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非甾体选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)及其用途
申请号 CN201880082668.1 申请日 2018-10-23 公开(公告)号 CN111511359A 公开(公告)日 2020-08-07
申请人 IGBMC研究协会(ARI); 发明人 P·尚邦; G·华;
摘要 本 发明 涉及式1的选择性糖皮质 激素 受体激动调节剂(SEGRAM)或其衍 生物 的两种对映体；涉及式1的SEGRAM或其衍生物的氘化形式；以及涉及(式1)的SEGRAM或其衍生物的两种氘化对映体：或其药学上可接受的盐、 溶剂 化物和/或前药。本发明还涉及式1的SEGRAM或其衍生物、或其药学上可接受的对映体、氘化形式、盐、 溶剂化物 和/或前药，其用于 预防 或 治疗 需要其的受试者的炎性病症。
权利要求

1.式1的选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)或其衍生物：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药，其用于预防或治疗需要其的受试者的炎性病症。
2.根据权利要求1应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述SEGRAM为氘化形式，优选其中所述SEGRAM为式2的化合物：
3.根据权利要求1或2应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述SEGRAM为外消旋形式、或者为其两种对映体形式之一。
4.根据权利要求1至3中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中式1的SEGRAM的衍生物是式3的化合物：
其中：
-W选自O、S或CH2，
-R2选自H或CH3，且
-Z2、Z3、Z4、Z5和Z6各自独立地选自H、F、Cl、Br、CH3、OCH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、C(CH3)3、COCH3、
NO2、CN、CH＝CH2或CONH2。
5.根据权利要求1至4中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述SEGRAM不诱导或基本不诱导糖皮质激素受体的直接反式激活功能或直接反式抑制功能。
6.根据权利要求1至5中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述SEGRAM在施用给需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导与甾体抗炎药(SAID)相关的副作用。
7.根据权利要求6应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中与SAID相关的副作用选自包括以下的组：皮肤萎缩；骨质疏松；生长抑制；体重下降；脂肪量增加；瘦体重下降；胸腺、脾、肾和/或肾上腺细胞凋亡；皮质酮合成抑制；肾上腺抑制；高血糖；胰岛素抗性；血胰岛素增多和脂肪肝。
8.根据权利要求1至7中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述炎性病症的特征在于至少一种分泌的细胞因子和/或抗体的水平升高，所述至少一种分泌的细胞因子和/或抗体选自包括以下的组：IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-
17a、IL-17c、IL-17f、IL-18、IL-21、IL-22、IL-23、IL-33、TSLP、TGFβ、CCL4、TNFα、MMP13、IgE、IgG1和IgG2a。
9.根据权利要求1至8中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、变应性鼻窦炎、变应性结膜炎、过敏性鼻炎、鼻结膜炎、巨细胞动脉炎(霍顿病)、枯草热、日光皮炎、湿疹、荨麻疹、血管性水肿、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性静脉炎、虫咬皮肤炎、过敏性反应、银屑病、类风湿性关节炎、炎症性肠病(IBD)(包括克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)、牙周炎、慢性炎性疾病、红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征、硬皮病、多发性硬化症、白癜风、扁平苔癣、2型糖尿病、冠心病、高脂血症、绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性以及移植物抗宿主病。
10.根据权利要求1至9中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎。
11.根据权利要求1至10中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎；并且，其中所述SEGRAM是式1的SEGRAM或其衍生物的对映体，所述对映体对应于式1的SEGRAM或其衍生物的外消旋混合物的超临界流体色谱法(SFC)的第一洗脱峰[CpdX(eA)]。
12.根据权利要求1至10中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、银屑病、变应性结膜炎和溃疡性结肠炎；并且，其中所述SEGRAM是式1的SEGRAM或其衍生物的对映体，所述对映体对应于式1的SEGRAM或其衍生物的外消旋混合物的超临界流体色谱法(SFC)的第二洗脱峰[CpdX(eB)]。
13.根据权利要求2至10中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎；并且，其中所述SEGRAM是式2的SEGRAM或其衍生物的对映体，所述对映体对应于式2的SEGRAM或其衍生物的外消旋混合物的超临界流体色谱法(SFC)的第一洗脱峰[CpdX-D3(eA)]。
14.根据权利要求2至10中任一项应用的所述SEGRAM或其衍生物，其中所述炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、银屑病、变应性结膜炎和溃疡性结肠炎；并且，其中所述SEGRAM是式2的SEGRAM或其衍生物的对映体，所述对映体对应于式2的SEGRAM或其衍生物的外消旋混合物的超临界流体色谱法(SFC)的第二洗脱峰[CpdX-D3(eB)]。
15.式1的选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)或其衍生物的对映体、或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药，优选所述对映体是CpdX(eA)或CpdX(eB)。
16.根据权利要求15所述的式1的SEGRAM或其衍生物的对映体，其中通过超临界流体色谱法(SFC)分离式1的化合物或其衍生物的外消旋混合物来获得所述对映体，并且，其中CpdX(eA)对应于第一洗脱峰和CpdX(eB)对应于第二洗脱峰。
17.式1的选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)或其衍生物的氘化形式、或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药。
18.根据权利要求17所述的式1的SEGRAM或其衍生物的氘化形式，其中所述氘化形式是式2的化合物：
19.根据权利要求17或18所述的式1的SEGRAM或其衍生物的氘化形式，其中所述氘化形式为外消旋形式。
20.根据权利要求17或18所述的式1的SEGRAM或其衍生物的氘化形式，其中所述氘化形式是式2的化合物的两种对映体之一，优选所述对映体是CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)。
21.根据权利要求20所述的式1的SEGRAM或其衍生物的氘化形式，其中通过超临界流体色谱法(SFC)分离式2的化合物或其衍生物的外消旋混合物来获得所述对映体，并且，其中CpdX-D3(eA)对应于第一洗脱峰，而CpdX-D3(eB)对应于第二洗脱峰。
说明书全文

非甾体选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)及其用途

技术领域

[0001] 本发明涉及选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)，其用于预防或治疗需要其的受试者的炎性病症。具体而言，本发明的SEGRAM既不诱导糖皮质激素受体的直接反式激活功能，也不诱导其直接反式抑制功能，而且不发挥合成糖皮质激素(GC)的使人衰弱的(debilitating)作用。

背景技术

[0002] 糖皮质激素(GC)是生命必需的主要应激激素，其调节众多生理过程以维持体内平衡。它们属于皮质类固醇类，与它们的同源受体糖皮质激素受体(GR)结合。
[0003] GR也称为NR3C1(核受体亚家族3，C组，成员1)，普遍存在于几乎每个脊椎动物的几乎每个细胞中。它调节控制各种重要生理过程(如发育、代谢和免疫反应)的基因的表达。
[0004] 从结构上讲，GR是包含若干结构域的模块蛋白(modular protein)：
[0005] -N末端反式激活结构域(NTD或“A/B结构域”)；
[0006] -中央DNA结合结构域(DBD或“C结构域”)。该结构域是核受体超家族中最保守的结构域，其包含两个锌指基序，所述锌指基序识别并结合目标DNA序列——称为糖皮质激素应答元件(GRE)；
[0007] -柔性铰链区(或“D结构域”)；
[0008] -C末端配体结合结构域(LBD或“E结构域”)。该结构域形成用于结合GC的疏水袋；
[0009] -和C末端结构域(CTD或“F结构域”)。
[0010] 在GC与GR LBD结合后，GR发生构象变化，导致分别位于DBD/铰链区接合处和LBD内的两个核定位信号暴露。然后，GR通过核孔迅速转移到核中，在核中其可以发挥下文以及图1详述的三种转录调节功能之一。
[0011] 第一种功能称为“直接反式激活”，其是与GC结合的GR直接与顺式作用的正GRE((+)GRE)结合的结果，从而激活靶基因表达。共有(+)GRE序列GGAACANNNTGTTCT(其中N为A、T、C或G中的任一者)(SEQ ID NO:1)是一种不完善的回文结构，包含由3个碱基对隔开的两个6-碱基对半位点，因此称为“IR3”(针对“反向重复序列3”)。
[0012] 第二种功能是“间接束缚(tethered)反式抑制”，其源于与GC结合的GR与促炎转录因子AP-1和NF-κB的物理相互作用。通过与AP-1的Jun亚基和NF-κB的p65亚基结合，GR对抗它们的活性并干扰这两种蛋白的转录激活功能(Nissen和Yamamoto,2000.Genes Dev.14(18):2314-29；Yang-Yen等人,1990.Cell.62(6):1205-15)。
[0013] 第三种功能称为“直接反式抑制”，其是与GC结合的GR直接结合至最近(2011)描述的负GRE(nGRE)(Surjit等人,2011.Cell.145(2):224-41)的结果，它介导对特定基因的直接抑制。共有nGRE序列CTCC(N)0-2GGAGA(其中N为A、T、C或G中的任一者)(SEQ ID NO:2)也是回文结构，但与经典(+)GRE的序列和间隔子长度不同(因此视情况命名为IR0、IR1或IR2)。
[0014] 天然GC的抗炎特性已在60多年前得到证实(Carryer等人,1950.J Allergy.21(4):282-7)。从那时起，合成的GC衍生物已被广泛用于旨在抑制或减轻各种疾病中的急性和慢性炎症和变应性紊乱的治疗中。但是，GC治疗与多种严重的使人衰弱的副作用相关(Oray等人,2016.Expert Opin Drug Saf.15(4):457-65)，例如2型糖尿病、血脂异常、体重增加、认知障碍、胃炎、肝性脂肪变性、骨质疏松、高血压、缺血性心脏病、dermatoporosis、皮肤萎缩、白内障、青光眼、瞳孔放大或细胞介导的免疫的抑制。服用GC超过60天的患者中，多达90％的患者可发生不同的副作用，而与给药剂量和给药途径无关。这些副作用中的一些甚至可发生在服用低剂量(≤7.5mg/天)的患者中(Curtis等人,2006.Arthritis Rheum.55(3):420-6；Pereira等人,2010.Clinics(Sao Paulo).65(11):1197-1205))。
[0015] 在2011年发现直接反式抑制途径之前，GC的有益抗炎作用已被归于间接束缚反式抑制途径，而认为GC治疗产生的许多不良副作用仅与直接反式激活途径有关(Clark和Belvisi,2012.Pharmacol Ther.134(1):54-67)(图1)。
[0016] 因此，在过去的几十年中，人们致力于开发新的GR配体，称为“解离的”或“选择性(SElective)”GR激动调节剂(SEGRAM)，这些配体保留反式抑制特性，同时部分或(最理想地)完全失去它们的反式激活特性( 等人,2004.Proc Natl Acad Sci U S A.101(1):227-32)。
[0017] 在这方面，已经开发了许多推定的SEGRAM，但很少用于临床试验。发现这样的配体RU24858在体外表现出这种预期的解离特性(Vayssière等人,1997.Mol Endocrinol.11(9):1245-55)。然而，在体内施用后，病理生理学研究未能证实这种解离(Belvisi等人,2001.J Immunol.166(3):1975-82)。
[0018] 后来，另一种合成的非甾体配体，称为Mapracorat(也称为ZK245186或BOL-303242-X)已被证明在体外在受渗透胁迫激发的角膜上皮细胞中(Cavet等人,2010.Mol Vis.16:1791-1800)以及在体内在干眼症和术后炎症的实验模型中(Shafiee等人,
2011.Invest Ophthalmol Vis Sci.52(3):1422-30)起抗炎剂的作用，其活性与合成的“传统”类固醇地塞米松相当，但降低了眼内压和体重方面的副作用。Mapracorat也已成为2009年6月至2013年7月之间几项临床试验的研究产品：剂量发现II期临床试验，作为用于特应性皮炎的软膏(临床试验编号NCT00944632、NCT01228513、NCT01359787、NCT01407510、NCT01408511和NCT01736462)；和I、II和III期临床试验，作为用于变应性结膜炎(临床试验编号NCT01289431)以及白内障手术后的炎症和疼痛(临床试验编号NCT00905450、
NCT01230125、NCT01298752、NCT01591161、NCT01591655和NCT01736462)的眼用混悬液。但是，截至2018年10月，尚不能得到这些试验的研究结果，也未授予上市许可，这表明Mapracorat可能已显示出功效和/或副作用问题。
[0019] 如在2011年，与GC结合的GR介导的直接反式抑制功能也被证明与不期望的副作用有关(Surjit等人,2011.Cell.145(2):224-41)，似乎仅靶向间接束缚反式抑制途径将有效预防副作用。
[0020] 因此，仍然需要开发真正的SEGRAM，其不能有效诱导GR的直接反式激活或直接反式抑制功能，同时仍在体内诱导其间接束缚反式抑制活性和抗炎性质。
[0021] 有趣的是，在20世纪90年代后期，Schering  AG(现为Bayer HealthCare Pharmaceuticals)开发了新型非甾体化合物(参见，例如美国专利6,245,804)，声称抗炎活性与其代谢作用无关(参见，例如美国专利US6,323,199)。到2016年，申请人发现在这些化合物中，其中的一种，即5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮，以下称为“CpdX”，不诱导GR的反式激活和直接反式抑制功能，同时仍诱导其间接束缚反式抑制活性(Hua等人,2016.Proc Natl Acad Sci U S A.113(5):E635-43)。
[0022] 在本文中，发明人证明，与本领域先前描述的推定的SEGRAM(例如Mapracorat)相反，CpdX选择性地诱导GR“间接束缚反式抑制活性”，因此是真正的SEGRAM，其选择性地表现出GR的间接反式抑制功能，而Mapracorat显示所有三种GR功能。最重要的是，发明人证明，在长期施用给小鼠后，CpdX及其新型衍生物在治疗上与合成糖皮质激素地塞米松(Dex)一样有效，同时没有合成糖皮质激素的公认的使人衰弱的副作用。

发明内容

[0023] 本发明涉及式1(CpdX)的选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)或其衍生物：
[0024]
[0025] 或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药，其用于预防或治疗需要其的受试者的炎性病症。
[0026] 在一个实施方案中，式1的SEGRAM或其衍生物为氘化形式，优选地，SEGRAM为式2(CpdX-D3)的化合物：
[0027]
[0028] 在一个实施方案中，SEGRAM为外消旋形式，或者为其两种对映体形式之一。
[0029] 在一个实施方案中，式1的SEGRAM的衍生物是式3的化合物：
[0030]
[0031] 其中：
[0032] -W选自O、S或CH2，
[0033] -R2选自H或CH3，并且
[0034] -Z2、Z3、Z4、Z5和Z6各自独立地选自H、F、Cl、Br、CH3、OCH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、C(CH3)3、COCH3、NO2、CN、CH＝CH2或CONH2。
[0035] 在一个实施方案中，式1的SEGRAM或其衍生物不诱导或基本上不诱导糖皮质激素受体的直接反式激活功能或直接反式抑制功能。
[0036] 在一个实施方案中，式1的SEGRAM或其衍生物在施用于需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导甾体抗炎药(SAID)相关的副作用。
[0037] 在一个实施方案中，与SAID相关的副作用选自包括以下的组：皮肤萎缩；骨质疏松；生长抑制；体重下降；脂肪量增加；瘦体重下降；胸腺、脾、肾和/或肾上腺细胞凋亡；皮质酮合成抑制；肾上腺抑制；高血糖；胰岛素抗性；血胰岛素增多；和脂肪肝。
[0038] 在一个实施方案中，炎性病症的特征在于选自包括以下的组的至少一种分泌的细胞因子和/或抗体的水平升高：IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17a、IL-17c、IL-17f、IL-18、IL-21、IL-22、IL-23、IL-33、TSLP、TGFβ、CCL4、TNFα、COX2、MMP13、IgE、IgG1和IgG2a。
[0039] 在一个实施方案中，炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、变应性鼻窦炎、变应性结膜炎、过敏性鼻炎、鼻结膜炎、巨细胞动脉炎(霍顿病)、枯草热、日光皮炎、湿疹、荨麻疹、血管性水肿、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性静脉炎、虫咬皮肤炎、过敏性反应、银屑病、类风湿性关节炎、炎症性肠病(IBD)(包括克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)、牙周炎、慢性炎性疾病、红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征(Sjogren's syndrome)、硬皮病、多发性硬化症、白癜风、扁平苔癣、2型糖尿病、冠心病、高脂血症、绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性以及移植物抗宿主病。
[0040] 在一个实施方案中，炎性病症选自包括以下的组：接触性皮炎、特应性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎。
[0041] 在一个实施方案中，炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎；并且，SEGRAM是式1的SEGRAM或其衍生物的对映体，所述对映体对应于式1的SEGRAM或其衍生物的外消旋混合物的超临界流体色谱法(SFC)的第一洗脱峰[CpdX(eA)]。
[0042] 在一个实施方案中，炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、银屑病、变应性结膜炎和溃疡性结肠炎；并且，SEGRAM是式1的SEGRAM或其衍生物的对映体，所述对映体对应于式1的SEGRAM或其衍生物的外消旋混合物的超临界流体色谱法(SFC)的第二洗脱峰[CpdX(eB)]。
[0043] 在一个实施方案中，炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和溃疡性结肠炎；并且，SEGRAM是式2的SEGRAM或其衍生物的对映体，所述对映体对应于式2的SEGRAM或其衍生物的外消旋混合物的超临界流体色谱法(SFC)的第一洗脱峰[CpdX-D3(eA)]。
[0044] 在一个实施方案中，炎性病症选自包括以下的组：特应性皮炎、接触性皮炎、银屑病、变应性结膜炎和溃疡性结肠炎；并且，SEGRAM是式2的SEGRAM或其衍生物的对映体，所述对映体对应于式2的SEGRAM或其衍生物的外消旋混合物的超临界流体色谱法(SFC)的第二洗脱峰[CpdX-D3(eB)]。
[0045] 本发明还涉及式1的选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)的对映体、或涉及其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药，优选地，所述对映体为CpdX(eA)或CpdX(eB)。
[0046] 在一个实施方案中，通过超临界流体色谱法(SFC)分离式1化合物或其衍生物的外消旋混合物而获得对映体，其中CpdX(eA)对应于第一洗脱峰，而CpdX(eB)对应于第二洗脱峰。
[0047] 本发明还涉及式1的选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)的氘化形式，或涉及其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药。
[0048] 在一个实施方案中，所述氘化形式是式2的化合物：
[0049]
[0050] 在一个实施方案中，所述氘化形式为外消旋形式。
[0051] 在一个实施方案中，所述氘化形式是式2的化合物的两种对映体之一，优选地，所述对映体是CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)。
[0052] 在一个实施方案中，通过超临界流体色谱法(SFC)分离式2的化合物或其衍生物的外消旋混合物而获得所述氘化形式，并且，其中CpdX-D3(eA)对应于第一洗脱峰而CpdX-D3(eB)对应于第二洗脱峰。
[0053] 定义
[0054] 如本文所用，“肾上腺抑制”或“肾上腺机能不全”是指其中肾上腺不产生足够量的皮质醇的病状。使用大剂量甾体超过一个星期会开始对受试者的肾上腺产生抑制作用，因为外源糖皮质激素抑制下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和垂体促肾上腺皮质激素(ACTH)以及阻抑肾上腺皮质酮合成酶的合成。随着抑制时间的延长，肾上腺萎缩，并且在停止外源糖皮质激素后可能需要长达9个月来恢复全部功能。在此恢复时间内，由于肾上腺萎缩以及对CRH和ACTH释放的抑制，受试者在诸如疾病之类的应激期间容易遭受肾上腺机能不全。
[0055] 如本文所用，"CpdX"是指式1的选择性糖皮质激素受体激动调节剂(SEGRAM)：
[0056]
[0057] 或其药学上可接受的对映体、氘化形式、盐、溶剂化物和/或前药。"CpdX"对应于5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]-异苯并呋喃-1(3H)-酮(见实施例1，图2A)。
[0058] 如本文所用，“CpdX(eA)”是指式1的SEGRAM的两种对映体之一或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。"CpdX(eA)"对应于由制备型超临界流体色谱法分离的5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]-异苯并呋喃-1(3H)-酮的第一洗脱峰(见实施例1，图2B)。
[0059] 如本文所用，“CpdX(eB)”是指式1的SEGRAM的两种对映体之一或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。“CpdX(eB)”对应于通过制备型超临界流体色谱法分离的5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]-异苯并呋喃-1(3H)-酮的第二洗脱峰(见实施例1，图2B)。
[0060] 如本文所用，“CpdX-D3”是指式1的SEGRAM的氘化外消旋形式或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。“CpdX-D3”对应于式2的5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟-甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮(见实施例1，图2C)：
[0061]
[0062] 如本文所用，“CpdX-D3(eA)”是指式2的SEGRAM的两种对映体之一或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。“CpdX-D3(eA)”对应于通过制备型超临界流体色谱法分离的5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮的第一洗脱峰(见实施例1，图2D)。
