[0001] 本发明属于后生元技术领域，具体公开了阿克曼氏菌外膜蛋白Amuc_1098在预防和/或治疗急性炎症疾病药物或保健食品中的应用。

[0002] 急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是一种常见的急腹症，病情复杂多变，程度轻重不等。轻者仅表现为胰腺水肿，重者出现胰腺坏死，并发腹膜炎、休克，继发全身多器官功能衰竭，病死率高。急性胰腺炎的发病机制复杂，目前尚未完全阐明。多数学者认为急性胰腺炎是腺泡内胰酶异常激活导致胰腺实质自身消化，腺泡细胞释放炎性细胞因子，引起炎症级联反应。严重时胰腺局部可发生出血和坏死，继而引起全身炎症反应综合征。目前针对急性胰腺炎的治疗手段包括手术和非手术治疗。非手术治疗包括：禁食、胃肠减压；补液、防治休克；镇痛解痉；抑制胰腺分泌；营养支持；中药治疗；应用抗生素抗感染治疗。急性胰腺炎常伴有肠道菌群紊乱，直肠粪便中大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、克雷伯菌、鲍曼不动杆菌等有害菌丰度增加，拟杆菌和乳酸菌等有益菌含量降低。因此，维持肠道微生物稳态有助于治疗急性胰腺炎。

[0003] 阿克曼氏菌(Akkermansia muciniphila,Akk)作为一种前景广阔的下一代益生菌备受关注，成为科学研究的热点。由于益生菌的活性和潜在的致病性，益生菌的临床应用有一定的挑战性，而后生元是指给宿主带来健康益处的无生命的微生物或其成分的制剂，是微生态制剂领域的新兴概念。后生元主要分为菌体成分和菌体代谢物两部分。其中菌体成分主要包括膜蛋白、胞内多糖、肽聚糖、磷壁酸、脂壁酸、缩醛磷脂等；菌体代谢物包括维生素、脂质、有机酸、细菌素、酵素、胞外多糖、短链脂肪酸等。复杂的组成成分决定了后生元功能的多样性，包括抗氧化、抗炎、抗癌、平衡肠道菌群、增强肠道上皮屏障功能、增强免疫调节和促进新陈代谢等。与益生菌相比，后生元更稳定、安全性更高、不受抗生素的影响、更广泛的作用靶点、更易于被肠道吸收。因此，后生元应用范围非常广泛，可以用于食品、保健品、饲料等多个行业中，具有广阔的市场应用前景。Amuc_1098是阿克曼氏菌最丰富的外膜蛋白之一，被注释为IV型毛分泌素，是一种天然的后生元化合物。目前，尚未报道Amuc_1098在炎症性疾病中的作用机制。

[0004] 本发明第目的，本发明的目的是通过大量实验筛选阿克曼氏菌来源的Amuc_1098蛋白新的临床用途。

[0005] 提供阿克曼氏菌外膜蛋白Amuc_1098在制备预防和/或治疗炎症疾病药物或保健食品中的应用。

[0006] 作为优选方案，提供阿克曼氏菌外膜蛋白Amuc_1098在制备预防和/或治疗急性胰腺炎药物或保健食品中的应用。

[0007] 作为优选方案，所述药物包括药物载体和/或药学上可接受的辅助治疗材料；所述保健食品包括特殊医疗食品、固体饮料、乳制品、豆制品类或动物饲料。

[0008] 所述药物的剂型包括丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂或口服液；

[0009] 保健食品的剂型包括丸剂、片剂、胶囊、颗粒剂、混悬剂、口服液、灌肠剂或管饲制剂。

[0010] 本发明所述的Amuc_1098蛋白可通过工程菌大肠杆菌BL21表达纯化并大量扩增得到。

[0011] 本发明通过实验发现，所述Amuc_1098蛋白具有如下性能：

[0012] (1)改善急性胰腺炎小鼠的临床症状；

[0013] (2)改善急性胰腺炎小鼠体内炎症水平；

[0014] (3)减少小鼠胰腺腺泡细胞炎性因子的分泌。

[0015] 本发明提供阿克曼菌来源的Amuc_1098蛋白可用于改善全身和胰腺组织炎症方面的应用。

[0016] 本发明有益效果如下：

[0017] 阿克曼菌来源的Amuc_1098蛋白可以具有显著抑制全身和胰腺组织炎症的作用，在炎症相关性疾病中有一定的应用市场，为今后炎症相关性疾病的预防和治疗提供新线索和新思路。可作为当今有限后生元治疗手段的有益补充。附图说明

[0018] 图1为实施例1中阿克曼氏菌来源的Amuc_1098蛋白在急性胰腺炎小鼠中减轻脏器肿大的作用。图中，A为急性胰腺炎小鼠Amuc_1098蛋白干预后体重变化图；B‑E分别为Amuc_1098蛋白干预小鼠肺脏、脾脏、胰腺、肾脏重量。

[0019] 图2为实施例2中阿克曼氏菌来源的Amuc_1098蛋白在改善急性胰腺炎小鼠临床症状中的作用；图中，A‑B分别为血清中淀粉酶、脂肪酶含量；C为Amuc_1098蛋白干预急性胰腺炎小鼠的胰腺组织HE染色；D为胰腺组织病理评分统计图。

[0020] 图3为实施例3中阿克曼氏菌来源的Amuc_1098蛋白在减轻急性胰腺炎小鼠全身炎症方面的应用。图中，A‑D分别为Amuc_1098蛋白干预小鼠及急性胰腺炎小鼠血清炎症因子TNF‑α、IL‑1β、IL‑6、MCP1的含量。

