经取代的1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸衍生物
阅读：391发布：2021-08-28
专利汇可以提供经取代的1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸衍生物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及某些式(Ia)的经取代的1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸衍 生物 及其药用盐，其显示出有用的药理学性质，例如作为S1P1受体激动剂。本发明还提供了含有本发明化合物的药物组合物及使用本发明化合物和组合物 治疗 S1P1受体相关障碍的方法，所述S1P1受体相关障碍为例如 牛 皮癣、类 风 湿性关节炎、克罗恩病、移 植物 排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病、痤疮、 微生物 感染或微生物 疾病 及 病毒感染 或病毒疾病。，下面是经取代的1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸衍生物专利的具体信息内容。
1.一种化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Ia)的化合物：
其中
m为1或2；
n为1或2；
1
Y为N或CR ；
4
Z为N或CR ；且
1 2 3 4
R、R、R 和R 各自独立选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基。
2.权利要求1的化合物，其中m为1。
3.权利要求1的化合物，其中m为2。
4.权利要求1至3中任一项的化合物，其中n为1。
5.权利要求1至3中任一项的化合物，其中n为2。
6.权利要求1至5中任一项的化合物，其中Y为N。
1
7.权利要求1至5中任一项的化合物，其中Y为CR。
1
8.权利要求7的化合物，其中R 为H或C1-C6卤代烷基。
1
9.权利要求7的化合物，其中R 为H或三氟甲基。
2
10.权利要求1至9中任一项的化合物，其中R 选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基。
2
11.权利要求1至9中任一项的化合物，其中R 选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基。
3
12.权利要求1至11中任一项的化合物，其中R 选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基。
3
13.权利要求1至11中任一项的化合物，其中R 选自H、氨甲酰基、氯、氰基、环丁基、环己基、环戊基、环戊基氧基、环丙基、环丙基甲氧基、环己基甲基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、乙基氨基、异丁基、异丙氧基、甲基磺酰基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、1,2,3-噻二唑-4-基、三氟甲氧基和三氟甲基。
14.权利要求1至13中任一项的化合物，其中Z为N。
4
15.权利要求1至13中任一项的化合物，其中Z为CR。
4
16.权利要求15的化合物，其中R 选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基。
4
17.权利要求15的化合物，其中R 选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基。
1 2 3 4
18.权利要求1至5中任一项的化合物，其中R、R、R 和R 各自独立选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有一个C3-C7环烷基。
3
19.权利要求1至5和18中任一项的化合物，其中R 选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素和杂环基。
3
20.权利要求1至5和18中任一项的化合物，其中R 选自H、氯、环丁基、环己基、环戊基、环丙基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、异丁基、异丙氧基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、三氟甲氧基和三氟甲基。
4
21.权利要求1至5和18至20中任一项的化合物，其中R 选自H、氰基和C1-C6卤代烷基。
4
22.权利要求1至5和18至20中任一项的化合物，其中R 选自H、氰基和三氟甲基。
23.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Ia)的化合物，其中
m为1或2；
n为1或2；
1
Y为N或CR ；
4
Z为N或CR ；
1
R 为H或C1-C6卤代烷基；
2
R 选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；
3
R 选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素和杂环基；且
4
R 选自H、氰基和C1-C6卤代烷基。
24.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Ia)的化合物，其中
m为1或2；
n为1或2；
1
Y为N或CR ；
4
Z为N或CR ；
1
R 为H或三氟甲基；
2
R 选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；
3
R 选自H、氯、环丁基、环己基、环戊基、环丙基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、异丁基、异丙氧基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、三氟甲氧基和三氟甲基；且
4
R 选自H、氰基和三氟甲基。
25.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Ik)的化合物：
其中
Y为N或CR1；
Z为N或CR4；
R1为H或C1-C6卤代烷基；
R2选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；
R3选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基；且
R4选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基。
26.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Ik)的化合物：
其中
1
Y为N或CR ；
4
Z为N或CR ；
1
R 为H或C1-C6卤代烷基；
2
R 选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；
3
R 选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素和杂环基；且
4
R 选自H、氰基和C1-C6卤代烷基。
27.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Ik)的化合物：
其中
1
Y为N或CR ；
4
Z为N或CR ；
1
R 为H或三氟甲基；
2
R 选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；
3
R 选自H、氨甲酰基、氯、氰基、环丁基、环己基、环戊基、环戊基氧基、环丙基、环丙基甲氧基、环己基甲基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、乙基氨基、异丁基、异丙氧基、甲基磺酰基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、1,2,3-噻二唑-4-基、三氟甲氧基和三氟甲基；且
4
R 选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基。
28.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Ik)的化合物：
其中
1
Y为N或CR ；
4
Z为N或CR ；
1
R 为H或三氟甲基；
2
R 选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；
3
R 选自H、氯、环丁基、环己基、环戊基、环丙基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、异丁基、异丙氧基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、三氟甲氧基和三氟甲基；且
4
R 选自H、氰基和三氟甲基。
29.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Im)的化合物：
其中
2
R 选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；且
3
R 选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基。
30.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Im)的化合物：
其中
2
R 选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；且
3
R 选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素和杂环基。
31.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Im)的化合物：
其中
R2选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；且
R3选自H、氨甲酰基、氯、氰基、环丁基、环己基、环戊基、环戊基氧基、环丙基、环丙基甲氧基、环己基甲基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、乙基氨基、异丁基、异丙氧基、甲基磺酰基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、1,2,3-噻二唑-4-基、三氟甲氧基和三氟甲基。
32.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自式(Im)的化合物：
其中
2
R 选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；且
3
R 选自H、氯、环丁基、环己基、环戊基、环丙基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、异丁基、异丙氧基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、三氟甲氧基和三氟甲基。
33.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自以下化合物：
(S)-2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-环己基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
(R)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(3-氰基-5-(三氟甲氧基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
(R)-2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(3-氰基-4-(三氟甲氧基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(2,4-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
(S)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(3,5-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-((5-异丙氧基吡嗪-2-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙
酸；
2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-(吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-异丁基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-新戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙
酸；
2-(7-(3-氰基-4-环己基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-丙基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙
酸；
2-(7-((6-环戊基-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]
吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-((6-(3,3-二 氟 吡 咯 烷-1-基 )-5-(三 氟 甲 基) 吡 啶 -3-基 )甲 氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-环丁基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-环丙基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-((6-(吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环
戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-氰基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙
酸；
2-(7-(4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-(乙基氨基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-(环己基甲基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-氨甲酰基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-(甲基磺酰基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-(吡嗪-2-基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；和
2-(7-(4-(1,2,3-噻二唑-4-基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸。
34.权利要求1的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，所述化合物选自以下化合物：
(S)-2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-环己基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
(R)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(3-氰基-5-(三氟甲氧基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
(R)-2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(3-氰基-4-(三氟甲氧基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(2,4-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
(S)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(3,5-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-((5-异丙氧基吡嗪-2-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙
酸；
2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-(吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-异丁基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-新戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙
酸；
2-(7-(3-氰基-4-环己基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-丙基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙
酸；
2-(7-((6-环戊基-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]
吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-((6-(3,3-二 氟 吡 咯 烷-1-基 )-5-(三 氟 甲 基) 吡 啶 -3-基 )甲 氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸；
2-(7-(4-环丁基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；
2-(7-(4-环丙基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)
乙酸；和
2-(7-((6-(吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环
戊并[b]吲哚-3-基)乙酸。
35.权利要求1的盐及其药用溶剂化物和水合物，所述盐选自以下盐：
(R)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸的钙盐；和
(R)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸的L-精氨酸盐。
36.权利要求1的溶剂化物或水合物，其选自以下溶剂化物或水合物：
(S)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸水合物的D-赖氨酸盐；和
(S)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸的乙腈溶剂化物的(R)-1-苯乙胺盐。
37.权利要求1的化合物的结晶形式，其选自：
(S)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲
哚-3-基)乙酸水合物。
38.权利要求37的结晶形式，其具有基本如在图12中显示的X射线粉末衍射图。
39.权利要求37或38的结晶形式，其具有基本如在图13中显示的差示扫描量热法热解曲线。
40.权利要求37至39中任一项的结晶形式，其具有基本如在图13中显示的热重量分析热解曲线。
41.权利要求37至40中任一项的结晶形式，其具有基本如在图14中显示的吸湿分析。
42.一种药物组合物，其包含权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物或权利要求37至41中任一项的结晶形式及药用载体。
43.在个体中治疗S1P1受体相关障碍的方法，所述方法包括向有此需要的所述个体给药治疗有效量的权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物。