[0063] 如本文所用，“CpdX-D3(eB)”是指式2的SEGRAM的两种对映体之一或其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。“CpdX-D3(eB)”对应于通过制备型超临界流体色谱法分离的5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮的第二洗脱峰(见实施例1，图2D)。
[0064] “糖皮质激素受体(GR)的直接反式激活功能”是指在其启动子区域包含被结合糖皮质激素(GC)的GR结合的正糖皮质激素应答元件((+)GRE)(具有SEQ ID NO:1)的基因的转录激活。
[0065] “糖皮质激素受体(GR)的直接反式抑制功能”是指在其启动子区域中包含被结合糖皮质激素(GC)的GR结合的负糖皮质激素应答元件(nGRE)(具有SEQ ID NO:2)的基因的转录抑制。
[0066] “增强的Th2活性”是指与健康受试者相比，患病受试者的Th2活性增加(例如至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、8倍、10倍或更多)。Th2活性增强可以根据本领域已知的方法通过分泌的细胞因子和抗体(例如IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TSLP、IgE和IgG1)的水平增加来度量。
[0067] “增强的Th17活性”是指与健康受试者相比，患病受试者的Th17活性增加(例如至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、8倍、10倍或更多)。Th17活性增强可以根据本领域已知的方法通过分泌的细胞因子(例如IL-1β、IL-6、IL-17a、IL-17c、IL-17f、IL-21、IL-22、IL-23和TGFβ)的水平升高来度量。
[0068] “增强的Th1活性”是指与健康受试者相比，患病受试者的Th1活性增加(例如至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、8倍、10倍或更多)。Th1活性增强可根据本领域已知的方法通过分泌的细胞因子和抗体(例如IL-1β、IL-2、IL-3、IL-6、IL-12、IL-18、IL-23、IFN-γ、TNFα和IgG2a)的水平升高来度量。
[0069] 如本文所使用的，“脂肪肝”也称为“肝性脂肪变性”，是指其中甘油三酸酯脂肪的大液泡经由脂肪变性过程在肝细胞中积累的病状(即，脂质在细胞内的异常滞留)。脂肪的这种积累也可伴随着进行性肝炎症(肝炎)，称为脂肪性肝炎。
[0070] “生长抑制”是甾体抗炎药(SAID)疗法的一种公认的重要不良反应，尤其是在儿童中。生长抑制的机制包括但不限于SAID对合成代谢和生长(包括骨代谢、氮保留)的基本成分的影响和对胶原形成的影响。SAID疗法还导致对生长激素释放和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)生物利用度的抑制。在一个实施方案中，SAID疗法后的生长抑制影响整个身体，使身体发育迟缓。在一个实施方案中，SAID疗法后的生长抑制影响内部器官，包括但不限于胸腺、脾、肾、肝和肾上腺。
[0071] “高血糖”是其中过量的葡萄糖在血浆中循环的病状，例如，每升血液中的葡萄糖高于11.1mmol(每dL血液中200mg的葡萄糖)。美国糖尿病协会指南将受试者分为几个亚组，从轻度高血糖(葡萄糖水平范围为约5.6至约7mmol/L血液，即约100至约126mg/dL血液)到糖尿病(葡萄糖水平高于7mmol/L血液，即高于126mg/dL血液)。SAID对葡萄糖代谢的影响是剂量依赖性的，可在先前没有糖尿病的患者中引起空腹血糖水平的轻度升高和餐后血糖的较大升高。SAID诱导的高血糖是多因素起源的，可以由肝糖原异生的增加、脂肪组织中葡萄糖摄取的抑制和/或由SAID引起的受体和受体后功能的改变来解释。在SAID疗法后或向需要其的受试者施用本发明的SEGRAM后评估高血糖发展的技术是本领域技术人员熟知的，其包括但不限于用生化分析进行血液测试和葡萄糖测试(包括空腹血糖(FBS)测试、空腹血浆葡萄糖(FPG)测试、葡萄糖耐量测试、餐后葡萄糖(PG)测试和随机葡萄糖测试)。
[0072] 如本文所用，“血胰岛素增多”或“胰岛素过多”是指其中过量的胰岛素在血浆中循环的病状。血胰岛素增多与高血压、肥胖、血脂异常和葡萄糖耐受不良(都统称为“代谢综合征”)有关。
[0073] “糖皮质激素受体(GR)的间接束缚反式抑制功能”是指在其启动子区域中包含分别被AP-1的Jun亚基和/或NF-κB的p65亚基结合的AP-1结合位点(具有核酸序列ATGAGTCAT)和/或NF-κB结合位点(具有核酸序列SEQ ID NO:3——GGGRNNYYCC，其中R为G或A中的任一者，Y为T或C中的任一者，N为A、T、C或G中的任一者)的基因的转录抑制，所述AP-1的Jun亚基和/或NF-κB的p65亚基本身被结合糖皮质激素(GC)的GR结合。
[0074] “炎性病症”指的是导致例如由白细胞和/或嗜中性粒细胞趋化性的流入引起的炎症的病理状态。炎症可由病原生物体和病毒感染引起，或可由非感染性手段(例如，对外来抗原的免疫反应、自身免疫反应、心肌梗塞或中风后的创伤或再灌注)引起。Th1、Th2和Th17细胞是T辅助细胞的三个子集，已知其与几种炎性病症有关。它们根据其细胞因子环境与原始CD4T细胞(或Th0细胞)进行区分：IFN-γ驱动Th1细胞生产，而IL-10和IL-4抑制Th1细胞生产；相反，IL-4驱动Th2细胞生产，而IFN-γ抑制Th2细胞。对于Th17细胞，它们的产生是由TGF-β、IL-6、IL-21、IL-23和IL-33驱动的。
[0075] “骨质疏松”是一种进行性疾病，其特征是骨量低、骨组织的微结构退化、骨脆性以及由此而导致的骨折风险增加。继发性骨质疏松是全身性药物使用(如SAID)的结果，其是糖皮质激素疗法中最使人衰弱的并发症之一，这自1940年以来就已被认识到。SAID暴露的累积剂量和持续时间是骨质疏松发展的关键决定因素。抑制成骨细胞功能是SAID对骨代谢的主要作用，导致骨形成减少。在开始SAID治疗后，则骨质流失立即开始，这主要发生在治疗的前六个月中。除骨质流失外，SAID治疗还可导致骨结构完整性的改变。在SAID疗法后或在向需要其的受试者施用本发明的SEGRAM后评估骨质疏松的发展的技术是本领域技术人员熟知的，包括但不限于测量基线的骨矿物质密度和将基线结果与治疗期间和之后的后续测量结果进行比较。预防骨质疏松的技术也是本领域技术人员熟知的，包括但不限于向有此需要的患者施用钙和/或维生素D的营养补剂和适当的身体活动。
[0076] 如本文所用，“前药”是指本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)的药理学上可接受的衍生物，例如体内生物转化产物为活性药物的酯。前药的特征在于提高的生物利用度且在体内易于代谢成活性化合物。用于本发明目的的合适的前药包括羧酸酯(特别是烷基酯、芳基酯、酰氧基烷基酯和二氧杂环戊烯羧酸酯)和抗坏血酸酯。
[0077] “降低的Th2活性”是指与健康受试者相比，患病受试者的Th2反应降低(例如为至多2分之一、3分之一、4分之一、5分之一、6分之一、8分之一、10分之一或更少)。Th2活性降低可以根据本领域已知的方法通过分泌的细胞因子和抗体(例如IL-1β、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TSLP、IgE和IgG1)水平的降低来度量。
[0078] “降低的Th17活性”是指与健康受试者相比，患病受试者的Th17反应降低(例如为至多2分之一、3分之一、4分之一、5分之一、6分之一、8分之一、10分之一或更少)。Th17活性降低可以根据本领域已知的方法通过分泌的细胞因子(例如IL-1β、IL-6、IL-17a、IL-17c、IL-17f、IL-21、IL-22、IL-23和TGFβ)水平的降低来度量。
[0079] “降低的Th1活性”是指与健康受试者相比，患病受试者的Th1反应降低(例如为至多2分之一、3分之一、4分之一、5分之一、6分之一、8分之一、10分之一或更少)。Th1活性降低可以根据本领域已知的方法通过分泌的细胞因子和抗体(例如IL-1β、IL-2、IL-3、IL-6、IL-
12、IL-18、IL-23、IFN-γ、TNFα和IgG2a)水平的降低来度量。
[0080] “皮肤萎缩”，也称为"类固醇性萎缩"或"皮质类固醇诱导的皮肤萎缩”，包括表皮和/或真皮厚度的减少、皮脂腺的退化、皮下脂肪的减少和/或肌肉层萎缩。它是由SAID驱动的对成纤维细胞的有丝分裂活性和/或胶原酶的抑制所致，导致胶原和糖胺聚糖合成的减少以及原纤维直径的减小。在SAID疗法后或在向需要其的受试者施用本发明的SEGRAM后评估皮肤萎缩的发展的技术是本领域技术人员熟知的，包括但不限于皮肤变薄和血管突出的可视化控制、使用卡尺(包括Harpenden皮褶卡尺)、重量分析、超声、软组织X射线、组织度量、电阻率和Kindlin-1(Ussar等人,2008.PLoS Genet.4(12):e1000289)和REDD1(Britto等人,2014.Am J Physiol Endocrinol Metab.307(11):E983-93；Baida等人,2015.EMBO Mol Med.7(1):42-58)基因的转录分析。
[0081] 如本文所用，“溶剂化物”是指包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)和一种或多种药学上可接受的溶剂分子(例如乙醇)的分子复合物。当所述溶剂是水时，使用术语“水合物”。
[0082] 如本文所用，“与甾体抗炎药(SAID)相关的副作用”是指通常在接受短期、中期或长期甾体抗炎药(SAID)治疗的受试者中观察到的副作用(也称为“使人衰弱的作用”)。
[0083] “与Th2相关的炎性病症”是指任何疾病、病症或病状，其中Th2细胞支持、引起或介导该疾病、病症或病状过程，或者其中Th2细胞参与治愈或减轻该疾病、病症或病状的症状，这可以表现为增强或降低的Th2活性。
[0084] “与Th17相关的炎性病症”是指任何疾病、病症或病状，其中Th17细胞支持、引起或介导该疾病、病症或病状过程或其中Th17细胞参与治愈或减轻该疾病、病症或病状的症状，这可以表现为增强或降低的Th17活性。
[0085] “与Th1相关的炎性病症”是指任何疾病、病症或病状，其中Th1细胞支持、引起或介导该疾病、病症或病状过程，或者其中Th1细胞参与治愈或减轻该疾病、病症或病状的症状，这可以表现为增强或降低的Th1活性。

具体实施方式

[0086] 本发明涉及用于预防和/或治疗炎性病症的方法，该方法包括向需要其的受试者施用治疗有效量的选择性GR激动调节剂(SEGRAM)。
[0087] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗与T辅助细胞2(Th2)相关的炎性病症。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗与T辅助细胞17(Th17)相关的炎性病症。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗与T辅助细胞1(Th1)相关的炎性病症。
[0088] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗与Th2和Th17相关的炎性病症(也称为“Th2/Th17混合型炎性病症”)。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗与Th1和Th17相关的炎性病症(也称为“Th1/Th17混合型炎性病症”)。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗与Th1和Th2相关的炎性病症(也称为“Th1/Th2混合型炎性病症”)。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗与Th1、Th2和Th17相关的炎性病症(也称为“Th1/Th2/Th17混合型炎性病症”)。
[0089] 炎性病症
[0090] 炎性病症的实例包括但不限于：特应性皮炎、接触性皮炎、哮喘(包括变应性气喘)、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎、巨细胞动脉炎(霍顿病)、炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)、绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性、牙周炎、佩吉特氏病、骨质疏松、多发性骨髓瘤、葡萄膜炎、急性骨髓性白血病、慢性髓细胞性白血病、胰腺β细胞破坏、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎和其它关节炎状况、痛风、成人呼吸窘迫综合症(ARDS)、慢性肺部炎性疾病、矽肺、肺结节病、鼻炎、过敏性反应、胰腺炎、肌肉退化、恶病质(包括感染后恶病质(cachexia secondary to infection)、恶性肿瘤后恶病质或获得性免疫缺陷综合症后恶病质)、reiter综合征、I型糖尿病、骨吸收病、移植物抗宿主病(GVHD)、缺血再灌注损伤、脑外伤、多发性硬化症、脑型疟疾(cerebral malaria)、脓毒症、脓毒症休克、中毒性休克综合症，内毒素休克，革兰氏阴性脓毒症、因感染(例如流感)而导致的发烧和肌痛以及胃灼热。
[0091] Th2相关的炎性病症
[0092] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗Th2相关的炎性病症。在一个实施方案中，Th2相关的炎性病症包括任何疾病、病症或病状，其中Th2细胞支持、引起或介导该疾病、病症或病状过程。在一个实施方案中，Th2相关的炎性病症包括任何疾病、病症或病状，其中Th2细胞参与治愈或减轻疾病、病症或病状的症状。
[0093] 在一个实施方案中，Th2相关的炎性病症表现为增强的Th2活性。在一个实施方案中，Th2相关的炎性病症表现为降低的Th2活性。
[0094] Th2相关的炎性病症包括但不限于变应性疾病和传染病(尤其是细胞外感染)。
[0095] 本发明涵盖的与Th2相关的变应性疾病包括但不限于：特应性皮炎、变应性气喘、变应性鼻窦炎、变应性结膜炎、过敏性鼻炎、鼻结膜炎、枯草热、日光皮炎、湿疹、荨麻疹、血管性水肿、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性静脉炎、虫咬皮肤炎和过敏性反应。
[0096] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗特应性皮炎(见实施例5)。
[0097] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗变应性气喘(见实施例6)。
[0098] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗变应性结膜炎(见实施例10)。
[0099] Th17相关的炎性病症
[0100] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗Th17相关的炎性病症。在一个实施方案中，Th17相关的炎性病症包括任何疾病、病症或病状，其中Th17细胞支持、引起或介导该疾病、病症或病状过程。在一个实施方案中，Th17相关的炎性病症包括任何疾病、病症或病状，其中Th17细胞参与治愈或减轻疾病、病症或病状的症状。
[0101] 在一个实施方案中，Th17相关的炎性病症表现为增强的Th17活性。在一个实施方案中，Th17相关的炎性病症表现为降低的Th17活性。
[0102] 与Th17相关的炎性病症包括但不限于自身免疫性疾病和增生性疾病(例如癌症)。
[0103] 本发明涵盖的与Th17相关的自身免疫疾病包括但不限于：接触性皮炎、银屑病、类风湿性关节炎、炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)、牙周炎、慢性炎性疾病、红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征、硬皮病、多发性硬化症、白癜风、扁平苔癣、2型糖尿病、冠心病、高脂血症、绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性以及移植物抗宿主病。
[0104] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗接触性皮炎(见实施例3)。
[0105] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗银屑病(见实施例7)。
[0106] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗类风湿性关节炎(见实施例8)。
[0107] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗结肠炎(见实施例9)。
[0108] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗牙周炎。
[0109] Th1相关的炎性病症
[0110] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗Th1相关的炎性病症。在一个实施方案中，Th1相关的炎性病症包括任何疾病、病症或病状，其中Th1细胞支持、引起或介导该疾病、病症或病状过程。在一个实施方案中，与Th1相关的炎性病症包括任何疾病、病症或病状，其中Th1细胞参与治愈或减轻该疾病、病症或病状的症状。
[0111] 在一个实施方案中，Th1相关的炎性病症表现为增强的Th1活性。在一个实施方案中，Th1相关的炎性病症表现为降低的Th1活性。
[0112] Th1相关的炎性病症包括但不限于传染病(特别是细胞内感染，例如病毒感染)和增生性疾病(例如癌症)。
[0113] 测量细胞因子/Ig水平的方法
[0114] 测量分泌的细胞因子和抗体水平的增加或降低的方法是本领域技术人员熟知的，包括但不限于组织学分析以及细胞因子和/或免疫球蛋白特性的分析。
[0115] 细胞因子和/或免疫球蛋白特性可通过常规方法使用抗细胞因子(例如抗-IL-1β、抗-IL-2、抗-IL-3、抗-IL-4、抗-IL-5、抗-IL-6、抗-IL-10、抗-IL-12、抗-IL-13、抗-IL-17a、抗-IL-17c、抗-IL-17f、抗-IL-18、抗-IL-21、抗-IL-22、抗-IL-23、抗-IL-33、抗-IFN-γ、抗-TNFα、抗-TGFβ或抗-TSLP)和/或抗同种型(anti-isotype)抗体(例如抗-IgA、抗-IgE、抗-IgG1、抗-IgG2a、抗-IgG2b、抗-IgG3或抗-IgM抗体)在流式细胞测定、ELISA测定、夹心ELISA测定、ELISPOT测定等中进行测量。测量细胞因子特性的其它方法包括但不限于逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，包括实时聚合酶链反应(RT-PCR)、定量逆转录聚合酶链反应(q-RT-PCR)等。
[0116] 本发明的SEGRAM的性质
[0117] 对GR的功能
[0118] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM不诱导或基本上不诱导糖皮质激素受体(GR)的直接反式激活功能。
[0119] “不诱导糖皮质激素受体(GR)的直接反式激活功能”是指当本发明的SEGRAM与GR结合后，包含正糖皮质激素应答元件((+)GRE)的基因的转录水平为：不高于本发明的SEGRAM与GR结合前其的转录水平。换言之，在本发明的SEGRAM与GR结合后，与本发明的SEGRAM与GR结合之前相比，包含正糖皮质激素应答元件((+)GRE)的基因的转录没有增加。
[0120] “基本上不诱导糖皮质激素受体(GR)的直接反式激活功能”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，包含正糖皮质激素应答元件((+)GRE)的基因的转录水平不高于：在本发明的SEGRAM与GR结合之前其转录水平的三倍、两倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更低。换言之，与本发明的SEGRAM与GR结合之前相比，当本发明的SEGRAM与GR结合后，包含正糖皮质激素应答元件((+)GRE)的基因的转录的增加不超过：三倍、两倍、
1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更小。
[0121] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM不诱导或基本上不诱导GR的直接反式抑制功能。
[0122] “不诱导GR的直接反式抑制功能”是指本发明的SEGRAM与GR结合后，包含负糖皮质激素应答元件(nGRE)的基因的转录水平不低于：在本发明的SEGRAM与GR结合之前其的转录水平。换言之，与本发明的SEGRAM与GR结合之前相比，当本发明的SEGRAM与GR结合后，包含负糖皮质激素应答元件(nGRE)的基因的转录不减少。
[0123] “基本上不诱导GR的直接反式抑制功能”是指当本发明的SEGRAM与GR结合后，包含负糖皮质激素应答元件(nGRE)的基因的转录水平不低于：在本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的转录水平的三倍、两倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更少。换言之，与本发明的SEGRAM结合至GR之前相比，当本发明的SEGRAM与GR结合后，包含负糖皮质激素应答元件(nGRE)的基因的转录的减少不超过三倍、两倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更小。
[0124] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM不诱导或基本上不诱导GR的直接反式激活或直接反式抑制功能。
[0125] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM选择性地诱导GR的间接束缚反式抑制功能。
[0126] 对Th细胞的功能
[0127] 对Th2细胞的功能
[0128] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM抑制或基本上抑制Th2细胞从Th0细胞的分化。
[0129] “抑制Th2细胞从Th0细胞的分化”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，Th2细胞的数量不高于本发明的SEGRAM与GR结合之前Th2细胞的数量。在一个实施方案中，Th2细胞的数量低于本发明的SEGRAM与GR结合之前Th2细胞的数量。在一个实施方案中，相比本发明的SEGRAM与GR结合之前Th2细胞的数量，Th2细胞的数量是1.1分之一、1.2分之一、1.5分之一、2分之一、3分之一、5分之一、10分之一、25分之一、50分之一、100分之一或更少。
[0130] “基本上抑制Th2细胞从Th0细胞的分化”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，Th2细胞的数量不高于：本发明的SEGRAM与GR结合之前其数量的两倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更小。
[0131] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM抑制或基本上抑制任何一种或多种选自包括以下各项或由以下各项组成的组的细胞因子的产生：IL-4、IL-5、IL-10、IL-13和TSLP。在一个实施方案中，本发明的SEGRAM抑制或基本上抑制选自包括IgE和IgG1或由其组成的组的任何一种或多种免疫球蛋白的产生。
[0132] “抑制任何一种或多种细胞因子的产生”和“抑制任何一种或多种免疫球蛋白的产生”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，所述细胞因子或免疫球蛋白的表达水平不高于在本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平。在一个实施方案中，所述细胞因子或免疫球蛋白的表达水平低于在本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平。在一个实施方案中，相比本发明的SEGRAM与GR结合前它们的表达水平，所述细胞因子或免疫球蛋白的表达水平是1.1分之一、1.2分之一、1.5分之一、2分之一、3分之一、5分之一、10分之一、25分之一、50分之一、100分之一或更低。
[0133] “基本上抑制任何一种或多种细胞因子的产生”和“基本上抑制任何一种或多种免疫球蛋白的产生”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，所述细胞因子的表达水平或免疫球蛋白的表达水平不高于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平的两倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更少。
[0134] 对Th17细胞的功能
[0135] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM抑制或基本上抑制Th17细胞从Th0细胞的分化。
[0136] “抑制Th17细胞从Th0细胞的分化”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，Th17细胞的数量不高于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的数量。在一个实施方案中，Th17细胞的数量低于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的数量。在一个实施方案中，相比本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的数量，Th17细胞的数量是1.1分之一、1.2分之一、1.5分之一、2分之一、3分之一、5分之一、10分之一、25分之一、50分之一、100分之一或更少。
