作为丙型肝炎病毒抑制剂的氟化大环化合物 |
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| 申请号 | CN200980115493.0 | 申请日 | 2009-03-19 | 公开(公告)号 | CN102015652A | 公开(公告)日 | 2011-04-13 |
| 申请人 | 益安药业; | 发明人 | 盖永华; 柯日新; 王喆; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了式I化合物或其药学可接受的盐、酯或前药，其抑制丝 氨 酸蛋白酶活性，尤其是丙型 肝炎 病毒(HCV)NS3-NS4A蛋白酶的活性，因此，本发明化合物干扰丙型肝炎病毒的生命周期，并且也可用作抗病毒药；本发明进一步涉及药物组合物，其包含用于施用于患HCV感染受试者的上述化合物；本发明还涉及通过施用包含本发明化合物的药物组合物 治疗 HCV感染受试者的方法。 | ||||||
| 权利要求 | 1.式I化合物或其药学可接受的盐、酯或前药： |
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| 说明书全文 | 作为丙型肝炎病毒抑制剂的氟化大环化合物[0001] 相关申请 [0002] 本申请要求于2008年3月20日提交的美国临时申请No.61/038,096的权益。上述申请的全部教导通过引用并入本文。 技术领域[0003] 本发明涉及新的具有抑制HCV的抗病毒活性以及对HCV感染治疗有用的丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶抑制剂化合物。更具体地，本发明涉及氟化大环化合物，含有此化合物的组合物以及其应用的方法，以及制备这些化合物的方法。 [0004] 发明背景 [0005] HCV是非甲非乙型肝炎的主要病因并且是发达和发展中世界的日益严重的公共卫生问题。 据估计全世界有超过200百万的人感染这种病毒，超过人类免疫缺陷性病毒(HIV)感染个体的数目几乎五倍。HCV感染的病人，由于百分率很高的个体遭受慢性感染，因此处于发展为肝脏硬化随后发展为肝细胞癌以及晚期肝病的危险之中。 HCV在西方世界中是肝细胞癌最普遍的病因并且是需要肝移植的患者的病因。 [0006] 对于抗-HCV治疗剂的开发有相当多的障碍，其包括，但不限于，病毒的持续稳定性，病毒在宿主中复制过程中的遗传多样性，病毒发展为抗药突变体的高频率，以及缺乏可复制的传染性培养系统和用于HCV复制和发病的小-动物模型。在大多数的情况中，鉴于轻度的感染进程以及肝脏的复杂生物学，因此必须缜密考虑所给出的抗病毒药物，其可能具有显著的副作用。 [0007] 目前仅仅有两个被批准用于HCV感染治疗的疗法。 最初的治疗方案通常包括3-12个月的静脉注射干扰素-α(IFN-α)的过程，而新批准的第二代疗法包括IFN-α与常规抗病毒核苷模拟类病毒唑的共-治疗。 此两种疗法导致干扰素有关副作用同时具有低的抗HCV感染效力。由于较差的耐受性以及已有疗法的令人失望的效力，人们因此需要开发有效的用于HCV感染治疗的抗病毒药。 [0008] 在患者群体中，大多数个体长期感染并且无症状并且预测是未知的，有效的药物需要比现行的治疗具有显著小的副作用。 丙型肝炎非结构蛋白-3(NS3)是病毒多蛋白加工以及随后病毒复制所需的蛋白水解酶。 尽管大量的病毒变体与HCV感染有关，NS3蛋白酶的活性部位保持高度保守使其抑制成为有效的干预方式。 最近用蛋白酶抑制剂治疗HIV的成功支持了NS3的抑制是抗HCV斗争中关键靶标的观点。 [0010] HCV多蛋白由病毒和宿主肽酶加工成10个具有各种功能的不连续肽。 有三个结构蛋白，C、E1和E2。 P7蛋白功能未知并且由高度可变的序列组成。 有六个非结构蛋白。NS2是与NS3蛋白的一部分一起发挥功能的锌-依赖的金属蛋白酶。NS3包括两种催化功能(由与NS2的结合中分离出来)：N-末端的丝氨酸蛋白酶，其需要NS4A作为辅因子；以及在羧基末端的ATP酶-依赖的解旋酶功能。 NS4A是丝氨酸蛋白酶的紧密结合但非-共价辅因子。 [0011] NS3-NS4A蛋白酶负责裂解病毒多蛋白上的四个位点。 NS3-NS4A裂解是自动催化的，顺式产生。 剩余三个水解作用，NS4A-NS4B、NS4B-NS5A和NS5A-NS5B均反式产生。 NS3是一种丝氨酸蛋白酶，其在结构上分类为糜蛋白酶-样蛋白酶。 虽然NS丝氨酸蛋白酶本身具有蛋白水解活性，但HCV蛋白酶在催化多蛋白裂解方面不是有效酶。 已经表明NS4A蛋白的中央疏水区域是这种增强所需的。 NS3蛋白与NS4A的复合物形成似乎是加工作用，增强所有位点的蛋白水解效力所必需的。 [0012] 抗病毒药开发的一般策略是使病毒编码的酶包括NS3失活，所述酶是病毒复制不可缺少的。 针对寻找NS3蛋白酶抑制剂的当前努力综述于S.Tan，A.Pause，Y.Shi，N.Sonenberg，Hepatitis C Therapeutics：Current Status and Emerging Strategies，Nature Rev.Drug Discov.1，867-881(2002)。 [0013] 发明概述 [0014] 本发明涉及氟化大环化合物及其药学可接受的盐、酯或前药，以及用它们治疗需要这种治疗受试者的丙型肝炎感染的方法。 本发明化合物干扰丙型肝炎病毒的生命周期，并且还可用途抗病毒剂。 本发明进一步涉及药物组合物，其包含用于施用于罹患HCV感染的受试者的前述化合物、盐、酯或前药。本发明进一步的特征是药物组合物，其包含本发明化合物(或其药学可接受的盐、酯或前药)以及另一抗-HCV剂例如干扰素(例如，α-干扰素、β-干扰素、复合干扰素(consensusinterferon)、聚乙二醇化干扰素、或者白蛋白或其它轭合干扰素)，利巴韦林，金刚烷胺，另一HCV蛋白酶抑制剂，或者HCV聚合酶、螺旋酶或内核糖体进入位点抑制剂。本发明还涉及通过给受试者施用本发明药物组合物在受试者中治疗HCV感染的方法。本发明进一步涉及药物组合物，其包含本发明化合物或其药学可接受的盐、酯或前药，以及药学可接受的载体或赋形剂。 [0015] 在本发明的一个实施方案中，公开了式I表示的化合物或其药学可接受的盐、酯或前药： [0016] [0017] 其中 [0018] R选自： [0019] (i)-C1-C8烷基、-C2-C8链烯基或-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；取代的-C1-C8烷基、取代的-C2-C8链烯基或取代的-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；-C3-C12环烷基或取代的-C3-C12环烷基；-C4-C12烷基环烷基或取代的-C4-C12烷基环烷基；-C3-C12环烯基或取代的-C3-C12环烯基；-C4-C12烷基环烯基或取代的-C4-C12烷基环烯基； [0020] (ii)芳基；取代的芳基；杂芳基；取代的杂芳基； [0021] (iii)杂环烷基或取代的杂环烷基； [0022] (iv)氢；氘； [0023] A不存在或者选自-(C＝O)-、-S(O)2、-C＝N-OR1或-C(＝N-CN)； [0024] 其中R1选自： [0025] (i)氢； [0026] (ii)芳基；取代的芳基；杂芳基；取代的杂芳基； [0027] (iii)杂环烷基或取代的杂环烷基； [0028] (iv)-C1-C8烷基、-C2-C8链烯基或-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；取代的-C1-C8烷基、取代的-C2-C8链烯基或取代的-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；-C3-C12环烷基或取代的-C3-C12环烷基；-C3-C12环烯基或取代的-C3-C12环烯基； [0029] L201不存在或者选自-C1-C12亚烷基、-C2-C12亚链烯基或-C2-C12亚炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；取代的-C1-C12亚烷基、取代的-C2-C12亚链烯基或取代的-C2-C12亚炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；-C3-C12亚环烷基或取代的-C3-C12亚环烷基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；-C3-C12亚环烯基或取代的-C3-C12亚环烯基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子； [0030] M不存在或者选自O、S、SO、SO2或NR1，其中R1如前文定义； [0031] L101不存在或者选自-C1-C12亚烷基、-C2-C12亚链烯基或-C2-C12亚炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；取代的-C1-C12亚烷基、取代的-C2-C12亚链烯基或取代的-C2-C12亚炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；-C3-C12亚环烷基或取代的-C3-C12亚环烷基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；-C3-C12亚环烯基或取代的-C3-C12亚环烯基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子； [0032] Z101不存在或者选自M、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基； [0033] G选自-OH、-NH(SO2)R2、-NH(SO2)NR3R4和NR3R4； [0034] R2选自： [0035] (i)芳基；取代的芳基；杂芳基；取代的杂芳基； [0036] (ii)杂环烷基；取代的杂环烷基； [0037] (iii)-C1-C8烷基、-C2-C8链烯基或-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；取代的-C1-C8烷基、取代的-C2-C8链烯基或取代的-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；-C3-C12环烷基或取代的-C3-C12环烷基；-C3-C12环烯基或取代的-C3-C12环烯基；杂环；取代的杂环； [0038] R3和R4独立地选自： [0039] (i)氢； [0040] (ii)芳基；取代的芳基；杂芳基；取代的杂芳基； [0041] (iii)杂环烷基或取代的杂环烷基； [0042] (iv)-C1-C8烷基、-C2-C8链烯基或-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；取代的-C1-C8烷基、取代的-C2-C8链烯基或取代的-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子；-C3-C12环烷基或取代的-C3-C12环烷基；-C3-C12环烯基或取代的-C3-C12环烯基；杂环或取代的杂环； [0043] 或者，R3和R4与它们连接的氮一起形成杂环或取代的杂环； [0044] Q1和Q2独立地选自卤素；优选F、Cl和Br； [0045] X不存在或者选自： [0047] (2)硫； [0048] (3)NR4；其中R4如前面上文定义； [0049] (4)-O-NH-； [0050] Y不存在或者选自： [0051] (i)-C(＝O)-、-C(＝O)-NH-、-S(O)2-、-S(O)2NH-； [0052] (ii)-C1-C6烷基，其含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子，任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基； [0053] (iii)-C2-C6链烯基，其含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子，任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基； [0054] (iv)-C2-C6炔基，其含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子，任选被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、芳基、取代的芳基、杂芳基或取代的杂芳基； [0055] (v)-C3-C12环烷基、取代的-C3-C12环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基； [0056] W选自芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基、取代的杂环烷基；各自任选与一个或多个芳基、取代的芳基、杂芳基稠合；取代的杂芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环烷基； [0057] 或者-X-Y-W一起形成 其中各W1、W2独立地选自： [0058] i)氢； [0059] ii)芳基； [0060] iii)取代的芳基； [0061] iv)杂芳基； [0062] v)取代的杂芳基； [0063] vi)杂环或取代的杂环； [0064] vii)-C1-C8烷基、-C2-C8链烯基或-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子； [0065] viii)取代的-C1-C8烷基、取代的-C2-C8链烯基或取代的-C2-C8炔基，其各自含有0、1、2或3个选自O、S或N的杂原子； [0066] ix)-C3-C12环烷基； [0067] x)取代的-C3-C12环烷基； [0068] xi)-C3-C12环烯基； [0069] xii)取代的-C3-C12环烯基； [0070] 或者W1和W2与它们连接的碳原子一起形成选自下列的环状部分：-C3-C8环烷基、-C3-C8环烯基、杂环、取代的-C3-C8环烷基、取代的-C3-C8环烯基和取代的杂环，其各自任选与一个或多个芳基、取代的芳基、杂芳基稠合；取代的杂芳基、杂环或取代的杂环； [0071] 前提条件是当X是氧并且Y不存在时，W不含有喹 啉(X-Y-W不含有或者得自喹 啉的任何部分(X-Y-W不含有 [0072] [0073] m是0、1、2或3； [0074] m′是0、1、2或3；和 [0075] s是0、1、2、3或4。 [0076] 在另一实施方案中，本发明特征是药物组合物，其包含本发明化合物或其药学可接受的盐、酯或前药。 在本发明的再另一实施方案中，公开了药物组合物，其包含治疗有效量的本发明化合物或其药学可接受的盐、酯或前药，与药学可接受的载体或赋形剂组合。 在本发明的再另一实施方案中，是在有治疗需求的受试者中用所述药物组合物治疗丙型肝炎感染的方法。 [0077] 发明详述 [0078] 本发明第一实施方案是上文所述式I表示的化合物或其药学可接受的盐、酯或前药，其单独或者与药学可接受的载体或赋形剂组合。 [0079] 本发明另一实施方案是式II表示的化合物： [0080] [0081] 或其药学可接受的盐、酯或前药，其单独或者与药学可接受的载体或赋形剂组合，其中R、A、L201、M、L101、Z101、W、Y、X、Q1、Q2和G如第一实施方案所定义。 [0082] 本发明另一实施方案是式III表示的化合物： [0083] [0084] 或其药学可接受的盐、酯或前药，其单独或者与药学可接受的载体或赋形剂组合，其中R、A、L201、M、L101、Z101、W1、W2、Q1、Q2和G如第一实施方案所定义。 [0085] 在一个实施例中，W1和W2独立地选自氢、芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，或者W1和W2与它们连接的碳原子一起形成选自下列的环状部分：-C3-C8环烷基、-C3-C8环烯基、杂环、取代的-C3-C8环烷基、取代的-C3-C8环烯基和取代的杂环，其各自任选与一个或多个芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基稠合。 [0086] 本发明的其它实施方案是式IV、V和VI表示的化合物： [0087] [0088] 或其药学可接受的盐、酯或前药，其单独或者与药学可接受的载体或赋形剂组合，其中R301选自：H、卤素、C1-C6烷基、C3-C12环烷基、-CH2-烷基氨基、-CH2-二烷基氨基、-CH2-芳基氨基、-CH2-二芳基氨基、-(C＝O)-烷基氨基、-(C＝O)-二烷基氨基、-(C＝O)-芳基氨基、-(C＝O)-二芳基氨基、芳基、取代的芳基、芳基烷基、取代的芳基烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂芳基烷基、取代的杂芳基烷基、杂环烷基或取代的杂环烷基；其中R、A、L201、M、L101、Z101、Q1、Q2和G如第一实施方案所定义。 [0089] 本发明的其它实施方案是式VII和VIII表示的化合物： [0090] [0091] 或其药学可接受的盐、酯或前药，其单独或者与药学可接受的载体或赋形剂组合，其中R、A、L201、M、L101、Z101、Q1、Q2和G如第一实施方案所定义。 [0092] 本发明的其它实施方案是式IX和X表示的化合物： [0093] [0094] 或其药学可接受的盐、酯或前药，其单独或者与药学可接受的载体或赋形剂组合，其中R、A、L201、M、L101、Z101、Q1、Q2和G如第一实施方案所定义。 [0095] 本发明代表性的化合物包括但不限于以下式XI化合物(表1)，其中R、M-L和G对于各实施例描述于表1。 [0096] [0097] 表1 [0098] [0099] [0100] [0101] [0102] [0103] [0104] [0105] [0106] 本发明代表性的化合物还包括但不限于以下式XII化合物(表2)，其中R、M-L和G对于各实施例描述于表2。 [0107] [0108] 表2 [0109] [0110] [0111] [0112] [0113] [0114] [0115] 本发明代表性的化合物还包括但不限于以下式XIII化合物(表3)，其中R、M-L和G对于各实施例描述于表3。 [0116] [0117] 表3 [0118] [0119] [0120] [0121] [0122] [0123] [0124] [0125] 本发明代表性的化合物还包括但不限于以下式XIV化合物(表4)，其中R、M-L和G对于各实施例描述于表4。 [0126] [0127] 表4 [0128] [0129] [0130] [0131] [0132] [0133] [0134] 本发明特征还在于药物组合物，其包含本发明化合物或其药学可接受的盐、酯或前药。 [0135] 本发明化合物可以作为单独的活性药物施用，或者与一种或多种药剂组合使用以治疗或预防丙型肝炎感染或者与HCV感染有关的症状。 与本发明化合物或化合物的组合来组合施用的其它药剂包括用于由HCV感染引起的疾病的治疗剂，其通过直接或间接机制抑制HCV病毒复制。 这些药剂包括例如以下的药剂：宿主免疫调节剂(例如，干扰素-α、聚乙二醇化干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、CpG寡核苷酸等)，或者抑制宿主细胞功能的抗病毒化合物例如一磷酸次黄嘌呤核苷脱氢酶(例如，利巴韦林等)。 还包括调节免疫功能的细胞因子。 还包括包含定向抑制HCV的HCV抗原或抗原佐剂组合的疫苗。 还包括这样的药剂，其干扰宿主细胞组成以抑制病毒蛋白合成，以通过抑制内核糖体进入位点(IRES)引起的HCB病毒复制的翻译步骤而阻断病毒蛋白合成，或者用靶向膜蛋白的viroporin家族例如HCV P7等的药剂来阻断病毒颗粒成熟和释放。 与本发明化合物组合施用的其它药剂包括通过靶向参与病毒复制的病毒基因组的蛋白质来抑制HCV复制的任何药剂或药剂组合。这些药剂包括但不限于HCV RNA依赖性RNA聚合酶的其它抑制剂，例如描述于WO0190121(A2)或者美国专利No.6,348,587B1或WO0160315或WO0132153中的核苷型聚合酶抑制剂；或者非-核苷抑制剂，例如描述于EP 1162196A1或WO0204425中的苯并咪唑聚合酶抑制剂；或者HCV蛋白酶的抑制剂，例如拟肽(peptidomimetic)型抑制剂例如BILN2061等，或者HCV螺旋酶的抑制剂。 [0136] 与本发明化合物组合施用的其它药剂包括抑制共感染个体的其它病毒复制的任何药剂或药剂组合。这些药剂包括但不限于用于由乙型肝炎(HBV)感染引起的疾病的治疗剂，例如阿德福韦、拉米夫定和替诺福韦；或者由人免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的疾病的治疗剂例如蛋白酶抑制剂：利托那韦、洛匹那韦、茚地那韦、那非那韦、沙奎那韦、安泼那韦、阿扎那韦、替拉那韦、TMC-114、福沙那韦；逆转录酶抑制剂：齐多夫定、拉米夫定、去羟肌苷、司他夫定、替诺福韦、扎西他滨、阿巴卡韦、依法韦仑、奈韦拉平、地拉韦啶、TMC-125；整合酶抑制剂：L-870812、S-1360，或者进入抑制剂：恩夫韦地(T-20)、T-1249。 [0137] 相应地，本发明一个方面涉及治疗或预防由含RNA的病毒引起的感染的方法，该方法包括给需要此治疗的患者共同施用选自宿主免疫调节剂和第二抗病毒剂中的一种或多种或其组合的药剂，以及治疗有效量的本发明化合物或化合物组合或者其药学可接受的盐、立体异构体、互变异构体、前药、前药的盐或其组合。 宿主免疫调节剂的实例是，但不限于，干扰素-α、聚乙二醇化-干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、细胞因子、疫苗和包含抗原和佐剂的疫苗，并且所述第二抗病毒剂通过抑制与病毒复制相关的宿主细胞功能来抑制HCV的复制，或者通过靶向病毒基因组的蛋白来抑制HCV的复制。 [0138] 本发明进一步的方面涉及治疗或预防由含RNA的病毒引起的感染的方法，该方法包括给需要此治疗的患者共同施用治疗或减轻HCV感染的症状包括肝硬化和肝炎的药剂或药剂组合，以及治疗有效量的本发明化合物或化合物组合或者其药学可接受的盐、立体异构体、互变异构体、前药、前药的盐或其组合。 本发明再另一方面提供了治疗或预防由含RNA的病毒引起的感染的方法，该方法包括给需要此治疗的患者共同施用治疗由乙型肝炎(HBV)感染引起的疾病的患者的一种或多种药剂，以及治疗有效量的本发明化合物或化合物组合或者其药学可接受的盐、立体异构体、互变异构体、前药、前药的盐或其组合。治疗由乙型肝炎(HBV)感染引起的疾病的患者的药剂可以是例如但不限于L-脱氧胸腺嘧啶核苷、阿德福韦、拉米夫定或tenfovir，或其任何组合。 含RNA的病毒的实例包括但不限于丙型肝炎病毒(HCV)。 [0139] 本发明另一方面涉及治疗或预防由含RNA的病毒引起的感染的方法，该方法包括给需要此治疗的患者共同施用治疗由人免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的疾病的患者的一种或多种药剂，以及治疗有效量的本发明化合物或化合物组合或者其药学可接受的盐、立体异构体、互变异构体、前药、前药的盐或其组合。 治疗由人免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的疾病的患者的药剂可以包括但不限于利托那韦、洛匹那韦、茚地那韦、那非那韦、沙奎那韦、安泼那韦、阿扎那韦(atazanavir)、替拉那韦、TMC-114、福沙那韦、齐多夫定、拉米夫定、去羟肌苷、司他夫定、替诺福韦、扎西他滨、阿巴卡韦、依法韦仑、奈韦拉平、地拉韦啶、TMC-125、L-870812、S-1360、恩夫韦地(enfuvirtide，T-20)或T-1249，或其任何组合。 含RNA的病毒的实例包括但不限于丙型肝炎病毒(HCV)。 此外，本发明提供了本发明化合物或化合物组合或者其治疗可接受的盐形式、立体异构体或互变异构体、前药、前药的盐或其组合以及选自宿主免疫调节剂和第二抗病毒剂中的一种或多种药剂或其组合制备用于治疗患者中含RNA的病毒特别是丙型肝炎病毒引起的感染的医药的用途。 宿主免疫调节剂的实例是，但不限于，干扰素-α、聚乙二醇化-干扰素-α、干扰素-β、干扰素-γ、细胞因子、疫苗和包含抗原和佐剂的疫苗，并且所述第二抗病毒剂通过抑制与病毒复制相关的宿主细胞功能来抑制HCV的复制，或者通过靶向病毒基因组的蛋白来抑制HCV的复制。 [0140] 当用于上述或其它治疗时，本发明化合物组合或化合物与本文上面定义的一种或多种药剂一起，可以以纯净形式使用，或者当存在此种形式时，可以以药学可接受的盐形式、前药、前药的盐或其组合使用。 或者，此种治疗剂的组合可以以药物组合物施用，所述药物组合物含有治疗有效量的感兴趣的化合物或化合物组合，或者其药学可接受的盐形式、前药或前药的盐，以及一种或多种上文定义的药剂，和药学可接受的载体。此药物组合物可通过使所述病毒与所述药物组合物接触而用于抑制含RNA的病毒特别是丙型肝炎病毒(HCV)的复制。 此外，此组合物可用于治疗或预防由含RNA的病毒特别是丙型肝炎病毒(HCV)引起的感染。 [0141] 因此，本发明进一步的方面涉及治疗或预防由含RNA的病毒特别是丙型肝炎病毒(HCV)引起的感染的方法，该方法包括级有此治疗需要的患者施用一种药物组合物，所述药物组合物含有本发明的化合物或化合物组合或者其药学可接受的盐形式、立体异构体或互变异构体、前药或前药的盐或其组合，一种或多种上文定义的药剂，和药学可接受的载体。 [0142] 当组合施用时，所述治疗剂可以配制成分离的组合物，它们在相同时间或者在预定时期给药，或者所述治疗剂可以以单个的单位剂型给药。 [0143] 考虑用于此组合治疗的抗病毒剂包括有效抑制哺乳动物中的病毒形成和/或复制的药剂(化合物或生物制品)，其包括但不限于干扰对于哺乳动物中的病毒的形成和/或复制所必需的宿主或病毒机制的药剂。 此类药剂可选自另一抗-HCV剂；HIV抑制剂；HAV抑制剂；和HBV抑制剂。 [0144] 其它抗-HCV剂包括有效减少或预防丙型肝炎相关的症状或疾病的进程的那些药剂。 此类药剂包括但不限于免疫调节剂、HCV NS3蛋白酶的抑制剂、HCV聚合酶的其它抑制剂、HCV生命周期中的另一靶的抑制剂以及其它抗-HCV剂，包括但不限于利巴韦林、金刚烷胺、levovirin和viramidine。 [0145] 免疫调节剂包括有效提高或能够哺乳动物中免疫系统应答的那些药剂(化合物或生物制品)。 免疫调节剂包括但不限于一磷酸次黄嘌呤核苷脱氢酶抑制剂例如VX-497(merimepodib，VertexPharmaceuticals)、I型干扰素、II型干扰素、复合干扰素、asialo-干扰素聚乙二醇化干扰素和轭合干扰素，包括但不限于与其它蛋白包括但不限于人白蛋白轭合的干扰素。 I型干扰素是一组干扰素，它们均与I型受体结合，包括天然和合成产生的I型干扰素，而II型干扰素均与II型受体结合。 I型干扰素的实例包括但不限于[α]-、[β]-、[δ]-、[ω]-和[τ]-干扰素，而II型干扰素的实例包括但不限于[γ]-干扰素。 [0146] HCV NS3蛋白酶的抑制剂包括有效抑制哺乳动物中的HCV NS3蛋白酶功能的药剂(化合物或生物制品)。 HCV NS3蛋白酶抑制剂的实例包括但不限于描述于下列中的那些化合物：WO 99/07733、WO99/07734、WO 00/09558、WO 00/09543、 WO 00/59929、WO 03/064416、WO 03/064455、WO 03/064456、WO 2004/030670、WO 2004/037855、WO 2004/039833、WO 2004/101602、WO 2004/101605、 WO2004/103996、WO 2005/028501、WO 2005/070955、WO 2006/000085、WO 2006/007700和WO 2006/007708(均为Boehringer Ingelheim的)，WO 02/060926、WO 03/053349、WO03/099274、WO 03/099316、WO2004/032827、WO 2004/043339、 WO 2004/094452、WO 2005/046712、WO 2005/051410、WO 2005/054430(均为BMS 的)，WO 2004/072243、WO 2004/093798、WO 2004/113365、WO 2005/010029(均为Enanta的)，WO 2005/037214(Intermune)和WO 2005/051980(Schering)，以及标识为VX-950、ITMN-191和SCH 503034候选品。 [0147] HCV聚合酶的抑制剂包括有效抑制HCV聚合酶的功能的药剂(化合物或生物制品)。 此类抑制剂包括但不限于HCV NS5B聚合酶的非核苷和核苷抑制 剂。 HCV聚合酶抑制剂的实例包括但不限于描述于下列中的那些化合物：WO 02/04425、WO 03/007945、WO 03/010140、WO 03/010141、WO 2004/064925、 WO 2004/065367、WO 2005/080388 和 WO 2006/007693( 均 为 Boehringer Ingelheim的 )，WO 2005/049622(Japan Tobacco)，WO 2005/014543(Japan Tobacco)，WO 2005/012288(Genelabs)，WO 2004/087714(IRBM)，WO 03/101993(Neogenesis)，WO 03/026587(BMS)，WO 03/000254(Japan Tobacco)和WO 01/47883(Japan Tobacco)，以及临床候选品XTL-2125、HCV 796、R-1626和NM 283。 [0148] HCV生命周期中的另一靶的抑制剂包括有效抑制HCV形成和/或复制而非通过抑制HCV NS3蛋白酶的功能的药剂(化合物或生物制品)。 此类药剂可干扰对于HCV的形成和/或复制所必需的宿主或HCV病毒机制。 HCV生命周期中的另一靶的抑制剂包括但不限于进入抑制剂，抑制选自下列的靶的药剂：螺旋酶、NS2/3蛋白酶和内核糖体进入位点(IRES)，以及干扰其它病毒靶包括但不限于NS5A蛋白和NS4B蛋白的功能的药剂。 [0149] 可以想到，患者可能同时感染丙型肝炎病毒以及一种或多种其它病毒包括但不限于人免疫缺陷病毒(HIV)、甲肝病毒(HAV)和乙肝病毒(HBV)。 因此还考虑组合治疗法以治疗此种共同感染，其方式是通过共同施用本发明化合物以及HIV抑制剂、HAV抑制剂和HBV抑制剂中的至少一种。 [0150] 根据再另一实施方案，本发明药物组合物可进一步包含HCV生命周期中的其它靶包括但不限于螺旋酶、聚合酶、金属蛋白酶和内核糖体进入位点(IRES)的抑制剂。 [0151] 根据另一实施方案，本发明药物组合物可进一步包含另一抗病毒剂、抗细菌剂、抗真菌剂或抗癌剂，或者免疫调节剂，或者另一治疗剂。 [0152] 根据再另一实施方案，本发明包括在有此治疗需求的受试者中治疗病毒感染例如但不限于丙型肝炎感染的方法，其方式是给所述受试者施用有效量的本发明化合物或其药学可接受的盐、酯或前药。 [0153] 根据进一步的实施方案，本发明包括在有此治疗需求的受试者中治疗丙型肝炎感染的方法，其方式是给所述受试者施用抗-HCV病毒有效量或抑制量的本发明化合物。 [0154] 本发明的另外的实施方案包括通过使生物样品与本发明化合物接触来处理生物样品的方法。 [0155] 本发明再进一步的方面是应用本文所述任一合成方法来制备本文所述任一化合物的方法。 [0156] 用于本发明的细胞色素P450单氧合酶抑制剂期待抑制本发明化合物的代谢。因此，细胞色素P450单氧合酶抑制剂将是有效抑制蛋白酶抑制剂的代谢的量。相应地，该CYP抑制剂是以这样的量施用的，即与没有CYP抑制剂时的生物利用度相比，该蛋白酶抑制剂的生物利用度增加了。 [0157] 在一个实施方案中，本发明提供了改进本发明化合物的药代动力学的方法。改进药物的药代动力学的益处是本领域公认的(US2004/0091527；US 2004/0152625； US 2004/0091527)。 相应地，本发明的一个实施方案提供了施用CYP3A4的抑制剂和本发明化合物的方法。 本发明另一实施方案提供了施用本发明化合物以及同工酶 3A4(″CYP3A4″)、同工酶2C19(″CYP2C19″)、同工酶2D6(″CYP2D6″)、同 工酶1A2(″CYP 1A2″)、同工酶2C9(″CYP2C9″)或同工酶2E1(″CYP2E1″)的 抑制剂的方法。 在优选的实施方案中，该CYP抑制剂优选抑制CYP3A4。 改善相关的NS3/4A蛋白酶的药代动力学的任一CYP抑制剂均可用于本发明的方法。 这些CYP抑制剂包括但不限于利托那韦(WO 94/14436)、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环孢菌素、氯美噻唑、西咪替丁、伊曲康唑、氟康唑、咪康唑、氟伏沙明、氟西汀、奈法唑酮、舍曲林、茚地那韦、那非那韦、安泼那韦、福沙那韦、沙奎那韦、洛匹那韦、地拉韦啶、红霉素、VX-944和VX-497。 优选的CYP抑制剂包括利托那韦、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环孢菌素和氯美噻唑。 [0159] 根据本发明的进一步特征是一种包装，其中包括至少一种本发明化合物和本发明CYP抑制剂，以及信息插页，该信息插页中含有本发明组合使用的说明。 在本发明另选的实施方案中，该药物包装进一步包含一种或多种本文所述的另外的药剂。 该另外的药剂可以在同一包装或者分离的包装中提供。 [0160] 本发明另一方面涉及供患者用于治疗HCV感染或者预防HCV感染的包装的药盒，其中包括：各药物组分的单个或多个的药物剂型；在贮存期间或者施用之前容纳该药剂剂型的容器；以及用于以有效治疗或预防HCV感染的方式进行施药的说明书。 [0161] 相应地，本发明提供了用于同时或顺次施用本发明的NS3/4A蛋白酶抑制剂以及CYP抑制剂(和任选的另外的药剂)或其衍生物的药盒，其是以常规方式制备的。 典型地，此药盒将包括，例如在药学可接受的载体中的各种抑制剂的组合物以及任选的另外的药剂(并且中一个或多个制剂中)，以及用于同时或顺次施用的书面说明书。 [0162] 在另一实施方案中，提供了一种包装的药盒，其含有一种或多种用于自行施药的剂型；在贮存期间或者使用之前容纳该剂型的容器，优选是密封的；以及用于患者进行施药的说明书。 该说明书通常是书写在包装插页、标签和/或该药盒的其它组件上的说明书，并且所述剂型是本文所述的。 各剂型可以单独放置，例如在金属箔-塑料薄片的片状物中，各剂型在单个的单元格或泡囊中相互分离，或者所述剂型可以放置在单个容器中，如在塑料瓶中。 本发明药盒亦典型地包括用于包装单个药盒组件即剂型、容器和供使用的书面说明书的形式。 此类包装形式可以采用厚纸板或纸盒、塑料或箔囊等的形式。 [0163] 定义 [0165] 术语″病毒感染″是指病毒例如丙型肝炎病毒(HCV)引入到细胞或组织中。通常，病毒的引入亦与复制有关。 可通过使用例如酶免疫分析法测定生物液体例如血液中的病毒抗体滴度来确定病毒感染。 其它适宜的诊断方法包括基于分子学的技术，例如RT-PCR、直接杂交捕捉试验、基于核酸序列的扩增等等。病毒可以感染器官例如肝脏，并引起疾病例如肝炎、肝硬化、慢性肝病和肝细胞癌。 [0166] 术语″抗癌剂″是指能够预防或抑制癌症进程的化合物或药物。 此类药剂的实例包括顺铂、放线菌素D、多柔比星、长春新碱、长春碱、依托泊苷、安吖啶、米托蒽醌、替尼泊苷、泰素(taxol)、秋水仙碱、环孢霉素A、吩噻嗪类或硫杂蒽类(thioxantheres)。 [0167] 术语″抗真菌剂″将用于描述根据本发明的不同于3-AP、3-AMP或者3-AP和3-AMP的前药的可用于治疗真菌感染的化合物。 本发明的抗真菌剂包括例如特比萘芬、氟康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、克霉唑、灰黄霉素、制霉菌素、托萘酯、卡泊芬净、两性霉素B、脂质体两性霉素B和两性霉素B脂质复合物。 [0168] 术语″抗细菌剂″是指由微生物产生的以抑制其它微生物生长的天然产生的抗生素，以及实验室合成或修饰的药剂，其具有杀菌或抑菌活性，例如β-内酰胺类抗细菌剂、糖肽类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类和氨基糖甙类。 一般地，如果抗细菌剂是抑菌剂，其表示该药剂基本上终止细菌生长(但不是杀灭细菌)；如果该药剂是杀菌剂，其表示该药剂会杀灭该细菌细胞(并且在杀灭该细菌之前可终止其生长)。 [0169] 术语″免疫调节剂″是指改变受试者的体液或细胞免疫系统的工作的任何物质。 此类免疫调节剂包括肥大细胞介导的炎症的抑制剂、干扰素、白细胞介素、前列腺素、甾族化合物、皮质激素、集落刺激因子、趋化因子等。 [0170] 术语″C1-C6烷基″或者″C1-C8烷基″等，如本文使用的，是指饱和的直链或支链烃基，其分别含有1-6个或者1-8个碳原子。C1-C6烷基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基；C1-C8烷基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基、庚基、辛基。 [0171] 术语″C2-C6链烯基″或″C2-C8链烯基″等，如本文使用的，表示得自一种烃基部分的基团，其中该烃基部分具有至少一个碳-碳双键并且分别含有2-6个或者2-8个碳原子。 链烯基基团包括但不限于例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基、庚烯基、辛烯基等。 [0172] 术语″C2-C6炔基″或″C2-C8炔基″等，如本文使用的，表示得自一种烃基部分的基团，其中该烃基部分具有至少一个碳-碳叁键并且分别含有2-6个或者2-8个碳原子。典型的炔基基团包括但不限于例如乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基、庚炔基、辛炔基等。 [0173] 术语″C3-C8-环烷基″或″C3-C12-环烷基″等，如本文使用的，表示得自一种单环或多环饱和碳环的基团，其中该饱和碳环化合物分别具有3-8个或者3-12个环原子。 C3-C8-环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基；并且C3-C12-环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.1]庚基和双环[2.2.2]辛基。 [0174] 术语″C3-C8-环烯基″或″C3-C12-环烯基″等，如本文使用的，表示得自单环或多环碳环化合物的基团，其具有至少一个碳-碳双键，其中所述碳环化合物分别具有3至8个或者3至12个环原子。C3-C8-环烯基的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基等；C3-C12-环烯基的实例包括但不限于环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基等。 [0175] 术语″芳基″，如本文使用的，是指具有1或2个芳族环的单环或双环状环系统，其包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等。 [0176] 术语″芳基烷基″，如本文使用的，是指连接于芳环的C1-C3烷基或C1-C6烷基残基。 实例包括但不限于苄基、苯乙基等。 [0177] 术语″杂芳基″，如本文使用的，是指具有5至10个环原子且其中至少一个环原子选自S、O和N的单-、双-或三-环芳族基团；其中包含在该环中的任意N或S可以任选被氧化。 杂芳基包括但不限于吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、 唑基、异 唑基、噻二唑基、 二唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并 唑基、喹喔啉基等。 [0178] 术语″杂芳基烷基″，如本文使用的，是指连接于杂芳基环的C1-C3烷基或C1-C6烷基残基。 实例包括但不限于吡啶基甲基、嘧啶基乙基等。 [0179] 术语″取代的″，如本文使用的，是指用取代基独立地置换其上的一个、两个或三个或者更多个氢原子，所述取代基包括但不限于-F、-Cl、-Br、-I、-OH、保护的羟基、-NO2、-CN、-NH2、N3、保护的氨基、烷氧基、硫代烷氧基、氧代、-卤代-C1-C12-烷基、-卤代-C2-C12-链烯基、-卤代-C2-C12-炔基、-卤代-C3-C12-环烷基、-NH-C1-C12-烷基、-NH-C2-C12-链烯基、-NH-C2-C12-炔基、-NH-C3-C12-环烷基、-NH-芳基、-NH-杂芳基、-NH-杂环烷基、-二烷基氨基、-二芳基氨基、-二杂芳基氨 基、-O-C1-C12-烷基、-O-C2-C12-链烯基、-O-C2-C12-炔 基、-O-C3-C12-环烷基、-O-芳基、-O-杂芳基、-O-杂环烷基、-C(O)-C1-C12-烷 基、-C(O)-C2-C12- 链 烯 基、-C(O)-C2-C12- 炔 基、-C(O)-C3-C12- 环 烷 基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、-C(O)-杂环烷基、-CONH2、-CONH-C1-C12-烷 基、-CONH-C2-C12- 链 烯 基、-CONH-C2-C12- 炔 基、-CONH-C3-C12- 环 烷 基、-CONH-芳 基、-CONH- 杂 芳 基、-CONH- 杂 环 烷 基、-OCO2-C1-C12- 烷 基、-OCO2-C2-C12-链烯基、-OCO2-C2-C12-炔基、-OCO2-C3-C12-环烷基、-OCO2-芳基、-OCO2- 杂 芳 基、-OCO2- 杂 环 烷 基、-OCONH2、-OCONH-C1-C12- 烷 基、-OCONH-C2-C12- 链 烯 基、-OCONH-C2-C12- 炔 基、-OCONH-C3-C12- 环 烷基、-OCONH-芳基、-OCONH-杂芳基、-OCONH-杂环烷基、-NHC(O)-C1-C12-烷 基、-NHC(O)-C2-C12- 链 烯 基、-NHC(O)-C2-C12-炔 基、-NHC(O)-C3-C12-环 烷基、-NHC(O)-芳基、-NHC(O)-杂芳基、-NHC(O)-杂环烷基、-NHCO2-C1-C12-烷 基、-NHCO2-C2-C12- 链 烯 基、-NHCO2-C2-C12- 炔 基、-NHCO2-C3-C12- 环 烷 基、-NHCO2- 芳 基、-NHCO2- 杂 芳 基、-NHCO2- 杂 环 烷 基、-NHC(O) NH2、-NHC(O)NH-C1-C12- 烷 基、-NHC(O)NH-C2-C12- 链 烯 基、-NHC(O) NH-C2-C12-炔 基、-NHC(O)NH-C3-C12-环 烷 基、-NHC(O)NH- 芳 基、-NHC(O) NH- 杂 芳 基、-NHC(O)NH- 杂 环 烷 基、NHC(S)NH2、-NHC(S)NH-C1-C12- 烷 基、-NHC(S)NH-C2-C12- 链 烯 基、-NHC(S)NH-C2-C12- 炔 基、-NHC(S) NH-C3-C12-环烷基、-NHC(S)NH-芳基、-NHC(S)NH-杂芳基、-NHC(S)NH-杂环 烷基、-NHC(NH)NH2、-NHC(NH)NH-C1-C12-烷 基、-NHC(NH)NH-C2-C12-链 烯 基、-NHC(NH)NH-C2-C12-炔基、-NHC(NH)NH-C3-C12-环烷基、-NHC(NH)NH-芳 基、-NHC(NH)NH-杂 芳 基、-NHC(NH)NH- 杂 环 烷 基、-NHC(NH)-C1-C12- 烷 基、-NHC(NH)-C2-C12-链烯基、-NHC(NH)-C2-C12-炔基、-NHC(NH)-C3-C12-环 烷基、-NHC(NH)-芳基、-NHC(NH)-杂芳基、-NHC(NH)-杂环烷基、-C(NH) NH-C1-C12-烷基、-C(NH)NH-C2-C12-链烯基、-C(NH)NH-C2-C12-炔基、-C(NH) NH-C3-C12-环 烷 基、-C(NH)NH- 芳 基、-C(NH)NH- 杂 芳 基、-C(NH)NH- 杂 环 烷 基、-S(O)-C1-C12- 烷 基、-S(O)-C2-C12- 链 烯 基、-S(O)-C2-C12- 炔基、-S(O)-C3-C12-环 烷 基、-S(O)-芳 基、-S(O)- 杂 芳 基、-S(O)-杂 环 烷基-SO2NH2、-SO2NH-C1-C12-烷 基、-SO2NH-C2-C12-链烯 基、-SO2NH-C2-C12- 炔基、-SO2NH-C3-C12- 环 烷 基、-SO2NH- 芳 基、-SO2NH- 杂 芳 基、-SO2NH- 杂环 烷 基、-NHSO2-C1-C12- 烷 基、-NHSO2-C2-C12- 链 烯 基、-NHSO2-C2-C12- 炔基、-NHSO2-C3-C12-环烷基、-NHSO2-芳基、-NHSO2-杂芳基、-NHSO2-杂环烷 基、-CH2NH2、-CH2SO2CH3、-芳基、-芳烷基、-杂芳基、-杂芳基烷基、-杂环 烷基、-C3-C12-环烷基、多烷氧基烷基、多烷氧基、-甲氧基甲氧基、-甲氧基乙氧基、-SH、-S-C1-C12-烷基、-S-C2-C12-链烯基、-S-C2-C12-炔基、-S-C3-C12-环烷基、-S-芳基、-S-杂芳基、-S-杂环烷基、甲基硫基甲基或-L′-R′，其中L′是 C1-C6亚烷基、C2-C6亚链烯基或C2-C6亚炔基，并且R′是芳基、杂芳基、杂环、C3-C12环烷基或C3-C12环烯基。 应当理解，所述芳基、杂芳基、烷基等可进一步被取代。 在某些情况下，取代部分的各取代基另外任选被一个或多个基团取代，各基团独立地选自-F、-Cl、-Br、-I、-OH、-NO2、-CN或-NH2。 当有至少两个被取代基取代的氢原子时，该两个取代基可以一起形成环烷基、环烯基或杂环环。 [0180] 根据本发明，本文描述的任一芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基可以是任何芳族基团。 芳族基团可以是取代的或未取代的。 [0181] 应当理解，本文描述的任一烷基、链烯基、炔基、环烷基和环烯基部分亦可以是脂肪族基团、脂环族基团或杂环基团。 “脂肪族基团”是非族族部分，其可含有碳原子、氢原子、卤素原子、氧、氮或其它原子的任意组合，并且任选含有一个或多个不饱和单元，例如双和/或叁键。脂肪族基团可以是直链、支链或环状的，并且优选含有约1至约24个碳原子，更典型地为约1至约12个碳原子。 除了脂肪族烃基以外，脂肪族基团包括，例如，多烷氧基烷基如聚亚烷基二醇类、聚胺类和聚亚胺类。 此类脂肪族基团可以进一步被取代。 应当理解，脂肪族基团可以取代本文所述烷基、链烯基、炔基、亚烷基、亚链烯基和亚炔基基团使用。 [0182] 术语″脂环族″，如本文使用的，是指得自单环或多环状饱和碳环化合物的基团。实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.2.1]庚基和双环[2.2.2]辛基。 此类脂环族基团可以进一步被取代。 [0183] 术语″杂环烷基″和″杂环″可以互换使用，并且是指非芳族3-、4-、5-、6-或7-元环或者双-或三-环基团稠合系统，其中(i)各环含有1至3个独立地选自氧、硫和氮的杂原子，(ii)各5-元环具有0至1个双键并且各6-元环具有0至2个双键， (iii)所述氮和硫杂原子可任选被氧化，(iv)该氮杂原子可任选被季铵化，(v)上述环的任一个可以与苯环稠合，以及(vi)其它环原子是碳原子，其可任选被氧代取代。 典型的杂环烷基基团包括但不限于[1，3]二氧戊环、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、 唑烷基、异 唑烷基、吗啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、喹喔啉基、哒嗪酮基和四氢呋喃基。 此类杂环基团可以进一步被取代，得到取代的杂环。 [0184] 显然，在本发明的各种实施方案中，取代或未取代的烷基、链烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基烷基、杂芳基烷基和杂环烷基将是单价、二价或多价的。因此，亚烷基、亚链烯基和亚炔基、亚环烷基、亚环烯基、亚环炔基、亚芳基烷基、亚杂芳基烷基和亚杂环烷基基团包括在上述定义中，并且适用于以适当价态提供本文的通式。 [0185] 术语″羟基活化基团″，如本文使用的，是指一种本领域已知的不稳定的化学部分，其活化羟基从而在合成操作期间例如在取代或消除反应中脱离。 羟基活化基团的实例包括但不限于甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根、对硝基苯甲酸根、膦酸根等。 [0186] 术语″活化的羟基″，如本文使用的，是指用上文定义的羟基活化基团活化的羟基，所述羟基活化基团包括例如甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根、对硝基苯甲酸根、膦酸根。 [0188] 术语″卤代″和″卤素″，如本文使用的，是指选自氟、氯、溴和碘的原子。 [0189] 本文描述的化合物含有一个或多个不对称中心且因此产生对映异构体、非对应异构体、及其它立体异构的形式，其可以根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-，或者对于氨基酸为(D)-或(L)-本发明意欲包括所有这些可能的异构体，以及它们的外消旋的和旋光纯的形式。 旋光异构体可由它们相应的旋光活性前体通过如上所述的方法，或通过拆分消旋混合物来制备。 在拆分试剂存在下通过色谱层析或通过反复结晶或通过本领域技术人员公知的这些技术的组合来进行拆分。 关于拆分的具体资料可见于Jacques，et al.，Enantiomers，Racemates，andResolutions(John Wiley&Sons，1981)。当本文描述的化合物含有烯烃的双键或其它几何不对称性中心时，且除非另有说明，其是指化合物包括E和Z几何异构体两种。同样地，所有的互变异构形式也意欲包括在内。 本文出现的任意碳-碳双键构型的选择仅仅为了方便起见，而不是意欲命名一种特定的结构，除非正文中如此陈述；因此本文任意描述为反式的碳-碳双键可以是顺式的、反式的、或两者任意比例的混合物。 [0191] 本文所用术语“药学可接受的盐”是指通过本发明的方法形成的化合物的那些盐，其在合理的医学判断范围内，适于与人和低等动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等等，并且相应地具有合理的利益/危险比例。 药学可接受的盐是本领域公知的。 [0192] 术语″羟基保护基团″，如本文使用的，是指一种本领域已知的不稳定的化学部分，其在合成操作期间保护羟基避免不希望的反应。 在所述合成操作之后，本文所述的羟基保护基团可以选择性地被除去。 本领域已知的羟基保护基团一般性地描述于T.H.Greene and P.G.，S.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd edition，JohnWiley&Sons，New York(1999)。 羟基保护基团的实例包括苄氧基羰基、4-硝基苄氧基羰基、4-溴苄氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、甲氧基羰基、叔丁氧基羰基、异丙氧基羰基、二苯基甲氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、2-糠基氧基羰基、烯丙氧基羰基、乙酰基、甲酰基、氯乙酰基、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、甲基、叔丁基、2，2，2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1，1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、苄基、对-甲氧基苄基二苯基甲基、三苯基甲基(三苯甲基)、四氢呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫基甲基、苯甲氧基甲基、2，2，2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、对甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基等。