44.在个体中治疗与S1P1受体相关的障碍的方法，所述方法包括向有此需要的所述个体给药治疗有效量的权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物，其中所述与S1P1受体相关的障碍选自由淋巴细胞介导的疾病或障碍、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍、癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
45.在个体中治疗与S1P1受体相关的障碍的方法，所述方法包括向有此需要的所述个体给药治疗有效量的权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物，其中所述与S1P1受体相关的障碍为微生物感染或微生物疾病或病毒感染或病毒疾病。
46.权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途。
47.权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途，其中所述S1P1受体相关障碍选自由淋巴细胞介导的疾病或障碍、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍、癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
48.权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途，其中所述S1P1受体相关障碍为微生物感染或微生物疾病或病毒感染或病毒疾病。
49.权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物，其用在通过疗法来治疗人体或动物体的方法中。
50.权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物，其用在治疗S1P1受体相关障碍的方法中。
51.权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物，其用在治疗S1P1受体相关障碍的方法中，其中所述S1P1受体相关障碍选自由淋巴细胞介导的疾病或障碍、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍、癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
52.权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物、权利要求37至41中任一项的结晶形式或权利要求42的药物组合物，其用在治疗S1P1受体相关障碍的方法中，其中所述S1P1受体相关障碍为微生物感染或微生物疾病或病毒感染或病毒疾病。
53.制备组合物的方法，所述方法包括将权利要求1至34中任一项的化合物、权利要求35的盐、权利要求36的水合物或溶剂化物或权利要求37至41中任一项的结晶形式与药用载体混合。
经取代的1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸衍生物
[0001] 本申请是中国申请号为200980137275.7、发明名称为“可用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的经取代的1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸衍生物”且申请日为2009年7月22日的专利申请(PCT申请号为PCT/US2009/004265)的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及某些式(Ia)的经取代的1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸衍生物及其药用盐，其显示出有用的药理学性质，例如作为S1P1受体激动剂。本发明还提供了含有本发明化合物的药物组合物及使用本发明化合物和组合物治疗S1P1受体相关障碍的方法，所述S1P1受体相关障碍为例如牛皮癣(psoriasis)、类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)、克罗恩病(Crohn’s disease)、移植物排斥(transplant rejection)、多发性硬化(multiple sclerosis)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus)、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)、I型糖尿病(type I diabetes)、痤疮(acne)、微生物感染或微生物疾病及病毒感染或病毒疾病。
背景技术
[0003] 本发明涉及作为S1P1受体激动剂的化合物，其例如通过调节白细胞运输、在二级淋巴组织中隔离淋巴细胞和/或提高血管完整性而具有至少免疫抑制活性、抗炎活性和/或止血活性。
[0004] 本申请部分集中于解决未得以满足的对以下免疫抑制剂(例如可口服使用)的需要，所述免疫抑制剂对至少以下疾病具有治疗功效且具有较小的副作用(例如对系统性感染的免疫应答缺损)，所述疾病为自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍(例如急性和慢性炎性病症)、移植物排斥、癌症和/或具有血管完整性潜在缺陷的病症或与血管发生相关的病症[例如可以是病理性的(例如可发生在炎症、肿瘤发展和动脉粥样硬化中)]。
[0005] 1-磷酸-鞘氨醇(S1P,sphingosine-1-phosphate)受体1-5构成了一类G蛋白 偶联受体，其具有七个跨膜结构域。这些受体[称为S1P1至S1P5(以前分别称为内皮分化基因(EDG,endothelial differentiation gene)受体-1、-5、-3、-6和-8；Chun et al.,Pharmacological Reviews,54:265-269,2002)]通过与1-磷酸-鞘氨醇结合来活化，而1-磷酸-鞘氨醇如下产生：对鞘氨醇进行由鞘氨醇激酶催化的磷酸化反应。S1P1、S1P4和S1P5受体活化Gi但不活化Gq，而S1P2和S1P3受体既活化Gi又活化Gq。S1P3受体而非S1P1受体响应于激动剂而使细胞内的钙增加。
[0006] 已显示对S1P1受体具有激动剂活性的S1P受体激动剂快速且可逆地使淋巴细胞减少(也称为外周淋巴细胞降低(PLL,peripheral lymphocyte lowering)；Hale et al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,14:3351-3355,2004)。这由于在二级淋巴组织(淋巴结和淋巴集结(Peyer’s patches))中隔离T细胞和B细胞并因此使T细胞和B细胞远离炎症部位和器官移植部位而可在临床上用于免疫抑制(Rosen et al.,Immunol.Rev.,195:160-177,2003；Schwab et al.,Nature Immunol.,8:1295-1301,2007)。这种对淋巴细胞的隔离(例如在淋巴结中)被认为是以下同时作用的结果：由激动剂驱动的对T细胞上S1P1受体的功能性拮抗作用(因此降低S1P动员T细胞从淋巴结中流出的能力)和对淋巴结内皮上S1P1受体的持续激动作用(从而提高对抗淋巴细胞迁移的屏障功能)(Matloubian et al.,Nature,427:355-360,2004；Baumruker et al.,Expert Opin.Investig.Drugs,16:283-289,2007)。已报道对S1P1受体的单独激动足以实现对淋巴细胞的隔离(Sanna et al.,J Biol Chem.,279:13839-13848,2004)且这发生在对系统性感染的免疫应答无缺损的情况下(Brinkmann et al.,Transplantation,72:764-769,2001；Brinkmann et al.,Transplant Proc.,33:530-531,2001)。
[0007] 对内皮S1P1受体的这种激动在促进血管完整性方面发挥较广泛的作用，这通过在小鼠皮肤和肺的毛细血管完整性中涉及S1P1受体的研究来支持(Sanna et al.,Nat Chem Biol.,2:434-441,2006)。血管完整性可被炎性过程(例如由败血病、重度创伤和手术引起的炎性过程)所危害，从而导致急性肺损伤或呼吸窘迫综合征(Johan Groeneveld,Vascul.Pharmacol.,39:247-256,2003)。
[0008] 对S1P1受体具有激动剂活性的示例性S1P受体激动剂为FTY720(fingolimod)(一种正在进行临床试验的免疫抑制剂)(Martini et al., Expert Opin.Investig.Drugs,16:505-518,2007)。FTY720作为前药而在体内被磷酸化；磷酸化衍生物为S1P1、S1P3、S1P4和S1P5受体(而非S1P2受体)激动剂(Chiba,Pharmacology&Therapeutics,108:308-319,2005)。已显示FTY720快速且可逆地使淋巴细胞减少(也称为外周淋巴细胞降低(PLL)；Hale et al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,14:3351-3355,2004)。这由于在二级淋巴组织(淋巴结和淋巴集结)中隔离T细胞和B细胞并因此使T细胞和B细胞远离炎症部位和器官移植部位而可在临床上用于免疫抑制(Rosen et al.,Immunol.Rev.,195:160-177,2003；Schwab et al.,Nature Immunol.,8:1295-1301,2007)。
[0009] FTY720在临床试验中由于其对S1P3受体的激动而引起不良事件(即暂时性无症状心动过缓)(Budde et al.,J.Am.Soc.Nephrol.,13:1073-1083,2002；Sanna et al.,J.Biol.Chem.,279:13839-13848,2004；Ogawa et al.,BBRC,361:621-628,2007)。
[0010] 已报道FTY720在 至少以下 模型中具 有治疗功 效：大 鼠自身免 疫性 心 肌 炎 模 型 和 小 鼠 急 性 病 毒 性 心 肌 炎 模 型 (Kiyabayashi et al.,J.Cardiovasc.Pharmacol.,35:410-416,2000；Miyamoto et al.,J.Am.Coll.Cardiol.,37:1713-1718,2001)；小鼠炎性 肠病(包括 结肠炎)模 型(Mizushima et al.,Inflamm.Bowel Dis.,10:182-192,2004；Deguchi et al.,Oncology Reports,16:699-703,2006；Fujii et al.,Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.,291:G267-G274,2006；Daniel et al.,J.Immunol.,178:2458-2468,2007)；
大鼠进行性膜增生性肾小 球肾炎模型(Martini et al.,Am.J.Physiol.Renal Physiol.,292:F1761-F1770,2007)；基 于 使 用S1P1受 体 激 动 剂SEW2871 进 行 的研究而表明主要通过S1P1受体来发挥作用的小鼠哮喘模型(Idzko et al,J.
Clin.Invest.,116:2935-2944,2006)；小鼠气道炎症和诱发性支气管高反应性模型(Sawicka et al.,J.Immunol.,171；6206-6214,2003)；小 鼠 特 应 性 皮 炎 模 型(Kohno et al.,Biol.Pharm.Bull.,27:1392-1396,2004)；小鼠缺血-再灌注损伤模型(Kaudel et al.,Transplant.Proc,39:499-502,2007)；小鼠系统性红斑狼疮(SLE)模型 (Okazaki et al.,J.Rheumatol.,29:707-716,2002；Herzinger et al,Am.J.Clin.Dermatol.,8:329-336,2007)；大鼠类风湿性关节炎模型(Matsuura et al.,Int.J.Immunopharmacol.,22:323-331,2000；Matsuura et al.,Inflamm.Res.,49:404-410,2000)；
大鼠自身免疫性葡萄膜炎模型(Kurose et al.,Exp.Eye Res.,70:7-15,2000)；小鼠I型糖尿病模型(Fu et al,Transplantation,73:1425-1430, 2002；Maki et al.,Transplantation,74:1684-1686,2002；Yang et al.,Clinical Immunology,107:30-35,2003；
Maki et al.,Transplantation,79:1051-1055,2005)；小鼠动脉粥样硬化模型(Nofer et al.,Circulation,115:501-508,2007；Keul et al.,Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,27:607-613,2007)；大鼠创伤性脑损伤(TBI)后脑部炎症反应模型(Zhang et al.,J.Cell.Mol.Med.,11:307-314,2007)；及小鼠移植物冠状动脉病和移植物抗宿 主 病(GVHD) 模 型 (Hwang et al.,Circulation,100:1322-1329,1999；Taylor et al.,Blood,110:3480-3488,2007)。体外结果表明FTY720对β-淀粉样蛋白相关炎性疾病(包括阿尔茨海默病)可具有治疗功效(Kaneider et al.,FASEB J.,18:309-311,2004)。
已报道KRP-203(一种对S1P1受体具有激动剂活性的S1P受体激动剂)在大鼠自身免疫性心肌炎模型中具有治疗功效(Ogawa et al.,BBRC,361:621-628,2007)。已使用S1P1受体激动剂SEW2871而显示对内皮S1P1受体的激动在I型糖尿病血管内皮中防止促炎单核细胞/内皮相互作用(Whetzel et al.,Circ.Res.,99:731-739,2006)并保护血管免受由TNFα介导的单核细胞/内皮相互作用(Bolick et al.,Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,25:976-981,2005)。
大鼠进行性膜增生性肾小 球肾炎模型(Martini et al.,Am.J.Physiol.Renal Physiol.,292:F1761-F1770,2007)；基 于 使 用S1P1受 体 激 动 剂SEW2871 进 行 的研究而表明主要通过S1P1受体来发挥作用的小鼠哮喘模型(Idzko et al,J.
Clin.Invest.,116:2935-2944,2006)；小鼠气道炎症和诱发性支气管高反应性模型(Sawicka et al.,J.Immunol.,171；6206-6214,2003)；小 鼠 特 应 性 皮 炎 模 型(Kohno et al.,Biol.Pharm.Bull.,27:1392-1396,2004)；小鼠缺血-再灌注损伤模型(Kaudel et al.,Transplant.Proc,39:499-502,2007)；小鼠系统性红斑狼疮(SLE)模型 (Okazaki et al.,J.Rheumatol.,29:707-716,2002；Herzinger et al,Am.J.Clin.Dermatol.,8:329-336,2007)；大鼠类风湿性关节炎模型(Matsuura et al.,Int.J.Immunopharmacol.,22:323-331,2000；Matsuura et al.,Inflamm.Res.,49:404-410,2000)；
大鼠自身免疫性葡萄膜炎模型(Kurose et al.,Exp.Eye Res.,70:7-15,2000)；小鼠I型糖尿病模型(Fu et al,Transplantation,73:1425-1430, 2002；Maki et al.,Transplantation,74:1684-1686,2002；Yang et al.,Clinical Immunology,107:30-35,2003；
Maki et al.,Transplantation,79:1051-1055,2005)；小鼠动脉粥样硬化模型(Nofer et al.,Circulation,115:501-508,2007；Keul et al.,Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,27:607-613,2007)；大鼠创伤性脑损伤(TBI)后脑部炎症反应模型(Zhang et al.,J.Cell.Mol.Med.,11:307-314,2007)；及小鼠移植物冠状动脉病和移植物抗宿 主 病(GVHD) 模 型 (Hwang et al.,Circulation,100:1322-1329,1999；Taylor et al.,Blood,110:3480-3488,2007)。体外结果表明FTY720对β-淀粉样蛋白相关炎性疾病(包括阿尔茨海默病)可具有治疗功效(Kaneider et al.,FASEB J.,18:309-311,2004)。
已报道KRP-203(一种对S1P1受体具有激动剂活性的S1P受体激动剂)在大鼠自身免疫性心肌炎模型中具有治疗功效(Ogawa et al.,BBRC,361:621-628,2007)。已使用S1P1受体激动剂SEW2871而显示对内皮S1P1受体的激动在I型糖尿病血管内皮中防止促炎单核细胞/内皮相互作用(Whetzel et al.,Circ.Res.,99:731-739,2006)并保护血管免受由TNFα介导的单核细胞/内皮相互作用(Bolick et al.,Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.,25:976-981,2005)。
[0011] 另外，已报道FTY720对大鼠和小鼠中的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)(针对人多 发性硬化的模 型)具有治疗功 效(Brinkmann et al.,J.
Biol.Chem.,277:21453-21457,2002；Fujino et al.,J.Pharmacol.Exp.
Ther.,305:70-77,2003；Webb et al.,J.Neuroimmunol.,153:108-121,2004；Rausch et al.,J.Magn.Reson.Imaging,20:16-24,2004；Kataoka et al.,Cellular&Molecular Immunology,2:439-448,2005；Brinkmann et al.,Pharmacology&Therapeutics,115:84-105,2007；Baumruker et al.,Expert Opin.Investig.Drugs,16:283-289,2007；
Balatoni et al.,Brain Research Bulletin,74:307-316,2007)。另外，已发现FTY720在临床试验中对多发性硬化具有治疗功效。在针对反复性-弛张性多发性硬化的II期临床试验中发现FTY720减少由磁共振成像(MRI)检测到的损伤数目且降低多发性硬化患者的临床疾病活性(Kappos et al.,N.Engl.J.Med.,355:1124-1140,2006；Martini et al.,Expert Opin.Investig.Drugs,16:505-518,2007；Zhang et al.,Mini-Reviews in Medicinal Chemistry,7:845-850,2007；Brinkmann,Pharmacology&Therapeutics,115:84-105,2007)。FTY720正处于针对弛张性-反复性多发性硬化的III期研究 中 (Brinkmann,Pharmacology&Therapeutics,115:84-105,2007；Baumruker et al.,Expert.Opin. Investig.Drugs,16:283-289,2007；Dev et al.,Pharmacology and Therapeutics,117:77-93,2008)。
Biol.Chem.,277:21453-21457,2002；Fujino et al.,J.Pharmacol.Exp.