[0137] “基本上抑制Th17细胞从Th0细胞的分化”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，Th17细胞的数量不高于：本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的数量的两倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更小。
[0138] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM抑制或基本上抑制选自包括IL-17a、IL-17c、IL-17f、IL-21、IL-22、IL-23和TGFβ或由其组成的组的任何一种或多种细胞因子的产生。
[0139] “抑制任何一种或多种细胞因子的产生”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，所述细胞因子的表达水平不高于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平。在一个实施方案中，所述细胞因子的表达水平低于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平。在一个实施方案中，相比本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平，所述细胞因子的表达水是1.1分之一、1.2分之一、1.5分之一、2分之一、3分之一、5分之一、10分之一、25分之一、50分之一、100分之一或更少。
[0140] “基本上抑制任何一种或多种细胞因子的产生”是指，在本发明的SEGRAM与GR结合后，所述细胞因子的表达水平不高于：本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平的两倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更少。
[0141] 对Th1细胞的功能
[0142] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM抑制或基本上抑制Th1细胞从Th0细胞的分化。
[0143] “抑制Th1细胞从Th0细胞的分化”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，Th1细胞的数量不高于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的数量。在一个实施方案中，Th1细胞的数量低于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的数量。在一个实施方案中，相比本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的数量，Th1细胞的数量是1.1分之一、1.2分之一、1.5分之一、2分之一、3分之一、5分之一、10分之一、25分之一、50分之一、100分之一或更少。
[0144] “基本上抑制Th1细胞从Th0细胞的分化”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，Th1细胞的数量不高于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的数量的两倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更小。
[0145] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM抑制或基本上抑制选自包括IL-2、IL-12、IL-18、IFN-γ和TNFα或由其组成的组的任何一种或多种细胞因子的产生。在一个实施方案中，本发明的SEGRAM抑制或基本上抑制选自包括IgG2a或由其组成的组的任何一种或多种免疫球蛋白的产生。
[0146] “抑制任何一种或多种细胞因子的产生”和“抑制任何一种或多种免疫球蛋白的产生”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，所述细胞因子或免疫球蛋白的表达水平不高于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平。在一个实施方案中，所述细胞因子或免疫球蛋白的表达水平低于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平。在一个实施方案中，相比本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平，所述细胞因子或免疫球蛋白的表达水平是1.1分之一、1.2分之一、1.5分之一、2分之一、3分之一、5分之一、10分之一、25分之一、50分之一、100分之一或更少。
[0147] “基本上抑制任何一种或多种细胞因子的产生”和“基本上抑制任何一种或多种免疫球蛋白的产生”是指在本发明的SEGRAM与GR结合后，所述细胞因子的表达水平或免疫球蛋白的表达水平不高于本发明的SEGRAM与GR结合之前它们的表达水平的两倍、1.8倍、1.6倍、1.5倍、1.4倍、1.3倍、1.2倍、1.1倍或更少。
[0148] 副作用
[0149] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用给需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导副作用。
[0150] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用给需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导与甾体抗炎药(SAID)相关的副作用。
[0151] SAID的实例包括但不限于天然糖皮质激素和合成糖皮质激素。天然糖皮质激素的实例包括但不限于：可的松、可托多松、脱氧皮质酮、氢化可的松、乙酰氧基孕烯醇酮(prebediolone acetate)和孕烯醇酮。合成糖皮质激素包括但不限于：阿氯米松、安西奈德、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、氯泼尼松、氯泼尼松、环索奈德、氯倍他索、氯倍他松(clobetasone)、氯可托龙、氯泼尼醇、可的伐唑(cortivazol)、地夫可特、地奈德、去羟米松、地塞米松、双氟拉松、二氟可龙、二氟泼尼酯、氟氯奈德(fluclorolone)、氟氯奈德、氟氢可的松、氟氢缩松、醋酸氟羟孕酮(flugestoneacetate)、氟米松(flumetasone)、氟尼缩松、氟轻松、氟轻松醋酸酯、氟可丁、氟可龙、氟米龙、氟培龙、氟泼尼定(fluprednidene)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、氟替卡松、福莫可他、哈西奈德(halcinonide)、卤米松、氯替泼诺、甲羟松、甲泼尼松、甲基强的松龙、莫米松、帕拉米松、泼尼卡酯、脱氢皮质醇(prednisolone)、强的松和替可的松、泼尼立定(prednylidene)、美索龙、去炎松、去炎松和乌倍他索。
[0152] SAID相关的副作用的例子包括但不限于：肌肉骨骼副作用、内分泌和代谢副作用、胃肠副作用、心血管副作用、皮肤病学副作用、神经精神病学副作用、眼科学副作用和免疫学副作用。
[0153] SAID相关的肌肉骨骼副作用包括但不限于骨质疏松症、骨骼的缺血性坏死和肌病。
[0154] SAID相关的内分泌和代谢副作用包括但不限于：代谢综合征；生长抑制；体重下降；脂肪量增加；瘦体重下降；胸腺、脾、肾和/或肾上腺细胞凋亡；皮质酮合成抑制；肾上腺抑制；高血糖；胰岛素抗性；血胰岛素增多；2型糖尿病；血脂异常；脂肪肝；和库兴样特征(cushingoid feature)。
[0155] SAID相关的胃肠副作用包括但不限于胃炎、消化性溃疡、胃肠道出血、内脏穿孔和胰腺炎。
[0156] SAID相关的心血管副作用包括但不限于高血压、冠心病、缺血性心脏病和心力衰竭。
[0157] SAID相关的皮肤病学副作用包括但不限于皮肤萎缩、dermatoporosis、瘀斑、紫癜、糜烂、条纹、伤口愈合延迟、容易挫伤、痤疮、多毛症和脱发。
[0158] SAID相关的神经精神病学副作用包括但不限于情绪变化、抑郁、欣快症、情绪不稳、易怒、静坐不能、焦虑、认知障碍、精神病、痴呆和谵妄。
[0159] SAID相关的眼科学副作用包括但不限于白内障、青光眼、上睑下垂、瞳孔放大、机会性眼部感染和中心性浆液性脉络膜视网膜病变。
[0160] SAID相关的免疫学副作用包括但不限于细胞介导的免疫的抑制、干染诱因(predisposition to infection)和潜伏感染的再激活。
[0161] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM不诱导或基本上不诱导选自包括以下各项或由以下各项组成的组的任何一种或多种与SAID相关的副作用：骨质疏松；骨骼的缺血性坏死；肌病；代谢综合征；生长抑制；体重下降；脂肪量增加；瘦体重下降；胸腺、脾、肾和/或肾上腺细胞凋亡；皮质酮合成抑制；肾上腺抑制；高血糖；胰岛素抗性；血胰岛素增多；2型糖尿病；血脂异常；脂肪肝；胃炎；消化性溃疡；胃肠道出血；内脏穿孔；肝性脂肪变性；胰腺炎；高血压；冠心病；缺血性心脏病；心力衰竭；皮肤萎缩；dermatoporosis；瘀斑；紫癜；糜烂；条纹；伤口愈合延迟；容易挫伤；痤疮；多毛症；脱发；情绪变化；抑郁；欣快症；情绪不稳；易怒；静坐不能；焦虑；认知障碍；精神病；痴呆；谵妄；白内障；青光眼；上睑下垂；瞳孔放大；机会性眼部感染；中心性浆液性脉络膜视网膜病变；细胞介导的免疫的抑制；干染诱因和潜伏感染的再激活。
[0162] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM不诱导或基本上不诱导选自包括以下各项或由以下各项组成的组的任何一种或多种与SAID相关的副作用：皮肤萎缩；骨质疏松；生长抑制；体重下降；脂肪量增加；瘦体重下降；胸腺、脾、肾和/或肾上腺细胞凋亡；皮质酮合成抑制；肾上腺抑制；高血糖；胰岛素抗性；血胰岛素增多；和脂肪肝。
[0163] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用于需要其的受试者后不引起皮肤萎缩(见实施例11)。
[0164] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用给需要其的受试者后不引起骨质疏松症(见实施例12)。
[0165] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用于需要其的受试者后不引起生长抑制(见实施例13)。
[0166] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用给需要其的受试者后不引起体重下降(见实施例13)。
[0167] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用给需要其的受试者后不引起脂肪量增加和/或瘦体重下降(见实施例13)。
[0168] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用给需要其的受试者后不引起胸腺、脾、肾和/或肾上腺细胞凋亡(见实施例14)。
[0169] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用给需要其的受试者后不引起皮质酮合成抑制(见实施例15)。
[0170] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用于需要其的受试者后不引起肾上腺抑制(见实施例15)。
[0171] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用于需要其的受试者后不引起高血糖(见实施例16)。
[0172] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用给需要其的受试者后不引起胰岛素抗性(见实施例17)。
[0173] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用于需要其的受试者后不引起血胰岛素增多(见实施例17)。
[0174] 在一个实施方案中，本发明的SEGRAM在施用于需要其的受试者后不引起脂肪肝(见实施例18)。
[0175] 结构
[0176] 在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM是式1化合物或其衍生物的一种或两种对映体：
[0177]
[0178] 或其药学上可接受的氘化形式、盐、溶剂化物和/或前药。
[0179] 如本文所用，式1的化合物是5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]-异苯并呋喃-1(3H)-酮，其被称为“CpdX”。
[0180] 在一个实施方案中，式1的化合物为外消旋(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]-异苯并呋喃-1(3H)-酮。在一个实施方案中，通过超临界流体色谱法(SFC)分离式1化合物或其衍生物的外消旋混合物，获得式1化合物的两种对映体中的每一种，所述两种对映体分别对应于第一洗脱峰[CpdX(eA)]和第二洗脱峰[CpdX(eB)]。
[0181] SFC是本领域技术人员熟知的技术。在一个实施方案中，可以使用直链淀粉三-(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)柱通过SFC有效地纯化式1的化合物的每种对映体。
[0182] 在一个实施方案中，式1的化合物被氘化。在一个实施方案中，式1的化合物中的至少一个氢原子被氘化。在一个实施方案中，式1的化合物中的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21个氢原子被氘化。
[0183] 在一个实施方案中，式1的化合物中的三个氢原子被氘化。因此，在一个实施方案中，式1的氘化形式是式2的化合物或其药学上可接受的对映体、盐、溶剂化物和/或前药，并被称为“CpdX-D3”：
[0184]
[0185] 在一个实施方案中，式2的化合物为外消旋(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟-甲基)-戊基氨基}-异苯并呋喃-1(3H)-酮。在一个实施方案中，通过超临界流体色谱法(SFC)分离式2化合物或其衍生物的外消旋混合物，获得式2化合物的两种对映体，所述两种对映体分别对应于第一洗脱峰[CpdX-D3(eA)]和第二洗脱峰[CpdX-D3(eB)]。
[0186] SFC是本领域技术人员熟知的技术。在一个实施方案中，可以使用直链淀粉三-(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)柱通过SFC有效地纯化式2的化合物的每种对映体。
[0187] 在下文中，除非另外明确指出，否则对式1的化合物的任何引用也包括上文所定义的式2的化合物。
[0188] 在一个实施方案中，式1的化合物的衍生物包括美国专利6,245,804中公开的化合物。
[0189] 在一个实施方案中，式1的化合物包含在衍生自式3的可能的化合物中。
[0190] 在一个实施方案中，式1的化合物的衍生物为式3的化合物：
[0191]
[0192]
[0193] 其中：
[0194] -W选自O、S或CH2；
[0195] -R2选自H或CH3；以及
[0196] -Z2、Z3、Z4、Z5和Z6各自独立地选自H、F、Cl、Br、CH3、OCH3、CH2CH3、CH2CH2CH3、CH(CH3)2、C(CH3)3、COCH3、NO2、CN、CH＝CH2或CONH2，
[0197] 或其药学上可接受的对映体、氘化形式、盐、溶剂化物和/或前药。
[0198] 在一个实施方案中，式3的化合物被氘化。在一个实施方案中，式3的化合物中的至少一个氢原子被氘化。在一个实施方案中，式3的化合物中至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多的氢原子被氘化。
[0199] 在一个具体的实施方案中，当式3的化合物被氘化时，Z2选自D、CD3、OCD3、CH2CD3、CH2CH2CD3、CH(CD3)2、C(CD3)3、COCD3或CH＝CD2。
[0200] 在一个具体且优选的实施方案中，当式3的化合物被氘化时，Z2为OCD3。
[0201] 本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。
[0202] 合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐(camsylate)、柠檬酸盐、环磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸、六氟磷酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘化物/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、蔗糖盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟醋酸盐和异烟酸盐(xinofoate salt)。
[0203] 合适的碱盐是由形成无毒盐的碱形成的。实例包括但不限于：铝、精氨酸、苄星青霉素、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘氨酸、赖氨酸、镁、葡甲胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇、2-(二乙氨基)乙醇、乙醇胺、吗啉、4-(2-羟乙基)吗啉和锌盐。
[0204] 还可形成酸和碱的半盐(hemisalt)，例如半硫酸盐和半钙盐。
[0205] 优选地，药学上可接受的盐包括但不限于：盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、硫酸氢盐/硫酸盐、硝酸盐、柠檬酸盐和乙酸盐。
[0206] 本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)的药学上可接受的盐可以通过以下一种或多种方法制备：
[0207] (i)使本发明的SEGRAM(优选式1化合物或其衍生物)与期望的酸反应；
[0208] (ii)使本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)与期望的碱反应；
[0209] (iii)从本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)的合适的前体除去酸或碱不稳定的保护基；或使用期望的酸使合适的环状前体例如内酯或内酰胺开环；或者[0210] (iv)通过与合适的酸反应或借助于合适的离子交换柱将本发明的SEGRAM(优选式1化合物或其衍生物)的一种盐转化为另一种盐。
[0211] 所有这些反应通常在溶液中进行。该盐可以从溶液中沉淀并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。盐中的离子化程度可以从完全离子化到几乎未离子化不等。
[0212] 对本发明的SEGRAM，优选对式1的化合物或其衍生物，的所有引用，都包括对其对映体、氘化形式、盐、溶剂化物、多组分络合物和液晶以及它们的组合的引用。
[0213] 本发明的化合物包括本发明的SEGRAM，优选本文所定义的式1的化合物或其衍生物，包括其所有多晶型物和晶习(crystal habit)、其前药和异构体(包括光学、几何和互变异构体)以及同位素标记的化合物。
[0214] 另外，尽管通常就盐而言，优选药学上可接受的盐，但应注意，本发明在最广泛的意义上也包括非药学上可接受的盐，其可以例如用于分离和/或纯化本发明的SEGRAM，优选式1的化合物或其衍生物。例如，通过光学活性酸或碱形成的盐可用于形成非对映异构体盐，该盐可有助于本发明SEGRAM的旋光异构体(优选式1化合物或其衍生物的旋光异构体)的分离。
[0215] 本发明通常还涵盖本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)的所有药学上可接受的前体药物(predrug)和前药。
[0216] 对映体
[0217] 本发明还涉及式1的化合物或其衍生物的一种或两种对映体：
[0218]
[0219] 或其药学上可接受的氘化形式、盐、溶剂化物和/或前药。
[0220] 在一个实施方案中，从新合成式1的化合物或其衍生物的对映体(实施例1，图2A)。
[0221] 在一个实施方案中，通过分离存在于式1的化合物或其衍生物中的两种外消旋组分来获得式1的化合物或其衍生物的对映体(实施例1，图2B)。
[0222] 在一个实施方案中，两种外消旋组分的分离通过超临界流体色谱法(SFC)执行。SFC是本领域技术人员熟知的技术。在该实施方案中，可以使用直链淀粉三-(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)柱通过SFC有效地分离式1的化合物或其衍生物的每种对映体。
[0223] 在通过SFC分离式1的化合物或其衍生物的外消旋混合物的一个实施方案中，第一洗脱峰称为“CpdX(eA)”，而第二洗脱峰称为“CpdX(eB)”。
[0224] 氘化SEGRAM
[0225] 本发明还涉及式1化合物或其衍生物的氘化形式：
[0226]
[0227] 或其药学上可接受的对映体、盐、溶剂化物和/或前药。
[0228] 在一个实施方案中，式1的化合物的氘化形式包含至少一个氘化氢原子。在一个实施方案中，式1的化合物的氘化形式包含至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18，19、20或21个氘化氢原子。
[0229] 在一个实施方案中，式1的化合物的氘化形式包含三个氘化氢原子。因此，在一个实施方案中，式1的化合物的氘化形式是式2的化合物或其药学上可接受的对映体、盐、溶剂化物和/或前药，并且被称为“CpdX-D3”：
[0230]
[0231] 氘化对映体
[0232] 本发明还涉及式2的化合物或其衍生物的一种或两种对映体：
[0233]
[0234] 或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药。
[0235] 在一个实施方案中，从新合成式2的化合物或其衍生物的对映体(实施例1，图2C)。
[0236] 在一个实施方案中，通过分离存在于式2的化合物或其衍生物中的两种外消旋组分，获得式2的化合物或其衍生物的对映体(实施例1，图2D)。
[0237] 在一些实施方案中，两种外消旋组分的分离通过超临界流体色谱法(SFC)执行。SFC是本领域技术人员熟知的技术。在一个实施方案中，可以使用直链淀粉三-(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)柱通过SFC有效地分离式2的化合物或其衍生物的每种对映体。
[0238] 在通过SFC分离式2的化合物或其衍生物的外消旋混合物的一个实施方案中，第一洗脱峰称为“CpdX-D3(eA)”，而第二洗脱峰称为“CpdX-D3(eB)”。
[0239] 组成
[0240] 组合物
[0241] 本发明还涉及包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)或由其组成或基本上由其组成的组合物。
[0242] 本发明还涉及用于在需要其的受试者中预防或治疗炎性病症或用于在需要其的受试者中预防或治疗炎性病症的用途的组合物，其包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)或由其组成或基本上由其组成。
[0243] 本发明还涉及用于在需要其的受试者中预防或治疗与Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症或用于在需要其的受试者中预防或治疗与Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症的用途的组合物，其包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)或由其组成或基本上由其组成。
[0244] 药物组合物
[0245] 本发明还涉及药物组合物，其包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)与至少一种药学上可接受的赋形剂或由其组成或基本上由其组成。
[0246] 本发明还涉及用于在需要其的受试者中预防或治疗炎性病症或用于在需要其的受试者中预防或治疗炎性病症的用途的药物组合物，其包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)与至少一种药学上可接受的赋形剂或由其组成或基本上由其组成。
[0247] 本发明还涉及用于在需要其的受试者中预防或治疗与Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症或用于在需要其的受试者中预防或治疗与Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症的用途的药物组合物，其包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)与至少一种药学上可接受的赋形剂或由其组成或基本上由其组成。
[0248] 药学上可接受的赋形剂包括但不限于水；盐水；林格溶液(Ringer's solution)；右旋糖溶液；以及乙醇、葡萄糖、蔗糖、右旋糖酐、甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、聚乙二醇(PEG)、磷酸盐、乙酸盐、明胶、胶原、 植物油等的溶液。一种可以另外包括合适的防腐剂、稳定剂、抗氧化剂、抗微生物剂和缓冲剂例如BHA、BHT、柠檬酸、抗坏血酸、四环素等。
