技术领域
[0001] 本
发明属于
生物农药技术领域，具体涉及绿僵菌与短稳杆菌的复配杀虫剂及其应用。
背景技术
[0002] 森林可以调节
气候、涵养
水源、保持水土、减少噪音、
净化空气、美化环境等并且结构复杂、多样性高、
稳定性强，具有开发潜
力大、生态安全的重要特点，包括生态公益林、用材林和城市生态景观建设林等。近年来林业病虫害危害已经呈上升趋势，一些常见的病虫害已经上升为主要病虫害而严重发生与流行。其重大病虫害种类不断增多，严重的导致成片林木发病或死亡，造成的经济损失和生态环境的毁坏难以估量，严重制约了森林的健康发展。但
化学农药的大量使用增加了
害虫的抗药性、污染了环境。目前市场上有多种混配农药，多为不同作用机制的化学农药间的混配，其使用量大，且害虫易产生多种抗药性。多种化学药剂的长期使用已造成农林用地农药残留量的增加，致使多种产品在国际市场上交易受限，而害虫对药剂的抗药性的增加和药剂对天敌害虫的杀伤也致使用药量和用药
频率的增加，常常导致某一害虫或多种害虫再猖獗的发生。
[0003] 短稳杆菌(Empedobacter brevis)是一种昆虫病原细菌，革兰氏阴性杆菌，可广泛用于多种农、林、果、蔬、茶和草坪等
植物的鳞翅目类害虫幼虫的防治。昆虫摄入病原细菌制剂后，通过肠细胞吸收，从而破坏肠道壁细胞的胶粘物质，使中肠的透性失去控制，之后细菌大量侵入体腔和血液，虫体发生败血症而最后导致其死亡。感染细菌后的主要表现是取食量减少甚至停食，行动迟钝，几天后死亡，虫体死亡后虫尸会
软化变黑，腐烂发臭污染。在防治城市绿化和公园苗木花草的鳞翅目害虫时，只需喷药时避开行人，喷药后不会对环境造成污染和影响，对有益生物无害。
[0004] 绿僵菌(Metarhizium spp.)是一种昆虫病原
真菌，作为一种生物药剂，因侵染过程涉及多种因素作用，寄主一般难于产生抗药性，能起到对害虫持续控制的作用。因此，已成为害虫防治的重要药剂之一受到关注。绿僵菌能通过主动侵染寄主、穿透昆虫体壁致死寄主，其发病迅猛，可在短期内有效遏制害虫种群数量的急剧增加，将害虫控制在经济损害水平以下。
[0005] 但是绿僵菌和短稳杆菌作为两种生物药剂都有自己的杀虫谱，并且都相对较窄，导致其使用范围和效果很有限。
发明内容
[0006] 本发明的目的是针对
现有技术中复配杀虫剂的不足，提供一种绿僵菌与短稳杆菌的复配杀虫剂及其应用，该杀虫剂与环境友好，可以扩大
生物农药的杀虫谱、增加杀虫效果、减少高残留化学农药的使用；可以应用于防治乡土阔叶树、生态景观林等的林间食叶害虫等方面。
[0007] 本发明的绿僵菌与短稳杆菌的复配杀虫剂，包括有效成分和杀虫剂可接受的辅料，所述的有效成分包括绿僵菌与短稳杆菌。
[0008] 所述的复配杀虫剂可以按照现有常规技术制备成水乳剂、粉剂、
乳油剂等各种剂型。
[0009] 优选，所述的绿僵菌为金龟子绿僵菌M09，也可为金龟子绿僵菌Ma32和金龟子绿僵菌 1245中的一种或两种的混合物。
[0010] 本发明用于复配的绿僵菌不限于金龟子绿僵菌M09、金龟子绿僵菌Ma32、金龟子绿僵菌1245，还可以是其他绿僵菌菌株。因为本发明利用的是绿僵菌的昆虫病原菌的共性与短稳杆菌复配实现增效作用，而非仅利用某个绿僵菌菌株的特性才能实现。
[0011] 优选，所述的金龟子绿僵菌M09为2.5×1010个孢子/g，所述的短稳杆菌为1×1010个孢子 /g，所述的金龟子绿僵菌M09与短稳杆菌的重量比为1-9：1-9。
[0012] 优选，所述的复配杀虫剂为绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂，按重量份计，包括有效成分10-30 份，辅料70-90份；所述的有效成分含金龟子绿僵菌M09 3-27份，短稳杆菌3-27份；所述的辅料含
有机溶剂47-72.8份，乳化剂5-10份，抗
氧化剂0.1-5份，增效剂2-6份，紫外保护剂 0.1-5份；
[0013] 所述的
有机溶剂为
甲苯、二甲苯、二甲基甲酰胺(DMF)、乙醚、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇、甲醇、环己
酮或丙酮中的一种或两种以上的混合物；
[0014] 所述的乳化剂为Tween80、农乳500#、Np-10、Span-80、op-10中的一种或两种以上的混合物；
[0015] 所述的抗
氧化剂为丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没子食子酸丙酯或硫代二丙酸二月桂酯中的一种或两种以上的混合物；
