盐的标题化合物。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.6(d，J＝6.8Hz，6H)，3.93(m，1H)，4.51(s，2H)，6.75(d，J＝6Hz，1H)，7.14(d，J＝7.6Hz，1H)， 7.44-7.59(m，3H)，7.87-7.91(m，3H)，8.09(s，1H)，8.18(s，1H)，8.31(d，J ＝ 6.4Hz，1H)，+ 10.19(d，J＝0.8Hz，1H)，13.10(s，1H).MS(ES+)m/e 403(M+H)。 [0542] 实施例6 [0543] 2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酸叔丁酯[0544] [0545] 3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚，2-溴乙酸叔丁酯[0546] 将3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(4g，18.2mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(5.7g，27.3mmol)和K2CO3(3.44g，27.3mmol)在CH3CN(100mL)中的混合物于70℃搅拌过夜。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并除去，以得到残余物。将残余物通过柱色谱纯化以得到为白色固体的标题化合物(4g，67％)。 [0547] 实施例7 [0548] N-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0549] [0550] 将化合物2，4-二氯嘧啶(14.8g，0.1mol)、1H-吲唑-5-胺(14.6g，110mmol)和Et3N(15g，150mmol)在EtOH(200mL)中的混合物于80℃搅拌3小时。将反应混合物冷却并过滤。收集滤饼并干燥，以得到为固体的化合物5(15g，60％)。 [0551] 实施例8 [0552] 5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0553] [0554] 于0℃在5分钟内向N-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(7.35g，30mmol)、Boc2O(18.9g，90mmol)在CH2Cl2(150mL)中的混合物加入DMAP(3.6g，30mmol)。在0.5小时后，完成反应。用水洗涤反应混合物，经Na2SO4干燥并除去以得到残余物，将残余物通过凝胶柱色谱纯化以得到为白色固体的标题化合物(6g，67％)。 [0555] 实施例9 [0556] 5-((2-(3-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0557] [0558] 将5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(4g，8.9mmol)、2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酸叔丁酯(3.3g，10mmol)、KOAc(35g，360mmol)、Pd(dppf)2Cl2(400mg)和Boc2O(3.9g，18mmol)在二噁烷/水(10/1，100mL)中的混合物于100℃搅拌3天。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并除去以得到残余物，将残余物通过凝胶柱色谱纯化以得到为固体的标题化合物(3g，54％)。 [0559] 实施例10 [0560] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙酸 [0561] [0562] 将化合物5-((2-(3-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(2g)和CF3COOH(20mL)在DCM(20mL)中的混合物于25℃搅拌2小时。除去溶剂以得到为黄色固体的标题化合物(1.5g)。 [0563] 实施例11 [0564] (S)-3-(2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙酰氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯 [0565] [0566] 将2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙酸(600mg，1.66mmol)、3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(300mg，1.62mmol)、HATU(760mg，2mmol)和Et3N(250mg，2mmol)在DMF(18mL)中的混合物于25℃搅拌过夜。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩以得到残余物，将残余物通过HPLC纯化以提供为固体的标题化合物(300mg，50％)。 [0567] 实施例12 [0568] (R)-2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-(吡咯烷-3-基)乙酰胺HCl盐 [0569] [0570] 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.84-1.96(m，1H)，2.07-2.19(m，1H)，3.07-3.38(m，4H)，4.40-4.42(m，1H)，4.65(s，2H)，7.36(d，J ＝ 6.4Hz，1H)，7.56(t，J ＝ 8.0Hz，1H)， 7.65(d，J ＝ 8.0Hz，1H)，7.90-7.94(m，2H)，8.14-8.29(m，2H)，8.66(d，J ＝ 6.8Hz，1H)，+ 9.39-9.80(m，3H)，11.87(s，1H)。MS(ES+)m/e 430(M+H)。 [0571] 实施例13 [0572] (R)-2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-(吡咯烷-3-基)乙酰胺HCl盐 [0573] [0574] 将化合物2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙酸(500mg，1.39mmol)、NH4Cl(125mg，2mmol)、HATU(720mg，1.89mmol) 和 Et3N(200mg，2mmol)在DMF(15mL)中的混合物于25℃搅拌过夜。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩以得到残余物，将残余物通过HPLC纯化以提供为固体的标题 1 化合物(60.1mg，12％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ4.52(s，2H)，6.78(d，J＝6.4Hz，1H)， 7.19(dd，J＝9.6和1.6Hz，1H)，7.40-7.62(m，5H)，7.84-7.87(m，2H)，8.11(s，1H)，8.15(s，+ 1H)，8.33(d，J＝6.4Hz，1H)，10.35(s，1H)。MS(ES+)m/e 361(M+H)。 [0575] 实施例14 [0576] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-1-(1，1-二氧代硫代吗啉代)乙酮TFA盐 [0577] [0578] 将化合物2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙酸(500mg，1.39mmol)、硫代吗啉1，1-二氧化物(375mg，2.2mmol)、HATU(720mg，1.89mmol)和Et3N(200mg，2mmol)在DMF(15mL)中的混合物于25℃搅拌过夜。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩以得到残余物，将残余物通过制备型HPLC纯化以得到为固体的标题化合物(54.6mg，10％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.11(b，2H)， 3.30(b，2H)，3.85(b，4H)，5.00(s，2H)，6.76(d，J ＝ 6.4Hz，1H)，6.91(s，1H)，7.09(s，1H)， 7.16(dd，J＝8.0和2.4Hz，1H)，7.45(t，J＝8.0Hz，1H)，7.47-7.50(m，2H)，7.81(s，1H)， 7.86(d，J＝8.0Hz，1H)，8.08(s，1H)，8.12(b，1H)，8.33(d，J＝6.4Hz，1H)，10.26(s，1H)。 MS(ES+)m/e 479(M+H)+。 [0579] 实施例15 [0580] N-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)吗啉-4-甲酰胺[0581] [0582] 于40℃在10分钟内向三光气(600mg，2mmol)在THF(10mL)中的混合物滴加3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯胺(836mg，4mmol)和Et3N(1.2g，12mmol)在THF(10mL)中的溶液。在0.5小时后，将吗啉(435mg，5mmol)加入到反应混合物中。在 15分钟后，将反应混合物用饱和NH4Cl淬灭、用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩以得到残余物，将残余物通过凝胶柱色谱纯化以得到为白色固体的标题化合物(530mg， 50％)。 [0583] 实施例16 [0584] 5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(吗啉-4-甲酰氨基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0585] [0586] 将5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.7mmol)、N-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)吗啉-4-甲酰胺(250mg，0.8mmol)、CsF(510mg，3mmol)、Pd(PPh3)4(120mg)和Boc2O(432mg， 2mmol)在二噁烷/水(10/1，10mL)中的混合物在微波下于130℃搅拌20分钟。将三罐合并。将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱纯化以得到标题化合物(360mg)。 [0587] 实施例17 [0588] N-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)吗啉-4-甲酰胺HCl盐 [0589] [0590] 将5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(吗啉-4-甲酰氨基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(360mg，粗品)在MeOH/HCl(4M，20mL)中的混合物于25℃ 1 搅拌过夜。将反应混合物浓缩以得到为HCl盐的标题化合物(68mg)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.49(s，4H)，3.62(s，4H)，7.14(b，1H)，7.50(t，J ＝ 7.6Hz，1H)，7.60-7.65(m， 3H)，7.88(d，J ＝ 6.8Hz，1H)，8.22(s，1H)，8.28(d，J ＝ 5.6Hz，1H)，8.46(b，1H)，8.68(s，+ 1H)，9.00(s，1H)，11.77(s，1H)。MS(ES+)m/e 416(M+H)。 [0591] 实施例18 [0592] 3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯甲酸甲酯 [0593] [0594] 将N-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(3.7g，15mmol)、3-甲氧基羰基)苯硼酸(3.3g，18mmol)、K2CO3(4.14g，30mmol)和Pd(dppf)2Cl2(700mg)在二噁烷/水(4/1，75mL)中的混合物于100℃搅拌16小时。将反应混合物浓缩以得到标题化合物(7g，粗品)，其无需进一步纯化直接进行用于下步反应。 [0595] 实施例19 [0596] 3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯甲酸 [0597] [0598] 向3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯甲酸甲酯(7g，粗品)在二噁烷(120mL)中的混合物加入NaOH(2M，120mL)。将反应混合物回流1.5小时，然后冷却至室温并用EtOAc(100mL)萃取。将水相分离并用HCl(6M)酸化。将混合物过滤并收集滤饼、干燥以得到直接用于下步反应的标题化合物(1.3g，粗品)。 [0599] 实施例20 [0600] 3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-N-(1，1-二氧代四氢-2H-硫吡喃-4-基)苯甲酰胺TFA盐 [0601] [0602] 将3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯甲酸(400mg，1.2mmol)、4-氨基四氢-2H-硫吡喃1，1-二氧化物(300mg，1.4mmol)，HATU(720mg，1.89mmol)和Et3N(200mg，2mmol)在DMF(15mL)中的混合物于25℃搅拌过夜。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩以得到残余物，将残余物通过HPLC纯化以得到为固体的标题化合物(81mg，20％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ2.19-2.24(m，2H)，2.31-2.33(m， 2H)，3.12-3.15(m，2H)，3.34-3.38(m，2H)，4.23-4.28(m，1H)，6.93(d，J ＝ 6.8Hz，1H)， 7.58-7.76(m，3H)，8.12(s，1H)，8.14(s，1H)，8.24(d，J＝7.2Hz，1H)，8.31(d，J＝8.0Hz， 1H)，8.65(s，1H)。MS(ES+)m/e 463(M+H)+。 [0603] 实施例21 [0604] 4-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0605] [0606] 将3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯甲酸(400mg，1.2mmol)、4-氨基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，1.5mmol)、HATU(720mg，1.89mmol)和Et3N(200mg，2mmol)在DMF(15mL)中的混合物于25℃搅拌过夜。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩以得到残余物，将残余物通过HPLC纯化以提供为固体的标题化合物(200mg，30％)。 [0607] 实施例22 [0608] 3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-N-(哌啶-4-基)苯甲酰胺HCl盐 [0609] [0610] 将4-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯甲酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg)在MeOH(5mL)中的HCl中的混合物于25℃下搅拌3小时。除去溶剂以 1 提供为黄色固体的标题化合物(150mg)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.79-1.87(m，2H)， 1.98-2.01(m，2H)，3.01-3.04(m，2H)，3.32-3.36(m，2H)，3.64-3.69(m，1H)，7.10-7.15(m， 1H)，7.66(d，J ＝ 8.0Hz，1H)，7.75(t，J ＝ 8Hz，1H)，8.16(s，1H)，8.20(s，1H)，8.36(d，J＝6.8Hz，1H)，8.42(d，J＝7.6Hz，1H)，8.78(d，J＝7.2Hz，1H)，8.90(s，1H)，8.96(s，1H)，+ 11.73(s，1H)。MS(ES+)m/e 414(M+H)。 [0611] 实施例23 [0612] N-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0613] [0614] 向化合物2，4-二氯-5-甲基嘧啶(5g，30.8mmol)和5-氨基吲唑(4.1g，30.8mmol)在无水乙醇(100mL)中的混合物加入Na2CO3(16g，154mmol)。将所得混合物在N2下于80℃加热过夜。在冷却至室温后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机相经无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩，随后通过柱色谱于硅胶(用DCM∶MeOH＝50∶1洗脱)上以得到为棕色固体的标题化合物(7g，收率87％)。 [0615] 实施例24 [0616] 5-((叔丁氧基羰基)(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0617] [0618] 向N-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(5g，19.3mmol)在无水DCM(100mL)中的溶液加入Boc2O(12.6g，57.9mmol)、TEA(5.85g，57.9mmol)和DMAP(1.17g， 9.56mmol)。将所得混合物在室温下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用DCM萃取。将有机相用无水Na2SO4干燥，且在真空中除去溶剂，随后通过柱色谱于硅胶(用PE∶EA＝10∶1洗脱)上纯化以得到为白色固体的标题化合物(5g，收率56％)。 [0619] 实施例25 [0620] 5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(环丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0621] [0622] 向化合物5-((叔丁氧基羰基)(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(1.9g，4.14mmol)、化合物N-环丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(1.57g，4.97mmol)和CsF(1.89g，12.42mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(5mL)中的混合物加入Pd(PPh3)4(239mg，0.21mmol)。将所得的混合物在N2下于100℃加热过夜。在冷却至室温后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取，将有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱于硅胶(用PE∶EA＝5∶1洗脱)上纯化以得到为黄色固体的标题化合物(1.6g，收率62％)。 [0623] 实施例26 [0624] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯氧基)-N-环丙基乙酰胺盐酸盐 [0625] [0626] 向化合物5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(环丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.81mmol)在EtOAc(2mL)中的溶液加入HCl/EtOAc(10mL)中，并在室温下搅拌过夜。将形成的沉淀过滤并用EtOAc 1 洗涤，在真空中干燥以得到为黄色固体的标题化合物(300mg，收率89％)。H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.50-0.54(m，2H)，0.70-0.75(m，2H)，2.42(s，3H)，2.66-2.71(m，1H)，4.51(s， 2H)，7.27(dd，J＝8.4和2.4Hz，1H)，7.49(t，J＝8.0Hz，1H)，7.64-7.68(m，2H)，7.72(s，+ 1H)，8.04(s，2H)，8.20(s，1H)，8.28(s，1H)。