用于制备发酵乳产品的方法 |
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申请号 | CN202280061420.3 | 申请日 | 2022-09-15 | 公开(公告)号 | CN117940026A | 公开(公告)日 | 2024-04-26 |
申请人 | 雀巢产品有限公司; | 发明人 | L·费里埃; C·布兰查德; V·凯普琪; A·L·韦切利奥; G·M·阿吉拉尔-洛佩兹; | ||||
摘要 | 本 发明 涉及用于制备 发酵 乳产品乳酸双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌例如发酵乳粉的方法、该发酵乳产品本身以及包含其的营养组合物。本发明还涉及此类发酵乳产品任选地在营养组合物中的用途。 | ||||||
权利要求 | 1.用于制备粉状发酵乳产品的方法,所述方法包括: |
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说明书全文 | 用于制备发酵乳产品的方法技术领域[0001] 本发明涉及用于制备发酵乳产品例如发酵乳粉的方法、该发酵乳产品本身以及包含其的营养组合物。该发酵乳产品和包含其的营养组合物具有增加的适口性。本发明还涉及该发酵乳产品任选地在营养组合物中用于促进营养物质吸收和肠道健康的用途。本发明还涉及包含根据本发明的发酵乳粉的营养组合物用于促进营养物质吸收、健康微生物群和肠道健康的用途。 背景技术[0002] 免疫和肠道健康是婴幼儿母亲最关心的问题之一,她们寻求天然/营养的解决方案来获得“舒适的胃”(肠道健康)。 [0003] 如今,益生菌主要用于使婴儿的肠道达到一定程度的舒适。然而,对于在婴幼儿中使用存在限制。 [0005] 乳发酵可能会产生对肠道健康具有潜在意义的各种代谢物,但用益生菌进行液态乳发酵需要添加促酵剂/活化剂,导致产品粘度不够,带有奶酪味,通常不为婴幼儿所喜爱。 [0007] 因此,需要找到可接受的产品形式的营养溶液,该营养溶液可以有益于食用该溶液的婴幼儿的免疫和肠道健康。因此,还额外需要该营养溶液来驱动代谢向糖分解发酵方向发展,以促进免疫和肠道健康。 [0008] 本发明人通过开发制备包含用两种益生菌(乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium lactis‑B.lactis)和鼠李糖乳杆菌(Lacticaseibacillus rhamnosus–L.rhamnosus))发酵的乳并且天然地递送用于肠道益处和免疫健康的代谢物的产品(营养组合物)的方法发现了上面提及的技术问题的解决方案。 发明内容[0010] 本发明的另外的特征和优点在下文参照附图给出的目前优选的实施方案的说明中有所描述,并且这些特征和优点将从该说明中显而易见,其中: [0011] 图1是制备根据本发明的发酵乳产品的方法的示意图。 [0012] 图2报告了实施例4的实验结果并且示出了仅用乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513发酵增加了游离氨基酸丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸和天冬氨酸的水平,而用乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌发酵可以降低这些水平。 [0013] 图3示出了通过根据最新发明的2种益生菌进行乳发酵增加了UMP的水平(基于实施例5中的结果)。 [0014] 图4示出了乳的发酵可以降低在EE中发现的与肠道屏障功能改变相关的一些代谢物的水平(基于实施例5的结果)。 [0015] 图5示出了实施例6的结果。具体地,其示出了根据本发明的营养组合物诱导了双歧杆菌的增加。 [0016] 图6示出了实施例6的结果。具体地,其示出了所有测试产品都显著减少了铵的产生。 [0017] 图7是总结在实施例6的实验中获得的结果的表。 具体实施方式[0018] 定义 [0019] 在本发明的上下文中,术语“发酵乳产品”是指已经用乳酸双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌(例如乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513或乳酸双歧杆菌NCC2018和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514或鼠李糖乳杆菌LPR NCC4007)的培养物发酵的乳制品。 [0020] 鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514(HN001TM)是可商购获得的并且可以例如以名称Protect EarlyLife(Rhamnosus)从Howaru(DuPont Danisco)以目录名TM HN001 购买。 [0021] 鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514保藏于澳大利亚政府分析实验室(AGAL)专利菌种保藏中心(1Suakin St,Pymble.NSW.2073,Australia),保藏号为NM/9709514。在本发明的TM上下文中,鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514也称为鼠李糖乳杆菌HN001 或鼠李糖乳杆菌HN001。 [0022] 鼠李糖乳杆菌NCC 4007根据布达佩斯条约于2004年10月以鼠李糖乳杆菌CGMCC 1.3724保藏于中国科学院中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)(中国北京,邮政信箱 2714,100080)。 [0023] 乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513(HN019TM)是可商购获得的并且可以例如以名称TMTransit(Bifido)从Howaru(DuPont Danisco)以目录名HN019 购买。 [0024] 乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513保藏于澳大利亚政府分析实验室(AGAL)专利菌种保藏中心(澳大利亚政府分析实验室(AGAL)(1Suakin St,Pymble.NSW.2073,Australia)),保藏号为NM/9709514。在本发明的上下文中,乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513也称为乳酸双TM歧杆菌HN019 或乳酸双歧杆菌HN019。 [0025] 乳酸双歧杆菌NCC2818根据布达佩斯条约于2005年6月7日以名称乳酸双歧杆菌NCC 2818保藏号CNCM I‑3446保藏于国家微生物菌种保藏中心(Collection Nationalede Cultures de Micro‑Organismes)(CNCM,巴斯德研究所(28rue du Dr Roux,75724Paris Cedex 15,France))。 [0026] 在本发明的上下文中,术语“乳制品”是指含有至少15%的乳的任何产品(呈全脂乳、脱脂乳或部分脱脂乳的形式)。 [0027] 在本发明的上下文中,术语“发酵乳粉”或“粉状发酵乳”是指呈粉末形式的如上所定义的发酵乳产品,例如已经用乳酸双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌(例如乳酸双岐杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514)的培养物发酵然后喷雾干燥以获得粉末的乳制品。在一些实施方案中,根据本发明的发酵乳粉可含有附加成分,诸如例如果胶和奶油粉。 [0030] 在一个具体实施方案中,本发明的组合物是“合成营养组合物”。表述“合成营养组合物”是指通过化学和/或生物手段获得的混合物(即,合成组合物不是母乳)。 [0031] 在本发明的上下文中,词语“发酵”是指通过细菌酶物质的作用在有机底物中产生化学变化的代谢过程。这种发酵代谢过程导致代谢物的产生。 [0032] 如本文所用,表述“婴儿配方食品”是指旨在专用于供给在生命的头几个月期间的婴儿营养,而且本身满足这类人的多种营养需求的食料(符合欧盟委员会2006年12月22日颁发的针对婴儿配方食品和较大婴儿配方食品的第91/321/EEC 2006/141/EC号指令中第2(c)条的规定)。也是指旨在用于婴儿的营养组合物,并且如在食品法典委员会(法典STAN 72‑1981)和婴儿特殊品(包括针对特殊医学目的的食物)中所定义。表述“婴儿配方食品”既涵盖“一段婴儿配方食品(starter infant formula)”,也涵盖“二段婴儿配方食品(follow‑up formula)”或“较大婴儿配方食品(follow‑on formula)”。 [0033] “二段婴儿配方食品”或“较大婴儿配方食品”从第6个月开始给予。婴儿配方食品构成了这类人逐渐多样化饮食中的主要液体元素。 [0034] 表述“婴孩食物”是指旨在专用于供给在生命的头一年期间的婴儿或幼儿营养的食料。 [0035] 表述“婴儿谷物组合物”是指旨在专用于供给在生命的头一年期间的婴儿或幼儿营养的食料。 [0036] 表述“成长乳”(或GUM)是指通常添加有维生素和矿物质的乳基饮料,其旨在用于幼儿或儿童。 [0037] 术语“强化剂”是指适用于强化人乳、婴儿配方食品、成长乳或用其他营养物质强化的人母乳或者与它们混合的液体或固体营养组合物。因此,本发明的强化剂可在溶解于人母乳、婴儿配方食品、成长乳或用其他营养物质强化或以其他方式强化的人母乳中之后施用,它可作为独立组合物施用。