[0001] 本发明属于医药技术领域，更具体地，涉及具有免疫抑制作用的化合物及应用，尤其涉及化合物1‑4的分离制备方法及用途，具体涉及分离纯化过程，结构确证，免疫抑制作用等。

[0002] 自身免疫性疾病(AIDs)是由身体免疫系统对自身成分的免疫反应引起的疾病状态。根据器官特异性分类，AIDs可分为器官特异性自身免疫疾病，如糖尿病、多发性硬化症；其次，非器官特异性AID(系统性或系统性AID)，如系统性红斑狼疮，类风湿性关节炎。由于人们生活环境和生活习惯的变化，AIDs的发病率也在逐年上升。目前，全球约有5％的人口受到AIDs的影响，AIDs往往是慢性和持续的，最终导致残疾。因此，发现具有抑制淋巴T和B细胞增殖活性的多靶向药物在治疗AIDs方面发挥着重要作用。

[0003] 篮状菌(Talaromyces)是发菌科、篮状菌属真菌，主要分布于土壤，植物，海绵和食品中。据报道，该属真菌次生代谢产物类型包括杜克拉青霉素及其衍生物、萜类、生物碱类、甾体类等，而且表现出良好的抗肿瘤、抗真菌、抗炎、神经保护、抑制CDC25B磷酸酶等活性。这不仅为人类医药领域的研究提供了新思路，也为进一步丰富化合物库的化学结构及活性提供新来源。近年来，随着AIDs的患者不断的增加，越来越多的科研团队开始致力于从真菌中寻找结构新颖且对淋巴T和B细胞增殖有良好抑制活性的化合物。因此，从Talaromyces adpressus中筛选具有免疫抑制作用的新的天然产物具有非常重要的意义。

[0004] 本发明的目的是提供具有免疫抑制作用的化合物的来源以及分离纯化方法及其在制备免疫抑制药物中的应用。

[0005] 根据本发明第一方面，提供了一种联苯衍生物类化合物，所述联苯衍生物类化合物的结构式如式1、式2、式3和式4所示：

[0006]

[0007] 优选地，所述联苯衍生物类化合物为保藏编号为CCTCC NO：M20232471的菌种的次生代谢产物。

[0008] 根据本发明另一方面，提供了一种联苯衍生物类化合物在制备免疫抑制药物中的应用，所述联苯衍生物类化合物如式1、式3或式4所示化合物，所述式1、式3和式4所示化合物的结构式分别如下：

[0009]

[0010] 优选地，所述免疫抑制药物为治疗免疫性肝炎的药物。

[0011] 优选地，所述式1、式3或式4所示化合物用于抑制淋巴T细胞和淋巴B细胞增殖。

[0012] 总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，主要具备以下的技术优点：

[0013] (1)从Talaromyces adpressus真菌中发现新颖的联苯衍生物类化合物，化合物的结构类型属于首次从Talaromyces adpressus真菌中发现，在化学结构上具有一定的创新性。

[0014] (2)进一步生物活性评价结果表明，其中化合物对刀豆蛋白A(Con A)诱导的淋巴T和脂多糖(LPS)诱导的淋巴B细胞的增殖有显著的抑制作用。附图说明

[0015] 图1是化合物1‑4的结构图。

[0016] 图2是化合物1，2和4的实测和计算的ECD趋势图。

[0017] 图3是化合物3的实测和计算的ECD趋势图。

[0018] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

[0019] 本发明的联苯衍生物类化合物，其结构式如下；

[0020]

[0021] 化合物1：Talaromycesin D

[0022] 化合物2：Talaromycesin E

[0023]

[0024] 化合物3：Talaromycesin F

[0025]

[0026] 化合物4：Talaromycesin G

[0027] 本发明人通过对真菌(Talaromyces adpressus)的乙醇提取物进行分离纯化，得到4个新化合物。综合运用多种波谱分析方法和其他手段，确定其为联苯衍生物类化合物，具体结构如式1所示。通过对化合物1‑4的免疫抑制活性评价，发现化合物1，3和4对Con A诱导的淋巴T和LPS诱导的淋巴B细胞的增殖有显著的抑制作用。

[0028] 本发明的第二个目的是提供式1中所示化合物在制备免疫抑制药物中的应用。

[0029] 实施例1：化合物1‑4(Talaromycesins D‑G)的制备和结构鉴定

[0030] 如式(1)所示化合物1‑4的制备

[0031] 植物信息

[0032] 本株真菌(Talaromyces adpressus)于2019年5月从采集自海南三亚亚龙湾的土壤中分离，该菌株的序列号为MZ373307。菌种样本已保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20232471，分类命名为：Talaromyces adpressus TJ414‑38，拉丁文学名为：Talaromyces adpressus，保藏该菌种的单位名称为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为：2023年12月6日。

