哺乳动物的类固醇代谢物
阅读：593发布：2020-05-13
专利汇可以提供哺乳动物的类固醇代谢物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且在特定实施方式中，此处描述了类固醇衍 生物 、制备这类化合物的方法、包含这类化合物的药物组合物和药物以及使用这类化合物 治疗 雄 激素 受体介导的 疾病 或病症的方法。，下面是哺乳动物的类固醇代谢物专利的具体信息内容。
1.式(33)或(53)的化合物
或其药学可接受的盐。
2.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(33)：
3.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(53)：
4.一种组合物，包含权利要求1-3中任一项的化合物。
5.一种药物组合物，包含
a)式(33)或(53)的化合物
或其药学可接受的盐；以及
b) 或其药学可接受的盐。
6.如权利要求5所述的药物组合物，所述组合物包括
a)式(33)的化合物
或其药学可接受的盐；以及
b) 或其药学可接受的盐。
7.如权利要求5所述的药物组合物，所述组合物包括
a)式(53)的化合物
或其药学可接受的盐；以及
b) 或其药学可接受的盐。
8.如权利要求5-7中任一项所述的药物组合物，其中所述化合物以用于治疗前列腺癌的治疗有效量存在。
9.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述前列腺癌是去势抗性前列腺癌。
10.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述化合物抑制雄激素生物合成。
11.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述化合物抑制雄激素受体信号传导。
12.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述化合物降低雄激素受体敏感性。
13.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述组合物还包括治疗有效量的用于治疗前列腺癌的第二物质。
14.权利要求1-3中任一项的化合物在制备用于治疗前列腺癌的药物中的用途。
15.如权利要求14所述的用途，其中所述前列腺癌是去势抗性前列腺癌。
哺乳动物的类固醇代谢物
技术领域
[0002] 发明背景
[0003] 前列腺癌是男性中最常见的癌症，在2009年导致超过27,360人死亡(国立癌症研究所，2009)。大部分的前列腺癌死亡是由于转移性疾病的发展，其对于常规的雄激素剥夺疗法没有响应。自二十世纪四十年代以来，雄激素剥夺疗法已经成为前列腺癌患者的治疗标准。大部分患者尽管进行了雄激素剥夺，最终仍经历疾病恶化。多年来，该病的较晚期被称为“激素不敏感的前列腺癌”或“非雄激素依赖型前列腺癌”。后来了解，在雄激素剥夺疗法后数年出现的前列腺癌仍然依赖于雄激素。幸存的前列腺癌细胞获得了引入低水平的循环雄激素（由肾上腺表达）的能力，变得对这些低水平的睾酮更加敏感，实际上在前列腺癌细胞自身内合成睾酮。这个阶段的前列腺癌现在被称作“去势抗性前列腺癌（castration resistant prostate cancer）或CRPC。
[0004] 发明概述
[0005] 在特定实施方式中，此处描述了化合物、制备这类化合物的方法、包含这类化合物的药物组合物和药物以及使用这类化合物治疗雄激素受体介导的疾病或病症的方法。
[0007]
[0008] 其中，
[0009] (a)ABCD环结构和/或一个或两个甲基独立地任选地被一个或多个选自C1-C6-烷基、卤代的C1-C6-烷基、C1-C6-烯基、卤代的C1-C6-烯基、卤素、氨基、氨基亚烷基、肟基、n,n+1-环氧基、羰基(氧代)、葡糖苷酸基（glucuronido）、葡萄糖醛酸酯基（glucuronato）、O-连接的硫酸酯和羟基的取代基所取代；
[0010] (b)X是葡糖苷酸基、葡萄糖醛酸酯基、O-连接的硫酸酯、OH或O；以及
[0011] (c)每个存在的虚线独立地是双键或单键，
[0012] 其中所述化合物不是：
[0013] 并且其中将药物施用于个体后在体内形成所述化合物。
[0014] 在一些实施方式中，本发明提供了包含有效量的化合物的药物组合物，其中当该组合物施用于个体后，该化合物产生式(1)的代谢物或其药学可接受的盐或N-氧化物：
[0015]
[0016] 其中，
[0017] (a)ABCD环结构和/或一个或两个甲基独立地任选地被一个或多个选自C1-C6-烷基、卤代的C1-C6-烷基、C1-C6-烯基、卤代的C1-C6-烯基、卤素、氨基、氨基亚烷基、肟基、n,n+1-环氧基、羰基(氧代)、葡糖苷酸 基、葡萄糖醛酸酯基、O-连接的硫酸酯和羟基的取代基所取代；
[0018] (b)X是葡糖苷酸基、葡萄糖醛酸酯基、O-连接的硫酸酯、OH或O；
[0019] 以及
[0020] (c)每个存在的虚线独立地是双键或单键，
[0021] 其中无论该化合物还是该代谢物都不是：
[0022] 其中，该代谢物对于治疗雄激素受体介导的疾病或病症是有效的。
[0023] 在一些实施方式中，本发明提供了治疗雄激素受体介导的疾病或病症的方法，该方法包括将治疗有效量的化合物或其药学可接受的盐或N-氧化物施用于需要其的患者以抑制雄激素的生物合成、抑制雄激素受体的信号传导及降低雄激素受体的敏感性，其中在所述化合物施用于个体后所述化合物产生代谢物或其药学可接受的盐或N-氧化物，其中所述代谢物具有式(1)的结构，
[0024]
[0025] 其中，
[0026] (a)ABCD环结构和/或一个或两个甲基独立地任选地被一个或多个选自C1-C6-烷基、卤代的C1-C6-烷基、C1-C6-烯基、卤代的C1-C6-烯基、卤素、氨基、氨基亚烷基、肟基、n,n+1-环氧基、羰基(氧代)、葡糖苷酸基、葡萄糖醛酸酯基、O-连接的硫酸酯和羟基的取代基所取代；
[0027] (b)X是葡糖苷酸基、葡萄糖醛酸酯基、O-连接的硫酸酯、OH或O；
[0028] 以及
[0029] (c)每个存在的虚线独立地是双键或单键，其中该化合物或该代谢物都不是：
[0030] 在一些实施方式中，本发明提供了具有式(1)结构的化合物或化合物的药学可接受的盐或N-氧化物
[0031]
[0032] 其中，
[0033] (a)ABCD环结构和/或一个或两个甲基独立地被两个选自n,n+1环氧基、氧基和羟基的取代基所取代，
[0034] (b)X是葡糖苷酸基、葡萄糖醛酸酯基、O-连接的硫酸酯、OH或O；
[0035] 以及
[0036] (c)每个存在的虚线独立地是双键或单键，
[0037] 其中该化合物不是：
[0038] 并且其中在将药物施用于个体后在体内形成该化合物。
[0039] 在一些实施方式中，本发明提供了具有式(1)结构的化合物或化合物的药学可接受的盐或N-氧化物
[0040]
[0041] 其中，
[0042] (a)ABCD环结构和一个甲基独立地被一个选自n，n+1环氧基、氧基和羟基的取代基所取代，
[0043] (b)X是葡糖苷酸基、葡萄糖醛酸酯基、O-连接的硫酸酯、OH或O；
[0044] 以及
[0045] (c)每个存在的虚线独立地是双键或单键，
[0046] 其中该化合物不是：
[0047] 其中在将药物施用于个体后在体内形成该化合物。
[0050] 图1的表格是10μm化合物(1)与0.1M磷酸盐缓冲液和合并的大鼠肝微粒体在存在和缺乏还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)-生成系统的情况下孵育后，在各个时间点，化合物(1)的浓度和其可能的代谢物。
[0051] 图2的表格是10μM化合物(1)与0.1M磷酸盐缓冲液、3mM MgCl2、1mM EDTA和合并的大鼠肝微粒体在存在和缺乏NADPH-生成系统的情况下孵育后，在各个时间点化合物(1)的浓度和其可能的代谢物。
[0052] 图3的表格是10μM化合物(1)与0.1M磷酸盐缓冲液和合并的狗肝微粒体在存在和缺乏NADPH-生成系统的情况下孵育后，在各个时间点化合物(1)的浓度和其可能的代谢物。
[0053] 图4的表格是10μM化合物(1)与0.1M磷酸盐缓冲液、3mM MgCl2、1mM EDTA和合并的狗肝微粒体在存在和缺乏NADPH-生成系统的情况下孵育后，在各个时间点化合物(1)的浓度和其可能的代谢物。
[0054] 图5的表格是10μM化合物(1)与0.1M磷酸盐缓冲液和合并的猴肝微粒体在存在和缺乏NADPH-生成系统的情况下孵育后，在各个时间点化合物(1)的浓度和其可能的代谢物。
[0055] 图6的表格是10μM化合物(1)与0.1M磷酸盐缓冲液、3mM MgCl2、1mM EDTA和合并的猴肝微粒体在存在和缺乏NADPH-生成系统的情况下孵育后，在各个时间点化合物(1)的浓度和其可能的代谢物。
[0056] 图7的表格是10μM化合物(1)与0.1M磷酸盐缓冲液和合并的人肝微粒体在存在和缺乏NADPH-生成系统的情况下孵育后，在各个时间点化合物(1)的浓度和其可能的代谢物。
[0057] 图8的表格是10μM化合物(1)与0.1M磷酸盐缓冲液、3mM MgCl2、1mM EDTA和合并的人肝微粒体在存在和缺乏NADPH-生成系统的情况下孵育后，在各个时间点化合物(1)的浓度和其可能的代谢物。
[0058] 图9是化合物(1)的代表性色谱图(m/z 389)。
[0059] 图10是10μM化合物(1)在大鼠肝微粒体中孵育长达120分钟的代表性色谱图(m/z 405)。
[0060] 图11是10μM化合物(1)在大鼠肝微粒体中孵育长达120分钟的代表性色谱图(m/z 421)。
[0061] 图12是10μM化合物(1)在大鼠肝微粒体中与EDTA和MgCl2孵育长达120分钟的代表性色谱图(m/z 405)。
[0062] 图13是10μM化合物(1)在大鼠肝微粒体中与EDTA和MgCl2孵育长达120分钟的代表性色谱图(m/z 421)。
[0063] 图14是10μM化合物(1)在狗肝微粒体中孵育长达120分钟的代表性色谱图(m/z 405)。
[0064] 图15是10μM化合物(1)在狗肝微粒体中孵育长达120分钟的代表性色谱图(m/z 421)。
[0065] 图16是10μM化合物(1)在狗肝微粒体中与EDTA和MgCl2孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 405)。
[0066] 图17是10μM化合物(1)在狗肝微粒体中与EDTA和MgCl2孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 421)。
[0067] 图18是10μM化合物(1)在猴肝微粒体中孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 405)。
[0068] 图19是10μM化合物(1)在猴肝微粒体中孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 421)。
[0069] 图20是10μM化合物(1)在猴肝微粒体中与EDTA和MgCl2孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 405)。
[0070] 图21是10μM化合物(1)在猴肝微粒体中与EDTA和MgCl2孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 421)。
[0071] 图22是10μM化合物(1)在人肝微粒体中孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 405)。
[0072] 图23是10μM化合物(1)在人肝微粒体中孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 421)。
[0073] 图24是10μM化合物(1)在人肝微粒体中与EDTA和MgCl2孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 405)。
[0074] 图25是10μM化合物(1)在人肝微粒体中与EDTA和MgCl2孵育长达120分钟的代表性色谱图(SIR m/z 421)。
[0076] 图27是来自猴血浆的母体化合物在0.1%甲酸的水溶液和0.1%甲酸的乙腈溶液中的色谱图。
[0077] 图28是采用优化的HPLC参数来自猴血浆的母体化合物在0.1%甲酸的水溶液和0.1%甲酸的乙腈溶液中的色谱图。
[0078] 图29是人血浆中母体化合物的校正曲线。
[0079] 图30是直接输注的母体化合物的片段化图谱。
[0080] 图31是0.417ng/mL母体化合物在分析方法稀释剂中的片段化图谱。
[0081] 图32是5ng/mL母体化合物在人血浆中的片段化模式。
[0082] 图33是10ng/mL母体化合物在人血浆中的片段化模式。
[0083] 图34是显示提取的食蟹猴血浆中MRM 389至195的色谱图。
[0084] 图35是显示标准品1（Std.1）的MRM 389至195的色谱图。
[0085] 图36是显示标准品2（Std.2）的MRM 389至195的色谱图。
[0086] 图37是显示标准品3（Std.3）的MRM 389至195的色谱图。
[0087] 图38是显示标准品5（Std.5）的MRM 389至195的色谱图。
[0088] 图39是显示标准品6（Std.6）的MRM 389至195的色谱图。
[0089] 图40是显示标准品7（Std.7）的MRM 389至195的色谱图。
[0090] 图41是采用为母体化合物而优化的MS/MS参数，母体化合物的产物离子光谱。
[0091] 图42是采用为母体化合物而优化的MS/MS参数，标准品1（Std.1）的产物离子光谱。
[0092] 发明详述
[0093] 某些化学术语
[0094] 除非另外说明，本申请（包括说明书和权利要求）中所用的下列术语具有以下给出的定义。必须注意的是，说明书和附加权利要求中所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数对象，除非在上下文中另外清楚地指出。在参考文献中可以找到标准化学术语的定TH义，包括Carey和Sundberg“ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4 ED.”卷A (2000)和B(2001)，Plenum Press,New York，其通过引用整体并入本文。除非另外说明，采用在本领域技术范围内的质谱学、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药学的常规方法。
[0095] 此处所用的术语“烯基”是指其中有一个或多个双键的烃链。烯基的双键可以未共轭或与另一个不饱和基团共轭。合适的烯基包括但不限于 (C2-C8)烯基，如乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基、己烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基、2-乙基己烯基、2-丙基-2-丁烯基、4-(2-甲基-3-丁烯)-戊烯基。烯基部分可以是支链、直链或环状的(在这种情况下，它也可被称为“环烯基”基团)，并且可以是未取代的或取代的。