[0016] 所述的增效剂为
柠檬酸、增效醚、氯化脂肪、
碳酸烷其酯、增效砜中的一种或两种以上的混合物；
[0017] 所述的紫外保护剂为
抗坏血酸、
荧光素钠、腐植酸和糊精中的一种或两种以上的混合物。
[0018] 本发明通过将绿僵菌和短稳杆菌复配，发现当绿僵菌和短稳杆菌以特定重量比存在于本发明杀虫剂中时，证明了复配的增效作用，获得了更好的杀虫效果。本发明上述的验证具有增效作用、获得更好的杀虫效果的绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂包括但不限于如下几种，见表1 (表1中的数字表示重量份数)：
[0019] 表1本发明的具有显著增效作用的绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂
[0020]
[0021]
[0022] 表1中的绿僵菌为金龟子绿僵菌M09；绿僵菌采用金龟子绿僵菌Ma32和/或金龟子绿僵菌1245与短稳杆菌复配也可实现增效作用，只需根据金龟子绿僵菌Ma32或金龟子绿僵菌 1245的具体含量(浓度)对重量份数进行相应调整即可；复配杀虫剂中的辅料，有机溶剂、乳化剂、抗氧化剂、增效剂、紫外保护剂可分别为以上列出的一种或两种以上的组合。
[0023] 上述的杀虫剂中的有效成分绿僵菌与短稳杆菌的重量比、有效成分与杀虫剂可接受的辅料的重量比因绿僵菌与短稳杆菌含量高低的变化等因素可以在更宽范围内变化。
[0024] 优选，所述的复配杀虫剂为绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂，按重量份计，包括有效成分10-70 份，辅料30-90份；所述的有效成分含金龟子绿僵菌M09 5-63份，短稳杆菌5-63份；所述的辅料含载体14-74份，抗氧化剂0.1-5份，增效剂2-6份，紫外保护剂0.1-5份；
[0025] 所述的载体为
高岭土、
硅藻土、
膨润土或滑石粉中的一种或两种以上的混合物；
[0026] 所述的抗氧化剂为丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没子食子酸丙酯或硫代二丙酸二月桂酯中的一种或两种以上的混合物；
[0027] 所述的增效剂为柠檬酸、增效醚、氯化脂肪、碳酸烷其酯、增效砜中的一种或两种以上的混合物；
[0028] 所述的紫外保护剂为抗坏血酸、荧光素钠、腐植酸和糊精中的一种或两种以上的混合物。
[0029] 本发明通过将绿僵菌和短稳杆菌复配，发现当绿僵菌和短稳杆菌以特定重量比存在于本发明杀虫剂中时，证明了复配的增效作用，获得了更好的杀虫效果。本发明上述的验证具有增效作用、获得更好的杀虫效果的绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂包括但不限于如下几种，见表2(表 2中的数字表示重量份数)：
[0030] 表2本发明的具有显著增效作用的绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂
[0031]
[0032]
[0033] 表2中的绿僵菌为金龟子绿僵菌M09；绿僵菌采用金龟子绿僵菌Ma32和/或金龟子绿僵菌1245与短稳杆菌复配也可实现增效作用，只需根据金龟子绿僵菌Ma32或金龟子绿僵菌 1245的具体含量(浓度)对重量份数进行相应调整即可；复配杀虫剂中的辅料，有机溶剂、乳化剂、抗氧化剂、增效剂、紫外保护剂可分别为以上列出的一种或两种以上的组合。
[0034] 上述的杀虫剂中的有效成分绿僵菌与短稳杆菌的重量比、有效成分与杀虫剂可接受的辅料的重量比因绿僵菌与短稳杆菌含量高低的变化等因素可以在更宽范围内变化。
[0035] 本发明还提供上述任一种绿僵菌与短稳杆菌的复配杀虫剂在防治害虫中的应用。
[0036] 所述的害虫为林业食叶害虫、乡土阔叶树食叶害虫，其所为害的树种包括松树、桉树、樟树、木麻黄、黎蒴、火焰木、红
棉、台湾相思、红锥、红稠、樟树、杜英、拟赤杨、山乌桕、木荷、枫树、落羽杉、水杉、美丽异木棉、复羽叶栾树、红花油茶、紫荆、红花紫荆、含笑、紫薇、竹子、润楠、枫香、凤凰木、杜鹃、樱花、仪花、蓝花楹、红苞木、黄槐、火力楠、尖叶杜英、小叶榄仁、
风铃木、千年桐、大红花、阴香、桂花、无瓣海桑、桐花、秋茄、白骨壤、腊肠树、水黄皮和/或
银叶树。
[0037] 所述的害虫包括斜纹夜蛾、樟巢螟、樟翠尺蛾、肉桂双瓣卷蛾、青黄枯叶蛾、朱红毛斑蛾、豹尺蛾、刺尾尺蛾、橙带蓝尺蛾、大钩翅尺蛾、绿额翠尺蛾、松茸毒蛾、