[0249] 可以用于本发明的组合物中的药学上可接受的赋形剂的其它实例包括但不限于离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白例如人血清白蛋白；缓冲物质例如磷酸盐；甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；饱和植物脂肪酸、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮)的部分甘油酯混合物；基于纤维素的物质；聚乙二醇；羧甲基纤维素钠；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物；聚乙二醇；和羊毛脂。
[0250] 另外，一些药学上可接受的赋形剂可以包括表面活性剂(例如，羟丙基纤维素)；表面活性剂(例如，羟丙基纤维素)；合适的载体，例如包含水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)的溶剂和分散介质、其合适的混合物、以及植物油例如花生油和芝麻油；等渗剂，例如糖或氯化钠；包衣剂，例如卵磷脂；延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶；防腐剂，例如苯扎氯铵、苄索氯铵、氯丁醇、硫柳汞等；缓冲剂，例如硼酸、碳酸氢钠和碳酸氢钾、硼酸钠和硼酸钾、碳酸钠和碳酸钾、乙酸钠、磷酸二氢钠等；张度剂，例如右旋糖酐40、右旋糖酐70、右旋糖、甘油、氯化钾、丙二醇、氯化钠；抗氧化剂和稳定剂，例如亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代亚硫酸钠(sodium thiosulfite)、硫脲等；非离子润湿剂或澄清剂，例如聚山梨酯80、聚山梨酯20、泊洛沙姆282和泰洛沙泊；粘度调节剂，例如右旋糖酐40、右旋糖酐70、明胶、甘油、羟乙基纤维素、羟甲基丙基纤维素、羊毛脂、甲基纤维素、矿脂、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素等等。
[0251] 药物
[0252] 本发明还涉及包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)或由其组成或基本上由其组成的药物。
[0253] 本发明还涉及用于在需要其的受试者中预防或治疗炎性病症或用于在需要其的受试者中预防或治疗炎性病症的用途的药物，其中所述药物包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)或由其组成或基本上由其组成。
[0254] 本发明还涉及用于在需要其的受试者中预防或治疗与Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症或用于在需要其的受试者中预防或治疗与Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症的用途的药物，其中所述药物包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)或由其组成或基本上由其组成。
[0255] 药妆组合物
[0256] 本发明还涉及包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物或其衍生物)或由其组成或基本上由其组成的药妆组合物。
[0257] 本发明还涉及用于在需要其的受试者中预防或治疗炎性病症或用于在需要其的受试者中预防或治疗炎性病症的用途的药妆组合物，其中所述药物包含本发明的SEGRAM(优选式1的化合物)或由其组成或基本上由其组成。
[0258] 施用方式
[0259] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物将被全身或局部施用。
[0260] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物将通过以下方式被施用：口服、注射、局部、透皮(transdermally)、皮下、粘膜(transmucosally)、皮肤(percutaneously)、鼻(例如通过鼻内喷雾剂或滴剂)、颊(buccally)、舌下、眼、耳内、气管内、内镜、关节内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、腹膜内、肠内、直肠或阴道。
[0261] 注射
[0262] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物被注射，优选被全身注射。适用于全身注射的配制剂的实例包括但不限于液体溶液或悬浮液、适合于在注射之前以液体形式溶解或悬浮的固体形式。全身注射的实例包括但不限于静脉内、皮下、肌内、皮内和腹膜内注射和输注。在另一个实施方案中，当注射时，本发明的组合物、药物组合物或药物是无菌的。获得无菌药物组合物的方法包括但不限于GMP合成(GMP代表“优质生产规范”)。
[0263] 口服施用
[0264] 在另一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物经口服施用。
[0265] 适于口服施用的配制剂的实例包括但不限于固体形式、液体形式和凝胶。
[0266] 适于口服施用的固体形式的实例包括但不限于丸剂、片剂、胶囊、软明胶胶囊、硬明胶胶囊、囊片、压制片剂、扁囊剂、圆片(wafer)、糖衣丸剂、糖衣片剂或分散片剂/或崩解片剂、粉剂、适于在口服施用前以液体形式溶解或悬浮的固体形式或泡腾片剂。
[0267] 适于口服施用的液体形式的实例包括但不限于溶液剂、悬浮剂、可饮用溶液剂、酏剂、密封的小药瓶、饮剂、灌药(drench)、糖浆和液剂。
[0268] 局部施用
[0269] 在另一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物被局部施用。
[0270] 局部施用的特征在于例如使用手、手指或各种涂药器(卷式、滚动式或其它棒状容器、管容器、棉球、粉扑、棉签、泵、刷子、垫子、布和/或类似物)，将本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物直接递送、施用或施加到目标部位以产生局部作用(通常在其一个或多个暴露表面或外表面上，例如在暴露的、可目视观察到的表皮的最外层上)。可以例如通过敷、放置、摩擦、擦拭(sweeping)、倾倒、铺展和/或按摩到皮肤中或皮肤上来进行施加，或者通过任何其它常规的或合适的方法来进行施加。优选地，局部施用是在没有明显地将组合物成分吸收到受试者的血流中的情况下实现的(以避免全身作用)。
[0271] 适于局部施用的配制剂的实例包括但不限于棒、唇膏、蜡、乳膏、洗剂、软膏、香油(balm)、凝胶、上光剂(gloss)、防晒制剂、化妆品、面膜、免洗洗剂或清洁剂、脱毛制剂和/或类似物。
[0272] 本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物可以与例如1％或2％(w/w)的苯甲醇(作为防腐剂)、乳化蜡、甘油、棕榈酸异丙酯、乳酸、纯净水和山梨糖醇溶液混合，以形成白色、光滑、均匀、不透明的乳膏或洗剂。另外，组合物可以包含聚乙二醇400(PEG 400)。它们可以与例如2％(w/w)的苯甲醇(作为防腐剂)、白矿脂、乳化蜡和没食子酸丙酯(tenox)II(丁基化羟基茴香醚、没食子酸丙酯、柠檬酸、丙二醇)混合形成软膏。可以用溶液、洗剂、乳膏、软膏或其它此类形式的组合物浸渍编织垫或包扎材料(例如纱布)卷，其也可以用于局部应用。
[0273] 在一个实施方案中，适于局部施用的配制剂包含约0.001％w/w，优选约0.005％w/w、0.01％w/w、0.02％w/w、0.03％w/w、0.04％w/w、0.05％w/w、0.06％w/w、0.07％w/w、0.08％w/w、0.09％w/w、0.1％w/w、0.2％w/w、0.3％w/w、0.4％w/w、0.5％w/w、0.6％w/w、
0.7％w/w、0.8％w/w、0.9％w/w、1.0％w/w或更多的式1的化合物或其衍生物。
[0274] 透皮施用
[0275] 在另一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物也可以使用透皮系统局部施用，所述透皮系统例如丙烯酸类聚合物粘合剂中的一种，其中树脂交联剂浸渍有所述组合物并被层压成不可渗透的衬垫。
[0276] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物可以作为透皮贴剂，更具体而言作为缓释透皮贴剂，被施用。透皮贴剂可以包括任何常规形式，例如粘合剂基质、聚合物基质、储库贴剂、基质或整体式层压结构，其通常包括一个或多个背衬层、粘合剂、渗透增强剂、任选的速率控制膜和防粘衬里，所述防粘衬里在应用之前被除去以露出粘合剂。聚合物基质贴剂还包含聚合物基质形成材料。合适的透皮贴剂在例如美国专利5,262,165、5,948,433、6,010,715和6,071,531中有更详细的描述，其每一个专利的公开内容整体并入本文。
[0277] 适于透皮施用的配制剂的实例包括但不限于软膏、糊剂、乳膏、薄膜、香油、贴剂，例如透皮贴剂、凝胶、脂质体形式等。
[0278] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物是软膏、糊剂、乳膏、薄膜、香油、贴剂，例如透皮贴剂、凝胶、脂质体形式等。
[0279] 在本发明的一个实施方案中，所述软膏是一种油质软膏；乳化软膏，例如水包油或油包水软膏；或水溶性软膏，优选油质软膏。
[0280] 在本发明的一个实施方案中，所述油质软膏使用主要成分，诸如植物油和动物油；植物脂肪和动物脂肪；蜡；凡士林，例如白凡士林或凡士林油；和石蜡，例如液体石蜡或石蜡油。
[0281] 在本发明的一个实施方案中，透皮组合物还包含一种或多种赋形剂。合适的药学上可接受的赋形剂是技术人员熟知的。合适的赋形剂的实例包括但不限于载体、乳化剂、硬化剂、流变改性剂或增稠剂、表面活性剂、润肤剂、防腐剂、湿润剂、缓冲剂、溶剂、保湿剂(moisturizing agent)和稳定剂。
[0282] 眼部施用
[0283] 在另一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物也可以眼内施加。在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的施用可以是局部眼部施用，例如施用滴眼剂或通过在包含本发明的抑制剂的眼用溶液中洗眼来施用。
[0284] 眼用溶液是指意图在眼球和/或结膜上施用，或插入到结膜囊中或施用到眼睛后段的无菌液体、半固体或固体制剂。如本文所用，术语“眼睛后段”指的是眼睛的后三分之二，包括前透明膜和其后的结构(玻璃体液、视网膜、脉络膜、视神经)。特别地，眼用组合物可以例如通过玻璃体内注射被施用到玻璃体内。眼用组合物的实例包括但不限于滴眼剂、眼用洗剂、用于滴眼剂的粉末和用于眼用洗剂的粉末、以及注射到结膜囊或玻璃体中的组合物。
[0285] 载体的实例包括但不限于水；缓冲盐水；矿油(petroleum jelly)(凡士林，也称为白软石蜡)；矿脂；油，例如矿物油、植物油、动物油、石蜡油、蓖麻油或凡士林油；有机和无机蜡，例如微晶蜡、石蜡、蜂蜡和地蜡(ozocerite wax)；天然聚合物，例如黄原胶、明胶、纤维素、胶原、淀粉或阿拉伯胶；合成聚合物；酒精；多元醇等等。在本发明的一个实施方案中，载体是基础乳膏，其包含乳化剂、油相成分和水相成分。
[0286] 软膏或洗剂基础赋形剂的实例包括但不限于凡士林、PlastibaseTM(这是一种用聚乙烯(平均分子量约为21000Da)和液体石蜡制备的基底)和ESMA-PTM(由微晶蜡制成)。
[0287] 乳化剂的实例包括但不限于鲸蜡醇、十八醇十六醇混合物、硬脂醇、聚羧乙烯、聚卡波非、聚乙二醇及其衍生物、聚氧乙烯及其衍生物，例如聚山梨酯20或聚山梨酯80，其单独地或与脂肪醇(例如鲸蜡醇、硬脂醇和十八醇十六醇混合物)以及山梨聚糖酯(例如山梨聚糖脂肪酸酯)组合。
[0288] 油相成分的实例包括但不限于凡士林(例如白凡士林、黄凡士林或凡士林油)、石蜡(例如液体石蜡或石蜡油)、二甲聚硅氧烷及其混合物。
[0289] 水相成分的实例包括但不限于水、丙三醇和丙二醇。
[0290] 硬化剂的实例包括但不限于硬脂醇、十八醇十六醇混合物和鲸蜡醇。
[0291] 流变改性剂或增稠剂的实例包括但不限于卡波姆(例如 )和聚氧乙烯牛脂胺(例如 )。
[0292] 表面活性剂的实例包括但不限于阴离子、阳离子、两性和非离子表面活性剂，例如月桂基硫酸钠、十八醇十六醇混合物、鲸蜡醇、月桂基硫酸镁、蜡或它们的组合。
[0293] 润肤剂的实例包括但不限于白色或黄色矿脂(白或黄凡士林)、液态矿脂(液态凡士林)、石蜡或阿夸弗尔(aquaphor)。
[0294] 防腐剂的实例包括但不限于抗微生物防腐剂，例如尼泊金酯(羟苯甲酯)、尼泊金丙酯(羟苯酸酯)、尼泊金丁酯、羟苯乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、尼泊金丙酯钾、尼泊金丙酯钠、对羟苯甲酸酯、山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、硫柳汞、苯甲酸钠和苄醇。
[0295] 湿润剂的实例包括但不限于丙二醇和藻酸丙二醇酯。
[0296] 缓冲剂的实例包括但不限于氢氧化钠、柠檬酸和氢氧化钾。
[0297] 溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、苄醇和丙二醇。
[0298] 保湿剂的实例包括但不限于甘油、矿物油、聚氧乙烯硬化的蓖麻油和凡士林、丙二醇、石蜡、蜡(例如蜂蜡)、聚乙二醇或其混合物例如聚乙二醇(macrogol)[聚乙二醇(macrogol)是不同分子量的聚乙二醇的混合物]、硬脂醇、苄醇、对羟基苯甲酸酯(对羟基苯甲酸酯类)、稠化烃、柠檬酸、鲨烯、羊毛脂、甘油、聚氧乙烯硬化的蓖麻油、山梨聚糖脂肪酯、甘油脂肪酯、动物和植物脂肪、油、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、硅胶、膨润土、硅酸、滑石粉、氧化锌及其混合物。
[0299] 稳定剂的实例包括但不限于碳水化合物(例如蔗糖、乳糖和海藻糖)、糖醇(例如甘露醇和山梨醇)、氨基酸(例如组氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸和精氨酸)。
[0300] 呼吸道施用
[0301] 在另一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物将通过呼吸道施用，所述呼吸道施用包括鼻施用(例如通过喷雾)和颊部施用。
[0302] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物可以通过本领域已知的用于通过吸入施用治疗剂的多种吸入装置中的任一种来递送。这些装置包括定量吸入器、雾化器、干粉吸入器、喷雾器等。
[0303] 适用于实施本发明的市售吸入装置的一些具体实例是Cyclohaler、TurbohalerTMTM(Astra)、 (Glaxo)、 (Glaxo)、Spiros 吸入器(Dura)、Inhale 
TM
Therapeutics销售的装置、AERx (Aradigm)、 雾化器(Mallinckrodt)、Acorn 
雾化器(Marquest Medical Products)、 定量吸入器(Glaxo)、 粉
末吸入器(Fisons)、 软雾吸入器(Boehringer Ingelheim)等。
[0304] 如本领域技术人员将认识到的，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的配方，递送的配制剂的量和单剂量的施用持续时间，取决于所采用的吸入装置的类型。
[0305] 对于某些气雾剂递送系统，例如雾化器，施用频率和系统被启动的时长将主要取决于气雾剂中本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的浓度。例如，可以在喷雾剂溶液中以较高浓度的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物使用较短的施用时间。
[0306] 诸如定量吸入器之类的装置可以产生更高的气雾剂浓度，并且可以被操作更短的时间来递送期望量的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物。
[0307] 诸如粉末吸入器之类的设备递送活性剂，直到从设备中排出给定量的药剂为止。在这种类型的吸入器中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物在给定量的粉末中的量决定了单次施用中递送的剂量。
[0308] 在一个实施方案中，通过吸入递送的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的颗粒的粒径优选小于约10μm，更优选在约1μm至约5μm的范围。
[0309] 有利地，为了作为干粉施用，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物被制备成粒径小于约10μm，优选约1至约5μm，的颗粒形式。这样的配制剂可以通过本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的喷雾干燥、研磨、微粉化(micronisation)或临界点冷凝来实现。
[0310] 用于从干粉吸入器施用的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的配制剂通常包括细粒干粉，其含有本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物，但该粉末还可以包含填充剂、载体、赋形剂、另外的添加剂等。添加剂的实例包括但不限于单糖、二糖和多糖；糖醇和其它多元醇，例如乳糖、葡萄糖、棉子糖、松三糖、乳糖醇、麦芽糖醇、海藻糖、蔗糖、甘露醇、淀粉、菊粉或其组合；表面活性剂，例如山梨糖醇、二棕榈酰磷脂酰胆碱或卵磷脂；或类似物。
[0311] 可以通过在压力下迫使本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物通过喷嘴来生产包括本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的喷雾剂。可以选择喷嘴的尺寸和配置、施加的压力以及液体进料速率，以实现期望的输出量和粒径。可以例如通过与毛细管或喷嘴进料结合的电场产生电喷雾。适用于喷雾器的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的配制剂通常包括本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的水溶液。
[0312] 关节内施用
[0313] 在另一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物将通过关节内施用。
[0314] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物可以在需要其的受试者的关节内被递送。例如，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物可以通过盘内(peri-disc)或盘周围(peri-disc)施用而被施用于患有背痛的炎性病症的受试者。例如，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物可以通过膝关节间或膝关节周围注射被施用给患有膝痛的炎性病症的受试者。
[0315] 缓释施用
[0316] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物以缓释形式被施用。在另一个实施方案中，该组合物、药物组合物或药物包含控制调节剂释放的递送系统。
[0317] 受试者
[0318] 在一个实施方案中，受试者是动物。在一个实施方案中，所述受试者是哺乳动物。
[0319] 哺乳动物的实例包括但不限于灵长类动物(包括人类和非人类)、牛(包括奶牛)、马、猪、绵羊、山羊、狗和猫。
[0320] 在一个优选的实施方案中，所述受试者是人。
[0321] 在一个实施方案中，所述受试者是成体(例如，人类年龄满18岁的受试者或已达到生殖能力的受试者)。在另一个实施方案中，所述受试者是幼儿(例如，人类年龄18岁以下的受试者或尚未达到生殖能力的受试者)。
[0322] 在一个实施方案中，所述受试者是雄性。在一个实施方案中，所述受试者是雌性。
[0323] 在一个实施方案中，受试者被诊断患有炎性病症，优选患有Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症。在一个实施方案中，受试者被诊断患有Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症中的任何一种，所述Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症选自包括以下各项或由以下各项组成的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、变应性鼻窦炎、变应性结膜炎、过敏性鼻炎、鼻结膜炎、巨细胞动脉炎(霍顿病)、枯草热、日光皮炎、湿疹、荨麻疹、血管性水肿、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性静脉炎、虫咬皮肤炎、过敏性反应、银屑病、类风湿性关节炎、炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)、牙周炎、慢性炎性疾病、红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征、硬皮病、多发性硬化症、白癜风、扁平苔癣、2型糖尿病、冠心病、高脂血症、绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性以及移植物抗宿主病。
[0324] 在一个实施方案中，受试者被诊断患有Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症中的任何一种，所述Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症选自包括以下各项或由以下各项组成的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、类风湿性关节炎和炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)。
[0325] 在一个实施方案中，所述受试者处于发展炎性病症(优选Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症)的风险中。在一个实施方案中，所述受试者处于发展Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症中的任一种的风险中，所述Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症选自包括以下各项或由以下各项组成的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、变应性鼻窦炎、变应性结膜炎、过敏性鼻炎、鼻结膜炎、巨细胞动脉炎(霍顿病)、枯草热、日光皮炎、湿疹、荨麻疹、血管性水肿、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性静脉炎、虫咬皮肤炎、过敏性反应、银屑病、类风湿性关节炎、炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)、牙周炎、慢性炎性疾病、红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征、硬皮病、多发性硬化症、白癜风、扁平苔癣、2型糖尿病、冠心病、高脂血症、绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性以及移植物抗宿主病。
[0326] 在一个实施方案中，所述受试者处于发展Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症中的任一种的风险中，所述Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症选自包括以下各项或由以下各项组成的组：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)。
[0327] 方案
[0328] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物将以技术人员确定且就个体而言适合每个受试者的剂量被施用。
[0329] 应该理解，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的总体每日用法将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。对于任何特定受试者的具体治疗有效量将取决于多种因素，包括正在治疗的疾病和疾病的严重性；所使用的具体组合物、受试者的年龄、体重、总体健康、性别和饮食；施用时间、施用途径、治疗持续时间；与本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物联合或同时使用的药物；以及医学领域众所周知的类似因素。例如，以低于实现期望的治疗效果所需的剂量的水平开始治疗化合物的剂量并逐渐增加剂量直至实现期望的效果，这在本领域技术范围内；但是相反地，从加载剂量开始(这是一种更快地达到稳态血浆浓度的方式)，然后再跟随计算出的维持剂量以精确补偿消除过程的作用，这可同样有用。
[0330] 在一个实施方案中，每天至少一次、每天至少两次、每天至少三次施用治疗有效量的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物。
[0331] 在一个实施方案中，每两天、三天、四天、五天、六天施用治疗有效量的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物。