[0096] 此处所用的术语“烷氧基”包括-O-(烷基)，其中烷基如此处所定义。仅仅作为示例，C1-6烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基等。烷氧基可以是未取代的或取代的。
[0097] 此处所用的术语“烷基”是指具有1-10个碳原子的烃基，可以包括直链的、支链的、环状的、饱和的和/或不饱和的特征。无论在本文哪里出现，数值范围如“1-10”是指在给定范围内的每个整数；例如，“1-10个碳原子”或“C1-10”或“(C1-C10)”是指烷基可能由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等、直至并包括10个碳原子组成，尽管本定义也涵盖出现的没有指定数值范围的术语“烷基”。烷基部分可以是“饱和烷基”基团，这意味着它不包含烯烃或炔烃部分。代表性的饱和烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-1-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和正己基以及更长的烷基，如庚基和辛基。烷基部分也可以是“不饱和烷基”基团，这意味着它包含至少一个烯烃或至少一个炔烃部分。“烯烃”部分是指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的基团，“炔烃”部分是指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳叁键组成的基团。代表性的不饱和烷基包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、炔丙基等。烷基可以是未取代的或取代的。取代的烷基包括但不限于卤素取代的烷基，如，仅仅作为示例，三氟甲基、五氟乙基等。
[0098] 此处所用的术语“炔基”是指其中具有一个或多个叁键的烃链。炔基的叁键可以未共轭或与另一个不饱和基团共轭。合适的炔基包括但不限于(C2-C6)炔基，如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、甲基丙 炔基、4-甲基-1-丁炔基、4-丙基-2-戊炔基和4-丁基-2-己炔基。炔基可以是支链的或直链的，可以是未取代的或取代的。
[0099] 此处所用的术语“酯”是指具有式-COOR的化学部分，其中R选自烷基、环烷基、芳基和杂环基团(通过环上的碳键合)。此处所述的化合物上的任何羟基或羧基侧链都可以被酯化。制备这类酯的实验方法和特定基团是本领域技术人员已知的，并且可容易地在rd参考文献资源中找到，如Greene和Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,3 Ed.,John Wiley&Sons,New York，NY,1999，其通过引用整体并入本文。酯基可以是未取代的或取代的。
[0100] 此处所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。优选的卤素基团是氟、氯和溴。
[0102] 术语“卤代烷基”、“卤代烯基”、“卤代炔基”和“卤代烷氧基”包括被一个或多个卤素基团或其组合所取代的烷基、烯基、炔基和烷氧基结构。
[0103] 此处所用的术语“葡糖苷酸”、“葡糖苷酸基（glucuronido）”和类似术语是指通过如下示例的键或在2、3或4羟基位置的葡萄糖醛酸连接：
[0104]
[0105] 此处所用的术语“葡萄糖醛酸酯”、“葡萄糖醛酸酯基（glucuronato）”和类似术语是指通过如下示例的键的葡萄糖醛酸连接：
[0106]
[0107] 此处所用的术语“元环”可以包括任何环状结构。术语“元”表示构成环的骨架原子的数目。因此，例如，环己基、吡啶、吡喃和噻喃是6元环，而环戊基、吡咯、咪唑、呋喃和噻吩是5元环。
[0108] 此处所用的术语“部分”是指分子的特定片段或官能团。化学部分是通常公认的嵌入或连接到分子的化学实体。
[0109] 此处所用的术语“保护基团”是指封闭一些或所有反应性部分并选择性防止这些基团参与化学反应直至该保护基团被去除的化学部分。
[0111] 除非另外说明，当取代基被认为“任选地被取代”时，意味着该取代基是可以被例如选自下列基团的一个或多个基团单独且独立地取代的基团：烯基、烷基、烷氧基、烷基胺、烷硫基、炔基、酰胺基、氨基（包括单和二取代的氨基）、芳基、芳氧基、芳硫基、羰基、碳环基、氰基、环烷基、卤素、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基、杂环基、羟基、异氰酸基、异硫氰酸基、巯基、硝基、O-氨甲酰基、N-氨甲酰基、O-硫代氨甲酰基、N-硫代氨甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-磺酰胺基、N-磺酰胺基、C-羧基、O-羧基、全卤代烷基、全氟代烷基、甲硅烷基、磺酰基、硫代羰基、硫氰酰基、三卤代甲磺酰基，及其被保护的化合物。可以形成上述取代基的被保护的化合物的保护基团是本领域技术人员已知的，并且可在参考文献中找到，如Greenerd和Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3 Ed.，John Wiley&Sons，New York，NY，1999，和Kocienski，Protective Groups，Thieme Verlag，New York，NY，1994，其通过引用整体并入本文。
[0112] 某些药学术语
[0113] 此处所用的关于制剂、组合物或组分的术语“可接受的”是指对被治疗的个体的一般健康没有持续的不利影响。
[0114] 此处所用的术语“激动剂”是指增强另一种分子的活性或受体位点的活性的分子，如化合物、药物、酶激活剂或激素调节剂。
[0115] 此处所用的术语“拮抗剂”是指减弱或阻止另一种分子的作用或受体位点的活性的分子，如化合物、药物、酶抑制剂或激素调节剂。
[0116] 此处所用的术语“载体”是指帮助化合物进入细胞或组织的相对无毒的化学化合物或试剂。
[0117] 此处所用的术语“共同施用”或类似术语包括将选择的多种治疗剂施用于单个患者，并且包括通过相同或不同的施用途径或同时或不同时地施用药剂的治疗方案。
[0118] 此处所用的术语“有效量”或“治疗有效量”是指可以在某种程度上减轻所治疗的疾病或病症的一种或多种症状的药剂或化合物的足够的给药量。结果可以是疾病的指征、症状或病因的下降和/或减轻，或生物系统的其它任何期望的改变。例如，对于治疗用途的“有效量”是在疾病中提供临床显著性降低所需的包含此处公开的化合物的组合物的量。使用例如剂量递增研究等技术可以确定在任何个例中的适宜的“有效”量。
[0119] 此处所用的术语“增强”是指所需效果的效能或持续时间的增加或延长。因此，关于增强治疗剂的效果的术语“增强”是指或在效能或在持续时间上增加或延长其它治疗剂对系统的效果的能力。此处所用的术语“增强性有效量”是指足以增加另一种治疗剂在期望的系统中的效果的量。
[0120] 术语“试剂盒”和“制品”被作为同义使用。
[0121] 此处所用的术语“代谢物”是指当化合物被代谢时形成的化合物的衍生物。也可以在用光谱学和其它分析手段确定它们的结构后，用精细的化学合成方法产生所述代谢物。
[0122] 此处所用的术语“活性代谢物”是指当化合物被代谢时形成的化合物的生物活性衍生物。
[0123] 此处所用的术语“代谢”是指特定物质被生物体改变的过程总和（包括但不限于水解反应和酶催化的反应）。因此，酶可能对化合物产生特异性的结构改变。例如，细胞色素P450催化多种氧化和还原反应，而尿苷二磷酸葡糖醛酸基转移酶催化活化的葡萄糖醛酸分子向芳族醇、脂族醇、羧酸、胺类和游离巯基的转化。关于代谢的更多信息可以从The Pharmacological Basis of Therapeutics，9th Edition，McGraw-Hill(1996)获得。
[0124] 此处所用的术语“调节”是指与靶标直接或间接相互作用以改变靶标的活性，包括，仅仅作为示例，增强靶标的活性，抑制靶标的活性，限制靶标的活性，或扩展靶标的活性。
[0125] 此处所用的术语“调节剂”是指与靶标直接或间接相互作用的分子。该相互作用包括但不限于激动剂和拮抗剂的相互作用。
[0126] 此处所用的“药学可接受的”是指一种物质，如载体或稀释剂，其不破坏化合物的生物活性或特性，并且相对无毒，即，该物质可以施用于个体，而不产生不期望的生物学效果或不与含有该化合物的组合物中的任何组分以有害的方式相互作用。
[0127] 此处所用的术语化合物的“药学可接受的盐”是指药学上可接受的盐。
[0128] 此处所用的术语“药物组合”是指将超过一种活性组分混合或组合产生的产物，包括活性组分的固定的和非固定的组合。此处所用的术语“固定的组合”是指将活性组分，例如式(1)的化合物和共同药剂，以单一实体或剂量的形式同时施用于患者。术语“非固定的组合”是指将活性组分，例如式(1)的化合物和共同药剂，以分开的实体同时、共同或没有特定间隔时限地顺序地施用于患者，其中这种施用在患者身体中提供了有效水平的两种化合物。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如三种或更多种活性组分的施用。
[0129] 此处所用的术语“药物组合物”是指一种或多种活性化合物与其它化学组分如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂的混合物。
[0130] 术语“个体”或“患者”包括哺乳动物或非哺乳动物。哺乳动物的例子包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人类、非人灵长类如黑猩猩和其它猿和猴种；农畜，如牛、马、绵羊、山羊、猪；家畜，如兔、狗和猫；实验动物，包括啮齿类动物，如大鼠、小鼠、豚鼠等。非哺乳动物的例子包括但不限于鸟、鱼等。在此处提供的方法和组合物的一个实施方式中，哺乳动物是人。
[0131] 此处所用的术语“治疗”包括减轻、减缓或改善疾病或病症的症状，预防额外的症状，改善或预防症状潜在的代谢性病因，抑制疾病或病症，例如阻止疾病或病症的发展，减轻疾病或病症，使疾病或病症消退，减轻由疾病或病症导致的症状，或阻止疾病或病状的症状。
[0132] 示例性的生物活性
[0133] 雄激素受体(AR)
[0134] 雄激素结合于靶组织细胞内的特异性受体——雄激素受体(AR)。AR在体内许多组织中表达，并且内源雄激素配体如睾酮(T)和二氢睾酮(DHT)的生理学以及病理生理学效应通过该受体表达。AR在结构上由三个主要的功能结构域组成：配体结合结构域(LBD)、DNA结合结构域和氨基端结构域。结合于AR并模拟内源AR配体效应的化合物被称为AR激动剂，而抑制内源AR配体效应的化合物被称为AR拮抗剂。雄激素与受体的结合使之活化并使之结合于邻近靶基因的DNA结合位点。在那里它与共激活剂蛋白和基础转录因子相互作用以调控基因的表达。因此，通过其受体，雄激素导致了细胞中基因表达的改变。这些改变最终影响了在靶组织的生理学中可见的细胞的代谢输出、分化或增殖。在前列腺中，雄激素通过与存在于雄激素敏感性组织的细胞质中的AR结合而刺激了前列腺组织和前列腺癌细胞的生长。
[0135] 选择性调节AR的化合物在许多疾病和病症的治疗或预防中具有临床重要性，包括但不限于前列腺癌、良性前列腺增生症、女性多毛症、脱发、神经性厌食、乳腺癌、痤疮、肌肉骨骼病症如骨病、造血病症、神经肌肉疾病、风湿病、癌症、AIDS、恶病质、用于激素替代疗法(HRT)、用于男性避孕、用于男性性功能增强、用于男性生殖病症以及原发性或继发性男性性腺机能亢进。
[0136] 去势抗性前列腺癌
[0137] 阻断内源激素（例如睾酮）的作用（抗雄激素）的药剂可高效且常规地应用于前列腺癌的治疗（雄激素剥夺疗法）。尽管在初期可有效抑制肿瘤生长，但是这些雄激素剥夺疗法最终在几乎所有患者中都失败，导致“去势抗性前列腺癌”(″CRPC")。大部分，但不是所有的前列腺癌细胞起初对雄激素剥夺疗法有响应。然而，随着时间的推移，幸存的前列腺癌细胞群体出现，因为它们曾经对雄激素剥夺疗法产生的选择压力有 响应而现在对其耐受。不仅原发性癌对使用的疗法耐受，而且癌细胞也可能脱离原发性癌并在血流中流动，将疾病扩散到远距离位点（尤其是骨骼）。在其它效应中，这导致明显的疼痛以及进一步的骨骼脆性。
[0138] 设想CRPC细胞通过扩增至少三种不同的途径以增强对依然可获得的细胞内雄激素的响应，而在以低水平的循环雄激素为特征的环境中幸存。这些途径包括：(1)AR表达的上调，这增加了AR拷贝数，因此增强了细胞对医学去势疗法诱发的低水平循环雄激素的敏感性；(2)增强参与将雄激素剥夺疗法后细胞中残留的雄激素摄入的酶的表达；(3)增强调节类固醇生成的基因的表达，允许CRPC细胞合成其自身的雄激素。类固醇生成途径中的关键酶是细胞色素C17α-羟化酶/C17，20-裂解酶(CYP17)，该酶控制肾上腺、睾丸和前列腺中雄激素的产生。
[0139] 在特定实施方式中，此处描述了化合物、制备这类化合物的方法、包含这类化合物的药物组合物和药物以及用这类化合物来治疗雄激素介导的疾病或病症的方法，该疾病或病症包括但不限于前列腺癌、良性前列腺增生症、女性多毛症、脱发、神经性厌食、乳腺癌、痤疮、肌肉骨骼病症如骨病、造血病症、神经肌肉疾病、风湿病、癌症、AIDS、恶病质、用于激素替代疗法(HRT)、用于男性避孕、用于男性性功能增强、用于男性生殖病症以及原发性或继发性男性性腺机能减退。在一些实施方式中，雄激素介导的疾病或病症是前列腺癌。在一些实施方式中，前列腺癌是去势抗性前列腺癌。
[0140] 在特定实施方式中，此处描述了化合物、包含这类化合物的药物组合物和药物以及用这类化合物降低雄激素生物合成、降低雄激素受体信号传导并降低雄激素受体敏感性的方法。
[0141] 一方面，所述化合物、包含这类化合物的药物组合物和药物以及使用这类化合物的方法降低雄激素的生物合成。在一些实施方式中，此处公开的化合物抑制雄激素产生控制性的酶的活性。在一些实施方式中，此处公开的化合物抑制细胞色素C17α-羟化酶/C17，20-裂解酶(CYP17)的活性。
[0142] 一方面，所述化合物、包含这类化合物的药物组合物和药物以及使用这类化合物的方法降低雄激素受体信号传导。在一些实施方式中，此处公开的化合物结合AR，并且是睾酮结合的竞争性抑制剂。
[0143] 一方面，所述化合物、包含这类化合物的药物组合物和药物以及使用这类化合物的方法降低雄激素受体的敏感性。在一些实施方式中，此处公开的化合物降低细胞中AR蛋白的含量并降低细胞被低水平雄激素生长信号维持的能力。在一些实施方式中，此处公开的化合物在将药物施用于个体后在体内形成。
[0144] 化合物
[0145] 式(1)的化合物、其药学可接受的盐、药学可接受的N-氧化物、药学可接受的代谢物、药学可接受的前药、药学可接受的多晶型物和药学可接受的溶剂化物调节类固醇激素核受体的活性，因此其可用于治疗雄激素受体介导的疾病或病症。
[0146]
[0147] 在式(1)的化合物中，ABCD环结构是任选地被取代的类固醇或其类似物的“A”、“B”、“C”和“D”环部分；X是葡糖苷酸基、葡萄糖醛酸酯基、O-连接的硫酸酯、OH或O；且其中每个存在的虚线独立地是双键或单键，以形成满足化合价的稳定的分子。