马尾松毛虫、梨刺蛾、茶长卷蛾、双线盗毒蛾、荔枝拟木蠹蛾、三点斑刺蛾、窃达刺蛾、肉桂木蛾、凤凰木夜蛾、广州小瓣螟、棉大卷叶螟、黄野螟、绿翅绢野螟、粗点纹灰尺蛾、樟细蛾、黄脊竹蝗、
角异斑腿蝗、掩
耳螽、樟管蓟马、荔枝椿象、樟叶蜂、黑缘角胸叶蝉、黄斑隐头叶甲、黄守瓜、黄足黑守瓜、华胸突鳃金龟、黄足黑守瓜、茶丽纹象甲、棕长颈卷叶象甲、花椒长足象、松突圆蚧、白蛾蜡蝉、湿地松粉蚧、鸭脚树星室木虱、黑刺粉虱、烟粉虱和/或台湾乳白蚁。
[0038] 与现有技术相比，本发明具有如下优点：
[0039] 本发明提供了一种新的杀虫剂，其以绿僵菌和短稳杆菌复配；将两种药剂复配后杀虫谱明显扩大，杀虫效果显著增强，具有明显增效作用，可明显提高各单剂的杀虫
毒力的效果，提高了杀虫速率、降低了使用成本。一方面，杀虫剂合理的复配为减缓害虫的抗性提供有效措施，另一方面，杀虫剂的复配不仅能有效延长药剂的使用寿命，而且本发明复配杀虫剂作用效果与化学药剂效果相当，也可以减少化学药剂用药量，降低使用成本，减少对环境的污染，具有实际意义。理想的农药复配剂型可以适应多方面的需要，对害虫综合防治具有积极的促进作用。
[0040] 本发明的杀虫剂由1种昆虫病原真菌绿僵菌和1种昆虫病原细菌短稳杆菌主剂复配而成， 与环境具良好的相容性，可广泛应用，对农业增产增收、发展绿色环保农业、改善生态环境、 提高人类健康水平具有重要意义。
[0041] 本发明生产工艺简单，能大幅度减少农药的使用量，延缓害虫的抗药性，在害虫的无公害防治和持续综合防治上效果明显。
[0042] 本发明的金龟子绿僵菌M09已于2014年2月公开于非
专利文献中,具体公开于论文“王磊,许益镌,陆永跃等.不同
土壤类型和
含水量下金龟子绿僵菌对红火蚁的致病力.生物安全学报,2014,23(2)；107-111”；金龟子绿僵菌Ma32已于2013年公开于非专利文献中,具体公开于硕士学位论文“夏龙荪.白僵菌和绿僵菌对几种植物病原真菌的拮抗作用研究.安徽农业大学,2013”；金龟子绿僵菌1245已于2007年12月28日公开于非专利文献中,具体公开于硕士学位论文“许志斌.绿僵菌传代菌株的退化.南昌大学,2007”；上述菌种
申请人本人也持有，并保证自申请日起20年内向公众提供。
具体实施方式
[0043] 以下
实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0044] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，以下
试剂和原料如无特殊说明均为常规市售。未具体注明的实验方法，均可按照常规方法进行。
[0045] 以下实施例中所采用的短稳杆菌，由镇江市润宇生物科技开发有限公司提供，1×1010个孢子/ml，约1×1010个孢子/g。
[0046] 实施例1：复配配比实验
[0047] 本发明通过大量的实验研究表明，将绿僵菌、短稳杆菌复配制备杀虫剂具有更好的杀虫效果。
[0048] 为了确定较优的绿僵菌、短稳杆菌复配比例，将不同配比的绿僵菌﹒短稳杆菌复
配对斜纹夜蛾进行室内毒力测定，结果如表3所示。
[0049] 供试药剂：短稳杆菌1×1010孢子/mL；金龟子绿僵菌(金龟子绿僵菌M09)1×107孢子/mL；CK为水。
[0050] 表3不同配比绿僵菌﹒短稳杆菌复配对斜纹夜蛾的毒力
[0051]
[0052] 表3结果表明，两种药剂混配后对斜纹夜蛾具有良好的毒力活性，其中绿僵菌：短稳杆菌(V:V)比例5：5处理效果最佳，在第5天死亡率已经达到98.67％；绿僵菌：短稳杆菌(V:V) 比例3：7、7：3和9：1处理在第5天死亡率也达到90％以上，在第7天，绿僵菌：短稳杆菌比例3：7、5：5、7：3处理的死亡率均达到100％。此外，分别将金龟子绿僵菌Ma32或金龟子绿僵菌1245与短稳杆菌混配，也均获得了类似的效果。
[0053] 以上结果说明，说明绿僵菌与短稳杆菌混配能能起到很好的杀虫作用。
[0054] 实施例2：10％的绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂
[0055] 1.按以下重量比配制10％绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂
[0056]
[0057] 用于上述的10％绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂中的金龟子绿僵菌M09为固体
发酵获得10
的分生孢子经抽提后获得的绿僵菌高孢粉，2.5×10 个孢子/g。
