一种促进骨骼健康的组合物及应用 |
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申请号 | CN202311783555.3 | 申请日 | 2023-12-22 | 公开(公告)号 | CN117887617A | 公开(公告)日 | 2024-04-16 |
申请人 | 君乐宝乳业集团股份有限公司; | 发明人 | 冯丽莉; 袁庆彬; 王新潮; 张莉静; 张栋; 郑磊; 潘彤媛; 宁一冰; 荀一萍; 薛玉玲; 魏立华; | ||||
摘要 | 本 发明 公开了一种促进骨骼健康的组合物及应用,属于微 生物 工程 技术领域。该组合物包括重量比为1:(0.3‑0.9):(0.4‑1.2)的短双歧杆菌i1088、 酪蛋白 磷酸 肽和2'‑岩藻糖基乳糖。本发明提供的一种促进骨骼健康的组合物,短双歧杆菌i1088、酪蛋白磷酸肽和2'‑岩藻糖基乳糖三者在促进骨骼生长发育方面具有协同增效作用,该组合物具有促进骨骼发育、 预防 骨骼发育迟缓作用,可应用于婴儿配方奶粉、儿童配方奶粉和保健食品中。 | ||||||
权利要求 | 1.一种促进骨骼健康的组合物,其特征在于,所述组合物包含短双歧杆菌i1088,所述短双歧杆菌i1088,该菌菌株已于2023年5月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心,保藏编号为CGMCC NO.27281,拉丁文名称是Bifidobacterium breve。 |
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说明书全文 | 一种促进骨骼健康的组合物及应用技术领域背景技术[0002] 骨骼是人体的支架,其生长发育不仅对人体形态有重要的影响,对内脏器官的发育、对人的劳动能力和运动能力都有直接影响,同时骨髓还肩负着重要的造血功能。因此,幼儿期骨骼发育情况决定着人体远期健康。据《中国儿童身高管理现状调研报告》显示,我国有54.2%的孩子身高都不达标。因此,在小儿发育时期,保护好孩子的骨骼,促进其骨骼正常发育非常重要。 [0003] 短双歧杆菌为双歧杆菌属细菌,呈革兰氏阳性,是天然存在于人结肠中的优势菌群,在调节肠道菌群平衡和促进肠道正常发育等方面具有重要作用。近年来,肠道菌群对于身体各项技能的调控作用被频繁报道,其促进骨骼发育功能也被学者发现。2'‑岩藻糖基乳糖(2'‑Fucosyllactose,2'‑FL)是母乳低聚糖中的一种,其对骨骼发育的促进作用也在相关实验中得到验证。酪蛋白磷酸肽(CPP)可促进小肠对钙质的吸收,还可增加骨骼和牙齿对钙的利用,对于儿童长牙齿和成骨都有很好的用处。上述成分都能够从母乳、婴幼儿奶粉或者牛奶中自然获取,但是儿童中骨骼发育迟缓症状仍有发生。鉴于2'‑FL与CPP其吸收和作用位点均在肠道,缺乏某种益生菌可能是问题的关键。 发明内容[0004] 本发明的目的,旨在要提供一种促进骨骼健康的组合物及应用,该组合物能够有效促进骨骼生长发育。 [0005] 为了实现上述目的,本发明采用的技术方案是: [0006] 一种促进骨骼健康的组合物,所述组合物包含短双歧杆菌i1088,所述短双歧杆菌i1088,该菌菌株已于2023年5月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心,保藏编号为CGMCC NO.27281,拉丁文名称是Bifidobacterium breve。 [0007] 其中,短双歧杆菌i1088的16SrDNA序列全长为1403bp,具体序列如SEQ ID NO.1所示,为: [0008] ACACATGCAGTCGAACGGGATCCATCAAGCTTGCTTGGTGGTGAGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATGCGTGACCGACCTGCCCCATGCACCGGAATAGCTCCTGGAAACGGGTGGTAATGCCGGATGCTCCATCACACTGCATGGTGTGTTGGGAAAGCCTTTGCGGCATGGGATGGGGTCGCGTCCTATCAGCTTGATGGCGGGGTAACGGCCCACCATGGCTTCGