银金核-卫星结构表面等离子体共振探针及其制备方法
专利汇可以提供银金核-卫星结构表面等离子体共振探针及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种 银 金核-卫星结构 表面 等离子体 共振探针及其制备方法。首先，将 葡萄糖 溶液和十六烷基三甲基溴化铵溶液依次快速加入到定量的银 氨 溶液中反应，制得纳米银立方溶液；然后，将清洗干净的玻璃基底静置于纳米银立方溶液中制得纳米银立方玻璃基底；接着在制得的纳米银立方玻璃基底上固定单链DNA分子；之后，使单链DNA与miRNA分子杂交；最后，制备金 纳米粒子 并使之修饰在miRNA分子一端即制得可用于 肺 癌早期检测的银金“核-卫星”结构 表面等离子体 共振探针。所制备的表面等离子体共振探针粒径在50~70nm之间，散射 光谱 峰位于450~650nm，检测灵敏度达10nM。，下面是银金核-卫星结构表面等离子体共振探针及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种银金核-卫星结构表面等离子体共振探针，其特征在于，该表面等离子体共振探针中的纳米银立方与金纳米粒子形成银金“核-卫星”结构，增强了纳米银立方的表面等离子体共振信号；其结构是：纳米银立方固定在预处理过的玻璃表面，识别单链DNA通过功能基团连接到纳米银立方表面，利用DNA与miRNA的碱基互补配对作用将miRNA连接到单链DNA修饰过的纳米银立方表面，miRNA的另一端通过功能基团连接金纳米粒子，形成银金“核-卫星”结构表面等离子体共振探针。
2.根据权利要求1所述的银金核-卫星结构表面等离子体共振探针，其特征在于：该表面等离子体共振探针粒径在40~70 nm之间，散射光谱峰位于450~650 nm。
3.一种如权利要求1所述的银金核-卫星结构表面等离子体共振探针的制备方法，其特征在于该制备方法包括以下步骤：
1）纳米银立方的制备
首先，在室温下将葡萄糖溶液3~8 mM和十六烷基三甲基溴化铵溶液50~80 mM依次快速加入到定量的银氨溶液10~15 mM中，其中银氨溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液浓度比为10: 1；然后，置于反应釜中在90~120℃下反应10~12 h；最后，取出反应后溶液离心并超声波辐射2~5 min后制得纳米银立方溶液；
2）纳米银立方玻璃基底的制备
首先，将玻璃基底依次置于洗洁精溶液、丙酮、无水乙醇、超纯水中各超声清洗1~2 h；
然后，取出玻璃基底用氮气吹干后浸于步骤1）中制备的纳米银立方溶液中，浸泡2~5 min后取出用超纯水冲洗并用氮气吹干；
3）单链DNA分子的固定
首先，将步骤2）中制备的纳米银立方玻璃基底置于紫外-臭氧清洗机中照射20~30 min，取出后用超纯水冲洗并用氮气吹干；然后将吹干的玻璃基底浸于1 uM 的单链DNA溶液中经摇床25℃摇匀10~12 h；最后，取出玻璃基底用超纯水冲洗并用氮气吹干，置于1 mM的6-巯基己-1-醇溶液中孵化2~3 h后用超纯水冲洗并用氮气吹干；
4）单链DNA与RNA分子的杂交
首先，将miRNA-21和与之对应的一端连巯基的单碱基错配miRNA按miRNA与miRNA-21 -2 2
摩尔浓度比为10 :1~10:1混合；然后将步骤3）中制备的单链DNA分子固定后的纳米银立方玻璃基底浸泡于此混合溶液中经摇床25℃摇匀2~3 h；最后，取出玻璃基底用超纯水冲洗并用低流氮气吹干；
5）金纳米颗粒的制备
首先，取100~200 mM十六烷基三甲基溴化铵溶液和5~20 mM HAuCl4溶液加入到烧杯中不断搅拌，在冰水浴的条件下向其中加入10~50 mM NaBH4溶液；然后，在27℃恒温水浴中静置1~5 h，制得金纳米种子溶液，金纳米种子直径3~5 nm；最后，取100~500 mM 十六烷基三甲基溴化铵溶液，加入0.1~0.9 mM HAuCl4溶液，再加入100~200 mM 抗坏血酸溶液不断搅拌，向其中加入上述步骤制备的金纳米种子溶液，静置1~5 h后经过离心并超声辐射后制得金纳米粒子的直径为8~12 nm；
6）金纳米颗粒的修饰
将步骤4）修饰好的玻璃基底浸于步骤5）中制备的金纳米粒子溶液中，金纳米粒子直径8~12 nm，浸泡10~60 min后取出用超纯水冲洗并用低流氮气吹干。
银金核-卫星结构表面等离子体共振探针及其制备方法
技术领域
背景技术
发明内容
本发明的银金“核-卫星”结构表面等离子体共振探针，其特征在于：该表面等离子体共振探针中的纳米银立方与金纳米粒子形成银金“核-卫星”结构，增强了纳米银立方的表面等离子体共振信号，探针粒径在40~70 nm之间，散射光谱峰位于450~650 nm。
