一种高负载虾青素的猴头菇蛋白-卵磷脂复合南极磷虾油乳液的制备方法 |
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| 申请号 | CN202311853840.8 | 申请日 | 2023-12-29 | 公开(公告)号 | CN117694550A | 公开(公告)日 | 2024-03-15 |
| 申请人 | 大连工业大学; | 发明人 | 刘玉佳; 刘祥凯; 薛日溧; 詹宏磊; 李成; 王晗; | ||||
| 摘要 | 本 发明 属于活性成分运输技术领域，公开了一种高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的制备方法。利用天然猴头菇蛋白‑卵磷脂复合物作为乳化剂，制备负载虾青素的 水 包油乳液，乳液运载体系解决了虾青素 水溶性 、 稳定性 和 生物 利用度差的问题，实现了虾青素的稳态化输送。制得的乳液能够保护虾青素，解决虾青素溶解性差、易 氧 化、生物可及性差的问题。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的制备方法，其特征是，包括以下步骤： |
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| 说明书全文 | 一种高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的制备方法 技术领域[0001] 本发明属于活性成分运输技术领域，本发明涉及一种高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的制备方法。 背景技术[0002] 虾青素(Astaxanthin,AST)是一种脂溶性类胡萝卜素，颜色为暗红色，在海洋生物及微藻中含量丰富，特别是南极磷虾油和雨生红球藻中含量丰富。虾青素具有抗氧化、提高人体免疫力、抗癌等生物活性，在许多领域具有广泛的应用前景，如作为保健食品、医药、化妆品等。虾青素因为其本身具有的共轭双键具有很强的抗氧化效果，但同时也具有在光照、高温下易降解的特性，另外，南极磷虾油中虾青素脂溶性好，在水溶液中溶解性差，限制了其在许多领域的更深入的应用。南极磷虾油水包油乳液体系是一种有效的脂溶性递送方式，在南极磷虾油生物活性成分的保护、靶向运输方面具有显著优势。但乳液体系的不稳定性在一定程度上影响了实际应用，利用乳化剂稳定水油界面提高乳液稳定性是一种有效的方式，用大分子蛋白作为乳化剂稳定乳液存在乳化性能差、抗氧化能力差的问题。 发明内容[0003] 为了克服现有技术的不足，本发明提供一种高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的制备方法，利用天然猴头菇蛋白‑卵磷脂复合物作为乳化剂，制备负载虾青素的水包油乳液，乳液运载体系解决了虾青素水溶性、稳定性和生物利用度差的问题，实现了虾青素的稳态化输送。制得的乳液能够保护虾青素，解决虾青素溶解性差、易氧化、生物可及性差的问题。 [0004] 本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的： [0005] 一种高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的制备方法，包括以下步骤： [0007] S2:将猴头菇蛋白溶液与卵磷脂溶液混合，磁力搅拌制备猴头菇蛋白与卵磷脂复合物，冻干得到复合物冻干粉； [0008] S3:将步骤S2中得到的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合物干粉溶于去离子水中，超声10min使其溶解得到复合物溶液，向南极磷虾油中加入步骤S1得到的虾青素粉末制备油相，复合物溶液作为水相，将水相与油相以体积比为9:1混合，经均质、超声后获得复合物乳液。 [0009] 进一步的，所述步骤S1具体为：取1g雨生红球藻粉末置于烧杯中，加入20mL去离子水，用细胞破碎仪在500W的条件下对雨生红球藻粉末进行破壁。向破壁处理后含有雨生红球藻的水溶液中加入60mL乙醇，在40℃下磁力搅拌30min，离心取上清，得到虾青素提取液；离心条件设置为：8000rpm，10min。重复上述操作2‑3次。对得到的虾青素提取液在40℃下进行旋蒸，最后进行冷冻干燥得到虾青素粉末。 [0010] 进一步的，所述步骤S2中，猴头菇蛋白提取具体为：将猴头菇粉末以1:20的料液比加入去离子水，利用0.1M NaOH调Ph至10，在6000rpm/min的条件下离心10min取上清，用稀醋酸调Ph至4，在4℃下用80％饱和硫酸铵沉淀上清过夜，在6000rpm/min的条件下离心10min收集沉淀，用PBS溶解并用0.1M NaOH调至中性后进行透析48h，冻干得到猴头菇蛋白。 [0011] 进一步的，所述步骤S2中，猴头菇蛋白溶液制备具体为：从猴头菇中提取得到猴头菇蛋白，溶于PBS使浓度为5mg/ml，离心后取上清得到猴头菇蛋白溶液。 [0012] 进一步的，所述步骤S2中，卵磷脂溶液制备具体为：将大豆卵磷脂溶于PBS缓冲液中，制备得到20mg/ml的卵磷脂水溶液。 [0013] 进一步的，所述步骤S2中，猴头菇蛋白溶液与卵磷脂溶液质量比为1‑2，磁力搅拌两小时后进行透析48h，冻干得到复合物冻干粉。 [0014] 进一步的，所述步骤S3中，步骤S1得到的雨生红球藻源虾青素粉末24mg溶于4mL南极磷虾油中制备含虾青素的油相，使用高速匀浆机在14000rpm下均质6min。 [0015] 进一步的，所述步骤S3中，均质条件为转速13500rpm/min，工作时间3.5min，重复两次；超声使用仪器为超声细胞粉粹机，超声条件为20min，658W，工作4s，停止5s，重复两次。 [0017] 本发明与现有技术相比的有益效果是： [0018] 本发明提供的一种高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的制备方法，目前在虾青素的应用上存在溶解性差、利用率低以及不易储存的问题，限制了虾青素在食品、医药等领域的应用。本发明通过制备由猴头菇蛋白‑磷脂复合乳化剂稳定的南极磷虾油乳液运载体系包埋虾青素，提高了虾青素的水溶性、稳定性和生物利用度。附图说明 [0019] 图1为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液包埋率图。 [0020] 图2为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液粒径图。 [0021] 图3为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液PDI图。 [0022] 图4为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液ζ‑电位图。 [0023] 图5为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的共聚焦图片。 [0024] 图6实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液对ABTS自由基清除能力测定图。 [0025] 图7实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液对DPPH自由基清除能力测定图。 [0026] 图8为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液在60℃储存6天的虾青素保留率图。 [0027] 图9为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液经过胃肠道消化后的粒径变化图。 [0028] 图10为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液经过胃肠道消化后的PDI变化图。 [0029] 图11为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液经过胃肠道消化后的ζ‑电位变化图。 [0030] 图12为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液经过胃肠道消化后的生物可及性图。 具体实施方式[0031] 下面通过具体实施例详述本发明，但不限制本发明的保护范围。如无特殊说明，本发明所采用的实验方法均为常规方法，所用实验器材、材料、试剂等均可从商业途径获得。本发明首先提取雨生红球藻中的虾青素，制备猴头菇蛋白与卵磷脂复合物，将复合物溶解制备水相，将虾青素添加到南极磷虾油中制备油相，通过将水油以9:1的体积比比例混合，均质超声后得到虾青素乳液。 [0032] 实施例1 [0033] 一种高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的制备方法，具体如下： [0034] 取1g雨生红球藻粉末置于烧杯中，加入20mL去离子水，用细胞破碎仪在500W的条件下对雨生红球藻粉末进行破壁。向破壁处理后含有雨生红球藻的水溶液中加入60mL乙醇，在40℃下磁力搅拌30min，离心取上清，离心条件设置为：8000rpm，10min。重复上述操作2‑3次。对得到的虾青素提取液在40℃下进行旋蒸，最后进行冷冻干燥得到虾青素粉末。将猴头菇粉末以1:20的料液比加入去离子水，利用0.1M NaOH调Ph至10，在6000rpm/min的条件下离心10min取上清，用稀醋酸调Ph至4，在4℃下用80％饱和硫酸铵沉淀上清过夜，在 6000rpm/min的条件下离心10min收集沉淀，用PBS溶解并用0.1M NaOH调至中性后进行透析 48h，冻干得到猴头菇蛋白。