MS(ES+)m/e 451(M+H)。 [0627] 实施例27 [0628] 5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0629] [0630] 向将5-((叔丁氧基羰基)(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(1.4g，3.05mmol)、4-(2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.68g，3.66mmol)和CsF(1.39g，9.15mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(5mL)中的混合物加入Pd(PPh3)4(176mg，0.15mmol)。将所得的混合物在N2下于100℃加热过夜。在冷却至室温后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取，将有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩得到残余物，将残余物通过柱色谱于硅胶(用PE∶EA＝1∶1洗脱)上纯化以得到为黄色固体的标题化合物(1.1g，收率47％)。 [0631] 实施例28 [0632] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯氧基)-N-(哌啶-4-基)乙酰胺盐酸盐 [0633] [0634] 向5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(700mg，0.92mmol)在EtOAc(2mL)中的溶液加入HCl/EtOAc(10mL)，并在室温下搅拌过夜。将形成的沉淀过滤并用EtOAc洗涤，在真空中干燥以得到为黄色固体的标题化合物(230mg，收率54％)。1 H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.73-1.84(m，2H)，2.01-2.05(m，2H)，2.42(s，3H)，3.02-3.09(m， 2H)，3.39-3.43(m，2H)，3.99-4.05(m，1H)，4.57(s，2H)，7.30(dd，J ＝ 8.4 和 2.4Hz，1H)， 7.51(t，J＝8.4Hz，1H)，7.67-7.74(m，4H)，8.05(s，1H)，8.20(s，1H)，8.24(s，1H)。MS(ES+)+ m/e 494(M+H)。 [0635] 实施例29 [0636] 2-(3-溴苯氧基)乙酸叔丁酯 [0637] [0638] 向3-溴苯酚(5g，28.9mmol)在MeCN(100mL)中的溶液加入溴乙酸叔丁酯(6.76g，34.7mmol)和K2CO3(5.98g，43.3mmol)。将所得混合物在氮气下于80℃加热过夜。在冷却至室温后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥、过滤并浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱于硅胶(PE∶EA＝50∶1)上纯化以得到为油状液体的标题化合物(7g，收率84％)。 [0639] 实施例30 [0640] 2-(3-溴苯氧基)乙酰氯 [0641] [0642] 向2-(3-溴苯氧基)乙酸叔丁酯(4.6g，16mmol)在无水DCM(50mL)中的溶液加入TFA(18g，0.16mol)并在室温下搅拌过夜。在TLC显示反应完成后，将混合物在减压下浓缩以得到粗酸。将该酸溶解于无水DCM(50mL)中，将草酰氯(2.44g，19.2mmol)和DMF(0.2mL)加入到该溶液中。将该混合物在室温下保持4小时。将混合物在减压下浓缩，以提供白色固体，将其不经进一步纯化用于下步反应。 [0643] 实施例31 [0644] 2-(3-溴苯氧基)-N-环丙基乙酰胺 [0645] [0646] 在0℃向2-(3-溴苯氧基)乙酰氯(2.3g，9.24mmol)在无水DCM(30mL)中的溶液加入三乙胺(2.8g，27.7mmol)和环丙胺(632mg，11.1mmol)。然后将所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应物用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用Na2SO4干燥并在减压下浓缩得到残余物，将残余物通过柱色谱于硅胶(用PE∶EA＝5∶1洗脱)上纯化以得到为白色固体的标题化合物(1.95g，收率78％)。 [0647] 实施例32 [0648] N-环丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺 [0649] [0650] 向2-(3-溴苯氧基)-N-环丙基乙酰胺(1.95g，7.25mmol)、双(频哪醇)二硼(2.76g，10.87mmol)和KOAc(2.13g，21.7mmol)在DMSO(20mL)中的混合物加入Pd(dppf)Cl2-DCM(265mg，0.36mmol)。将所得的混合物在N2下于100℃加热过夜。在冷却至室温后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取，将有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩得到残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用PE∶EA＝10∶1洗脱)上纯化以得到为白色固体的标题化合物(1.4g，收率60％)。 [0651] 实施例33 [0652] 4-(2-(3-溴苯氧基)乙酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0653] [0654] 在0℃向2-(3-溴苯氧基)乙酰氯(2.1g，8.43mmol)在无水DCM(30mL)中的溶液加入三乙胺(2.56g，25.3mmol)和4-氨基-1-Boc-哌啶(2.02g，10.1mmol)。然后将所得混合物在室温下搅拌过夜。将反应物用水稀释，并用EtOAc萃取。将有机层用Na2SO4干燥并在减压下浓缩得到残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用PE∶EA＝5∶1洗脱)上纯化以得到为白色固体的标题化合物(2.8g，收率80％)。 [0655] 实施例34 [0656] 4-(2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0657] [0658] 向4-(2-(3-溴苯氧基)乙酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.8g，6.79mmol)、双(频哪醇)二硼(2.59g，10.2mmol)和KOAc(1.99g，20.4mmol)在DMSO(30mL)中的混合物加入Pd(dppf)Cl2-DCM(249mg，0.34mmol)。将所得混合物在N2下加热至100℃过夜。在冷却至室温后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取，将有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩得到残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用PE∶EA＝5∶1洗脱)上纯化以得到为白色固体的标题化合物(1.7g，收率54％)。 [0659] 实施例35 [0660] N-(2-氯嘧啶-4-基)-6-氟-1H-吲唑-5-胺 [0661] [0662] 向2，4-二氯嘧啶(730mg，4.89mmol)和6-氟-5-氨基吲唑(740mg，4.89mmol)在无水乙醇(15mL)中的混合物加入Na2CO3(1.56g，14.7mmol)。将所得混合物在N2下于80℃加热过夜。在冷却至室温后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取，将有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩得到残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用PE∶EA＝3∶1洗脱)上纯化以得到为棕色固体的标题化合物(750mg，收率58％)。 [0663] 实施例36 [0664] 5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-6-氟-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯[0665] [0666] 向N-(2-氯嘧啶-4-基)-6-氟-1H-吲唑-5-胺(750mg，2.85mmol)在无水DCM(10mL)中的溶液加入Boc2O(1.86g，8.55mmol)、TEA(864mg，8.55mmol)和DMAP(173mg， 1.42mmol)。将所得混合物在室温下搅拌4小时。将混合物用水稀释并用DCM萃取。将有机相用无水Na2SO4干燥，并在真空中除去溶剂得到残余物，将残余物通过柱色谱于硅胶(用PE∶EA＝20∶1洗脱)上纯化以得到为白色固体的标题化合物(21g，收率60％)。 [0667] 实施例37 [0668] 5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-6-氟-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0669] [0670] 向5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-6-氟-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(920mg，1.98mmol)在1，4-二噁烷(16mL)和水(4mL)中的混合物加入N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(760mg，2.38mmol)、Pd(PPh3)4(115mg，0.1mmol)和CsF(906mg，5.96mmol)。将所得的混合物在N2下于100℃加热过夜。在冷却至室温后，将混合物用水稀释并用EtOAc萃取，将有机相经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩得到残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用PE∶EA＝3∶1洗脱)上纯化以得到为黄色固体的标题化合物(600mg，收率48％)。 [0671] 实施例38 [0672] 2-(3-(4-((6-氟-1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺盐酸盐 [0673] [0674] 5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-6-氟-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(520mg，0.84mmol)在EtOAc(2mL)中的混合物加入HCl/EtOAc(10mL)，并在室温下搅拌过夜。将形成的沉淀过滤并用EtOAc洗 1 涤，在真空中干燥以得到为黄色固体的标题化合物(200mg，收率56％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.04(d，J＝6.4Hz，6H)，3.88-3.93(m，1H)，4.51(s，2H)，7.00(b，1H)，7.22(d，J＝7.6Hz，1H)，7.49(t，J＝7.6Hz，1H)，7.56(d，J＝10.4Hz，1H)，7.75-7.79(m，2H)，7.93(d，J＝ 7.2Hz，1H)，8.09(d，J＝ 6.4Hz，1H)，8.16(s，1H)，8.36(d，J＝ 6.4Hz，1H)，11.09(s，+ 1H)。MS(ES+)m/e 457(M+H)。 [0675] 实施例39 [0676] N-(2-氯-5-甲氧基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0677] [0678] 向2，4-二氯-5-甲氧基嘧啶(3.56g，0.02mol)在EtOH(80mL)中的混合物加入1H-吲唑-5-胺(2.66g，0.02mol)，然后加入DIEA(7.8g，0.06mol)。将所得混合物于45℃搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温并过滤。将滤饼用MTBE冲洗并收集以得到为棕色固体的标题化合物(4.4g，收率81％)。 [0679] 实施例40 [0680] 5-((叔丁氧基羰基)(2-氯-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0681] [0682] 向N-(2-氯-5-甲氧基-4-基)-1H-吲唑-5-胺(4.2g，15.3mmol)在DCM(50mL)中的混合物加入TEA(4.6g的混合物，45.9mmol)、(Boc)2O(8.32g，38.2mmol)和DMAP(0.2g)。将所得混合物在室温下搅拌1小时并浓缩，随后通过柱色谱纯化以提供为浅黄色固体的标题化合物(5.5g，收率76％)。 [0683] 实施例41 [0684] 5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0685] [0686] 在N2下向5-((叔丁氧基羰基)(2-氯-5-甲氧基-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(1.5g，3.16mmol)在溶剂(二噁烷∶水＝10∶1，33mL)中的溶液加入N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(1.2g，3.79mmol)、(Boc)2O(1.38g，6.32mmol)、CsF(1.4g，9.48mmol)，然后加入Pd(PPh3)4(0.11g， 0.095mmol)。将所得混合物在90℃下搅拌24小时。将混合物通过柱色谱纯化以得到为白色固体的标题化合物(0.98g，收率49％)。 [0687] 实施例42 [0688] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-羟基嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [0689] [0690] 将5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(1.2g，2mmol)和吡啶盐酸盐(7.8g)的混合物于140℃搅拌1小时。将反应冷却至室温。加入水(20mL)，接着加入NH3.H2O以调节pH值至6-7。将混合物过滤。将滤饼收集并干燥以得到为灰色固体的标题化合物(0.46mmol，收率55％)。 [0691] 实施例43 [0692] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺TFA盐 [0693] [0694] 向2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-羟基嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(450mg，1.07mmol)在THF(45mL)中的混合物加入2-(二甲基氨基)乙醇(115mg，1.29mmol)，然后加入PPh3(563mg，2.15mmol)。将所得混合物在室温下搅拌0.5小时。然后加入DEAD(374mg，2.15mmol)。将所得混合物在回流下加热过夜。在减压下除去溶剂，随后加入10mL的EtOAc和10mL的水。加入TFA以调节pH＝4-5。将水性溶液浓缩并通过制备 1 型HPLC纯化以得到为黄色固体的标题化合物(0.1g，收率10％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.07(d，J＝6.4Hz，6H)，2.94(d，J＝4.0Hz，6H)，3.64-3.65(m，2H)，3.92-3.94(m，1H)， 4.48(s，2H)，4.52-4.53(m，2H)，7.02(dd，J＝9.2和1.6Hz，1H)，7.37(t，J＝7.2Hz，1H)，+ 7.60-7.89(m，5H)，8.12-8.19(m，3H)，8.90(s，1H)，9.60(b，1H)。MS(ES+)m/e 490(M+H)。 [0695] 实施例44 [0696] N-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0697] [0698] 将2，4，6- 三氯嘧啶 (3.67g，20mmol)、1H- 吲唑 -5-胺 (2.66g，20mmol) 和TEA(3.03g，30mmol)在EtOH(75mL)中的溶液在回流下加热过夜。除去溶剂后，在MeOH中将残余物重结晶以提供为固体的标题化合物(4.2g，收率50％)。 [0699] 实施例45 [0700] N-(2-氯-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0701] [0702] 将N-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(4.2g，15mmol)、1-甲基哌嗪(2.0g，20mmol)和TEA(3.03g，30mmol)在MeOH(75mL)中的溶液回流过夜。除去溶剂后，在DCM中将残余物重结晶以得到为固体的标题化合物(3g，收率58％)。 [0703] 实施例46 [0704] 5-((叔丁氧基羰基)(2-氯-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0705] [0706] 向N-(2-氯-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(1.5g，4.4mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入TEA(0.93g，9.2mmol)、(Boc)2O(3g，13.9mmol)和DMAP(1.1g，9.2mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。除去溶剂后，将残余物通过柱色谱于硅胶(用石油醚∶乙酸乙酯＝50∶1-10∶1洗脱)上纯化以得到为固体的标题化合物(1.2g，收率50％)。 [0707] 实施例47 [0708] 5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0709] [0710] 将5-((叔丁氧基羰基)(2-氯-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(0.600g，1.1mmol)、Pd(dppf)Cl2(50mg)、CsF(0.501g，3.3mmol)和N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(0.640g，2mmol)在二噁烷/水(10∶1，10mL)中的溶液于100℃搅拌过夜。除去溶剂后，通过HPLC纯化残余物以得到标题化合物(250mg，收率32％)。 [0711] 实施例48 [0712] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺TFA盐 [0713] [0714] 将5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(250mg， 0.36mmol)在DCM(10mL)和TFA(3.0mL)中的溶液在室温下搅拌3小时。将混合物在真 1 空中浓缩以提供为固体的标题化合物(150mg，收率70％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.02(d，J＝6.4Hz，6H)，2.79(s，3H)，3.04(b，2H)，3.20-3.27(m，2H)，3.47-3.50(m，2H)， 3.85-3.93(m，1H)，4.45(s，2H)，4.71-4.75(m，2H)，6.56(s，1H)，7.01(dd，J＝8.4和2.4Hz， 1H)，7.36(t，J ＝ 8.0Hz，1H)，7.41-7.52(m，4H)，7.88(d，J ＝ 7.6Hz，1H)，7.98(s，2H)，+ 9.53(s，1H)，10.00(s，1H)。MS(ES+)m/e 501(M+H)。 [0715] 实施例49 [0716] N-(2-氯嘧啶-4-基)-6-甲基-1H-吲唑-5-胺 [0717] [0718] 将2，4-二氯嘧啶(0.69g，4.6mmol)、6-甲基-1H-吲唑-5-基胺盐酸盐(0.85g，4.6mmol)和TEA(1.4g，13.8mmol)在EtOH(16mL)中的溶液在回流下加热过夜。除去挥发物以得到粗制的标题化合物(1.7g)，将其不经纯化用于下步反应。 [0719] 实施例50 [0720] 5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-6-甲基-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0721] [0722] 向N-(2-氯嘧啶-4-基)-6-甲基-1H-吲唑-5-胺(1.7g，粗品)在DCM(20mL)中的溶液加入TEA(0.93g，9.2mmol)、(Boc)2O(3g，13.9mmol)和DMAP(1.1g，9.2mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时。除去溶剂后，通过柱色谱于硅胶(用石油醚∶乙酸乙酯＝50∶1-10∶1洗脱)上纯化残余物以得到为固体的标题化合物(0.45g，2步收率21.1％)。 [0723] 实施例51 [0724] 5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲基-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0725] [0726] 将5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-6-甲基-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(0.45g，1.67mmol)、Pd(dppf)Cl2(50mg)、Na2CO3(0.35g，3.34mmol)和N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(0.64g， 2mmol)在二噁烷/水(10∶1，10mL)中的溶液于100℃搅拌过夜。除去溶剂后，通过HPLC纯化残余物以得到标题化合物(180mg，收率17％)。 [0727] 实施例52 [0728] N-异丙基-2-(3-(4-((6-甲基-1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙酰胺TFA盐 [0729] [0730] 向5-((叔丁氧基羰基)(2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-6-甲基-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.29mmol)在DCM(10mL)中的溶液加入TFA(1.5mL)。将混合物在室温下搅拌过夜，并在真空中浓缩以提供标题化合物+ (170mg，收率96％)。MS(ES+)m/e 417(M+H)。 [0731] 实施例53 [0732] N-(2-氯嘧啶-4-基)-N-甲基-1H-吲唑-5-胺 [0733] [0734] 向2，4-二氯嘧啶 (1.0g，6.7mmol)在EtOH(20mL)中的溶液加入(1H- 吲唑-5-基)-甲基-胺(1.0g，6.8mmol)和TEA(2.02g，20mmol)。将所得混合物回流过夜。除去溶剂以得到粗制的标题化合物(2.5g)，将其不经纯化用于下步反应。 [0735] 实施例54 [0736] 5-((2-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0737] [0738] 向N-(2-氯嘧啶-4-基)-N-甲基-1H-吲唑-5-胺(2.5g，粗品)在DCM(50mL)中的溶液加入TEA(2.0g，20mmol)、(Boc)2O(4.2g，19.2mmol)，并加入DMAP(1.0g)。将所得混合物在室温下搅拌1小时。将混合物真空浓缩，并通过柱色谱纯化以得到为固体的标题化合物(0.95g，2步收率38.8％)。 [0739] 实施例55 [0740] 5-((2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0741] [0742] 在N2下向5-((2-氯嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(0.6g，1.67mmol)在溶剂(二噁烷∶水＝4∶1，20mL)中的溶液加入N-异丙基-2-[3-(4，4， 5，5-四甲基-[1，3，2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基]-乙酰胺(0.6g，1.88mmol)、(Boc)2O(1.09g，5mmol)、K3PO4(1.06g，5mmol)，t-Bu3P(0.4g，2mmol)和Pd2(dba)3(0.1g)。将所得混合物于100℃搅拌24小时，并在真空中浓缩，提供粗物质，其不经进一步纯化用于进行下步反应。 [0743] 实施例56 [0744] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)(甲基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺TFA盐 [0745] [0746] 向如上的5-((2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯加入HCl/MeOH(4M，5mL)，将混合物搅拌2.0小时。在真空中除去溶剂且将残余物通过HPLC纯化以得到为TFA盐的标题化合物(120mg)。 1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.20(d，J＝6.8Hz，6H)，3.85(s，3H)，4.07-4.13(m，1H)，4.62(s， 2H)，6.37-6.45(m，1H)，7.39(dd，J＝10.4和2.0Hz，1H)，7.43(d，J＝2.0Hz，1H)，7.60(t，J ＝ 7.6Hz，1H)，7.79(d，J ＝ 8.8Hz，1H)，7.86-7.89(m，2H)，7.91(s，1H)，8.05(b，1H)， 8.18(s，1H)。MS(ES+)m/e 417(M+H)+。 [0747] 实施例57 [0748] 2-氯-N-(1H-吡唑-4-基)嘧啶-4-胺 [0749] [0750] 将2，4-二氯嘧啶(200mg，2.41mmol)、1H-吡唑-4-基胺(431mg，2.89mmol)和TEA(730mg，7.23mmol)在异丙醇中的混合物(8mL)于50℃搅拌过夜。冷却后，将反应混合物浓缩。将粗产物不经纯化直接用于下一步骤。 [0751] 实施例58 [0752] 4-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯 [0753] [0754] 向(2-氯嘧啶-4-基)-(1H-吡唑-4-基)-胺(470mg，2.41mmol)、TEA(730mg，7.23mmol)和 DMAP(607mg，4.82mmol)在无水DCM(15mL) 中的混合物缓慢加入Boc2O(1040mg，4.82mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，并浓缩。将残余物通过柱色谱在硅胶上纯化以得到为白色固体的标题化合物(200mg，0.5mmol，收率21％)。 [0755] 实施例59 [0756] 4-((2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯 [0757] [0758] 向4-[叔丁氧基羰基(2-氯-嘧啶-4-基)-氨基]-吡唑-1-羧酸叔丁酯(118.5mg，0.3mmol)、N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(134mg，0.42mmol)、Na2CO3(64mg，0.6mmol)和Boc2O(130mg，0.6mmol)在EtOH(3mL)和H2O(0.3mL)中的混合物加入Pd(dppf)2Cl2(21mg，0.03mmol)。在N2保护下在微波下将混合物于130℃搅拌30分钟。冷却后，将混合物浓缩。将残余物通过快速柱色谱在硅胶上纯化，然后用P-HPLC纯化以得到为白色固体的标题化合物(30mg，0.066mmol，收率22％)。 [0759] 实施例60 [0760] 2-(3-(4-((1H-吡唑-4-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺TFA盐 [0761] [0762] 向4-((2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯(167mg，0.369mmol)在DCM(20mL)中的溶液加入TFA(2mL)。将混合物在室温下搅拌5小时，然后浓缩以得到为黄色固体的标题化合物(170mg， 1 0.364mmol，98％收率)。H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.20-8.18(d，J＝7.2Hz，1H)，8.07(s 2H)，7.80-7.78(d，2H)，7.64-7.60(t，J＝8.8Hz，1H)，7.40-7.40(dd，J＝9.6，2.4Hz，1H)， 6.91-6.89(d，J＝7.2Hz，1H)，4.63(s，2H)，4.13-4.09(m，1H)1.18-1.16(d，J＝6.4Hz 6H)。 + MS(ES+)m/e 353(M+H)。 [0763] 实施例61 [0764] 5-((2-氯嘧啶-4-基)氧基)-1H-吲唑 [0765] [0766] 将2，4-二氯嘧啶(184mg，1.232mmol)、1H-吲唑-5-醇(150mg，1.12mmol)和TEA(340mg，3.36mmol)在EtOH中的混合物(5mL)于80℃搅拌过夜。冷却后，将反应混合物浓缩。将粗产物不经纯化直接用于下一步骤。 [0767] 实施例62 [0768] 5-((2-氯嘧啶-4-基)氧基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0769] [0770] 向5-((2-氯嘧啶 -4-基)氧基)-1H-吲唑(275mg，1.12mmol)、TEA(340mg，3.36mmol)和DMAP(28mg，0.224mmol)在无水DCM(5mL)中的搅拌混合物缓慢加入 Boc2O(484mg，2.24mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后浓缩。将残余物通过柱色谱在硅胶上纯化以得到为白色固体的标题化合物(200mg，0.57mmol，收率50％)。 [0771] 实施例63 [0772] 5-((2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氧基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0773] [0774] 向5-((2-氯嘧啶-4-基)氧基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(104mg，0.3mmol)、N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(134mg，0.42mmol)、t-Bu3P(61mg，0.3mmol)、K3PO4.3H2O(160mg，0.6mmol)和Boc2O(130mg，0.6mmol)在二噁烷(3mL)和H2O(0.4mL)中的混合物加入Pd2(dba)3(27mg，0.03mmol)。在N2保护下将混合物于80℃搅拌过夜。冷却后，将混合物浓缩。将残余物通过反相HPLC纯化以得到为白色固体的标题化合物(58mg，0.115mmol，38％收率)。 [0775] 实施例64 [0776] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氧基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺HCl盐 [0777] [0778] 将5-((2-(3-(2-(异丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氧基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(340mg，0.675mmol)在HCl(g)/EtOAc(40mL)中的混合物在室温下搅拌3小时，然后浓缩以提供为白色固体的标题化合物(272mg，0.621mmol，92％收率)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.87-8.85(d，J＝6.4Hz，1H)，8.25(s 1H)，7.78-7.71(m， 2H)，7.69-7.65(m，2H)，7.50-7.43(m，3H)，7.30-727(dd，J＝8.0，2.4Hz，1H)，4.48(s，2H)， 4.06-4.00(m，1H)，1.14-1.12(d，J＝6.4Hz 6H)。MS(ES+)m/e 404(M+H)+。 [0779] 实施例65 [0780] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-1-(哌嗪-1-基)乙酮HCl盐 [0781]1 [0782] 基本上采用与实施例12中描述的相同的程序来制备标题化合物。H NMR(400MHz，CD3OD)δ3.24(b，4H)，3.82(b，4H)，5.00(s，2H)，6.93(b，1H)，7.33(dd，J＝ 7.6和 1.6Hz，1H)，7.56(t，J＝8.4Hz，1H)，7.68(d，J＝8.4Hz，2H)，7.79(b，2H)，8.15(s，1H)，8.22(d，J+ ＝7.2Hz，2H)。(ES+)m/e 430(M+H)。 [0783] 实施例66 [0784] 2-(3-(4-氨基-6-氯嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [0785] [0786] 实施例67 [0787] 2-(3-(6-氨基-2-氯嘧啶-4-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [0788] [0789] 向4-氨基-2，6-二氯嘧啶(1.016g，6.72mmol)、N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(2.032g，6.37mmol)和CsF(2.858g，18.803mmol)在1，4-二噁烷(31.2mL)和H2O(6.3mL)中的混合物加入Pd(PPh3)4(0.362g， 0.313mmol)。将所得的混合物在N2下于100℃搅拌过夜。在冷却至室温后，将混合物在减压下浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用PE∶EtOAc＝2∶1洗脱)上纯化以得到为白色粉末的化合物2-(3-(4-氨基-6-氯嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(670mg，收率33％)和为白色粉末的2-(3-(6-氨基-2-氯嘧啶-4-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(460mg，收率22％)。 [0790] 实施例68 [0791] 2-(3-(4-氨基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺[0792] [0793] 向化合物2-(3-(4-氨基-6-氯嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(0.97g，3.031mmol)在n-BuOH(15mL)中的溶液加入1-甲基哌嗪(1.5g，15mmol)并在N2下于120℃搅拌过夜。在冷却至室温后，将混合物在减压下浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用EtOAc∶MeOH＝20∶1洗脱)上纯化以得到为浅黄色粉末的标题化合物(460mg，收率39％)。 [0794] 实施例69 [0795] 2-(3-(6-氨基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺[0796] [0797] 向化合物2-(3-(6-氨基-2-氯嘧啶-4-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(0.436g，1.363mmol)在n-BuOH(10mL)中的溶液加入1-甲基哌嗪(0.682g，6.815mmol)并在N2下于 120℃搅拌过夜。在冷却至室温后，将混合物在减压下浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用EtOAc∶MeOH＝20∶1洗脱)上纯化以得到为浅黄色粉末的标题化合物(0.273g，收率52％)。 [0798] 实施例70 [0799] N-异丙基-2-(3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-6-(吡啶-4-基氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙酰胺 [0800] [0801] 向化合物2-(3-(4-氨基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(460mg，1.199mmol)、4-碘吡啶(319.5mg，1.559mmol)、Pd2(dba)3(109.8mg， 0.12mmol)和X-Phos(57mg，0.12mmol)在无水1，4-二噁烷(15mL)中的混合物加入 Cs2CO3(1.17g，3.3mmol)。将所得混合物在N2下加热至120℃过夜。在冷却至室温后，将混合物用1，4-二噁烷稀释，并通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，用EtOAc洗涤残余物并真空干燥以 1 得到为白色固体的标题化合物(173mg，收率31.3％)。H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.17(d，J＝6.4Hz，6H)，2.36(s，3H)，2.55(t，J＝5.2Hz，4H)，3.72(t，J＝4.8Hz，4H)，4.06-4.16(m， 1H)，4.56(s，2H)，5.97(s，1H)，7.19(dd，J＝ 8.0和 2.4Hz，1H)，7.39(t，J＝ 8.0Hz，1H)， 7.78(d，J＝6.4Hz，2H)，7.98(s，1H)，8.02(d，J＝8.0Hz，1H)，8.32(d，J＝5.6Hz，1H)。m/+ e 462(M+H)。 [0802] 实施例71 [0803] N-异丙基-2-(3-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-6-(吡啶-4-基氨基)嘧啶-4-基)苯氧基)乙酰胺 [0804] [0805] 向化合物2-(3-(6-氨基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(493mg，1.286mmol)，4-碘吡啶(290mg，1.415mmol)，Pd2(dba)3(117.8mg， 0.129mmol)和X-Phos(61.4mg，0.129mmol)在无水1，4-二噁烷(15mL)中的混合物加入Cs2CO3(1258mg，3.858mmol)。将所得混合物在N2下加热至120℃过夜。在冷却至室温后，将混合物用1，4-二噁烷稀释，并通过硅藻土垫过滤。浓缩滤液，并用EtOAc洗涤残余物并 1 真空干燥以得到为白色固体的标题化合物(184mg，收率31.0％)。H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.17(d，J＝6.4Hz，6H)，2.36(s，3H)，2.57(t，J＝4.8Hz，4H)，3.65(b，4H)，4.08-4.14(m， 1H)，4.54(s，2H)，6.57(s，1H)，7.08(dd，J＝ 8.0和 2.4Hz，1H)，7.39(t，J＝ 8.4Hz，1H)，+ 7.62(d，J＝7.6Hz，1H)，7.69-7.73(m，3H)，8.31(d，J＝6.4Hz，1H)。m/e 462(M+H)。 [0806] 实施例72 [0807] 4-((3-溴苯氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0808] [0809] 在氮气氛围下于0℃搅拌4-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g，7.0mmol)、3-溴苯酚(1.5g，7.0mmol)和PPh3(2.7g，10.5mmol)在无水THF(30mL)中的溶液。在5分钟时间内向该混合物逐滴加入DEAD(1.8g，10.5mmol)，通过TLC监测反应。在起始原料完全消失后，将溶剂减压蒸发，并且通过柱色谱(PE/EA，9/1)纯化所得的油，以提供直接使用而不需+要进一步提纯的标题化合物(2.4g粗品)。m/e 372(M+H)。 [0810] 实施例73 [0811] 4-((3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0812] [0813] 将4-((3-溴苯氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.4g，6.5mmol)、Pin2B2(2.5g，9.7mmol)、Pd(dppf)Cl2(250mg)和乙酸钾(1.9g，19.4mmol)在50mL的二噁烷中的溶液脱气并用N2吹扫，于80℃加热14小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用EtOAc(300L)稀释、过滤//浓缩，并通过色谱(EA∶PE，1∶10)纯化以得到为黄色固体的标题化合物 1 (600mg，22％)。