[0021] 图4为实施例4中阿克曼氏菌来源的Amuc_1098蛋白在体外抑制小鼠胰腺腺泡细胞分泌炎症因子的应用。图中，体外雨蛙素诱导小鼠胰腺腺泡细胞模拟急性胰腺炎炎症环境，不同浓度Amuc_1098蛋白干预，A‑D分别为细胞培养上清炎症因子TNF‑α、IL‑1β、IL‑6、MCP1的含量。

[0022] 参照附图和具体实施例对本发明作进一步详细地描述。

[0023] 实施例1Amuc_1098蛋白减轻急性胰腺炎小鼠脏器肿大

[0024] 将6‑8周雄性C57BL6/J小鼠，随机分为3组(Control、AP、AP+Amuc_1098)，每组10只。小鼠适应性饲养一周后，Control组和AP组小鼠每天给予PBS灌胃，PBS灌胃量为每只小鼠100μL；AP+Amuc_1098组小鼠每天给予Amuc_1098蛋白灌胃，Amuc_1098蛋白剂量为每只小鼠3μg(3μg的Amuc_1098蛋白溶于100μL的PBS溶液中，然后灌胃小鼠100μL)。三组小鼠连续灌胃21天，每天称量并记录小鼠体重，在第21天时AP组和AP+Amuc_1098组小鼠每隔1小时腹腔注射一次雨蛙素溶液(5μg/kg)，连续注射10次，在第10次腹腔注射雨蛙素的同时注射一次脂多糖(5mg/kg)，由此构建急性胰腺炎小鼠模型。第22天解剖小鼠，称量三组小鼠肺脏、脾脏、胰腺和肾脏的重量。

[0025] 结果如图1A所示，与对组组(Control)相比，急性胰腺炎组(AP)小鼠体重无明显变化，Amuc_1098干预组(AP+Amuc_1098)小鼠体重有下降趋势。结果如图1B‑E所示，与Control相比，AP小鼠肺脏、脾脏、胰腺、肾脏重量显著上升，而Amuc_1098干预后的AP小鼠各脏器重量显著下降。这些数据表明，AP小鼠各脏器存在肿大的现象，而Amuc_1098干预能有效改变这一症状。

[0026] 实施例2Amuc_1098蛋白改善急性胰腺炎小鼠临床症状

[0027] 上述三组小鼠解剖前收集小鼠血液，室温静置2小时后，在4℃离心机中以4000rpm离心10分钟，取上清在Roche Cobas c 701/702仪器上检测淀粉酶和脂肪酶含量。小鼠的胰腺组织放入4％多聚甲醛溶液中固定48小时以上，将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整，将修切好的组织和对应的标签放于包埋盒内，将包埋盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精(50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％)进行脱水30分钟，然后放入梯度二甲苯(50％、100％)中分别5分钟，再包埋在优质石蜡中。将修整好的石蜡块置于石蜡切片机切片，厚4～5μm。切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平，用防脱载玻片将组织捞起，通风橱风干。组织玻片60℃烘干30min。石蜡切片依次用二甲苯、酒精脱蜡至水，最后用苏木素和伊红溶液染色。染色后用中性树胶进行脱水封片盖玻片粘在树胶上轻轻压平，片子风干后用数字切片扫描仪进行全景多层扫描，获得小鼠胰腺组织的全景图像，用SlideViewer软件分析。

[0028] 胰腺组织学评分具体包括以下4方面：

[0029]

[0030] 结果如图2A‑B所示，AP小鼠血清淀粉酶和脂肪酶含量显著增加，Amuc_1098干预后血清淀粉酶含量无明显改变；但是，AP小鼠经Amuc_1098干预后血清脂肪酶含量显著下降。如图2C所示，与对照组小鼠相比，AP小鼠胰腺小叶严重分离、缺失、大量积血、脓肿，而Amuc_
1098干预后能显著改善AP小鼠的胰腺病理状态。如图2D所示，胰腺组织学评分显示，与对照组小鼠相比，AP小鼠胰腺组织学评分显著增加，而Amuc_1098干预后能降低胰腺组织学评分至正常值。这些结果表明，Amuc_1098蛋白可以改善AP小鼠临床症状。

[0031] 实施例3：Amuc_1098蛋白减轻急性胰腺炎小鼠全身炎症

[0032] 按照实施例1中的干预方式，检测各组小鼠血清中的炎症因子。如图3A‑D所示，与对照组小鼠比较，AP小鼠血清炎症因子TNF‑α、IL‑1β、IL‑6、MCP1含量显著增加，而Amuc_1098干预后AP小鼠血清中的促炎因子明显降低至正常范围。这些结果表明，Amuc_1098蛋白可以减轻急性胰腺炎小鼠全身炎症。

[0033] 实施例4：体外Amuc_1098蛋白抑制小鼠胰腺腺泡细胞分泌炎性因子

[0034] 为了进一步验证Amuc_1098蛋白的抑制炎症效应，在体外用雨蛙素(100nM)刺激小鼠胰腺腺泡细胞(MPC‑83)24小时构建AP细胞模型，然后用不同浓度Amuc_1098蛋白(0.05/0.5/5/10μg/mL)干预72小时，结果如图4A‑D所示，与空白组(NC)相比，AP组MPC‑83细胞培养上清中炎症因子TNF‑α、IL‑1β、IL‑6、MCP1分泌量显著增加，而加入Amuc_1098蛋白干预后，这些炎症因子的分泌量明显下降。以上结果提示，Amuc_1098蛋白在体外可以抑制小鼠胰腺腺泡细胞分泌炎性因子。

[0035] 上述具体实施方式用来解释说明本发明，仅为本发明的优选实施例，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明做出的任何修改、等同替换、改进等，都落入本发明的保护范围。