Ther.,305:70-77,2003；Webb et al.,J.Neuroimmunol.,153:108-121,2004；Rausch et al.,J.Magn.Reson.Imaging,20:16-24,2004；Kataoka et al.,Cellular&Molecular Immunology,2:439-448,2005；Brinkmann et al.,Pharmacology&Therapeutics,115:84-105,2007；Baumruker et al.,Expert Opin.Investig.Drugs,16:283-289,2007；
Balatoni et al.,Brain Research Bulletin,74:307-316,2007)。另外，已发现FTY720在临床试验中对多发性硬化具有治疗功效。在针对反复性-弛张性多发性硬化的II期临床试验中发现FTY720减少由磁共振成像(MRI)检测到的损伤数目且降低多发性硬化患者的临床疾病活性(Kappos et al.,N.Engl.J.Med.,355:1124-1140,2006；Martini et al.,Expert Opin.Investig.Drugs,16:505-518,2007；Zhang et al.,Mini-Reviews in Medicinal Chemistry,7:845-850,2007；Brinkmann,Pharmacology&Therapeutics,115:84-105,2007)。FTY720正处于针对弛张性-反复性多发性硬化的III期研究 中 (Brinkmann,Pharmacology&Therapeutics,115:84-105,2007；Baumruker et al.,Expert.Opin. Investig.Drugs,16:283-289,2007；Dev et al.,Pharmacology and Therapeutics,117:77-93,2008)。
[0012] 最近已报道FTY720具有抗病毒活性。具体数据已在淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)小鼠模型中提供，其中所述小鼠用Armstrong或LCMV克隆13株感染(Premenko-Lanier et al.,Nature,454,894,2008)。
[0013] 已报道FTY720阻碍感染有Francisella tularensis的树突细胞向纵隔淋巴结的迁移，因此使其菌落减小。Francisella tularensis与兔热病、溃疡性腺感染、呼吸系统感染和伤寒病相关(E.Bar-Haim et al,PLoS Pathogens,4(11):e1000211.doi:10.1371/journal.ppat.1000211,2008)。
[0014] 最近还已报道短期高剂量的FTY720在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中快速降低眼部浸润。当在眼部炎症早期给药时，FTY720快速阻止视网膜损伤。据报道其不但阻止对靶器官的浸润，而且降低现有的浸润(Raveney et al.,Arch.Ophthalmol.126(10),1390,2008)。
[0015] 已报道用FTY720进行的治疗在小鼠中通过减少与骨表面接附的成熟破骨细胞数目来缓解由卵巢切除术引起的骨质疏松症。数据提供了以下证据：S1P控制破骨细胞前体的迁移行为，这在动力学上调节骨矿物质稳态(Ishii et al.,Nature,advance online publication,8February 2009,doi:10.1038/nature07713)。
[0016] 已在少突胶质细胞祖细胞的存活提高中涉及对S1P1受体的激动。少突胶质细胞祖细胞的存活是髓鞘再生过程所需要的。多发性硬化损伤中的髓鞘再生被认为促进从临床复发中恢复(Miron et al.,Ann.Neurol.,63:61-71,2008；Coelho et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,323:626-635,2007；Dev et al.,Pharmacology and Therapeutics,117:77-93,2008)。还已显示S1P1受体在由血小板源性生长因子(PDGF)诱导的少突胶质细胞祖细胞有丝分裂中发挥作用(Jung et al.,Glia,55:1656-1667,2007)。
[0017] 还已报道对S1P1受体的激动作用介导神经干细胞向中枢神经系统(CNS)受损区域的迁移(包括在大鼠脊髓损伤模型中)(Kimura et al.,Stem Cells,25:115-124,2007)。
[0018] 已在对角质形成细胞增殖的抑制中涉及对S1P1受体的激动(Sauer et al.,J.Biol.Chem.,279:38471-38479,2004)，这与关于S1P抑制角质形成细胞增殖的报道一致(Kim et al.,Cell Signal,16:89-95,2004)。角质形成细胞在毛囊口处的过度增殖(其然后可被阻断)及相关炎症是痤疮的显著发病因素(Koreck et al.,Dermatology,206:96-105,2003；Webster,Cutis,76:4-7,2005)。
[0019] 已报道FTY720在抑制病理性血管发生(例如可发生在肿瘤发展中)中具有治疗功效。FTY720对血管发生的抑制被认为涉及对S1P1受体的激动(Oo et al.,J.Biol.Chem.,282；9082-9089,2007；Schmid et al.,J.Cell Biochem.,101:259-270,2007)。已报道FTY720在小鼠黑素瘤模型中对抑制原发性和转移性肿瘤生长具有治疗功效(LaMontagne et al.,Cancer Res.,66:221-231,2006)。已报道FTY720在小鼠转移性肝细胞癌模型中具有治疗功效(Lee et al.,Clin.Cancer Res.,11:84588466,2005)。
[0020] 已报道FTY720向小鼠的口服给药强效地阻断了由VEGF诱导的血管渗透性(一种与血管发生、炎症和病症例如败血病、缺氧和实体瘤生长相关的重要过程)(T Sanchez et al,J.Biol.Chem.,278(47),47281-47290,2003)。
[0021] 环孢菌素A和FK506(神经钙蛋白抑制剂)是用于预防移植器官排斥的药物。虽然它们可有效地延迟或抑制移植物排斥，但已知经典的免疫抑制剂例如环孢菌素A和FK506引起若干不期望的副作用(包括肾毒性、神经毒性、β-细胞毒性和胃肠不适)。在器官移植中存在未得以满足的对以下免疫抑制剂的需要，所述免疫抑制剂不会引起这些副作用且作为单一疗法或当与经典的免疫抑制剂联用时可有效地抑制对同种抗原具有反应性的T细胞向移植组织的迁移，因此延长移植物存活。
[0022] 已显示FTY720作为单一疗法或当与经典的免疫抑制剂[包括环孢菌素A、FK506和RAD(一种mTOR抑制剂)]协同联用时均对移植物排斥具有治疗功效。已显示的是，与经典的免疫抑制剂环孢菌素A、FK506和RAD不同，FTY720对延长移植物存活具有功效而不引起一般的免疫抑制且据信药物作用中的这种差异与就联用所观察到的协同作用相关(Brinkmann et al.,Transplant Proc.,33:530-531,2001；Brinkmann et al.,Transplantation,72:764-769,2001)。
[0023] 已报道对S1P1受体的激动在小鼠和大鼠皮肤同种异体移植物模型中对延长同种异体移植物存活具有治疗功效(Lima et al.,Transplant Proc.,36:1015-1017,2004；Yan et al.,Bioorg.&Med.Chem.Lett.,16:3679-3683,2006)。已报道FTY720在大鼠心脏同种异体移植物模型中对延长同种异体移植物存活具有治疗功效(Suzuki et al.,Transpl.Immunol.,4:252-255,1996)。已报道FTY720与环孢菌素A协同作用以延长大鼠皮肤同种异体移植物存活 (Yanagawa et al.,J.Immunol.,160:5493-5499,1998)、与环孢菌素A协同作用及与FK506协同作用以延长大鼠心脏同种异体移植物存活及与环孢菌素A协同作用以延长犬肾脏同种异体移植物存活和猴肾脏同种异体移植物存活(Chiba et al.,Cell Mol.Biol.,3:11-19,2006)。已报道KRP-203(一种S1P受体激动剂)在大鼠皮肤同种异体移植物模型中对延长同种异体移植物存活具有治疗功效且作为单一疗法或当与环孢菌素A协同联用时均在大鼠心脏同种异体移植物模型中对延长同种异体移植物存活具有治疗功效(Shimizu et al.,Circulation,111:222-229,2005)。还已报道KRP-203当与霉酚酸酯(MMF)[其活性代谢物为霉酚酸(一种嘌呤生物合成抑制剂)的前药]联用时在大鼠肾脏同种异体移植物模型和大鼠心脏同种异体移植物模型中均对延长同种异体移植物存活具有治疗功效(Suzuki et al.,J.Heart Lung Transplant,25:302-209,2006；Fujishiro et al.,J.Heart Lung Transplant,25:825-833,2006)。已报道S1P1受体激动剂AUY954当与亚治疗剂量的RAD001[Certican/Everolimus(一种mTOR抑制剂)]联用时可延长大鼠心脏同种异体移植物存活(Pan et al.,Chemistry&Biology,13:1227-1234,2006)。已报道FTY720在大鼠小肠同种异体移植物模型中与环孢菌素A协同作用以延长小肠同种异体移植物存活(Sakagawa et al.,Transpl.Immunol.,13:161-168,2004)。已报道FTY720在小鼠胰岛移植物模型中具有治疗功效(Fu et al.,Transplantation,73:1425-1430,2002；Liu et al.,Microsurgery,27:300-304,2007)及在使用人胰岛细胞以证实对人胰岛功能无有害作用的研究中具有治疗功效(Truong et al.,American Journal of Transplantation,7:2031-2038,2007)。
[0024] 已报道FTY720在针对非前列腺素合成依赖性神经性疼痛的非限制性(spared)神经损伤模型中减少伤害性行为(O.Costu et al,Journal of Cellular and Molecular Medicine 12(3),995-1004,2008)。
[0025] 已报道FTY720阻碍鼠类接触性过敏(CHS)的开始。来自在致敏期用FTY720处置的小鼠的免疫化淋巴结细胞的过继性转移实际上不能在接受者中引起CHS应答(D.Nakashima et al.,J.Investigative Dermatology(128(12),2833-2841,2008)。
[0026] 已报道FTY720的预防性口服给药(1mg/kg和3次/周)在C57BL/6小鼠中完全阻止了实验性自身免疫性重症肌无力的发展(T.Kohono et al,Biological&Pharmaceutical Bulletin,28(4),736-739,2005)。
[0027] 在一个实施方案中，本发明包括作为S1P1受体激动剂相对于S1P3受体具有选择性的化合物。已在心动过缓中直接涉及S1P3受体而非S1P1受体(Sanna et al.,J.Biol.Chem.,279:13839-13848,2004)。相对于至少S1P3受体具有选择性的S1P1受体激动剂由于拓宽治疗窗、对较高剂量有较好耐受性且因此提高治疗功效而相对于现有疗法具有优点。本发明包括作为S1P1受体激动剂及对心动过缓不显示出活性或基本不显示出活性的化合物。
[0028] S1P1受体激动剂可用于治疗或预防需要对免疫系统进行抑制或对S1P1受体进行激动的病症，例如由淋巴细胞介导的疾病或障碍、移植物排斥、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍及具有血管完整性潜在缺陷的病症或与血管发生相关的病症(例如可以是病理性的)。
[0029] 在一个实施方案中，本发明包括作为S1P1受体激动剂的化合物，其具有良好的总体物理性质和生物活性且其有效性基本至少为对S1P1受体具有活性的现有化合物所具有的有效性。
[0030] 在本申请通篇中引用的任意参考文献不应该被解释为对这些参考文献为本申请现有技术的承认。
发明内容
[0032]
[0033] 其中
[0034] m为1或2；
[0035] n为1或2；
[0036] Y为N或CR1；
[0037] Z为N或CR4；和
[0038] R1、R2、R3和R4各自独立选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基(carboxamide)、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自 C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基。
[0039] 在一些实施方案中，本发明包括式(Ia)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物：
[0040]
[0041] 其中
[0042] m为1或2；
[0043] n为1或2；
[0044] Y为N或CR1；
[0045] Z为N或CR4；且
[0046] R1、R2、R3和R4各自独立选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有一个C3-C7环烷基。
[0047] 本发明包括作为S1P1受体激动剂的化合物，其例如通过调节白细胞运输、在二级淋巴组织中隔离淋巴细胞和/或提高血管完整性而具有至少免疫抑制活性、抗炎活性和/或止血活性。
[0048] S1P1受体激动剂可用于治疗或预防需要对免疫系统进行抑制或对S1P1受体进行激动的病症，例如由淋巴细胞介导的疾病或障碍、移植物排斥、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍(例如急性和慢性炎性病症)、癌症及具有血管完整性潜在缺陷的病症或与血管发生相关的病症[例如可以是病理性的(例如可发生在炎症、肿瘤发展和动脉粥样硬化中)]。上述需要对免疫系统进行抑制或对S1P1受体进行激动的病症包括由淋巴细胞介导的疾病或障碍、具有血管完整性潜在缺陷的病症、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍(例如急性和慢性炎性病症)、急性或慢性细胞、组织或实体器官移植物排斥、关节炎(包括牛皮癣性关节炎和类风湿性关节炎)、糖尿病(包括I型糖尿病)、脱髓鞘病(包括多发性硬化)、缺血-再灌注损伤(包括肾脏和心脏缺血-再灌注损伤)、炎性皮肤病(包括牛皮癣、特应性皮炎和痤疮)、过度增殖性皮 肤病(包括痤疮)、炎性肠病(包括克罗恩病和溃疡性结肠炎)、系统性红斑狼疮、哮喘、葡萄膜炎、心肌炎、变态反应、动脉粥样硬化、脑部炎症(包括阿尔茨海默病和创伤性脑损伤后的脑部炎性反应)、中枢神经系统疾病(包括脊髓损伤或脑梗塞)、病理性血管发生(包括可发生在原发性和转移性肿瘤生长中的病理性血管发生)、类风湿性关节炎、糖尿病性视网膜病、动脉粥样硬化、癌症、慢性肺病、急性肺损伤、急性呼吸系统疾病综合征、败血病等。
[0049] 本发明一个方面涉及包含本发明化合物和药用载体的药物组合物。
[0050] 本发明一个方面涉及包含本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式及药用载体的药物组合物。
[0051] 本发明一个方面涉及在个体中治疗与S1P1受体相关的障碍(a disorder associated with the S1P1receptor)的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0052] 本 发 明 一 个 方 面 涉 及 在 个 体 中 治 疗S1P1受 体 相 关 障 碍 (an S1P1receptor-associated disorder)的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0053] 本发明一个方面涉及在个体中治疗与S1P1受体相关的S1P1受体相关障碍(an S1P1receptor-associated disorder associated with the S1P1receptor)的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式或其药物组合物。
