一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法
专利汇可以提供一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法及其体外活性，其关键在于，以可逆加成裂解链转移(RAFT)聚合反应为主，通过改变亲 水 嵌段与疏水嵌段比例合成不同的聚合前药，进一步用叶酸部分修饰合成pH刺激响应性和靶向性兼具的药物递送体系，实验表明该体系药载量高、 水溶性 好、毒 副作用 小，有效地提高了药物的利用率，具有精准、高效 治疗 癌症的潜能。，下面是一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：
(1) 亲水单体P(OEGMA)m的制备，其反应式如下所示，包含以下步骤：在氩气Ar，2-10Pa条件下，以CPPA-NHS为RAFT反应的大分子引发剂，与乙二醇甲基丙烯酸酯OEGMA一并溶于1,
4-二氧六环Dio中，加入偶氮二异丁腈AIBN后，冷冻－解冻循环三次，在70℃下避光反应
24h，用液氮冷冻以终止反应，解冻，加3 5mL甲醇稀释，用截留分子量MWCO为3500Da的透析~
袋在甲醇中透析24 h,浓缩后得到亲水单体P(OEGMA)m，其中m表示OEGMA的聚合度DP，它的范围为5 120；
~
(2) 两亲性单体P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n的制备，包含以下步骤：
a) MGMA的制备，其反应式如下所示，包含以下步骤：在冰浴温度≤0℃和氩气Ar，2-
10Pa条件下，羟基乙酸甲酯MG溶于含三乙胺TEA的二氯甲烷DCM溶液中并搅拌0.5h，然后将甲基丙烯酰氯MA溶于二氯甲烷DCM所形成的混合液缓慢加入，0.5h后置于室温下避光反应
12h，过滤除杂,用旋转蒸发仪浓缩溶剂，进一步以乙酸乙酯、正己烷为洗脱剂过硅胶柱除去二取代产物，用旋转蒸发仪浓缩所收集溶液即得纯的2-甲氧基-2-氧代乙基甲基丙烯酸酯MGMA；
b) P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n的制备，其反应式如下所示，包含以下步骤：在氩气Ar，2-
10Pa条件下，将步骤(1)制备的P(OEGMA)m 作为RAFT反应的大分子引发剂，与步骤(2)a)制备的MGMA一起溶于Dio中，加入AIBN后，冷冻－解冻循环三次，在70℃下避光反应24h，用液氮冷冻以终止反应，解冻，加3 5mL甲醇稀释，用MWCO为3500Da的透析袋在甲醇中透析24 h,~
浓缩后得到两亲性二嵌段聚合物P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n，其中n表示MGMA的聚合度DP，n的范围为10 120；
~
(3) 聚合前药P(OEGMA)m-b-PDOX的制备，其反应式如下所示，包含以下步骤：常温25℃，通氩气 Ar，2-10Pa条件下，将步骤(2)制备的二嵌段聚合单体P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n与单水合肼N2H4·H2O溶于N,N-二甲基甲酰胺DMF与甲醇形成的混合液中,避光反应12h,用MWCO为
3500Da的透析袋在水中透析24h后冷冻干燥48h得到含酰肼的两亲物P(OEGMA)m- b-hydrazide，将该物质与盐酸阿霉素DOX·HCl在氩气 Ar，2-10Pa条件下溶于含等体积甲醇与DMF的混合液中，加入1滴三氟乙酸TFA后避光室温25℃下反应48h，用MWCO为3500Da的透析袋在甲醇中透析，用旋转蒸发仪浓缩后即得到聚合前药P(OEGMA)m-b-PDOX，简称为OM@DOX；
(4) pH刺激响应性聚合前药OM@DOX纳米胶束的制备，包含以下步骤：取步骤(3)制备的聚合物前药OM@DOX，将OM@DOX溶于含TEA的DMF混合液中，搅拌0.5h后，缓慢滴加至二次水中并搅拌0.5h,用MWCO为3500Da的透析袋在水中透析24h除去有机溶剂，即得到OM@DOX纳米胶束水溶液。
2.一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法，其特征在于该聚合前药还具有靶向性：包含以下步骤：
(I) FA-NH2的制备，其反应式如下所示，包含以下步骤：在冰浴温度≤0℃和氩气Ar，2-
10Pa条件下，将具有靶向性的叶酸FA溶于无水的DMF中，加入催化剂1-(3-二甲氨基丙基)-
3-乙基碳二亚胺EDC和N-羟基硫代琥珀酰亚胺NHS，搅拌0.5h后，加入N-叔丁氧羰基-1,6-己二胺NH2-BOC溶于含TEA的DMF的混合液，在室温25℃下反应24h，缓慢滴加至不断搅拌的二次水中，过滤，真空干燥后得到氨基被叔丁氧羰基保护的FA-NH-BOC，加入DCM和TFA溶剂并搅拌0.5h，浓缩，加入DCM及TEA，避光室温25℃下搅拌24h,转速设为5000r/min 离心3min,用DCM洗两次，真空干燥后得到FA-NH2；
(II) FA-P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n的制备，其反应式如下所示，包含以下步骤：在室温25℃通氩气Ar，2-10Pa条件下将权利要求1中步骤(2)制备的二嵌段聚合物P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n与步骤(I)制备的FA-NH2溶于含TEA的无水二甲亚砜DMSO溶液中，避光反应48h后，缓慢滴加至乙醚中沉淀，真空干燥得到接叶酸的两亲性聚合物FA-P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n；
(III) 聚合前药FA-P(OEGMA)m-b-PDOX的制备，其反应式如下所示，包含以下步骤：常温
25℃，通氩气 Ar，2-10Pa条件下，将步骤(II)中制备的二嵌段共聚物FA-P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n与单水合肼N2H4·H2O溶于N,N-二甲基甲酰胺DMF与甲醇形成的混合液中,避光反应