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGGAGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTTGTTAGGGAGCAAGGCATTTTGTGTTGAGTGTACCTTTCGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGTAGGCGGTTCGTCGCGTCCGGTGTGAAAGTCCATCGCTTAACGGTGGATCCGCGCCGGGTACGGGCGGGCTTGAGTGCGGTAGGGGAGACTGGAATTCCCGGTGTAACGGTGGAATGTGTAGATATCGGGAAGAACACCAATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCCGTTACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGATGCTGGATGTGGGGCCCGTTCCACGGGTTCCGTGTCGGAGCTAACGCGTTAAGCATCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGCTTGACATGTTCCCGACGACCCCAGAGATGGGGTTTCCCTTCGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTCGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCCGTGTTGCCAGCGGATTGTGCCGGGAACTCACGGGGGACCGCCGGGGTTAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAGATCATCATGCCCCTTACGTCCAGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAACGGGATGCGACAGCGCGAGCTGGAGCGGATCCCTGAAAACCGGTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGGCGGAGTCGCTAGTAATCGCGAATCAGCAACGTCGCGGTGAATGCGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCATGAAAGTGGGCAGCACCCGAAGCCGGTGGCCTAACCCCTTGCGGGAGGGAGCCGTC。 [0009] 短双歧杆菌i1088的tuf基因序列全长为979bp,具体序列如SEQ ID NO.2所示,为: [0010] TCAACATCGCCCACATCGAGTACCAGACCGAGAAGCGTCACTACGCTCACGTCGACTGCCCGGGCCACGCCGACTTCGTGAAGAACATGATCACCGGTGCTGCCCAGATGGATGGCGCCATCCTCGTTGTGGCCGCCACCGACGGCCCGATGGCTCAGACCCGCGAGCACGTGCTGCTCGCTCGTCAGGTGGGCGTCCCGAAGATCCTTGTCGCCCTGAACAAGTGCGACATGGTTGAGGATGAGGAGCTCATCGAGCTCGTCGAAGAAGAGGTCCGCGACCTCCTCGACGAGAACGGCTTCGACCGCGACTGCCCGGTCATCCACACCTCCGCTTACGGTGCTCTGCACGACGACGCTCCGGACCACGAGAAGTGGGTCCAGTCCGTTAAGGACCTCATGGACGCCGTCGACGACTACATCCCGACCCCGGTCCACGACCTCGACAAGCCGTTCCTGATGCCGATCGAGGACGTCTTCACCATCTCCGGCCGTGGTACCGTTGTCACCGGTCGTGTTGAGCGTGGCCAGCTGGCCGTCAACACTCCGGTCGAGATCGTTGGTATCCGTCCGACCCAGACCACCACCGTCACCTCCATCGAGACCTTCCACAAGACCATGGACGCCTGCGAGGCTGGCGACAACACCGGTCTGCTGCTGCGTGGTCTTGGCCGTGAAGATGTCGAGCGTGGCCAGGTTGTGGCCAAGCCGGGCTCCGTCACCCCGCACACCAAGTTCGAGGGCGAAGTCTACGTGCTGACCAAGGACGAGGGTGGCCGTCACTCGCCGTTCTTCTCCAACTACCGTCCGCAGTTCTACTTCCGTACCACCGACGTCACCGGCGTCATCGAGCTGCCGGAAAGGCGTCGAGATGGTTCAGCCGGGCGACCACGCTACCTTCACCGTTGAGCTGATTCAGCCCATCGCTATGGAGGAAGGCCTGACCTTCGCTGTGCGTGAAGTGGCCCCACCGTTGGCTC。 [0011] 作为一种限定,所述促进骨骼健康为促进骨骼发育。 [0012] 作为另一种限定,所述组合物包含短双歧杆菌i1088、酪蛋白磷酸肽和2'‑岩藻糖基乳糖。 [0013] 作为进一步限定,所述短双歧杆菌i1088、酪蛋白磷酸肽和2'‑岩藻糖基乳糖的重量比为1:(0.3‑0.9):(0.4‑1.2)。 [0014] 作为更进一步限定,所述短双歧杆菌i1088的活菌数为3.5×106‑1×107CFU/g。 [0015] 本发明还提供了上述的一种促进骨骼健康的组合物的应用,所述组合物用于制备具有促进骨骼健康功效的婴儿配方奶粉、儿童配方奶粉或保健食品。 [0016] 作为一种限定,所述组合物在婴儿配方奶粉、儿童配方奶粉或保健食品中的添加量为0.5wt%‑2.3wt%。 [0017] 本发明还提供了一种婴儿配方奶粉,包含上述的促进骨骼健康的组合物。 [0018] 本发明还提供了一种儿童配方奶粉,包含上述的促进骨骼健康的组合物。 [0019] 本发明还提供了一种保健食品,包含上述的促进骨骼健康的组合物[0020] 由于采用了上述技术方案,本发明与现有技术相比,所取得的技术进步在于: [0021] 本发明提供的一种促进骨骼健康的组合物,短双歧杆菌i1088能够显著增加骨密度、促进骨骼健康,同时能够调节骨代谢,改善骨质疏松,可应用于婴儿配方奶粉、儿童配方奶粉、中老年配方奶粉和保健食品中。短双歧杆菌i1088、酪蛋白磷酸肽和2'‑岩藻糖基乳糖三者在促进骨骼生长发育方面具有协同增效作用,该组合物具有促进骨骼发育、预防骨骼发育迟缓作用,可应用于婴儿配方奶粉、儿童配方奶粉和保健食品中。附图说明 [0023] 图2为本发明实施例1中处理后斑马鱼体长; [0024] 图3为本发明实施例2中处理后斑马鱼脊椎骨改善骨质疏松情况荧光强度图,图中虚线框为分析部位。 [0025] 图4为本发明实施例2中斑马鱼肠道菌群荧光强度。 具体实施方式[0026] 本发明提供的一种促进骨骼健康的组合物中,所使用的短双歧杆菌i1088为新菌株,该菌菌株已于2023年5月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心,保藏编号为CGMCC NO.27281,拉丁文名称是Bifidobacterium breve。 [0027] 该菌株的分离、纯化、鉴定实验如下: [0028] (一)短双歧杆菌i1088的分离纯化 [0029] (1)婴儿粪便来源 [0031] (2)菌株的分离和纯化 [0032] a.样品制备 [0033] 称取1g新鲜粪便,加入粪便稀释液,充分振荡混匀至粪便溶解后,得粪便溶液; [0034] b.样品富集 [0035] 将粪便溶液用粪便稀释液进行10倍梯度稀释,取10‑2稀释度的该粪便溶液200μL,均匀涂布于TOS培养基平板Ⅰ上,在37℃厌氧条件下培养72h; [0036] c.菌株分离 [0037] 挑取上述TOS培养基平板Ⅰ上的双歧杆菌单菌落,分离划线接种于新TOS培养基平板Ⅱ中,在37℃厌氧条件下培养48h,然后挑取该TOS培养基平板Ⅱ上的单菌落,继续划线接种到新的无菌固体MRS培养基平板上,连续培养三次至培养基内菌落形态一致,显微镜观察菌株细胞形态单一后,即获得待验证的单菌株,标记为i1088; [0038] d.单菌株扩配 [0039] 将上述待验证的单菌株i1088挑取至改良液体MRS培养基内,在37℃条件下培养48h,得到最终的纯培养菌株i1088; [0040] e.