[0054] 本发明一个方面涉及在个体中治疗与S1P1受体相关的障碍的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物，其中所述与S1P1受体相关的障碍选自由淋巴细胞介导的疾病或障碍、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍、癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
[0055] 本发明一个方面涉及在个体中治疗与S1P1受体相关的障碍的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式或其药物组合物，其中所述与S1P1受体相关的障碍选自由淋巴细胞介导的疾病或障碍、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍、癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
[0056] 本发明一个方面涉及在个体中治疗由淋巴细胞介导的疾病或障碍的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0057] 本发明一个方面涉及在个体中治疗自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0058] 本发明一个方面涉及在个体中治疗炎性疾病或障碍的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0059] 本发明一个方面涉及在个体中治疗癌症的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0060] 本发明一个方面涉及在个体中治疗障碍的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物，其中所述障碍选自牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
[0061] 本发明一个方面涉及在个体中治疗牛皮癣的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0062] 本发明一个方面涉及在个体中治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0063] 本发明一个方面涉及在个体中治疗克罗恩病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0064] 本发明一个方面涉及在个体中治疗移植物排斥的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0065] 本发明一个方面涉及在个体中治疗多发性硬化的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0066] 本发明一个方面涉及在个体中治疗系统性红斑狼疮的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0067] 本发明一个方面涉及在个体中治疗溃疡性结肠炎的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0068] 本发明一个方面涉及在个体中治疗I型糖尿病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0069] 本发明一个方面涉及在个体中治疗痤疮的方法，所述方法包括向有此需 要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0070] 本发明一个方面涉及在个体中治疗与S1P1受体相关的障碍的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物，其中所述与S1P1受体相关的障碍为微生物感染或微生物疾病或病毒感染或病毒疾病。
[0071] 本发明一个方面涉及在个体中治疗与S1P1受体相关的障碍的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式或其药物组合物，其中所述与S1P1受体相关的障碍为微生物感染或微生物疾病或病毒感染或病毒疾病。
[0072] 本发明一个方面涉及在个体中治疗胃炎的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0073] 本发明一个方面涉及在个体中治疗多肌炎的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0074] 本发明一个方面涉及在个体中治疗甲状腺炎的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0075] 本发明一个方面涉及在个体中治疗白癜风的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0076] 本发明一个方面涉及在个体中治疗肝炎的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0077] 本发明一个方面涉及在个体中治疗胆汁性肝硬化的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
[0078] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途。
[0079] 本发明一个方面涉及本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式或其药物组合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途。
[0080] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途，所述S1P1受体相关障碍选自由淋巴细胞介导的疾病或障碍、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍、癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
[0081] 本发明一个方面涉及本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式 或其药物组合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途，所述S1P1受体相关障碍选自由淋巴细胞介导的疾病或障碍、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍、癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
[0082] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗由淋巴细胞介导的疾病或障碍的药物中的用途。
[0083] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗自身免疫性疾病或障碍的药物中的用途。
[0084] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗炎性疾病或障碍的药物中的用途。
[0085] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
[0086] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途，所述S1P1受体相关障碍选自牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
[0087] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗牛皮癣的药物中的用途。
[0088] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
[0089] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗克罗恩病的药物中的用途。
[0090] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗移植物排斥的药物中的用途。
[0091] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗多发性硬化的药物中的用途。
[0092] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗系统性红斑狼疮的药物中的用途。
[0093] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途。
[0094] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗I型糖尿病的药物中 的用途。
[0095] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗痤疮的药物中的用途。
[0096] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途，其中所述S1P1受体相关障碍为微生物感染或微生物疾病或病毒感染或病毒疾病。
[0097] 本发明一个方面涉及本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式或其药物组合物在制备用于治疗S1P1受体相关障碍的药物中的用途，其中所述S1P1受体相关障碍为微生物感染或微生物疾病或病毒感染或病毒疾病。
[0098] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗胃炎的药物中的用途。
[0099] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗多肌炎的药物中的用途。
[0100] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗甲状腺炎的药物中的用途。
[0101] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗白癜风的药物中的用途。
[0102] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗肝炎的药物中的用途。
[0103] 本发明一个方面涉及本发明化合物在制备用于治疗胆汁性肝硬化的药物中的用途。
[0104] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在通过疗法来治疗人体或动物体的方法中。
[0105] 本发明一个方面涉及本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式，其用在通过疗法来治疗人体或动物体的方法中。
[0106] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗S1P1受体相关障碍的方法中。
[0107] 本发明一个方面涉及本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式，其用在治疗S1P1受体相关障碍的方法中。
[0108] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗S1P1受体相关障碍的 方法中，所述S1P1受体相关障碍选自由淋巴细胞介导的疾病或障碍、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍、癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
[0109] 本发明一个方面涉及本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式，其用在治疗S1P1受体相关障碍的方法中，所述S1P1受体相关障碍选自由淋巴细胞介导的疾病或障碍、自身免疫性疾病或障碍、炎性疾病或障碍、癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
[0110] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗由淋巴细胞介导的疾病或障碍的方法中。
[0111] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗自身免疫性疾病或障碍的方法中。
[0112] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗炎性疾病或障碍的方法中。
[0113] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗癌症的方法中。
[0114] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗S1P1受体相关障碍的方法中，所述S1P1受体相关障碍选自牛皮癣、类风湿性关节炎、克罗恩病、移植物排斥、多发性硬化、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、I型糖尿病和痤疮。
[0115] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗牛皮癣的方法中。
[0116] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗类风湿性关节炎的方法中。
[0117] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗克罗恩病的方法中。
[0118] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗移植物排斥的方法中。
[0119] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗多发性硬化的方法中。
[0120] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗系统性红斑狼疮的方法中。
[0121] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗溃疡性结肠炎的方法中。
[0122] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗I型糖尿病的方法中。
[0123] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗痤疮的方法中。
[0124] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗S1P1受体相关障碍的方法中，其中所述S1P1受体相关障碍为微生物感染或微生物疾病或病毒感染或病毒疾病。
[0125] 本发明一个方面涉及本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式，其用在治疗S1P1受体相关障碍的方法中，其中所述S1P1受体相关障碍为微生物感染或微生物疾病或病毒感染或病毒疾病。
[0126] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗胃炎的方法中。
[0127] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗多肌炎的方法中。
[0128] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗甲状腺炎的方法中。
[0129] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗白癜风的方法中。
[0130] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗肝炎的方法中。
[0131] 本发明一个方面涉及本发明化合物，其用在治疗胆汁性肝硬化的方法中。
[0132] 本发明一个方面涉及制备组合物的方法，所述方法包括将本发明化合物和药用载体混合。
[0133] 本发明一个方面涉及制备组合物的方法，所述方法包括将本发明化合物、盐、水合物、溶剂化物或结晶形式和药用载体混合。
[0135] 图1显示了以下实验的结果，所述实验测量化合物7与媒介物相比在小鼠中降低外周淋巴细胞绝对计数的能力。
[0136] 图2显示了以下实验的结果，所述实验测量化合物5与媒介物相比在小鼠中降低外周淋巴细胞绝对计数的能力。