12h,用MWCO为3500Da的透析袋在水中透析24h后冷冻干燥48h得到含酰肼的两亲物FA-P(OEGMA)m-b-hydrazide，将该物质与DOX·HCl在氩气 Ar，2-10Pa条件下溶于含等体积甲醇与DMF的混合液中，加入1滴三氟乙酸TFA后避光室温25℃下反应48h，用MWCO为3500Da的透析袋在甲醇中透析，用旋转蒸发仪浓缩后即得到聚合前药FA-P(OEGMA)m-b-PDOX，记为FA-OM@DOX；
(IV) pH刺激响应性聚合前药FA-OM@DOX纳米胶束的制备，包含以下步骤：取步骤(III)制备的聚合前药FA-OM@DOX，将FA-OM@DOX溶于含TEA的DMF混合液中，搅拌0.5h后，缓慢滴加至二次水中并搅拌0.5h,用MWCO为3500Da的透析袋在水中透析24h除去有机溶剂，即得到FA-OM@DOX的纳米胶束水溶液。
3.根据权利要求1所述的一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中AIBN、CPPA-NHS和OEGMA的摩尔浓度比为1：(2.4～6.7) :(8～24)。
4.根据权利要求1所述的一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)a)中TEA与DCM的体积比范围为1:(2～4.5)；所述步骤(2)a)中MG和MA的摩尔浓度范围比为1：(1.7～2.3) ；所述步骤(2)a)中乙酸乙酯和正己烷的体积比为1:
(3.62～4.8); 所述步骤(2)b)中P(OEGMA)m 和MGMA摩尔浓度比为1：(10～80)。
5.根据权利要求1所述的一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中 P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n、P(OEGMA)m-b-hydrazide和DOX·HCl的摩尔浓度比为1：(1.2～3.6):(1.4～5.1)；所述步骤(3)中N2H4·H2O、甲醇、DMF和TFA的体积比为1:(6～10):(2～7):(0.1～0.4)。
6.根据权利要求2所述的一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(I)中FA、EDC、NHS、NH2-BOC和TEA的摩尔浓度比范围为1：(1.01～1.2):
(1.04～1.3):(1.8～2.4) (1.4～2.2)；所述步骤(I) 中DCM、TFA和TEA的体积比范围为1:
(0.92～1.08):(1.8～2.4)；所述步骤(II) 中P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n、FA-NH2和TEA的摩尔浓度比范围为1:(1.01～1.2) :(1.01～1.2)；所述步骤(III)中FA-P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n、 FA-P(OEGMA)m-b-hydrazide和DOX·HCl的摩尔浓度比范围为1：(1.2～3.6):(1.4～5.1)；
所述步骤(III)中N2H4·H2O、甲醇、DMF和TFA的体积比范围为1:(6～10):(2～7):(0.1～
0.4)。
7.根据权利要求1所述的一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中聚合前药中阿霉素的浓度范围为0.01mg·L-1～0.05 mg·L-1;所述步骤(4)中DMF和水的体积比范围为1：(6～500);所述步骤(4)中透析后所得的纳米胶束粒径范围为10 1000nm。
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8.根据权利要求2所述的一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法，其特征在于：所述步骤(IV)中聚合前药中阿霉素的浓度范围为0.01mg·L-1～0.05 mg·L-1;所述步骤(IV)中DMF和水的体积比范围为1：(6～500);所述 (IV)中透析后所得的纳米胶束粒径范围为10 1000nm。
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9.根据权利要求1-8任一项所述方法制备pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药。
一种pH刺激响应性的线形二嵌段聚合前药的制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
析袋在甲醇中透析24h,浓缩后得到亲水单体P(OEGMA)m，其中m表示OEGMA的聚合度DP，它的范围为5 120；
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12h，过滤除杂,用旋转蒸发仪浓缩溶剂，进一步以乙酸乙酯、正己烷为洗脱剂过硅胶柱除去二取代产物，用旋转蒸发仪浓缩所收集溶液即得纯的2-甲氧基-2-氧代乙基甲基丙烯酸酯MGMA；
浓缩后得到两亲性二嵌段聚合物P(OEGMA)m-b-P(MGMA)n，其中n表示MGMA的聚合度DP，n的范围为10 120；
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12h,用MWCO为3500Da的透析袋在水中透析24h后冷冻干燥48h得到含酰肼的两亲物FA-P(OEGMA)m-b-hydrazide。将该物质与DOX·HCl在氩气Ar，2-10Pa条件下溶于含等体积甲醇与DMF的混合液中，加入1滴三氟乙酸TFA后避光室温25℃反应48h，用MWCO为3500Da的透析袋在甲醇中透析，用旋转蒸发仪浓缩后即得到聚合前药FA-P(OEGMA)m-b-PDOX，记为FA-OM@DOX；
具体实施方式
6A)中宫颈癌细胞Hela存活率为16.2%，从图6(B)中可以看出对正常细胞的L929毒副作用较小。
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