当作为独立组合物施用时,本发明的乳强化剂也可被鉴定为“补充剂”。在一个实施方案中,本发明的乳强化剂是补充剂。 [0038] 表述“离乳期”是指在婴儿或幼儿的饮食中逐步用其他食物替代母乳期间的时期。 [0039] 本发明的营养组合物可以呈固体形式(例如,粉末)或呈液体形式。各种成分(例如低聚糖)的量在组合物呈固体形式(例如粉末)时可以基于干重计以g/100g组合物来表示,或者在组合物是指液体形式时表示为g/L组合物的浓度(后者还涵盖可由粉末在液体(诸如乳、水……)中重构之后获得的液体组合物,例如重构的婴儿配方食品或较大/二段婴儿配方食品或成长乳或婴儿谷物产品或被设计用于婴儿营养的任何其他配制物)。 [0040] 术语“益生菌”是指对宿主的健康或良好状态具有有益效果的微生物细胞制剂或微生物细胞组分。(Salminen S,Ouwehand A.Benno Y.等人,“Probiotics:how should they be defined”Trends Food Sci.Technol.1999:10 107‑10)。微生物细胞一般为细菌或酵母。 [0041] 术语“cfu”应理解为菌落形成单位。 [0042] 除非另外指明,否则所有百分比均按重量计。 [0043] 另外,在本发明的上下文中,术语“包含”或“包括”不排除其他可能的要素。本发明的组合物(包括本文所述的多个实施方案)可包含下列要素、由或基本上由下列要素组成:本文所述的本发明的基本要素和必要限制,以及本文所述的或视需求而定的任何另外的或任选的成分、组分或限制。 [0044] 发酵乳产品和包含其的营养组合物的制备方法 [0045] 在一个方面,本发明提供了用于制备粉状发酵乳产品的方法,该方法包括: [0046] a)将脱脂乳浓缩物加热至65℃以上的温度持续几秒钟,然后加热至更高的温度,然后冷却至发酵温度; [0047] b)用乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514在范围为38℃至45℃的温度下以范围为99:1至1:99的特定益生菌比例并且在范围为4.3至4.9的pH下发酵步骤a)的产物; [0048] c)将步骤b)的产物冷却至10℃以下的温度; [0049] d)在范围为55℃至65℃的温度下加热步骤c)的产物,然后立即在范围为70℃至200℃的温度下喷雾干燥步骤c)的产物; [0050] e)然后任选地将步骤d)的产物与奶油粉和果胶共混并且任选地筛分。 [0051] 在一个实施方案中,步骤a)的第一部分通过将脱脂乳浓缩物加热至至少75℃的温度持续几秒钟(例如至少15秒)然后加热至更高的温度(例如85℃)来进行。在另一个实施方案中,步骤a)的第二部分通过冷却至范围为38℃至45℃(例如范围为41℃至43℃)的发酵温度来进行。在另一个实施方案中,步骤a)通过将脱脂乳浓缩物加热至至少75℃的温度持续几秒钟(例如至少15秒)然后加热至更高的温度(例如85℃)然后冷却至范围为38℃至45℃(例如范围为41℃至43℃)的发酵温度来进行。 [0052] 在一个实施方案中,步骤b)通过用乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514在范围为38℃至45℃、优选地范围为41℃至43℃的温度下发酵步骤a)的产物来进行。 [0053] 在一个实施方案中,步骤b)通过用乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514以范围为99:1至1:99的特定益生菌比例发酵步骤a)的产物来进行。在本发明的一个实施方案中,益生菌乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514的比例在由以下项组成的组中选择:99:1、50:50、75:25、50:50、25:75、1:99。在另一个实施方案中,益生菌乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514的比例的范围为65:53至85:15,例如75:25。 [0054] 在一个实施方案中,步骤b)在范围为4.3至4.9(例如范围为4.6至4.7)的pH下进行。 [0055] 在另一个实施方案中,步骤b)通过用乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514在范围为38℃至45℃、优选地范围为41℃至43℃的温度下使用范围为65:53至85:15(例如75:25)的特定比例的乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514发酵步骤a)的产物来进行,并且步骤b)在范围为4.3至4.9(例如范围为4.6至4.7)的pH下进行。 [0056] 在一个实施方案中,步骤c)通过将步骤b)的产物冷却至10℃以下的温度、范围为4℃至10℃(例如4℃至8℃)的温度来进行。 [0057] 在一个实施方案中,步骤d)通过在范围为55℃至65℃的温度下(例如在60℃下)加热步骤c)的产物然后立即在范围为70℃至200℃的温度下喷雾干燥产物来进行。 [0058] 在一个实施方案中,喷雾干燥器的入口和出口空气的温度的范围介于70℃与200℃之间。 [0059] 在一个实施方案中,在步骤d)中通过使用离心盘将步骤c)的发酵产物分散成受控液滴尺寸的喷雾进行喷雾干燥来将发酵产物干燥成粉末。 [0060] 在本发明的一个实施方案中,使用多级喷雾干燥器。 [0061] 在本发明的另一个实施方案中,发酵乳产品粉末的干燥在外部振动流化床上完成。 [0062] 在本发明的一个实施方案中,提供了用于制备包含粉状发酵乳的营养组合物的方法,该方法包括制备根据本发明的方法的粉状发酵乳并且包括: [0063] f)添加水果和/或蔬菜泥、一种或多种谷物粉并混合直至均匀; [0064] g)添加水果(例如柠檬)汁以将pH调节至小于4.2; [0065] h)任选地对混合物进行巴氏灭菌。 [0066] 发酵乳产品 [0067] 在一个方面,本发明提供了能够通过如上所述的方法获得的发酵乳产品。 [0068] 在本发明的一个实施方案中,发酵乳产品是发酵乳粉。 [0069] 在本发明的一个实施方案中,发酵乳产品包含脱脂乳粉、奶油粉、乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513、鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514和果胶。 [0070] 在一个实施方案中,根据本发明的发酵乳粉含有附加成分,诸如例如果胶(量的范围为0%至5%w/w,例如1%至3%w/w)和奶油粉(量的范围为25%至50%w/w,例如30%至40%w/w)。 [0071] 在本发明的一个实施方案中,发酵乳产品包含比例范围为65:30至85:15(例如比例为75:25)的乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514。 [0072] 在本发明的一个实施方案中,发酵乳产品呈粉末形式。 [0073] 包含根据本发明的粉状发酵乳产品的营养组合物 [0074] 在本发明的一个实施方案中,提供了包含根据本发明的粉状发酵产品的营养组合物。在本发明的一个实施方案中,提供了包含能够根据本发明的方法获得的粉状发酵产品的营养组合物。 [0075] 在本发明的一个实施方案中,营养组合物是婴儿食物产品、二段婴儿配方食品或成长乳。在一个实施方案中,本发明的营养组合物是包含基于乳的部分的婴儿食物产品、二段婴儿配方食品或成长乳。 [0076] 在本发明的一个实施方案中,营养组合物是合成营养组合物。 [0077] 在本发明的一个实施方案中,营养组合物包含范围为1%至5%w/w的量的根据本发明的粉状发酵乳、范围为80%至99.7%w/w的量的水果泥、范围为0%至20%w/w的量的蔬菜泥、范围为0.1%至3%w/w的量的谷物粉、范围为0.05%至1%w/w的量的水果汁浓缩物、范围为0%至3%w/w的量的植物油。 [0078] 在本发明的一个实施方案中,营养组合物包含在由以下项组成的列表中选择的水果泥:梨泥、香蕉泥、树莓泥、草莓泥、苹果泥、西梅泥、樱桃泥、蓝莓泥、黑莓泥以及它们的混合物。 [0079] 在本发明的一个实施方案中,营养组合物包含在由以下项组成的列表中选择的蔬菜泥:菠菜泥、甘薯泥以及它们的混合物。 [0080] 在本发明的一个实施方案中,营养组合物包含在由以下项组成的列表中选择的谷物粉:燕麦粉、藜麦粉、大麦粉以及它们的混合物。 [0081] 在本发明的一个实施方案中,营养组合物包含水果汁浓缩物,其是柠檬汁浓缩物。 [0082] 在本发明的一个实施方案中,营养组合物包含植物油,其是胡桃油。 [0083] 根据本发明的发酵乳产品和包含其的营养组合物的用途和优点 [0084] 本发明人已经惊奇观察到根据本发明的发酵乳产品(例如根据本发明的粉状发酵乳产品)和包含其的营养组合物的许多意想不到的优点和益处。 [0085] 粉状发酵产品和包含其的营养组合物的适口性 [0086] 如上所述,用益生菌进行液体乳发酵需要添加促酵剂/活化剂,导致产品粘度不够,带有奶酪味。 [0087] 实施例3中所示的结果表明,包含根据本发明的粉状发酵乳粉的营养组合物显示出最佳的适口性。该效果在与基于具有单一微生物(乳酸双歧杆菌)的液体发酵乳产品的对应营养组合物的适口性相比时尤为突出。 [0088] 在一个实施方案中,本发明提供了根据本发明的粉状发酵乳产品用于改善适口性的用途。在本发明的一个实施方案中,还提供了根据本发明的粉状发酵乳产品用于改善包含其的营养组合物的适口性的用途。 [0089] 粉状发酵产品和包含其的营养组合物的最佳氨基酸吸收 [0090] 发酵通常会导致蛋白质断裂并释放出肽、三肽、二肽和单个氨基酸。然而,氨基酸并不代表最容易吸收的氮形式。 [0091] 本发明人惊奇地发现,与具有单一益生菌的发酵乳产品相比,根据本发明的用2种益生菌(例如以比例75:25)发酵的发酵乳粉导致几种氨基酸减少。