[0137] 图3显示了如下制备1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸衍生物的一般合成方案：使芳基甲基卤化物或芳基甲基醇与2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯偶联。随后对酯官能团进行水解，得到式(Ia)的化合物，其中“m”为1且“n”为1。
[0138] 图4显示了如下制备卤化的1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸中间体的一般合成方案：使芳基甲基卤化物与2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚 -3-基)乙酸乙酯偶联。随后对芳基上的卤素进行官能化及对酯官能团进行水解，得到式(Ia)的化合物，其中“m”为1且“n”为1。
[0139] 图5显示了制备用于制备式(Ia)的化合物的醇中间体的一般合成方案。合成方案显示通过金属催化偶联对芳基上的卤素进行官能化，接着将羟基转化为三氟甲磺酸酯部分。随后通过金属催化偶联反应将三氟甲磺酸酯置换为各种官能团且对酯进行还原，得到醇中间体。
[0140] 图6显示了制备用于制备式(Ia)的化合物的溴化物中间体的一般合成方案。合成方案显示通过金属催化偶联或亲核置换对芳基上的卤素进行官能化。随后对甲基进行溴化，得到溴化物中间体。
[0141] 图7显示了以下实验的结果，所述实验测量化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])与媒介物相比降低小鼠外周淋巴细胞绝对计数的能力。
[0142] 图8显示了以下实验的结果，所述实验测量化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])与媒介物相比降低大鼠外周淋巴细胞绝对计数的能力。
[0143] 图9显示了以下实验的结果，所述实验测量三种不同剂量的化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])与媒介物相比减小大鼠平均踝直径的能力。
[0144] 图10显示了以下实验的结果，所述实验测量三种不同剂量的化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])与媒介物相比对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)具有功效的能力。
[0145] 图11显示了实验的结果，其中与媒介物相比，当大鼠响应于用化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])进行的治疗时，心率没有或基本没有降低。
[0146] 图12显示了化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])的 晶体形式的粉末X射线衍射(PXRD)图。
[0147] 图13显示了化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])的差示扫描量热法(DSC)热解曲线和热重量分析(TGA)热解曲线。
[0148] 图14显示了化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])的吸湿分析。
[0149] 图15显示了化合物12的第2种对映异构体的钙盐的晶体形式(如实施例1.32中所述)的粉末X射线衍射(PXRD)图。
[0150] 图16显示了化合物12的第2种对映异构体的钙盐(如实施例1.32中所述)的差示扫描量热法(DSC)热解曲线。
[0151] 图17显示了化合物12的第2种对映异构体的钙盐(如实施例1.32中所述)的热重量分析(TGA)热解曲线。
[0152] 图18显示了化合物12的第1种对映异构体的D-赖氨酸盐的晶体形式(如实施例1.34中所述)的粉末X射线衍射(PXRD)图。
[0153] 图19显示了化合物12的第1种对映异构体的D-赖氨酸盐(如实施例1.34中所述)的差示扫描量热法(DSC)热解曲线。
[0154] 图20显示了化合物12的第1种对映异构体的D-赖氨酸盐(如实施例1.34中所述)的热重量分析(TGA)热解曲线。
[0155] 图21显示了被认为是化合物12的第1种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为9.1分钟])的分子图像。
[0156] 图22显示了通过Fisher吲哚合成来制备1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基乙酸衍生物的一般合成方案。随后进行水解和脱羧，得到式(Ia)的化合物，其中“m”为1且“n”为1。
[0157] 图23显示了化合物12的第2种对映异构体的L-精氨酸盐的晶体形式(如实施例1.33中所述)的粉末X射线衍射(PXRD)图。
[0158] 图24显示了化合物12的第2种对映异构体的L-精氨酸盐(如实施例1.33中所述)的差示扫描量热法(DSC)热解曲线。
[0159] 图25显示了化合物12的第2种对映异构体的L-精氨酸盐(如实施例1.33中所述)的热重量分析(TGA)热解曲线。
[0160] 图26显示了化合物12的第2种对映异构体的L-精氨酸盐(如实施例1.33中所述)的吸湿分析。
具体实施方式
[0161] 定义
[0162] 出于清楚和一致目的，下述定义将适用于本专利文件通篇。
[0163] 术语“激动剂”是指这样的部分，所述部分与G蛋白偶联受体例如S1P1受体相互作用并活化所述受体，因此可引起所述受体的特征性生理学或药理学应答。例如，激动剂在与所述受体结合后活化细胞内应答或提高GTP与膜的结合。在某些实施方案中，本发明激动剂为S1P1受体激动剂，其能够促进S1P1受体的持续内陷(internalization)(参见例如Matloubian et al.,Nature,427,355,2004)。
[0164] 术语“拮抗剂”是指这样的部分，所述部分在与激动剂(例如内源性配体)相同的位点竞争性地与所述受体结合，但不活化由所述受体的活性形式引起的细胞内应答并因此可抑制由激动剂或部分激动剂引起的细胞内应答。拮抗剂在没有激动剂或部分激动剂的情况下不降低基线细胞内应答。
[0165] 本申请使用的术语“水合物”是指这样的本发明化合物或其盐，所述化合物或其盐还包含化学计量或非化学计量的通过非共价分子间力来结合的水。
[0166] 本申请使用的术语“溶剂化物”是指这样的本发明化合物或其盐，所述化合物或其盐还包含化学计量或非化学计量的通过非共价分子间力来结合的溶剂。优选的溶剂是挥发性的、是无毒性的和/或就以痕量给药于人类而言是可接受的。
[0167] 术语“需要治疗”和涉及治疗的术语“有此需要”可互换使用且是指由护理人员(例如就人类而言为医师、护士、执业护士等；就动物(包括非人类哺乳动物)而言为兽医)作出的以下判断：个体或动物需要治疗或将受益于治疗。上述判断基于各种因素来作出，所述因素在护理人员专业知识范围内且包括关于所述个体或动物由于可用本发明化合物治疗的疾病、病症或障碍而患病或将患病的知识。因此，本发明化合物可按保护性或预防性方式来使用；或本发明化合物可用于缓解、抑制或改善所述疾病、病症或障碍。
[0169] 术语“反向激动剂”是指这样的部分，所述部分与所述受体的内源性形式 结合或与所述受体的组成性活化形式结合且抑制由所述受体的活性形式引起的基线细胞内应答以使其低于在没有激动剂或部分激动剂的情况下观察到的正常活性基线水平或减少GTP与膜的结合。在一些实施方案中，与在没有反向激动剂的情况下的基线应答相比，所述基线细胞内应答在反向激动剂存在下被抑制至少30％。在一些实施方案中，与在没有反向激动剂的情况下的基线应答相比，所述基线细胞内应答在反向激动剂存在下被抑制至少50％。在一些实施方案中，与在没有反向激动剂的情况下的基线应答相比，所述基线细胞内应答在反向激动剂存在下被抑制至少75％。
[0170] 术语“调节”是指具体活性、功能或分子在数量、质量、应答或效果方面的增加或减少。
[0171] 术语“药物组合物”是指包含至少一种活性成分的组合物，所述活性成分包括但不限于本发明化合物的盐、溶剂化物和水合物，因此所述组合物可用于在哺乳动物(例如但不限于人类)中进行研究以得到具体的有效结果。本领域技术人员基于技术人员的需要而应该理解和知晓适于确定活性成分是否具有所需有效结果的技术。
[0172] 术语“治疗有效量”是指活性化合物或药物物质的以下量，所述量在组织、系统、动物、个体或人类中引起研究人员、兽医、医生或其他临床医师所寻求的生物应答或医药应答，其包括以下一种或多种：
[0173] (1)预防疾病，例如在可能易患疾病、病症或障碍但尚未经历或表现出所述疾病的病理学或症状学的个体中预防所述疾病、病症或障碍；
[0174] (2)抑制疾病，例如在正经历或表现出疾病、病症或障碍的病理学或症状学的个体中抑制所述疾病、病症或障碍(即阻止所述病理学和/或症状学的进一步发展)；和[0175] (3)改善疾病，例如在正经历或表现出疾病、病症或障碍的病理学或症状学的个体中改善所述疾病、病症或障碍(即逆转所述病理学和/或症状学)。
[0176] 化学基团、部分或自由基
[0177] 术语“C1-C6烷氧基”是指直接与氧原子相连的如本申请定义的C1-C6烷基。在一些实施方案中，其具有1至5个碳，在一些实施方案中具有1至4个碳，在一些实施方案中具有1至3个碳及在一些实施方案中具有1或2个碳。实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基等。
[0178] 术语“C1-C6烷基”是指含有1至6个碳的直链或支链烃基。在一些实施方案中，其具有1至5个碳，在一些实施方案中具有1至4个碳，在一些实施方案中具有1至3个碳及在一些实施方案中具有1或2个碳。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、叔戊基、新戊基、1-甲基丁基[即-CH(CH3)CH2CH2CH3]、2-甲基丁基[即-CH2CH(CH3)CH2CH3]、正己基等。
[0179] 术语“C1-C6烷基氨基”是指与-NH-基团相连的一个烷基，其中所述烷基具有与本申请所述相同的含义。一些实例包括但不限于甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、异丙基氨基、正丁基氨基、仲丁基氨基、异丁基氨基、叔丁基氨基等。
[0180] 术语“C1-C6烷基磺酰基”是指与具有式-S(O)2-的砜基中的硫相连的C1-C6烷基，其中所述烷基具有与本申请所述相同的定义。实例包括但不限于甲基磺酰基、乙基磺酰基、正丙基磺酰基、异丙基磺酰基、正丁基磺酰基、仲丁基磺酰基、异丁基磺酰基、叔丁基磺酰基等。
[0181] 术语“氨甲酰基”是指基团-CONH2。
[0182] 术语“羧基”是指基团-CO2H；术语“羧基”也称为羧酸基团。
[0183] 术语“氰基”是指基团-CN。
[0184] 术语“C3-C7环烷氧基”是指直接与氧原子相连的含有3至7个碳的饱和环基。一些实例包括环丙基-O-、环丁基-O-、环戊基-O-、环己基-O-等。
[0185] 术语“C3-C7环烷基”是指含有3至7个碳的饱和环基。一些实施方案含有3至6个碳。一些实施方案含有3至5个碳。一些实施方案含有5至7个碳。一些实施方案含有3至4个碳。实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。
[0186] 术语“C1-C6卤代烷氧基”是指直接与氧原子相连的如本申请定义的C1-C6卤代烷基。实例包括但不限于二氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、五氟乙氧基等。
[0187] 术语“C1-C6卤代烷基”是指如本申请定义的C1-C6烷基，其中所述烷基被一个卤素取代至被卤素完全取代，其中完全取代的C1-C6卤代烷基可由式CnL2n+1表示，其中L为卤素且“n”为1、2、3、4、5或6。当存在多于一个卤素时，所述卤素可相同或不同且选自氟、氯、溴或碘，优选为氟。在一些实施方案中，其具有1至5个碳，在一些实施方案中具有1至4个碳，在一 些实施方案中具有1至3个碳及在一些实施方案中具有1或2个碳。卤代烷基的实例包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯二氟甲基、2,2,2-三氟乙基、五氟乙基等。
[0188] 术语“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴或碘。
[0189] 术语“杂芳基”是指含有5至14个芳族环原子的芳族环系，所述环系可以是单环、稠合二环或稠合三环，其中至少一个芳族环原子为选自例如但不限于O、S和N的杂原子，其中所述N可任选取代有H、C1-C4酰基或C1-C4烷基。一些实施方案含有5至6个环原子，例如呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、异噁唑基、吡唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等。一些实施方案含有8至14个环原子，例如喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、三嗪基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、吲嗪基、嘌呤基、二氮杂萘基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、1H-苯并咪唑基、咪唑并吡啶基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基等。
[0190] 术语“杂环的”或“杂环基”是指含有3至8个环原子的非芳族环，其中一个、两个或三个环原子为选自例如O、S、S(＝O)、S(＝O)2和NH的杂原子，其中所述N如本申请所述任选被取代。在一些实施方案中，所述氮任选取代有C1-C4酰基或C1-C4烷基。在一些实施方案中，环碳原子任选取代有氧代，因此形成羰基。在一些实施方案中，环硫原子任选取代有氧代原子，因此形成硫代羰基。所述杂环基团可通过任意可用的环原子例如环碳、环氮等来连接/结合。在一些实施方案中，所述杂环基团为3、4、5、6或7元环。杂环基团的实例包括但不限于氮杂环丙烷-1-基、氮杂环丙烷-2-基、氮杂环丁烷-1-基、氮杂环丁烷-2-基、氮杂环丁烷-3-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、吗啉-2-基、吗啉-3-基、吗啉-4-基、哌嗪-1-基、哌嗪-2-基、哌嗪-3-基、哌嗪-4-基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、[1,3]二氧杂环戊烷-2-基、硫吗啉-4-基、[1,4]氧杂氮杂环庚烷-4-基、1,1-二氧代硫吗啉-4-基、氮杂环庚烷-1-基、氮杂环庚烷-2-基、氮杂环庚烷-3-基、氮杂环庚烷-4-基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃-3-基等。
[0191] 本发明化合物
[0192] 本发明一个方面涉及某些式(Ia)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合 物：
[0193]
[0194] 其中
[0195] m、n、R2、R3、Y和Z具有与本申请上文和下文所述相同的定义。
[0196] 应该理解的是，本发明包括化合物、化合物的溶剂化物和/或水合物、化合物的药用盐及化合物的药用盐的溶剂化物和/或水合物，其中所述化合物如本申请所定义。
[0197] 应该理解的是，出于清楚目的而在不同实施方案中描述的本发明某些特征也可在单一实施方案中组合提供。相反地，出于简要目的而在单一实施方案中描述的本发明各种特征也可分开提供或以任意合适的亚组合形式来提供。涉及由包含在本申请所述一般化学1 2 3
式例如(Ia)、(Ic)、(Ie)、(Ig)、(Ii)、(Ik)和(Im)中的变量(例如m、n、R、R、R、Y和Z)表示的化学基团的实施方案的所有组合明确地包括在本发明中，就如同每种组合被各自单独明确地记载，其程度是上述组合得到稳定的化合物(即可被分离、表征和就生物活性进行试验的化合物)。另外，描述上述变量的实施方案中列出的化学基团的所有亚组合及本申请描述的用途和医药适应症的所有亚组合也明确地包括在本发明中，就如同化学基团的每种亚组合及用途和医药适应症的每种亚组合被各自单独明确地记载在本申请中。
式例如(Ia)、(Ic)、(Ie)、(Ig)、(Ii)、(Ik)和(Im)中的变量(例如m、n、R、R、R、Y和Z)表示的化学基团的实施方案的所有组合明确地包括在本发明中，就如同每种组合被各自单独明确地记载，其程度是上述组合得到稳定的化合物(即可被分离、表征和就生物活性进行试验的化合物)。另外，描述上述变量的实施方案中列出的化学基团的所有亚组合及本申请描述的用途和医药适应症的所有亚组合也明确地包括在本发明中，就如同化学基团的每种亚组合及用途和医药适应症的每种亚组合被各自单独明确地记载在本申请中。