H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38(1H，m)，7.27(2H，m)，6.96(1H，m)，3.82(2H，d，J＝6.0Hz)，2.76(1H，m)，1.73(4H，m)，1.84(4H，m)。 [0814] 实施例74 [0815] 5-(叔丁氧基羰基(2-(3-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0816] [0817] 将5-(叔丁氧基羰基(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(642mg，1.44mmol)、4-((3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.44mmol)、KOAc(564m g，5.76mmol)、Boc2O(604mg，2.88mmol)和Pd(dppf)Cl2(70mg)在二噁烷/水(30mL/3mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于100℃加热 16小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用DCM稀释、过滤，浓缩，并通过色谱(PE/+ EA，5/1)纯化以得到为黄色油状物的标题化合物(300mg，粗品)。m/e 701(M+H)。 [0818] 实施例75 [0819] N-(2-(3-(哌啶-4-基甲氧基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0820] [0821] 将5-(叔丁氧基羰基(2-(3-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(250mg，0.36mmol)溶解在30mL的HCl/Et2O(饱和的)中。在室温下将它搅拌过夜。将混合物浓缩以得到残余物，用水稀释残余物，并通过EA萃取。使用饱和NaHCO3溶液将水相调节至11。将其浓缩且通过制备型TLC 1 进一步纯化残余物，以提供为黄色固体的标题化合物(50mg，35％)。H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.24(2H，m)，8.04(1H，s)，7.90(2H，m)，7.56(2H，m)，7.38(1H，t，J＝6.0Hz)，7.04(1H，dd，J＝9.0Hz，J＝3.0Hz)，6.65(1H，d，J＝6.0Hz)，3.95(2H，d，J＝6.0Hz)，3.42(2H，d，J＝3.0Hz)，2.15(2H，t，J＝3.0Hz)，2.12(1H，m)，2.07(2H，q，J＝3.0Hz)，1.69(2H，q，J+ ＝3.0Hz)；m/e 401(M+H)。 [0822] 实施例76 [0823] 4-(3-溴苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0824] [0825] 在氮气氛围下于0℃搅拌4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.4g，7.0mmol)、3-溴苯酚(1.2g，7.0mmol)和PPh3(2.7g，10.4mmol)在无水THF(35mL)中的溶液。在5分钟时间内向该混合物逐滴加入DEAD(1.8g，10.4mmol)，通过TLC监测反应。在起始原料完全消失后，将溶剂减压蒸发，并且通过柱色谱(PE/EA，9/1)纯化所得的油以提供标题化合物(1.3g，52％)。+ m/e 357(M+H)。 [0826] 实施例77 [0827] 4-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0828] [0829] 将4-(3-溴苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g，3.5mmol)、Pin2B2(1.4g，5.3mmol)、Pd(dppf)Cl2(135mg)和乙酸钾(1.0g，10.6mmol)在20mL的二噁烷中的混合物脱气，用N2吹扫，并于80℃加热14小时。将混合物浓缩以得到残余物，用EtOAc(200mL)稀释残余物、过滤，浓缩，并通过色谱(EA∶PE，1∶10)纯化以得到为黄色固体的标题化合物 1 (500mg，36％)。H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.38(1H，m)，7.32(1H，m)，7.27(1H，m)，7.25(1H，m)，7.38(1H，m)，4.51(1H，m)，3.69(2H，m)，3.36(2H，m)，1.88(2H，m)，1.74(2H，m)，1.34(2H，m)。 [0830] 实施例78 [0831] 5-(叔丁氧基羰基(2-(3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0832] [0833] 将5-(叔丁氧基羰基(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(221mg，0.5mmol)、4-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.5mmol)、KOAc(196mg，2.0mmol)、Boc2O(210mg，1.0mmol)和Pd(dppf)Cl2(40mg)在二噁烷/水(30mL/3mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，用DCM稀释残余物、过滤，浓缩，并通过色谱(PE/EA，5/1)纯化+ 以得到为黄色油状物的标题化合物(180mg，粗品)。m/e 687(M+H)。 [0834] 实施例79 [0835] N-(2-(3-(哌啶-4-基氧基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0836] [0837] 将5-(叔丁氧基羰基(2-(3-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(170mg，0.25mmol)溶解在30mL的HCl/Et2O(饱和的)中。在室温下将其搅拌过夜。将混合物浓缩以得到残余物，用水稀释残余物，并通过EA萃取。使用饱和NaHCO3溶液将水相调节至11。将其浓缩且通过制备型TLC进一步纯化残余物，以提供为黄色固体的标题化合物(20mg，21％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.26(1H，d，J＝6.0Hz)，8.18(1H，s)，8.04(1H，s)，7.96(1H，s)，7.93(1H，t，J＝3.0Hz)，7.56(2H，m)，7.42(1H，t，J＝9.0Hz)，7.14(1H，dd，J＝9.0Hz，J＝3.0Hz)，6.87(1H，d，J＝6.0Hz)，+ 5.80(1H，m)，3.38(2H，m)，3.30(2H，m)，2.16(2H，m)，2.11(2H，m)；m/e 387(M+H)。 [0838] 实施例80 [0839] 2-(3-溴-4-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺 [0840] [0841] 将2-氯-N-环丙基乙酰胺(1.7g，13.1mmol)、3-溴-4-氟苯酚(2.5g，13.1mmol)和K2CO3(2.7g，19.6mmol)在20mL丙酮中的溶液于60℃加热16小时。将混合物过滤并浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱(PE/EA，3/1)纯化以得到为黄色固体的标题化合物(2.5g，66％)。m/e 289(M+H)+。 [0842] 实施例81 [0843] N-环丙基-2-(4-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺 [0844] [0845] 将2-(3-溴-4-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺(2.5g，8.7mmol)、Pin2B2(3.3g，13.0mmol)、Pd(dppf)Cl2(330mg)和乙酸钾(2.6g，26.0mmol)在35mL二噁烷中的混合物脱气并用N2吹扫，于80℃加热14小时。将混合物浓缩以得到残余物，用EtOAc(200mL)稀释残余物、过滤、浓缩并通过色谱(EA∶PE，1∶5)纯化以得到为黄色固体的标题化合物+ (600mg，21％)。m/e 336(M+H)。 [0846] 实施例82 [0847] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)嘧啶-2-基)-4-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺[0848] [0849] 将 N-(2- 氯嘧啶 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 胺 (150mg，0.61mmol)/N- 环丙基-2-(4-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(205mg，0.61mmol)、KOAc(240mg，2.45mmol) 和 Pd(dppf)Cl2(60mg)在二噁烷 / 水(20mL/3mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，用DCM稀释残余物、过滤、浓缩并通过色谱(DCM/MeOH，20/1)纯化，随后通过制备型1 TLC进一步纯化以得到为黄色固体的标题化合物(35mg，14％)。H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.26(1H，d，J＝6.0Hz)，8.17(1H，s)，8.03(1H，s)，7.52(3H，m)，7.13(2H，m)，6.70(1H，d，J＝6.0Hz)，4.53(2H，s)，2.72(1H，t，J＝3.0Hz)，0.75(2H，t，J＝3.0Hz)，0.57(2H，t，+ J＝3.0Hz)；m/e 419(M+H)。 [0850] 实施例83 [0851] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)-4-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺 [0852] [0853] 将N-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(209mg，0.80mmol)、N-环丙基-2-(4-氟-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(270mg，0.80mmol)、KOAc(316mg，3.22mmol)和Pd(dppf)Cl2(60mg)在二噁烷/水(20mL/3mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，用DCM稀释残余物、过滤、浓缩并通过色谱(DCM/MeOH，20/1)纯化，随后通过制备型TLC进一步纯化以得到为黄色固体的标题化合物(35mg，10％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.16(1H，s)，8.12(1H，s)，8.02(1H，s)，7.70(1H，dd，J＝9.0Hz，J＝3.0Hz)，7.54(1H，d，J＝9.0Hz)，7.44(1H，m)，7.10(2H，m)，4.46(2H，s)，2.69(1H，m)，2.31(3H，s)，0.73(2H，t，J＝3.0Hz)，0.55(2H，t，J＝3.0Hz)；m/e 433(M+H)+。 [0854] 实施例84 [0855] 2-(3-溴-5-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺 [0856] [0857] 将2-氯-N-环丙基乙酰胺(2.8g，20.9mmol)、3-溴-5-氟苯酚(4.0g，20.9mmol)和K2CO3(4.3g，31.4mmol)在40mL丙酮中的溶液于60℃加热16小时。将混合物过滤并浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱(PE/EA，3/1)纯化以得到为黄色固体的标题化合物+(4.3g，71％)。m/e 288(M+H)。 [0858] 实施例85 [0859] N-环丙基-2-(3-氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺 [0860] [0861] 将2-(3-溴-5-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺(4.3g，14.9mmol)、Pin2B2(5.7g，22.4mmol)、Pd(dppf)Cl2(600mg)和乙酸钾(4.4g，44.8mmol)在50mL二噁烷中的溶液脱气并用N2吹扫，于80℃加热14小时。将混合物浓缩以得到残余物，用EtOAc(200mL)稀释残余物、过滤、浓缩并通过色谱(EA∶PE，1∶5)纯化以得到为黄色固体的标题化合物(3.2g，+ 64％)。m/e 336(M+H)。 [0862] 实施例86 [0863] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)嘧啶-2-基)-5-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺[0864] [0865] 将 N-(2- 氯嘧啶 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 胺 (340mg，1.4mmol)、N- 环丙基-2-(3-氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(650mg，1.9mmol)、CsF(835mg，5.5mmol)和Pd(dppf)Cl2(200mg)在二噁烷/水(20mL/3mL)中的混合物脱气并用N2冲洗，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，用DCM稀释残余物、过滤、浓缩并通过(DCM/MeOH，20/1)纯化以得到为黄色固体的标题化合物1 (80mg，14％)。H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.26(1H，d，J＝6.0Hz)，8.08(1H，s)，8.06(1H，s)， 7.78(1H，s)，7.65(1H，dd，J＝9.0Hz，J＝3.0Hz)，7.58(2H，s)，6.89(1H，dt，J＝9.0Hz，J＝3.0Hz)，6.66(1H，d，J＝6.0Hz)，4.58(2H，s)，2.74(1H，m)，0.76(2H，t，J＝3.0Hz)，+ 0.58(2H，t，J＝3.0Hz)；m/e 419(M+H)。 [0866] 实施例87 [0867] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)-5-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺 [0868] [0869] 将N-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(360mg，1.4mmol)、N-环丙基-2-(3-氟-5-的混合物(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(650mg，1.9mmol)、CsF(835mg，5.5mmol)和Pd(dppf)Cl2(200mg)在二噁烷/水(20mL/3mL)中的混合物脱气并用N2冲洗，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，将其用DCM稀释残余物、过滤、浓缩并通过色谱(DCM/MeOH，20/1)纯化以得到为黄色固1 体的标题化合物(60mg，10％)。H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.14(1H，s)，8.04(2H，m)，7.70(2H，m)，7.57(2H，m)，6.81(1H，dt，J＝9.0Hz，J＝3.0Hz)，4.51(2H，s)，2.72(1H，m)，2.29(3H，+ s)，0.72(2H，t，J＝3.0Hz)，0.57(2H，t，J＝3.0Hz)；m/e 433(M+H)。 [0870] 实施例88 [0871] 3-((3-溴苯氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0872] [0873] 在氮气氛围下于0℃搅拌3-(羟甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(935mg，4.35mmol)、3-溴苯酚(753mg，4.35mmol)和PPh3(1.71mg，6.53mmol)在无水THF(30mL)中的溶液。在5分钟时间内向该混合物逐滴加入DEAD(1.14g，6.53mmol)，通过TLC监测反应。在起始原料完全消失后，将混合物倒入EA(50mL)中，用盐水洗涤(3×20mL)，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压蒸发，通过柱色谱(PE/EA，10/1)纯化所得的油状物以得到标题化合物(0.8g，粗+ 品)。m/e 370(M+H)。 [0874] 实施例89 [0875] 3-((3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 [0876] [0877] 将3-((3-溴苯氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.7g，1.9mmol)、Pin2B2(0.72g，2.8mmol)、Pd(dppf)Cl2(154mg)和乙酸钾(556mg，5.67mmol)在二噁烷(50mL)中的溶液脱气并用N2吹扫，于80℃加热14小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水洗涤(3×30mL)，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压蒸发，用柱色+ 谱(EA∶PE，1∶5)纯化所得的油状物以得到标题化合物(0.9g，粗品)。m/e 418(M+H)。 [0878] 实施例90 [0879] 5-(叔丁氧基羰基(2-(3-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基)甲氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0880] [0881] 将5-(叔丁氧基羰基(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(240mg，0.54mmol)、3-((3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(270mg，0.65mmol)、CsF(788mg，5.4mmol)、Boc2O(353mg，1.62mmol)和Pd(dppf)Cl2(88mg)在二噁烷/水(20mL/2mL)中的混合物脱气并用N2冲洗，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水洗涤(30mL×3)，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压蒸发，用柱色谱(DCM∶MeOH，50∶1)纯化所得的油状物以得到为黄色油状物的标题化合物(0.1g)。m/e 701(M+H)+。 [0882] 实施例91 [0883] N-(2-(3-(哌啶-3-基甲氧基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0884] [0885] 将5-(叔丁氧基羰基(2-(3-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基)甲氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.14mmol)溶解在HFIP(3mL)中，采用微波将该溶液于150℃搅拌1小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物通过制备型TLC(DCM∶MeOH，4∶1)纯化以得到为黄色固体的标题化合物(40mg，70％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.26(d，J＝8.4Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.07(s，1H)，7.91-7.88(m，2H)， 7.61-7.52(m，2H)，7.44(t，J ＝ 8.0Hz，1H)，7.14-7.12(m，1H)，6.74(d，J ＝ 6.4Hz，1H)， 4.11-4.07(m，1H)，3.97-3.93(m，1H)，3.58-3.54(m，1H)，3.41-3.31(m，1H)，3.00-2.89(m， 2H)，2.36-2.27(m，1H)，2.04-1.97(m，1H)，1.85-1.78(m，1H)，1.56-1.45(m，1H)；m/e 401(M+H)+。 [0886] 实施例92 [0887] 3-(3-溴苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯 [0888] [0889] 在氮气氛围下于0℃搅拌3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.0g，5.8mmol)、3-溴苯酚(1.08g，5.8mmol)和PPh3(2.28g，8.7mmol)在无水THF(35mL)中的溶液。在5分钟时间内向该混合物逐滴加入DEAD(1.51g，8.7mmol)，通过TLC监测反应。在起始原料完全消失后，将混合物倒入EA(50mL)中，用盐水洗涤(20mL×3)，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压蒸发，通过柱色谱(PE/EA，10/1)纯化所得的油状物以得到标题化合物(0.8g，粗品)。m/e +342(M+H)。 [0890] 实施例93 [0891] 3-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯 [0892] [0893] 将3-(3-溴苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.8g，2.3mmol)、Pin2B2(1.91g，7.5mmol)、Pd(dppf)Cl2(408mg)和乙酸钾(1.47g，15mmol)在二噁烷(50mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于80℃加热14小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水洗涤(3×30mL)，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压蒸发，用柱色谱(EA∶PE，1∶5)纯化所得的油状物以得到为黄色油状物的标题化合物(450mg，粗品)。 + m/e 390(M+H)。 [0894] 实施例94 [0895] 5-(叔丁氧基羰基(2-(3-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0896] [0897] 将5-(叔丁氧基羰基(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(466mg，1.05mmol)、3-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(488mg，1.25mmol)、CsF(1.53g，10.5mmol)、Boc2O(687mg，3.15mmol)和Pd(dppf)Cl2(172mg)在二噁烷/水(30mL/3mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水洗涤(3×30mL)，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压蒸发，通过柱色谱(PE/EA，5/1)纯化所得的+ 油状物以得到为黄色固体的标题化合物(200mg，28.5％)。m/e 673(M+H)。 [0898] 实施例95 [0899] N-(2-(3-(吡咯烷-3-基氧基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0900] [0901] 将5-(叔丁氧基羰基(2-(3-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-3-基氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(135mg，0.25mmol)溶解在2mL浓盐酸中。将其在室温下搅拌5分钟。加入10mL水，然后用1N的NaOH调节pH9-10。用EA萃取(30mL×3)，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压蒸发，通过制备型TLC(DCM/MeOH，5/1)纯化所得的油1 状物以得到为黄色固体的标题化合物(45mg，62.5％)。H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.27(d，J ＝ 6.0Hz，1H)，8.17(s，1H)，8.05(s，1H)，7.98(d，J ＝ 7.6Hz，1H)，7.90-7.86(m，1H)， 7.59-7.53(m，2H)，7.44(t，J＝8.0Hz，1H)，7.11(dd，J＝2.0Hz，J＝2.4Hz，1H)，6.67(d，J+ ＝6.0Hz，1H)，5.28-5.26(m，1H)，3.62-3.31(m，4H)，2.40-2.25(m，2H)；m/e 373(M+H)。 [0902] 实施例96 [0903] 2-(5-溴-2-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺 [0904] [0905] 将2-氯-N-环丙基乙酰胺(1.0g，7.5mmol)、5-溴-2-氟苯酚(1.44g，7.5mmol)和K2CO3(1.55g，11.25mmol)在30mL丙酮中的溶液于60℃加热16小时。将混合物过滤并浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱(PE/EA，2/1)纯化以得到为黄色固体的标题化合+物(1.2g，55.3％)。m/e 288(M+H)。 [0906] 实施例97 [0907] N-环丙基-2-(2-氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺 [0908] [0909] 将2-(5-溴-2-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺(0.83g，2.88mmol)、Pin2B2(1.1g，4.33mmol)、Pd(dppf)Cl2(120mg)和乙酸钾(0.85g，8.64mmol)在35mL二噁烷中的混合物脱气并用N2吹扫，于80℃加热14小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用EtOAc(100mL)稀释，用盐水洗涤(3×30mL)，经Na2SO4干燥并过滤。将滤液减压蒸发，通过柱色谱(PE/EA，2/1)纯化所得的油状物以得到为油状物的标题化合物(600mg，21％)。m/e + 336(M+H)。 [0910] 实施例98 [0911] 2-(5-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)嘧啶-2-基)-2-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺[0912] [0913] 将 N-(2- 氯嘧啶 -4- 基 )-1H- 吲唑 -5- 胺 (147mg，0.6mmol)、N- 环丙基-2-(2-氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(300mg，0.89mmol)、KOAc(235mg，2.4mmol)和Pd(dppf)Cl2(70mg)在二噁烷/水(20mL/3mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用DCM(30mL)稀释并过滤。浓缩滤液并通过柱色谱(DCM/MeOH，10/1)纯化以得到1 为黄色固体的标题化合物(35mg，14％)。H NMR(400MHz，DMSO)δ13.01(s，1H)，9.65(s， 1H)，8.33(d，J ＝ 5.6Hz，1H)，8.21-8.20(m，1H)，8.09-7.96(m，3H)，7.62-7.55(m，2H)， 7.39-7.34(m，1H)，6.68(d，J ＝ 6.0Hz，1H)，4.64(s，2H)，2.70-2.65(m，1H)，0.63-0.59(m，+ 2H)，0.48-0.43(m，2H)；m/e 419(M+H)。 [0914] 实施例99 [0915] 2-(5-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)-2-氟苯氧基)-N-环丙基乙酰胺 [0916] [0917] 将N-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(100mg，0.38mmol)、N-环丙基-2-(2-氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(130mg，0.38mmol)、KOAc(151mg，1.55mmol)和Pd(dppf)Cl2(50mg)在二噁烷/水(20mL/3mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用DCM(30mL)稀释并过滤。浓缩滤液并通过柱色谱(DCM/MeOH，10/1)纯化 1 以得到为黄色固体的标题化合物(10mg，2.9％)。H NMR(400MHz，DMSO)δ13.01(s，1H)， 8.62(s，1H)，8.21(s，1H)，8.17(d，J ＝ 4.0Hz，1H)，8.11-8.09(m，2H)，7.97-7.94(m，1H)， 7.85-7.82(m，1H)，7.71-7.68(m，1H)，7.59-7.56(m，1H)，7.31-7.26(m，1H)，4.58(s，2H)，+ 2.68-2.63(m，1H)，2.25(s，3H)，0.66-0.58(m，2H)，0.47-0.43(m，2H)；m/e 433(M+H)。 [0918] 实施例100 [0919] N-(6-氯-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [0920] [0921] 将N-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(0.88g，3.17mol)、吡咯烷(225mg，3.17mmol)和DIPEA(818mg，6.34mmol)在BuOH(30mL)中的混合物于120℃搅拌12小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物通过制备型HPLC纯化以得到为白色固体的标题化合+ 物(0.8g，80％)。m/e 315(M+H)。 [0922] 实施例101 [0923] 5-(6-(3-(2-(环丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0924] [0925] 将N-(6-氯 -2-(吡咯烷-1- 基)嘧啶-4-基 )-1H-吲唑-5-胺 (300mg，0.95mmol)、N-环丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(452mg，1.43mmol)、CsF(1.38g，1.55mmol)和Pd(dppf)Cl2(150mg)在二噁烷/水(30mL/3mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于100℃加热16小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用DCM(50mL)稀释并过滤。浓缩滤液并通过柱色谱(DCM/MeOH中，10/1)纯+ 化以得到为黄色固体的标题化合物(90mg，16％)。m/e 570(M+H)。 [0926] 实施例102 [0927] 2-(3-(6-(1H-吲唑-5-基氨基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基)苯氧基)-N-环丙基乙酰胺 [0928] [0929] 将5-(6-(3-(2-(环丙基氨基)-2-氧代乙氧基)苯基)-2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-4-基氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(90mg，0.16mmol)溶解在HFIP(2mL)中，采用微波将溶液于150℃搅拌1小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物通过制备型TLC纯 1 化(DCM∶MeOH，4∶1)以得到为黄色固体的标题化合物(35mg，46.7％)。H NMR(400MHz，DMSO)δ12.92(s，1H)，9.27(s，1H)，8.32(s，1H)，8.19(d，J ＝ 4.4Hz，1H)，7.99(s，1H)， 7.60(s，1H)，7.56-7.47(m，3H)，7.39(t，J＝8.0Hz，1H)，7.02(dd，J＝2.0Hz，J＝2.0Hz， 1H)，6.47(s，1H)，4.50(s，2H)，3.63-3.60(m，4H)，2.73-2.66(m，1H)，1.95-1.98(m，4H)， 0.66-0.61(m，2H)，0.51-0.47(m，2H)；m/e 470(M+H)。 [0930] 实施例103 [0931] 3-(3-溴苯基)-N-环丙基丙酰胺 [0932] [0933] 将3-(3-溴苯基)丙酸(3.0g，13.1mmol)加入到SOCl2(10mL)的溶液中并于70℃搅拌2小时。将混合物在减压下浓缩。将残余物溶解于CH2C12(20mL)中，然后于0℃逐滴加入到环丙胺(1.17g，19.6mmol)和三乙胺(4.0g，39.3mmol)的混合物中，然后将反应混合物在环境温度下搅拌过夜。用1N的HCl淬灭反应混合物，用盐水洗涤有机层、干燥、浓缩成残余物。将残余物通过色谱(PE/EA：1/1至1/2)纯化以得到为白色固体的标题化合物(2.8g，79％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36(m，2H)，7.15(m，2H)，5.53(s，1H)，2.94(t，2H)，2.68(s，1H)，2.41(t，2H)，0.77(m，2H)，0.44(m，2H)。m/e 268(M+H)+。 [0934] 实施例104 [0935] N-环丙基-3-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙酰胺 [0936] [0937] 将PdCl2(dppf)(420mg，0.5mmol)加入到3-(3-溴苯基)-N-环丙基丙酰胺(2.8g，10.3mmol)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧硼杂环戊烷)(3.9g，15.5mmol)和KOAc(2.5g，25.7mmol)在二噁烷(80mL)中的混合物中。在氮气下将混合物于100℃搅拌过夜。然后将反应混合物真空浓缩，并将残余物通过色谱(PE/EA：5/1 1 至1/1)纯化以得到为灰白色固体的标题化合物(3.0g，92％)。H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.60-7.67(m，2H)，7.27-7.33(m，2H)，5.47(s，1H)，2.92-2.97(m，2H)，2.41(t，2H)，+ 2.04(s，1H)，1.34(s，12H)，0.70-0.72(m，2H)，0.38-0.40(m，2H)；m/e 316(M+H)。 [0938] 实施例105 [0939] 5-(叔丁氧基羰基(2-(3-(3-(环丙基氨基)-3-氧代丙基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0940] [0941] 在N2气流下将PdCl2(dppf)(165mg，0.21mmol)加入到N-环丙基-3-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基)丙酰胺(380mg，1.2mmol)、Boc2O(650mg， 3.0mmol)、CsF(600mg，4.0mmol)和5-(叔丁氧基羰基(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(446mg，1.0mmol)在二噁烷/H2O(30ml，10/1)中的混合物中。在氮气氛围下将混合物于100℃搅拌24小时。该反应混合物用EA(60mL)萃取，用盐水洗涤、干燥、真空浓缩，并将残余物通过色谱(PE/EA：5/0至1/5)纯化以得到为黄色油状物的标题化合物+ 产物(240mg)。m/e 599(M+H)。 [0942] 实施例106 [0943] 3-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙酰胺 [0944] [0945] 将5-(叔丁氧基羰基(2-(3-(3-(环丙基氨基)-3-氧代丙基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(220mg，0.367mmol)加入到饱和HCl在乙醚(30mL)中的混合物中。在环境温度下将该混合物搅拌3小时。然后将混合物过滤，并将黄色固体加入到盐酸(5mL)中，然后搅拌10分钟，并用H2O(50ml)稀释、过滤。将得到的灰白色晶体作为盐酸盐加入到饱和NaHCO3(10ml)并搅拌2小时。将混合物过滤，用H2O(10ml)洗涤固体、1 干燥以得到为灰白色固体的标题化合物(50mg，34％)。H NMR(300MHz，DMSO)δ13.00(s， 1H)，9.62(s，1H)，8.34-8.32(m，3H)，8.22(m，1H)，8.06(s，1H)，7.85(s，1H)，7.55(m，1H)， 7.40(m，3H)，6.66(d，1H)，2.90(m，2H)，2.60(m，1H)，2.40(m，2H)，0.57(m，2H)，0.33(m，2H)。 + m/e 399(M+H)。 [0946] 实施例107 [0947] 2-(3-溴苯基硫基)-N-环丙基乙酰胺 [0948] [0949] 将2-氯-N-环丙基乙酰胺(1.33g，10mmol)、3-溴苯硫酚(1.6g，8.5mmol)和K2CO3(4.8g，35mmol)在30mL丙酮中的溶液于70℃下加热过夜。将混合物过滤并浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱(PE/EA，1∶1)纯化以得到为白色固体的标题化合物1 (2.4g，96％)。H NMRδ(300MHz，CDCl3)7.39(1H，m)，7.31(1H，m)，7.14(2H，m)，6.71(1H，+ s)，3.58(2H，s)，2.64-2.77(1H，m)，0.73-0.84(2H，m)，0.41(2H，m)；m/e 286(M+H)。 [0950] 实施例108 [0951] N-环丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯硫基)乙酰胺 [0952] [0953] 将2-(3-溴苯基硫基)-N-环丙基乙酰胺(2.43g，9.1mmol)、Pin2B2(3.5g，13.7mmol)、Pd(dppf)Cl2(730mg)和乙酸钾(2.67g，27.3mmol)在30mL二噁烷中的混合物脱气并用N2吹扫，于95℃加热12小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用EtOAc(200mL)稀释、过滤、浓缩并通过色谱(EA∶PE，1∶1)纯化以得到为黄色油状物的标题化合物(2.4g，82％)。m/e 286(M+H)+。 [0954] 实施例109 [0955] 5-(叔丁氧基羰基(2-(3-(2-(环丙基氨基)-2-氧代乙硫)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [0956] [0957] 将N-环丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯硫基)乙酰胺(380mg，1.1mmol)、N-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(246mg，1.0mmol)、CsF(730mg，5.0mmol)、Boc2O(650mg，3.0mmol) 和Pd(dppf)Cl2(1700mg)在二噁烷/ 水(27mL/3mL)中的混合物脱气并用N2吹扫，于100℃加热24小时。将混合物浓缩以得到残余物，将残余物用DCM稀释、过滤，浓缩，并通过色谱(DCM/MeOH中，20/1)纯化以得到为黄色+固体的粗制标题化合物(200mg)。m/e 617(M+H)。 [0958] 实施例110 [0959] 2-(3-(4-(1H-吲唑-5-基氨基)嘧啶-2-基)苯硫基)-N-环丙基乙酰胺 [0960] [0961] 将5-(叔丁氧基羰基(2-(3-(2-(环丙基氨基)-2-氧代乙硫)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(209mg，0.80mmol)在浓HCl(3mL)中的混合物搅拌10分钟，随后加入冰。用NaHCO3溶液将反应混合物调节至pH10，用CH2Cl2/MeOH(1/1，20ml)萃取。过滤并浓缩滤液以得到残余物，将残余物通过色谱(DCM/MeOH，20/1)纯化，随后进一步1 通过制备型TLC纯化以得到为黄色固体的标题化合物(25mg，18％)。