[0332] 在一个实施方案中，每周两次、每周一次、每两周一次、每月一次施用治疗有效量的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物。
[0333] 在一个实施方案中，每月一次、每两个月一次、每三个月一次、每四个月一次、每五个月一次、每六个月一次、每年一次施用治疗有效量的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物。
[0334] 在一个实施方案中，将治疗有效量的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物施用约一天、两天、三天、四天、五天、六天、一周、两周、三周、一个月、两个月、三个月、六个月、一年的时间段或更长的时间段，例如几年或受试者的余生。在一个实施方案中，施用治疗有效量的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物，直到治疗或减轻炎性病症，优选Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症为止。
[0335] 在一个实施方案中，施用治疗有效量的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物，用于长期治疗。在另一个实施方案中，施用治疗有效量的本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物，用于急性治疗。
[0336] 质量/体重/天的方案
[0337] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量的范围为约0.5μg/kg至约50mg/kg，优选约5μg/kg至约25mg/kg，优选约50μg/kg至约5mg/kg，优选约250μg/kg至约2.5mg/kg，优选约300μg/kg至约1mg/kg，优选约350μg/kg至约800μg/kg，优选约400μg/kg至约600μg/kg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量为约500μg/kg。
[0338] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量的范围为约1μg/kg至约100mg/kg，优选约10μg/kg至约50mg/kg，优选约100μg/kg至约10mg/kg，优选约500μg/kg至约5mg/kg，优选约750μg/kg至约2.5mg/kg，优选约800μg/kg至约2mg/kg，优选约900μg/kg至约1.5mg/kg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量为约1mg/kg。
[0339] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量的范围为约5μg/kg至约500mg/kg，优选约50μg/kg至约250mg/kg，优选约500μg/kg至约50mg/kg，优选约1mg/kg至约25mg/kg，优选约1.5mg/kg至约12.5mg/kg，优选约2mg/kg至约
10mg/kg，优选约2.5mg/kg至约7.5mg/kg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量为约5mg/kg。
[0340] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量的范围为约0.5μg/kg至约250μg/kg，优选约1μg/kg至约200μg/kg，优选约5μg/kg至约150μg/kg，优选约10μg/kg至约100μg/kg，优选约25μg/kg至约75μg/kg，优选约30μg/kg至约50μg/kg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量为约40μg/kg。
[0341] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量的范围为约0.1μg/kg至约10mg/kg，优选约1μg/kg至约1mg/kg，优选约10μg/kg至约500μg/kg，优选约20μg/kg至约450μg/kg，优选约30μg/kg至约400μg/kg，优选约40μg/kg至约350μg/kg，优选约45μg/kg至约300μg/kg，优选约50μg/kg至约250μg/kg，优选约55μg/kg至约200μg/kg，优选约60μg/kg至约150μg/kg，优选约65μg/kg至约100μg/kg，优选约70μg/kg至约90μg/kg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量为约80μg/kg。
[0342] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量的范围为约1μg/kg至约5mg/kg，优选约10μg/kg至约2.5mg/kg，优选约25μg/kg至约2mg/kg，优选约50μg/kg至约1mg/kg，优选约100μg/kg至约750μg/kg，优选约150μg/kg至约600μg/kg，优选约200μg/kg至约600μg/kg，优选约250μg/kg至约550μg/kg，优选约300μg/kg至约500μg/kg，优选约350μg/kg至约450μg/kg，优选约380μg/kg至约420μg/kg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量为约400μg/kg。
[0343] 质量/天的方案
[0344] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量的范围为约0.05μg至约250μg、约0.1μg至约150μg、约0.2μg至约100μg、约0.3μg至约50μg、约0.4μg至约35μg、约0.5μg至约25μg、约2.5μg至约20μg，优选约5μg至约15μg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量为约10μg。
[0345] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量的范围为约0.1μg至约500μg、约0.2μg至约300μg、约0.4μg至约200μg、约0.6μg至约100μg、约0.8μg至约75μg、约1μg至约50μg、约5μg至约40μg，优选约10μg至约30μg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量为约20μg。
[0346] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量的范围为约0.5μg至约500μg，优选约1μg至约250μg，优选约10μg至约200μg，优选约25μg至约180μg，优选约50μg至约160μg，优选约60μg至约140μg，优选约80μg至约120μg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日量为约100μg。
[0347] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量的范围为约50μg至约25mg，优选约50μg至约15mg，优选约100μg至约12.5mg，优选约200μg至约10mg，优选约300μg至约7.5mg，优选约400μg至约5mg，优选约500μg至约4.5mg，优选约1mg至约4mg，优选约1.5mg至约3.5mg，优选约2mg至约3mg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量为约2.5mg。
[0348] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量的范围为约0.1mg至约50mg，优选约0.1mg至约30mg，优选约0.2mg至约25mg，优选约0.4mg至约20mg，优选约0.6mg至约15mg，优选约0.8mg至约10mg，优选约1mg至约9mg，优选约2mg至约8mg，优选约3mg至约7mg，优选约4mg至约6mg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量为约5mg。
[0349] 在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物的每日人类当量的范围为约0.5mg至约100mg，优选约0.6mg至约75mg，优选约0.8mg至约60mg，优选约1mg至约55mg，优选约2.5mg至约50mg，优选约5mg至约45mg，优选约10mg至约40mg，优选约15mg至约
35mg，优选约20mg至约30mg，优选约23mg至约27mg。在一个实施方案中，待施用给需要其的受试者的式1的化合物或其衍生物的每日人类当量为约25mg。
[0350] 联合疗法
[0351] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物可以作为联合疗法的一部分被施用。因此，其包含在本发明的实施方案的范围内，所述实施方案包括共同施用组合物和药物，所述组合物和药物除本发明的SEGRAM(优选式1化合物或其衍生物)之外还包含另外的治疗剂/或活性成分。
[0352] 这样的多药物方案(通常称为联合疗法)可以用于预防或治疗炎性病症，优选用于预防或治疗Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症。
[0353] 除了需要治疗功效(这可能需要使用除了本发明的SEGRAM之外的活性剂)之外，还可能有其它的理由强迫或强烈建议使用涉及代表辅助疗法(即，补助和补充由本发明的SEGRAM执行的功能)的活性成分的药物组合。
[0354] 用于辅助治疗目的的合适的补充治疗剂包括这样的药物，所述药物不直接预防或治疗炎性病症(优选不直接预防或治疗Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症)，而是治疗由基本或潜在的炎性病症(优选Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症)直接引起或间接伴随基本或潜在的炎性病症(优选Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症)的疾病或病状。
[0355] 因此，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物可以以单一疗法的形式被施用，但是也可以以多疗法的形式被使用，在多疗法中，根据本发明的SEGRAM联合一种或多种其它治疗剂被共施用。
[0356] 可与本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物联合施用的其它活性剂的实例包括但不限于：
[0357] (i)甾体抗炎药(SAID)，包括：
[0358] a.天然糖皮质激素，例如可的松、可托多松、脱氧皮质酮、氢化可的松、乙酰氧基孕烯醇酮和孕烯醇酮；
[0359] b.合成糖皮质激素，例如阿氯米松、安西奈德、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、氯泼尼松、氯泼尼松、环索奈德、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龙、氯泼尼醇、可的伐唑、地夫可特、地奈德、去羟米松、地塞米松、双氟拉松、二氟可龙、二氟泼尼酯、氟氯奈德、氟氯奈德、氟氢可的松、氟氢缩松、醋酸氟羟孕酮、氟米松、氟尼缩松、氟轻松、氟轻松醋酸酯、氟可丁、氟可龙、氟米龙、氟培龙、氟泼尼定、氟泼尼龙、氟替卡松、福莫可他、哈西奈德、卤米松、氯替泼诺、甲羟松、甲泼尼松、甲基强的松龙、莫米松、帕拉米松、泼尼卡酯、脱氢皮质醇、强的松和替可的松、泼尼立定、美索龙、去炎松、去炎松和乌倍他索；
[0360] (ii)非甾体抗炎药(NSAID)，包括：
[0361] a.TNFα抑制剂，例如英夫利昔、阿达木单抗、赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、戈利木单抗、依那西普、沙利度胺、来那度胺和泊马度胺(pomalidomide)；
[0362] b.水杨酸盐类，例如amoxiprin、阿司匹林、扑炎痛(benorylate)、二氟尼柳、法斯拉胺(faislamine)、氨水杨酸和水杨酸甲酯；
[0363] c.支气管扩张药，例如
[0364] i.β2-肾上腺素激动药，例如abediterol、阿福特罗(arformoterol)、班布特罗、克仑特罗、福莫特罗、茚达特罗(indacaterol)、奥达特罗、普罗托醇、甲氧苯舒喘宁(salmefamol)、沙美特罗和维兰特罗(vilanterol)；
[0365] ii.抗胆碱能药物，例如阿托品、苯托品、比哌立登、氯苯那敏、双环胺、茶苯海明、苯海拉明、多塞平、抗敏安、格隆溴铵、异丙托溴铵、奥芬那君(orphenadrine)、氧托品(oxitropium)、奥昔布宁、溴丙胺太林、托特罗定、噻托溴铵、三环抗忧郁药、苯海索、东莨菪碱、索利那新、托吡卡胺、安非他酮、右美沙芬、多撒库铵(doxacurium)、六甲铵、美坎敏胺和筒箭毒；和
[0366] iii.白三烯调节剂，例如2-TEDC、黄芩素、BW-A4C、BW-B70C、咖啡酸、肉桂基-3,4-二羟基-α-氰基肉桂酸酯(CDC)、CJ-13610、姜黄素、芬留顿、贯叶金丝桃素、金丝桃(Hypericum perforatum)、甲氯芬那酸(meclofenamate)、米诺环素、N-硬脂酰多巴胺、替美加定、齐留通、AM-103、AM-679、BAYx1005、MK-591、MK-886、3-甲氧基托酚酮、木犀草素、PD-146176、阿西鲁司特(acebilustat)、卡托普利、DG-051、福辛普利拉、JNJ-26993135、SA-
6541、SC-57461A、乌苯美司、17-十八炔酸、氮卓斯汀、阿西维辛、丝氨酸-硼酸盐复合物和西司他丁；
[0367] d.芳基链烷酸，例如2-芳基丙酸、双氯芬酸、吲哚美辛和舒林酸；
[0368] e.布洛芬，例如卡洛芬、非诺洛芬、氟比洛芬、异丁苯丙酸、酮洛芬、酮咯酸、氯索洛芬、萘普生和噻洛芬酸；
[0369] f.N-芳基邻氨基苯甲酸，例如芬那酸、甲灭酸和甲氯芬那酸；
[0370] g.吡唑烷衍生物，例如苯基丁氮酮和羟苯基丁氮酮；
[0371] h.昔康类，例如美洛昔康和吡罗昔康；
[0372] i.剂昔布类(coxibs)，例如赛来昔布、依托昔布、帕瑞昔布、罗非昔布和戊地昔布；
[0373] j.磺苯胺类(sulphonanilides)，例如尼美舒利；
[0374] k.脂肪氧合酶抑制剂，例如黄芩素、咖啡酸、二十碳四炔酸、二十碳三烯酸(eicosatriynoic acid)、七叶亭、氟比洛芬、棉酚、5-羟基二十碳四烯酸(HETE)内酯、5(S)-HETE和去甲二氢愈创木酸；
[0375] l.大环内酯衍生物，例如9-(S)-二氢红霉素衍生物；
[0376] m.抗炎肽(也称为抗发炎蛋白)，例如衍生自精囊蛋白的肽、选择素结合肽、基于杀菌/渗透增强蛋白BPI的阳离子肽和IL-2衍生的肽；
[0377] n.抗炎细胞因子，例如IL-1Ra、IL-4、IL-6、IL-10、IL-11和IL-13；
[0378] o.促炎细胞因子抑制剂，例如TNFα抑制剂和IL-18抑制剂；
[0379] p.半乳凝素，例如半乳凝素-1；
[0380] q.中和促炎信号分子/细胞因子的抗体，例如，针对TNFα、IL-1、IL-18的抗体；和[0381] r.他汀类药物。
[0382] 上述组合包括本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物与一种其它活性剂的组合以及与两种或更多种活性剂的组合。
[0383] 在一个实施方案中，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物以及其它治疗活性剂可以以下述方式施用：
[0384] -就剂型而言，分别或彼此一起；以及
[0385] -就其施用时间而言，连续的或同时的。
[0386] 因此，本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物的施用可以在其它活性剂施用之前、与之同时或在其之后。
[0387] 方法和用途
[0388] 治疗方法
[0389] 本发明进一步涉及一种在需要其的受试者中预防和/或治疗炎性病症的方法，其包括向该受试者施用治疗有效量的选择性GR激动调节剂(SEGRAM)。本发明进一步涉及在需要其的受试者中预防和/或治疗炎性病症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物。
[0390] 本发明还涉及一种用于在需要其的受试者中预防和/或治疗增强的Th1、Th2和/或Th17活性的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的SEGRAM。本发明还涉及一种用于在需要其的受试者中预防和/或治疗增强的Th1、Th2和/或Th17活性的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物。
[0391] 本发明还涉及一种用于在需要其的受试者中预防和/或治疗分泌的细胞因子和抗体水平升高的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的SEGRAM。本发明进一步涉及一种用于在需要其的受试者中预防和/或治疗分泌的细胞因子和抗体水平升高的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物。发明。
[0392] 在一个实施方案中，SEGRAM是式1的化合物或其衍生物或其药学上可接受的对映体、氘化形式、盐、溶剂化物和/或前药。
[0393] 在一个实施方案中，SEGRAM不诱导或基本上不诱导糖皮质激素受体(GR)的直接反式激活或直接反式抑制功能。在一个实施方案中，SEGRAM诱导糖皮质激素受体(GR)的间接束缚反式抑制功能。
[0394] 在一个实施方案中，SEGRAM在施用给需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导与甾体抗炎药(SAID)相关的副作用。在一个实施方案中，治疗有效量的根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物在施用给需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导与甾体抗炎药(SAID)相关的副作用。
[0395] 在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗选自包括以下各项或由以下各项组成的组的炎性病症：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、变应性鼻窦炎、变应性结膜炎、过敏性鼻炎、鼻结膜炎、巨细胞动脉炎(霍顿病)、枯草热、日光皮炎、湿疹、荨麻疹、血管性水肿、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性静脉炎、虫咬皮肤炎、过敏性反应、银屑病、类风湿性关节炎、炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)、牙周炎、慢性炎性疾病、红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征、硬皮病、多发性硬化症、白癜风、扁平苔癣、2型糖尿病、冠心病、高脂血症、绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性以及移植物抗宿主病。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗选自包括以下各项或由以下各项组成的组的炎性病症：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗特应性皮炎。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗接触性皮炎。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗变应性气喘。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗银屑病。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗类风湿性关节炎。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗溃疡性结肠炎。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗变应性结膜炎。在一个实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性。
[0396] 在一个实施方案中，分泌的细胞因子和抗体选自包括以下各项或由以下各项组成的组：IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17a、IL-17c、IL-17f、IL-18、IL-21、IL-22、IL-23、IL-33、TSLP、TGFβ、CCL4、TNFα、COX2、MMP13、IgE、IgG1和IgG2a。
[0397] 仅仅用途
[0398] 本发明进一步涉及治疗有效量的选择性GR激动调节剂(SEGRAM)用于预防和/或治疗需要其的受试者中的炎性病症的用途。本发明进一步涉及治疗有效量的根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗需要其的受试者中的炎性病症的用途。
[0399] 本发明进一步涉及治疗有效量的SEGRAM用于预防和/或治疗需要其的受试者中增强的Th1、Th2和/或Th17活性的用途。本发明进一步涉及治疗有效量的根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗需要其的受试者中增强的Th1、Th2和/或Th17活性的用途。
[0400] 本发明进一步涉及治疗有效量的SEGRAM用于预防和/或治疗需要其的受试者中分泌的细胞因子和抗体水平升高的用途。本发明进一步涉及治疗有效量的根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗需要其的受试者中分泌的细胞因子和抗体水平升高的用途。
[0401] 在一个实施方案中，SEGRAM是式1的化合物或其衍生物或其药学上可接受的对映体、氘化形式、盐、溶剂化物和/或前药。
[0402] 在一个实施方案中，SEGRAM不诱导或基本上不诱导糖皮质激素受体(GR)的直接反式激活或直接反式抑制功能。在一个实施方案中，SEGRAM诱导糖皮质激素受体(GR)的间接束缚反式抑制功能。
[0403] 在一个实施方案中，SEGRAM在施用给需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导与甾体抗炎药(SAID)相关的副作用。在一个实施方案中，治疗有效量的根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物在施用给需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导与甾体抗炎药(SAID)相关的副作用。
[0404] 在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗选自包括以下各项或由以下各项组成的组的炎性病症：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、变应性鼻窦炎、变应性结膜炎、过敏性鼻炎、鼻结膜炎、巨细胞动脉炎(霍顿病)、枯草热、日光皮炎、湿疹、荨麻疹、血管性水肿、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性静脉炎、虫咬皮肤炎、过敏性反应、银屑病、类风湿性关节炎、炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)、牙周炎、慢性炎性疾病、红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征、硬皮病、多发性硬化症、白癜风、扁平苔癣、2型糖尿病、冠心病、高脂血症、绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性以及移植物抗宿主病。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗选自包括以下各项或由以下各项组成的组的炎性病症：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗特应性皮炎。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗接触性皮炎。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗变应性气喘。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗银屑病。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗类风湿性关节炎。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗溃疡性结肠炎。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗变应性结膜炎。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性。
[0405] 在一个实施方案中，分泌的细胞因子和抗体选自包括以下各项或由以下各项组成的组：IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17a、IL-17c、IL-17f、IL-18、IL-21、IL-22、IL-23、IL-33、TSLP、TGFβ、CCL4、TNFα、COX2、MMP13、IgE、IgG1和IgG2a。