[0198] 本申请使用的“取代”表明化学基团中的至少一个氢原子被非氢取代基或基团代替。所述非氢取代基或基团可以是单价或二价。当所述取代基或基团是二价时，应该理解的是，该基团进一步取代有另一个取代基或基团。当本申请化学基团被“取代”时，其可具有高达满价的取代，例如甲基可被1、2或3个取代基取代，亚甲基可被1或2个取代基取代，苯基可被1、2、3、4或5个取代基取代，萘基可被1、2、3、4、5、6或7个取代基取代等。类似地，“取代有一个或多个取代基”是指基团的以下取代：所述基团取代有一个取代基至取代有总数为所述基团所完全允许的取代基。另外，当基团取代有多于一个取代基时，所述取代基可相同或不同。
[0200] 本发明化合物也包括存在于中间体和/或最终化合物中的原子的所有同位素。同位素包括原子数相同但质量数不同的那些原子。例如，氢的同位素包括氘和氚。
[0201] 应该理解和知晓的是，式(Ia)的化合物及与其相关的化学式可具有一个或多个手性中心且因此可按对映异构体和/或非对映异构体形式存在。应该理解的是，本发明涉及并包括所有上述对映异构体、非对映异构体和它们的混合物(包括但不限于外消旋体)。应该理解的是，除非另有说明或另有显示，式(Ia)和本公开通篇中使用的化学式意在表示所有单独的对映异构体和它们的混合物。
[0202] 变量“n”
[0203] 在一些实施方案中，n为1。
[0204] 在一些实施方案中，本发明化合物由下述式(Ic)表示：
[0205]
[0206] 其中式(Ic)中的各个变量具有与本申请上文和下文所述相同的含义。
[0207] 在一些实施方案中，n为2。
[0208] 在一些实施方案中，本发明化合物由下述式(Ie)表示：
[0209]
[0210] 其中式(Ie)中的各个变量具有与本申请上文和下文所述相同的含义。
[0211] 变量“m”
[0212] 在一些实施方案中，m为1。
[0213] 在一些实施方案中，本发明化合物由下述式(Ig)表示：
[0214]
[0215] 其中式(Ig)中的各个变量具有与本申请上文和下文所述相同的含义。
[0216] 在一些实施方案中，m为2。
[0217] 在一些实施方案中，本发明化合物由下述式(Ii)表示：
[0218]
[0219] 其中式(Ii)中的各个变量具有与本申请上文和下文所述相同的含义。
[0220] 变量Y和Z
[0221] 在一些实施方案中，Y为N或CR1且Z为N或CR4。
[0222] 在一些实施方案中，Y为N且Z为N。
[0223] 在一些实施方案中，Y为N且Z为CR4。
[0224] 在一些实施方案中，Y为CR1且Z为N。
[0225] 在一些实施方案中，Y为CR1且Z为CR4。
[0226] 在一些实施方案中，Y为N。
[0227] 在一些实施方案中，Y为CR1。
[0228] 在一些实施方案中，Z为N。
[0229] 在一些实施方案中，Z为CR4。
[0230] 基团R1
[0231] 在一些实施方案中，R1选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基。
[0232] 在一些实施方案中，R1选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂 环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有一个C3-C7环烷基。
[0233] 在一些实施方案中，R1为H或C1-C6卤代烷基。
[0234] 在一些实施方案中，R1为H。
[0235] 在一些实施方案中，R1为三氟甲基。
[0236] 基团R2
[0237] 在一些实施方案中，R2选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基。
[0238] 在一些实施方案中，R2选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有一个C3-C7环烷基。
[0239] 在一些实施方案中，R2选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基。
[0240] 在一些实施方案中，R2选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基。
[0241] 在一些实施方案中，R2为H。
[0242] 在一些实施方案中，R2为氰基。
[0243] 在一些实施方案中，R2为三氟甲氧基。
[0244] 在一些实施方案中，R2为三氟甲基。
[0245] 基团R3
[0246] 在一些实施方案中，R3选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基。
[0247] 在一些实施方案中，R3选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个 取代基。
[0248] 在一些实施方案中，R3选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有一个C3-C7环烷基。
[0249] 在一些实施方案中，R3选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素和杂环基。
[0250] 在一些实施方案中，R3选自H、氨甲酰基、氯、氰基、环丁基、环己基、环戊基、环戊基氧基、环丙基、环丙基甲氧基、环己基甲基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、乙基氨基、异丁基、异丙氧基、甲基磺酰基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、1,2,3-噻二唑-4-基、三氟甲氧基和三氟甲基。
[0251] 在一些实施方案中，R3选自H、氯、环丁基、环己基、环戊基、环丙基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、异丁基、异丙氧基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、三氟甲氧基和三氟甲基。
[0252] 在一些实施方案中，R3为H。
[0253] 在一些实施方案中，R3为氯。
[0254] 在一些实施方案中，R3为环丁基。
[0255] 在一些实施方案中，R3为环己基。
[0256] 在一些实施方案中，R3为环戊基。
[0257] 在一些实施方案中，R3为环丙基。
[0258] 在一些实施方案中，R3为3,3-二氟吡咯烷-1-基。
[0259] 在一些实施方案中，R3为异丁基。
[0260] 在一些实施方案中，R3为异丙氧基。
[0261] 在一些实施方案中，R3为新戊基。
[0262] 在一些实施方案中，R3为丙基。
[0263] 在一些实施方案中，R3为吡咯烷-1-基。
[0264] 在一些实施方案中，R3为三氟甲氧基。
[0265] 在一些实施方案中，R3为三氟甲基。
[0266] 在一些实施方案中，R3为氨甲酰基。
[0267] 在一些实施方案中，R3为氰基。
[0268] 在一些实施方案中，R3为环戊基氧基。
[0269] 在一些实施方案中，R3为环丙基甲氧基。
[0270] 在一些实施方案中，R3为环己基甲基。
[0271] 在一些实施方案中，R3为乙基氨基。
[0272] 在一些实施方案中，R3为甲基磺酰基。
[0273] 在一些实施方案中，R3为1,2,3-噻二唑-4-基。
[0274] 基团R4
[0275] 在一些实施方案中，R4选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基。
[0276] 在一些实施方案中，R4选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、C1-C6烷基硫基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有一个C3-C7环烷基。
[0277] 在一些实施方案中，R4选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基。
[0278] 在一些实施方案中，R4选自H、氰基和C1-C6卤代烷基。
[0279] 在一些实施方案中，R4选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基。
[0280] 在一些实施方案中，R4选自H、氰基和三氟甲基。
[0281] 在一些实施方案中，R4为H。
[0282] 在一些实施方案中，R4为氰基。
[0283] 在一些实施方案中，R4为三氟甲基。
[0284] 在一些实施方案中，R4为三氟甲氧基。
[0285] 某些组合
[0286] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Ia)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，其中
[0287] m为1或2；
[0288] n为1或2；
[0289] Y为N或CR1；
[0290] Z为N或CR4；
[0291] R1为H或C1-C6卤代烷基；
[0292] R2选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；
[0293] R3选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素和杂环基；且
[0294] R4选自H、氰基和C1-C6卤代烷基。
[0295] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Ia)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，其中
[0296] m为1或2；
[0297] n为1或2；
[0298] Y为N或CR1；
[0299] Z为N或CR4；
[0300] R1为H或三氟甲基；
[0301] R2选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；
[0302] R3选自H、氯、环丁基、环己基、环戊基、环丙基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、异丁基、异丙氧基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、三氟甲氧基和三氟甲基；且
[0303] R4选自H、氰基和三氟甲基。
[0304] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Ik)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物：
[0305]
[0306] 其中
[0307] Y为N或CR1；
[0308] Z为N或CR4；
[0309] R1为H或C1-C6卤代烷基；
[0310] R2选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；
[0311] R3选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧 基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基；且
[0312] R4选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基。
[0313] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Ik)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物：
[0314]
[0315] 其中
[0316] Y为N或CR1；
[0317] Z为N或CR4；
[0318] R1为H或C1-C6卤代烷基；
[0319] R2选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；
[0320] R3选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素和杂环基；且
[0321] R4选自H、氰基和C1-C6卤代烷基。
[0322] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Ik)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物：
[0323]
[0324] 其中
[0325] Y为N或CR1；
[0326] Z为N或CR4；
[0327] R1为H或三氟甲基；
[0328] R2选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；
[0329] R3选自H、氨甲酰基、氯、氰基、环丁基、环己基、环戊基、环戊基氧基、环丙基、环丙基甲氧基、环己基甲基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、乙基氨基、异丁基、异丙氧基、甲基磺酰基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、1,2,3-噻二唑-4-基、三氟甲氧基和三氟甲基；且[0330] R4选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基。
[0331] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Ik)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，其中
[0332] Y为N或CR1；
[0333] Z为N或CR4；
[0334] R1为H或三氟甲基；
[0335] R2选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；
[0336] R3选自H、氯、环丁基、环己基、环戊基、环丙基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、异丁基、异丙氧基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、三氟甲氧基和三氟甲基；且
[0337] R4选自H、氰基和三氟甲基。
[0338] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Im)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物：
[0339]
[0340] 其中
[0341] R2选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；且
[0342] R3选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C1-C6烷基氨基、C1-C6烷基磺酰基、氨甲酰基、氰基、C3-C7环烷氧基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素、杂芳基和杂环基，其中所述C1-C6烷基和C1-C6烷氧基各自任选取代有选自C3-C7环烷基和卤素的一个或两个取代基。
[0343] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Im)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物：
[0344]
[0345] 其中2
[0346] R 选自H、氰基、C1-C6卤代烷氧基和C1-C6卤代烷基；且3
[0347] R 选自H、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基、C3-C7环烷基、C1-C6卤代烷氧基、C1-C6卤代烷基、卤素和杂环基。
[0348] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Im)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物：
[0349]
[0350] 其中
[0351] R2选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；且
[0352] R3选自H、氨甲酰基、氯、氰基、环丁基、环己基、环戊基、环戊基氧基、环丙基、环丙基甲氧基、环己基甲基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、乙基氨基、异丁基、异丙氧基、甲基磺酰基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、1,2,3-噻二唑-4-基、三氟甲氧基和三氟甲基。