H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.36(1H，m)，8.24(1H，d，J ＝ 6Hz)，8.14(2H，m)，8.05(1H，s)，7.56(2H，s)，7.49(1H，m)，7.41(1H，d，J＝6Hz)，6.63(1H，d，J＝6Hz)，3.60(2H，s)，2.58(1H，m)，0.61(2H，m)，+ 0.36(2H，m)；m/e 417(M+H)。 [0962] 实施例111 [0963] 2-(3-(4-氨基嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [0964] [0965] 在N2下将2-氯嘧啶-4-胺(0.50g，3.8mmol)、N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(1.46g，4.6mmol)、CsF(1.75g，11.4mmol)和Pd(PPh3)4(0.2g，0.2mmol)在二噁烷(8mL)和H2O(2mL)中的混合物于100℃下搅拌过夜。在冷却至室温后，将混合物在减压下浓缩以得到残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用PE∶EtOAc＝1∶1洗脱)上纯化以得到为无色油状物的标题化合物(400mg，收率36％)。 [0966] 实施例112 [0967] N-异丙基-2-(3-(4-(吡啶-4-基氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙酰胺 [0968] [0969] 在N2下将化合物2-(3-(4-氨基嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(300mg，1.1mmol)、4- 溴吡啶 (258mg，1.3mmol)、Cs2CO3(1026mg，3.3mmol)、Pd2(dba)3(96mg， 0.1mmol)和X-Phos(51mg，0.1mmol)在无水二噁烷(30mL)中的混合物于120℃搅拌过夜。在冷却至室温后，将混合物过滤，浓缩滤液，将残余物用EtOAc洗涤，然后过滤以提供为白色固体的标题化合物(200mg，收率52％)。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ10.09(s，1H)， 8.47-7.92(m，8H)，7.45(t，J ＝ 7.6Hz，1H)，7.12-6.82(m，2H)，4.52(s，2H)，3.99-3.92(m， 1H)，1.06(d，J＝6.8Hz，6H)；m/e 364(M+H)。 [0970] 实施例113 [0971] 2-氯-4-(4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)嘧啶 [0972] [0973] 将2，4-二氯嘧啶(745mg，5mmol)、1，2，3，4，5，6-六氢-[4，4′]联吡啶(811mg，5mmol)和TEA(758mg，7.5mmol)在EtOH(15mL)中的混合物在回流下搅拌过夜。在除去溶剂后，通过柱色谱在硅胶(用石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1-1∶1洗脱)上纯化得到为白色固体的标题化合物(500mg，收率36.4％)。 [0974] 实施例114 [0975] N-异丙基-2-(3-(4-(4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙酰胺 [0976] [0977] 将2-氯-4-(4-(吡啶-4-基)哌啶-1-基)嘧啶(500mg，1.82mmol)，加入Pd(dppf)2Cl2(50mg)、Na2CO3(579mg，5.46mmol)和N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1， 3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(871mg，2.73mmol)在二噁烷/水(10∶1， 10mL)中的混合物于100℃搅拌过夜。在除去溶剂后，用P-HPLC纯化残余物以得到为固 1 体的标题化合物(300mg，收率35.2％)。H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.80(d，J＝6.8Hz， 2H)，8.23(d，J ＝ 7.6Hz，1H)，8.10(d，J ＝ 6.4Hz，2H)，7.83-7.81(m，2H)，7.59(t，J ＝ 8.4Hz，1H)，7.37-7.20(m，2H)，5.54(d，J ＝ 13.2Hz，1H)，4.62(s，2H)，4.52(d，J ＝ 14Hz， 1H)，4.12-4.06(m，1H)，3.61-3.47(m，4H)，2.26-1.89(m，4H)，1.17(d，J ＝ 7.6Hz，6H)；m/e + 432(M+H)。 [0978] 实施例115 [0979] 4，6-二氯-2-碘嘧啶 [0980] [0981] 向化合物 4，6- 二氯嘧啶 -2- 胺 (39g，237.82mmol) 在 CH3CN(300mL)、CH2I2(1000mL)中的溶液加入t-BuONO(129.3g，1.25mol)并将该混合物加热至回流过夜。将混合物在减压下浓缩，并将残余物通过柱色谱纯化以得到为黄色固体的标题化合物(30g，收率46％)。 [0982] 实施例116 [0983] 2-(3-(4，6-二氯嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [0984] [0985] 向化合物4，6-二氯-2-碘嘧啶(13.92g，50.64mmol)、N-异丙基-2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙酰胺(18g，56.39mmol)、Na2CO3(13.88g，130.96)在DME(150mL)和水(50mL)中的混合物加入Pd(PPh3)4(5.04g， 4.36mmol)，并在N2下并将该混合物加热至回流过夜。然后将反应混合物倒入水(100mL)中，用EtOAc萃取(150mL×2)，将有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩，并将残余物通过柱色谱纯化以得到为白色固体的标题化合物(9.05g，收率52％)。 [0986] 实施例117 [0987] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-氯嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [0988] [0989] 向化合物2-(3-(4，6-二氯嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(5.7g，16.75mmol)在iPrOH(110mL)中的溶液加入DIPEA(6.5g，48.82mmol)和1H-吲唑-5-胺(2.23g，17.25mmol)，并将反应混合物加热至回流过夜。将反应混合物在减压下浓缩，并将 1 残余物通过柱色谱纯化以得到标题化合物(3.22g，收率44％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.05(s，1H)，9.90(s，H)，8.09(b，2H)，7.95-7.89(m，3H)，7.59-7.41(m，3H)，7.12(d，J＝ 8.0Hz，1H)，6.66(s，1H)，4.51(s，2H)，4.00-3.94(m，1H)，1.08(d，J ＝ 6.4Hz，6H)；m/e + 437(M+H)。 [0990] 实施例118 [0991] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [0992] [0993] 向2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-氯嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(300mg，0.687mmol)在iprOH(20mL)中的搅拌溶液在室温下加入Et3N(3mL)和哌嗪(592mg，6.87mmol)。将混合物于110℃搅拌过夜。然后反应混合物在减压下浓缩，并将残余 1 物通过制备型HPLC纯化以提供标题化合物(114mg，收率34％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.91(s，1H)，9.01(s，1H)，8.08(s，1H)，8.02(s，1H)，7.94-7.89(m，3H)，7.51-7.35(m， 3H)，7.04(dd，J＝8.0和2.0Hz，1H)，5.82(s，1H)，4.50(s，2H)，3.98-3.92(m，1H)，3.48(b，+ 4H)，2.76(b，4H)，1.07(d，J＝6.8Hz，6H)；m/e 487(M+H)。 [0994] 实施例119 [0995] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-吗啉代吡啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [0996] [0997] 使用与2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(实施例118)相同的程序来合成标题化合物(112mg，收率 1 34％ )。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.93(s，1H)，9.09(s，1H)，8.08(s，1H)，8.03(s，1H)， 7.95-7.91(m，3H)，7.49-7.38(m，3H)，7.05(d，J ＝ 8.0Hz，1H)，5.84(s，1H)，4.50(s，2H)，+ 3.94(b，1H)，3.69(s，4H)，3.52(s，4H)，1.06(d，J＝6.8Hz，6H)；m/e 488(M+H)。 [0998] 实施例120 [0999] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(4-甲基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [1000] [1001] 使用与2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(实施例118)相同的程序来合成标题化合物(100mg，收率 1 65％ )。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.94(s，1H)，9.00(s，1H)，8.13(s，1H)，8.05(s，1H)， 7.97-7.91(m，3H)，7.53-7.05(m，4H)，5.75(s，1H)，4.53(s，2H)，4.02-3.62(m，5H)，2.64(b，+ 2H)，2.50(b，2H)，2.26(s，3H)，1.92(b，2H)，1.09(d，J＝6.8Hz，6H)；m/e 515(M+H)。 [1002] 实施例121 [1003] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [1004] [1005] 使用与2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(实施例118)相同的程序来合成标题化合物(110mg，收率 1 32％ )。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.90(s，1H)，8.96(s，1H)，8.11(s，1H)，8.02(s，1H)， 7.92-7.03(m，5H)，5.74(s，1H)，4.50(s，2H)，3.96-3.68(m，3H)，2.85(b，2H)，2.66(b，2H)，+ 2.31(b，2H)，1.77(b，2H)，1.07(d，J＝6.8Hz，6H)；m/e 501(M+H)。 [1006] 实施例122 [1007] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(二甲基氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [1008] [1009] 使用与2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(实施例118)相同的程序来合成标题化合物(101mg，收率 1 33％ )。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.90(s，1H)，9.00(s，1H)，8.10(s，1H)，8.02(s，1H)， 7.97-7.88(m，3H)，7.48(s，2H)，7.38(t，J＝8.0Hz，1H)，7.03(d，J＝7.2Hz，1H)，5.73(s，+ 1H)，4.50(s，2H)，3.98-3.93(m，1H)，3.07(s，6H)，1.08(d，J＝6.8Hz，6H)；m/e 446(M+H)。 [1010] 实施例123 [1011] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(哌啶-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [1012] [1013] 使用与2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(实施例118)相同的程序合成标题化合物(110mg，收率 1 33％ )。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.91(s，1H)，8.98(s，1H)，8.09(s，1H)，8.02(s，1H)， 7.94-7.89(m，3H)，7.49-7.03(m，5H)，5.85(s，1H)，5.00(s，2H)，3.96-3.93(m，1H)，3.58(b，+ 4H)，1.55(b，6H)，1.07(d，J＝6.8Hz，6H)；m/e 486(M+H)。 [1014] 实施例124 [1015] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [1016] [1017] 使用与2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(实施例118)相同的程序来合成标题化合物(110mg，收率 1 33％ )。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.00(s，1H)，9.07(s，1H)，8.15(s，1H)，8.08(s，1H)， 8.05-7.92(m，3H)，7.53(s，1H)，7.42(t，J＝8.0Hz，1H)，7.07(d，J＝7.6Hz，1H)，5.79(s， 1H)，4.53(s，2H)，4.03-3.95(m，1H)，2.78(b，2H)，3.59-3.56(m，2H)，3.29(s，3H)，3.07(s，+ 3H)，1.10(d，J＝6.8Hz，1H)；m/e 490(M+H)。 [1018] 实施例125 [1019] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [1020] [1021] 使用与2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(实施例118)相同的程序来合成标题化合物(100mg，收率 1 29％ )。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.91(s，1H)，8.99(s，1H)，8.09(s，1H)，8.02(s，1H)， 7.96-7.86(m，3H)，7.49-7.03(m，4H)，5.71(s，1H)，4.46(s，2H)，4.00-3.92(m，1H)，3.67(b，+ 2H)，3.30(b，2H)，3.01(s，3H)，2.15(s，6H)，1.07(d，J＝6.8Hz，6H)；m/e 503(M+H)。 [1022] 实施例126 [1023] 2-(3-(4-氯-6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [1024] [1025] 向化合物2-(3-(4，6-二氯嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(1g，2.9mmol)在甲苯(24mL)中的溶液加入NaOH(232mg，5.8mmol)和2-(二甲基氨基)乙醇(261mg，2.9mmol)。将所得混合物于110℃搅拌3小时。然后将反应混合物用水稀释并用DCM萃取。将有机层经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩以提供残余物，将残余物通过柱色谱在硅胶(用DCM∶MeOH＝100∶1洗脱)上纯化以得到为固体的标题化合物(550mg，收率48％)。 [1026] 实施例127 [1027] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)-6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺 [1028] [1029] 向化合物2-(3-(4-氯-6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)嘧啶-2-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(100mg，0.25mmol)在EtOH(1mL)中的溶液加入1H-吲唑-5-胺(101.5mg，0.76mmol)和TFA(0.25mL)。将所得混合物加热至80℃过夜。将混合物浓缩并通过色谱在硅胶柱上纯化，并再次通过制备型TLC纯化以得到为浅黄色固体的标题化合物(100mg，收 1 率16％)。H NMR(400MHz，MeOD)δ8.05-7.96(m，4H)，7.54-7.49(m，2H)，7.40-7.08(m，2H)， 5.94(s，1H)，4.55(s，4H)，4.14-4.06(m，1H)，2.79-2.76(m，2H)，2.33(s，6H)，1.16(d，J ＝+ 6.8Hz，6H)；m/e 490(M+H)。 [1030] 实施例128 [1031] 吗啉-4-羧酸3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基酯[1032] [1033] 在0℃向3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(500mg，2.27mmol)、DMAP(277.3mg)和Et3N(450.46mg，4.54mmol)在DCM(10mL)中的混合物逐滴地加入吗啉-4-羰酰氯(339.5mg，2.27mmol)在DCM(10mL)中的溶液。将水加入到该混合物中，并用DCM萃取(40mL×2)。将有机相用Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到标题化合物(600mg，收率79％)，将其直接用于下一步骤。 [1034] 实施例129 [1035] 吗啉-4-羧酸3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基酯 [1036] [1037] 在室温下向5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.2243mmol)在EtOH(3mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液加入Na2CO3(47.54mg，0.4485mmol)、(Boc)2O(93.29mg，0.4485mmol)和吗啉-4-羧酸3-(4，4，5，5-四甲基-1，3， 2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基酯(149.44mg，0.4485mmol)。通过将氮气鼓入穿过该溶液将混合物脱气，加入Pd(PPh3)2Cl2(15.07mg，0.02243mmol)，将混合物在微波辐射下于110℃加热20分钟。将混合物干燥并在减压下浓缩并将残余物通过柱色谱在硅胶(DCM∶MeOH＝ 1 50∶1)上纯化以得到标题化合物(50mg，收率53％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.02(s， 1H)，9.66(s，1H)，8.33-8.18(m，4H)，7.55-7.51(m，3H)，7.25(d，J＝ 8.0Hz，1H)，6.67(d，J+ ＝5.6Hz，1H)，3.64(b，6H)，3.45(b，2H)；m/e 417(M+H)。 [1038] 实施例130 [1039] 二甲基氨基甲酸3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基酯[1040] [1041] 在0℃向3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(500mg，2.23mmol)、DMAP(277.4mg)和Et3N(450.46mg，4.46mmol)在DCM(15mL)中的混合物逐滴地加入二甲基氨基甲酰氯(238.6mg，2.23mmol)在DCM(15mL)中的溶液，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将水加入到该混合物中，并用DCM萃取(40mL×2)。