[0406] 用途限定的产品
[0407] 本发明还涉及用于在需要其的受试者中预防和/或治疗炎性病症的选择性GR激动调节剂(SEGRAM)。本发明进一步涉及根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物，其用于预防和/或治疗需要其的受试者的炎性病症。
[0408] 本发明进一步涉及一种SEGRAM，其用于在需要其的受试者中预防和/或治疗增强的Th1、Th2和/或Th17活性。本发明进一步涉及根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物，其用于预防和/或治疗需要其的受试者中增强的Th1、Th2和/或Th17活性。
[0409] 本发明进一步涉及一种SEGRAM，其用于在需要其的受试者中预防和/或治疗分泌的细胞因子和抗体的水平升高。本发明进一步涉及根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物，其用于预防和/或治疗需要其的受试者中分泌的细胞因子和抗体的水平升高。
[0410] 在一个实施方案中，SEGRAM是式1的化合物或其衍生物或其药学上可接受的对映体、氘化形式、盐、溶剂化物和/或前药。
[0411] 在一个实施方案中，SEGRAM不诱导或基本上不诱导糖皮质激素受体(GR)的直接反式激活或直接反式抑制功能。在一个实施方案中，SEGRAM诱导糖皮质激素受体(GR)的间接束缚反式抑制功能。
[0412] 在一个实施方案中，SEGRAM在施用给需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导与甾体抗炎药(SAID)相关的副作用。在一个实施方案中，治疗有效量的根据本发明的组合物、药物组合物、药物或药妆组合物在施用给需要其的受试者后不诱导或基本上不诱导与甾体抗炎药(SAID)相关的副作用。
[0413] 在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗Th1、Th2和/或Th17相关的炎性病症。在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗选自包括以下各项或由以下各项组成的组的炎性病症：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、变应性鼻窦炎、变应性结膜炎、过敏性鼻炎、鼻结膜炎、巨细胞动脉炎(霍顿病)、枯草热、日光皮炎、湿疹、荨麻疹、血管性水肿、结节性红斑、多形性红斑、皮肤坏死性静脉炎、虫咬皮肤炎、过敏性反应、银屑病、类风湿性关节炎、炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)、牙周炎、慢性炎性病症、红斑狼疮、皮肌炎、血管炎、干燥综合征、硬皮病、多发性硬化症、白癜风、扁平苔癣、2型糖尿病、冠心病、高脂血症、绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性以及移植物抗宿主病。在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗选自包括以下各项或由以下各项组成的组的炎性病症：特应性皮炎、接触性皮炎、变应性气喘、银屑病、变应性结膜炎、类风湿性关节炎和炎症性肠病(IBD)(包括但不限于克罗恩病、溃疡性结肠炎和结肠炎)。在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗特应性皮炎。在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗接触性皮炎。在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗变应性气喘。在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗银屑病。在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗类风湿性关节炎。在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗溃疡性结肠炎。在一个实施方案中，本发明的用途是用于预防和/或治疗变应性结膜炎。在一个实施方案中，根据本发明的SEGRAM、组合物、药物组合物、药物或药妆组合物用于预防和/或治疗绝经后引起的代谢综合征和脂肪变性。
[0414] 在一个实施方案中，分泌的细胞因子和抗体选自包括以下各项或由以下各项组成的组：IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17a、IL-17c、IL-17f、IL-18、IL-21、IL-22、IL-23、IL-33、TSLP、TGFβ、CCL4、TNFα、COX2、MMP13、IgE、IgG1和IgG2a。
[0415] 附图简述
[0416] 图1的示意图显示糖皮质激素受体(GR)在结合糖皮质激素(GC)后的三种转录调节功能：在左侧，直接反式激活是与GC结合的GR直接与顺式作用的正GRE((+)GRE)结合的结果，从而激活靶基因表达。在中间，直接反式抑制是与GC结合的GR直接结合至顺式作用的负GRE(IR nGRE)的结果，这介导对靶基因的直接抑制。在右侧，间接束缚反式抑制是由与GC结合的GR与促炎转录因子AP-1和/或NF-κB的物理相互作用引起的，从而对抗它们的活性。
[0417] 图2包括用于合成以下任一者的两个方案：(A)[(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮][CpdX]、或(C)[(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮][CpdX-D3]；以及两个色谱图，其显示通过超临界流体色谱法(SFC)方法分离以下任一者的两种对映体：(B)[(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]-异苯并呋喃-1(3H)-酮][CpdX]、或(D)[(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮][CpdX-D3]。
[0418] 图3是一组四个直方图，其显示通过qRT-PCR分析测量的来自以下基因的所示RNA转录物的表达(相对于HPRT管家基因的表达)：(A)GR-反式激活的REDD1基因，其编码mTOR抑制剂；(B)GR直接反式抑制的角蛋白5(K5)基因；(C)GR间接反式抑制的白介素-1β(IL-1β)基因；和(D)GR间接反式抑制的白介素-6(IL-6)基因。在用以下化合物局部处理18小时后从小鼠耳朵提取RNA转录物：(A和B)乙醇[媒介物]、1纳摩尔/cm2的以下之一：地塞米松[Dex]、Mapracorat、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX]、CpdX(eA)、CpdX(eB)、(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX-D3]、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)；(C和D)，如(A和B)中一样，但是还用12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸2
酯[TPA]进行处理(1纳摩尔/cm)。数据表示为至少三次独立试验的平均值±SEM，其中每个处理至少三只小鼠。
[0419] 图4是直方图，其显示通过q-RT-PCR分析测量的基因的RNA转录物的相对RNA表达，所述基因编码：巨噬细胞炎症蛋白-1β[CCL4]、环氧酶-2[COX2]、胶原酶3[MMP13]、白介素-1β[IL1β]、白介素-6[IL6]、肿瘤坏死因子α[TNFα]、胸腺基质淋巴细胞生成素[TSLP]、白介素-22[IL22]和白介素-23[IL23]。Th1、Th2和Th17特异性促炎性白介素被突出显示。通过用以下物质处理(1纳摩尔/cm2)诱导接触性皮炎样炎症后从小鼠耳朵皮肤样品中提取RNA转录物：单独的12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯[TPA]、TPA和地塞米松[TPA+Dex]、TPA和(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[TPA+CpdX]、或TPA和(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-
2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[TPA+CpdX-D3]。数据表示为至少三次独立试验的平均值±SEM，其中每个处理至少三只小鼠。
[0420] 图5是通过q-RT-PCR分析测量的基因的RNA转录物的相对RNA表达的直方图，所述基因编码：白介素-1β[IL1β]、白介素-6[IL6]、环氧酶-2[COX2]和肿瘤坏死因子α[TNFα]。如图4中所述地从小鼠耳朵皮肤样品中提取RNA转录物。地塞米松[Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)-戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX]、以及(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}-异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX-D3]在乙醇(EtOH)(1纳摩尔/cm2)或乳膏(0.05％)中被施用。
数据表示为至少三次独立试验的平均值±SEM，其中每个处理至少三只小鼠。
[0421] 图6是一组八张显微照片，显示图5中处理的小鼠的皮肤切片。小鼠耳朵皮肤切片用苏木精和曙红染色。比例尺表示20μm。
[0422] 图7是直方图，显示通过q-RT-PCR分析测量的基因的RNA转录物的相对RNA表达，所述基因编码：胶原酶3[MMP13]、环氧酶-2[COX2]、白介素-1β[IL1β]、白介素-6[IL6]、白介素-10[IL10]、白介素-13[IL13]和胸腺基质淋巴细胞生成素[TSLP]。Th2特异性促炎性白介素被突出显示。在诱导特应性皮炎样炎症并用以下物质处理(1纳摩尔/cm2)后从小鼠耳朵皮肤样品中提取RNA转录物：单独的钙泊三醇[MC903]、钙泊三醇和地塞米松[MC903+Dex]、钙泊三醇和(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[MC903+CpdX]、钙泊三醇和CpdX(eA)[MC903+CpdX(eA)]、钙泊三醇和CpdX(eB)[MC903+CpdX(eB)]、钙泊三醇和(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[MC903+CpdX-D3]、钙泊三醇和CpdX-D3(eA)[MC903+CpdX-D3(eA)]、或钙泊三醇和CpdX-D3(eB)[MC903+CpdX-D3(eB)]。数据表示为至少三次独立试验的平均值±SEM，其中每个处理至少三只小鼠。
[0423] 图8是一组八张显微照片，示出了按图7处理的小鼠的皮肤切片。小鼠耳朵皮肤切片用苏木精和曙红染色。比例尺表示20μm。
[0424] 图9是一组两个直方图，显示(A)支气管肺泡灌洗[BAL]中的细胞计数和(B)通过q-RT-PCR分析测量的RNA转录物的相对RNA表达，所述RNA转录物在22天诱导哮喘样肺炎症后从小鼠肺样品提取，所述22天诱导包括用卵清蛋白(OVA)致敏18天，然后用OVA激发3天——单独的[OVA]或[OVA]与1mg/kg体重的地塞米松[OVA+Dex]或(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[OVA+CpdX]一起。5
(A)：报告了总细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的数目(x10 )。
(B)：报告了编码白介素-1β[IL1β]、白介素-6[IL6]、白介素-4[IL4]、白介素-5[IL5]、白介素-10[IL10]、白介素-13[IL13]、嗜酸性粒细胞趋化因子[Eotaxin]、巨噬细胞炎症蛋白-1β[CCL4]和肿瘤坏死因子α[TNFα]的基因的相对RNA表达。Th2和Th1特异性促炎性白介素被突出显示。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少六只小鼠。通过学生t检验计算相比OVA处理的统计学显著性；(*)p<0.05；(**)p<0.01；(***)p<0.001。
[0425] 图10是一组三张显微照片，显示如图9所述地用卵清蛋白(OVA)致敏18天然后进行3天激发后卵清蛋白诱导的哮喘样肺炎症。肺切片用苏木精和曙红染色。指示了细支气管周(B)和血管周(V)区域。比例尺表示40μm。
[0426] 图11是一组四个直方图，显示(A-B)支气管肺泡灌洗[BAL]中的细胞计数和(C-D)通过q-RT-PCR分析测量的RNA转录物的相对RNA表达，所述RNA转录物是通过用屋尘螨(HDM)致敏28天然后进行3天HDM激发诱导哮喘样肺炎症后在第32天从小鼠肺样品中提取的，所述激发单独用[HDM]或用[HDM]与1mg/kg体重的地塞米松[HDM+Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[HDM+CpdX]、CpdX(eA)[HDM+CpdX(eA)]、CpdX(eB)[HDM+CpdX(eB)]、(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[HDM+CpdX-D3]、CpdX-D3(eA)[HDM+CpdX-D3(eA)]或CpdX-D3(eB)[HDM+CpdX-D3(eB)]一起。(A-B)：报告了总细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的数目(x105)。(C-D)：报告了基因的相对RNA表达，所述基因编码白介素-1β[IL1β]、白介素-6[IL6]、白介素-4[IL4]、白介素-5[IL5]、白介素-13[IL13]、嗜酸性粒细胞趋化因子[Eotaxin]和巨噬细胞炎症蛋白-1β[CCL4]。Th2特异性促炎性白介素被突出显示。数据表示为至少三次独立试验的平均值±SEM，其中每个处理至少四只小鼠。通过学生t检验计算相比HDM处理的统计学显著性；(*)p<0.05；(**)p<0.01；(***)p<0.001；(ns)不显著。
[0427] 图12是一组八张显微照片，显示如图11所述地用HDM致敏28天然后进行3天激发后的屋尘螨(HDM)诱导的哮喘样肺炎症。肺切片用苏木精和曙红染色。指示了细支气管周(B)和血管周(V)区域。比例尺表示40μm。
[0428] 图13是一组两个直方图，显示小鼠对乙酰甲胆硷(MCh，50mg/mL)的气道高反应性，在所述小鼠中，通过如图11中所述地用HDM致敏28天然后进行3天激发来诱导屋尘螨(HDM)诱导的哮喘样肺炎症。(A)气道阻力，(B)气道弹性阻力。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少8只小鼠。通过双因素方差分析然后进行Bonferroni多重比较计算与HDM独自处理相比的统计学显著性；(**)p<0.01；(***)p<0.001；(****)p<0.0001；(ns)不显著。
[0429] 图14是直方图，显示通过q-RT-PCR分析测量的基因的RNA转录物的相对RNA表达，所述基因编码白介素-17a[IL17a]、白介素-17c[IL17c]、白介素-17f[IL17f]和白介素-22[IL22]。在诱导 诱导的银屑病样炎症9天后从小鼠耳朵皮肤样品提取RNA转录物，所述诱导包括最后5天用以下之一进行局部处理：乙醇[Aldara+媒介物]、1纳摩尔/cm2地塞米松[Aldara+Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[Aldara+CpdX]、(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[Aldara+CpdX-D3]。Th17特异性促炎性白介素被突出显示。数据表示为至少三次独立试验的平均值±SEM，其中每个处理至少三只小鼠。
[0430] 图15是一组五张显微照片，显示在如图14所述地进行5天局部处理后， 产生的银屑病样耳朵皮肤炎症。小鼠耳朵皮肤样品用苏木精和曙红染色。比例尺表示20μm。
[0431] 图16是一组八张显微照片，显示小鼠的后爪，其中诱导了胶原诱导的关节炎样炎症(T0，左图)，并用以下物质进行10天(T10)腹膜内施用(右图)来处理：NaCl 0.9％[媒介物]、1mg/kg体重的地塞米松[Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX]、或(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)-戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX-D3]。
[0432] 图17是一组两幅图，显示在诱导关节炎样炎症(在T0)和腹膜内施用下述物质10天(T10)后小鼠的后爪(在踝关节水平)的厚度(以mm为单位)：(A)NaCl 0.9％[媒介物]、1mg/kg体重的地塞米松[Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX]或(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)-戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX-D3]；和(B)[CpdX-(eA)]、[CpdX(eB)]、[CpdX-D3(eA)]或[CpdX-D3(eB)]。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少六只小鼠。通过学生t检验计算相比Dex处理的统计学显著性。(*)p<0.05；(ns)表示在Dex处理小鼠、CpdX处理小鼠和CpdX-D3处理小鼠之间观察到的差异不显著。
[0433] 图18是直方图，其显示通过q-RT-PCR分析测量的白介素-1β[IL1β]、白介素-6[IL6]、白介素-17a[IL17a]、白介素-17f[IL17f]和肿瘤坏死因子α[TNFα]的RNA转录物的相对RNA表达。在如图17所述的10天处理之前(T0)或之后(T10)从小鼠全后爪提取总RNA转录物。Th17和Th1特异性促炎性白介素被突出显示。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少六只小鼠。
[0434] 图19是一组十张结肠切片的显微照片(在两个放大倍率下，比例尺分别表示50μm或20μm)，其显示与正常结肠切片[无DSS处理]相比，以及与在第11天、第12天和第13天从经过腹膜内施用NaCl 0.9％[DSS+媒介物]、1mg/kg体重的地塞米松[DSS+Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基-苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]-异苯并呋喃-1(3H)-酮[DSS+CpdX]或(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟-苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)-戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[DSS+CpdX-D3]处理的小鼠获得的切片相比，由13天DSS(3％右旋糖酐硫酸钠)处理引起的溃疡性结肠炎。结肠切片最初用苏木精和曙红染色。实心箭：粘膜炎性细胞浸润；虚线箭：粘膜下层炎性细胞浸润；箭头：溃疡。
[0435] 图20是直方图，显示编码白介素-1β[IL1β]、白介素-6[IL6]、白介素-17a[IL17a]、白介素-17f[IL17f]、胸腺基质淋巴细胞生成素[TSLP]和胶原酶3[MMP13]的基因的RNA转录物的比较q-RT-PCR分析。Th17和Th2特异性促炎性白介素被突出显示。RNA转录物提取自小鼠的结肠样品，其中所述小鼠用3％DSS(在饮用水中)口服处理13天，并在第11天、第12天和第13天被腹膜内施用NaCl 0.9％[DSS+媒介物]、1mg/kg体重的地塞米松[DSS+Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]-异苯并呋喃-1(3H)-酮[DSS+CpdX]、CpdX(eA)[DSS+CpdX(eA)]、CpdX(eB)[DSS+CpdX(eB)]、(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[DSS+CpdX-D3]、CpdX-D3(eA)[DSS+CpdX-D3(eA)]或CpdX-D3(eB)[DSS+CpdX-D3(eB)]。数据表示为至少三次独立试验的平均值±SEM，其中每个处理至少四只小鼠。
[0436] 图21是(A)一组九张显微照片，显示在第24天的最后处理后20分钟，在诱导卵清蛋白(OVA)诱导的变应性结膜炎后小鼠眼睛的临床外观，所述诱导包括14天的OVA致敏，然后用NaCl 0.9％(媒介物)或OVA进行10天激发。在第22、23和24天，用NaCl 0.9％[OVA]、0.1％的以下之一：地塞米松[OVA+Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[OVA+CpdX]、CpdX-(eA)[OVA+CpdX(eA)]、CpdX(eB)[OVA+CpdX(eB)]、(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[OVA+CpdX-D3]、CpdX-D3(eA)[OVA+CpdX-D3(eA)]或CpdX-D3(eB)[OVA+CpdX-D3(eB)]共处理OVA激发的小鼠眼睛；和(B)图显示了按照(A)处理的小鼠眼睛的临床评分(结膜充血、眼睑水肿和流泪(tearing))。进行评分，每个参数的评分范围为0到3(0＝不存在、1＝轻度、2＝中度和3＝严重症状)。因此，每只动物的总临床评分为0至9，数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少四只小鼠。
[0437] 图22是一组两个直方图，显示(A)Kindlin-1(包含nGRE的基因)和(B)REDD1(包含+GRE的基因)基因的RNA转录物的相对表达(通过q-RT-PCR分析测量)。将小鼠的背部皮肤剃毛，然后用乙醇[媒介物]、1纳摩尔/cm2的以下之一：地塞米松[Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]-异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX]、[CpdX(eA)]、[CpdX(eB)]、(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}-异苯并呋喃-1-(3H)-酮[CpdX-D3]、[CpdX-D3(eA)]或[CpdX-D3(eB)]局部处理8天。数据表示为至少三次独立试验的平均值±SEM，其中每个处理至少三只小鼠。
[0438] 图23是直方图，显示对小鼠表皮厚度(以μm为单位)的形态测定分析，其中所述小鼠的背部皮肤被剃毛，然后如图22中所述被局部处理8天。数据表示为至少三次独立试验的平均值±SEM，其中每个处理至少三只小鼠。
[0439] 图24是一组十六张显微照片，显示小鼠中的皮肤萎缩，其中所述小鼠的背部皮肤被剃毛，然后如图22中所述被局部处理。左图：皮肤样品用苏木精和曙红染色。右图：核被DAPI染色。比例尺表示20μm。
[0440] 图25是一组通过microCT(微型CT)测量的五个皮质骨参数的十幅图：(A)骨体积/总体积(％)；(B)皮质厚度(mm)；(C)总面积(mm2)；(D)骨面积(mm2)和(E)骨髓面积(mm2)。通过每日皮下注射NaCl 0.9％[媒介物]、1mg/kg体重的地塞米松[Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX]、[CpdX(eA)]、[CpdX(eB)]、(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX-D3]、[CpdX-D3(eA)]或[CpdX-D3(eB)]处理
8周龄小鼠，持续3个月。FX Quantum micro-CT扫描仪(Perkin Elmer)用于在中段胫骨处进行测量。数据对应于平均值(由箭头指示)±SEM，其中每个处理至少六只小鼠。通过单因素方差分析检验，然后进行Dunnett多重比较检验，计算相比媒介物处理的统计学显著性。(*)p<0.05；(**)p<0.01(***)p<0.001；(****)p<0.0001；(ns):不显著。
[0441] 图26是直方图，显示小鼠胫骨中Wnt16基因的RNA转录物的相对表达(通过q-RT-PCR分析测量)。如图25所示处理8周龄的小鼠。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少六只小鼠。
[0442] 图27是一组三幅图，显示如所示地通过每日皮下注射NaCl 0.9％[媒介物]、1mg/kg体重的地塞米松[Dex]、(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX]或(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX-D3]被再处理3个月的8周龄小鼠的(A)体重、(B)脂肪率和(C)瘦肉率相对于基线(处理前)的变化。数据对应于平均值(由箭头指示)±SEM，其中每个处理至少9只小鼠。通过Krustal-Walis检验，然后进行邓恩(Dunn)多重比较检验，计算统计学显著性；(*)p<0.05；(**)p<0.01；(***)p<0.001。