结果在实施例4中报告。 [0092] 因此,在一个实施方案中,本发明提供了根据本发明的粉状发酵乳产品用于促进肠道中的营养物质吸收(例如氨基酸吸收)的用途。在本发明的一个实施方案中,还提供了包含根据本发明的粉状发酵乳产品的营养组合物用于促进肠道中的营养物质吸收(例如氨基酸吸收)的用途。 [0093] 在一个实施方案中,提供了根据本发明的粉状发酵乳产品,其用于促进肠道中的营养物质吸收,例如氨基酸吸收。在本发明的一个实施方案中,还提供了包含根据本发明的粉状发酵乳产品的营养组合物,其用于促进肠道中的营养物质吸收,例如氨基酸吸收。 [0094] 因此,在一个实施方案中,本发明提供了根据本发明的粉状发酵乳产品在制造用于促进肠道中的营养物质吸收(例如氨基酸吸收)的营养组合物中的用途。 [0095] 因此,在一个实施方案中,本发明提供了用于促进对其有需要的受试者的肠道中的营养物质吸收(例如氨基酸吸收)的方法,该方法包括向受试者施用根据本发明的粉状发酵乳产品或包含其的营养组合物。 [0096] 在本发明的一个实施方案中,粉状发酵乳粉和包含其的营养组合物用于促进营养物质吸收的用途是非治疗性用途。 [0097] 粉状发酵产品和包含其的营养组合物对肠道健康的益处 [0098] 本发明人惊奇地发现,在根据本发明的用2种益生菌发酵的发酵乳粉中,观察到: [0099] ‑尿苷‑5'单磷酸(UMP)的增加,其是一种参与肠道和免疫健康、特别是在临床前模型中预防与断奶相关的腹泻的组分。UMP天然存在于乳(包括人乳)中,并且已知其可促进肠道成熟和修复(图3),如Li等人Food Funct.,2019中所示。 [0100] ‑根据本发明的发酵乳呈现出某些代谢物(例如1‑(1‑烯基‑棕榈酰基)‑2‑油酰基‑GPE(P‑16:0/18:1)、3‑羟基丁酰基肉碱和辛酸酯等)的水平降低,Semba等人EBioMedicine 17(2017)已经描述了这些代谢物与患有环境性肠病的受试者的血清中肠道屏障功能的改变相关(图4)。 [0101] 结果在实施例5中报告。 [0102] 总之,结果表明根据本发明的发酵乳粉含有对食用该发酵乳粉或包含其的营养组合物的宿主的肠道健康有益的代谢物。 [0103] 因此,在一个实施方案中,本发明提供了根据本发明的粉状发酵乳产品用于促进肠道健康(例如用于预防腹泻)的用途。在本发明的一个实施方案中,还提供了包含根据本发明的粉状发酵乳产品的营养组合物用于促进肠道健康(例如用于预防腹泻)的用途。 [0104] 在一个实施方案中,提供了根据本发明的粉状发酵乳产品用于促进肠道健康,例如用于预防腹泻。在本发明的一个实施方案中,还提供了包含根据本发明的粉状发酵乳产品的营养组合物用于促进肠道健康,例如用于预防腹泻。 [0105] 因此,在一个实施方案中,本发明提供了根据本发明的粉状发酵乳产品在制造用于促进肠道健康(例如用于预防腹泻)的营养组合物中的用途。 [0106] 因此,在一个实施方案中,本发明提供了用于促进对其有需要的受试者的肠道健康(例如用于预防腹泻)的方法,该方法包括向受试者施用根据本发明的粉状发酵乳产品或包含其的营养组合物。 [0107] 在本发明的一个实施方案中,粉状发酵乳粉和包含其的营养组合物用于促进肠道健康(例如用于预防腹泻)的用途是非治疗性用途。 [0108] 粉状发酵产品和包含其的营养组合物对有益肠道微生物群和免疫健康的促进[0109] 当食物被摄入时,大多数蛋白质通常在上胃肠道被吸收,而不会到达结肠。相反,纤维不会被消化,并以完整形式到达结肠,在那里它们将被发酵。这是最佳的健康状况。然而,近十年来,饮食中纤维的减少和蛋白质食用的增加会导致一些蛋白质在结肠中发酵。 [0110] 存在两种结肠微生物发酵类型: [0111] 1)碳水化合物或纤维的糖分解发酵:这导致形成大量碳水化合物代谢物,如短链脂肪酸(SCFA),主要是乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐。SCFA的益处在肠道层是局部的,有助于肠道健康。SCFA降低粪便pH,因此促进腔内矿物质吸收。 [0113] 双歧杆菌可以在特定的碳水化合物上生长,并且已被证明可直接促进免疫保护。 [0114] 2)蛋白质或肽或氨基酸的蛋白水解发酵。 [0115] 蛋白水解发酵不仅会产生支链脂肪酸,还会产生潜在有毒代谢物,诸如酚类化合物、含硫化合物、胺和铵。铵能够促进细菌病原体生长,并且大量的氨与细菌性小肠结肠炎或其他类型的细菌和病毒感染的几率增加相关。 [0116] 这样,增加结肠中糖分解与蛋白水解发酵的比例因此被认为有利于免疫健康。 [0117] 本发明人惊奇地发现,与单独的发酵乳粉相比,根据本发明的营养组合物诱导了双歧杆菌的增加。与PFM(发酵乳粉)相比,在24小时和/或48小时后观察到营养组合物的双歧杆菌属(Bifidobacterium spp.)水平显著较高(图5)。 [0119] 结果在实施例6中报告。 [0120] 因此,在一个实施方案中,本发明提供了根据本发明的粉状发酵乳产品用于促进肠道有益微生物群和免疫健康的用途。