首先，在室温下将葡萄糖溶液3~8 mM和十六烷基三甲基溴化铵溶液50~80 mM依次快速加入到定量的银氨溶液10~15 mM中，其中银氨溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液浓度比为10: 1；然后，置于反应釜中在90~120℃下反应10~12 h；最后，取出反应后溶液离心并超声波辐射2~5 min后制得纳米银立方溶液；
2）纳米银立方玻璃基底的制备
首先，将玻璃基底依次置于洗洁精溶液、丙酮、无水乙醇、超纯水中各超声清洗1~2 h；
然后，取出玻璃基底用氮气吹干后浸于步骤1）中制备的纳米银立方溶液中，浸泡2~5 min后取出用超纯水冲洗并用氮气吹干；
3）单链DNA分子的固定
首先，将步骤2）中制备的纳米银立方玻璃基底置于紫外-臭氧清洗机中照射20~30 min，取出后用超纯水冲洗并用氮气吹干；然后将吹干的玻璃基底浸于1 uM 的单链DNA溶液中经摇床25℃摇匀10~12 h；最后，取出玻璃基底用超纯水冲洗并用氮气吹干，置于1 mM的6-巯基己-1-醇溶液中孵化2~3 h后用超纯水冲洗并用氮气吹干；
4）单链DNA与RNA分子的杂交
首先，将miRNA-21和与之对应的一端连巯基的单碱基错配miRNA按miRNA与miRNA-21 -2 2
摩尔浓度比为10 :1~10:1混合；然后将步骤3）中制备的单链DNA分子固定后的纳米银立方玻璃基底浸泡于此混合溶液中经摇床25℃摇匀2~3 h；最后，取出玻璃基底用超纯水冲洗并用低流氮气吹干；
5）金纳米颗粒的制备
首先，取100~200 mM十六烷基三甲基溴化铵溶液和5~20 mM HAuCl4溶液加入到烧杯中不断搅拌，在冰水浴的条件下向其中加入10~50 mM NaBH4溶液；然后，在27℃恒温水浴中静置1~5 h，制得金纳米种子溶液，金纳米种子直径3~5 nm；最后，取100~500 mM 十六烷基三甲基溴化铵溶液，加入0.1~0.9 mM HAuCl4溶液，再加入100~200 mM 抗坏血酸溶液不断搅拌，向其中加入上述步骤制备的金纳米种子溶液，静置1~5 h后经过离心并超声辐射后制得金纳米粒子的直径为8~12 nm；
6）金纳米颗粒的修饰
将步骤4）修饰好的玻璃基底浸于步骤5）中制备的金纳米粒子溶液中，金纳米粒子直径8~12 nm，浸泡10~60 min后取出用超纯水冲洗并用低流氮气吹干。
具体实施方式
由表1可知，所有的实施例中结合miRNA-21（1 uM）后的表面等离子体共振散射光谱都有明显的蓝移现象发生，其中实施例5在1 ul的结合量下光谱蓝移30 nm，说明表面等离子体共振探针在微量标示物存在情况下依旧具有优异的检测性能，检测灵敏度达到10 nM。
首先，在室温下将葡萄糖溶液3~8 mM和十六烷基三甲基溴化铵溶液50~80 mM依次快速加入到定量的银氨溶液10~15 mM中，其中银氨溶液与十六烷基三甲基溴化铵溶液浓度比为10: 1；然后，置于反应釜中在90~120℃下反应10~12 h；最后，取出反应后溶液离心并超声波辐射2~5 min后制得纳米银立方溶液；
2）纳米银立方玻璃基底的制备
首先，将玻璃基底依次置于洗洁精溶液、丙酮、无水乙醇、超纯水中各超声清洗1~2 h；
然后，取出玻璃基底用氮气吹干后浸于步骤1）中制备的纳米银立方溶液中，浸泡2~5 min后取出用超纯水冲洗并用氮气吹干；
3）单链DNA分子的固定
首先，将步骤2）中制备的纳米银立方玻璃基底置于紫外-臭氧清洗机中照射20~30 min，取出后用超纯水冲洗并用氮气吹干；然后将吹干的玻璃基底浸于1 uM 的单链DNA溶液中经摇床25℃摇匀10~12 h；最后，取出玻璃基底用超纯水冲洗并用氮气吹干，置于1 mM的6-巯基己-1-醇溶液中孵化2~3 h后用超纯水冲洗并用氮气吹干；
4）单链DNA与RNA分子的杂交
首先，将miRNA-21和与之对应的一端连巯基的单碱基错配miRNA按miRNA与miRNA-21 -2 2
摩尔浓度比为10 :1~10:1混合；然后将步骤3）中制备的单链DNA分子固定后的纳米银立方玻璃基底浸泡于此混合溶液中经摇床25℃摇匀2~3 h；最后，取出玻璃基底用超纯水冲洗并用低流氮气吹干；
5）金纳米颗粒的制备
首先，取100~200 mM十六烷基三甲基溴化铵溶液和5~20 mM HAuCl4溶液加入到烧杯中不断搅拌，在冰水浴的条件下向其中加入10~50 mM NaBH4溶液；然后，在27℃恒温水浴中静置1~5 h，制得金纳米种子溶液（金纳米种子直径3~5 nm）；最后，取100~500 mM 十六烷基三甲基溴化铵溶液，加入0.1~0.9 mM HAuCl4溶液，再加入100~200 mM 抗坏血酸溶液不断搅拌，向其中加入上述步骤制备的金纳米种子溶液，静置1~5 h后经过离心并超声辐射后制得金纳米粒子的直径为8~12 nm；
6）金纳米颗粒的修饰
将步骤4）修饰好的玻璃基底浸于步骤5）中制备的金纳米粒子溶液中（金纳米粒子直径8~12 nm），浸泡10~60 min后取出用超纯水冲洗并用低流氮气吹干。
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