[0033] 提取分离

[0034] Talaromyces adpressus的合适菌丝体接种在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板，静态条件下于28℃培养4天。将琼脂块接种到大米培养基上(240个锥形烧瓶，之前通过高压灭菌进行灭菌，每个含有250g大米和200mL水)。所有烧瓶均于28℃下培养30天。发酵培养后的大米在室温下用95％乙醇(60L)提取10次，并减压浓缩后得到总浸膏(700g)。将所得到的总浸膏悬浮于水中，用乙酸乙酯萃取，减压回收溶剂，最终得到乙酸乙酯部位的总提取物(500g)。乙酸乙酯部位进行硅胶柱层析(100‑200目)，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱(10:1‑1:1)，用TLC检测合并相似的部分，得到4个组分(A‑D)。组分C采用反相硅胶柱层析，以甲醇/水(20:80‑100:0)梯度洗脱，得到10个组分(C1‑C10)。

[0035] 组分C5经凝胶色谱柱以甲醇洗脱，得到4个组分(C5.1‑C5.4)。组分C5.2采用半制备高效液相色谱法(甲醇/水,55/45,2.0mL/min)得到化合物3(6.3mg，保留时间14.0min)。

[0036] 组分C6经凝胶色谱柱以甲醇洗脱，得到6个组分(C6.1‑C6.6)。组分C6.3用硅胶柱层析(200‑300目)以二氯甲烷/甲醇(300:1‑50:1)梯度洗脱，再用半制备型高效液相色谱(甲醇/水,49/51,2.0mL/min)进一步分离得到化合物1(14.1mg，保留时间26.0min)。组分C6.4用硅胶柱层析(200‑300目)以二氯甲烷/甲醇(300:1‑50:1)梯度洗脱得到三个组分(C6.4.1‑C6.4.3)。C6.4.2进一步采用半制备型高效液相色谱(乙腈/水,45/55,2.0mL/min)得到化合物4(11.2mg，保留时间16.0min)。

[0037] 组分C9经凝胶色谱柱以甲醇洗脱，得到5个组分(C9.1‑C9.5)。组分C9.3用硅胶柱层析(200‑300目)以二氯甲烷/甲醇(300:1‑10:1)梯度洗脱，再用半制备型高效液相色谱(乙腈/水,45/55,2.0mL/min)进一步分离得到化合物2(1.8mg，保留时间15.0min)。

[0038] 如式1所示化合物1‑4的结构鉴定

[0039] 对化合物1‑4的高分辨质谱，紫外光谱，红外光谱，旋光，核磁共振，圆二色谱等数据测试，并进行综合分析，从而确定化合物的结构。

[0040] 化合物1：Colorless oil； +3(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)＝205(4.52),257(4.04),301(3.74)nm；ECD(MeOH)λmax(Δε)＝206(+9.27)nm；IR(KBr)νmax 3347,‑1 +1612,1519,1453cm ；HRESIMS[M+Na] m/z 327.1209(calcd for C17H20O5Na,327.1208).Talaromycesin D的绝对构型是通过计算ECD来确定。化合物结构如图1所示，NMR数据如表
1所述，ECD图如图2所示。

[0041] 化合物2：Colorless oil； +4(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)＝201(4.42),249(3.77),290(3.43)nm；ECD(MeOH)λmax(Δε)＝203(+3.70)nm；IR(KBr)νmax＝‑1 +3431,1626,1517,1459cm ；HRESIMS[M+Na] m/z327.1208(calcd for C17H20O5Na,
327.1208).Talaromycesin E的绝对构型是通过与化合物1进行ECD对比来确定。化合物结构如图1所示，NMR数据如表1所述，ECD图如图2所示。

[0042] 化合物3：White amorphous powder； ‑40(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)＝206(4.62),258(4.15),301(3.84)nm；ECD(MeOH)λmax(Δε)＝221(‑7.58)nm；IR(KBr)νmax‑1 +＝3381,1709,1613,1519,1456cm ；HRESIMS[M+Na] m/z 341.0999(calcd for C17H18O6Na,
341.1001).Talaromycesin F的绝对构型是通过计算ECD来确定。化合物结构如图1所示，NMR数据如表1所述，ECD图如图3所示。

[0043] 化合物4：Colorless oil； +26(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)＝200(4.74),261(4.45)nm；ECD(MeOH)λmax(Δε)＝209(+4.94)nm；IR(KBr)νmax＝3389,1612,‑1 +1518,1447cm ；HRESIMS[M+Na] m/z 354.0771(calcd for C17H17NO4SNa,354.0776).Talaromycesin G的绝对构型是通过与化合物1进行ECD对比来确定。化合物结构如图1所示，NMR数据如表1所述，ECD图如图2所示。

[0044] 表1.化合物1‑4的1H和13C NMR数据(δin ppm,J in Hz,CD3OD)

[0045]

[0046] aRecorded at 400MHz.bRecorded at 100MHz.cRecorded at 600MHz.dRecorded at 150MHz.

[0047] 实施例2：本发明中化合物1‑4对Con A诱导的淋巴T和LPS诱导的淋巴B细胞的增殖抑制活性

[0048] 采用CCK‑8法验证化合物1‑4的免疫抑制活性，结果如表2所述。

[0049] 表2.化合物1‑4的免疫抑制活性评价

[0050]

[0051] aCsA was used as positive control

[0052] 实验结论：化合物1，3和4对刀豆蛋白A(Con A)诱导的淋巴T和脂多糖(LPS)诱导的淋巴B细胞的增殖有显著的抑制作用。

[0053] 本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。