[0148] ABCD环结构的任选的取代基包括下列中的一种或多种：C1-C6-烷基和卤代的C1-C6-烷基；C1-C6-烯基和卤代的C1-C6-烯基，包括其中双键直接连接于环结构的情况；卤素；氨基；氨基亚烷基；肟基；n,n+1-环氧基；羰基(氧代)；葡糖苷酸基、葡萄糖醛酸酯基、O-连接的硫酸酯和羟基。在ABCD环结构的相邻碳原子上的氢取代基可以被任选地去除并被相邻碳原子间的额外键所替代，以在环结构中的这些碳之间产生双 键。在一些实施方式中，ABCD环结构上的任选的取代是环结构的10和/或13位的甲基。
[0149] 式(1)的某些实施方式在“A”、“B”、“C”和“D”环的任何位置包括两个取代基，每个取代基独立地选自羟基、羰基（氧代）或n,n+1环氧基。式(1)的某些实施方式在“A”、“B”、“C”和“D”环的任何位置包括一个独立选自羟基、羰基（氧代）或n，n+1环氧基的取代基。
[0150] 式(1)的某些特定实施方式在下面被表示为式(2)、式(3)、式(4)、式(5)、式(6)、式(7)、式(8)、式(9)、式(10)、式(11)、式(12)、式(13)、式(14)、式(15)、式(16)、式(17)、式(18)、式(19)、式(20)、式(21)、式(22)、式(23)式(24)、式(25)、式(26)、式(27)、式(28)、式(29)、式(30)和式(31)，其中X是葡糖苷酸基、葡萄糖醛酸酯基或O-连接的硫酸酯。
[0151]
[0152]
[0153]
[0154] 式(1)的某些特定实施方式在下面被表示为式(32)、式(33)、式(34)、式(35)、式(36)、式(37)、式(38)、式(39)、式(40)、式(41)、式(42)、式(43)、式(44)、式(45)、式(46)、式(47)、式(48)、式(49)、式(50)、式(51)、式(52)、式(53)、式(54)、式(55)、式(56)、式(57)、式(58)、式(59)、式(60)、式(61)、式(62)、式(63)、式(64)和式(65)。
[0155]
[0156]
[0157]
[0158] 化合物的合成
[0159] 式(1)的化合物可以用本领域技术人员已知的标准合成技术或用本领域技术人员已知的方法结合此处所述的方法来合成。此外，此处所述的溶剂、温度和其它反应条件可根据本领域技术人员的实践和知识而变化。
[0160] 用于合成式(1)的化合物的起始材料可以从商业来源如Aldrich Chemical Co.(Milwaukee，Wis.)、Sigma Chemical Co.(St.Louis，Mo.)获得，或者可以合成起始材料。可以使用本领域技术人员已知的技术和 材料合成此处所述的化合物和其它具有不同th取代基的相关化合物，如在March，ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4 Ed.，(Wiley 1992)；Carey和th
Sundberg，ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4 Ed.，卷A和B(Plenum2000，2001)以及Green和Wuts，rd
PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS 3 Ed.，(Wiley 1999)（所有这些均通过引用整体并入本文）中所述。此处公开的制备化合物的通用方法可衍生自本领域已知的反应，并且可以如本领域技术人员所公认的那样，使用合适的试剂和条件来修改反应，以用于引入此处提供的通式中发现的各种部分。作为指导，可以采用下列合成方法。
Sundberg，ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4 Ed.，卷A和B(Plenum2000，2001)以及Green和Wuts，rd
PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS 3 Ed.，(Wiley 1999)（所有这些均通过引用整体并入本文）中所述。此处公开的制备化合物的通用方法可衍生自本领域已知的反应，并且可以如本领域技术人员所公认的那样，使用合适的试剂和条件来修改反应，以用于引入此处提供的通式中发现的各种部分。作为指导，可以采用下列合成方法。
[0161] 当存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子（例如碱金属离子、碱土离子或铝离子）替代或与有机碱配位时，式(1)的化合物可以作为药学可接受的盐而被制备。此外，可以用起始材料或中间体的盐制备公开的化合物的盐形式。
[0162] 可以设想制备式(1)的各种方法，提供下列说明作为非限制性实例。在一些实施方式中，在惰性气氛（例如氮气和氩气）中进行下列一种或多种化学反应。在一些实施方式中，监测反应的温度。在一些实施方式中，用HPLC或TLC监测反应。在一些实施方式中，监测反应的pH。在一些实施方式中，控制反应的温度。在一些实施方式中，用HPLC确定产物的纯度。在一些实施方式中，实验以小规模、中等规模、大规模、分析规模或生产规模进行。在一些实施方式中，通过用包含硅胶、硅藻土或其组合的过滤板过滤而使产物澄清。
[0163] 在一些实施方式中，大规模地进行合成。在一些实施方式中，大规模包括约1-约10kg的规模。在一些实施方式中，以生产规模进行合成。在一些实施方式中，生产规模包括大于约10kg的规模。在一些实施方式中，生产规模包括约10-约1,000kg的规模。在一些实施方式中，生产规模包括约10-约100kg的规模。在一些实施方式中，生产规模包括约
10-约50kg的规模。在一些实施方式中，生产规模包括约33.4kg的规模。
10-约50kg的规模。在一些实施方式中，生产规模包括约33.4kg的规模。
[0164] 在一些实施方式中，以小规模进行实验以收集信息，该信息将用于计划或进行生产规模的合成。在一些实施方式中，预期以较小规模获得的结果可在生产规模上重复。在一些实施方式中，不能预期以较小规模获得的结果可在生产规模上重复。在一些实施方式中，以生产规模获得的产率比以较小规模获得的产率要高。在一些实施方式中，以生产规模获得的产率比以较小规模获得的产率要低。
[0165]
[0166] 在一个实施方式中，制备式i的化合物在溶剂中的溶液。然后使式ii的化合物与该溶液接触，获得的混合物在存在碱的情况下加热足以获得式iii的化合物的时间。在一些实施方式中，时间为约1小时、约2小时、约4小时、约8小时、约12小时或约24小时。在一些实施方式中，时间为约1小时-约24小时。在一些实施方式中，碱包括碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、磷酸钠或磷酸钾。在一些实施方式中，溶剂包括DMF。在一些实施方式中，温度为约50°C、约70°C、约100°C、约150°C或有效维持回流条件的温度。在一些实施方式中，温度为约50°C-约200°C。式iii的化合物可以用本领域技术人员已知的任何方法从反应混合物中分离并纯化。这样的方法包括但不限于将水性混合物倒入反应混合物中，进而使化合物iii沉淀为固体。分离的式iii的化合物可以任选地用本领域技术人员已知的任何方法纯化。这样的方法包括但不限于用水研碎。
[0167]
[0168] 在一个实施方式中，制备式iii的化合物在溶剂中的溶液，并使该溶液与催化剂接触足以获得式iv的化合物的时间。在一些实施方式中，时间为约1小时、约2小时、约4小时、约8小时、约12小时或约24小时。在一些实施方式中，时间为约1小时-约24小时。在一些实施方式中，催化剂包括碳载钯、碳载铂、过渡金属盐或过渡金属络合物。在一些实施方式中，溶剂包括N-甲基吡咯烷酮。在一些实施方式中，温度为约50°C、约70°C、约
100°C、约150℃、约190°C、约200°C或有效维持回流条件的温度。在一些实施方式中，温度为约50°C-约250°C。式iv的化合物可以用本领域技术人员已知的任何方法从反应混合物中分离并纯化。这样的方法包括但不限于在线过滤（in-line filtration）和/或结晶。分离的式iii的化合物可以任选地用本领域技术人员已知的任何方法纯化。
100°C、约150℃、约190°C、约200°C或有效维持回流条件的温度。在一些实施方式中，温度为约50°C-约250°C。式iv的化合物可以用本领域技术人员已知的任何方法从反应混合物中分离并纯化。这样的方法包括但不限于在线过滤（in-line filtration）和/或结晶。分离的式iii的化合物可以任选地用本领域技术人员已知的任何方法纯化。
[0169]
[0170] 在一个实施方式中，制备式iv的化合物在溶剂中的溶液，并使该溶液与碱接触足以获得式v的化合物(即化合物(1))的时间。在一些实施方式中，时间为约1小时、约2小时、约4小时、约8小时、约12小时或约24小时。在一些实施方式中，时间为约1小时-约24小时。在一些实施方式中，碱包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、混合的碱金属醇盐（例如锂-钾醇盐）、碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、磷酸钠或磷酸钾。在一些实施方式中，溶剂包括水、甲醇、乙醇、2-丙醇、叔丁醇或其混合物。在一些实施方式中，溶剂包括甲醇，碱包括甲醇钠。在一些实施方式中，温度为约35°C、约
50°C、约70°C、约100°C或有效维持回流条件的温度。在一些实施方式中，温度为约
25°C-约100°C。式v的化合物可以用本领域技术人员已知的任何方法从反应混合物中分离并纯化。这样的方法包括但不限 于萃取。分离的式iii的化合物可以任选地用本领域技术人员已知的任何方法纯化。这样的方法包括但不限于研碎。
50°C、约70°C、约100°C或有效维持回流条件的温度。在一些实施方式中，温度为约
25°C-约100°C。式v的化合物可以用本领域技术人员已知的任何方法从反应混合物中分离并纯化。这样的方法包括但不限 于萃取。分离的式iii的化合物可以任选地用本领域技术人员已知的任何方法纯化。这样的方法包括但不限于研碎。
[0171] 化合物的其它形式
[0172] 为了方便起见，在本章节和本文其它部分所述的化合物的形式和其它特征采用了单一通式，示例性地如“式(1)”。然而，此处所述的化合物的形式和其它特征同样等同地适用于此处所述的落在式(1)范围内的所有通式。例如，此处所述的化合物的形式和其它特征可以适用于具有式(2)、式(3)、式(4)、式(5)、式(6)、式(7)、式(8)、式(9)、式(10)、式(11)、式(12)、式(13)、式(14)、式(15)、式(16)、式(17)、式(18)、式(19)、式(20)、式(21)、式(22)、式(23)、式(24)、式(25)、式(26)、式(27)、式(28)、式(29)、式(30)、式(31)、式(32)、式(33)、式(34)、式(35)、式(36)和式(37)结构的化合物以及落在这些通式范围内的所有具体化合物。
[0173] 可以通过将游离碱形式的化合物与药学可接受的无机或有机酸反应而将式(1)的化合物制备为药学可接受的酸加成盐(这是一种类型的药学可接受的盐)，所述酸包括但不限于无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等；和有机酸如醋酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、对甲苯磺酸、酒石酸、三氟乙酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、芳基磺酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲基二环-[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、4，4’-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-甲酸)、3-苯丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸和己二烯二酸。也可以通过加入所需的反离子从溶液中沉淀或用合适的介质如离子交换树脂进行盐交换来产生所述盐。这些方法可用于形成盐，包括但不限于四苯基硼酸盐、四氟硼酸盐和六氟磷酸盐。
[0174] 或者，可以通过将游离酸形式的化合物与药学可接受的无机或有机碱反应而将式(1)的化合物制备为药学可接受的碱加成盐(这是一种类型的药学可接受的盐)，所述碱包括但不限于有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、 三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等，以及无机碱如氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。
[0175] 可以理解的是，提到药学可接受的盐包括其溶剂加成形式或晶体形式，尤其是溶剂化物或多晶型物。溶剂化物包含化学计量或非化学计量的溶剂，可能在结晶过程中与药学可接受的溶剂如水、乙醇等形成。当溶剂为水时形成水合物，或者当溶剂为醇时形成醇化物。在此处所述的方法过程中可以便利地制备或形成式(1)的化合物的溶剂化物。仅仅作为示例，可以使用有机溶剂（包括但不限于二噁烷、四氢呋喃或甲醇）通过从水性/有机溶剂混合物中再结晶便利地制备式(1)化合物的水合物。此外，此处提供的化合物可以以非溶剂化以及溶剂化形式存在。通常，对于此处提供的化合物和方法，溶剂化形式被视为等同于非溶剂化形式。
[0176] 式(1)的化合物包括晶体形式，也被称为多晶型物。多晶型物包括化合物的相同元素组成的不同晶体堆积排布。多晶型物通常具有不同的X-衍射图样、红外光谱、熔点、密度、硬度、晶体形状、光学和电学特性、稳定性和溶解度。各种因素如再结晶溶剂、结晶速率和保存温度可能导致单晶型为主。
[0177] 可以通过在0-80°C在合适的惰性有机溶剂（如，但不限于乙腈、乙醇、含水二噁烷等）中，用还原剂（如，但不限于硫磺、二氧化硫、三苯基膦、三烷基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、氰硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等）处理，而从式(1)的化合物的N-氧化物制备未氧化形式的式(1)的化合物。此外，所述还原剂可以被共价结合或配位支持在固相载体如树脂或二氧化硅上。
[0178] 此处所述的式(1)的化合物可以被同位素（例如用放射性同位素）或通过另外的其它手段标记，包括但不限于使用发色团或荧光部分、生物性发光标记或化学发光标记。式(1)的化合物可以具有一个或多个手性中心，每个中心可以以R或S构型存在。此处提出的化合物包括所有的非对映异构体、对映异构体和差向异构体形式及其合适的混合物。可以通过将化合物的差向异构体混合物与旋光拆分剂反应，形成化学上不同的化合物、分离组分，去除拆分剂并回收纯的差向异构体，将式(1)的化合 物制备为各自的非对映异构体或差向立体异构体。尽管可以用此处所述的化合物的共价非对映异构体衍生物进行差向异构体的拆分，但优选可分离的复合物(例如晶状的非对映异构体盐)。非对映异构体具有独特的物理性质(例如熔点、沸点、溶解度、反应性等等)，并且可以利用这些差异轻易地分离。可以通过手性色谱法或优选地通过基于溶解度差异的分离/拆分技术来分离非对映异构体。然后用拆分剂，通过不会导致差向异构化作用的任何实用手段回收纯的差向异构体。适用于将化合物的立体异构体从它们的立体异构体混合物中拆分出来的技术的更详细描述可见Jean Jacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，“Enantiomers，Racemates and Resolutions，”John Wiley And Sons，Inc.，1981，其通过引用整体并入本文。