[0353] 本发明一些实施方案涉及以下化合物，所述化合物选自式(Im)的化合物及其药用盐、溶剂化物和水合物，其中
[0354] R2选自H、氰基、三氟甲氧基和三氟甲基；且
[0355] R3选自H、氯、环丁基、环己基、环戊基、环丙基、3,3-二氟吡咯烷-1-基、异丁基、异丙氧基、新戊基、丙基、吡咯烷-1-基、三氟甲氧基和三氟甲基。
[0356] 酯和前药
[0357] 本发明一个方面涉及式(IIa)的化合物，其作为合成中间体而可用于制备式(Ia)的化合物和/或作为前药而可用于递送式(Ia)的化合物：
[0358]
[0359] 其中m、n、R2、R3、Y、Z和W具有与本申请上文和下文所述相同的定义及R5为C1-C6烷基。
[0360] 本发明一个方面涉及式(IIa)的化合物。
[0361] 在一些实施方案中，R5为乙基。
[0362] 在一些实施方案中，R5为叔丁基。
[0363] 出于简要目的，应该理解的是，本申请上文和下文描述的涉及式(Ia)和(IIa)的2 3
化合物所共享的公用变量即m、n、R、R、Y、Z和W的所有实施方案适用于式(IIa)的化合物，就如同当具体涉及式(IIa)时，上述变量被各自单独地披露在本申请中。
化合物所共享的公用变量即m、n、R、R、Y、Z和W的所有实施方案适用于式(IIa)的化合物，就如同当具体涉及式(IIa)时，上述变量被各自单独地披露在本申请中。
[0364] 本发明一个方面涉及式(IIa)的化合物，其作为合成中间体而可用于制备式(Ia)的化合物。
[0365] 本发明一个方面涉及式(IIa)的化合物，其作为本申请描述和显示的化合物例如5
表A中的化合物的酯，其中R 为乙基。
表A中的化合物的酯，其中R 为乙基。
[0366] 本发明一个方面涉及式(IIa)的化合物，其作为本申请描述和显示的化合物例如5
表A中的化合物的酯，其中R 为叔丁基。
表A中的化合物的酯，其中R 为叔丁基。
[0367] 本发明一个方面涉及式(IIa)的化合物，其作为前药而可用于递送式(Ia)的化合物。
[0368] 本发明一个方面涉及式(IIa)的化合物，其可用作式(Ia)的化合物的前药。
[0369] 本发明一些实施方案包括选自下表A中显示的一种或多种化合物的每种组合。
[0370] 表A
[0371]
[0372]
[0373]
[0374]
[0375]
[0376] 另外，本发明每种化合物和化学通式[例如表A中列出的那些化合物(包括其非对映异构体和对映异构体)]包括其所有药用盐、溶剂化物和水合物。
[0377] 应该理解的是，本发明包括本申请披露的每种化合物和通式的每种非对映异构体、每种对映异构体和它们的混合物，就如同它们以每个手性碳的具体立体化学指定被各自单独地披露。通过使用本领域技术人员公知的各种方法对单独的异构体进行分离(例如通过对非对映异构体混合物进行手性HPLC、重结晶等)或对单独的异构体进行选择性合成(例如通过对映异构体选择性合成等)。
[0378] 本发明式(Ia)的化合物可根据本领域技术人员使用的相关公开文献方法来制备。用于这些反应的示例性试剂和方法在以下制备实施例中描述。保护和脱保护可通过本领域公知的方法来进行(参见例如Greene,T.W.and Wuts,P.G.M.,Protecting Groups in rdOrganic Synthesis,3 Edition,1999[Wiley](将其全文并入本申请作为参考))。
[0379] 本发明实施方案包括选自以下的一种或多种盐及其药用溶剂化物和水合物的每种组合：
[0380] (R)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的钙盐；和
[0381] (R)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的L-精氨酸盐。
[0382] 药物组合物
[0383] 本发明另一个方面涉及药物组合物，所述药物组合物含有本申请描述的一种或多种化合物和一种或多种药用载体。一些实施方案涉及含有本发明化合物和药用载体的药物组合物。
[0384] 本发明一些实施方案包括制备药物组合物的方法，所述方法包括将本申请披露的任意化合物实施方案中的至少一种化合物和药用载体混合。
[0385] 制剂可通过任意合适的方法来制备，通常通过以所需比例对一种或多种活性化合物与液体和/或微细分散的固体载体进行均匀混合，然后如果需要，则使所得混合物成形为所需形状。
[0386] 常规赋型剂例如粘合剂、填充剂、可接受的润湿剂、制片润滑剂和崩解剂可用在用于口服给药的片剂和胶囊剂中。用于口服给药的液体制剂可呈以下形式：溶液剂、乳剂、水性或油性混悬剂和糖浆剂。可选择地，口服制剂可呈干粉剂形式，所述干粉剂可在使用前用水或另一种合适的液体媒介物复溶。可将其它添加剂例如助悬剂、乳化剂、非水性媒介物(包括食用油)、防腐剂、矫味剂和着色剂加到液体制剂中。肠胃外剂型可如下制备：将本发明化合物溶解在合适的液体媒介物中，对溶液进行过滤灭菌，然后填充到合适的小瓶或安瓿中并密封。这些方法仅是本领域公知的用于制备剂型的多种合适方法中的几个实例。
[0387] 本发明化合物可使用本领域技术人员公知的技术来配制成药物组合物。除本申请提及的那些药用载体外，合适的药用载体是本领域已知的；例如参见Remington,The thScience and Practice of Pharmacy,20 Edition,2000,Lippincott Williams&Wilkins(Editors:Gennaro et al.)。
[0388] 尽管本发明化合物在可选择的用途中可按原料化学物质或纯化学物质形式来给药以进行预防或治疗，但优选的是，所述化合物或活性成分以还含有药用载体的药物制剂或药物组合物形式来提供。
[0389] 因此，本发明还提供药物制剂，所述药物制剂含有本发明化合物或其药用盐、溶剂化物、水合物或衍生物及一种或多种药用载体和/或预防性成分。载体必须是“可接受的”即与制剂中的其它成分是相容的且就其接受者而言不是过度有害的。
[0390] 药物制剂包括适于口服给药、直肠给药、经鼻给药、局部给药(包括含服给药和舌下给药)、阴道给药或肠胃外给药(包括肌内给药、皮下给药和静脉内给药)的那些药物制剂或其形式适于吸入给药、吹入给药或透皮贴剂给药的那些药物制剂。透皮贴剂如下以受控速率递送药物：以有效的方式提供用于吸收的药物并使药物的降解最小化。通常，透皮贴剂包含不可渗透的背层、单一的压敏粘合剂层和可除去的具有剥离衬里的保护层。本领域技术人员基于技术人员的需要而应该理解和知晓适于制备所需有效透皮贴剂的技术。
[0391] 因此，可将本发明化合物及常规辅料、载体或稀释剂配制成药物制剂及其单位剂量形式且可按以下形式用于口服使用：固体形式(例如片剂或填充胶囊剂)或液体形式(例如溶液剂、混悬剂、乳剂、酏剂、凝胶剂或填充有溶 液剂、混悬剂、乳剂、酏剂或凝胶的胶囊剂)；按栓剂形式用于直肠给药；或按无菌注射溶液剂形式用于肠胃外(包括皮下)使用。上述药物组合物及其单位剂量形式可包含常规比例的常规成分及具有或不具有其它活性化合物或成分且上述单位剂量形式可含有与待用预定每日剂量范围相称的任意合适有效量的活性成分。
[0392] 对于口服给药，所述药物组合物可呈以下形式：例如片剂、胶囊剂、混悬剂或液体制剂。优选将所述药物组合物配制成含有具体量的活性成分的剂量单位形式。上述剂量单位的实例为胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂或混悬剂，其中常规添加剂为例如乳糖、甘露醇、玉米淀粉或马铃薯淀粉；其中粘合剂为例如结晶纤维素、纤维素衍生物、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；其中崩解剂为例如玉米淀粉、马铃薯淀粉或羧甲基纤维素钠；和其中润滑剂为例如滑石或硬脂酸镁。所述活性成分也可按组合物形式通过注射来给药，其中例如盐水、右旋糖或水可用作合适的药用载体。
[0393] 本发明化合物或其盐、溶剂化物、水合物或生理学功能性衍生物可用作药物组合物中的活性成分，特别是作为S1P1受体调节剂。在有关“药物组合物”的上下文中定义了术语“活性成分”且是指药物组合物中提供主要药理学作用的组分，其与通常被认为不提供药物益处的“非活性成分”相对。
[0394] 当使用本发明化合物时，剂量可在宽范围内变化且如医师所惯用和已知的那样，对所述剂量进行调整以在每种个体情况下适用于个体情况。例如，所述剂量取决于待治疗疾病的性质和严重程度、患者的情况、所使用的化合物、治疗或预防的是急性病症还是慢性病症或除本发明化合物外是否给药其它活性化合物。本发明代表性剂量包括但不限于约0.001mg至约5000mg、约0.001mg至约2500mg、约0.001mg至约1000mg、约0.001mg至约
500mg、约0.001mg至约250mg、约0.001mg至100mg、约0.001mg至约50mg和约0.001mg至约25mg。可在一天中给药多次剂量，特别是当认为需要相对大的量时，所述多次剂量为例如2、3或4次剂量。基于个体且当患者的医师或护理人员认为合适时，可能需要上调或下调本申请描述的剂量。
500mg、约0.001mg至约250mg、约0.001mg至100mg、约0.001mg至约50mg和约0.001mg至约25mg。可在一天中给药多次剂量，特别是当认为需要相对大的量时，所述多次剂量为例如2、3或4次剂量。基于个体且当患者的医师或护理人员认为合适时，可能需要上调或下调本申请描述的剂量。
[0395] 用于治疗所需要的活性成分或其活性盐、溶剂化物、水合物或衍生物的量不但随所选择的具体盐而变化，而且随给药途径、所治疗病症的性质及患者的年龄和情况而变化且最终将由护理医师或临床医师来确定。通常，本领域技术人员理解如何将在一种模型系统(通常为动物模型)中得到的体内数据 外推至另一种模型系统(例如人类)。在一些情况下，这些外推可仅基于所述动物模型与另一种动物模型的体重比较，所述另一种动物模型为例如哺乳动物，优选为人类，然而更常见的是，这些外推不是简单地基于体重，而是结合了多种因素。代表性因素包括患者的类型、年龄、体重、性别、饮食和医药情况、疾病的严重程度、给药途径、药理学所考虑的因素例如所用具体化合物的活性、功效、药物代谢动力学和毒理学分布、是否使用药物递送系统、治疗或预防的是急性病症还是慢性病症或除本发明化合物外是否给药其它活性化合物并作为药物联用的一部分。用本发明化合物和/或组合物治疗病症的给药方案根据包括上述那些因素在内的各种因素来选择。因此，所使用的实际给药方案可变化很大，因此可能偏离优选的给药方案且本领域技术人员应该理解的是，可对在这些典型范围外的剂量和给药方案进行试验及当需要时，在这些典型范围外的剂量和给药方案可用在本发明方法中。
[0396] 所需剂量可方便地以单一剂量形式或分份剂量形式来提供，所述分份剂量以合适的间隔(例如每天两次、三次、四次或更多次亚剂量)来给药。所述亚剂量本身可被进一步分成例如多个松散分开的离散给药形式。可将每日剂量分成若干份(例如2份、3份或4份)给药形式，特别是当认为给药相对大的量是合适的时。如果基于个体行为而需要，则可能需要上调或下调所指出的每日剂量。
[0397] 为了由本发明化合物制备药物组合物，合适的药用载体可以是固体、液体或这两者的混合物。固体制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，所述物质也可作为稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包囊材料。
[0398] 在粉剂中，所述载体是微细分散的固体，其与微细分散的活性组分形成混合物。
[0399] 在片剂中，将所述活性组分与具有必要粘合能力的载体以合适的比例混合且压制成所需形状和尺寸。
[0400] 所述粉剂和片剂可含有各种百分量的所述活性化合物。粉剂或片剂中的代表性量可为约0.5至约90％所述活性化合物。然而，本领域技术人员应该知道何时需要在上述范围外的量。适于粉剂和片剂的载体包括碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维 素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制备”意在包括对所述活性化合物与作为载体的包囊材料进行配制，因此提供所述活性组分(带有或不带有载体)被载体包围并因此与所述载体结合的胶囊剂。类似地，本发明包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、扁囊剂和锭剂可用作适于口服给药的固体形式。
[0402] 适于阴道给药的制剂可按以下形式来提供：阴道栓剂、塞剂(tampon)、乳膏剂、凝胶剂、糊剂(paste)、泡沫剂或喷雾剂，它们除所述活性成分外含有本领域已知合适的上述载体。
[0403] 液体制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂(例如水溶液剂或水-丙二醇溶液剂)。例如，可将肠胃外注射液体制剂配制成在水性聚乙二醇溶液中的溶液剂。注射剂(例如无菌注射水性或油性混悬剂)可按照已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和助悬剂来配制。无菌注射剂也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液剂或混悬剂(例如在1,3-丁二醇中的溶液剂)。可接受且可使用的媒介物和溶剂为水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌非挥发油通常用作溶剂或混悬介质。出于该目的，可使用任意温和的非挥发油，其包括合成的甘油一酯或甘油二酯。另外，脂肪酸例如油酸可用于制备注射剂。
[0404] 因此，可将本发明化合物配制成用于肠胃外给药(例如通过注射(例如推注或连续输注))且可按单位剂量形式存在于加有防腐剂的安瓿、预填充注射器、小体积输注容器或多剂量容器中。所述药物组合物可呈以下形式：在油性或水性媒介物中的混悬剂、溶液剂或乳剂且可含有制剂物质例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。可选择地，所述活性成分可呈粉末形式(其通过对无菌固体进行无菌分装或通过对溶液进行冷冻干燥来得到)以在使用前用合适的媒介物(例如无菌的无热原的水)复溶。
[0405] 适于口服使用的水性制剂可如下制备：将所述活性组分溶解或混悬在水中并根据需要加入合适的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂。
[0406] 适于口服使用的水性混悬剂可如下制备：将微细分散的所述活性组分分散在含有粘性物质的水中，所述粘性物质为例如天然胶或合成胶、树脂、甲 基纤维素、羧甲基纤维素钠或其它公知的助悬剂。
[0407] 本发明也包括这样的固体制剂，其在使用前才被转化成用于口服给药的液体制剂。上述液体制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂。除所述活性组分外，这些制剂可含有着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人造甜味剂和天然增甜剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
[0408] 就局部给药于表皮而言，可将本发明化合物配制成软膏剂、乳膏剂、洗剂或透皮贴剂。
[0409] 例如，软膏剂和乳膏剂可用水性或油性基质配制，其中加入合适的增稠剂和/或胶凝剂。洗剂可用水性或油性基质配制且通常还将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。
[0410] 适于在口腔中进行局部给药的制剂包括锭剂，其在经矫味的基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)中含有所述活性剂；软锭剂，其在惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中含有所述活性成分；和漱口剂，其在合适液体载体中含有所述活性成分。
[0411] 通过常规手段例如用点滴器、吸移管或喷雾器将溶液剂或混悬剂直接施用至鼻腔中。所述制剂可按单一剂量形式或多剂量形式来提供。就点滴器或吸移管的多剂量形式而言，可通过向患者给药合适的预定体积的溶液剂或混悬剂来实现给药多剂量形式。就喷雾器而言，可例如通过计量雾化喷雾泵来实现给药多剂量形式。
[0412] 给药于呼吸道也可通过气雾剂来实现，其中在具有合适推进剂的加压包装中提供所述活性成分。如果本发明化合物或包含它们的药物组合物以气雾剂形式(例如经鼻气雾剂或通过吸入)来给药，则其可例如使用喷雾器、雾化器、泵式雾化器、吸入装置、计量吸入器或干粉吸入器来进行。用于将本发明化合物以气雾剂形式给药的药物形式可通过本领域技术人员公知的方法来制备。例如，可使用本发明化合物或其药用盐、溶剂化物、水合物或衍生物在水、水/醇混合物或合适盐水中的溶液剂或分散剂，它们使用常规添加剂(例如苯甲醇或其它合适的防腐剂)、用于提高生物利用度的吸收促进剂、增溶剂、分散剂和其它添加剂及当合适时使用常规推进剂(例如二氧化碳、CFC例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷等)。所述气雾剂也可方便地含有表面活性剂例如卵磷脂。药物剂量可通过提供计量阀来控制。