在本发明的一个实施方案中,还提供了包含根据本发明的粉状发酵乳产品的营养组合物用于促进肠道有益微生物群和免疫健康的用途。 [0121] 在一个实施方案中,提供了根据本发明的粉状发酵乳产品用于促进肠道有益微生物群和免疫健康。在本发明的一个实施方案中,还提供了包含根据本发明的粉状发酵乳产品的营养组合物用于促进肠道有益微生物群和免疫健康。 [0122] 因此,在一个实施方案中,本发明提供了根据本发明的粉状发酵乳产品在制造用于促进肠道有益微生物群和免疫健康的营养组合物中的用途。 [0123] 因此,在一个实施方案中,本发明提供用于促进对其有需要的受试者的肠道有益微生物群和免疫健康的方法,该方法包括向受试者施用根据本发明的粉状发酵乳产品或包含其的营养组合物。 [0124] 在本发明的一个实施方案中,粉状发酵乳粉和包含其的营养组合物用于促进肠道有益微生物群和免疫健康的用途是非治疗性用途。 [0125] 实验部分 [0126] 实施例1 [0127] 发酵乳产品(粉末)的制备 [0128] 如下制备根据表1中呈现的配方的发酵乳粉。 [0129] 将脱脂乳浓缩物在75℃下加热15秒,然后在85℃下加热1秒,然后冷却至42±1℃范围内的发酵温度;以75:25的比例添加乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514并发酵,直至pH达到4.6±0.3,然后冷却至8℃。然后将产物在60±5℃的温度下加热,然后立即喷雾干燥。然后将粉末发酵乳与奶油粉和果胶共混,然后用2mm过滤器筛分。 [0130] 制备其的方法也在图1中示意性地表示。 [0131] 表1:发酵乳配方 [0132] [0133] [0134] 实施例2 [0135] 包含发酵乳的营养组合物的制备 [0136] 制备营养组合物(呈泥形式的婴儿食物产品),其包含如实施例1中所述制备的发酵乳粉。根据几种配方制备营养组合物,其成分在下表2至表8中报告。表9还描述了在通用配方中表示为重量百分比的此类成分的范围。 [0137] 将如实施例1中所述制备的粉末发酵乳与奶油粉和果胶共混,然后用2mm过滤器筛分,然后在罐中添加果泥,并添加谷物粉,混合直至均匀。添加水果(柠檬)汁以调节pH,然后将产物转移到储存罐中在高温下进行巴氏灭菌热灌装,随后注入氮气,进行X射线检测并包装到纸盒中。 [0138] 表2(配方n.1) [0139] 成分粉末发酵乳 有机梨泥 有机苹果泥 有机香蕉泥 有机树莓泥 有机草莓泥 燕麦粉 浓缩柠檬汁 [0140] 表3(配方n.2) [0141] 粉末发酵乳有机苹果泥 有机西梅泥 有机香蕉泥 燕麦粉 藜麦粉 浓缩柠檬汁 [0142] 表4(配方n.3) [0143]粉末发酵乳 有机樱桃泥 有机香蕉泥 有机苹果泥 有机草莓泥 燕麦粉 浓缩柠檬汁 [0144] 表5(配方n.4) [0145]粉末发酵乳 有机苹果泥 有机香蕉泥 有机蓝莓泥 有机黑莓泥 燕麦粉 藜麦粉 浓缩柠檬汁 [0146] 表6(配方n.5) [0147] 粉末发酵乳有机梨泥 有机苹果泥 菠菜泥 燕麦粉 藜麦粉 浓缩柠檬汁 [0148] 表7(配方n.6) [0149] 粉末发酵乳有机苹果泥 有机甘薯泥 桃泥 胡桃油 大麦粉 浓缩柠檬汁 [0150] 表8(配方n.7) [0151]粉末发酵乳 有机香蕉泥 有机树莓泥 有机梨泥 胡桃油 大麦粉 浓缩柠檬汁 [0152] 表9(通用配方) [0153] 粉末发酵乳 1%‑5%水果泥 80%‑99.7% 蔬菜泥 0%‑20% 谷物粉 0.1%‑3% 水果汁浓缩物 0.05%‑1% 植物油 0%‑3% 总计 100,00 [0154] 实施例3 [0155] 发酵乳粉和包含其的营养组合物中实现最佳适口性的益生菌选择及其比例[0156] 根据上述方法首先用不同比例的益生菌乳酸双歧杆菌:鼠李糖乳杆菌(100:0、75:25、50:50、25:75、0:100)发酵乳产品。 [0157] 结果表明,在75:25的益生菌比例下获得了最佳的适口性和质地。 [0158] 下表10中的结果示出了乳酸双歧杆菌:鼠李糖乳杆菌的比例为25:75和100:0的最终产品配方的结果,表明比例75:25提供了优选风味。 [0159] 表10 [0160] [0161] [0162] 实施例4 [0163] 发酵乳粉和/或包含其的营养组合物的最佳氨基酸吸收 [0164] 针对根据本发明的发酵乳粉研究了发酵前后氨基酸的存在。发酵通常会导致蛋白质断裂并释放出肽、三肽、二肽和游离氨基酸。然而,氨基酸并不代表最容易吸收的氮形式。 [0165] 将所有样品保持在‑80℃直至进行处理。 [0166] 使用来自Hamilton Company的自动化MicroLab 系统制备样品,并用甲醇沉淀蛋白质。将所得提取物分成五个级分:两个级分用于通过利用正离子模式电喷雾离子化(ESI)的两种单独反相(RP)/UPLC‑MS/MS方法进行分析,一个级分用于通过利用负离子模式ESI的RP/UPLC‑MS/MS进行分析,一个级分用于通过利用负离子模式ESI的HILIC/UPLC‑MS/MS进行分析,并且一个样品留作备用。