将猴头菇蛋白溶于PBS，使猴头菇蛋白溶液浓度定量为5mg/ml，将猴头菇蛋白溶液离心后备用；将大豆卵磷脂溶于PBS缓冲液中，制备得到20mg/ml的卵磷脂水溶液，向蛋白水溶液中添加磷脂使质量比为2:1，磁力搅拌两小时后进行透析，冻干得到复合物冻干粉；取复合物冻干粉制备复合溶液，将虾青素粉末(24mg)溶于南极磷虾油中制备含虾青素的油相，使用高速匀浆机在14000rpm下均质6min。复合溶液中添加含有虾青素的南极磷虾油，使最终油相体积分数为10vt％，使用高速匀浆机以13500r/min预均质 7min形成粗乳液，再用超声细胞粉碎机进一步超声处理(20min，658W)获得高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液(HPLA1)。添加叠氮化钠以防止微生物生长。 [0035] 实施例2 [0036] 取1g雨生红球藻粉末置于烧杯中，加入20mL去离子水，用细胞破碎仪在500W的条件下对雨生红球藻粉末进行破壁。向破壁处理后的雨生红球藻粉末中加入60mL乙醇，在40℃下磁力搅拌30min，离心取上清，离心条件设置为：8000rpm，10min。重复上述操作2‑3次。对得到的虾青素提取液在40℃下进行旋蒸，最后进行冷冻干燥得到虾青素粉末。将猴头菇粉末以1:20的料液比加入去离子水，利用0.1M NaOH调Ph至10，在6000rpm/min的条件下离心10min取上清，用稀醋酸调Ph至4，在4℃下用80％饱和硫酸铵沉淀上清过夜，在6000rpm/min的条件下离心10min收集沉淀，用PBS溶解并用0.1M NaOH调至中性后进行透析48h，冻干得到猴头菇蛋白。将猴头菇蛋白溶于PBS，使猴头菇蛋白溶液浓度定量为5mg/ml，将猴头菇蛋白溶液离心后备用；将大豆卵磷脂溶于PBS缓冲液中，制备得到20mg/ml的卵磷脂水溶液，向蛋白水溶液中添加磷脂使质量比为1:1，磁力搅拌两小时后进行透析，冻干得到复合物冻干粉；取复合物冻干粉制备复合溶液，将虾青素粉末(24mg)溶于南极磷虾油中制备含虾青素的油相，使用高速匀浆机在14000rpm下均质6min。向复合溶液中添加含有虾青素的南极磷虾油，使最终油相体积分数为10vt％，使用高速匀浆机以13500r/min预均质7min形成粗乳液，再用超声细胞粉碎机进一步超声处理(20min，658W)获得高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液(HPLA2)。添加叠氮化钠以防止微生物生长。 [0037] 实施例3 [0038] 取1g雨生红球藻粉末置于烧杯中，加入20mL去离子水，用细胞破碎仪在500W的条件下对雨生红球藻粉末进行破壁。向破壁处理后的雨生红球藻粉末中加入60mL乙醇，在40℃下磁力搅拌30min，离心取上清，离心条件设置为：8000rpm，10min。重复上述操作2‑3次。对得到的虾青素提取液在40℃下进行旋蒸，最后进行冷冻干燥得到虾青素粉末。将猴头菇粉末以1:20的料液比加入去离子水，利用0.1M NaOH调Ph至10，在6000rpm/min的条件下离心10min取上清，用稀醋酸调Ph至4，在4℃下用80％饱和硫酸铵沉淀上清过夜，在6000rpm/min的条件下离心10min收集沉淀，用PBS溶解并用0.1M NaOH调至中性后进行透析48h，冻干得到猴头菇蛋白。将猴头菇蛋白溶于PBS，使猴头菇蛋白溶液浓度定量为5mg/ml，将猴头菇蛋白溶液离心后备用；将大豆卵磷脂溶于PBS缓冲液中，制备得到20mg/mL的卵磷脂水溶液，向蛋白水溶液中添加磷脂使质量比为1:2，磁力搅拌两小时后进行透析，冻干得到复合物冻干粉；取复合物冻干粉制备复合溶液，将虾青素粉末(24mg)溶于南极磷虾油中制备含虾青素的油相，使用高速匀浆机在14000rpm下均质6min。向复合溶液中添加含有虾青素的南极磷虾油，使最终油相体积分数为10vt％，使用高速匀浆机以13500r/min预均质7min形成粗乳液，再用超声细胞粉碎机进一步超声处理(20min，658W)获得高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液(HPLA3)。添加叠氮化钠以防止微生物生长。 [0039] 对比例1 [0040] 取1g雨生红球藻粉末置于烧杯中，加入20mL去离子水，用细胞破碎仪在500W的条件下对雨生红球藻粉末进行破壁。向破壁处理后的雨生红球藻粉末中加入60mL乙醇，在40℃下磁力搅拌30min，离心取上清，离心条件设置为：8000rpm，10min。重复上述操作2‑3次。对得到的虾青素提取液在40℃下进行旋蒸，最后进行冷冻干燥得到虾青素粉末。