本发明优选的羟基保护基团是乙酰基(Ac或-C(O)CH3)、苯甲酰基(Bz或-C(O)C6H5)和三甲基甲硅烷基(TMS或-Si(CH3)3)。 Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences，66： 1-19(1977)中详细描述了药学可接受的盐。 该盐可在本发明化合物最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱官能团与适宜的有机酸反应而分离。 药学可接受的盐的实例包括但不限于无毒性的酸加成盐，例如氨基基团与无机酸或者与有机酸形成的盐，或者通过使用本领域使用的其它方法例如离子交换法形成的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，所述有机酸例如乙酸、马来酸、酒石酸、枸橼酸、琥珀酸或丙二酸。 其它药学可接受的盐包括但不限于己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷基丙酸盐、二葡萄酸盐、十二烷基硫酸盐、乙基磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘盐、 2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、乙二酸盐、棕榈酸盐、巴莫酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。 典型的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁盐等等。 其它药学可接受的盐包括，当合适时，使用平衡离子形成的无毒的铵基、季铵、以及胺阳离子，所述平衡离子例如卤化物、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、具有1到6个碳原子的烷基、磺酸根和芳基磺酸根。 [0193] 术语″氨基保护基团″，如本文使用的，是指一种本领域已知的不稳定的化学部分，其在合成操作期间保护氨基避免不希望的反应。 在所述合成操作之后，本文所述的氨基保护基团可以选择性地被除去。 本领域已知的羟基保护基团一般性地描述于T.H.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd edition，John Wiley&Sons，New York(1999)。 氨基保护基团的实例包括但不限于叔丁氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、苄氧基羰基等。 [0194] 本文所用术语“药学可接受的酯”是指通过本发明方法形成的本发明化合物的酯，其在体内水解，并且包括在人体中容易被分解以留下母体化合物或其盐的那些。 合适的酯基包括，例如，那些得自药学可接受的脂肪族羧酸，尤其是链烷酸、链烯酸、环链烷酸和链烷双酸的酯基，其中各个烷基或链烯基部分优选具有不超过6个碳原子。 特定酯的实例包括但不限于甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。 [0195] 用文所用术语“药学可接受的前药”是指通过本发明方法形成的化合物的那些前药，其在合理的医学判断范围内，适于与人和低等动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等等，并且具有合理的利益/危险比例，和有效的目的用途，以及本发明化合物的可能的两性离子的形式。 本文使用的“前药”是指一种化合物，其在体内通过新陈代谢方式(例如通过水解)是可逆的，以得到本发明通式所描述的任意化合物。 各种形式的前药是本领域公知的，例如，论述于Bundgaard，(ed.)，Design of Prodrugs，Elsevier(1985)；Widder，et al.(ed.)，Methods in Enzymology，vol.4，Academic Press(1985)；Krogsgaard-Larsen，et al.，(ed).″Design and Application of Prodrugs，Textbook of Drug Design and Development，Chapter 5，113-191(1991)；Bundgaard，et al.，Journal of Drug Deliver Reviews，8：1-38(1992)；Bundgaard，J.of Pharmaceutical Sciences，77：285 et seq.(1988)；Higuchiand Stella(eds.)Prodrugs as Novel Drug Delivery Systems，AmericanChemical Society(1975)；以及Bernard Testa&Joachim Mayer， ″ Hydrolysis In Drug And Prodrug Metabolism：Chemistry，BiochemistryAnd Enzymology， ″John Wiley and Sons，Ltd.(2002)中的。 [0196] 术语″酰基″包括得自酸类的残基，所述酸类包括但不限于羧酸类、氨基甲酸类、碳酸类、磺酸类和亚磷酸类。 实例包括脂肪族羰基、芳族羰基、脂肪族磺酰基、芳族亚硫酰基、脂肪族亚硫酰基、芳族磷酸根和脂肪族磷酸根。 脂肪族羰基的实例包括但不限于乙酰基、丙酰基、2-氟乙酰基、丁酰基、2-羟基乙酰基等。 [0197] 术语″非质子溶剂″，如本文使用的，是指对质子活性相对惰性的溶剂，即不会以质子给予体起效。 实例包括但不限于烃类例如己烷和甲苯，例如，卤代烃类例如二氯甲烷、氯化乙烯、氯仿等，杂环化合物例如四氢呋喃和N-甲基吡咯烷酮，以及醚类例如二乙基醚、双-甲氧基甲基醚。 此类溶剂是本领域技术人员公知的，并且个别溶剂或其混合物对特定化合物和反应条件是优选的，这取决于例如以下的因素：试剂的溶解度、试剂的反应性和优选的温度范围。 非质子溶剂的进一步讨论可见于有机化学教科书或者专论中，例如：OrganicSolvents Physical Properties and Methods of Purification，4th ed.，editedby John A.Riddick et al，Vol.II， 在 Techniques of Chemistry Series，JohnWiley&Sons，NY，1986中。 [0198] 术语″亲质子有机溶剂″或″质子溶剂″，如本文使用的，是指倾向于提供质子的溶剂，例如醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇等。 此类溶剂是本领域技术人员公知的，并且个别溶剂或其混合物对特定化合物和反应条件是优选的，这取决于例如以下的因素：试剂的溶解度、试剂的反应性和优选的温度范围。 供质子溶剂的进一步讨论可见于有机化学教科书或者专论中，例如：Organic SolventsPhysical Properties and Methods of Purification，4th ed.，edited by JohnA.Riddick et al，Vol.II，在Techniques of Chemistry Series，John Wiley&Sons，NY，1986中。 [0199] 本发明预想的取代基和变体的组合仅仅是产生稳定化合物形成的那些。 本文使用的术语“稳定的″是指具有足以允许生产的稳定性以及其保持充分时间的化合物完整性来用于在本文详述的目的(例如，治疗或预防施用于受试者)的化合物。 [0200] 合成的化合物可由反应混合物中分离，并且进一步地通过诸如柱色谱法、高压液相色谱法或重结晶法进行纯化。 另外，不同的合成步骤可以任选的顺序或次序进行，以得到期望化合物。 此外，本文描述的溶剂、温度、反应时间等仅仅用于说明的目的，并且反应条件的变化可产生本发明期望的桥连大环产物。 本文描述的用于化合物合成的合成化学转化和保护基法(保护和去保护)包括，例如，在R.Larock，Comprehensive Organic Transformations，VCH Publishers(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，2d.Ed.，John Wiley and Sons(1991)；L.Fieser and M.Fieser，Fieser andFieser′s Reagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1994)；以 及L.Paquette，ed.，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis，JohnWiley and Sons(1995)中描述的那些。 [0201] 本发明化合物可通过本文所述合成方法添加不同的功能团进行修饰，以增强选择性的生物学特性。 这些修饰包括其增加进入所给生物系统(例如，血液、淋巴系统、中枢神经系统)的生物学渗透，增加口服利用率，增加溶解度以允许通过注射进行施用，改变新陈代谢和改变排泄速率的那些修饰。 [0202] 药物组合物 [0203] 本发明的药物组合物含有与一或多种药学可接受的载体一起配制的治疗有效量的本发明化合物。 此处所述的术语“药学可接受的载体″是指任意类型的无毒的、惰性固体、半固体或液体的填料、稀释剂、密封材料或制剂辅料。 可用作药学可接受的载体的材料的某些实例为糖诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素以及醋酸纤维素；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂诸如可可脂和栓剂蜡；油类诸如花生油、棉子油；红花油：芝麻油；橄榄油；玉米油以及大豆油；乙二醇类诸如丙二醇；酯类诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂诸如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原的水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇，和磷酸盐缓冲液，以及其它无毒的相容润滑剂诸如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂，释放剂，涂层剂，甜料，香料和芳香剂，防腐剂和抗氧化剂可根据配方师的判断存在于组合物中。 本发明的药物组合物可口服、直肠给药、注射、池内、阴道内、腹腔内、局部(如通过粉剂、软膏剂或滴剂)、口颊或作为口服或鼻喷入法施用于人及其它动物。 [0204] 本发明的药物组合物可以经口服、胃肠外、经吸入喷雾、局部、直肠、经鼻、经口颊、阴道或通过植入贮库来施用，优选经口服施用或经注射施用。 本发明的药物组合物可含有任何常规无毒药学可接受的载体、辅剂或载剂。 在某些情况下，该制剂的pH值可以用药学可接受的酸、碱或缓冲剂来调节以增强配制的化合物或其递送形式的稳定性。 本文所述术语胃肠外包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜腔内、胸骨内、鞘内、创伤内和颅内注射或者输注技术。 [0205] 供口服施用的液体剂型包括药学可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、悬浮剂、糖浆剂和酏剂。 除活性化合物之外，该液体剂型可含有本领域通常使用的惰性稀释剂，例如，水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、丙三醇、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨糖醇的脂肪酸酯，及其混合物。 除惰性的稀释剂之外，口服组合物还可以包括助剂诸如润湿剂、乳化和悬浮剂，甜料、香料和芳香剂。 [0206] 可注射的制剂，例如，无菌可注射的水性或油性的悬浮液可以根据已知的技术利用合适的分散或润湿剂和悬浮剂来配制。 无菌可注射的制剂也可以是在无毒的注射用稀释剂或溶剂中的无菌可注射的溶液、悬浮液或乳液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以利用的可接受的介质和溶剂为水、林格氏溶液，U.S.P.和等渗氯化钠溶液。 此外，无菌、不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。 可用于此目的任意温和的不挥发油包括合成的单-或二甘油酯。 此外，脂肪酸诸如油酸可用于可注射的制剂中。 [0207] 可以将可注射的制剂灭菌，例如通过细菌-截留滤器过滤来灭菌，或者通过掺入无菌固体组合物形式的杀菌剂来灭菌，所述组合物可在使用前溶解或分散于无菌水中或者其它无菌可注射介质中。 [0208] 为了延长药物的效果，通常需要延缓皮下或肌肉注射对药物的吸收。 这可通过利用具有弱水溶性的晶体或无定形物质的液体悬浮液实现。 然后，药物的吸收率取决于其溶解速度，其次，可取决于晶体大小和晶形。 或者，肠胃外施用药物剂型的延缓吸收通过将药物溶解或悬浮在油介质中实现。 通过在可生物降解的聚合物诸如聚丙交酯-聚乙交酯中形成药物的微囊基体来制备可注射的储存形式。 取决于药物与聚合物的比例以及所用特定聚合物的特性，可以控制药物释放的速率。 其它可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备。 [0209] 用于直肠或阴道施用的组合物优选地为栓剂，其可以通过将本发明的化合物与合适的无刺激性的赋形剂或载体诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来进行制备，所述赋形剂或载体在室温下是固体，但是在体温时是液体，因此在直肠或阴道腔内融化并释放活性化合物。 [0210] 供口服施用的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。 在这些固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性的药学可接受的赋形剂或载体例如枸橼酸或磷酸二钙和/或下列的混合：a)填充剂或增充剂例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂例如甘油，d)崩解剂例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂例如石蜡，f)吸收促进剂例如季胺化合物，g)润湿剂例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂例如高岭土和膨润土，和i)润滑剂例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂硫酸钠，及其混合物。 在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，该剂型亦可包含缓冲剂。 [0211] 类似类型的固体组合物还可用作利用赋形剂例如乳糖以及高分子量聚乙二醇等的在软和硬填充胶囊中的填料。 [0212] 活性化合物还可以是含有一或多种如上所述赋形剂的微囊形式。 片剂、糖锭、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可以用包衣与壳料诸如肠溶衣材、释放控制包衣或制剂领域公知的其它衣材来制备。 在此固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂诸如蔗糖、乳糖或淀粉一起混合。 这些剂型也可含有，如正常生产的，除了惰性稀释剂之外的其它物质，例如，压片润滑剂及其它压片助剂诸如硬脂酸镁与微晶纤维素。 就胶囊、片剂与丸剂而言，该剂型同时可以含有缓冲剂。 它们可任选地含有遮光剂，并且还可以是仅仅或优先地在肠道的某一部分，任选地以延缓方式释放活性成分的组合物。 可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。 [0213] 本发明化合物的局部或透皮施用的剂型包括药膏、糊剂、乳膏剂、洗液、凝胶、粉末、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。 在无菌条件下将活性组分与药学可接受的载体以及需要的任意需要的防腐剂或缓冲液混合。 眼用的制剂、滴耳剂、眼膏、粉末和溶液也在本发明的范围内。 [0214] 除本发明的活性物质之外，药膏、糊剂、乳膏剂和凝胶还可含有赋形剂诸如动物和植物脂肪、油类、蜡、石蜡油、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅树脂、膨润土、硅酸、滑石以及氧化锌，或其混合物。 [0215] 除本发明的化合物之外，粉末和喷雾剂还可含有赋形剂诸如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。 喷雾剂可另外含有常规的推进物诸如氯氟烃。 [0216] 透皮贴片具有给身体提供控制递送化合物的其它优点。 此剂型可通过将化合物溶解或分散在适当的介质中来进行制备。 也可以使用吸收增强剂来增强化合物穿越皮肤的流动性。 可通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或者凝胶中来控制速率。 [0217] 抗病毒活性 [0218] 本发明化合物的抑制量或剂量可以是约0.01mg/Kg至约500mg/Kg的范围，或者从约1至约50mg/Kg。 抑制量或剂量也取决于施用途径以及与其它药剂共同使用的可能性而变化。 [0219] 根据本发明的治疗方法，通过以实现期望结果所必需的量和时间将抗-丙型肝炎病毒有效量或抑制量的本发明化合物施用于受试者来治疗或预防受试者诸如人或低等哺乳动物的病毒感染。 本发明的其它方法是以实现期望结果所必需的量和时间用抑制量的本发明组合物的化合物处理生物样品。 [0220] 本发明使用的术语本发明化合物的“抗-丙型肝炎病毒有效量”，是指充分量的化合物使得能够减少生物样品或受试者中的病毒载量(例如，导致病毒载量减少至少10％，优选至少50％，更优选至少80％，最优选至少90％或95％)。如医药领域所理解的，本发明化合物的抗-丙型肝炎病毒有效量应具有适于任意医学治疗的合理的益处/风险比率。 [0221] 术语本发明化合物的“抑制量”是指足以减少生物样品或受试者中丙型肝炎病毒载量的量(例如，导致病毒载量减少至少10％，优选至少50％，更优选至少80％，最优选至少90％或95％)。 可以理解当所述抑制量的本发明化合物施用于受试者时，其为适用于医生所确定的任意医学治疗的合理的益处/风险比。 在这里使用的术语“生物样品”，是指意欲施用于受试者的生物来源的物质。 生物样品的实例包括，但不限于血液和其组分诸如血浆、血小板、血细胞的亚群等等；器官诸如肾脏、肝脏、心脏、肺等等；精子和卵子；骨髓及其组分；或干细胞。因此，本发明的另一实施方案是通过将所述生物样品与抑制量的本发明的化合物或药物组合物接触处理生物样品的方法。 [0222] 在改善了受试者的病症后，如果必要，可施用维持量的本发明的化合物、组合物或其组合。 随后，施用的剂量或频率或二者，作为症状的函数，可以减少到当症状已经减轻至期望水平治疗应该停止时保持的改善病症。 然而，受试者可能在任意病征复发后需要长期的间歇疗法。 [0223] 然而，应能理解，本发明化合物和组合物的总日用量在医生合理的医学判断的范围内将由主治医师确定。 用于任意特定患者的特定抑制剂量取决于各种因素，包括待治疗的紊乱和紊乱的严重性；所用特定化合物的活性；所用的特定组合物；患者的年龄、体重、健康状态、性别和饮食；施用的时间，给药途径，以及所用特定化合物的排泄速率；治疗的持续时间；与所用特定化合物组合或同时使用的药物；以及在医药领域中公知的类似因素。 [0224] 以单一的或以分开的剂量施用于受试者的本发明化合物的总的日抑制剂量可以为，例如0.01到50mg/kg体重或更通常地0.1到25mg/kg体重。 单剂量组合物可含有这些量或其约量来构成日剂量。 通常，本发明的治疗方案包括以单一的或多剂量的方式每天将约10mg到约1000mg的本发明的化合物施用于需要此种治疗的患者。 [0225] 除非另有说明，在这里使用的所有技术和科学术语的含义与本领域的普通技术人员通常所了解的含义是一致的。 在这里提到的所有出版物、专利、公开的专利申请及其它参考文献整体引入作为参考。 [0226] 缩写 [0227] 在示意图描述以及以下实施例中使用的缩写为： [0228] ACN为乙腈； [0229] BME为2-巯基乙醇； [0230] BOP为苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸 盐； [0231] COD为环辛二烯； [0232] DAST为二乙基氨基硫三氟化物； [0233] DABCYL为6-(N-4′-羧基-4-(二甲氨基)偶氮苯)-氨基己基-1-O-(2-氰乙基)-(N，N-二异丙基)-亚磷酰胺； [0234] DCM为二氯甲烷； [0235] DIAD为二异丙基偶氮二羧酸酯； [0236] DIBAL-H为二异丁基氢化铝； [0237] DIEA为二异丙基乙胺； [0238] DMAP为N，N-二甲基氨基吡啶； [0239] DME为乙二醇二甲醚； [0240] DMEM为Dulbecco′s改良Eagles培养基； [0241] DMF为N，N-二甲基甲酰胺； [0242] DMSO为二甲基亚砜； [0243] DUPHOS为 [0244] EDANS为5-(2-氨基-乙基氨基)-萘-1-磺酸； [0245] EDCI或EDC为1-(3-二乙基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐； [0246] EtOAc为乙酸乙酯； [0247] HATU为O(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯； [0248] Hoveyda′s Cat.为二氯(o-异丙氧基苯基亚甲基)(三环己基膦)钌盐(II)； [0249] KHMDS为二(三甲基甲硅烷基)-酰胺钾； [0250] Ms为甲磺酰基； [0251] NMM为N-4-甲基吗啉； [0252] PyBrOP为溴代-三-吡咯烷并-六氟磷酸 盐； [0253] Ph为苯基； [0254] RCM为闭环易位作用； [0255] RT为逆转录； [0256] RT-PCR为逆转录-聚合酶链式反应； [0257] TEA为三乙基胺； [0258] TFA为三氟乙酸； [0259] THF为四氢呋喃； [0260] TLC为薄层色谱法； [0261] TPP或PPh3为三苯基膦； [0262] tBOC或Boc为叔-丁氧基羰基；和 [0263] Xantphos为4，5-二-二苯基膦基-9，9-二甲基-9H-呫吨。 [0264] 合成方法 [0265] 本发明的化合物和方法通过下述举例说明本发明化合物制备方法的流程将被更好的理解，它们仅是用于说明而非限制本发明范围。 对公开的实施方案的各种变化和修饰对于本领域技术人员而言是显然的，并且此类非限制性地包括与本发明化学结构、取代基、衍生物和/或方法相关的那些变化和修饰可以被实施而不会脱离本发明的精神和所附权利要求的范围。 [0266] 流程1 [0267] [0268] 制备作为HCV蛋白酶抑制剂的氟化大环化合物的通用方法列于流程1中。使用偶合剂例如HATU使大环核羧酸1-1与二氟甲基P1化合物1-2偶合，得到酯1-4，使其转化成酸1-5。 酸1-4到磺酰胺1-6的进一步转化是通过使用CDI/碱/环丙基磺酰胺实现的。 或者，化合物1-1与二氟甲基P1-P1’1-3的偶合，直接得到化合物1-6。 分别从相应不饱和母体化合物的氢化作用制备化合物1-7和1-8。 [0269] 流程2 [0270] [0271] 大环核化合物1-1通常通过使用Ru衍生物作为催化剂的前体化合物2-1的闭环易位作用，接着碱水解制备的，如流程2所示。 [0272] 流程3 [0273] [0274] 式2-1表示的各种大环核化合物是从Boc-L-羟基脯氨酸甲基酯、相应的氨基酸衍生物和X-Y-W表示的中间体制备的。 这种用于合成大环核化合物的通用合成策略描述于流程3。 [0275] 流程4 [0276] [0277] 大环核化合物的制备进一步示例于流程4。 化合物4-1与羟胺反应，得到肟4-2，在碱性条件下使其与脯氨酸衍生物4-3偶合，得到化合物4-4。 接着经Suzuki或Stille型反应的乙烯化作用，得到化合物4-5。 Boc基团脱保护，接着与叔-亮氨酸微生物偶合，得到化合物4-6，其进一步脱保护，再与相应的氯甲酸酯反应，得到易位前体 4-7。 该闭环易位作用得到大环核酯4-8，使其水解，得到大环核酸4-9(即式1-1)。 [0278] 流程5 [0279] [0280] 二氟甲基P1氨基酸酯(1-2)的合成显示于流程5。 使单-Boc氨基酸酯5-1进一步保护成二-Boc氨基酸酯5-2。 氧化裂解化合物5-2得到醛5-3，然后使用氨基硫三氟化衍生物例如二乙基氨基硫三氟化物(DAST)使其转化成二氟甲基化合物5-4。5-4使用HCl脱保护得到需要的二氟甲基P1化合物1-2。 [0281] 流程6 [0282] [0283] 流程6描述了二氟甲基P1磺酰胺衍生物(1-3)的合成。 化合物5-2水解得到酸6-1，使用CDI/RSO2NH2/DBU或EDCI/DMAP/RSO2NH2使其转化成6-2。 6-2脱保护 得到需要的二氟甲基P1磺酰胺中间体1-3。 [0284] 本文引用的所有文献，不论是已出版的、电子的、计算机可读的存储介质或其它形式的，均在本文整体引入作为参考，包括但不限于，摘要、文章、杂志、出版物、原文、论文、因特网网址、数据库、专利、以及专利公开。实施例 [0285] 本发明的化合物和方法结合下述实施例将被更好的理解，这些实施例仅是用于说明而非限制本发明范围。 