将有机相用Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到标题化合物(500mg，收率76％)，将其直接用于下一步骤。 [1042] 实施例131 [1043] 二甲基氨基甲酸3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基酯 [1044] [1045] 在室温下向5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.2243mmol)在EtOH(3mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液加入Na2CO3(47.54mg，0.4485mmol)、(Boc)2O(93.29mg，0.4485mmol)和二甲基氨基甲酸3-(4，4，5，5-四甲基-1， 3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯基酯(130.58mg，0.4485mmol)。通过将氮气鼓入穿过该溶液将混合物脱气，加入Pd(PPh3)2Cl2(15.07mg，0.02243mmol)，并将混合物在微波辐射下于 110℃加热20分钟。将混合物在减压下浓缩并将残余物通过柱色谱在硅胶(DCM∶MeOH＝ 1 50∶1)上纯化以得到标题化合物(30mg，收率37％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.02(s， 1H)，9.66(s，1H)，8.34-8.04(m，5H)，7.55-7.47(m，3H)，7.21(d，J＝ 8.0Hz，1H)，6.67(d，J+ ＝5.6Hz，1H)，3.07(s，3H)，2.94(s，3H)；m/e 375(M+H)。 [1046] 实施例132 [1047] 3-((3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)吡啶[1048] [1049] 在搅拌下于0℃向3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(1.5g，6.8mmol)在DMF(20mL)中的溶液分批加入NaH(0.82g，20.4mmol)。30分钟后，在0℃分批加入化合物3-(氯甲基)吡啶盐酸盐(1.4g，8.9mmol)，并将所得混合物温热至20℃并搅拌16小时。将其用水淬灭，用EtOAc萃取(100mL×3)，并将萃取液用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩，并将残余物通过色谱在硅胶柱(洗脱用PE∶EA＝10∶1至2∶1洗脱)上纯化以得到为白色固体的标题化合物(1g，收率50％)。 [1050] 实施例133 [1051] 1H-吲唑-5-基(2-(3-(吡啶-3-基甲氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯 [1052] [1053] 在N2氛围下将化合物3-((3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)吡啶(1g，3.2mmol)、化合物5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(670mg，1.5mmol)、K2CO3(414mg，3mmol)和Pd(dppf)2Cl2(109mg，0.15mmol)在二噁烷(20mL)和H2O(5mL)中的混合物于90℃加热16小时。然后将其浓缩，并将残余物通过色谱在硅胶柱(用DCM∶MeOH＝100∶1至20∶1洗脱)上纯化以得到为淡红色油状物的标题化合物(370mg，收率50％)。 [1054] 实施例134 [1055] 1H-吲唑-5-基(2-(3-(吡啶-3-基甲氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯 [1056] [1057] 向DCM(5mL)中的(370mg，0.75mmol)加入TFA(5mL)，并将所得的溶液于20℃搅拌3小时。将其浓缩并将残余物溶于DCM/MeOH(10∶1，100mL)中，用含水K2CO3和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物通过色谱在硅胶柱(用DCM∶MeOH＝100∶1至20∶1洗脱)上纯化并于MeOH中重结晶以得到为浅黄色固体的标题化合物(110mg，收率37％)。 1 H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.04(s，1H)，9.67(s，1H)，8.71(s，1H)，8.57(s，1H)，8.35(d，J＝5.6Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.00-7.89(m，4H)，7.56-6.68(m，6H)，5.25(s，2H)。 [1058] 13.02(s，1H)，9.66(s，1H)，8.33-8.18(m，4H)，7.55-7.51(m，3H)，7.25(d，J ＝+8.0Hz，1H)，6.67(d，J＝5.6Hz，1H)，3.64(b，6H)，3.45(b，2H)；m/e 417(M+H)。 [1059] 实施例135 [1060] 4-((3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)吡啶[1061] [1062] 在搅拌下于0℃向化合物3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(1.5g，6.8mmol)在DMF(20mL)中的溶液分批加入NaH(0.82g，20.4mmol)。30分钟后，在0℃分批加入化合物4-(氯甲基)吡啶(1.4g，8.9mmol)，并将所得混合物温热至20℃并搅拌16小时。将其用水淬灭，用EtOAc萃取(100mL×3)，并将萃取液用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物通过色谱在硅胶柱(用PE∶EA＝10∶1至2∶1洗脱)上纯化以得到为白色固体的标题化合物(1g，收率50％)。 [1063] 实施例136 [1064] N-(2-(3-(吡啶-4-基甲氧基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1065] [1066] 在微波反应器中于110℃和N2氛围下将化合物4-((3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)甲基)吡啶(139mg，0.44mmol)(6个批次)、化合物5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(100mg， 0.22mmol)、Na2CO3(47mg，0.44mmol)、Boc2O(96mg，0.44mmol) 和 Pd(PPh3)2Cl2(15.4mg， 0.022mmol)在EtOH(2mL)和H2O(0.2mL)中的混合物加热20分钟。然后将其冷却，用水稀释，用DCM萃取，将萃取物浓缩并将残余物通过色谱在硅胶柱(用DCM∶MeOH＝100∶1至20∶1洗脱)上纯化并从MeOH重结晶以得到为浅黄色固体的标题化合物(110mg， 1 收率23％)。H NMR(400MHz，MeOD)δ8.51(d，J＝5.6Hz，2H)，8.25(d，J＝6.0Hz，1H)， 8.15(s，1H)，8.05-7.94(m，3H)，7.57-7.16(m，6H)，6.65(d，J ＝ 6.0Hz，1H)，5.26(s，2H))； + m/e 395(M+H)。 [1067] 实施例137 [1068] 2-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷[1069] [1070] [1071] 在室温下向3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(800mg，3.636mmol)在DCM(20mL)中的混合物加入KI(1.2g，7.273mmol)、K2CO3(1.307g10.091mmol)和1-溴-2-甲氧基乙烷(1.01g，7.273mmol)。将混合物于80℃搅拌过夜。用DCM(30mL×2)萃取该混合物，将有机相用Na2SO4干燥并在减压下浓缩，并将残余物通过柱色谱纯化以得到标题化合物(550mg，收率50％)。 [1072] 实施例138 [1073] N-(2-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1074] [1075] 在室温下向5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.2243mmol)在EtOH(3mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液加入Na2CO3(47.54mg，0.4485mmol)、(Boc)2O(93.29mg，0.4485mmol)和2-(3-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-4，4，5， 5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷(124.76mg，0.4485mmol)。通过将氮气鼓入穿过该溶液将混合物脱气，然后加入Pd(PPh3)2Cl2(15.07mg，0.02243mmol)，并将混合物在微波辐射下于110℃加热20分钟。将混合物在减压下浓缩并将残余物通过柱色谱在硅胶(DCM∶MeOH＝50∶1)上纯化以得到标题化合物(40mg，收率49％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.01(s，1H)，9.61(s，1H)，8.32(d，J ＝ 5.6Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.01-7.91(m，3H)， 7.55-7.36(m，3H)，7.04(d，J＝7.6Hz，1H)，6.65(d，J＝5.6Hz，1H)，4.16(b，2H)，3.68(b， 2H)；m/e 362(M+H)+。 [1076] 实施例139 [1077] 1H-吲唑-5-基(2-(3-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯 [1078] [1079] 在室温下向5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.2243mmol)在EtOH(3mL)和H2O(0.3mL)中的搅拌溶液，加入Na2CO3(47.54mg，0.4485mmol)、(Boc)2O(93.29mg，0.4485mmol) 和(3- 甲氧基苯基 )硼酸 (68.17mg， 0.4485mmol)。通过将氮气鼓入穿过该溶液将混合物脱气，然后加入Pd(PPh3)2Cl2(15.07mg， 0.02243mmol)，并将混合物在微波辐射下于110℃加热20分钟。将混合物在减压下浓缩并将残余物通过柱色谱在硅胶上纯化以得到标题化合物(80mg，收率85％)。 [1080] 实施例140 [1081] N-(2-(3-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1082] [1083] 在室温下向1H-吲唑-5-基(2-(3-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1g，2.39mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液加入TFA(10mL)，并将混合物在室温下搅拌过夜。然后将混合物在减压下浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化以得到为白色固体的 1 标题化合物(200mg，收率26％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.05(s，1H)，10.02(s，1H)， 8.32(d，J＝6.0Hz，1H)，8.17(s，1H)，8.05(s，1H)，7.89-7.42(m，3H)，7.09(d，J＝7.6Hz，+ 1H)，6.72(d，J＝6.0Hz，1H)，3.83(s，3H)；m/e 318(M+H)。 [1084] 实施例141 [1085] 4-(2-(3-溴代苯氧基)乙基)吗啉 [1086] [1087] 向3-溴苯酚(7.8g，45.2mmol)在DMF(120mL)中的溶液加入4-(2-氯乙基)吗啉(8.54g，45.2mmol)、K2CO3(414mg，3mmol)和KI(7.5mg，45.2mmol)，并将所得混合物于20℃加热并搅拌16小时。将其用水淬灭，用EtOAc萃取(200mL×3)，并将萃取液用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物通过色谱在硅胶柱(用DCM∶MeOH＝100∶1到20∶1洗脱)上纯化以得到为红色液体的标题化合物(7g，收率54％)。 [1088] 实施例142 [1089] 4-(2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙基)吗啉 [1090] [1091] 在N2氛围下将化合物4-(2-(3-溴苯氧基)乙基)吗啉(1.1g，3.8mmol)、BIPN(1.47mg，5.8mmol)、KOAc(0.83mg，8.5mmol)和Pd(dppf)2Cl2(0.28mg，0.38mmol)在二噁烷(15mL)中的混合物于90℃加热16小时。然后将其浓缩，并将残余物通过色谱在硅胶柱(用DCM∶MeOH＝100∶1至20∶1洗脱)上纯化以得到为淡红色油状物的标题化合物(1g，收率78％)。 [1092] 实施例143 [1093] 1H-吲唑-5-基(2-(3-(2-吗啉代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯[1094] [1095] 在N2氛围下将化合物4-(2-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯氧基)乙基)吗啉(1g，3.2mmol)、化合物5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(670mg，1.5mmol)、K2CO3(414mg，3mmol)和Pd(dpPf)2Cl2(109mg，0.15mmol)在二噁烷(20mL)和H2O(5mL)中的混合物于90℃加热16小时。然后将其浓缩，并将残余物通过色谱在硅胶柱(用DCM∶MeOH＝100∶1至20∶1洗脱)上纯化以得到为淡红色油状物的标题化合物(380mg，收率50％)。 [1096] 实施例144 [1097] N-(2-(3-(2-吗啉代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1098] [1099] 向化合物1H-吲唑-5-基(2-(3-(2-吗啉代乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(380mg，0.75mmol)在DCM(5mL)中的溶液加入TFA(5mL)，并将所得的溶液于20℃搅拌3小时。将其浓缩并将残余物溶于DCM/MeOH中(10∶1，100mL)中，用含水K2CO3和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并将残余物通过色谱在硅胶柱(用DCM∶MeOH＝80∶0至15∶1洗脱)上纯化并从EtOAc和PE中重结晶以得到为浅黄色固体的标题化合物(120mg，收率39％ )。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.04(s，1H)，9.65(s，1H)，8.36(m，3H)，8.08(s，1H)， 7.94(s，1H)，7.57-7.38(m，3H)，7.06(d，J＝8.0Hz，1H)，6.68(d，J＝5.6Hz，1H)，4.17(t，J＝5.6Hz，2H)，3.58(s，4H)，2.73(t，J＝5.6Hz，2H)，2.67(s，4H)；m/e 417(M+H)+。 [1100] 实施例145 [1101] 5-((2-(3-乙酰基苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [1102] [1103] 将5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.22mmol)、3-乙酰基苯基)硼酸(73.7mg，0.44mmol)、Na2CO3(47.6mg，0.44mmol)、(Boc)2O(98mg，0.44mmol)、Pd(PPh3)Cl2(16mg，0.022mmol)在EtOH∶H2O(3.3mL，10∶1)中的溶液在微波辐射下于110℃加热20分钟。反应后，将其蒸发，加入EA和水，分离有机层，用饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥、浓缩并通过硅胶纯化以得到标题化合物(64mg，收率67％)。 [1104] 实施例146 [1105] 5-((2-(3-(1-氨基乙基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [1106] [1107] 向5-((2-(3-乙酰基苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.2mmol)，AcONH4(924mg，12mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液加入NaBH3CN(91mg， 1.44mmol)，将混合物在回流下搅拌6小时。反应后，将其蒸发，用水稀释，过滤以得到为白色固体的标题化合物(300mg，粗品)。 [1108] 实施例147 [1109] N-(2-(3-(1-氨基乙基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1110] [1111] 将5-((2-(3-(1-氨基乙基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(300mg，粗品)在HCl/MeOH(20mL)中的溶液于40℃搅拌6小时。反应后，将其蒸发，然后加入水，用饱和Na2CO3调节PH值至9，过滤以得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，以提供1 为白色固体的标题化合物(100mg)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.03(s，1H)，9.65(s，1H)， 8.44(s，1H)，8.35(d，J＝5.6Hz，2H)，8.18(d，J＝7.2Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.55-7.40(m， 4H)，6.67(d，J＝5.6Hz，1H)，4.12-4.07(m，1H)，2.08(b，2H)，1.31(d，J＝6.4Hz，3H)；m/e + 331(M+H)。 [1112] 实施例148 [1113] 5-((2-(4-乙酰基苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [1114] [1115] 将5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(1.5g，粗品)、(4-乙酰基苯基)硼酸(1.12g，6.8mmol)、Na2CO3(721mg，6.8mmol)、(Boc)2O(1.48g，6.8mmol)、Pd(PPh3)Cl2(239mg，0.34mmol)在EtOH∶H2O(16.5mL，10∶1)中的溶液在微波辐射下于110℃下加热20分钟。反应后，将其蒸发，加入EA和水，分离有机层，用饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩以得到标题化合物(2.6g，粗品)。 [1116] 实施例149 [1117] 5-((2-(4-(1-氨基乙基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [1118] [1119] 向5-((2-(4-乙酰基苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(2.6g，6.1mmol)、AcONH4(4.7g，61mmol)在MeOH(60mL)中的搅拌溶液加入NaBH3CN(461mg， 7.32mmol)，将混合物在回流下搅拌10小时。反应后，蒸发溶剂，然后加入水，过滤以得到标题化合物(2.1g，粗品)。 [1120] 实施例150 [1121] N-(2-(4-(1-氨基乙基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1122] [1123] 将5-((2-(4-(1-氨基乙基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(2.1g，粗品)在HCl/MeOH(60mL)中的溶液于40℃搅拌6小时。