[0179] 此外，此处提供的化合物和方法可能以几何异构体存在。此处提供的化合物和方法包括所有的顺式（cis）、反式（trans）、同式（syn）、逆式（anti）、E式(entgegen，E)和Z式(zusammen，Z)异构体及其合适的混合物。在一些情况下，化合物可能以互变异构体存在。所有的互变异构体都包括在此处所述的通式内，由此处所述的化合物和方法提供。在此处提供的化合物和方法的另外的实施方式中，由单一的制备步骤、组合或互变现象产生的对映异构体和/或非对映异构体的混合物也可用于此处所述的应用中。
[0180] 药物组合物/制剂
[0181] 此处所用的药物组合物是指式(1)的化合物与其它化学组分如载体、粘合剂、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于生物体。可以通过本领域已知的任何常规的形式和途径，将包含式(1)化合物的药物组合物以治疗有效量作为药物组合物施用，所述途径包括但不限于：静脉内、口服、直肠、气雾剂、肠胃外、眼部、经肺、经皮、经阴道、经眼、经鼻和表面施用。
[0182] 可以以局部方式而不是全身方式施用化合物，例如，通过将通常在储库式或持续释放制剂中的化合物直接注射进器官。而且，可以在靶向 递送系统（例如，器官特异性抗体包被的脂质体）中施用含有式(1)的化合物的药物组合物。脂质体将靶向器官并被该器官选择性地摄取。此外，含有式(1)的化合物的药物组合物可能以快速释放制剂形式、延长释放制剂形式或中等速度释放制剂形式提供。
[0183] 对于口服施用，可以通过将活性化合物与本领域公知的药学可接受的载体或赋形剂组合而轻易地配制式(1)的化合物。这类载体能使此处所述的化合物被配制为片剂、粉剂、丸剂、糖锭剂、胶囊、液体、胶体、糖浆剂、酏剂、浆剂、混悬剂等，用于由待治疗的患者口服摄取。
[0184] 通过将一种或多种固体赋形剂与一种或多种此处所述的化合物混合，任选地研磨获得的混合物，在加入合适的辅剂（如果需要）后，将颗粒的混合物进行加工以获得片剂或糖锭剂核心，从而可以获得用于口服使用的药物制剂。
[0185] 糖锭剂核心具有合适的包衣。为此，可以使用浓缩的糖溶液，其任选地可包含粘合剂、崩解剂、调味剂或稳定剂；阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或色素加入片剂或糖锭剂包衣以识别或区别活性化合物剂量的不同组合。
[0186] 可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的推入配合式胶囊以及由明胶和塑化剂如甘油或山梨醇制成的密封软胶囊。在一些实施方式中，胶囊包括包含一种或多种药用的牛和植物明胶的硬明胶胶囊。在某些情况中，明胶是碱处理的。推入配合式胶囊可以包含活性成分与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石或硬脂酸镁，以及任选的稳定剂的混合物。在软胶囊中，活性成分可以溶解或悬浮于合适的液体中，如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。此外，可以添加稳定剂。所有用于口服施用的制剂应当是适用于这种施用方式的剂量。
[0187] 对于颊部施用或舌下施用，组合物可以采用片剂、锭剂或以常规方式配制的凝胶剂的形式。肠胃外注射可能涉及浓注或连续输注。式(1)的化合物的药物制剂可以为适用于肠胃外注射的形式，如无菌悬液、溶液或在油性或水性介质中的乳剂，并且可以包含配制剂如悬浮剂、稳定 剂和/或分散剂。用于肠胃外施用的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，活性化合物的悬液可以被制备为合适的油性注射悬液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油，如芝麻油或合成的脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯或脂质体。水性注射悬液可以含有增加悬液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，悬液也可含有合适的稳定剂，或增加化合物溶解度以便允许制备高度浓缩的溶液的试剂。此外，活性成分可以是粉末形式，在使用前用合适的载体例如无菌无热原水配制。
[0188] 式(1)的化合物可以表面施用，并且可以配制为多种可表面施用的组合物，如溶液、悬液、洗液、凝胶剂、糊剂、医用棒、香膏、乳膏或软膏。这些药用化合物可以包含增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
[0189] 适用于经皮施用的具有式(1)结构的化合物的制剂，可以采用经皮施用装置和经皮施用贴剂，并且可以是溶解和/或分散于聚合物或粘合剂中的亲脂性乳剂或缓冲的水溶液。可以构建这样的贴剂，以用于药物试剂的连续、脉冲或按需施用。进一步地，式(1)的化合物的经皮施用可以通过离子电渗贴剂或类似方式完成。此外，透皮贴剂可以提供式(1)化合物的可控施用。通过使用速度控制膜或通过将化合物捕获在聚合物基质或凝胶中，可以减缓吸收速率。相反地，可以使用吸收促进剂来增强吸收。吸收促进剂或载体可包括帮助穿过皮肤的可吸收的药学可接受溶剂。例如，经皮装置为绷带的形式，其包含支持件、包含化合物以及任选的载体的容器、任选的用于在延长的时间期间以控制和预定的速率将化合物递送至宿主皮肤的速度控制屏障，以及将该装置固定于皮肤上的工具。
[0190] 对于吸入施用，式(1)的化合物可以是气溶胶、雾剂或粉末的形式。使用合适的推进剂（例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟甲烷、二氧化碳或其它合适的气体），式(1)的药物组合物可以方便地从加压包装或雾化器以气溶胶喷雾形式递送。在加压气溶胶的情况下，可以通过提供递送计量的阀来确定剂量单位。在吸药器或吹药器中使用的如仅仅 作为示例的明胶胶囊和药筒，可以被配制为包含化合物和合适的粉末基料如乳糖或淀粉的粉末混合物。
[0191] 式(1)的化合物也可以在直肠组合物中配制，如包含常规栓剂基料如可可脂或其它甘油酯以及合成聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、PEG等的灌肠剂、直肠凝胶、直肠泡沫剂、直肠气溶胶、栓剂、胶状栓剂或保留灌肠剂。在组合物的栓剂形式中，首先熔化低熔点蜡，例如，但不限于脂肪酸甘油酯的混合物，其任选地与可可脂组合。
[0192] 在实施此处提供的治疗或使用方法时，治疗有效量的此处提供的式(1)化合物在药物组合物中被施用于患有待治疗疾病或病症的哺乳动物。优选地，哺乳动物是人。治疗有效量可以因疾病的严重程度、个体的年龄和相对健康、所用的化合物的效能和其它因素而差异很大。化合物可以单独使用，或者与一种或多种作为混合物组分的治疗剂联合使用。
[0193] 可以使用一种或多种包含帮助将活性化合物加工成可药用制剂的赋形剂和辅助剂的生理学可接受的载体，以常规方式配制药物组合物。合适的制剂依赖于所选择的施用途径。任何公知的技术、载体和赋形剂可被合适地且如本领域所理解地使用。包含式(1)化合物的药物组合物可能以常规方式生产，如，仅仅作为示例，通过常规混合、溶解、制粒、制糖锭、磨细、乳化、胶囊化、捕获或压制工艺生产。
[0194] 药物组合物将包含至少一种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂，以及此处所述的作为游离酸或游离碱形式或药学可接受的盐形式的活性成分的式(1)化合物。此外，此处所述的方法和药物组合物包括使用N-氧化物、晶体形式（也被称为多晶型物）、以及具有相同活性类型的这些化合物的活性代谢物。在一些情况下，化合物可能以互变异构体存在。所有的互变异构体都被包括在此处所述化合物的范围内。此外，此处所述的化合物可以以未溶剂化形式以及与药学可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式存在。此处提供的化合物的溶剂化形式也被认为已在此处公开。此外，药物组合物可包含其它医用或药学试剂、载体、佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲液。
此外，药物组合物也包含其它有治疗价值的物质。
此外，药物组合物也包含其它有治疗价值的物质。
[0195] 用于制备包含此处所述的化合物的组合物的方法包括，将化合物与一种或多种惰性、药学可接受的赋形剂或载体一起配制，以形成固体、半固体或液体。固体组合物包括但不限于粉末、片剂、可分散颗粒、胶囊、扁囊剂和栓剂。液体组合物包括化合物溶解于其中的溶液、包含化合物的乳剂或包含含有此处公开的化合物的脂质体、微粒或纳米颗粒的溶液。半固体组合物包括但不限于凝胶、悬液和乳膏。组合物可以为液体溶液或悬液，适于使用前在液体中溶解或悬浮的固体形式，或乳剂。这些组合物可能也包含较少量的无毒的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等等。
[0196] 此处所述的药物组合物的概述可见于，例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy，Nineteenth Ed(Easton，Pa.:Mack Publishing Company，1995)；Hoover，John E.，Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania 1975；Liberman，H.A.和Lachman，L.，Eds.，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，New York，N.Y.，1980；以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，Seventh Ed.(Lippincott Williams&Wilkins 1999)，它们通过引用整体并入本文。
[0197] 施用方法和治疗方法
[0198] 式(1)的化合物可用于制备用于治疗类固醇激素核受体活性对疾病的病理学和/或症状有贡献的疾病或病症的药物。此外，用于治疗需要这种治疗的个体的此处所述任意疾病或病症的方法包括，将包含至少一种式(1)的化合物或其药学可接受的盐、药学可接受的N-氧化物、药学可接受的活性代谢物、药学可接受的前药或药学可接受的溶剂化物的药物组合物以治疗有效量施用于所述个体。
[0199] 可以施用包含此处所述的化合物的组合物，用于预防性和/或治疗性处理。在治疗应用中，将组合物以足以治愈或至少部分阻止疾病或病症的症状的量施用于已经患有该疾病或病症的患者。对于这种用途有效的量取决于疾病或病症的严重程度和进程、以前的治疗、患者的健康状态、 体重、对于药物的响应以及治疗医师的判断。通过常规实验（包括但不限于剂量递增临床试验）确定这种治疗的有效量被认为是本领域中的技能。
[0200] 包含此处所述的化合物的组合物可用于在需要这种治疗的患者中治疗选自下列的疾病状态或病症：原发和继发性醛固酮增多症、钠潴留增加、镁和钠排出增加（利尿）、水保留增加、高血压(孤立的心脏收缩和联合的心脏收缩/心脏舒张)、炎症、恶性肿瘤如白血病和淋巴瘤、Cushing先天性肾上腺增生、慢性原发性肾上腺机能不全、继发性肾上腺机能不全、前列腺癌、良性前列腺增生症、脱发、乳腺癌、AIDS、恶病质、用于激素替代疗法(HRT)、用于男性避孕、睾丸癌、卵巢癌、肺癌、骨质疏松症、骨质流失、骨更新异常增加、转移性骨病和恶性肿瘤高钙血症，该方法包括将有效量的此处所述的化合物或其互变异构体、前药、溶剂化物或盐施用于患者。在一些实施方式中，包含此处所述的化合物的组合物可用于治疗前列腺癌。在一些实施方式中，包含此处所述的化合物的组合物可用于治疗去势抗性前列腺癌。
[0201] 包含此处所述的化合物的组合物可用于治疗选自下列的疾病状态或病症：膀胱癌、前列腺疾病、前列腺病态、前列腺痛、前列腺炎、前列腺增生、尿失禁、前列腺肿瘤和癌、阴茎肿瘤和癌、睾丸肿瘤和癌、Sertoli-Leydig细胞癌、Leydig细胞癌、Sertoli细胞癌、Wilms肿瘤、肾细胞癌、肾瘤、输尿管肿瘤、雄激素性脱发、性腺功能减退、毛发过多(hyperpilosity)、良性前列腺肥大、前列腺的腺瘤和瘤形成(如晚期转移性前列腺癌)，包含雄激素受体的良性或恶性肿瘤细胞的治疗，如乳腺癌、脑癌、皮肤癌、卵巢癌、淋巴癌、肝癌和肾癌、胰腺癌、骨质疏松症、阻止精子形成、性欲、恶病质、子宫内膜异位症、多囊卵巢综合征、厌食、雄激素依赖性年龄相关的疾病和病症，如对于年龄相关的男性睾酮水平下降的雄激素补充、男性更年期、男性激素替代、男性和女性性功能障碍，以及对非卧床患者中肌肉萎缩的抑制。在一些实施方式中，包含此处所述的化合物的组合物可用于治疗前列腺癌。在其它实施方式中，包含此处所述的化合物的组合物可用于治疗去势抗性前列腺癌。
[0202] 在患者的状况没有改善的情况下，根据医生的判断，化合物的施用可以长期地进行，即在延长的时间期间，包括患者生命持续的始终，以改善或控制或限制患者的疾病或病症的症状。在患者的状态有改善的情况下，根据医生的判断，化合物的施用可以连续进行或临时暂停某一时间长度（即“休药期”）。
[0203] 一旦患者的状况发生改善，如果必要，施用维持剂量。随后，可以根据症状将施用剂量或频率或两者都降低到保持疾病或病症改善的水平。然而，一旦症状有任何复发，患者可能需要长期的间歇式治疗。
