一种前列腺素E2的高收率分离纯化方法
| 专利类型 | 发明授权 | 法律事件 | 公开; 实质审查; 授权; |
| 专利有效性 | 有效专利 | 当前状态 | 授权 |
| 申请号 | CN202011317658.7 | 申请日 | 2020-11-23 |
| 公开(公告)号 | CN112479962B | 公开(公告)日 | 2022-12-20 |
| 申请人 | 苏州纳微科技股份有限公司; | 申请人类型 | 企业 |
| 发明人 | 王希; 邓杰; 李建文; | 第一发明人 | 王希 |
| 权利人 | 苏州纳微科技股份有限公司 | 权利人类型 | 企业 |
| 当前权利人 | 苏州纳微科技股份有限公司 | 当前权利人类型 | 企业 |
| 省份 | 当前专利权人所在省份：江苏省 | 城市 | 当前专利权人所在城市：江苏省苏州市 |
| 具体地址 | 当前专利权人所在详细地址：江苏省苏州市工业园区百川街2号 | 邮编 | 当前专利权人邮编：215000 |
| 主IPC国际分类 | C07C405/00 | 所有IPC国际分类 | C07C405/00 |
| 专利引用数量 | 0 | 专利被引用数量 | 0 |
| 专利权利要求数量 | 1 | 专利文献类型 | B |
| 专利代理机构 | 苏州华博知识产权代理有限公司 | 专利代理人 | 何蔚; |
| 摘要 | 本 发明 提供了一种高收率分离纯化前列腺素E2的方法，包括以下步骤，将前列腺素粗品进行溶解、过滤；将上述过滤后的溶液上样到装有均粒反相 硅 胶的层析柱中进行层析；采用乙酸 水 溶液和 有机 溶剂 作为流动相对目标产物进行洗脱；分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。本发明采用单分散的UniSil C18或UniSil C8作为固定相，分离方法简单，可规模化生产，回收率高且稳定。 | ||
| 权利要求 | 1.一种前列腺素E2的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括以下步骤：1）将前列腺素E2粗提取物溶解并过滤；2）将上述过滤后的前列腺素E2溶液上样到装有反相硅胶微球的层析柱中进行层析；3）采用酸性水溶液和有机溶剂作为流动相对前列腺素E2溶液进行洗脱，所述酸性水溶液是乙酸水溶液，所述有机溶剂为乙腈；4）分段收集目的峰值的前列腺素E2溶液，对符合要求的组份液进行汇总； |
||
| 说明书全文 | 一种前列腺素E2的高收率分离纯化方法技术领域[0001] 本发明涉及药物纯化领域，特别是一种高收率分离纯化前列腺素E2的方法。 背景技术[0002] 前列腺素E2，也称地诺前列酮，英文名称简写为PGE2，前列腺素E2(PGE2)是一种重要的细胞生长和调节因子，是花生四烯酸环氧合酶代谢产物，为二十碳不饱和脂肪酸。PGE2可引起强烈子宫收缩，影响胎盘血液供应和胎盘功能，而发生流产。收缩子宫平滑肌的机制，可能与前列腺素使子宫平滑肌细胞内游离钙释放增加有关。PGE2不同于催产素，它对各期妊娠子宫均有兴奋作用，且比较温和，其缩宫作用较PGE2α强10～40倍。PGE2对子宫颈有转化及扩张作用，可用于人流手术前扩张宫颈。这可能是由于前列腺素刺激宫颈纤维细胞，是胶原纤维排列改变所致。PGE2可使支气管平滑肌舒张，对下丘脑体温调节中枢有升温作用，用药后体温可升高1～2℃。 [0003] 前列腺素E2英文名称：prostaglandin E2；PGE2；Cerviprost；(Z)‑7‑((1R，2R，3R)‑3‑Hydroxy‑2‑((S，E)‑3‑hydroxyoct‑l‑en‑l‑yl)‑5‑oxocyclopentyl)hept‑5‑enoic acid；ProstaglandinE2；prostin；Prostaglandin E2；Propess；Prepidil；MCH(human，mouse，rat)；Cervidil；prostine2；l‑pge2；Prostenon；Cervidil(R) [0004] 化学结构式如下： [0005] [0006] 目前国内外专利、科研文献等对前列腺素E2的报道多为生产方法及产品应用专利，分离纯化方法鲜有报道。CN111394289A主要是基因工程生产方法，其获得的样品纯度极低，仅2.547％，远远不能达到合格标准。因此有必要对前列腺素E2的分离、纯化和制备做更进一步的研究。 发明内容[0007] 本发明的目的在于提供一种高收率分离纯化前列腺素E2的方法，仅需一步层析纯化即可满足前列腺素E2纯度大于98.5％、收率大于99％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。 [0008] 为达到上述目的，本发明的技术方案如下：一种前列腺素E2的高收率分离纯化方法，包括以下步骤：1)将前列腺素E2粗提取物溶解并过滤；2)将上述过滤后的前列腺素E2溶液上样到装有反相硅胶微球的层析柱中进行层析；3)采用酸性水溶液和有机溶剂作为流动相对前列腺素E2溶液进行梯度洗脱；4)分段收集目的峰值的前列腺素E2溶液，对符合要求的组份液进行汇总； [0009] 所述前列腺素E2的高收率分离纯化方法，洗脱液中前列腺素E2的纯度大于98.5％，收率大于99％。 [0010] 优选的，所述反相硅胶为单分散的、具有孔道结构的微球。 [0011] 优选的，所述反相硅胶微球的型号是UniSil C18或UniSil C8。 [0012] 优选的，所述1)中前列腺素E2粗提取物溶解于酸性溶液中。 [0013] 优选的，所述3)中酸性水溶液为乙酸水溶液。 [0015] 优选的，上样前，对层析柱进行平衡，先用高浓度所述有机溶剂进行再生，后用浓度低于30％的所述有机溶剂进行平衡。所述高浓度指浓度在30％‑70％之间。 [0016] 优选的，所述洗脱过程为，以0.2％的乙酸水溶液为A相，以乙腈为B相，先用乙腈含量占A+B总量10％～30％的流动相冲洗1‑12个柱体积，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总分析测试，再用乙腈含量占A+B总量30‑70％的流动相对层析柱进行再生。 [0017] UniSil C18或UniSil C8是粒径均为10μm，孔径 的高分子微球，该类微球严格控制的粒径大小和孔径结构(如图1)，使其作为色谱填料时具有很好的针对性，用于分离纯化前列腺素E2时有很好的效果。 [0018] 本发明采用有机溶剂和含0.2％醋酸的水溶液作为流动相，仅用6‑12个柱体积就可完成前列腺素E2主峰的洗脱，所用流动相安全、无污染且成本较低，并且使用的流动相量较少，纯化周期比较短。 [0019] 本发明采用单分散的UniSil C18或UniSil C8作为固定相，仅需一步层析即可使前列腺素E2纯度高于98.5％，收率可达99％。 [0021] 图1为实施例1使用的UniSil C18或UniSil C8微球的的扫描电镜照片。 [0022] 图2为实施例1提纯前的前列腺素E2粗品的高效液相色谱分析。 [0023] 图3为实施例1纯化后前列腺素E2的高效液相色谱分析。 具体实施方式[0024] 下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。 [0025] 实施例1 [0026] 取样品，粗品前列腺素E2溶于酸性溶液中，含量为2mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。采用4.6×250mm的色谱柱，UniSilC18或C8微球(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为4.2ml。对层析柱进行柱前预处理，采用0.2％的醋酸水溶液(A相)和乙腈(B相)作为流动相进行梯度洗脱，流速控制在0.7ml/min。 等度洗脱过程为，用含量30％的B相冲洗72分钟，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中前列腺素E2的纯度大于98.5％，收率大于 99％。 [0027] 图2是提纯前的前列腺素E2粗品的高效液相色谱分析，可见有一定的杂质。图3是提纯后的前列腺素E2高效液相色谱分析，可见杂质非常少。 [0028] 实施例2 [0029] 取样品，粗品前列腺素E2溶于酸性水溶液中，含量为2mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。采用DAC50×250mm的色谱柱，UniSilC18或C8微球(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为490.6ml。对层析柱进行柱前预处理，采用0.2％的醋酸水溶液(A相)和乙腈(B相)作为流动相进行梯度洗脱，流速控制在50ml/min。等度洗脱过程为，用含量30％的B相冲洗80分钟，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中前列腺素E2的纯度大于98.5％，收率大于99％。 [0030] 实施例2已经达到中试规模，分离纯化前列腺素E2的纯度和收率依然稳定，表明本发明方法稳定性高，可适用于规模化生产。 [0031] 本发明采用有机溶剂和含0.2％醋酸的水溶液作为流动相，仅用6‑12个柱体积就可完成前列腺素E2主峰的洗脱，所用流动相安全、无污染且成本较低，并且使用的流动相量较少，纯化周期比较短。 [0032] 以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。 |
||
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