菌株保存 [0041] 取上述纯培养菌株i1088 800μL与灭菌的50%甘油混合,置于菌种保存管内,混匀后在‑80℃保存,同时接种改良MRS固体培养基试管斜面用于临时保存。 [0042] (二)短双歧杆菌i1088的鉴定 [0043] (1)菌株特性鉴定: [0044] 将步骤d得到的纯培养菌株i1088接种到MRS固体培养基平板上,在厌氧环境下划线倒置37℃培养72h,观察细胞形态并进行革兰氏染色、氧化酶检测、接触酶检测及碳水化合物产酸(API 50CH)等理化实验,结果如表1所示: [0045] 表1短双歧杆菌i1088细胞形态和理化实验结果表 [0046] [0047] (2)分子鉴定: [0048] 对步骤d得到的纯培养菌株i1088进行分子鉴定:以该纯培养菌株i1088基因组DNA为模板,用细菌16SrDNA通用引物扩增,得其16SrDNA序列,结果如SEQ ID NO.1所示,扩增其tuf基因序列,结果如SEQ ID NO.2所示。 [0049] 通过分析比对,该纯培养菌株i1088被鉴定为短双歧杆菌i1088,该菌株已保藏于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心,保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏日期是2023年5月8日,保藏编号为CGMCC NO.27281,拉丁名称为Bifidobacterium breve。 [0050] 下面通过具体实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解所描述的实施例仅用于解释本发明,并不限定本发明。 [0051] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为本领域常规方法。 [0052] 下述实施例中所使用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。 [0053] 下述实施例中短双歧杆菌A为商业途径获得,短双歧杆菌B为君乐宝菌种实验室自行筛选获得,其筛选方法与短双歧杆菌i1088相同。 [0054] 实施例1一种促进骨骼健康的组合物及应用 [0055] 本实施例提供了一种促进骨骼健康的组合物,包括重量比为1.04:0.32:1.15的短双歧杆菌i1088、酪蛋白磷酸肽和2'‑岩藻糖基乳糖,并验证了组合物促进骨骼健康的效果,具体验证实验如下: [0056] 实验动物: [0057] 斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质:每1L反渗透水中加入200mg速溶海盐,电导率为450‑550μS/cm;pH为6.5‑8.5;硬度为50‑100mg/L CaCO3),由本公司养鱼繁殖中心提供,实验动物使用许可证号为:SYXK(浙)2022‑0004,饲养管理符合国际AAALAC认证(认证编号:001458)的要求,IACUC伦理审查号:IACUC‑2023‑6993‑01; [0058] 野生型AB品系斑马鱼,以自然成对交配繁殖方式进行。 [0059] 一、促进幼鱼骨骼发育 [0060] 随机选取60尾年龄为3dpf的野生型AB品系斑马鱼,分别置于6个容量为20mL的烧杯中,每个烧杯均处理10尾斑马鱼,其中对照组不使用干预物,实验1‑5组分别水溶给予干预物(干预物的种类及浓度如表2所示,其中溶液密度为1,“CFU/mL”与“CFU/g”相同),于28℃处理72h后,收样,对照组及每个实验组均随机选取5尾斑马鱼,用茜素红染色后置于荧光显微镜下拍照,使用NIS‑Elements D 3.20高级图像处理软件分析并采集数据,分析斑马鱼脊椎骨荧光强度,以该指标的统计学分析结果评价样品促进幼鱼骨骼发育的功效,统计学处理结果采用mean±SE表示,用SPSS26.0软件进行统计学分析,p<0.05表明差异具有统计学意义,实验结果如表2、图1所示: [0061] 表2干预物用量及促进幼鱼生长发育功效实验结果 [0062] [0063] 注:**表示,与对照组比较,p<0.05;***表示,与对照组比较,p<0.001[0064] 由表2可知,在本实验条件下,实验1组、实验2组和实验3组相比于对照组均具有统计学差异,说明CPP和2'‑FL的组合物或短双歧杆菌在一定程度上均具有促进幼鱼骨骼发育的效果。 [0065] 但对比实验4组和实验1组、实验2组可知,普通的商业短双歧杆菌与CPP和2'‑FL形成的组合物,与单独使用商业短双歧杆菌或单独使用CPP和2'‑FL的组合物相比,在促进幼鱼骨骼发育方面并没有显著性差异。 [0066] 而对比实验5组(或实验6组)和实验1组、实验2组可知,短双歧杆菌i1088与CPP和2'‑FL形成的组合物,与单独使用短双歧杆菌i1088或单独使用CPP和2'‑FL的组合物相比,在促进幼鱼骨骼发育方面具有显著性差异,说明短双歧杆菌i1088、2’‑FL和CPP三者在促进幼鱼骨骼发育方面具有协同增效作用。 [0067] 对比实验5组和实验6组可知二者数据差异很小,说明当短双歧杆菌i1088、酪蛋白磷酸肽和2'‑岩藻糖基乳糖的重量比为1.04:0.32:1.15时,组合物即能发挥很好的促进骨骼发育的效果。 [0068] 二、促进骨骼发育 [0069] 随机选取70尾受精后6小时(6hpf)的野生型AB品系斑马鱼置于6孔板中,每孔均处理10尾斑马鱼,其中正常对照组不使用干预物,阳性对照组(Swisse“Calcium&VitaminD”,黄色胶囊,阴凉、干燥、避光储存,用标准稀释水配制成25.0mg/mL母液,现配现用)、实验1‑5组分别水溶给予干预物(干预物的种类及浓度如表3所示,其中溶液密度为1,“CFU/mL”与“CFU/g”相同),于28℃处理5d后,收样,正常对照组、阳性对照组及每个实验组均随机选取5尾斑马鱼,置于解剖显微镜下拍照,使用NIS‑Elements D 3.20高级图像处理软件分析并采集数据,分析斑马鱼体长,以该指标的统计学分析结果评价样品促进成鱼生长发育功效,统计学处理结果采用mean±SE表示,用SPSS26.0软件进行统计学分析,p<0.05表明差异具有统计学意义,实验结果如表3、图2所示: [0070] 表3干预物用量及促进生长发育功效实验结果 [0071] [0072] [0073] 注:**表示,与正常对照组相比,p<0.05;***表示,与正常对照组相比,p<0.001[0074] 由表3可知,实验1‑4组相对于正常对照组,均具有统计学差异,说明其均能在一定程度上均能促进成鱼生长发育,但相对于阳性对照组,其促进骨骼发育生长的效果不明显;而实验5组和实验6组相对于正常对照组具有显著性差异,相对于阳性对照组,数值也表现更好,说明短双歧杆菌i1088、CPP和2’‑FL的组合物在促进骨骼生长发育方面具有良好的效果。 [0075] 对比实验4组和实验5组或实验6组可知,短双歧杆菌i1088、CPP和2’‑FL的组合物相比于其他普通短双歧杆菌,三者在促进骨骼生长发育方面具有协同增效作用。 [0077] 经实验验证,短双歧杆菌i1088、CPP和2’‑FL的重量比在1:(0.3‑0.9):(0.4‑1.2)之间时,该组合物均能起到显著的促进骨骼发育的功效且对斑马鱼的健康状态无影响。 [0078] 本实施例还提供了一种促进骨骼健康的组合物的应用,它是将该组合物按照0.5wt%(组合物占婴儿配方奶粉的重量比)的添加量添加进婴儿配方奶粉中,使该婴儿配方奶粉具有促进骨骼生长发育的功效。 [0079] 经实验验证,短双歧杆菌i1088、CPP和2’‑FL的重量比在1:(0.3‑0.9):(0.4‑1.2)之间形成的组合物,按照0.5wt%‑2.3wt%(组合物占婴儿配方奶粉、儿童配方奶粉或保健食品的重量比)的添加量添加到婴儿配方奶粉、儿童配方奶粉或保健食品中,均可制备具有促进骨骼生长发育功效的婴儿配方奶粉、儿童配方奶粉或保健食品。 [0080] 实施例2一种促进骨骼健康的组合物及应用 [0081] 本实施例提供了一种改善骨质疏松的组合物,包括重量比为1.04:0.32:1.6的短双歧杆菌i1088、酪蛋白磷酸肽和钙,并验证了组合物改善骨质疏松的效果,具体验证实验如下: [0082] 实验动物: [0083] 斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质:每1L反渗透水中加入200mg速溶海盐,电导率为450‑550μS/cm;pH为6.5‑8.5;硬度为50‑100mg/L CaCO3),由本公司养鱼繁殖中心提供,实验动物使用许可证号为:SYXK(浙)2022‑0004,饲养管理符合国际AAALAC认证(认证编号:001458)的要求,IACUC伦理审查号:IACUC‑2023‑6993‑01; [0084] 野生型AB品系斑马鱼,以自然成对交配繁殖方式进行。 [0085] 一、抗骨质疏松 [0086] 随机选取60尾年龄为3dpf的野生型AB品系斑马鱼,分别置于6个容量为20mL的烧杯中,每个烧杯均处理10尾斑马鱼,分别水溶给予地塞米松建立斑马鱼骨质疏松模型。其中对照组不使用干预物,实验1‑5组分别水溶给予干预物(干预物的种类及浓度如表4所示,其中溶液密度为1,“CFU/mL”与“CFU/g”相同),于28℃处理96h后,收样,对照组及每个实验组均随机选取5尾斑马鱼,用茜素红染色后置于荧光显微镜下拍照,使用NIS‑Elements D 3.20高级图像处理软件分析并采集数据,分析斑马鱼脊椎骨荧光强度,以该指标的统计学分析结果评价样品抗骨质疏松的功效,统计学处理结果采用mean±SE表示,用SPSS26.0软件进行统计学分析,p<0.05表明差异具有统计学意义,实验结果如表4、图3所示: [0087] 表4干预物用量及抗骨质疏松功效实验结果 [0088] [0089] [0090] 注:**表示,与对照组比较,p<0.05;***表示,与对照组比较,p<0.001[0091] 由表4可知,在本实验条件下,实验4组的结果对比对照组、实验2组和实验3组均具有统计学差异,证明短双歧杆菌i1088具有显著的抗骨质疏松功效,且短双歧杆菌i1088相比于其他同属同种的短双歧杆菌,其抗骨质疏松效果显著;而实验1组对比对照组无明显差异,证明钙和酪蛋白磷酸肽的组合物抗骨质疏松功效不明显。 [0092] 对比实验5组、实验6组和实验7组可知,短双歧杆菌A与钙和酪蛋白磷酸肽的组合物、短双歧杆菌B与钙和酪蛋白磷酸肽的组合物、短双歧杆菌i1088与钙和酪蛋白磷酸肽的组合物相对于对照组均具有统计学差异,说明短双歧杆菌、钙和酪蛋白磷酸肽三者在抗骨质疏松方面具有协同增效作用,其可能是通过增加钙的吸收作用表现出显著的抗骨质疏松效果。而实验7组的效果又显著优于实验5组和实验6组,说明短双歧杆菌i1088、钙和酪蛋白磷酸肽之间具有协同增效作用,能极显著的抗骨质疏松。 [0093] 二、肠道定植效果 [0094] 随机选取40尾年龄为5dpf的野生型AB品系斑马鱼置于6孔板中,每孔均处理10尾斑马鱼,设置为实验组,分别水溶给予干预物(干预物的种类及浓度如表5所示,其中溶液密度为1,“CFU/mL”与“CFU/g”相同),其中,短双歧杆菌i1088和商业短双歧杆菌均使用DIO绿色荧光标记。 [0095] 于28℃处理24h后,移除干预物,然后在28℃下继续处理12h、24h和48h后,每个实验组分别随机选择5尾斑马鱼置于荧光显微镜下进行观察、拍照并保存图片,用NIS‑Elements D 3.20高级图像处理软件分析并采集数据,分析斑马鱼肠道荧光强度,以该指标的统计学分析结果评价样品肠道定植情况。 [0096] 统计学处理结果采用mean±SE表示,用SPSS26.0软件进行统计学分析,p<0.05表明差异具有统计学意义,检验结果如表5、图4所示: [0097] 表5干预物用量及肠道定植效果实验结果 [0098] [0099] 注:**表示,与同组0h比较,p<0.05;***表示,与同组0h相比,p<0.001[0100] 由表5可知,由实验1组、实验2组和实验3组可以看出,短双歧杆菌在超过12h时间内,菌含量均在统计学范围内下降,说明短双歧杆菌的肠道定植时间小于等于12h;由实验4组、实验5组和实验6组可知,相比于同属同种的其它短双歧杆菌,短双歧杆菌i1088与钙和酪蛋白磷酸肽的组合物,能显著增加短双歧杆菌i1088在肠道中的定植时间,使其在24h时仍与0h时菌含量没有统计学差异,且在48h时,才出现显著差异。 [0101] 益生菌主要通过抑制病原菌或与其竞争、增强肠道上皮的屏障功能、调节宿主免疫功能和参与肠‑脑轴调节来实现其益生作用。机体大部分益生菌存在于肠道,故其发挥益生作用的关键是能够有效在肠道内定植。通过分析结果不难得出,钙和酪蛋白磷酸肽的组合物能够显著延长短双歧杆菌i1088在斑马鱼肠道中的定植能力,其有效定植时间超过24h,显著高于单独使用短双歧杆菌i1088,因此能够有改善骨质疏松。 |