[0204] 在某些情况下，将治疗有效量的至少一种此处所述的式(1)的化合物（或其药学可接受的盐、药学可接受的N-氧化物、药学活性代谢物、药学可接受的前药或药学可接受的溶剂化物）与另一种治疗剂联合施用可能是合适的。仅仅作为示例，如果患者接受一种此处所述的化合物后经受的副作用之一是炎症，那么将抗炎药与初始的治疗剂联合施用可能是合适的。或者，仅仅作为示例，可通过施用佐剂增加此处所述的化合物之一的治疗效果（即佐剂本身仅仅具有最低的治疗益处，但是与另一种治疗剂联合后，对于患者的总体治疗效果得到增强）。或者，仅仅作为示例，通过此处所述的化合物之一与另一种也具有治疗益处的治疗剂（也包括治疗方案）联合施用可以增加患者所获的益处。在任何情况下，无论被治疗的疾病或病症如何，患者所获得的总体益处可能仅仅是两种治疗剂的加和，或者患者可能获得协同的益处。例如，式(1)的化合物和在治疗低钾血症、高血压、充血性心力衰竭、肾衰竭尤其是慢性肾衰竭、再狭窄、动脉粥样硬化、X综合征、肥胖、肾病、心肌梗死后综合征、冠心病、胶原形成增强、高血压和内皮功能障碍后的纤维化和重塑中使用的其它物质可能发生协同效应。这类化合物的例子包括抗肥胖剂如奥利司他、抗高血压剂、正性肌力药和降血脂剂，包括但不限于袢利尿剂如依他尼酸、呋赛米和托拉赛米；血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂，如贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利和群多普利；Na-K-ATP酶膜泵抑制剂如地高辛；中性肽链内切酶(NEP)抑制剂；ACE/NEP抑制剂，如奥马曲拉、 山帕曲拉和法西多曲；血管紧张素II拮抗剂，如坎地沙坦、依普罗沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、替米沙坦和缬沙坦，特别是缬沙坦；β-肾上腺素能受体阻断剂，如醋丁洛尔、倍他洛尔、比索洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、心得安、索他洛尔和噻吗洛尔；正性肌力药，如地高辛、多巴酚丁胺和米力农；钙通道阻断剂，如氨氯地平、苄普地尔、地尔硫卓、非洛地平、尼卡地平、尼莫地平、硝苯地平、尼索地平和维拉帕米；以及3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CoA)抑制剂，如洛伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西伐他汀、美伐他汀、维洛他汀（velostatin）、氟伐他汀、达伐他汀、阿托伐他汀、瑞舒伐他汀和利伐他汀。当此处所述的化合物连同其它治疗剂施用时，共同施用的化合物的剂量当然依赖于采用的共同药物的类型、采用的具体药物、被治疗的疾病或病症等等而变化。此外，当与一种或多种生物活性剂共同施用时，此处提供的化合物可以与生物活性剂或同时或顺序施用。如果顺序施用，主治医师将决定与生物活性剂联合施用蛋白质的合适顺序。
[0205] 在任何情况下，多种治疗剂（其中之一是此处所述的化合物之一）可能以任何顺序或甚至同时施用。如果同时，多种治疗剂可能以单一的一致形式或以多种形式（仅仅作为示例，或作为单一药丸或作为两种分开的药丸）提供。治疗剂之一可能以多个剂量给予，或两种都以多个剂量给予。如果不是同时，多个剂量之间的时间可以从长于0周到短于4周不等。此外，组合方法、组合物以及制剂不限于仅仅两种药剂的使用。也涉及多种治疗剂的组合。
[0206] 此外，式(1)的化合物也可与为患者提供额外或协同益处的方法组合使用。仅仅作为示例，期望患者在此处所述的方法中发现治疗和/或预防益处，其中式(1)的药物组合物和/或与其它治疗剂的组合与遗传测试组合使用，以确定个体是否携带已知与某种疾病或病症相关的突变基因。
[0207] 式(1)的化合物和联合治疗剂可以在疾病或病症发生之前、期间或之后施用，包含化合物的组合物的施用时机可以变化。因此，例如，化合物可以被用作预防药，可以连续地施用于具有患疾病或病症的倾向的个体以预防疾病或病症的发生。可以在症状开始期间或之后尽快将化合物 和组合物施用于个体。化合物的施用可以在症状发作的前48小时内、优选在症状发作的前48小时内、更优选在症状发作的前6小时内、最优选在症状发作的前3小时内开始。初始施用可以通过任何实用的途径，如，例如，静脉注射、浓注、输注5分钟至约5个小时、丸剂、胶囊剂、透皮贴剂、颊部施用等，或其组合。优选在检测到或怀疑疾病或病症发作后尽可能快地施用化合物，并且在治疗疾病所需的时间长度持续施用，如，例如，从约1个月至约3个月。治疗时间长短因每个个体而不同，可以使用已知的标准来确定长短。例如，化合物或包含化合物的制剂可以施用至少2周、优选约1个月至约3年、更优选约1个月至约10年。
[0208] 此处所述的药物组合物可以是适于精确剂量的单次施用的单位剂量形式。在单位剂量形式中，制剂被分为包含适量的一种或多种化合物的单位剂量。单位剂量可以是包含不连续量的制剂包装形式。非限制性的例子是包装的片剂或胶囊，以及在小瓶或安瓿中的粉末。水悬液组合物可以被分装在不可重复盖紧的单剂量容器中。另外，可以使用可重复盖紧的多剂量容器，在该情形中，通常在组合物中包含防腐剂。仅仅作为示例，用于肠胃外注射的制剂可以是单位剂量形式，其包括但不限于安瓿，或在添加有防腐剂的多剂量容器中[0209] 此处所述的式(1)化合物的合适的每日剂量为约0.03-约60mg/kg体重。在较大的哺乳动物（包括但不限于人）中，指示的每日剂量为约1mg-约4000mg，可方便地以分开剂量（包括但不限于每日多达四次）或以延缓形式施用。用于口服施用的合适的单位剂量形式包含约1mg-约4000mg活性成分。在一些实施方式中，式(1)化合物的单次剂量在约50mg-约2,000mg的范围内。在一些实施方式中，式(1)化合物的单次剂量为约90mg、约
200mg、约250mg、约325mg、约650mg、约975mg、约1300mg、约1625mg或约1950mg。在一些实施方式中，约90mg、约325mg、约650mg、约975mg、约1300mg、约1625mg或约1950mg的式(1)化合物的作为多次剂量给予施用。
200mg、约250mg、约325mg、约650mg、约975mg、约1300mg、约1625mg或约1950mg。在一些实施方式中，约90mg、约325mg、约650mg、约975mg、约1300mg、约1625mg或约1950mg的式(1)化合物的作为多次剂量给予施用。
[0210] 前面的范围仅仅是建议性的，因为关于个体治疗方案的变量数是巨大的，而显著偏离这些推荐值也不是不常见的。这种剂量可以根据众多变量而改变，不限于所用化合物的活性、待治疗的疾病或病症、施用模式、个体的需求、被治疗的疾病或病症的严重程度和医生的判断。
[0211] 可以通过在细胞培养或实验动物中的标准药学方法确定这些治疗方案的毒性和治疗效果，包括但不限于用于确定LD50(50%群体致死的剂量)和ED50(50%群体中治疗有效的剂量)的方法。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，其可以被表示为LD50和ED50之间的比值。优选表现出高治疗指数的化合物。从细胞培养试验和动物研究中获得的数据可用于配制用于人的剂量范围。这些化合物的剂量优选地落在包括ED50、具有最小毒性的循环浓度的范围内。剂量可能根据所用的剂型和所用的施用途径而在此范围内变化。
[0212] 孵育研究
[0213] 在存在和缺乏MgCl2/EDTA的情况下，为化合物(1)的溶解度而优化孵育培养基。在MgCl2/EDTA缺乏的情况下，测试物质的溶解度似乎稍好于其缺乏时。然而，二价阳离子MgCl2在CYP 450活性的激活中的作用尚未完全确定(Saito等人，2006，Tamura等人，
1988)。因此，在存在和缺乏EDTA和MgCl2的情况下，进行化合物(1)的代谢稳定性测试。
1988)。因此，在存在和缺乏EDTA和MgCl2的情况下，进行化合物(1)的代谢稳定性测试。
[0214] 标准品和质量控制
[0215] 标准曲线的线性回归决定系数(r2)数值为≥0.998。对于所有标准品，根据曲线中倒推计算的浓度的相对误差(%)在±15%之内。对于所有质量控制，相对误差(%)在±16%之内。
[0216] 阴性对照
[0217] 每次测试包括包含化合物(1)但没有微粒体（其体积被0.1M磷酸盐缓冲液替代）的两份空白样品(0分钟和120分钟)作为阴性对照。在所有情况下，正如与0分钟相比，在120分钟之后的回收率%接近于100% （在7%之内）所证明的（图11-18），化合物(1)在孵育期间是化学稳定的。
[0218] 化合物(1)在 0.1M磷酸盐缓冲液中的代谢稳定性
[0219] 在NADPH-生成系统存在或缺乏的情况下与合并的大鼠、狗、猴和人肝微粒体孵育不同时间后，化合物(1)及其代谢物的浓度分别如图10、图14、图18和图22所示。
[0220] 目标浓度为10μM的化合物(1)与合并的大鼠肝微粒体在0.1M磷酸盐缓冲液中孵育获得的结果表明，在NADPH-生成系统存在的情况下在120分钟的孵育期间，化合物(1)是相对稳定的，其相比于孵育0分钟的回收率为约86%（图10）。尽管没有观察到化合物(1)的明显损耗，检测到了5个新的峰(在3.3、4.9和8.8分钟洗脱的m/z 405和在1.0和3.7分钟洗脱的m/z 421)。在大鼠肝微粒体中，以NADPH和时间依赖的方式与目标浓度为
10μM的化合物(1)孵育后，观察到具有m/z 405和421的可能代谢物（例如单羟基化或二羟基化反应）。
10μM的化合物(1)孵育后，观察到具有m/z 405和421的可能代谢物（例如单羟基化或二羟基化反应）。
[0221] 目标浓度为10μM的化合物(1)在狗肝微粒体中在NADPH-生成系统和0.1M磷酸盐缓冲液存在情况下的孵育表明，测试物质在高达60分钟内是代谢稳定的。相比于0分钟孵育，在120分钟孵育后观察到约25%的化合物(1)的损耗(图14)。研究了在阴性对照(0分钟和/或没有NADPH)样品中不存在的新的峰，并且与大鼠肝微粒体相似，检测到具有m/z 405和421的可能代谢物（例如单羟基化或二羟基化反应）。事实上，在狗肝微粒体中以时间依赖的方式与目标浓度为10μM的化合物(1)孵育后观察到5个新的峰（在约3.4、5.1和9.2分钟洗脱的m/z 405和在约1.0和1.9分钟洗脱的m/z 421）（图14和15）。
[0222] 从目标浓度为10μM的化合物(1)在磷酸盐缓冲液中与猴肝微粒体在NADPH-生成系统存在或缺乏的情况下孵育获得的结果表明，测试物质被明显代谢。在120分钟孵育后观察到约15%至最高约55%的化合物（1）的时间依赖性损耗(图18)。母体化合物的损耗与新峰的形成相关。事实上，在猴肝微粒体中以NADPH和时间依赖的方式与目标浓度为10μM的化合物(1)孵育后，观察到4个新的峰（在约5.1和约9.2分钟洗脱的m/z 405和在约1.0和1.9分钟洗脱的m/z 421）（图18和19）。
[0223] 在仅存在0.1M磷酸盐缓冲液的情况下，化合物(1)在人肝微粒体中的孵育表明，测试物质以NADPH和时间依赖的方式至少被代谢了多达50%。化合物(1)的损耗与新峰的形成并行。采用提取离子色谱图，研究了具有m/z 405和421的可能的代谢物（例如单羟基化或二羟基化反应）。在测试条件下化合物（1）在人肝微粒体中的代谢导致产生7个新的峰(在约2.1、约3.4、约4.7、约8.4和约10.6分钟洗脱的m/z 405和在约1.0和约3.6分钟洗脱的m/z 421)。
[0224] 化合物(1)在 0.1M磷酸盐缓冲液、1mM EDTA和 3mM MgCl2中的代谢稳定性[0225] 在NADPH-生成系统存在或缺乏的情况下，与合并的大鼠、狗、猴和人肝微粒体在0.1M磷酸盐缓冲液、1mM EDTA和3mM MgCl2中孵育不同时间后的化合物(1)及其代谢物的浓度分别如图12、图16、图20和图24所示。
[0226] 目标浓度为10μM的化合物(1)与合并的大鼠肝微粒体孵育获得的结果表明，在NADPH-生成系统存在的情况下，在60分钟的孵育期间化合物(1)是相对稳定的，其相比于孵育0分钟的回收率为约85%。然而，相比于0分钟，在120分钟化合物（1）的回收率稍稍降至约79%(图12)。基于总离子流色谱图，用可能的代谢物的提取离子色谱图研究了在阴性对照(0分钟和/或没有NADPH)样品中不存在的任何新峰，从该可能的代谢物中检测到m/z 405和421（例如单羟基化或二羟基化反应）。事实上，母体化合物的少量损耗与5个新峰的形成(在约3.3、约4.9和约8.7分钟洗脱的m/z 405和在约1.0和约3.7分钟洗脱的m/z 421)相关，这是时间和NADPH依赖性的（图12和图13）。在缺乏MgCl2和EDTA孵育的条件下也检测到了这些峰。
[0227] 目标浓度为10μM的化合物(1)在狗肝微粒体中在NADPH-生成系统存在下的孵育表明，测试物质是代谢稳定的，其方式类似于大鼠。化合 物(1)在长达60分钟是稳定的，相比于0分钟时，回收率为约85%。在孵育120分钟后，化合物(1)以NADPH依赖性方式被代谢至少多达24%(图14)。研究了在阴性对照（0分钟和/或没有NADPH）样品中不存在的新的峰。与大鼠肝微粒体相似，检测到了具有m/z 405和421的可能的代谢物（例如单羟基化或二羟基化反应）。事实上，在狗肝微粒体中，以时间依赖的方式与目标浓度为10μM的化合物(1)孵育后，观察到4个新的峰（在约5.1和约9.1分钟洗脱的m/z 405和在约1.0和约1.9分钟洗脱的m/z 421）（图16和图17）。在缺乏MgCl2和EDTA孵育的条件下也检测到了这些峰。
[0228] 目标浓度为10μM的化合物(1)与猴肝微粒体在NADPH-生成系统存在或缺乏的情况下孵育获得的结果表明，测试物质在120分钟孵育时间内以NADPH和时间依赖的方式代谢不稳定。母体化合物的损耗（在120分钟内降低最多达37%）与新的峰的形成相关。事实上，在猴肝微粒体中以NADPH和时间依赖的方式与目标浓度为10μM的化合物(1)孵育后观察到4个新的峰（在约5.1和约9.3分钟洗脱的m/z 405和在约1.0和约1.9分钟洗脱的m/z 421）（图20和图21）。在缺乏MgCl2和EDTA孵育的条件下也检测到了这些峰。
[0229] 在人肝微粒体中孵育后，化合物(1)在NADPH-生成系统存在的情况下在120分钟内相对稳定(约89%的回收率)。然而，10μM的化合物(1)与人肝微粒体的孵育导致以时间依赖方式形成6个新的峰(在约4.7、约8.3和约10.6分钟洗脱的m/z 405和在约1.0、约1.7和约3.6分钟洗脱的m/z 421)（图24和图25）。在缺乏MgCl2和EDTA孵育的条件下也检测到了这些峰。
[0230] 孵育研究得到的结论
[0231] 在存在和缺乏EDTA和MgCl2的情况下，进行了目标浓度为10μM的化合物(1)在合并的混合性别的大鼠、狗、猴和人肝微粒体中120分钟孵育的代谢稳定性分析。在存在或缺乏NADPH-生成系统的情况下，研究时间依赖方式的母体化合物损耗和代谢物的形成。
[0232] 目标浓度为10μM的化合物(1)在存在EDTA和MgCl2的情况下孵育获得的结果表明，化合物(1)在大鼠和狗肝微粒体中在长达60分钟内是代谢稳定的。在孵育120分钟后，与没有NADPH-GS的阴性对照的稍微降低（在大鼠微粒体中）和明显降低（在狗微粒体中~21%）相比，在大鼠肝微粒体和在狗肝微粒体中分别观察到约21%和约24%的母体化合物的损耗，显示该测试的一些变化。正如在30-120分钟孵育后约16%至约37%的损耗所证明的，化合物(1)在猴微粒体中稳定性较差。然而，该系统显示在缺乏NADPH-GS的情况下，化合物(1)浓度增加(30和120分钟孵育时分别为约14%和约12%)。与猴肝微粒体相反，化合物(1)在人肝微粒体中是代谢稳定的，正如在存在NADPH-生成系统的情况下孵育120分钟有最高约11%的轻微损耗，但是在缺乏NADPH-GS的情况下人肝微粒体使化合物(1)稍稍损耗(约7%)所证明的。尽管阴性对照显示标准测试可变性，仍然可以解释代谢稳定性趋势。
[0233] 在所有种类中，母体化合物的损耗与新的峰、推定的代谢物（单氧化作用）的形成相关。值得指出的是，这些推定代谢物的形成是时间和NADPH-依赖性的，因此提示细胞色素P450和/或含黄素单氧酶(FMO)酶参与化合物(1)的生物转化。
[0234] 总之，在EDTA和MgCl2存在下孵育长达120分钟后，化合物(1)在大鼠、狗和人肝微粒体中代谢稳定，而在猴肝微粒体中稳定性较差。
[0235] 试剂盒和制品
[0236] 为了用于此处所述的治疗应用，此处也描述了剂盒和制品。该试剂盒可包含被区室化以容纳一个或多个容器如小瓶、管等的载体、包装或容器，每个容器包含一个用于此处所述的方法中的分隔的元件。合适的容器包括，例如瓶子、小瓶、注射器和试管。容器可以由多种材料如玻璃或塑料形成。