将猴头菇粉末以1:20的料液比加入去离子水，利用0.1M NaOH调Ph至10，在6000rpm/min的条件下离心10min取上清，用稀醋酸调Ph至4，在4℃下用80％饱和硫酸铵沉淀上清过夜，在6000rpm/min的条件下离心10min收集沉淀，用PBS溶解并用0.1M NaOH调至中性后进行透析48h，冻干得到猴头菇蛋白。将猴头菇蛋白溶于PBS，使猴头菇蛋白溶液浓度定量为4mg/mL，将猴头菇蛋白溶液离心后备用，将虾青素粉末(24mg)溶于南极磷虾油中制备含虾青素的油相，使用高速匀浆机在14000rpm下均质6min。向猴头菇蛋白溶液中添加含有虾青素的南极磷虾油，使最终油相体积分数为10vt％，使用高速匀浆机以13500r/min预均质7min形成粗乳液，再用超声细胞粉碎机进一步超声处理(20min，658W)获得高负载虾青素的猴头菇蛋白南极磷虾油乳液(HPA)。添加叠氮化钠以防止微生物生长。 [0041] 对比例2 [0042] 取1g雨生红球藻粉末置于烧杯中，加入20mL去离子水，用细胞破碎仪在500W的条件下对雨生红球藻粉末进行破壁。向破壁处理后的雨生红球藻粉末中加入60mL乙醇，在40℃下磁力搅拌30min，离心取上清，离心条件设置为：8000rpm，10min。重复上述操作2‑3次。对得到的虾青素提取液在40℃下进行旋蒸，最后进行冷冻干燥得到虾青素粉末。将大豆卵磷脂溶于PBS缓冲液中，制备得到4mg/mL的卵磷脂溶液，将虾青素粉末(24mg)溶于南极磷虾油中制备含虾青素的油相，使用高速匀浆机在14000rpm下均质6min。向卵磷脂溶液中添加含有虾青素的南极磷虾油，使最终油相体积分数为10vt％，使用高速匀浆机以13500r/min预均质7min形成粗乳液，再用超声细胞粉碎机进一步超声处理(20min，658W)获得高负载虾青素的卵磷脂南极磷虾油乳液(LA)。添加叠氮化钠以防止微生物生长。 [0043] 实验研究，将实施例1‑实施例3、对比例1‑2制备得到的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液进行理化分析测定。分析测定项目和方法如下所示。 [0044] 虾青素负载量 [0045] 配置二氯甲烷和甲醇体积比为2:1的混合液，向1mL实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液中加入有机溶剂混合液，涡旋混合5min，以10000r/min离心20min，提取得到乳液中的虾青素。将得到的稀释液转移至比色皿中，用紫外分光光度计在480nm处测其吸光度，利用得到的标准曲线计算虾青素含量，乳液包埋率的公式如下： [0046] [0047] 其中，c为乳液中提取得到的虾青素浓度，c0为初始加入乳液中的虾青素浓度。 [0048] 负载虾青素乳液粒径、PDI和ζ‑电位 [0049] 选择激光粒度仪对经超纯水稀释50倍的乳液进行粒径、PDI、Zeta电位的测定。 [0050] 抗氧化活性 [0051] ABTS自由基清除率测定 [0052] 通过将7mM ABTS水溶液与5mM过硫酸钾水溶液1:1等体积混合制得ABTS工作液。用磷酸盐缓冲液将ABTS工作液稀释至吸光值为0.70±0.02，将180μL ABTS稀释液与20μL实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液混合静置，在避光环境下静置6min，在734nm波长下测定吸光度值。ABTS自由基清除率的计算公式如下： [0053] ABTS自由基清除率(％)＝(Am‑A)/Am*100 [0054] 式中，A‑待测样品在734nm处的吸光值；Am‑空白样在734nm处的吸光值。 [0055] DPPH自由基清除率测定 [0056] 首先配置DPPH工作液，用无水乙醇溶解DPPH粉末，得到浓度为0.1mM DPPH乙醇工作液，在避光条件下储存备用。取500μLDPPH乙醇工作液与500μL实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液混合，在避光环境下静置30min，随后进行离心取上清，离心条件为4℃、15000rpm。将上清液在517nm下测定吸光度值。DPPH自由基清除率的计算公式如下： [0057] [0058] 式中，Ax‑待测样品在517nm处的吸光值；A0空白样在517nm处的吸光值；Ax0‑水加样品在734nm处的吸光值。 [0059] 共聚焦显微镜观察 [0060] 取1mL实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液与40μL尼罗河蓝(0.1％，w/v)和尼罗河红(0.1％，w/v)的荧光染料混合物混合，混匀15s后取10μL混合物于载玻片上，用甘油对装片进行固定后于63X油镜下激光激发的488nm和633nm下观察。 [0061] 体外消化 [0062] 模拟胃道消化：称取1g实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液于50mL离心管中，加入3mL胃液，用NaHCO3(1mol/L)调pH至4.0，37℃、350r/min摇床中振荡反应30min。再用HCl(1mol/L)调pH至2.0，37℃、350r/min摇床中振荡反应30min。 [0063] 模拟肠道消化：胃道消化完成后，用NaHCO3(1mol/L)调pH至6.9，加入0.6mL肠液，用氮气冲洗15s，涡旋15s，氮气冲洗15s后密封，在37℃、350r/min摇床中振荡反应2h。 [0064] 胃液：NaCl 3g，KCl 1.06g，CaCl2·2H2O 1.47g，KH2PO40.47 g，MgCl2·6H2O 0.74g，脂肪酶(20000U/g)5.63g，胃蛋白酶(400U/mgprotein)23.46g，水1L。 [0065] 肠液：胰酶(USP级)8g，胆酸钠25g，水1L。 [0066] 分别收集初始、模拟胃液后和模拟肠液后的乳液，使用每个消化阶段相应pH值的超纯水(不含酶)稀释600倍。分析样品的平均粒径、PDI和zeta‑电位。 [0067] 生物可及性 [0068] 待实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液在肠液消化完成后，将消化液在10000r/min条件下离心20min，之后取出中间胶束相提取虾青素。配置二氯甲烷和甲醇体积比为2:1的混合液，向1mL消化液中加入有机溶剂混合液，涡旋混合5min，以10000r/min离心20min，提取胶束中的虾青素，收集透明有机相，使用紫外可见光谱法对AST的浓度进行定量，生物可及性公式如下： [0069] [0070] 式中，cm为胶束中虾青素浓度；c0为乳液中初始添加的虾青素浓度。 [0071] 乳液粒径是表征乳液稳定性的重要指标之一。通常情况下，粒径越小，乳液稳定性越好。图2为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液包埋的虾青素乳液粒径，对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液粒径为181.31nm、358.12nm。实施例3制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液粒径最小，为169.64nm。乳液PDI是指乳液中粒子大小分布指数，通常用于评估乳液的稳定性和均匀性。乳液PDI值越小，表示乳液中粒子大小分布越均匀，稳定性越好。。对比例2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液具有最大的PDI值，为0.309，实施例3的PDI值最小。这表明实施例3制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液具有最好的稳定性。。乳液ζ‑电位是乳液稳定性的另一指标，乳液ζ‑电位的绝对值越大，乳液粒子间的静电排斥力越大，更不宜聚集，乳液稳定性越好。实施例3制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液ζ‑电位具有最小值‑49.98mV，这表明复配物乳液的粒子间具有更大的排斥力，使乳液更加稳定，原因可能在于界面处的复合物具有比纯蛋白、磷脂更大的绝对值电位。 [0072] 由实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液外观如图4所示，图4中可以看出虾青素负载乳液均表现为暗红色。激光共聚焦显微镜(CLSM)可以用来观察乳液微观形态及分布情况。图4中CLSM中油脂被尼罗红染为红色，蛋白被尼罗蓝染为绿色。由图4可以看出红色油滴被显示绿色的蛋白水相包裹，蛋白以及蛋白‑磷脂复合物作为乳化剂具有较好的效果，能够使乳液结构化。这表明制备的虾青素负载乳液具有较好的形态特征、液滴分布均匀。 [0073] 由图1可知实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的包埋率依次为：实施例3＞实施例2＞实施例1＞对比例1＞对比例2。这表明猴头菇与卵磷脂的复合提高了乳液对虾青素的包埋效果，原因可能在于复合物在界面处具有更好的稳定效果。 [0074] 如图6显示了实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液对ABTS自由基的清除活性。其中，对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液对ABTS自由基率为33.85±2.56％、22.88±1.13％，实施例3制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的ABTS自由基清除率具有最大值，为51.40±0.93％。