对公开的实施方案的各种变化和修饰对于本领域技术人员而言是显然的，并且此类非限制性地包括与本发明化学结构、取代基、衍生物、制剂和/或方法相关的那些变化和修饰可以被实施而不会脱离本发明的精神和所附权利要求的范围。 [0286] 实施例1.式XI化合物，其中(肟E异构体) [0287] 步骤1A [0288] [0289] 使化合物1A1(0.5g，1.93mmol)、盐酸羟胺(0.67g，5eq.)和甲醇(12m)的混合物在回流下加热5h，冷却至室温，用EtOAc稀释，用NaHCO3水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，再浓缩至干燥，得到化合物1A(0.46g)，其直接用于下一步骤。 [0290] 步骤1B [0291] [0292] 向化合物1A(0.458g，1.67mmol)、化合物1B1(1.84mmol)在DMF(4ml)中的溶液中加入碳酸铯(0.91g，2.79mmol)。使所得混合物在50℃下搅拌22h，冷却至室温，用EtOAc稀释，用水、盐水(3x)洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下浓缩，再将残余物通过色谱法纯化(己烷/EtOAC＝1∶0至4∶1)，得到1B(0.75g)。 MS(ESI)：m/z 501.30，503.28(M+H)；523.20，525.20(M+Na)。 [0293] 步骤1C [0294] [0295] 向化合物1B(0.75g，1.5mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(0.61g，4.5mmol)、三乙胺(0.63ml，4.5mmol)和乙醇(15ml)的混合物中加入含有CH2Cl2的1，1’-二(二苯基膦)膦)二茂铁钯(II)氯化物络合物(50mg，0.06mmol)。 使所得混合物在75℃下搅拌20h，冷却至室温，用10％KHSO4水溶液猝灭，用乙酸乙酯(3x)萃取。 使合并的有机层干燥(MgSO4)，在真空下浓缩，再将残余物通过色谱法纯化(己烷/EtOAC＝1∶0至 4∶1)，得到1C(0.27g)。 MS(ESI)：m/z 449.32(M+H)，471.29(M+Na)。 [0296] 步骤1D [0297] [0298] 将化合物1C(0.6mmol)在二氯甲烷(2ml)中的溶液用4M HCl/二 烷(3ml，12mmol)处理。 使所得混合物在室温下搅拌1小时，再在真空下浓缩至干燥，得到化合物1D的HCl盐(100％)。 MS(ESI)：m/z 349.09(M+H)。 [0299] 步骤1E [0300] [0301] 向化合 物1D(HCl盐，77mg，0.2mmol)、化合 物1E1(77mg，0.3mmol) 和DIPEA(0.11ml，0.63mmol)在DMF(2ml)中的溶液中在0℃下加入HATU(115mg，0.3mmol)。 使该混合物在室温下搅拌18h，用EtOAc稀释，再用半饱和NaCl水溶液洗涤4次。 使有机相用无水MgSO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。 使残余物通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAC＝9∶1至6∶4)，得到化合物1E(57mg)。 MS(ESI)：m/ e 588.13(M+H)。 [0302] 步骤1F [0303] [0304] 向化 合物1E(50mg，0.09mmol)在二 氯甲 烷(15ml)中的 溶液 中加 入Hoveyda-Grubbs′第一代催化剂或类似催化剂(5mol％eq.)。 使反应混合物在40℃下搅拌20h。 然后蒸发溶剂，再将该残余物通过硅胶快速色谱法使用梯度洗脱纯化。 然后蒸发溶剂，再将该残余物通过硅胶快速色谱法使用梯度洗脱纯化(己烷/EtOAC＝6∶1至 3∶1)，得到大环化合物1F(10mg)。 MS(ESI)m/z 560.38(M+H)。 [0305] 步骤1G [0306] [0307] 向化合物1F(10mg，0.017mmol)在THF/MeOH(2ml/1ml)中的溶液中加入1N氢氧化锂(1ml，1mmol)。 使该混合物在室温下搅拌20小时。 在真空下蒸发大部分有机溶剂，再将所得残余物用水稀释，再酸化至pH 5至6。 将该混合物用EtOAc萃取3次。 使合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，浓缩，再在真空下浓缩，得到1G(100％)。 MS(ESI)：m/z 546.36(M+H)。 [0308] 步骤1H [0309] [0310] 向化合物1H1(6.6g，25.85mmol)在THF(115ml)中的溶液中在-78℃下缓缓加入NaHMDS(1.0M，在THF中，28.5ml，28.5mmol)。该混合物在-78℃下搅拌1小时之后，加入在THF(15ml)中的Boc2O(6.8g，1.2eq.)。搅拌所得混合物，再使温度逐渐升高到室温过夜。 使反应混合物用EtOAc稀释，用盐水(2x)洗涤，干燥(MgSO4)，再在真空下干燥。 使该残余物通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAc＝1∶0至85∶15)，得到1H(8.05g)。 [0311] 步骤1I [0312] [0313] 向化合物1H(0.5g，1.4mmol)在异丙醇(5ml)中的溶液中加入NaIO4(0，9g，4.2mmol)，接着加入水(5ml)。 向此剧烈搅拌的混合物中加入OsO4(0.4％水溶液， 0.22m，2.5％eq.)。 使所得混合物在室温下搅拌4h，用EtOAc稀释，用NaHCO3水溶液、Na2S2O3水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，再在真空下干燥。 使该残余物通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAc＝1∶0至85∶15)，得到II(0.37g)。 [0314] 步骤1J [0315] [0316] 向化合物1I(2.9g，8.1mmol)在二氯甲烷(25ml)中的溶液中在-78℃下加入二乙基氨基硫三氟化物(DAST)(2.7ml，20.25mmol)。 使所得混合物在-78℃下搅拌1小时，然后用6h使温度逐渐升高到室温，用EtOAc稀释，用NaHCO3水溶液(2x)、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，再在真空下干燥。使该残余物通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAc＝1∶0至85∶15)，得到1J(1.49g)。 回收起始物质1I(1.2g)。 [0317] 步骤1K [0318] [0319] 向化合物1J(381mg，1.4mmol)在THF/MeOH(24ml-12ml)中的溶液中加入氢氧化锂水合物水溶液(1.0M，12ml，12mmol)。 使该混合物在室温下搅拌2天。 在真空下蒸发大部分有机溶剂，再将所得残余物用水稀释，再酸化至pH 5至6。 将该混合物用EtOAc萃取3次。 使合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，浓缩，再在真空下浓缩，得到化合物1K(～100％)，其直接用于下一步骤。 [0320] 步骤1L [0321] [0322] 使化合物1K(1.33mmol)和羰二咪唑(323mg，2.mmol)溶解于5ml无水DMF中，再使所得溶液在40℃下搅拌1小时。 向反应混合物中加入环丙基磺酰胺(483mg， 4mmol)，接着加入DBU(0.26ml，1.7mmol)。使反应混合物在40℃下搅拌18小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，再用半饱和NaCl水溶液洗涤4次。将有机层用无水(MgSO4)干燥，再在真空中浓缩，得到化合物1L，使其直接用于下一步骤1M。 [0323] 或者，从化合物1K使用偶合试剂EDCI/DMAP和环丙基磺酰胺制备化合物1L。 [0324] 步骤1M [0325] [0326] 使以上化合物1L在二氯甲烷(1ml)中的溶液用4N HCl/1，4-二 烷(4ml，16mmol)处理。使该混合物在室温下搅拌1小时，浓缩至干燥，得到1M，其直接用于下一步骤。 [0327] 步骤1N [0328] [0329] 向 化 合 物 1G(0.01mmol)、1M(1eq.) 和 DIPEA(0.05ml，0.287mmol) 在DMF(1ml)中的溶液中在0℃下加入HATU(24mg，0.063mmol)。 使该混合物在室温下搅拌18h，用EtOAc稀释，再用半饱和NaCl水溶液洗涤4次。 使有机相用无水MgSO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。 将残余物通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(1mg)。 MS(ESI)；m/z 782.27(M+H)。 [0330] 实 施 例 2. 式 XI 化 合 物， 其 中(肟Z异构体) [0331] [0332] 其使用如实施例1所述相同操作法制备。 MS(ESI)：m/z 782.27(M+H)。 [0333] 实施例3.式XI化合物，其中 (肟Z异构体) [0334] 步骤3A [0335] [0336] 向化 合物3A1(80 ％，3.05g，12，3mmol)、烯 丙基 溴(2ml，23mmol) 在DMF(20ml)中的溶液中加入碳酸铯(7.6g，23.3mmol)。 使所得混合物在40℃下搅拌22h，冷却至室温，用EtOAc稀释，用水、盐水(3x)洗涤，干燥(MgSO4)，浓缩并结晶，得到化合物3A(2.25g)。 [0337] 步骤3B [0338] [0339] 使化合物3A(2.25g，9.5mmol)、盐酸羟胺(1.95g，28mmol)和甲醇(50m)的混合物在回流下加热5h，冷却至室温，用EtOAc稀释，用NaHCO3水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，再浓缩至干燥，得到化合物3B(2.2g)。 [0340] 步骤3C [0341] [0342] 向化合物3C(2.17g，8.64mmol)、化合物3C1(9.6mmol)在DMF(14ml)中的溶液中加入碳酸铯(4.7g，14.4mmol)。 使所得混合物在50℃下搅拌22h，冷却至室温，用EtOAc稀释，用水、盐水(3x)洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下浓缩，再将残余物通过色谱法纯化(己烷/EtOAC＝1∶0至4∶1)，得到3C(2.09g)。 MS(ESI)：m/z479.29(M+H)。 [0343] 步骤3D [0344] [0345] 将化合物3C(4.4mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液用4M HCl/二 烷(8ml，32mmol)处理。 使所得混合物在室温下搅拌1小时，再在真空下浓缩至干燥，得到化合物3D的HCl盐(100％)。 MS(ESI)：m/z 379.22(M+H)。 [0346] 步骤3E [0347] [0348] 向化合物3D(4.4mmol)、Boc-L-叔亮氨酸1.22g，5.28mmol)和DIPEA(2.5ml，13.2mmol)在DMF(15ml)中的溶液中在0℃下加入HATU(2.0g，5.26mmol)。使该混合物在室温下搅拌18h，用EtOAc稀释，再用半饱和NaCl水溶液洗涤4次。 使有机相用无水MgSO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。使残余物通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAC＝ 6∶1至4∶1)，得到化合物3E(1.6g)。MS(ESI)：m/z 592.39(M+H)，614.37(M+Na)。 [0349] 步骤3F [0350] [0351] 将化合物3E(2.7mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液用4M HCl/二 烷(8ml，40mmol)处理。 使所得混合物在室温下搅拌1小时，再在真空下浓缩至干燥，得到化合物3F的HCl盐(100％)。 MS(ESI)：m/z 492.27(M+H)。 [0352] 步骤3G [0353] [0354] 使化合物3F(0.5g，0.947mmol)溶解于二氯甲烷(10m)中，冷却至0℃，用三乙胺(0.53ml，4eq.)处理，接着用氯甲酸酯化合物3G1(0.2ml，2eq.)处理。 使该混合物在室温下搅拌0.5至1小时，用乙酸乙酯稀释，用半饱和NaCl水溶液洗涤2次，干燥(MgSO4)，再在真空下干燥。使该残余物通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAc＝9∶1至7∶3)，得到化合物3G(470mg)。 