[0237] 例如，容器可以包含一种或多种此处所述的化合物，任选地在组合物中或与此处公开的另一种药剂相组合。容器任选地具有无菌入口(例如，容器可以是静脉溶液袋，或具有可以被皮下注射针头刺破的塞子的 小瓶)。该试剂盒任选地包括化合物，具有标识说明或标签或与其在此处所述的方法中的应用相关的说明。
[0238] 试剂盒通常包含一个或多个额外的容器，每个具有一种或多种从商业和用户角度来看对于此处所述的化合物的使用来说需要的材料(如试剂，任选地为浓缩形式，和/或装置)。这样的材料的非限制性例子包括但不限于缓冲液、稀释剂、过滤器、针头、注射器、载体、包装、容器、小瓶和/或管子标签，其中列出了内容物和/或使用说明，和具有使用说明的包装插页。通常也包括一组说明。
[0239] 标签可以位于容器上或与容器关联。当构成标签的字母、数字或其它字符被附着、模塑或铭刻在容器本身时，标记可以在容器上；当它存在于支撑容器的托架或载体内，例如作为包装插页时，标签可以与容器关联。标签可以用来说明内容物将用于特定的治疗应用。标签也可以说明内容物的使用说明，如在此处所述的方法中的使用说明。
[0240] 说明性实施例
[0241] 下列实施例提供了用于制备和测试式(1)的化合物的有效性和安全性的示例性方法。提供这些实施例仅仅是为了说明的目的，而不是为了限制此处提供的权利要求的范围。此处公开和要求保护的所有方法可以根据本公开内容进行和实施，而无需过多的实验。对于本领域技术人员而言很明显，在不偏离权利要求的概念、精神和范围的情况下，可以对此处所述的方法和方法的步骤或方法的步骤的顺序进行变化。所有这些对本领域技术人员而言显而易见的相似的替代和修改被视为在所附的权利要求的精神、范围和概念之内。
[0242] 实施例1:式 (1)的化合物的合成
[0243] 实施例1a：3α-乙酰氧基 -17-(1H-苯并咪唑 -1-基 )-16-甲酰雄甾 -5,16-二烯的合成
[0244]
[0245] 33.4kg 3α-乙酰氧基-17-氯-16-甲酰雄甾-5,16-二烯与苯并咪唑及碳酸钾在二甲基甲酰胺(DMF)中混合并加热，直至根据剩余的起始原料量测定反应完全。反应完全后，将反应混合物冷却并与冷却的水混合以猝灭反应。从猝灭的反应混合物中分离固体，并用DMF和水的混合物、水、稀盐酸水溶液、水、稀碳酸氢钠水溶液和水顺序洗涤。随后干燥中间产物3α-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯。
[0246] 实施例1b：3α-乙酰氧基 -17-(1H-苯并咪唑 -1-基 )雄甾 -5,16-二烯的合成和纯化
[0247]
[0248] 3α-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯与N-甲基吡咯烷酮(NMP)中的大约10%碳载钯催化剂(Pd/C)混合并加热，直至反应完全，这根据反应混合物中3α-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯/3α-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-5,16-二烯的比例来确定。反应完全后，冷却反应混合物。加入硫酸镁，过滤获得的混合物。将水加入滤液，搅拌获得的混合物。将固体粗品3α-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-5,16-二烯从水/NMP混合物中分离出来，用水和甲醇的混合物洗涤，干燥，并包装。
[0249] 将粗品3α-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-5,16-二烯溶解于乙酸乙酯中并使之澄清。通过真空蒸馏减小该混合物的体积。冷却获得的混合物，分离固体，用冷的乙酸乙酯洗涤，真空下干燥。在一些实施方式中，对样品进行进程内测试以确定杂质水平。如果杂质水平不可接受， 重复再结晶过程。
[0250] 实施例1c：3α-羟基 -17-(1H-苯并咪唑 -1-基 )雄甾 -5,16-二烯的合成和纯化[0251]
[0252] 3α-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-5,16-二烯与甲醇中的甲醇钠混合并加热，直至反应完全，这根据剩余的3α-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-5,16-二烯的量来确定。反应完全后，将反应化合物冷却并与水混合以猝灭反应。
搅拌获得的浆液并进一步冷却。将固体粗品3α-羟基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄
甾-5,16-二烯从猝灭的混合物中分离出来，用甲醇和水的混合物洗涤，然后用水洗涤，直至洗液为中性，随后干燥并包装。
搅拌获得的浆液并进一步冷却。将固体粗品3α-羟基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄
甾-5,16-二烯从猝灭的混合物中分离出来，用甲醇和水的混合物洗涤，然后用水洗涤，直至洗液为中性，随后干燥并包装。
[0253] 将粗品3α-羟基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-5,16-二烯溶解于甲醇和乙酸乙酯的混合物中，并使之澄清。通过溶剂交换，将产物从甲醇/乙酸乙酯溶液中转移至单独的乙酸乙酯中。冷却获得的混合物，分离固体，用冷的乙酸乙酯洗涤，并在真空下干燥。在一些实施方式中，对样品进行进程内测试以确定杂质水平。如果杂质水平不可接受，则重复再结晶过程。
[0254] 实施例2:(5S,10S,13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-10,13-二甲基
[0255] -4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十二氢-1H-环戊 [a]菲 -3(2H)-酮(6)的合成。
[0256]
[0257] 步骤1：(3S,5S,10S,13S)-17-氯 -16-甲酰基 -10,13-二甲基
[0258] -2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十四氢 -1H-环戊 [a]菲 -3-基乙酸酯(2)的合成。
[0259] 将醋酸盐1(3.0g,9.02mmol)在无水氯仿(60mL)中的溶液逐滴加入氮气下的氧氯化磷(15.0mL)和二甲基甲酰胺(15.0mL)的冷却(0°C)并搅拌的溶液中。将混合物升温至25°C，然后加热至回流5h，然后在50°C搅拌过夜。获得的混合物在减压条件下浓缩，倾倒至冰上，用乙酸乙酯萃取。合并的萃取物用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压条件下去除溶剂以获得白色的固体。通过使用1-10%EtOAc/己烷的快速色谱法进行纯化获得化合1
物2(2.59g,81%)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.85(s,3H),0.95(s,3H),0.96-1.55(m,11H),1.60-173(m,5H),1.80-1.84(m,2H),1.97-2.06(m,1H),2.0(s,3H),2.52(m,1H),4.67(m,1H),9.96(s,1H)。
物2(2.59g,81%)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.85(s,3H),0.95(s,3H),0.96-1.55(m,11H),1.60-173(m,5H),1.80-1.84(m,2H),1.97-2.06(m,1H),2.0(s,3H),2.52(m,1H),4.67(m,1H),9.96(s,1H)。
[0260] 步骤2：(3S,5S,10S,13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-16-甲酰基 -10,13-二甲基-2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十四氢 -1H-环戊 [a]菲 -3-基醋酸酯 (3)的制备。
[0261] 将 化 合 物 2(2.58g,6.80mmol)、苯 并 咪 唑(2.41g,20.4mmol) 和 碳 酸 钾(3.4g,24.6mmol)在干DMF(22mL)中的混合物在N2条件下在25°C加热1h。使混合物冷却至25°C，加入水中，用EtOAc萃取获得的固体。合并的萃取物用水、盐水洗涤，并干燥(Na2SO4)，在减压条件下去除溶 剂以获得棕色的固体。通过使用1-3%MeOH/CH2Cl2的快速色1
谱法进行纯化，获得淡黄色固体的化合物3(3.0g，定量)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.86(s,
6H),0.89-1.6(m,10H),1.61-1.80(m,8H),2.01(s,3H),2.24-2.33(m,1H),2.75(dd,J=15.1+
,6.06Hz,1H),4.68(m,1H),7.33(m,3H),7.84(m,1H),7.86(s,1H),9.56(s,1H)。APCI=461。
谱法进行纯化，获得淡黄色固体的化合物3(3.0g，定量)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.86(s,
6H),0.89-1.6(m,10H),1.61-1.80(m,8H),2.01(s,3H),2.24-2.33(m,1H),2.75(dd,J=15.1+
,6.06Hz,1H),4.68(m,1H),7.33(m,3H),7.84(m,1H),7.86(s,1H),9.56(s,1H)。APCI=461。
[0262] 步骤3：(3S，5S，10S，13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-1013-二甲基[0263] -2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十四氢 -1H-环戊 [a]菲 -3-基醋酸酯(4)的制备。
[0264] 将 化 合 物3(1.5g,3.0mmol)在 干 苯 甲 腈(8mL)中 的 溶 液 在 存 在 Pd/C(10wt%,750mg)的条件下回流16h。冷却至25°C后，通过经硅藻土垫过滤而去除催化剂。蒸发滤液，残余物通过使用1%MeOH/CH2Cl2的快速色谱法纯化，获得淡黄色固体的化合1
物4(0.7g，50%)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.86(s,3H),0.96(s,3H),0.78-0.9(m,1H),1.0-
1.51(m,2H),1.27-1.83(m,15H),2.03(s,3H),2.10-2.18(m,1H),2.34-2.42(m,1H),4.68(m+
,1H),5.96(s,1H),7.27(m,2H),7.45(m,1H),7.80(m,1H),7.95(s,1H)。APCI=433。
物4(0.7g，50%)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.86(s,3H),0.96(s,3H),0.78-0.9(m,1H),1.0-
1.51(m,2H),1.27-1.83(m,15H),2.03(s,3H),2.10-2.18(m,1H),2.34-2.42(m,1H),4.68(m+
,1H),5.96(s,1H),7.27(m,2H),7.45(m,1H),7.80(m,1H),7.95(s,1H)。APCI=433。
[0265] 步骤4：(3S，5S，10S，13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-1013-二甲基[0266] -2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十四氢-1H-环戊 [a]菲 -3-醇(5)的制备。
[0267] 将KOH在甲醇中的溶液 (10%,4.3mL)逐滴加入到 0°C 的醋酸酯4(450mg,1.61mmol)在甲醇(11.0mL)中的溶液中。将混合物加温至25°C，搅拌过夜。在减压条件下蒸发溶剂，向残余物中加水，混合物用乙酸乙酯萃取。有机相用水、盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。在减压条件下去除溶剂以获得粗物质，通过使用100%CH2Cl2和1-2%MeOH/
1
CH2Cl2的快速色谱法将其纯化，以分离淡黄色固体5(400mg，63%)。 H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.85(s,3H),0.97(s,3H),0.78-0.81(m,1H),0.99-1.50(m,10H),1.60-1.90(m,8H),2.11-2.20(m,1H),2.34-2.41(m,1H),3.62(m,1H),5.95(dd,J=1.6,3.3Hz,1H),7.28+
(m,2H),7.47(m,1H),7.80(m,1H), 7.94(s，1H)。HPLC＝98％。APCI＝391。
1
CH2Cl2的快速色谱法将其纯化，以分离淡黄色固体5(400mg，63%)。 H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.85(s,3H),0.97(s,3H),0.78-0.81(m,1H),0.99-1.50(m,10H),1.60-1.90(m,8H),2.11-2.20(m,1H),2.34-2.41(m,1H),3.62(m,1H),5.95(dd,J=1.6,3.3Hz,1H),7.28+
(m,2H),7.47(m,1H),7.80(m,1H), 7.94(s，1H)。HPLC＝98％。APCI＝391。
[0268] 步骤5：(5S，10S，13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-10，13-二甲基[0269] -4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15-十二氢-1H-环戊 [a]菲 -3(2H)-酮(6)的制备。
[0270] 将N-甲基吗啡啉-N-氧化物(NMO，108mg，0.92mmol)、分子筛( 300mg)和四丙基过钌酸铵(TPAP，14mg，0.04mmol)加入5(150mg，0.38mol)在二氯甲烷(4.0mL)和乙腈(0.4mL)的混合物中的溶液中。混合物在25℃搅拌4h。反应混合物经过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩为黑色残余物，通过使用100％CH2Cl2然后使用1-2％MeOH/CH2Cl2作为洗脱液1
的快速色谱法将其纯化，以分离为灰白色固体的分离物6(77mg，52％)。 H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.99(s，3H)，1.05(s，3H)，1.07-1.15(m，2H)，1.30-1.52(m，4H)，1.62-1.85(m，
