一种含嗜粘蛋白阿克曼氏菌和卷曲乳杆菌的组合物及应用 |
|||||||
| 申请号 | CN202311852490.3 | 申请日 | 2023-12-29 | 公开(公告)号 | CN117982542A | 公开(公告)日 | 2024-05-07 |
| 申请人 | 南京北极光生物科技有限公司; | 发明人 | 褚晓洁; 毕家华; 谢欣雨; 王欣璐; 程晓月; 任学良; | ||||
| 摘要 | 本 发明 公开了一种含嗜粘蛋白阿克曼氏菌和卷曲乳杆菌的组合物及应用。能够恢复肠道、 阴道 菌群，产生过 氧 化氢，进而抑制有害菌增殖，强化粘膜免疫防御机能。 辅助 治疗 炎症 发生和复发。 | ||||||
| 权利要求 | 1.一种组合物，其特征在于：一种组合物，含有嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌。 |
||||||
| 说明书全文 | 一种含嗜粘蛋白阿克曼氏菌和卷曲乳杆菌的组合物及应用技术领域[0001] 本发明涉及一种菌种组合物，特别涉及一种含嗜粘蛋白阿克曼氏菌和卷曲乳杆菌的组合物及应用。 背景技术[0003] 卷曲乳杆菌为革兰氏阳性菌，细长杆，微弯成链出现，无鞭毛，无芽孢，菌落白色，边缘不整齐，片状，中央凸起，化能异养性，兼性厌氧。专利CN201410674502.2报道了一株卷曲乳酸杆菌IMC 79具有较强产生过氧化氢的能力，对金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用；专利CN202211056385.4报道了一种拮抗白色念珠菌的卷曲乳杆菌LCP051及其应用，此卷曲乳杆菌LCP051和/或此卷曲乳杆菌LCP051的代谢产物能够预防和/或治疗白色念珠菌引发的阴道炎。CN114891692A报道了一种改善人体阴道环境的菌株及其应用，为该菌株为Lactobacillus crispatus LC‑17225。 [0004] 但单独的卷曲乳杆菌补充和治疗，作用效果有限，尤其是单独的卷曲乳杆菌的产生过氧化氢的能力有限，还需要进一步的提高。 发明内容[0005] 本发明的目的在于针对现有技术的不足之处，提供一种组合物，含有嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌。 [0006] 进一步的，嗜黏蛋白阿克曼菌后生元具备菌体后生元功能，同时具有益生元功能潜力的嗜粘蛋白阿克曼氏菌菌体制备。 [0007] 进一步的，嗜黏蛋白阿克曼菌后生元为阿克曼菌的灭活菌、裂解菌或含有阿克曼菌死菌体的培养液。 [0008] 进一步的，灭活方式可以为加热、紫外辐照、化学处理；优选为热灭活菌体。所述热灭活菌体可以为在培养结束后，收集菌体后制备加热死菌体，或者也可以不将菌体从培养液中暂时分离，而是将培养液中的菌体制成加热死菌体，然后采集该加热死菌体。优先的阿克曼菌后生元的制备方法为巴氏灭活处理，即得到所述阿克曼菌后生元。嗜黏蛋白阿克曼菌后生元的加热死菌体加热温度通常约为60～100℃，作为加热手段，可以为使用加热器的公知手段。在达到所需温度后，加热时间通常约为5～40分钟。 [0009] 进一步的，所述嗜黏蛋白阿克曼菌后生元为死菌体，或为包含活菌体和死菌体，优选为至少含有死菌体。死菌体和活菌体的组合中，死菌体与活菌体的比例为99:1、95:5、90:10、80:20、75:25、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、1:99。 [0011] 本发明中死菌体的形态可以为糊状形态、悬浊液形态、乳状形态、粉状形态、颗粒形态，优选为粉末形态。 [0012] 卷曲乳杆菌可以选择为卷曲乳酸杆菌可以选择为Lactobacillus crispatus LBV 88(DSM 22566)，Lactobacillus crispatus LBV 10(DSM23744)，Lactobacillus crispatus LBV 61(DSM 23745)，Lactobacillus crispatus LCr86(CGMCC 19758)，Lactobacillus crispatus SP28，Lactobacillus crispatus CP515，Lactobacillus crispatus LCr(LMG P‑31003)。 [0013] 嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元来源的嗜黏蛋白阿克曼氏菌可以选择为ATCC BAA‑835，AKK SNUG‑61027，AKKAM06。 [0014] 嗜黏蛋白阿克曼菌后生元与卷曲乳杆菌用量比例为0.25mg:100亿卷曲乳杆菌至1000mg:100亿卷曲乳杆菌；进一步的，0.5mg:100亿卷曲乳杆菌、1mg:100亿卷曲乳杆菌、 5mg:100亿卷曲乳杆菌、10mg:100亿卷曲乳杆菌、50mg:100亿卷曲乳杆菌、100mg:100亿卷曲乳杆菌、500mg:100亿卷曲乳杆菌、1000mg:100亿卷曲乳杆菌。 [0015] 或者嗜黏蛋白阿克曼菌后生元与卷曲乳杆菌用量比例为1亿：100亿至1000亿：100亿。进一步的，2亿：100亿、10亿：100亿、50亿：100亿、100亿：100亿、200亿：100亿、500亿：100亿。嗜黏蛋白阿克曼菌后生元的死菌体的数量为其活菌的数量灭活后的死菌体数量。因死菌体数量的检测手段的有限性，本发明中，死菌体的菌体数量可由对生产该死菌体的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。 [0016] 进一步的，组合物中包含或者不包含填充剂/载体，组合物中卷曲乳杆菌的用量为0.5亿/g‑500亿/g，进一步1亿/g‑100亿/g，进一步10亿/g‑50亿/g，进一步20亿/g‑30亿/g。 [0017] 进一步的，组合物中包括活菌与后生元的总菌体的用量为0.5亿/g‑500亿/g，进一步1亿/g‑100亿/g，进一步10亿/g‑80亿/g，进一步20亿/g‑50亿/g。 [0019] 本发明中所述的组合物的产品可以为各种剂型，包括也不局限于药品常见剂型，如粉剂、栓剂、凝胶、口服液、硬胶囊、软胶囊，也可以为保健食品和膳食补充剂的常见剂型，如饮料、固体饮料、软饮料、硬胶囊、软胶囊、多层硬胶囊、溶豆、冻干粉、奶豆、巧克力、夹心软糖、夹心巧克力、茶饮料、冷萃咖啡，还可以为日化抑菌洗剂等常见剂型，如抑菌液(抑制有害菌)、抑菌凝胶(抑制有害菌)、栓剂、凝胶等。 [0020] 益生菌的增殖有利于抑制有害菌的增殖，有利于肠道、阴道和尿道的菌群的平衡。也可用于人体其它部位的致病性细菌的感染。 [0021] 本发明中所述的治疗和/或改善肠道、阴道、尿道健康的产品的灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌可以微胶囊处理或不进行微胶囊处理，优选的，灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元不进行微胶囊化处理，而卷曲乳杆菌进行微胶囊化处理。 [0022] 本发明中所述的治疗和/或改善肠道、阴道、尿道健康的产品的各种剂型可以按照药品、保健食品、普通食品、日化、饲料、添加剂等的常规生产制备方法制备。将该组分中的一种或者多种载体混合，然后制成所需的剂型。 [0023] 在一个实施方式中，本发明中所述的治疗女性阴道炎症的产品制备方法是：可选择的将需要控制水分指标的物料制粒或不制粒后至生产所需水分指标，将嗜黏蛋白阿克曼菌后生元与卷曲乳杆菌混合，可选择的加入物料所需流动剂后进行胶囊灌装，可选择的将灌装好的胶囊挑选出不合格的后进行包衣(肠溶包衣)或不包衣，可选择的将包衣后的胶囊根据包装所需规格数量灌装至内包材即可。 [0024] 本发明还提供了一种益生菌组合物在制备治疗女性阴道炎、改善阴道健康药物、保健食品、饲料、饲料添加剂、食品添加剂中的应用。组合物包括嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌。 [0025] 本发明的组合物能够恢复阴道菌群，产生过氧化氢，进而抑制有害菌增值，缓解阴道痛痒、干涩等不适，祛除异味，平衡pH值，强化阴道粘膜免疫防御机能。辅助治疗阴道炎以及预防阴道炎的发生和复发。 [0026] 本发明还提供了一种益生菌组合物在制备治疗和/或改善肠道炎症、尿道炎症的药物、保健食品、饲料、饲料添加剂、食品添加剂中的应用 [0027] 本发明还提供了嗜黏蛋白阿克曼菌后生元在促进卷曲乳杆菌产生过氧化氢中的应用。包括治疗目的和非治疗目的应用。 [0028] 本发明还提供了体外抑制致病性细菌的方法，如在特定环境中抑制致病性细菌的用途，这种用途与疾病治疗无关。 [0029] 术语解释 [0030] 本文所用的“阿克曼菌后生元”，在没有其他标明的情况下，是指黏蛋白阿克曼菌灭活菌体。 [0031] 本文所用的“死菌体”，为灭活的菌体。 [0032] 本文所用的“后生元”，为益生菌经加工处理后的益菌成分统称，包括菌体与代谢产物。 [0034] 图1为AKK后生元对卷曲乳杆菌产过氧化氢的影响； [0035] 图2为AKK后生元对植物乳杆菌产过氧化氢的影响； [0036] 图3为AKK后生元对鼠李糖乳杆菌产过氧化氢的影响； [0037] 图4为AKK后生元对另一植物乳杆菌菌产过氧化氢的影响； [0038] 图5为AKK后生元对嗜酸乳杆菌产过氧化氢的影响； [0039] 图6为AKK后生元对另一鼠李糖乳杆菌产过氧化氢的影响； [0040] 图7为AKK后生元对罗伊氏乳杆菌产过氧化氢的影响； [0041] 图8为AKK后生元对动物双歧杆菌产过氧化氢的影响。 具体实施方式[0042] 为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。 [0043] 实施例1 [0044] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌，嗜黏蛋白阿克曼菌后生元为10mg，嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元为AKK835，卷曲乳杆菌为LBV 88，卷曲乳杆菌为1亿，总菌体量为100亿。 [0045] 实施例2 [0046] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌，嗜黏蛋白阿克曼菌后生元为50mg，嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元为AKK SNUG‑61027，卷曲乳杆菌为LBV10，卷曲乳杆菌为5亿，总菌体量为100亿。 [0047] 实施例3 [0048] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌，嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元为AKKAM06，卷曲乳杆菌为LBV61，卷曲乳杆菌为50亿，总菌体量为100亿。 [0049] 实施例4 [0050] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌，嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元为AKK835，卷曲乳杆菌为CP515，卷曲乳杆菌为99亿，总菌体量为100亿。 [0051] 实施例5 [0052] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌，嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元为AKK835，卷曲乳杆菌为LBV 61，卷曲乳杆菌为90亿，总菌体量为100亿。 [0053] 实施例6 [0054] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌，嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元为AKK835，卷曲乳杆菌为SP28，嗜黏蛋白阿克曼菌后生元为50mg，总菌体量为100亿。 [0055] 实施例7 [0056] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌以及鼠李糖乳酸菌，嗜黏蛋白阿克曼菌后生元为50mg，总菌体量为1000亿，嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元为AKK835，卷曲乳杆菌为LBV10。 [0057] 实施例8 [0058] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌以及鼠李糖乳酸菌，嗜黏蛋白阿克曼菌后生元为50mg，总菌体量为120亿，卷曲乳杆菌LMG P‑31003和以及鼠李糖乳酸菌GR‑1分别为50亿活菌。 [0059] 实施例9 [0060] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌Lc17217，嗜黏蛋白阿克曼菌后生元为10mg，嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元为AKK835，卷曲乳杆菌为1亿，总菌体量为100亿。 [0061] 实施例10 [0062] 一种组合物，包含灭活的嗜黏蛋白阿克曼菌后生元和卷曲乳杆菌Lcris‑18，嗜黏蛋白阿克曼氏菌后生元为AKKAM06，卷曲乳杆菌为50亿，总菌体量为100亿。 [0063] 实验例一 [0064] 嗜粘蛋白阿克曼氏菌的菌种活化。 [0065] 培养基组成：蛋白胨10.0g/L，脱水小牛脑浸粉12.5g/L，牛心浸粉5.0g/L，氯化钠5.0g/L，葡萄糖2.0g/L，磷酸氢二钠2.5g/L，粘蛋白2g/L，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，调节pH值7.4±0.2，121℃高压灭菌15分钟，备用。 [0066] 嗜粘蛋白阿克曼氏菌菌株活化在厌氧培养箱中操作。选择嗜粘蛋白阿克曼氏菌AKK835，从冻存管接种10ul至含有10ml上述培养基的试管中，37℃厌氧培养箱恒温培养48h。将试管中培养液转接活化至含有100ml上述培养基的培养瓶中，37℃厌氧培养箱恒温培养48h。所得培养液用于后续实验中的菌体接种。 [0067] 菌体后生元制备。AKK在专用培养基中进行菌株活化、培养、离心、灭菌制成。 [0068] 益生菌菌株活化。 [0070] 2.配制MRS琼脂培养基，115℃灭菌20min后，冷却至50℃时加入0.3g/LABTS，以及3mg/L辣根过氧化物酶HRP，磁力搅拌均匀后，进行显色平板倒制。 [0071] 3.实验分为实验组和对照组。实验组在菌悬液中添加AKK死菌体后生元，且AKK终浓度为10^9cfu/ml。对照组为菌悬液添加等体积的生理盐水。 [0072] 4.在显色平板上进行菌悬液点样，每个平板三个测试点，每个测试点10ul，37℃恒温培养箱培养48小时后，读取显色结果。 [0073] 表1AKK后生元对不同益生菌的影响 [0074] [0075] [0077] 实验例二 [0078] 同试验例一，所不同的是：AKK后生元的来源增加了AKK SNUG‑61027和AKK AM06。卷曲乳杆菌增加了Lactobacillus crispatus LBV 10(DSM 23744)，Lactobacillus crispatus LBV 61(DSM 23745)。 [0079] 表2AKK后生元对不同卷曲乳杆菌的影响 [0080] [0081] 从表2可以看出，AKK后生元对卷曲乳杆菌产生过氧化氢具有促进作用具有普遍性，其实以AKK835的促进卷曲乳杆菌产生过氧化氢的效果最好。 [0082] 本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)，具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语，应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样被特定定义，否则不会用理想化或过于正式的含义来解释。 |
||||||
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