[0443] 图28是一组四个直方图，显示通过每日皮下注射NaCl 0.9％[媒介物]、1mg/kg体重的地塞米松[Dex]或(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX]、[CpdX(eA)]、[CpdX-(eB)]、(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟-甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX-D3]、[CpdX-D3(eA)]或[CpdX-D3(eB)]被再处理3个月的8周龄小鼠的(A)胸腺、(B)脾、(C)肾上腺和(D)肾的重量(以克为单位)。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少9只小鼠。通过学生t检验计算统计学显著性；(*)p<0.05。
[0444] 图29是一组八张显微照片(在两个不同的放大倍率下，比例尺分别表示50μm或25μm)，显示按图27所示处理的8周龄小鼠的肾上腺的切片。在左图中通过双头箭指示肾上腺的皮质层，而在右图中通过长粗体双头箭和小的空双头箭分别指示皮质层的束状带和球状带区域。
[0445] 图30显示按图28所示处理的8周龄小鼠的皮质酮合成。(A)：小鼠肾上腺中类固醇11α-羟化酶(Cyp11a)、类固醇11β-羟化酶(Cyp11b1)、3β-羟化类固醇脱氢酶(HSD3β)和醛固酮合成酶(Cyp11b2)基因的RNA转录物的相对表达(通过q-RT-PCR分析测定)；(B)：在如所示处理的小鼠中上午10点和下午6点的血浆皮质酮水平。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少9只小鼠。
[0446] 图31是一组两个直方图，显示如图28所示处理的8周龄小鼠的血糖水平(mg/dL)。(A)：整夜禁食14小时后的血浆血糖水平；(B)：葡萄糖i.p.(腹腔)注射(2mg/kg体重)后2小时腹膜内葡萄糖耐量试验(IPGTT)。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少六只小鼠。
通过学生t检验计算相比媒介物处理的统计学显著性；(*)p<0.05；(**)p<0.01。
[0447] 图32(A)是直方图，显示如图28所示处理的8周龄小鼠的血液胰岛素水平(μg/L)。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少9只小鼠。(B)：腹膜内注射0.75U胰岛素/kg体重后1小时腹膜内胰岛素耐量试验(IPITT)。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少六只小鼠。通过学生t检验计算相比媒介物处理的统计学显著性，*p<0.01。(C)：针对在丝氨酸
318处磷酸化的磷酸-胰岛素受体底物-1(p-IRS1 S318)、泛-胰岛素(pan-insulin)受体底物-1(IRS，总的)、在丝氨酸473处磷酸化的磷酸-蛋白激酶B(p-AKT S473)和泛-蛋白激酶B(AKT，总的)蛋白，对小鼠肝样品的蛋白质印迹分析。
[0448] 图33是一组十六张显微照片(在两个放大倍率下)，显示在如图28所示处理的8周龄小鼠的肝中的选择性脂质沉积(通过冷冻肝切片的5％红油染色显示)。
[0449] 图34是一组两个直方图，显示小鼠肝中脂肪酸合酶(FASN)和硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD1)的转录物的相对RNA表达(q-RT-PCR分析)。如图28所示处理8周龄小鼠。数据对应于平均值±SEM，其中每个处理至少9只小鼠。通过学生t检验计算统计学显著性；(**)p<0.01；(***)p<0.001。
[0450] 图35是一组两个直方图，显示按照图28所示处理的8周龄小鼠的血液中总胆固醇水平(mmol/L)和胆汁酸水平(μmol/L)。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少9只小鼠。
[0451] 实施例
[0452] 通过以下实施例进一步阐释本发明。
[0453] 实施例1：CpdX和CpdX-D3的合成及其对映体的分离
[0454] “外消旋”CpdX合成及其对映体CpdX(eA)和CpdX(eB)的分离
[0455] 被称为化合物CpdX{(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮}的外消旋混合物按照图2A所概述地合成，达到99.5％纯度，其识别通过LCMS(MS+1＝442.1)、HPLC、HNMR和FNMR得到确认。
[0456] 然后使300mg CpdX的外消旋混合物运行通过制备型超临界流体色谱法(SFC)AD柱(250mm*30mm*5μm；流动相：Neu-MeOH；B％:20％-20％，2.3分钟)。
[0457] 然后，然后将收集到的对应于第一洗脱峰的馏分(CpdX峰1，图2B)在30℃在减压下浓缩、冻干并通过Phenomenex Synergi C18柱色谱法[150mm*25mm*10μm；流动相：水(0.1％TFA)-ACN；B％:50％-80％，10分钟]进一步纯化。将收集到的馏分在30℃在减压下浓缩并冻干为白色固体(97.77mg)，其识别通过LCMS(MS+1＝442.1)和SFC(滞留时间(RT)＝1.084分钟)得到确认，并被命名为“CpdX(eA)”对映体(97.6％纯度)(表1)。
[0458] 类似地，将收集到的对应于第二洗脱峰的馏分(CpdX峰2，图2B)在30℃在减压下浓缩、冻干并通过Phenomenex Synergi C18柱色谱法[150mm*25mm*10μm)；流动相：水(0.1％TFA)-ACN；B％:51％-81％，12分钟]进一步纯化。将收集到的馏分在30℃在减压下浓缩并冻干为白色固体(101.72mg)，其识别通过LCMS(MS+1＝442.1)和SFC(RT＝1.147分钟)得到确认，并被命名为“CpdX(eB)”对映体，具有98％纯度(表1)。
[0459] 进一步的分析将确定两种对映体CpdX(eA)和CpdX(eB)中的哪一种分别对应于R和S形式。
[0460] 表1
[0461] 峰 滞留时间(分钟) 高度 高度％ USP宽度 面积 面积％峰1 1.084 340022 50.432 0.052 619587 49.528
峰2 1.147 334193 49.568 0.052 631403 50.472
[0462] “外消旋”CpdX-D3的合成及其对映体CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)的分离
[0463] 对应于氘化化合物{(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮}的、被称为氘化化合物CpdX-D3的外消旋混合物按照图2C合成，其具有99.3％纯度和98.83％氘含量，并且其识别通过LCMS(MS+1＝445)、HPLC、HNMR和FNMR得到确认。
[0464] 然后使84.4mg的CpdX-D3运行通过制备型超临界流体色谱法(SFC)DAICEL CHIRALPAK AD-H柱(250mm*30mm*5μm；流动相：0.1％NH3H2O-MEOH；B％:20％-20％，2.3分钟)。
[0465] 将收集到的对应于第一洗脱峰的馏分(CpdX-D3峰1)在30℃在减压下浓缩，并将其冻干为白色固体(32.41mg)，其识别通过LCMS(MS+1＝445)和SFC(RT＝1.082分钟)得到确认，并被命名为对映体“CpdX-D3(eA)”，具有98.7％纯度。
[0466] 将收集到的对应于第二洗脱峰的馏分(CpdX-D3峰2)在30℃在减压下浓缩，并将其冻干为白色固体(31.06mg)，其识别通过LCMS(MS+1＝445)和SFC(RT＝1.149分钟)得到确认，并被命名为“CpdX-D3(eB)”对映体，具有99.1％纯度(图2D)。
[0467] 进一步的分析将确定两种对映体CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)中的哪一种分别对应于R和S形式。
[0468] 实施例2：与Mapracorat/ZK245186不同，CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)是真正的非甾体选择性GR激动调节剂(SEGRAM)(见图3)[0469] 材料和方法
[0470] 将Balb/C小鼠的耳朵用1纳摩尔/cm2的以下之一过夜处理18小时：
[0471] -乙醇[媒介物]、
[0472] -地塞米松[Dex]、
[0473] -Mapracorat、
[0474] -(R/S)-5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX]、
[0475] -5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)-戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮对映体A[CpdX(eA)]、
[0476] -5-[4-(5-氟-2-甲氧基苯基)-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)-戊基氨基]异苯并呋喃-1(3H)-酮对映体B[CpdX(eB)]、
[0477] -(R/S)-5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮[CpdX-D3]、
[0478] -5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮对映体A[CpdX-D3(eA)]、或
[0479] -5-{4-[2-(甲氧基-D3)-5-氟苯基]-2-羟基-4-甲基-2-(三氟甲基)戊基氨基}异苯并呋喃-1(3H)-酮对映体B[CpdX-D3(eB)]。
[0480] 然后从小鼠耳朵中提取RNA转录物，并通过q-RT-PCR分析4个基因的转录物：
[0481] (i)mTOR抑制剂REDD1的直接GR反式激活基因；
[0482] (ii)角蛋白5(K5)的GR直接反式抑制基因；和
[0483] (iii)白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的GR间接“束缚”反式抑制基因，其均在12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)的存在下被激活。
[0484] 结果
[0485] 用Dex或Mapracorat处理后，体内转录分析表明，与Dex一样，Mapracorat诱导所有三种GR功能(直接反式激活、直接反式抑制和间接束缚反式抑制，在图1中总结)，具有对REDD1基因相似的反式激活(图3A)、对K5基因相似的直接反式抑制(图3B)和对IL-1β(图3C)和IL-6(图3D)基因相似的间接反式抑制。
[0486] 相反，在体内施用CpdX后，与对照(媒介物)相比，GR选择性地表现出间接束缚反式抑制活性，其中REDD1和K5基因的相对RNA表达水平不变。在施用CpdX(eA)或CpdX(eB)或施用其氘化对应物CpdX-D3、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)后也获得了相似的结果。
[0487] 结论
[0488] Mapracorat不是非甾体选择性GR激动调节剂(SEGRAM)，表明Mapracorat可表现出当前在Dex治疗时遇到的副作用类似的副作用，即使是在较小的程度上。
[0489] 与之形成鲜明对比的是，CpdX以及它的两个对映体CpdX(eA)和CpdX(eB)选择性地表现出对GR的间接束缚反式抑制活性，正如对真正的SEGRAM所预期的那样。最有趣的是，氘化的CpdX(CpdX-D3)及其两个对映体[CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)]表现出与其CpdX对应物相同的选择性和抗炎特性。
[0490] 实施例3：CpdX和CpdX-D3在降低TPA诱导的刺激性接触性皮炎样Th1/Th2/Th17炎症方面与地塞米松(Dex)一样有效(见图4)
[0491] 材料和方法
[0492] 用TPA局部处理Balb/C小鼠耳朵以诱导“刺激性接触性皮炎样炎症”。
[0493] 用TPA处理小鼠4天，然后用媒介物、单独的TPA、TPA和Dex、TPA和CpdX或TPA和CpdX-D3再处理5天(直到第9天)。
[0494] 在第10天，从小鼠耳朵皮肤样品中提取RNA转录物，并通过q-RT-PCR分析CCL4、COX2、MMP13、IL-1β、IL-6、TNF-α、TSLP、IL-22和IL-23的转录物。收获耳朵皮肤，并进行组织学(用H&E染色)和免疫组化(用抗TSLP抗体)分析。
[0495] 结果
[0496] 通过用Dex、CpdX或CpdX-D3处理显著降低了TPA诱导的皮肤炎症。
[0497] 使用来自这些小鼠的耳朵提取物进行的转录物分析表明，CpdX和CpdX-D3与Dex一样有效地抑制了TPA诱导的促炎基因的转录(图4)。
[0498] 小鼠耳朵皮肤的组织学分析表明，与对照相比，通过用Dex、CpdX或CpdX-D3处理，TPA诱导的耳朵皮肤炎症得到了显著降低(数据未显示)。
[0499] 使用TSLP特异性抗体进行的免疫化学分析显示，通过Dex、CpdX或CpdX-D3处理，TPA处理的小鼠表皮中TSLP的表达同样明显降低(数据未显示)。
[0500] 结论
[0501] 总而言之，这些结果表明，CpdX和CpdX-D3与Dex一样有效地抑制诱导的皮肤炎症，表明它们两者均可用于治疗皮肤炎症，特别是用于Th1/Th2/Th17相关的炎性病症(例如接触性皮炎)的治疗中。
[0502] 实施例4：局部施用在乳膏配制剂或乙醇(EtOH)中的Dex、CpdX或CpdX-D3导致相似的抗炎活性(见图5和6)
[0503] 材料和方法
[0504] 首先用TPA对Balb/C小鼠耳朵局部处理3天，然后在乙醇(1纳摩尔/cm2)或乳膏(0.05％w/w)中不存在或存在Dex、CpdX或CpdX-D3的情况下进行三天的共处理，所述乳膏包括凡士林、液体石蜡、 1000NI(BASF)、没食子酸丙酯、依地酸钠、山梨酸和纯净水。
[0505] 从小鼠耳朵皮肤样品中提取RNA转录物，并通过q-RT-PCR分析IL-1β、IL-6、COX2和TNF-α的转录物。收获耳朵皮肤，并进行组织学分析(用H&E染色)。
[0506] 结果
[0507] 耳朵提取物的转录物分析显示，以乙醇或乳膏配制剂施用的Dex、CpdX或CpdX-D3对促炎基因具有类似的抑制作用(图5)。小鼠耳朵皮肤的组织学分析证实了类似的抗炎作用(图6)。
[0508] 结论
[0509] 以乙醇或乳膏配制剂施用的CpdX以及CpdX-D3在治疗皮肤炎症方面具有相同的抗炎功效。
[0510] 实施例5：CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)与地塞米松(Dex)在降低卡泊三醇(MC 903)诱导的特应性皮炎样Th2炎症方面一样有效(见图7和8)
[0511] 材料和方法
[0512] 为了研究CpdX的体内抗炎活性，用钙泊三醇(MC 903，一种维生素D3类似物)对Balb/C小鼠耳朵进行局部处理，以诱导特应性皮炎(AD)样炎症(Li等人,2006.Proc Natl Acad Sci U S A.103(31):11736-41)。
[0513] 用MC 903处理小鼠14天，然后用单独的MC 903(对照)、MC 903和Dex、MC 903和CpdX、MC 903和CpdX(eA)、MC 903和CpdX(eB)、MC 903和CpdX-D3、MC 903和CpdX-D3(eA)以及MC 903和CpdX-D3(eB)处理另外8天(直到第22天)。
[0514] 在第23天，从小鼠耳朵皮肤样品中提取RNA转录物，并通过q-RT-PCR分析7种细胞因子(MMP13、COX2、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-13和TSLP)的转录物。收获耳朵皮肤，并进行组织学(用H&E染色)和免疫组化(用抗TSLP抗体)分析。
[0515] 结果
[0516] 通过用Dex、CpdX或CpdX-D3进行处理显著减少了MC 903诱导的皮肤炎症。
[0517] 对这些小鼠的耳朵提取物进行的RNA转录物分析表明，CpdX和CpdX-D3与Dex一样有效地抑制了MC 903诱导的多种促炎基因(MMP13、COX2、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-13和TSLP)，包括Th2炎症的基因(IL-10、IL-13和TSLP)，的转录(图7)。
[0518] 小鼠耳朵皮肤的组织学分析表明，与对照相比，通过用Dex、CpdX或CpdX-D3处理，MC 903诱导的耳朵皮肤炎症得以减轻(图8)。
[0519] 使用TSLP特异性抗体进行的免疫组织化学分析显示，Dex、CpdX或CpdX-D3类似地显著降低了MC 903处理的小鼠表皮中TSLP淋巴因子的表达(数据未显示)。
[0520] 对于用CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)进行的处理，也观察到了相似的结果(图7和8)。
[0521] 结论
[0522] 总而言之，这些结果表明，局部施用CpdX、其氘化形式CpdX-D3或任何其对映体[CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)]与Dex一样有效地减少皮肤炎症，说明它们都可用于治疗皮肤炎症，特别是用于治疗Th2相关的炎性病症，例如特应性皮炎。
[0523] 实施例6：CpdX、CpdX(eA)、CpdX-D3和CpdX-D3(eA)，而不是CpdX(eB)也不是CpdX-D3(eB)，在减少哮喘样肺过敏性Th2炎症方面与地塞米松(Dex)一样有效(见图9至13)[0524] 材料和方法
[0525] 糖皮质激素已经(Pearlman等人,1997.Ann Allergy Asthma Immunol.78(4):356-62)并且一直广泛用于哮喘治疗中。为了研究体内可能的CpdX抗炎活性，用卵清蛋白(OVA)或屋尘螨(HDM)将小鼠致敏并激发，以诱发哮喘样过敏性肺炎症。
[0526] 卵清蛋白致敏和激发
[0527] 在第0天、第7天和第14天，用50μg OVA和明矾或单独用明矾经腹膜内使小鼠致敏。然后将小鼠分为三组，并在第19天、第20天和第21天用10μg OVA经鼻内(i.n.)激发小鼠。第一和第二组分别经鼻内接受0.5mg/kg体重的Dex或CpdX，而第三组用作对照。
[0528] 在第22天，通过检查支气管肺泡灌洗液(BAL)评估每只小鼠的肺过敏性炎症。计数总的BAL细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞。从肺样品中提取RNA转录物，并通过q-RT-PCR分析IL-1β、IL-6、IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、Eotaxin、CCL4和TNFα的RNA转录物。还对肺组织进行组织学(用H&E染色)和免疫组织化学(用嗜酸性粒细胞特异性抗体和嗜中性粒细胞特异性抗体)分析。
[0529] 屋尘螨(HDM)致敏和激发
[0530] 从第0天到第4天用1μg HDM经鼻内使小鼠致敏，然后在第14天和第21天进一步用10μg HDM经鼻内致敏。然后将小鼠分为八组，在第29天、第30天和第31天，再次用1μg HDM经鼻内激发每只小鼠。前七个组分别接受0.5mg/kg体重的Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)，而第八组用作对照。
[0531] 在第32天，使用计算机控制的小型动物呼吸机(Flex 系统，SCIREQ Technologies)侵入性地确定气道反应性。用甲苯噻嗪(15mg/kg，i.p.)麻醉小鼠，然后15分钟后腹膜内注射戊巴比妥钠(54mg/kg)。然后将18号金属针插入气管，将每只小鼠与Flex呼吸机连接，并以10mL/kg的潮气，以150次呼吸/分钟的频率，以及呼气终末正压为
2cm H2O，进行准正弦通气，以达到接近自发呼吸的平均肺容量。基线测量后，用盐水气溶胶激发小鼠10秒钟，然后，间隔4.5分钟，用50mg/mL乙酰甲胆硷激发小鼠。气道阻力和弹性阻力分别表示为cmH20.s/mL和cmH2O/mL。
[0532] 通过检查每只受HDM激发的小鼠的支气管肺泡灌洗液(BAL)评估肺过敏性炎症。计数总的BAL细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞。从肺样品中提取RNA转录物。通过q-RT-PCR分析IL-1β、IL-6、IL-4、IL-5、IL-13、Eotaxin、CCL4、IL-10和TNFα的RNA转录物。收获肺组织，并还进行组织学(用H&E染色)和免疫组织化学分析(用嗜酸性粒细胞特异性抗体和嗜中性粒细胞特异性抗体)。
[0533] 结果
[0534] 卵清蛋白致敏和激发
[0535] 用Dex或CpdX处理后，与对照组相比，BAL细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和淋巴细胞的总数均明显减少。巨噬细胞的数量没有变化(图9A)。
[0536] 与这些结果一致，肺样品的转录分析表明，IL-1β、IL-6的表达和Th2促炎基因IL-4、IL-5、IL-10和IL-13的表达、以及嗜酸性粒细胞趋化性趋化因子Eotaxin、CCL4和TNFα的表达，在Dex或CpdX处理后均显著且类似地下降(图9B)。
[0537] 肺石蜡切片的组织学分析表明，Dex或CpdX处理显著减少了细支气管周(B)和血管周(V)炎性细胞浸润(图10)。
[0538] 使用嗜酸性粒细胞特异性抗体和嗜中性粒细胞特异性抗体进行的免疫组织化学染色证实，Dex或CpdX处理均类似地减少了嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞(数据未显示)。
[0539] 屋尘螨(HDM)致敏和激发
[0540] 用Dex、CpdX或CpdX-D3处理后，与对照组相比，BAL细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞的总数明显减少。嗜中性粒细胞和巨噬细胞的数量未见明显变化(图11A和B)。
[0541] 肺样品的RNA转录分析表明，IL-1β、IL-6的表达和Th2促炎基因(IL-4、IL-5、IL-13)的表达、以及嗜酸性粒细胞趋化性趋化因子Eotaxin和CCL4的表达，均被Dex、CpdX或CpdX-D3显著且类似的降低(图11C和D)，而IL-10和TNFα的表达未受影响(数据未显示)。
[0542] 肺石蜡切片的组织学分析表明，Dex、CpdX或CpdX-D3处理均显著减少了细支气管周和血管周炎性细胞浸润(图12)。
[0543] 使用嗜酸性粒细胞特异性抗体进行的免疫组织化学染色证实，嗜酸性粒细胞由于Dex、CpdX或CpdX-D3处理而减少(数据未显示)。然而，使用嗜中性粒细胞特异性抗体未观察到明显的变化(数据未显示)。
[0544] 肺功能测试(通过气道阻力和弹性阻力的侵入性测量分析对乙酰甲胆硷的反应)表明，Dex、CpdX或CpdX-D3施用类似地降低了HDM诱导的气道高反应(AHR)(图13)。
[0545] 令人惊讶的是，用CpdX(eA)或CpdX-D3(eA)，而不是CpdX(eB)也不是CpdX-D3(eB)，进行处理有效地减少了总BAL细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞的数量(图11A和B)、以及减少了促炎基因的表达(图11C和D)。肺石蜡切片的组织学分析显示，CpdX(eA)或CpdX-D3(eA)处理减少了细支气管周和血管周炎性细胞浸润，但CpdX(eB)或CpdX-D3(eB)处理均没有使其减少(图12)。因此，肺功能测试表明，施用CpdX(eA)，而非CpdX(eB)，降低了HDM诱导的气道高反应(AHR)(图13)。
[0546] 结论
[0547] 总而言之，这些结果表明，CpdX和CpdX-D3与Dex一样有效地抑制了过敏原诱导的肺炎症，表明它们用于治疗Th2相关的炎性病症(例如哮喘)的潜在有用性。有趣的是，CpdX(eA)和CpdX-D3(eA)，但不是CpdX(eB)或CpdX-D3(eB)，确实有效地抑制了HDM诱导的肺炎症，表明只有CpdX(eA)或CpdX-D3(eA)是治疗哮喘的活性对映体。
[0548] 实施例7：通过用地塞米松(Dex)、CpdX或CpdX-D3进行局部处理减少Aldara诱导的银屑病样Th17炎症(见图14和15)
[0549] 材料和方法
[0550] 将Balb/C小鼠耳朵用 局部处理，以诱导银屑病样皮肤炎症(Vinter等人,2015.Br J Dermatol.172(2):345-53)。小鼠用 处理9天，包括在最后5天用乙醇
(媒介物)、Dex、CpdX或CpdX-D3进行共局部处理。
[0551] 在第10天，从小鼠耳朵提取RNA转录物，并通过q-RT-PCR分析IL-17a、IL-17c、IL-17f和IL-22转录物。还收获耳朵皮肤样品用于组织学分析(用H&E染色)。
[0552] 结果
[0553] 通过使用Dex、CpdX或CpdX-D3处理，显著减少了 诱导的银屑病样皮肤炎症。有趣的是，对耳朵提取物的RNA转录物分析表明，Th17细胞因子IL-17a、IL-17c、IL-17f和IL-22的诱导表达，而不是IL-23的诱导表达，通过Dex、CpdX或CpdX-D3处理而被类似地降低(图14和未显示的数据)。
[0554] 通过H&E染色进行的组织学分析证实了这些结果，并表明Dex、CpdX或CpdX-D3均可减少 诱导的银屑病样皮肤炎症(图15)。
[0555] 结论
[0556] 这些结果表明，在小鼠中，CpdX或CpdX-D3与Dex一样有效地抑制了Aldara诱导的银屑病样皮肤炎症，这表明CpdX和CpdX-D3在治疗这种Th17相关的炎性皮肤病症方面与Dex一样有效。
[0557] 实施例8：CpdX、CpdX(eA)、CpdX-D3和CpdX-D3(eA)，而不是CpdX(eB)也不是CpdX-D3(eB)，与地塞米松(Dex)在减少胶原诱导的关节炎(CIA)Th17炎症方面一样有效(见图16至18)