[0058] 2.10％绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂对鳞翅目昆虫的室内毒力测定
[0059] 供试药剂：10％绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂。
[0060] 供试昆虫：斜纹夜蛾、樟巢螟、樟翠尺蛾、肉桂双瓣卷蛾、青黄枯叶蛾、大钩翅尺蛾、绿额翠尺蛾、梨刺蛾、茶长卷蛾、双线盗毒蛾、凤凰木夜蛾、广州小瓣螟、棉大卷叶螟。
[0061] 表4 10％绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂对鳞翅目昆虫的室内毒力
[0062]
[0063] 注：其中c.f≥20时为增效作用，c.f≤-20时为拮抗作用，-20＜c.f＜20时为相加作用。
[0064] 10％绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂对鳞翅目昆虫具有较高致死率，并且与单剂(10％w/w绿僵菌或10％w/w短稳杆菌)相比，10％绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂对各供试昆虫的防治效果表现出增效作用。
[0065] 实施例3：12.5％的绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂
[0066] 1.按以下重量比配制12.5％的绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂
[0067]
[0068] 用于上述的12.5％的绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂中的金龟子绿僵菌M09为固体发酵获得的分生孢子经抽提后获得的绿僵菌高孢粉，2.5×1010个孢子/g。
[0069] 2.12.5％绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂对鳞翅目昆虫的室内毒力测定
[0070] 供试药剂：12.5％绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂
[0071] 供试昆虫：斜纹夜蛾、樟巢螟、樟翠尺蛾、肉桂双瓣卷蛾、青黄枯叶蛾、大钩翅尺蛾、绿额翠尺蛾、梨刺蛾、茶长卷蛾、双线盗毒蛾、凤凰木夜蛾、广州小瓣螟、棉大卷叶螟。
[0072] 表5 10％绿僵菌﹒短稳杆菌水乳剂对鳞翅目昆虫的室内毒力
[0073]
[0074] 注：其中c.f≥20时为增效作用，c.f≤-20时为拮抗作用，-20＜c.f＜20时为相加作用。
[0075] 12.5％绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂对鳞翅目昆虫具有较高致死率，并且与单剂(12.5％w/w绿僵菌或12.5％w/w短稳杆菌)相比，12.5％绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂对各供试昆虫的防治效果表现出增效作用。
[0076] 3.几种药剂对樟巢螟和斜纹夜蛾的防效实验
[0077] 供试药剂：
[0078] 2.5％高效氯氟氰菊酯悬浮剂(南京红太阳股份有限公司)；
[0079] 25％噻虫嗪水分散颗粒剂，(先正达作物保护有限公司)；
[0080] 10％吡虫啉
可湿性粉剂剂(江苏克胜集团股份有限公司)；
[0081] 1.2％烟
碱·苦参碱乳油(内蒙古赤峰市帅旗农药有限责任公司)；
[0082] 3％甲
氨基阿维菌素苯
甲酸盐水乳剂(广西田园生化股份有限公司)；
[0083] 12.5％绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂(本发明)。
[0084] 供试昆虫：樟巢螟
[0085] 表6几种杀虫剂对樟巣螟的林间防治效果
[0086]
[0087] 12.5％绿僵菌﹒短稳杆菌粉剂对樟巢螟具有较好的林间防治效果，施药7天后防治效果为 95.11％，比化学药剂高效氯氟氰菊酯(94.58％)效果好，比其他化学药剂如噻虫嗪水分散颗粒剂、吡虫啉可湿性粉剂剂、烟碱·苦参碱乳油、甲氨基阿维菌素
苯甲酸盐水乳剂的效果更好，说明该药剂可以替代化学药剂使用，对为害生物绿色防控提供新的药剂。
[0088] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。