将样品短暂放置在 (Zymark)上以除去有机溶剂。 [0167] 与实验样品一起分析几种类型的对照:通过取小体积的每个实验样品(或另选地,使用充分表征的人血浆池)产生的合并的基质样品用作整个数据集的技术重复;提取的水样品用作工艺空白。 [0168] 令人惊讶地,与具有单一益生菌的发酵乳相比,用比例为75:25的2种益生菌发酵的发酵乳粉导致几种氨基酸减少,表明用2种益生菌发酵释放的游离氨基酸较少。结果表明,通过添加鼠李糖乳杆菌改变了氮底物的代谢,并且表明在用75:25的益生菌比例产生的PFM中的氮利用率更高。 [0169] 图2示出了仅用乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513发酵增加了游离氨基酸丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸和天冬氨酸的水平。用乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513和鼠李糖乳杆菌两者发酵能够降低这些水平。 [0170] 实施例5 [0171] 根据本发明的营养组合物对腹泻预防和肠道健康有益 [0172] 针对根据本发明的发酵乳粉和针对仅用一种益生菌(乳酸双歧杆菌)发酵的乳产品研究了发酵前后的代谢物。 [0173] 将样品清点并立即储存在‑80℃下。将所有样品保持在‑80℃直至进行处理。 [0174] 使用来自Hamilton Company的自动化MicroLab 系统制备样品,并用甲醇沉淀蛋白质。将所得提取物分成五个级分:两个级分用于通过利用正离子模式电喷雾离子化(ESI)的两种单独反相(RP)/UPLC‑MS/MS方法进行分析,一个级分用于通过利用负离子模式ESI的RP/UPLC‑MS/MS进行分析,一个级分用于通过利用负离子模式ESI的HILIC/UPLC‑MS/MS进行分析,并且一个样品留作备用。将样品短暂放置在 (Zymark)上以除去有机溶剂。 [0175] 与实验样品一起分析几种类型的对照:通过取小体积的每个实验样品(或另选地,使用充分表征的人血浆池)产生的合并的基质样品用作整个数据集的技术重复;提取的水样品用作工艺空白。 [0176] 在这些条件下,观察到: [0177] 1)尿苷‑5'单磷酸(UMP)的增加,其是一种参与肠道和免疫健康、特别是在临床前模型中预防与断奶相关的腹泻的组分。UMP天然存在于乳(包括人乳)中,并且已知其可促进(Li等人Food Funct.,2019,10,4081)肠道成熟和修复(图3)。 [0178] 2)根据本发明的发酵乳呈现出代谢物(例如1‑(1‑烯基‑棕榈酰基)‑2‑油酰基‑GPE(P‑16:0/18:1)、3‑羟基丁酰基肉碱和辛酸酯等)的水平降低,已经发现这些代谢物与患有环境性肠病的受试者的血清中肠道屏障功能的改变相关(Semba等人,EBioMedicine 17(2017)57–66)(图4)。 [0179] 总之,这些结果表明根据本发明的发酵乳粉含有对食用该发酵乳粉或包含其的营养组合物的宿主的肠道健康有益的代谢物。 [0180] 实施例6 [0181] 包含根据本发明的发酵乳粉的营养组合物对肠道微生物群和免疫健康有益[0182] 在体外短期结肠发酵模型中测试发酵乳粉和最终配方,并监测pH、铵、SCFA以及微生物群组成的变化。 [0183] 在结肠孵育之前,对所有产品进行体外消化,包括完全通过口腔、胃和小肠阶段,后者涉及吸收(Dupont D.Crit Rev Food Sci Nutr 2019)。这被认为很重要,因为这些产品含有一部分可消化的化合物,这些化合物在体内转化为小分子后在小肠层级被吸收。经由透析模拟小肠吸收能够从肠消化物中去除小分子。为此,使用具有3.5kDa截留值的膜。 [0184] 短期结肠孵育筛选测定包括在代表8‑12个月婴儿供体的结肠区域的条件下对单剂量(预消化)的测试产品进行结肠孵育。 [0185] 根据水分含量对产品剂量进行标准化,使得在孵育开始时在结肠反应器中获得5g干物质(DM)/L的浓度。然而,由于透析步骤在结肠发酵之前进行,反应器中的实际产物浓度低于5g DM/L,这取决于上胃肠道模拟期间低分子量化合物的消化和吸收程度。 [0186] 对pH、气体、SCFA、铵和乳酸盐产生的变化进行评估。在0小时、6小时、24小时和48小时进行靶向qPCR以评估处理对肠道微生物群落的影响。 [0187] 通过靶向qPCR评估群落组成的变化。 [0188] 该分析在0小时、24小时和48小时进行以评估处理对厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、双歧杆菌属物种(Bifidobacterium spp.)、乳杆菌属物种(Lactobacillus spp.)和嗜黏蛋白阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila)的作用。 [0189] 与单独的发酵乳粉相比,所有测试配方(如上在实施例2中所述的配方1至7)诱导了双歧杆菌的增加。与PFM(发酵乳粉)相比,在24小时和/或48小时后观察到包含发酵乳粉的营养组合物的双歧杆菌属物种(Bifidobacterium spp.)水平显著较高(图5)。观察到2种产品具有最强的刺激作用。主要在0小时‑24小时之间观察到双歧杆菌的富集。 [0190] 就乳酸杆菌的增加而言,与非发酵乳相比,发酵乳使结肠乳酸杆菌更好地存活或生长。 [0191] 除T0外的所有产品均显著减少了铵的产生(图6)。T0与铵水平的增加相关,表明发酵乳和发酵产物都显示出改善的糖分解:蛋白分解比例。 [0192] 发酵乳大大减少了铵的产生,并且这在添加水果泥的情况下得以保持,表明乳的发酵降低了与感染风险增加相关的蛋白水解发酵和铵产生(以及支链SCFA)。 [0193] 本实验的结果在图7中总结。 [0194] 双歧杆菌和乳杆菌(Lactobacilli)被认为是有益的糖分解细菌,能够产生高浓度的乳酸盐和乙酸盐(Rios‑Covián D.Applied and Environmental Microbiology 79(23)2013)。乳酸盐是一种重要的代谢物,因为它具有抗微生物特性,而且(与乙酸盐一起)因为它是与其他细菌进行一系列营养相互作用的驱动因素,从而导致下游代谢物的产生(A.N.Vlasova;Vet Immunol Immunopathol.2016)。 [0195] 丰度较低的SCFA包括支链SCFA(异丁酸盐、异戊酸盐和异己酸盐)。铵和支链SCFA的产生源于蛋白水解微生物活性,这与有毒副产物诸如对甲酚的形成有关。因此,结肠中大量支链SCFA和铵的产生与有害的健康影响有关。因此,减少了支链SCFA和铵产生的产品被认为是健康有益的,特别是对于肠道健康和免疫保护而言。 [0196] 本发明的其他实施方案 [0197] i)用于制备粉状发酵乳产品的方法,所述方法包括: [0198] a)将脱脂乳浓缩物加热至65℃以上的温度持续几秒钟,然后加热至更高的温度,然后冷却至发酵温度; [0199] b)用乳酸双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌在范围为38℃至45℃的温度下以范围为99:1至1:99的特定益生菌比例在范围为4.3至4.9的pH下发酵步骤a)的产物; [0200] c)将步骤b)的产物冷却至10℃以下的温度; [0201] d)在范围为55℃至65℃的温度下加热步骤c)的产物,然后立即在范围为70℃至200℃的温度下喷雾干燥步骤c)的所述产物; [0202] e)然后任选地将步骤d)的产物与奶油粉和果胶共混并且任选地筛分。 [0203] ii).能够通过实施方案i)中所述的方法获得的粉状发酵乳产品。 [0204] iii).能够通过根据权利要求1所述的方法获得的粉状发酵乳产品,其包含浓缩脱脂乳、奶油粉、乳酸双歧杆菌AGAL NM97/09513、鼠李糖乳杆菌AGAL NM97/09514和果胶。 [0205] iv).用于制备包含根据实施方案ii)或iii)中任一项所述的粉状发酵乳产品的营养组合物的方法,所述方法包括: [0206] a)将脱脂乳浓缩物加热至65℃以上的温度持续几秒钟,然后加热至更高的温度,然后冷却至发酵温度; [0207] b)用乳酸双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌在范围为38℃至45℃的温度下以范围为99:1至1:99的特定益生菌比例在范围为4.3至4.9的pH下发酵步骤a)的产物; [0208] c)将步骤b)的产物冷却至10℃以下的温度; [0209] d)在范围为55℃至65℃的温度下加热步骤c)的产物,然后立即在范围为70℃至200℃的温度下喷雾干燥步骤c)的所述产物; [0210] e)然后任选地将步骤d)的所述产物与奶油粉和果胶共混并且任选地筛分; [0211] f)添加水果和/或蔬菜泥、一种或多种谷物粉并混合直至均匀; [0212] g)添加水果(柠檬)汁以将pH调节至小于4.2; [0213] h)任选地进行巴氏灭菌。 [0214] v).根据实施方案ii)所述的发酵乳产品用于促进肠道健康、免疫健康和/或肠道中的有益微生物群的用途。 [0215] vi).营养组合物,所述营养组合物包含能够根据实施方案i)中所述的方法获得的发酵乳产品。 [0216] vii).根据实施方案iv)所述的营养组合物,其包含(配方)。 [0217] viii).根据权利要求vii)或viii)所述的营养组合物用于促进肠道健康、免疫健康和/或肠道中的有益微生物群的用途。 [0218] 应当理解,对本文所述的目前优选的实施方案作出的各种变化和修改对于本领域的技术人员将为显而易见的。可在不脱离本发明的实质和范围并在不减少所伴随的优点的情况下作出这些变化和修改。因此,此类变化和修改旨在由所附权利要求书涵盖。 |