[0558] 材料和方法
[0559] 如Inglis等人(2007.Arthritis Res Ther.9(5):R113)和Geboes等人(2009.Arthritis Rheum.60(2):390-5)所述，用胶原处理小鼠以诱发Th17类风湿性关节炎样炎症。
[0560] 在第0天，对雄性小鼠(DBA-1品系)每只小鼠皮下注射100μg胶原。用卡尺定期测量踝关节水平处后爪的厚度。当踝关节厚度达到4mm左右(T0，即在第0天注射胶原后30至50天)时，每天以媒介物(NaCl 0.9％)、Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)(1mg/kg体重，稀释在NaCl 0.9％中)腹膜内注射小鼠，持续10天(T0至T10)，并且每天用卡尺测量踝关节水平处后爪的厚度。在T0和T10天[用媒介物、Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理之前和之后]获取后爪的照片，以评估肿胀的过程。
[0561] 在T0和T10时，从未经胶原处理和经过胶原处理的小鼠的整个后爪中提取RNA转录物。通过q-RT-PCR分析IL-1β、IL-6、IL-17a、IL-17f和TNFα转录物。
[0562] 结果
[0563] 后爪厚度在胶原注射后显示增加，而Dex、CpdX和CpdX-D3处理在10天内导致该厚度迅速减小(图16和17A)。在用CpdX(eA)或CpdX-D3(eA)处理的小鼠中观察到了后爪厚度的类似减少，而与之对比鲜明的是，在用CpdX(eB)或CpdX-D3(eB)处理后未观察到这样的减少(图17B和未示出的数据)。
[0564] 最值得注意的是，通过地塞米松、CpdX、CpdX(eA)、CpdX-D3或CpdX-D3(eA)处理，而不是CpdX(eB)也不是CpdX-D3(eB)处理，在患有CIA的小鼠后爪中表达的促炎基因的RNA转录物受到类似地抑制(图18)。
[0565] 结论
[0566] 这些结果表明，CpdX和CpdX-D3以及它们的对映体CpdX(eA)、CpdX-D3(eA)，而不是它们的CpdX(eB)或CpdX-D3(eB)对映体，在减轻类风湿性关节炎样Th17炎症方面与Dex一样有效。
[0567] 实施例9：在治疗右旋糖酐硫酸钠(DSS)诱发的Th17溃疡性结肠炎方面，CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)与地塞米松(Dex)一样有效(见图19和20)
[0568] 材料和方法
[0569] 为了研究CpdX和CpdX-D3对Th17溃疡性结肠炎的抗炎活性，用饮用水中的3％DSS对Balb/C小鼠进行13天的处理，其中在第11天、第12天和第13天腹膜内施用Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)(1mg/kg体重)或不施用上述化合物。
[0570] 在第14天，从小鼠结肠提取RNA转录物。通过q-RT-PCR分析IL-1β、IL-6、IL-17a、IL-17f、TSLP和MMP13转录物。还收获结肠样品用于组织学分析(用H&E染色)。
[0571] 结果
[0572] 组织学分析(H&E染色的石蜡切片)(图19和未显示的数据)显示，与对照小鼠(无DSS处理)相比，经DSS处理的小鼠结肠明显受损：常规结肠绒毛/隐窝结构在DSS处理的小鼠中是高度混乱的或者不存在。此外，还观察到溃疡(箭头)以及细胞浸润到肠粘膜(实心箭)和粘膜下层(虚线箭)中。最值得注意的是，在用Dex、CpdX、CpdX-D3或它们的两种对映体CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)处理3天的小鼠中，结肠绒毛/隐窝结构几乎恢复，并且粘膜和粘膜下层细胞浸润均明显减少。
[0573] 转录分析显示(图20)，Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)类似地抑制了DSS诱导的溃疡性结肠炎中过表达的促炎基因。
[0574] 结论
[0575] 总而言之，我们的结果表明，CpdX、CpdX-D3及其对映体CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)在治疗Th17相关的炎性病症(如溃疡性结肠炎)方面与Dex一样有效。
[0576] 实施例10：CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)在减轻卵清蛋白(OVA)诱发的变应性结膜炎方面与地塞米松(Dex)一样有效(见图21)
[0577] 材料和方法
[0578] 为了研究CpdX或CpdX-D3对变应性结膜炎的抗炎作用，在第1天和第8天，用50μg OVA和明矾经腹膜内使Balb/C小鼠致敏，然后从第15天至第21天，用在5μL无菌媒介物(0.9％NaCl)中的250μg OVA(被直接滴到结膜囊上)激发。从第22天到第24天，将小鼠分为几组，其被滴注单独的OVA、OVA和0.1％的以下化合物之一：Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)。
[0579] 在第24天最后一次滴注后20分钟，评估小鼠眼睛的临床外观。如Gimenes等人(2015.Experimental Eye Research 134:24-32)所述，对临床症状(结膜充血、眼睑水肿和流泪)进行评分，以评估结膜炎的发生和严重程度。参数的评分范围为0到3(0＝缺失，1＝轻度，2＝中度和3＝严重症状)，每只动物的总临床评分为0到9。数据表示为平均值±SEM，其中每个处理至少四只小鼠。
[0580] 结果
[0581] 在最后一次OVA激发后20分钟，与对照小鼠(媒介物)相比，所有OVA处理小鼠的眼睛均表现出明显的变应性结膜炎的临床症状(图21)。通过Dex处理以及CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理，这些症状已大大减轻(图21)。
[0582] 结论
[0583] 这些结果证明，CpdX、CpdX-D3及其对映体CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)与Dex一样有效地降低了卵清蛋白(OVA)诱导的变应性结膜炎。
[0584] 实施例11：与地塞米松(Dex)形成鲜明对比的是，用CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)进行局部处理没有诱发皮肤表皮萎缩(见图22至24)[0585] 材料和方法
[0586] 皮肤萎缩严重限制了用糖皮质激素进行局部治疗(Schoepe等人,2006.Exp Dermatol.15(6):406-20)。
[0587] 为了研究局部施用CpdX是否与Dex一样会导致皮肤萎缩，将Balb/C小鼠的背部皮肤剃毛。将乙醇(媒介物)、Dex、CpdX或其两种对映体CpdX(eA)或CpdX(eB)之一、以及氘化形式CpdX-D3或其两种对映体CpdX-D3(eA)或CpdX-将D3(eB)之一，局部施用于背部皮肤，持续8天。
[0588] 处理完成后，从背部皮肤样品中提取RNA转录物，并通过q-RT-PCR分析Kindlin-1和REDD1基因的转录物。还对背部皮肤进行了组织学和形态测定分析。
[0589] 结果
[0590] 据报道，Kindlin-1蛋白的缺失导致表皮皮肤萎缩(Ussar等人,2008.PloS Genet.4(12):e1000289)，而与此形成鲜明对比的是，Redd1蛋白的缺失预防GC引起的皮肤萎缩(Britto等人,2014.Am J Physiol Endocrinol Metab.307(11):E983-93；Baida等人,2015.EMBO Mol Med.7(1):42-58)。
[0591] 最有趣的是，由背部皮肤样品的转录分析清楚地表明，通过Dex局部处理大大降低了Kindlin-1基因(其包含nGRE)的转录，但CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理不会降低其转录(图22A)。相反地，REDD1基因(其包含+GRE)的转录通过Dex被显著增加，但不能通过CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理得到增加(图22B)。
[0592] 与RNA转录物分析一致，形态测定分析显示，在8天的Dex处理后，表皮厚度减少了约65％。相反，通过CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理，表皮厚度并未显著降低(图23)。这些数据与组织学分析完全一致，表明与CpdX或其氘化形式CpdX-D3或其任何对映体形成鲜明对比的是，Dex的应用严重诱导了皮肤萎缩(图24)。
[0593] 结论
[0594] 我们的结果清楚地表明，与Dex局部处理形成鲜明对比的是，使用CpdX或其氘化形式CpdX-D3或其任何对映体[CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)]进行局部处理不会导致表皮皮肤萎缩，这表明CpdX和CpdX-D3可以安全地用于皮肤治疗。
[0595] 实施例12：与地塞米松(Dex)处理相反，用CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)进行三个月处理没有影响皮质骨形成也没有影响骨小梁形成(见图25和26)
[0596] 材料和方法
[0597] 每天向B6雄性小鼠(8周龄)皮下注射媒介物(NaCl 0.9％)、Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)(1mg/kg体重，在NaCl 0.9％中稀释)，持续三个月。
[0598] 从纳入试验的每只动物解剖一个股骨和同侧胫骨，将其保存在70％乙醇中，用于通过micro-CT进行进一步的骨显微结构分析。FX Quantum micro-CT扫描仪(Perkin Elmer)用于在股骨远端和中段胫骨处进行测量。以全向性体素尺寸为10μm、160μA管电流和90kV管电压进行所有的扫描。
[0599] 使用CTAn软件(Bruker)进行形态学3D测量。在胫骨中段测量的皮质骨参数包括对与总体积相比的骨体积分数、皮质厚度、总面积、骨面积和骨髓面积的度量。从胫骨脊远端下方选择感兴趣的区域，并向胫骨近端延续20个切片。在股骨干骺端远端测量骨小梁参数，包括骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数目和骨小梁间距。从生长板远端下方选择感兴趣的区域(在此处骺板帽(cap)结构完全消失)，并朝向股骨近端延续100个切片。
[0600] 通过单因素方差分析检验，然后进行邓恩多重比较检验，计算与媒介物处理相比的统计学显著性，*p<0.05；**p<0.01；***p＜0.001；****p<0.0001。
[0601] 结果
[0602] 骨质疏松是长期糖皮质激素临床治疗的常见不良副作用(Canalis,2003.Curr Opin Rheumatol.15(4):454-7)。正如预期的那样，在三个月的Dex处理后，在小鼠胫骨皮质骨中观察到了骨质疏松样表型：与总体积相比，骨体积显著减少(图25A)；皮质厚度显著降低(图25B)；以及，骨面积，而不是骨髓面积，也减少(图25D和E)。出乎意料地，但是与先前的报道(Grahnemo等人,2015.J Endocrinol.224(1):97-108)一致，Dex处理增加了小鼠骨小梁的骨体积，原因是骨小梁的数量增加和骨小梁间距的减小，其中骨小梁厚度没有变化(数据未显示)。
[0603] 重要的是，与Dex处理形成鲜明对比的是，CpdX或CpdX-D3及其对映体CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)的这三个月的施用没有影响皮质骨和骨小梁中的骨形成(图25和未显示的数据)。
[0604] 据报道，WNT16基因的表达影响骨矿物质密度、皮质骨厚度、骨强度以及骨质疏松性骨折的风险(Zheng等人、2012.PloS Genet.Jul；8(7):e1002745)。小鼠胫骨样品的转录分析表明，通过Dex处理可将WNT16基因的转录降低50％，但CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理不会(图26)。
[0605] 结论
[0606] 这些结果表明，CpdX、CpdX-D3及其任何对映体[CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)]可安全用于炎性疾病的临床治疗，与Dex不同，它们不影响骨形成。
[0607] 实施例13：与地塞米松(Dex)相反，用CpdX或CpdX-D3进行长期处理不引起体重减轻，也不引起身体组成的改变(见图27)。
[0608] 材料和方法
[0609] 每天向B6雄性小鼠(8周龄)皮下注射媒介物(NaCl 0.9％)、Dex、CpdX或CpdX-D3(1mg/kg体重，稀释在媒介物中)，持续3个月。使用pDEXA仪器确定瘦体重和脂肪质量。通过Krustal-Walis检验，然后进行邓恩多重比较检验来计算统计学显著性，*p<0.05；**p<0.01；***p＜0.001。
[0610] 结果
[0611] 当用媒介物、CpdX或CpdX-D3处理3个月时，8周龄小鼠表现出类似的体重增加(图27A)以及同量的脂肪量(图27B)和瘦肉率(图27C)增加。相反，用Dex处理的小鼠表现出总体重的净损失(图27A)，以及脂肪的不成比例的增加(图27B)和瘦体重的减少(图27C)。
[0612] 结论
[0613] 这些结果表明，与Dex相比，长期施用CpdX或CpdX-D3不会导致体重减轻，也不会导致脂肪量增加和瘦体重的减少。
[0614] 实施例14：在体内施用三个月后，用CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理的小鼠没有表现出在用地塞米松(Dex)处理的小鼠中观察到的不期望的组织特异性“毒性”副作用(见图28)
[0615] 材料和方法
[0616] 每天向B6雄性小鼠(8周龄)皮下注射媒介物(NaCl 0.9％)、Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)(1mg/kg体重，稀释在媒介物中)，持续3个月。经过这些处理后，收获了四个器官(胸腺、脾、肾上腺和肾)并称重。
[0617] 结果
[0618] 已知糖皮质激素诱导剧烈的胸腺细胞凋亡(Cohen,1992.Semin Immunol.4(6):363-9)。因此，在三个月的处理后，在用Dex处理的19只小鼠中的16只中没有发现胸腺。与之形成鲜明对比的是，用CpdX、其氘化形式CpdX-D3或其对映体CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)进行处理，均未导致任何明显的胸腺细胞凋亡(图28A)。
[0619] 在接受Dex处理的小鼠中脾重量减少了50％以上，而在CpdX处理、CpdX(eA)处理、CpdX(eB)处理、CpdX-D3处理、CpdX-D3(eA)处理或CpdX-D3(eB)处理的小鼠中，脾重量则没有减少(图28B)。在用Dex处理的小鼠中也选择性地观察到肾重量的微小但明显的损失(图28D)。
[0620] 有趣的是，通过Dex处理降低了其中发生皮质酮合成的肾上腺的重量，而通过CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理则增加其重量(图28C)。
[0621] 结论
[0622] 在长期体内处理后，与施用合成糖皮质激素地塞米松明显不同的是，施用CpdX或其氘化形式CpdX-D3或其任何对映体[CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)]没有毒性，尤其对胸腺、脾和肾上腺没有毒性。
[0623] 实施例15：长期每天皮下注射地塞米松(Dex)抑制皮质酮合成，与之截然不同，通过用CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)进行类似的处理则增加皮质酮合成(见图29和30)
[0624] 材料和方法
[0625] 每天向B6雄性小鼠(8周龄)皮下注射媒介物(NaCl 0.9％)、Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)(1mg/kg体重，稀释在媒介物中)，持续三个月。
[0626] 经过该长期处理后，在上午10点和下午6点通过眶后穿刺将血液收集在肝素锂涂布的小瓶中，测定皮质酮的血浆水平。收获肾上腺并称重。提取RNA转录物，并通过q-RT-PCR分析Cyp11a、Cyp11b1、Cyp11b2和HSD3β基因的转录物。还对肾上腺进行了组织学分析。
[0627] 结果
[0628] 皮质酮是在肾上腺皮质层的束状带区合成的。在3个月的Dex处理后，肾上腺皮质层(见左图的双头箭)，特别是束状带区(见右图的粗双头箭)明显减少了(图29)，而通过施用CpdX或其氘化形式CpdX-D3或其对映体CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)，它们则显著增加(图29和未显示的数据)。
[0629] 小鼠肾上腺样品的转录分析表明，参与皮质酮合成途径的Cyp11a、Cyp11b1和HSD3β基因的转录物受到Dex处理的抑制，但通过CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理，其被增加(图30A)。
[0630] 与对照小鼠(媒介物)相比，Dex处理的小鼠在上午10点和下午6点都表现出低得多的皮质酮水平，而与之形成鲜明对比的是，CpdX处理、CpdX(eA)处理、CpdX(eB)处理、CpdX-D3处理、CpdX-D3(eA)处理和CpdX-D3(eB)处理的小鼠在上午10点显示出高得多的皮质酮水平(图30B)。
[0631] 有趣的是，由小鼠肾上腺样品的转录分析还显示，Dex处理抑制参与醛固酮合成途径的Cyp11b2基因的转录物，但CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理则不会抑制其转录物(图30A)。与该结果一致的是，组织学分析显示，通过Dex处理显著减少了产生醛固酮的球状带区(皮质层的最外侧区域，请见图29右图中的小的空心双头箭)，但CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理则没有使其减少(图29和未显示的数据)。
[0632] 结论
[0633] 最有趣的是，这些数据表明，CpdX及其氘化形式CpdX-D3[及其任何对映体CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)和CpdX-D3(eB)]通过抑制促炎基因而产生的有益抗炎作用，是由于下述原因产生的：(i)CpdX或CpdX-D3与GR的直接结合，从而激活其束缚间接反式抑制功能；以及(ii)由于CpdX或CpdX-D3引起的血液皮质酮水平升高，尤其是在静息(rest)期间，进一步激活了这种间接反式抑制功能。
[0634] 实施例16：与施用地塞米松(Dex)三个月明显不同，三个月体内施用CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)没有诱发高血糖(见图31)[0635] 材料和方法
[0636] 在长期施用糖皮质激素后，高血糖是常见的不良副作用(Clore&Thurby-Hay,2009.Endocr Pract.15(5):469-74)。
[0637] 每天向B6雄性小鼠(8周龄)皮下注射媒介物(NaCl 0.9％)、Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)(1mg/kg体重，稀释在媒介物中)，持续三个月。小鼠被过夜禁食。在葡萄糖腹腔注射(2mg/kg体重)之前(T0)和之后两个小时(T120)期间，测量小鼠血糖浓度。
[0638] 结果
[0639] 三个月的处理后，接受Dex处理的小鼠的血糖水平明显高于用以下之一处理的小鼠：盐水(媒介物)、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)(图31A)。
[0640] 腹膜内葡萄糖耐量试验(IPGTT)显示，注射葡萄糖后，在接受Dex处理的小鼠中，在两个小时期间内观察到明显较高的血糖水平，而在对照、CpdX处理、CpdX(eA)处理、CpdX(eB)处理、CpdX-D3处理、CpdX-D3(eA)处理或CpdX-D3(eB)处理的小鼠中，这些水平之间没有明显差异(图31B)。
[0641] 结论
[0642] 以上结果表明，与Dex相比，用CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理不会显著影响对血糖水平的控制。
[0643] 实施例17：与施用地塞米松(Dex)不同，CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)的三个月体内施用，不诱导胰岛素抗性(见图31和32)
[0644] 材料和方法
[0645] 众所周知，人类长期暴露于糖皮质激素(GC)会导致全身胰岛素抗性(Geer等人,2014.Endocrinol Metab Clin North Am.43(1):75-102)。
[0646] 每天向B6雄性小鼠(8周龄)皮下注射媒介物(NaCl 0.9％)、Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)(1mg/kg体重，稀释在媒介物中)，持续三个月。三个月后，在上午10点通过眶后穿刺将血液收集在肝素锂涂布的小瓶中，并测定胰岛素的血浆水平。
[0647] 对于腹膜内胰岛素耐量试验(IPITT)，小鼠在测试前禁食6小时。在胰岛素腹腔注射(0.75U/kg体重)之前(T0)和之后1小时期间，测量血糖浓度。
[0648] 在该三个月的处理后，收获肝样品并在RIPA缓冲液(20mM Tris pH 8、150mM NaCl、10％甘油、1％NP-40和2mM EDTA)中裂解。来自细胞信号的抗体用于通过蛋白质印迹法评估p-IRS1(S318)、IRS-1、p-AKT(S473)和AKT的相对水平。
[0649] 结果
[0650] 经过3个月的处理后，Dex处理的小鼠的血液胰岛素水平揭示了血胰岛素增多，但用盐水(媒介物)、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)处理的小鼠中则没有(图32A)。由于在接受Dex处理的小鼠中观察到高血糖(图31A)，而IPITT测试显示这些小鼠对胰岛素的反应严重受损(图32B)，因此它们可能显示出胰岛素抗性。与该提议一致的是，由肝提取物进行的蛋白质印迹分析表明，在Dex处理的小鼠中，但不是在媒介物处理、CpdX处理或CpdX-D3处理的小鼠中，磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1 S318)减少了(图32C)。如所预期的，在Dex处理的小鼠中，胰岛素刺激的蛋白激酶B(p-AKT S473)的磷酸化也降低了(图32C)。
[0651] 结论
[0652] 这些结果表明，与地塞米松相反，使用CpdX、其氘化形式CpdX-D3或其任何对映体[CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)]进行处理，不会引起胰岛素抗性。
[0653] 实施例18：与地塞米松(Dex)截然不同，CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)的三个月体内施用没有诱导脂肪肝(见图33至35)
[0654] 材料和方法
[0655] 每天向B6雄性小鼠(8周龄)皮下注射媒介物(NaCl 0.9％)、Dex、CpdX、CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)(1mg/kg体重，稀释在媒介物中)，持续三个月。该处理后，在上午10点通过眶后穿刺将血液收集在肝素锂涂布的小瓶中。测定总胆固醇和胆汁酸的血浆水平。
[0656] 收获肝样品。冷冻切片的5％红油染色显示肝中的脂质沉积。从肝样品中提取RNA转录物，并通过q-RT-PCR分析脂肪酸合酶(FASN)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)基因的转录物。
[0657] 结果
[0658] 在三个月的处理后，接受每天皮下施用Dex的小鼠肝中脂质沉积明显，在用CpdX或CpdX-D3、其对映体或媒介物处理的小鼠中则未观察到这种现象(图33)。因此，在接受Dex处理的小鼠的肝中观察到了在很大程度上参与肝脂肪生成的脂肪酸合酶(FASN)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)的转录物的增加，但与在媒介物处理、CpdX处理、CpdX(eA)处理、CpdX(eB)处理、CpdX-D3处理、CpdX-D3(eA)处理或CpdX-D3(eB)处理的小鼠则没有观察到(图34)。
[0659] 高胆固醇血症是非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)的主要原因(Kim等人,2014.PLoS One.9(6):e97841)。胆固醇在肝中转化为胆汁酸。因此，在表现出脂肪肝疾病的患者中也观察到高水平的胆汁酸(Aranha等人,2008.Eur J Gastroenterol Hepatol.20(6):519-25)。如预期的那样，经Dex处理的小鼠，但不是经过CpdX处理、CpdX(eA)处理、CpdX(eB)处理、CpdX-D3处理、CpdX-D3(eA)处理或CpdX-D3(eB)处理的小鼠，表现出明显的血液胆固醇和胆汁酸水平的升高(图35)。
[0660] 结论
[0661] 与用Dex进行的类似处理形成鲜明对比，用CpdX或其氘化形式CpdX-D3或其任何对映体[CpdX(eA)、CpdX(eB)、CpdX-D3(eA)或CpdX-D3(eB)]进行的三个月的体内处理，不诱发脂肪肝疾病。
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