6H)，1.96-2.43(m，8H)，5.96(dd，J ＝ 1.6，3.3Hz，1H)，7.28(m，2H)，7.47(m，1H)，7.80(m，+
1H)，7.93(s，1H)。HPLC＝96%。APCI＝389。
的快速色谱法将其纯化，以分离为灰白色固体的分离物6(77mg，52％)。 H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.99(s，3H)，1.05(s，3H)，1.07-1.15(m，2H)，1.30-1.52(m，4H)，1.62-1.85(m，
6H)，1.96-2.43(m，8H)，5.96(dd，J ＝ 1.6，3.3Hz，1H)，7.28(m，2H)，7.47(m，1H)，7.80(m，+
1H)，7.93(s，1H)。HPLC＝96%。APCI＝389。
[0271] 实施例3：(5R，10S，13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-10，13-二甲基[0272] -4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15-十二氢-1H-环戊 [a]菲 -3(2H)-酮(7)的合成。
[0273]
[0274] 步骤1：(3R,5R,10S,13S)-10,13-二甲基-17-氧代十六氢-1H-环戊[a]菲-3-基醋酸酯(2)的制备。
[0275] 将醋酸酐(4.22g,41.32mmol)逐滴加入氮气下0°C的乙醇1(3.0g,10.33mmol)在嘧啶(30mL)中的溶液中，然后将混合物加温至25°C并在25°C搅拌过夜。将水加入反应混合物中，用EtOAc稀释获得的混合物。分离有机相，用EtOAc萃取水相。混合的有机相相继用1N HCl、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。干燥(Na2SO4)并蒸发有机相，以分离为白1
色固体的所需的醋酸酯2(3.45g，定量)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.84(s,3H),0.95(s,3H),1.0-1.58(m,13H),1.60-1.74(m,2H),1.78-1.98(m,5H),2.0(s,3H),2.10(m,1H),2.45(m,1H),4.71(m,1H)。
色固体的所需的醋酸酯2(3.45g，定量)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.84(s,3H),0.95(s,3H),1.0-1.58(m,13H),1.60-1.74(m,2H),1.78-1.98(m,5H),2.0(s,3H),2.10(m,1H),2.45(m,1H),4.71(m,1H)。
[0276] 步骤2：(3R,5R,10S,13S)-17-氯 -16-甲酰基 -10,13-二甲基
[0277] -2,3,4,5,6,7，8,9,10,11,12,13,14,15-十四氢 -1H-环戊 [a]菲 -3-基醋酸酯(3)的制备。
[0278] 将醋酸盐2(1.5g,4.51mmol)在无水氯仿(30mL)中的溶液逐滴加入到氮气下的氧氯化磷(7.5mL)和二甲基甲酰胺(7.5mL)的搅拌的冷(0°C)溶液中。将混合物加温至25°C，加热至回流5h，然后在50°C搅拌过夜。获得的混合物在减压条件下浓缩，倾倒至冰上，用乙酸乙酯萃取。混合的萃取物用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，在减压条件下去除溶剂，以获得白色的固体。通过使用1-10%EtOAc/己烷的快速色谱法纯化获得化合物1
3(1.17g,68%)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.94(s,3H),0.96(s,3H),1.0-1.58(m,13H),1.60-2.0(m,5H),1.98-2.1(m,1H),2.0(s,3H),2.51(m,1H),4.71(m,1H),9.97(s,1H)。
3(1.17g,68%)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.94(s,3H),0.96(s,3H),1.0-1.58(m,13H),1.60-2.0(m,5H),1.98-2.1(m,1H),2.0(s,3H),2.51(m,1H),4.71(m,1H),9.97(s,1H)。
[0279] 步骤3：(3R,5R,10S,13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-16-甲酰基 -10,13-二甲基-2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十四氢 -1H-环戊 [a]菲 -3-基醋酸酯 (4)的制备。
[0280] 将 化 合 物 3(1.17g,3.08mmol)、苯 并 咪 唑(1.09g,9.22mmol) 和 碳 酸 钾(1.54g,11.1mmol)在干二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物在N2下80℃加热1h。将混合物冷却至25°C，加入水中，用EtOAc萃取获得的固体。合并的萃取物用水、盐水洗涤，并干燥(Na2SO4)，去除溶剂以获得棕色的固体。通过使用1-3%MeOH/CH2Cl2的快速色谱法纯化获得1
淡黄色固体的化合物4(1.40g，定量)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.94(s,6H),0.92-1.5(m,6H),1.50-1.59(m,2H),1.60-1.90(m,10H),2.03(s,3H),2.24-2.33(m,1H),2.75(dd,J=15.1+
,6.06Hz,1H),4.74(m,1H),7.33(m,3H),7.84(m,1H),7.86(s,1H),9.59(s,1H)。APCI=461。
淡黄色固体的化合物4(1.40g，定量)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.94(s,6H),0.92-1.5(m,6H),1.50-1.59(m,2H),1.60-1.90(m,10H),2.03(s,3H),2.24-2.33(m,1H),2.75(dd,J=15.1+
,6.06Hz,1H),4.74(m,1H),7.33(m,3H),7.84(m,1H),7.86(s,1H),9.59(s,1H)。APCI=461。
[0281] 步骤4：(3R,5R,10S,13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-10,13-二甲基[0282] -2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十四氢 -1H-环戊 [a]菲 -3-基醋酸酯(5)的制备。
[0283] 将 化 合 物 4(700mg,1.51mmol)在 干 苯 甲 腈(3.4mL) 中 的 溶 液 在 Pd/C(10wt%,350mg)的存在下回流8h。冷却至室温后，通过经硅藻土垫过 滤而去除催化剂。蒸发滤液，残余物通过使用1％MeOH/CH2Cl2的快速色谱法纯化，获得淡黄色固体的化合
1
物5(0.46g，71％)。H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.94(s，3H)，0.97(s，3H)，0.92-1.5(m，6H)，
1.50-1.59(m，2H)，1.60-1.90(m，10H)，2.03(s,3H)，2.24-2.33(m，1H)，2.75(dd，J＝15.1，
6.06Hz，1H)，4.74(m，1H)，5.96(s，1H)，7.27(m，2H)，7.33(m，1H)，7.81(m，1H)，7.93(s，1H)。
+
APCI＝433。
1
物5(0.46g，71％)。H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.94(s，3H)，0.97(s，3H)，0.92-1.5(m，6H)，
1.50-1.59(m，2H)，1.60-1.90(m，10H)，2.03(s,3H)，2.24-2.33(m，1H)，2.75(dd，J＝15.1，
6.06Hz，1H)，4.74(m，1H)，5.96(s，1H)，7.27(m，2H)，7.33(m，1H)，7.81(m，1H)，7.93(s，1H)。
+
APCI＝433。
[0284] 步骤5：(3R，5R，10S，13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-10，13-二甲基[0285] -2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15-十四氢-1H-环戊 [a]菲 -3-醇(6)的制备。
[0286] 将KOH在甲醇中的溶液(10％，2.8mL)逐滴加入到0℃的醋酸酯5(450mg，1.04mmol)在甲醇(7.0mL)中的溶液中，将混合物加温至25℃并搅拌2h。溶剂在减压条件下蒸发为残余物，将水加入残余物中。用乙酸乙酯萃取获得的混合物。有机相用水、盐水洗涤并干燥(Na2SO4)。在减压条件下去除溶剂以获得粗物质，通过使用100％CH2Cl2然后使用1-2％MeOH/CH2Cl2的快速色谱法将其纯化，以分离淡黄色固体6(250mg，63％)。
1
H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.94(s，3H)，0.97(s，3H)，1.00-1.35(m，1H)，1.22-1.56(m，8H)，
1.60-2.0(m，10H)，2.10-2.20(m，1H)，2.34-2.45(m，1H)，3.65(m，1H)，5.96(dd，J ＝ 1.6，+
3.3Hz，1H)，7.28(m，2H)，7.47(m，1H)，7.79(m，1H)，7.93(s，1H).HPLC＝100%。APCI＝391。
1
H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.94(s，3H)，0.97(s，3H)，1.00-1.35(m，1H)，1.22-1.56(m，8H)，
1.60-2.0(m，10H)，2.10-2.20(m，1H)，2.34-2.45(m，1H)，3.65(m，1H)，5.96(dd，J ＝ 1.6，+
3.3Hz，1H)，7.28(m，2H)，7.47(m，1H)，7.79(m，1H)，7.93(s，1H).HPLC＝100%。APCI＝391。
[0287] 步骤6：(5R，10S，13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-10，13-二甲基[0288] -4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15-十二氢-1H-环戊 [a]菲 -3(2H)-酮(7)的制备。
[0289] 将N-甲基吗啡啉-N-氧化物(NMO，94mg，0.8mmol)、分子筛( 260mg)和四丙基过钌酸铵(TPAP，12mg，0.034mmol)加入6(130mg，0.33mmol)在二氯甲烷(3.0mL)和乙腈(0.33mL)的混合物中的溶液中。混合物在25℃搅拌4h。反应混合物经过硅藻土垫过滤，将滤液浓缩为黑色残余物，通过使用100％CH2Cl2然后使用1-2％MeOH/CH2Cl2作为洗脱1
液的快速色谱法将其纯化，以分离为灰白色固体的分离物7(91mg，70％)。H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.99(s，3H)，1.07(s，3H)，1.20-1.54(m， 4H),1.62-1.78(m,4H),1.80-1.92(m,4H),1.96-2.20(m,3H),2.15-2.25(m,2H),2.28-2.5(m,2H),2.73(m,1H),5.96(dd,J=1.6,3.3+
Hz,1H),7.28(m,2H),7.47(m,1H),7.79(m,1H),7.93(s,1H).HPLC=99%。APCI=389。
液的快速色谱法将其纯化，以分离为灰白色固体的分离物7(91mg，70％)。H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.99(s，3H)，1.07(s，3H)，1.20-1.54(m， 4H),1.62-1.78(m,4H),1.80-1.92(m,4H),1.96-2.20(m,3H),2.15-2.25(m,2H),2.28-2.5(m,2H),2.73(m,1H),5.96(dd,J=1.6,3.3+
Hz,1H),7.28(m,2H),7.47(m,1H),7.79(m,1H),7.93(s,1H).HPLC=99%。APCI=389。
[0290] 实施例4:(3S,10R,13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-10,13-二甲基
[0291] -2.3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十二氢 -1H-环戊 [a]菲 -3-醇 (3)。
[0292]
[0293] 步骤1：(10R,13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-10,13-二甲基
[0294] -6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十氢 -1H-环戊 [a]菲 -3(2H)-酮 (2)的制备。
[0295] 根据WO 2006/093993中所述的方法制备酮2。
[0296] 步骤2：(3S,10R,13S)-17-(1H-苯并 [d]咪唑 -1-基 )-10,13-二甲基
[0297] -2,3,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十二氢 -1H-环戊 [a]菲 -3-醇 (3)的制备。
[0298] 将七水合氯化铈(145mg,0.39mmol)加入N2下的酮2(150mg,0.39mmol)在甲醇(4mL)中的溶液中，将溶液冷却至-20℃。然后加入硼氢化钠(7.4mg,0.195mmol)，混合物在-20°C搅拌0.5h，然后在-15°C搅拌0.5h。将水加入反应混合物中，随后加入EtOAc。分离有机相，用EtOAc萃取水相。合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发，以分离
1
为白色固体的所需的产物3(150mg，定量)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.90-1.06(m,2H),0.