MS(ESI)：m/z 576.21(M+H)。 [0355] 步骤3H [0356] [0357] 向化合物3G(450mg，0.78mmol)在二氯甲烷(100ml)中的溶液中加入Hoveyda-Grubbs′第一代催化剂或类似催化剂(5mol％eq.)。 使反应混合物在40℃下搅拌20h。 然后蒸发溶剂，再将该残余物通过硅胶快速色谱法使用梯度洗脱纯化(己烷/EtOAC＝9∶1至6∶4)，得到大环化合物3H(263mg)。 MS(ESI)m/z 548.11(M+H)。 [0358] 步骤3I [0359] [0360] 向化合物3H(85mg，0.155mmol)在THF/MeOH(10ml/5ml)中的溶液中加入1N氢氧化锂(5ml，5mmol)。使该混合物在室温下搅拌20小时。 在真空下蒸发大部分有机溶剂，再将所得残余物用水稀释，再酸化至pH 5至6。将该混合物用EtOAc萃取3次。使合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，浓缩，再在真空下浓缩，得到3I(100％)。MS(ESI)：m/z 534.12(M+H)。 [0361] 步骤3J [0362] [0363] 向 化 合 物 1G(0.057mmol)、1M(1eq.) 和 DIPEA(0.1ml，0.575mmol) 在DMF(4ml)中的溶液中在0℃下加入HATU(44mg，0.115mmol)。 使该混合物在室温下搅拌18h，用EtOAc稀释，再用半饱和NaCl水溶液洗涤4次。 使有机相用无水MgSO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。 将残余物通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(2mg)。 MS(ESI)；m/z 770.21(M+H)。 [0364] 实施例4.式XI化合物，其中(肟Z异构体) [0365] [0366] 其使用如实施例3所述相同操作法制备。 MS(ESI)：m/z 770.20(M+H)。 [0367] 实施例5.式XI化合物，其中(肟E异构体) [0368] [0369] 其使用如实施例3所述相同操作法制备。 MS(ESI)：m/z 770.21(M+H)。 [0370] 实施例6.式XI化合物，其中(肟Z异构体) [0371] [0372] 其使用如实施例3所述相同操作法制备。 MS(ESI)：m/z 770.20(M+H)。 [0373] 实施例7至140，表1中式XI的化合物，是根据实施例1至6和合成方法部分所述的操作法制备的。 [0374] 实施例141.式XII化合物，其中 [0375] [0376] 步骤141A [0377] [0378] 向1-溴-3-碘苯(3.8ml，30mmol)、苯乙炔(1.65ml，15mmol)、碘化亚铜(285mg，1.5mmol)、THF(20ml)和TMEDA(20m)的混合物中加入四(三苯膦)钯(0) (620mg，0.54mmol)。 使所得混合物在50℃下搅拌20h，冷却至室温，用EtOAc(250ml)稀释，用NaHCO3水溶液、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下浓缩，再将残余物通过色谱法纯化(己烷)，得到141a(2.7g)。 [0379] 步骤141B [0380] [0381] 使化合物141a(0.5g，1.94mmol)、三甲基甲硅烷基叠氮化物(0.9ml，6.8mmol)和DMF(3ml)的混合物在135℃下搅拌36h，冷却至室温，用EtOAc稀释，用盐水(3x)洗涤，干燥(MgSO4)，在真空下浓缩，再将残余物通过色谱法纯化(己烷/AcOEt＝4∶1至3∶1)，得到141b(350mg)。 MS(ESI)：m/z 300.06，302.03(M+H)。 [0382] 步骤141C [0383] [0384] 使化合物141b(339mgg，1.13mmol)、化合物141c-1(401mg，1.24mmol)、碳酸铯(736mg，2.26mmol)和DMF(5ml)的混合物在70℃下搅拌20h，用EtOAc稀释，用盐水(3x)洗涤，干燥(MgSO4)，再在真空下干燥。使该残余物通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAc＝9∶1至8∶2)，得到141c(373mg)。MS(ESI)：m/z 527.20，529.20(M+H)。 [0385] 步骤141D [0386] [0387] 向化合物141c(365mgg，0.69mmol)、乙烯基三氟硼酸钾(280mg，2.1mmol)、三乙胺(0.3ml)和乙醇(8ml)的混合物中加入含有CH2Cl2的1，1’-二(二苯基膦)膦)二茂铁钯(II)氯化物络合物(50mg，0.055mmol)。 使所得混合物在75℃下搅拌15h，冷却至室温，用10％KHSO4水溶液猝灭，用乙酸乙酯(3x)萃取。 使合并的有机层干燥(MgSO4)，在真空下浓缩，再将残余物通过色谱法纯化(己烷/EtOAC＝1∶0至4∶1)，得到141d(226g)。 MS(ESI)：m/z 475.14(M+H)，513.08(M+K)。 [0388] 步骤141E [0389] [0390] 将化合物141d(220mg，0.47mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液用4M HCl/二烷(3ml，12mmol)处理。 使所得混合物在室温下搅拌1小时，再在真空下浓缩至干燥，得到化合物141e的HCl盐(100％)。 MS(ESI)：m/e 375.07(M+H)。 [0391] 步骤141F [0392] [0393] 向 化 合 物141e(HCl盐，0.23mmol)、 化 合 物 141f1(90mg，0.35mmol) 和DIPEA(0.16ml，0.92mmol)在DMF(3ml)中的溶液中在0℃下加入HATU(140mg，0.37mmol)。 使该混合物在室温下搅拌18h，用EtOAc稀释，再用半饱和NaCl水溶液洗涤4次。 使有机相用无水MgSO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。 使残余物通过硅胶色谱法纯化(己烷/EtOAC＝9∶1至7∶3)，得到化合物141f(130mg)。 MS(ESI)： m/z 614.24(M+H)。 [0394] 步骤141G [0395] [0396] 向化合物141f(47mg，0.19mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中加入Hoveyda-Grubbs′第一代催化剂(5mol％eq.)。 使反应混合物在40℃下搅拌20h。 然后蒸发溶剂，再将该残余物通过硅胶快速色谱法使用梯度洗脱纯化(己烷/EtOAC＝9∶1至7∶3)，得到大环化合物141g(25mg)。 MS(ESI)m/z 586.27(M+H)。 [0397] 步骤141H [0398] [0399] 向化合物141g(20mg，0.034mmol)在THF/MeOH(4ml/2ml)中的溶液中加入1N氢氧化锂(2ml，2mmol)。 使该混合物在室温下搅拌20小时。 在真空下蒸发大部分有机溶剂，再将所得残余物用水稀释，再酸化至pH 5至6。 将该混合物用EtOAc萃取3次。 使合并的有机萃取物干燥(MgSO4)，浓缩，再在真空下浓缩，得到141h(100％)。 MS(ESI)：m/z 572.28(M+H)。 [0400] 步骤141I [0401] [0402] 该标题化合物是从141h使用实施例1步骤1N所述相同操作法制备的。MS(ESI)：m/z 808.55(M+H)。 [0403] 实施例142至206，表2中的式XII化合物是根据实施例1至141和合成方法部分所述操作法制备的。 [0404] 实 施 例 207. 式 XIII 化 合 物， 其 中 [0405] [0406] 向化合物207-1(16mg，0.03mmol)、1M(1eq.)和DIPEA(0.06ml，0.344mmol)在DMF(1ml)中的溶液中在0℃下加入HATU(20mg，0.052mmol)。使该混合物在室温下搅拌18h，用EtOAc稀释，再用半饱和NaCl水溶液洗涤4次。 使有机相用无水MgSO4干燥，过滤，然后在真空下浓缩。 将残余物通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(11mg)。 MS(ESI)；m/z 763.26(M+H)。 [0407] 实 施 例 208. 式 XIII 的 化 合 物， 其 中 [0408] [0409] 将实施例207的化合物(4mg，0.005mmol)、Pd-C(10％，4mg)和乙酸乙酯(4ml)的混合物在大气压下氢化0.5h，过滤，用乙酸乙酯洗涤。 将滤液浓缩，再将残余物通过制备型HPLC纯化，得到标题化合物(2mg)。 MS(ESI)：m/z 765.32(M+H)。 [0410] 实施例209至272，表3中的式XIII化合物是根据实施例1至208和合成方法部分所述操作法制备的。 [0411] 实施例273至338，表4中的式XIV化合物是根据实施例1至272和合成方法部分所述操作法制备的。 [0412] 本发明化合物显示出抗HCV NS3蛋白酶以及在含Huh-7细胞系的复制子中的HCV复制(基于细胞的测定法)中的有效抑制特性。 下列实施例阐述了本发明化合物用于抗-HCV效果的试验。 [0413] 实施例339.NS3/NS4a蛋白酶测定 [0414] 利用内部淬灭荧光底物测定HCV蛋白酶的活性和抑制作用。 将DABCYL和EDANS基团连接于短肽的相反末端。 蛋白水解裂解减轻了DABCYL基团对EDANS荧 光的淬灭。通过Molecular DevicesFluoromax(或等同物)利用355纳米的激发波长和485纳米的发射波长来测定荧光。 [0415] 在Corning白色半区域96-孔板(VWR 29444-312[Corning 3693])中用NS4A辅因子束缚的全长NS3HCV蛋白酶1b(最终酶浓度1到15nM)进行测定。测定缓冲液用10μM NS4A辅因子Pep 4A(Anaspec25336或自身的，MW 1424.8)补足。RET S1(Ac-Asp-Glu-Asp(EDANS)-Glu-Glu-Abu-[COO]Ala-Ser-Lys-(DABCYL)-NH2，AnaSpec 22991，MW1548.6)用作荧光肽底物。 测定缓冲液含有pH 7.5的50mMHepes、30mM NaCl和10mM BME。 酶反应在室温下，不存在和存在抑制剂的条件下进行30分钟。 肽抑制剂HCV Inh 1(Anaspec 25345，MW 796.8)Ac-Asp-Glu-Met-Glu-Glu-Cys-OH，[-20℃]和HCV Inh2(Anaspec 25346，MW 913.1)Ac-Asp-Glu-Dif-Cha-Cys-OH用作参考化合物。 [0416] IC50值利用下列公式205在ActivityBase(IDBS)中利用XLFit计算：y＝Λ A+((B-A)/(1+((C/x) D)))。 [0417] 实施例340-基于细胞的复制子测定 [0418] HCV复制子RNA的定量分析(基于HCV细胞的测定)是使用Huh11-7细胞系3 完成的(Lohmann，et al Science 285：110-113，1999)。 使细胞以4×10 细胞/孔接种于96孔板中，并给料含有DMEM(高葡萄糖)、10％胎牛血清、青霉素-链霉素和非必需氨基酸的培养基。 细胞在37℃下温育在7.5％CO2恒温箱中。 温育期结束时，利用Ambion RNAqueous96试剂盒(目录编号AM 1812)从细胞中提取和纯化总RNA。 为扩增HCV RNA以使得可通过HCV特异性探针(下面的)检测充分的材料，HCV特异性 引物(下面的)介导HCV RNA的逆转录以及利用TaqMan一步RT-PCR Master Mix试剂 盒(Applied Biosystems目录编号4309169)通过聚合酶链式反应(PCR)进行的cDNA的扩增。 RT-PCR引物的核苷酸序列，其位于HCV基因组的NS5B区域，如下： [0419] HCV正向引物“RBNS5bfor” [0420] 5′GCTGCGGCCTGTCGAGCT(SEQ ID NO：1)： [0421] HCV反向引物“RBNS5Brev” [0422] 5′CAAGGTCGTCTCCGCATAC(SEQ ID NO 2)。 [0423] 利用Applied Biosystems(ABI)Prism 7700序列检测系统(SDS)完成RT-PCR产物的检测，所述系统检测用荧光报道分子染料和猝灭剂染料标记的探针在PCR反应过程中退化时发射的荧光。在各PCR循环过程中测定荧光量的增加并反映RT-PCR产物的增加量。具体地，定量分析基于阈值循环，其中扩增绘图相交一个限定的荧光阈值。 样品 |
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