反应后，蒸发溶剂，然后加入水，用饱和Na2CO3调整pH至9，过滤以得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化以得到为白色固体的标题化合物(113.5mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.02(s，1H)，9.58(s， 1H)，8.34-8.27(m，4H)，8.20(s，1H)，8.08(s，1H)，7.56(s，2H)，7.49(d，J ＝ 6.0Hz，1H)， 4.05-4.03(m，1H)，1.27(d，J＝6.4Hz，3H)；m/e 331(M+H)+。 [1124] 实施例151 [1125] 2-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷[1126] [1127] 向化合物3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(550mg，2.5mmol)、2-溴-1，1-二乙氧基乙烷(985mg，5mmol)、Cs2CO3(2.43g，7.5mmol)在DMF(25mL)中的混合物加入KI(106mg，1mmol)，然后将混合物于110℃搅拌过夜。反应后，加入水，然后用EA萃取，用饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩以得到为浅黄色油状物的标题化合物(360mg，粗品)。 [1128] 实施例152 [1129] 5-((2-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [1130] [1131] 将2-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷(100mg，粗品)、5-((叔丁氧基羰基)(2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.15mmol)、Na2CO3(65mg，0.6mmol)、(Boc)2O(130mg，0.6mmol)、Pd(PPh3)Cl2(20mg，0.03mmol)在EtOH∶H2O(4.4mL，10∶1)中的混合物在微波辐射下于110℃下加热20分钟。反应后，将其蒸发，加入EA和水，分离有机层，用饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩，并通过制备型TLC纯化以得到标题化合物(30mg)。 [1132] 实施例153 [1133] 2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙醛 [1134] [1135] 向5-((2-(3-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(510mg，0.98mmol)在THF(20mL)中的溶液逐滴加入3M HCl(10mL)，然后将混合物在回流下搅拌7小时。反应后，将其蒸发，然后加入水，用饱和Na2CO3调整pH至9，过滤以得到标题化合物(420mg，粗品)。 [1136] 实施例154 [1137] N-(2-(3-(2-(异丙基氨基)乙氧基)苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1138] [1139] 向2-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯氧基)乙醛(420mg，粗品)、异丙胺(245mg，4.16mmol)在MeOH(15mL)中的搅拌溶液加入NaBH3CN(131mg，2.08mmol)，将该混合物在回流下搅拌7小时。反应后，将其蒸发并通过制备型HPLC纯化以得到为白色固体的标题化合物(90mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.02(s，1H)，9.65(s，1H)，8.34(d，J＝6.0Hz，1H)，8.27(s，1H)，8.10(s，1H)，7.94(d，J ＝ 3.2Hz，2H)，7.57-7.38(m，3H)，7.05(d，J＝ 8.0Hz，1H)，6.68(d，J＝ 6.0Hz，1H)，4.106-4.079(m，1H)，2.91(s，2H)，2.80-2.77(m，+ 1H)，1.61(b，1H)，1.00(d，J＝6.4Hz，6H)；m/e 389(M+H)。 [1140] 实施例155 [1141] N-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1142] [1143] 在室温下向2，4，6-三氯嘧啶(5.5g，30mmol)在EtOH(100mL)中的搅拌溶液加入TEA(1.5g，45mmol)和化合物1H-吲唑-5-胺(3.99g，30mmol)。将混合物回流过夜。在除去溶剂后，将残余物在MeOH中重结晶以得到为固体的标题化合物(3.4g，收率40％)。 [1144] 实施例156 [1145] 4-(6-((1H-吲唑-5-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 [1146] [1147] 在室温下向N-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(1g，3.5mmol)在EtOH(10mL)中的搅拌溶液加入TEA(1.4g，7mmol)和化合物哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.67g， 3.5mmol)。将混合物回流过夜。反应后，加入水，分离有机层和饱和盐水，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到标题化合物(1.2g)，将其无需进一步纯化直接用于下步反应。 [1148] 实施例157 [1149] 5-((叔丁氧基羰基)(6-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [1150] [1151] 在室温下向4-(6-((1H-吲唑-5-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.2g，粗品)在DCM(10mL)中的搅拌溶液加入(Boc)2O(3g，14mmol)、TEA(1.4g，14mmol)和DMAP(0.5g，3.5mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟。反应后，加入水，分离有机层，用柠檬酸一水合物和饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱在硅胶上纯化以得到标题化合物(0.6g)。 [1152] 实施例158 [1153] 5-((叔丁氧基羰基)(6-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-(3-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯 [1154] [1155] 将5-((叔丁氧基羰基)(6-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(600mg，0.95mmol)、(3-甲氧基苯基)硼酸(160mg，1.05mmol)、Na2CO3(201mg，1.9mmol)、Pd(dppf)Cl2(70mg，0.095mmol)在二噁烷：H2O(6.6mL， 10∶1)中的混合物在微波辐射下于140℃加热20分钟。反应后，将其蒸发，加入EA和水，分离有机层，用饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，浓缩并通过硅胶纯化以得到标题化合物(250mg，收率37.5％)。 [1156] 实施例159 [1157] N-(2-(3-甲氧基苯基)-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1158] [1159] 向5-((叔丁氧基羰基)(6-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)-2-(3-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(250mg)在DCM(5mL)中的溶液加入TFA(1mL)。将混合物在室温下搅拌30分钟。将其蒸发，然后加入水，用饱和Na2CO3调整pH至9，过滤以 1 得到为白色固体的标题化合物(115mg，收率80％)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.98(s， 1H)，9.30(s，1H)，8.09(s，1H)，8.00(s，1H)，7.53-7.37(m，6H)，7.03(d，J ＝ 8.8Hz，1H)，+ 6.50(s，1H)，3.82(s，3H)，3.73(b，4H)，3.39(s，1H)，2.71(b，4H)；m/e 402(M+H)。 [1160] 实施例160 [1161] N-(2-氯-6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1162] [1163] 在室温下向N-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(2g，7mmol)在EtOH(20mL)中的搅拌溶液加入TEA(2.8g，7mmol)和2-(二甲基氨基)乙醇(0.64g，7mmol)。将混合物回流过夜。反应后，加入水，分离有机层和饱和盐水，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到标题化合物(1.5g)。将残余物用于下一步骤中。 [1164] 实施例161 [1165] N-(6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-2-(3-甲氧基苯基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺 [1166] [1167] 将N-(2-氯-6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(1.5g，4.5mmol)、(3-甲氧基苯基)硼酸(661mg，5mmol)、Na2CO3(954mg，9mmol)、Pd(dppf)Cl2(300mg，0.45mmol)在二噁烷：H2O(22mL，10∶1)的混合物在微波辐射下于140℃加热30分钟。反应后，将其蒸发，加入EA和水，分离有机层，用饱和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩， 1 通过制备型HPLC纯化以得到为白色固体的标题化合物(125mg)。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.00(s，1H)，9.67(s，1H)，8.18(s，1H)，8.04(s，1H)，7.56-7.41(m，5H)，7.08-6.86(m，+ 2H)，4.46-4.43(m，1H)，3.83(s，3H)，2.66-2.63(m，2H)，2.22(s，6H)；m/e 405(M+H)。 [1168] 实施例162 [1169] [1170] 采用如上所述的程序合成下列化合物： [1171] ＝ [1172] [1173] [1174] 实施例181 [1175] ROCK1和ROCK2化合物选择性 [1176] Rho激酶抑制的剂量响应曲线得自于Millipore基于免疫的96孔板测定(Millipore目录号CSA001)。纯化的活性ROCK1和ROCK2从Invitrogen获得(ROCKI目录号，PV3691和ROCK2目录号，PV3759)。所述试剂盒组分包括测定板，它们预先涂有重组MYPT1，其包含特异性磷酸化的Thr696。化合物的抑制活性根据制造商的方案进行测量。简要地说，将降低浓度的测试化合物或已知ROCK抑制剂Y-27963(从50uM至0.003uM)加入至含有在测定稀释缓冲液中的5mM MgCl2和10毫单位ROCK1或ROCK2的反应缓冲液。将此混合物重叠于96孔板，并通过加入2.5uM的ATP开始反应。该测定在30℃进行30分钟，并以120rpm轻微振荡。通过用Tris-缓冲盐水和吐温洗涤缓冲液洗涤该板3次来终止该测定。抗磷酸化MYPT1(Thr696)抗体被加入到每个孔以检测磷酸化底物并在室温下孵育1小时，此后在室温下于1小时内加入HRP标记的抗兔IgG二抗。洗涤后使用底物试剂使该测定显影并在Tecan Infinite M1000上读取450nm处的吸光度，反射相对剩余的ROCK磷酸化活性。 [1177] 表示ROCK1和ROCK2的抑制以及某些化合物对ROCK2抑制的选择性的数据示于表3中。 [1178] [1179] ROCK1的抑制对ROCK2的抑制的剂量响应曲线示于图5。 [1180] 实施例182 [1181] ROCK1和ROCK2化合物选择性 [1182] Rho激酶抑制的剂量响应曲线得自于Invitrogen Z′-LYTETM激酶分析试剂盒(Invitrogen目录号PV3793)。纯化的活性ROCK1和ROCK2从Invitrogen获得(ROCK1目录号，PV3691和ROCK2目录号，PV3759)。所述试剂盒组分包括香豆素和荧光素标记的基于肌球蛋白轻链2(KKRPQRRYSNVF)的肽、含显影试剂的专有蛋白酶和用于终止显影反应的专有终止缓冲液。化合物的抑制活性根据制造商的方案进行测量。简要地说，将降低浓度的测试化合物或已知ROCK抑制剂Y-27963(从10uM至2.56×10-5uM)加入至含有50mM HEPES pH 7.5、5mM MgCl2、5mM EGTA和0.05％Brij-35的反应缓冲液，并且在测定稀释缓冲液中ROCK1为0.18ug/mL或ROCK2为0.8ug/mL。将该混合物重叠在白色96孔半区域板中，并通过加入5uM ATP ROCK1或12uM ATP ROCK2开始反应。该测定在室温下进行1小时，接着加入显影试剂，并在室温下进一步孵育1小时。然后加入终止试剂，并且该反应以及香豆素和荧光素发射信号立即在Tecan Infinite M1000荧光板读数器(激发：400nm；发射分别为445nm和520nm)上读取。通过将测试样品的发射率与对照样品比较，计算磷酸化百分数值，并使用Prism确定产生激酶活性1/2抑制的抑制剂的浓度(IC50)。表4提供了为上述实施例的化合物的IC50浓度。几种化合物在测量肌球蛋白轻链磷酸化(pMLC)的抑制的初步测定中也表现出活性。对于标记为ND的化合物而言，在采用的测试条件下活性是不可检测的。 [1183] [1184] [1185] 实施例183+ [1186] ROCK2选择性抑制剂KD025体外抑制了IL-17/IL-21在人CD4T细胞中的分泌和增殖。 [1187] 导致细胞因子分泌和增殖的静息T细胞的活化涉及来自抗原呈递细胞(APC)的两个不同信号，该信号通过T细胞受体(TCR)/CD3复合物与CD28受体的共刺激模拟。通过使+用新鲜纯化的CD4人T细胞和抗CD3和CD28的刺激抗体来刺激响应于TCR活化的IL-17和IL-21分泌，发现采用ROCK2选择性抑制剂KD025的治疗以剂量依赖的方式显著地抑制了IL-17与IL-21分泌。在相同条件下，对IFN-γ分泌的抑制是不太稳健的并仅在高剂量(10μM)的抑制剂下显著(图6A)。与对细胞因子分泌的抑制效果一致，采用KD025对T细胞的治疗下调了其体外响应于TCR刺激而增殖的能力(图6B)。 [1188] 实施例184 [1189] ROCK2siRNA(但不是ROCK1siRNA)抑制了IL-17和IL-21分泌 [1190] 为了证实ROCK2在调节人T细胞中的IL-17和IL-21分泌中的作用，我们特异性地通过RNA干扰使ROCK1和ROCK2表达沉默。特异性ROCK1和ROCK2小干扰RNA(siRNA)使蛋白质表达水平分别降低了72％和84％。ROCK2(但不是ROCK1)的沉默显著地减少了IL-17和IL-21，对人T细胞中的IFN-γ分泌产生的影响最小(图7)。 [1191] 实施例185 [1192] KD025抑制了STAT3磷酸化 [1193] STAT3经由RORγt表达的调节和直接结合到所述IL-17与IL-21启动子而在Th17分化中起到关键作用。此外，最近的研究已经表明，RhoA依赖性STAT3刺激需要ROCK活性并导致了氨基酸Y705上的STAT3磷酸化的活化。使用两种不同的实验设计，KD025被证明显著地下调了STAT3的磷酸化。在一项实验中，采用KD025预处理T细胞，然后用抗-CD3/CD28抗体刺激。采用KD025的预处理导致了STAT3的磷酸化减少(图8A)。在不同的实验中，我们在Th17-时滞条件下将细胞培养5天，然后采用所述ROCK2选择性抑制剂处理3小时。通过用ROCK2抑制剂进行处理减少了STAT3磷酸化(图8B)。 [1194] 实施例186 [1195] KD025离体下调了RA患者中的IL-17、IL-21和IFN-γ分泌(a)和IFN-γ和IL-17表达细胞的增加的频率(b) [1196] 类风湿关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性炎症性疾病，其导致关节结构的破坏。虽然参与到RA发展的致病事件未被充分了解，但是促炎细胞因子，如TNF-α、IL-1β、IFN-β、IL-6和更新的IL-17在诱发和保持RA发病中的关键作用是有据可查的。此外，相比于健康对照，Th17细胞在RA患者外周血中的频率显著增加并且与疾病活动度评分(DAS)相关联。 [1197] CD4+T细胞提纯自在疾病不同阶段的RA患者的外周血或提纯自健康对照，并在KD025的存在下用抗CD3/CD28抗体离体刺激。ROCK2选择性抑制剂响应于TCR刺激而以+STAT3依赖模式显著地下调了CD4T细胞分泌IL-17、IL-21和IFN-γ的能力(图9A)。对比于健康对照，IFN-γ分泌的抑制程度与IL-17和IL-21的抑制水平是相当的。此外，来+ 自2个不同的RA患者的CD4T细胞在KD025的存在下的培养显著地降低了产生IL-17的细胞和产生IFN-γ的细胞两者的频率，如细胞内染色所表明(图9B)。 [1198] 实施例187 [1199] 中和人VEGFR2的抗体 [1200] 在表1中鉴定的结合到并中和人VEGFR2的两个抗体分离自人Fab噬菌体展示文库。所述抗体阻断了配体VEGFA到hVEGFR2的结合(图12)。所述抗体还结合到表达KDR的猪主动脉内皮(PAE)细胞，并抑制VEGFR2、AKT和MAPK的VEGFA刺激的磷酸化。(图13)。表1表示CDR的氨基酸序列和抗体的可变域。Mab 101和Mab 102的Kd分别为约6.6mM和 1.7nM。 [1201] Mab 101的重链通过κ轻链基因(κ-文库)和λ轻链基因(λ-文库)重组。通过针对人VEGFR2和小鼠VEGFR2两者来淘选λ-文库发现20个独特的λ轻链变体。通过针对人VEGFR2和小鼠VEGFR2两者来淘选κ-文库发现22个独特的κ轻链变体。表2指示CDR的氨基酸序列和轻链的可变域。Mab 105、106和107的Kd分别增加约10倍(分别为0.24nM、0.22nM和0.12nM)(表3)。这些抗体和它们所衍生自的抗体Mab101结合到VEGFR的域2和3以及含有这些域的构建体。 [1202] [1203] [1204] 类似于亲本抗体，这些抗体结合到VEGFR2并阻断VEGFA到VEGFR2的结合(图14)，并抑制VEGFR2、AKT和MAPK的VEGFA刺激的磷酸化(图15)。 [1205] 包括单Mab 138、139、140和146在内的几种抗体也与小鼠VEGFR2交叉反应。 [1206] [1207] Mab 138、139和140抑制了VEFGR2以及包括MAPK在内的下游信号转导分子的VEGFA刺激的磷酸化。 [1208] 实施例188 [1209] AMD的治疗 [1210] 对患有继发于AMD的脉络膜新生血管(CNV)病变的50名男性和女性进行了研究。该研究使用Mab 106，将其通过玻璃体内注射每周施用，连续施用三周。该研究还采用了实施例43的化合物，其抑制ROCK2并对ROCK2是选择性的。实施例43的化合物通过i)每周玻璃体内注射施用，或ii)经由滴眼液每天施用。按指定时间间隔施用不种量的每种药物，其中某些对照受试者仅接收实施例43的化合物，或仅接收Mab 106，或仅接收安慰剂。对受试者进行六个月的观察以确定眼内炎症、黄斑厚度和黄斑灌注的状态。在这个时间段还测量了视敏力。 [1211] 对于Mab 106的每个浓度而言，当施用实施例43的化合物时，眼内炎症和黄斑灌注较少。在研究的时间段内，接收了两种药剂的受试者中的视敏力损失有所减少，并且有些受试者得到了改善。 [1212] 实施例189 [1213] 增殖性糖尿病性视网膜病变的治疗 [1214] 采用哌加他尼(具有VEGF 165特异性的聚乙二醇化的抗-VEGF适体)对需要手术治疗的增殖性糖尿病性视网膜病或临床显著糖尿病性黄斑水肿的患者进行术前治疗，具有或不具有采用实施例154的化合物的伴随治疗。通过玻璃体内注射施用药剂。手术后8周，针对术后再出血、注射后黄斑水肿和注射前后的VEGF165水平对受试者进行了评估。据预计，相比于单独施用哌加他尼，施用化合物154导致出血和黄斑水肿减少。

眼部病症的治疗

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