99(s,3H),1.08(s,3H),1.27-1.50(m,3H),1.57-1.87(m,7H),1.90-1.98(m,1H),2.05-2.42(m,4H),4.14(m,1H),5.32(d,J=1.4Hz,1H),5.96(dd,J=3.03,1.4Hz,1H),7.29(m,2H),7.47+
(m,1H),7.80(m,1H),7.96(s,1H)。HPLC=97%,APCI=389。
1
为白色固体的所需的产物3(150mg，定量)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ0.90-1.06(m,2H),0.
99(s,3H),1.08(s,3H),1.27-1.50(m,3H),1.57-1.87(m,7H),1.90-1.98(m,1H),2.05-2.42(m,4H),4.14(m,1H),5.32(d,J=1.4Hz,1H),5.96(dd,J=3.03,1.4Hz,1H),7.29(m,2H),7.47+
(m,1H),7.80(m,1H),7.96(s,1H)。HPLC=97%,APCI=389。
[0299] 实施例5:药物组合物
[0300] 实施例2a：口服组合物
[0301] 为了制备用于口服施用的药物组合物，将式(1)的化合物微粉化，以使其具有约0.20g/mL的堆积密度和约0.31g/mL的振实密度。将90mg微粉化的化合物填塞进适于口服施用的尺寸"3"的胶囊。
[0302] 实施例2b：口服组合物
[0303] 为了制备用于口服施用的药物组合物，将式(1)的化合物微粉化，以使其具有约0.20g/mL的堆积密度和约0.31ng/mL的振实密度。将325mg微粉化的化合物填塞进适于口服施用的尺寸"00"的胶囊。
[0304] 实施例2c：口服组合物
[0305] 为了制备用于口服施用的药物组合物，将90mg式(1)的化合物与200mg乳糖和1%硬脂酸镁混合。混匀混合物并直接压制成适于口服施用的片剂。
[0306] 实施例6：体外药理学研究
[0307] 实施例3a：雄激素受体结合试验
[0308] 用放射性标记的R1881(一种雄激素激动剂)在表达突变AR(IC50为384nM)的雄激素敏感性人前列腺癌细胞系(LNCaP)细胞和表达野生型AR(IC50为845nM)的细胞中测定雄激素受体(AR)竞争结合。以递增的浓度将式(1)的化合物加入细胞中。测定放射性标记的R1881的量作为与AR竞争结合的测定值。
[0309] 实施例3b：裂解酶活性的抑制
[0310] 分离并纯化由转染的大肠杆菌（E.coli）表达的完整CYP17作为酶来源。放射性标记的17-α-羟基孕烯醇酮作为底物。根据在底物的C-21侧链切割期间形成的氚标记的醋酸的量测定CYP17活性。以递增的浓度将式(1)的化合物加入反应中以评估对底物的CYP17切割的抑制效果。
[0311] 实施例3c：对睾酮诱导的前列腺癌细胞系增殖的抑制
[0312] 人前列腺癌细胞系(LNCaP和LAPC-4)在培养基中生长并用1nM二氢睾酮(DHT)刺激。该浓度的DHT刺激前列腺癌细胞的增殖。以递增的浓度将式(1)的化合物加入细胞中以评价对增殖的影响。
[0313] 实施例3d：在前列腺癌细胞系中雄激素受体 (AR)蛋白的降解
[0314] 将环己酰亚胺加入人前列腺癌细胞(LNCaP)以抑制培养细胞中所有的蛋白质合成。当蛋白质提取物用针对AR蛋白的单克隆抗体探测时，环己酰亚胺单独处理以时间依赖的方式降低AR水平。以递增的浓度将式(1)的化合物加入细胞中，以确定这种加入是否导致培养中AR蛋白随时间以显著更快的速率降低。
[0315] 实施例7：体内药理学研究
[0317] 将LAPC4前列腺癌细胞肿瘤的异种移植物植入SCID小鼠中。荷瘤小鼠接受每天两次50mg/kg体重(BW)的式(1)化合物的皮下(SC)施用。每周测量肿瘤大小，并与接受载体 或仅仅去势的对照小鼠进行比较。
[0318] 实施例8：β-羟基 -17(1H-苯并咪唑 -1-基 )雄甾 -5，16-二烯的代谢物的检测检测系统
[0319] 3β-羟基-17(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-5，16-二烯与蛋白质浓度为0.6mg/mL的合并的大鼠、狗、猴和人肝微粒体孵育。孵育混合物包含0.1M磷酸钾缓冲液pH 7.4或孵育缓冲液。孵育混合物在约37℃预孵育两分钟后，通过加入NADPH-生成系统(NADPH-GS)(1mM NADP+、5mM葡萄糖-6-磷酸、1.0单位/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)或0.1M磷酸盐缓冲液而启动反应。在合适的时间点(0、15、30、60和120分钟)，通过加入合适的终止溶液(含0.1％甲酸的乙腈)而终止反应。将样品在20℃以约 10000×g离心10分钟。从每份样品中转移一定量的上清液至预先标记的HPLC小瓶中用于分析。通过LC/MS分析样品以监测剩余的母体化合物或可能的代谢物的形成。在每种情况下都包括包含TOK-001但没有微粒体的空白样品。
[0320] 结果
[0321] 对3β-羟基-17(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-5,16-二烯进行的LC/MS显示m/z为389。在所有的物质中，相比于阴性对照，肝微粒体对3β-羟基-17(1H-苯并咪唑-1-基)雄甾-5,16-二烯的消耗与m/z405和421处新峰的形成相关，提示其为可能的代谢物（例如单羟基化和二羟基化反应）。
[0322] 实施例9：通过 HPLC-MS/MS对代谢物化学结构的验证
[0323] 设置用于对血浆中如下母体化合物进行定量的HPLC-MS/MS方法并进行优化，以提供对非人灵长类动物血浆样品中可能的代谢物峰的基线分辨率。
[0324]
[0325] 评估了流动相和固定相以及梯度修改的数种组合。使用ACE 5C18固定相以及修改的梯度获得了提高的分辨率。
[0326] 优化的方法足以保证对该方法所做的修改不会对其定量母体化合物的性能产生不利影响。确定优化的方法在0.5–500ng/mL母体化合物的范围内是线性的。在线性范围内的18份标准品中，总共18份满足在其标示浓度±15%内的反向计算接受标准，并且对于每份重复提取具有在15%以下的CV。
[0327] 根据已验证的方法提取狗和猴研究时保留的体内血浆样品，并以全扫描模式进行分析。以相对于母体的质量变化鉴定数个种类，其对应于以前观察的体内修饰。
[0328] 通过直接注入质谱仪而获得母体化合物的清晰的片段化图谱。对在分析性稀释液和人血浆中制备的浓度逐渐降低的样品进行分析，以确定在什么浓度下观察到的片段化图谱可以与背景噪音区别开来。
[0329] 对于稀释液中包含0.417ng/mL母体和血浆中包含5–10ng/mL母体的样品获得了清晰的图谱。
[0330] 分析母体可能代谢物的9份可信标准品，确定了这些可信标准品中的两份（标准品5（Std.5）和标准品7（Std.7））的确与来自体内研究的样品中观察到的两个代谢物峰之一共洗脱。9份可信标准品中没有一个与其它观察到的代谢物峰相匹配。
[0331] 观察到其它峰与体内研究期间的母体化合物共洗脱或几乎共洗脱。通过采用相同质量转换(389m/z至195m/z)的多反应监测(MRM)获得这些其它的峰，表明除了分析物峰之外的峰可能是由一个或多个双键迁移和/或差向异构化作用或仲羟基的迁移产生的母体同分异构体。设想并合成母体可能的同分异构代谢物，用作分析实验中的比较标准品。这些实验需要母体和其它峰之间足够的分辨率以用于精确和可重复的定量。
[0332] HPLC-MS/MS生物分析方法优化
[0333] 在HPLC-MS/MS平台上设置用于母体定量的初始HPLC-MS/MS方法。根据已验证的方法提取来自前面研究中的狗和猴血浆样品并进行分析，以重现初始色谱图。样品的色谱图如图26和27中所示。
[0334] 筛选多个分析柱，分析提取的狗和猴的血浆样品，并用下列流动相进行测试：0.1%甲酸的水溶液和0.1%甲酸的乙腈溶液。在柱的选择中评估峰形、峰面积和峰对称性的参数。下表列出了测试的柱以及观察的色谱图的简要评述。
[0335] 分析柱选择。
[0336]
[0337] 用ACE 5C18(p/n ACE-121-0502)柱获得了最有希望的结果。还评价了其它流动相在改进观察到的峰之间的分辨率方面的效果。其它的流动相包括：
[0338] ·0.1%甲酸的水溶液和0.1%甲酸的甲醇(MeOH)溶液；以及
[0339] ·2mM醋酸铵，0.1%甲酸，95:5H2O:MeOH和2mM醋酸铵
[0340] ，0.1%甲酸，5:95H2O:MeOH。
[0341] 使用所有三组流动相获得了相似的结果。为了使与验证的方法相比改变的参数数目最小化，选择初始流动相（0.1%甲酸的水溶液和0.1%甲酸的乙腈溶液）用于优化的方法。该方法的最终修改涉及梯度优化以改进观察到的峰之间的分辨率。图28中显示了用优化的方法获得的提取的猴血浆样品的样品色谱图。
[0342] 如下概括的用于定量人血浆中母体的优化HPLC-MS/MS生物分析方法是合格的。
[0343] 合格的HPLC-MS/MS条件的概要
[0344]
[0345] 如下所述制备0.5–1,000ng/mL范围内的校准标准品并提取双份。
[0346] 校准标准品制备
[0347]
[0348] 校准标准品提取的结果如下所示。校准曲线如图29中所示。
[0349] 校准标准品统计数据。
[0350]
[0351] 确定优化方法在0.5–500ng/mL母体化合物的范围内是线性的。线性范围内的18份标准品中，总共18份满足在其标示浓度的±15%内的反向计算接受标准，并且对于每份重复提取具有在15%以下的CV。在定量下限(LLOQ)和定量上限(ULOQ)制备的两组标准品都满足规定的接受标准。
[0352] 空白血浆的提取表现出一致的母体信号。约20次提取空白血浆注射的平均信号对应于约0.05ng/mL的计算浓度，其代表定量下限(0.5ng/mL)的10%。这种空白信号不影响人血浆中母体的定量。
[0353] 修改优化的HPLC-MS/MS生物分析方法，以便以全扫描模式收集数据，提取并分析来自前面研究的血浆样品。从母体质量改变的全扫描数据中提取可能代谢物的预测m/z。下面列举了对于狗和猴血浆样品所鉴定的可能代谢物以及它们各自的保留时间。星号标记的条目代表以下情形，其中可能的代谢物的产生很可能由于具有相似m/z的不同种类的同位素分布。这些情形的鉴定是基于m/z值仅相差2个单位的种类的共洗脱以及每个峰的对应峰强度。
[0354] 在狗血浆样品中观察的可能的代谢物。
[0355]
[0356] 在猴血浆样品中观察的可能的代谢物。
[0357]
[0358] 通过将在分析方法稀释剂中制备的母体的溶液直接注入质谱仪中而获得母体药物的清晰的片段化图谱，如图30所示。
[0359] 在分析方法稀释剂中制备一系列母体标准品，并以产物离子扫描模式进行分析以获得片段化图谱。该图谱可以与背景噪音相区别的最低浓度被测定为在分析方法稀释剂中制备的约0.42ng/mL的母体。片段化图谱如图31中所示。
[0360] 随后，将母体加入血浆中并根据已验证的方法进行提取。分析获得的浓度逐渐降低的样品，以确定分析保留的体内研究样品以确定是否存在片段化图谱是否可行。图谱可以与背景噪音相区别的血浆样品最低浓度被测定为血浆中的5–10ng/mL的母体。两种浓度的片段化图谱如图32和33中所示。对于5ng/mL样品观察到确定的图谱(图32)；然而，当应用于体内样品时，低信号强度可能是一个限制因素。
[0361] 在方法稀释剂中制备可能的代谢物的9份可信标准品，并通过优化的HPLC-MS/MS方法进行分析。可能的代谢物的概况以及与提取的食蟹猴血浆的比较如下所示。提取的血浆样品与9份可信标准品中观察到峰的6份标准品的色谱图如图34–40所示。9份可信标准品中的3份（标准品4、标准品8和标准品9）在方法色谱分析中在MRM 391→195没有观察到，而其它两份标准品（标准品1和标准品6）在MRM 391→195仅有次要峰。将这5份标准品注入，其中四份（标准品4、标准品6、标准品8和标准品9）经测定具有比母体化合物的分子离子质量高2amu的分子离子质量。化合物标准品1经测定具有388amu的分子离子质量，与母体化合物相同，尽管在优化的MS/MS参数下，没有产生显著量的m/z 195片段。使用为母体化合物优化的MS/MS参数，获得母体化合物与标准品1的产物离子光谱，而这比较如图41和42所示。
[0362] 可能的代谢物的概况
[0363]
[0364]
[0365] 没有一种可信标准品与猴样品在1.7分钟时观察到的早期洗脱代谢物的色谱图相匹配。
[0366] 两种可信代谢物（标准品5和标准品7）与2.7分钟时的较晚洗脱代谢物的色谱图相匹配。
[0367] 观察到可信标准品2与母体化合物共洗脱（最主要峰）。如果这种可能的代谢物存在于血浆样品中，用现在的方法无法将其与母体区别开来。
[0368] 可信标准品1和标准品3具有在血浆样品的色谱图中没有观察到的独特峰。可信标准品1被观察到具有与388amu的母体相匹配的母体质量，尽管使用为母体优化的MS/MS参数时没有产生显著量的m/z 195片段（图41和42），而最主要峰是m/z119。
[0369] 观察到可信标准品4、标准品6、标准品8和标准品9具有比母体的质量高2amu的390amu的母体质量。观察到可信标准品6具有与母体以及与2.7分钟处较晚洗脱代谢物色谱共洗脱的次要峰，尽管具有明显更低的响应，结合观察到的比母体高2amu，提示这两个峰源自标准品6样品中的杂质。
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