这表明，卵磷脂与猴头菇蛋白的复配对ABTS自由基清除率具有积极的影响。DPPH(1，1‑二苯基‑2‑三硝基苯肼)是一种可稳定存在于有机试剂中的自由基，其清除率反映物质的抗氧化能力。图7为实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液对DPPH自由基的清除活性。实施例3制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的DPPH自由基清除率具有最大值，为74.3±3.28％，结果对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的DPPH自由基清除率，这与图6中ABTS自由基清除率的变化趋势类似。 通过对ABTS、DPPH自由基的清除活性的研究，猴头菇蛋白与卵磷脂的限定条件复合可以提高乳液的抗氧化能力，可以更好的保护包埋于乳液中的虾青素。 [0075] 通过测定在60℃下储存6天的虾青素剩余量，进行研究实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液中虾青素的稳定性。如图8所示观察到初始虾青素保留率随着储存时间的增加而降低。其中，对比例2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液中的虾青素在经过6天储存后，虾青素保留率最低，为24.91％。实施例3制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液在60℃下稳定性最好，储存6天后虾青素仍有58.02％的保留量。表明吸附在界面处的复合物比纯蛋白、磷脂在高温下稳定效果更好，能够保护包埋在油滴中的虾青素，防止虾青素的降解。如图9所示，乳液经胃液消化后，粒径显著增加，原因在于蛋白酶的消化以及较低的pH值破坏了界面处蛋白的稳定性吸附，乳液发生絮凝。实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液粒径在经过胃液消化后，具有不同的增加趋势，对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液粒径由181.31±5.56nm、358.12±9.58nm增长至809.61±9.13nm、1453.79±90.44nm，而由实施例3制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的粒径由169.64±1.72nm增加至809.61±9.93nm、599.72±22.41nm，数据表明复合物在胃道消化过程中的表现要优于纯蛋白与磷脂稳定的乳液，在经过肠道消化后的虾青素负载乳液，粒径、PDI出现下降趋势，这一方面在于肠液的进一步消化使乳液消化为更小的颗粒，另一方面，由ζ‑电位可以看出，乳液在经胃转至肠道后，ζ‑电位由胃阶段的较小的正电位转为肠道阶段绝对值较大的负电位，油滴间的静电斥力使絮凝程度降低。 [0076] 生物可及性是指虾青素经过消化后可被吸收的剩余虾青素含量。由图12可知实施例1、2、3和对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液在经胃、肠模拟消化后，实施例1、2、3制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的虾青素生物可及性要均显著高于对比例1、2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液，对比例1制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液的生物可及性要高于对比例2制备的高负载虾青素的猴头菇蛋白‑卵磷脂复合南极磷虾油乳液。这同消化过程中粒径趋势相反，粒径越大，生物可及性越低。原因可能在于复合物乳液比纯蛋白、磷脂乳液具有更强的稳定性，在胃肠道消化中，稳定的乳液体系可以保护虾青素在胃环境中不被降解。进入肠道后，油脂被进一步消化，虾青素被释放后与游离脂肪酸形成胶束。复合物乳液在肠道中具有较小的粒径，这意味着能够具有更好的消化效果，更多的虾青素进入胶束层，提高了虾青素的生物可及性。 [0077] 以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的全部实施例。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。 |
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