[0413] 在意在给药于呼吸道的制剂(包括鼻内制剂)中，所述化合物通常将具有 小的粒度(例如10微米或更小的粒度)。上述粒度可通过本领域已知的方法例如通过微粉化来得到。当需要时，可使用适于实现所述活性成分持续释放的制剂。
[0414] 可选择地，所述活性成分可按干粉剂形式(例如所述化合物在合适粉末基质[例如乳糖、淀粉、淀粉衍生物例如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)]中的粉末混合物)来提供。方便地，所述粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。就明胶包装或泡罩包装而言，所述粉末组合物可按单位剂量形式(例如胶囊或药筒)来提供，所述粉末可通过吸入器从所述明胶包装或泡罩包装中来给药。
[0415] 所述药物制剂优选呈单位剂量形式。在上述形式中，将所述制剂细分为含有合适量的所述活性组分的单位剂量。所述单位剂量形式可以是经包装的制剂、含有多个离散制剂的包装(例如经包装的在小瓶或安瓿中的片剂、胶囊剂和粉剂)。另外，所述单位剂量形式可以是胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂本身或其可以是合适数量的呈包装形式的上述剂型中的任意一种。
[0416] 在一些实施方案中，所述组合物为用于口服给药的片剂或胶囊剂。
[0417] 在一些实施方案中，所述组合物为用于静脉内给药的液体制剂。
[0418] 本发明化合物可任选以药用盐形式存在，包括由药用无毒酸制备的药用酸加成盐，所述药用无毒酸包括无机酸和有机酸。代表性酸包括但不限于乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、枸橼酸、乙磺酸、二氯乙酸、甲酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、草酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、草酸、对甲苯磺酸等，例如Journal of Pharmaceutical Sciences,66:1-19(1977)中列出的那些药用盐，将其全文并入本申请作为参考。
[0419] 所述酸加成盐可按化合物合成的直接产物形式来得到。可选择地，可将游离碱溶解在含有合适酸的合适溶剂中且通过蒸发溶剂来分离盐或以其它方法对盐和溶剂进行分离。本发明化合物可使用本领域技术人员已知的方法来与标准低分子量溶剂形成溶剂化物。
[0420] 可将本发明化合物转化成“前药”。术语“前药”是指这样的化合物，所述化合物已用本领域已知的具体化学基团进行修饰且当给药到个体中时，所述化合物经历生物转化，得到母体化合物。因此，前药可被认为是这样的本发明化合物，其含有一种或多种以暂时方式用于改变或消除化合物性质的专门 无毒保护基。在一个一般方面，使用所述“前药”方法以促进口服吸收。参见T.Higuchi and V.Stella,Pro-drugs as Novel Delivery Systems Vol.14of the A.C.S.Symposium Series和Bioreversible Carriers in Drug Design,ed.Edward B.Roche,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press,1987，将这两篇文献全文并入本申请作为参考。
[0421] 本发明一些实施方案包括制备用于“组合疗法”的药物组合物的方法，所述方法包括对本申请披露的任意化合物实施方案中的至少一种化合物与本申请描述的至少一种已知药物物质和药用载体进行混合。
[0422] 应该注意的是，当S1P1受体激动剂用作药物组合物中的活性成分时，上述S1P1受体激动剂不但意在用于人类，而且意在用于其它非人类哺乳动物。实际上，动物保健领域中的最新进展表明应该考虑在伴侣动物(例如猫、狗等)和家畜(例如牛、鸡雏、鱼等)中使用活性剂例如S1P1受体激动剂以治疗S1P1受体相关疾病或障碍。相信本领域技术人员可容易地理解上述化合物在上述情况下的用途。
[0423] 水合物和溶剂化物
[0424] 应该理解的是，当提及本申请具体式使用短语“药用盐、溶剂化物和水合物”时，所述短语意在包括具体式的化合物的溶剂化物和/或水合物，所述具体式的化合物的药用盐及所述具体式的化合物的药用盐的溶剂化物和/或水合物。本领域技术人员也应该理解的是水合物为溶剂化物的亚属。
[0425] 可以多种口服和肠胃外剂型给药本发明化合物。对本领域技术人员明显的是，下述剂型作为活性组分可包括本发明化合物或本发明化合物的药用盐、溶剂化物或水合物。另外，本发明化合物的各种水合物和溶剂化物和它们的盐用作制备药物组合物中的中间体。除了本申请提及的那些方法外，用于制备和鉴定合适水合物和溶剂化物的通常方法是本领域公知的；参见例如，202-209页，K.J.Guillory,“Generation of Polymorphs,Hydrates,Solvates,and Amorphous Solids,”in：Polymorphism in Pharmaceutical Solids,ed.Harry G.Brittan,Vol.95,Marcel Dekker,Inc.,New York,1999，将该文献整体并入本为作为参考。因此，本发明一个方面涉及本申请描述的本发明化合物和/或它们的药用盐的水合物和溶剂化物，可通过本领域已知的方法分离和表征所述水合物和溶剂化物，所述方法为例如热重量分析(TGA)、TGA-质谱、TGA-红外广谱、粉末X射线衍射(PXRD)、卡尔·费歇尔滴定(Karl Fisher titration)、高分辨X射线衍射等。存在提供用于按常规基础鉴定溶剂化合物和水合物 的快速和有效服务的几个商业实体(commercial entity)。提供这些服务的示例性公司包括Wilmington PharmaTech(Wilmington,DE)、Avantium Technologies(Amsterdam)和Aptuit(Greenwich,CT)。
[0426] 本发明实施方案包括选自下述的一种或多种溶剂化物或水合物的每种组合：
[0427] (S)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸水合物的D-赖氨酸盐；和
[0428] (S)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的乙腈溶剂化物的(R)-1-苯乙胺盐。
[0429] 在一些实施方案中，结晶形式为(S)-2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸水合物。
[0430] 在 一 些实 施 方 案 中，(S)-2-(7-(4-环 戊 基-3-( 三氟 甲 基) 苄 基 氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸水合物的结晶形式具有基本如在图12中显示的X射线粉末衍射图，其中“基本”是指报道的峰可改变约±0.2°2θ。
[0431] 在 一 些实 施 方 案 中，(S)-2-(7-(4-环 戊 基-3-( 三氟 甲 基) 苄 基 氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸水合物的结晶形式具有基本如在图13中显示的差示扫描量热法热解曲线，其中“基本”是指报道的DSC特征可改变约±4℃。
[0432] 在 一 些实 施 方 案 中，(S)-2-(7-(4-环 戊 基-3-( 三氟 甲 基) 苄 基 氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸水合物的结晶形式具有基本图在图13中显示的热重量分析热解曲线。
[0433] 在 一 些实 施 方 案 中，(S)-2-(7-(4-环 戊 基-3-( 三氟 甲 基) 苄 基 氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸水合物的结晶形式基本具有如在如图14中显示的含水量-吸收分析，其中“基本”是指报道的含水量-吸收分析特征可改变约±5％的相对湿度。
[0434] 其它用途
[0435] 本发明另一个目的涉及经放射标记的本发明化合物，所述经放射标记的化合物不但用在体外和体内放射成像中，而且还用在体外和体内测定中，用于定位和定量在组织样品包括人中的S1P1受体及用于通过经放射标记的化合物的抑制结合识别S1P1受体配体。本发明另一目的是开发新颖的S1P1受体测定，所述测定包含所述经放射标记的化合物。
[0436] 本发明包括经同位素标记的本发明化合物。经同位素标记的化合物或经放射标记的化合物是以下那些化合物，所述化合物与本申请披露的化合物相同，但就以下事实不同：一个或多个原子被以下原子置换或取代，所述原子具有的原子质量或质量数与天然发现的最常见原子的原子质量或质量数不同。可结合到本发明化合物中的合适放射性核素包括但
2 3 11 13 14 13 15 15 17 18 18 35
不限于 H(对于氘也写作D)、H(对于氚也写作T)、C、C、C、N、N、O、O、O、 F、S、
36 75 76 77 82 123 124 125 131
Cl、Br、Br、Br、Br、I、 I、I和 I。结合到本发明放射标记的化合物中的放射性核素将取决于那个放射标记的化合物的具体应用。例如，对于体外S1P1受体标记和竞争测
3 14 82 125 131 35 11 18
定，结合 H、C、Br、I、 I或 S的化合物通常是最有用的。对于放射成像应用，C、F、
125 123 124 131 75 76 77
I、 I、 I、 I、Br、Br或 Br通常是最有用的。
2 3 11 13 14 13 15 15 17 18 18 35
不限于 H(对于氘也写作D)、H(对于氚也写作T)、C、C、C、N、N、O、O、O、 F、S、
36 75 76 77 82 123 124 125 131
Cl、Br、Br、Br、Br、I、 I、I和 I。结合到本发明放射标记的化合物中的放射性核素将取决于那个放射标记的化合物的具体应用。例如，对于体外S1P1受体标记和竞争测
3 14 82 125 131 35 11 18
定，结合 H、C、Br、I、 I或 S的化合物通常是最有用的。对于放射成像应用，C、F、
125 123 124 131 75 76 77
I、 I、 I、 I、Br、Br或 Br通常是最有用的。
[0437] 应该理解的是，“放射标记的”或“标记的化合物”是含有至少一个放射核素的式(Ia)、(Ic)、(Ie)、(Ig)、(Ii)、(Ik)或(Im)的化合物。在一些实施方案中，所述放射核素3 14 125 35 82
选自 H、C、 I、S和 Br。
选自 H、C、 I、S和 Br。
[0438] 一些同位素标记的本发明化合物用在化合物和/或底物组织分配测定中。在一些3 14
实施方案中，所述放射性核素 H和/或 C同位素在这些研究中是有用的。另外，用较重同
2
位素例如氘(即 H)取代可得到由较大代谢稳定性带来的一些治疗益处(例如体内半衰期增加或剂量需要量减少)且因此在一些情况下是优选的。本发明同位素标记的化合物通常可通过下述与在下文图3至6和实施例中披露的那些方法类似的方法制备，通过用同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。其它有用的合成方法在下文中讨论。另外，应该理解的是，在本发明化合物中表示的所有原子可以是所述原子最通常出现的同位素或是稀有放射同位素或是非放射活性同位素。
实施方案中，所述放射性核素 H和/或 C同位素在这些研究中是有用的。另外，用较重同
2
位素例如氘(即 H)取代可得到由较大代谢稳定性带来的一些治疗益处(例如体内半衰期增加或剂量需要量减少)且因此在一些情况下是优选的。本发明同位素标记的化合物通常可通过下述与在下文图3至6和实施例中披露的那些方法类似的方法制备，通过用同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。其它有用的合成方法在下文中讨论。另外，应该理解的是，在本发明化合物中表示的所有原子可以是所述原子最通常出现的同位素或是稀有放射同位素或是非放射活性同位素。
[0439] 用于将放射同位素结合到有机化合物中的合成方法对本发明化合物是适用的且是本领域公知的。这些合成方法(例如将活性水平的氚结合到目标分子中)以下所述：
[0440] A.用氚气体催化还原：该方法通常得到高比放射性的产物且需要卤化或不饱和前体。
[0443] D.氚气体暴露标记：该方法包括在合适催化剂的存在下将含有可交换质子的前体暴露于氚气体。
[0444] E.使用碘甲烷[3H]N-甲基化：通常使用该方法通过用高比放射性碘甲烷(3H)处3
理合适的前体制备O-甲基或N-甲基(H)产物。一般而言，该方法允许较高的比放射性，例如，约70-90Ci/mmol。
理合适的前体制备O-甲基或N-甲基(H)产物。一般而言，该方法允许较高的比放射性，例如，约70-90Ci/mmol。
[0445] 用于将活性水平的125I结合到目标分子中的合成方法包括：
[0446] A.桑德迈尔及类似反应：该方法将芳基胺或杂芳基胺转化成重氮盐，例如重氮四125 125
氟硼酸盐及随后使用Na I转化成 I标记的化合物。代表性方法由Zhu,G-D及其同事在J.Org.Chem.,2002,67,943-948中报道。
氟硼酸盐及随后使用Na I转化成 I标记的化合物。代表性方法由Zhu,G-D及其同事在J.Org.Chem.,2002,67,943-948中报道。
[0447] B.苯酚的邻位碘(125I)化：该方法允许125I结合在苯酚的邻位，如由Collier,T.L及其同事在J.Labelled Compd.Radiopharm.,1999,42,S264-S266中所报道。
[0448] C.芳基溴化物和杂芳基溴化物用125I交换：该方法通常是一个两步过程。第一步是使用例如以下方法将芳基或杂芳基溴化物转化成相应的三烷基锡中间体：在卤化三烷基锡或六烷基二锡[例如，(CH3)3SnSn(CH3)3]存在下，进行Pd催化的反应[即Pd(Ph3P)4]或通过芳基锂或杂芳基锂进行转换。代表性方法由Le Bas,M.-D及其同事在J.Labelled Compd.Radiopharm.2001,44,S280-S282中报道。
[0449] 放射标记的式(Ia)的S1P1受体化合物可用在筛选测定中以识别/评价化合物。一般而言，可就新合成的或识别的化合物(即试验化合物)减少“放射标记的式(Ia)的化合物”结合至S1P1受体的能力进行评价。因此，试验化合物与“放射标记的式(Ia)的化合物”竞争结合至S1P1受体的能力与其结合亲和力直接相关。
[0450] 本发明经标记的化合物与S1P1受体结合。在一个实施方案中，所述经标记的化合物具有小于约500μM的IC50，在另一个实施方案中，所述经标记的化合物具有小于约100μM的IC50，在另一个实施方案中，所述经标记的化合物具有小于约10μM的IC50，在另一个实施方案中，所述经标记的化合物具有小于约1μM的IC50及在另一个实施方案中，所述经标记的抑制剂具有小于约0.1μM的IC50。
[0452] 会理解的是，本发明方法的步骤不需要进行任意具体的次数或不需要按任意具体的顺序进行。基于对本发明下述实施例的考察，本发明其它目的、益处和新颖特征对于本领域技术人员来说会变得显而易见，所述实施例意在进行说明而非意在进行限制。
[0453] 实施例
[0454] 实施例1：本发明化合物的合成
[0455] 针对本发明化合物的示例性合成显示在图3至6中，其中所述符号与该说明书通篇所使用的符号具有相同的定义。
[0456] 本发明化合物和它们的合成通过以下实施例来进一步说明。提供下述实施例进一步定义本发明，然而非将本发明限制为这些实施例的具体情况。按照AutoNom 2.2版、CS ChemDraw Ultra 9.0.7版对本申请之前和之后描述的化合物进行命名。在一些情况下使用通用名且应该理解的是，本领域技术人员可知晓这些通用名。
[0457] 化学：质子核磁共振(1H NMR)光谱在配备有QNP(四核探头(Quad Nucleus Probe))或BBI(宽带反向(Broad Band Inverse))和z梯度的Bruker Avance-400上记录。1
质子核磁共振(H NMR)光谱也在配备有BBI(宽带反向)和z梯度的Bruker Avance-500上记录。化学位移以百万分数(ppm)给出，其中残余溶剂信号用作参考。以下所示使用NMR缩写：s＝单峰、d＝二重峰、dd＝双二重峰、t＝三重峰、q＝四重峰、m＝多重峰、bs＝宽TM TM
单峰。使用Smith Synthesizer 或Emrys Optimizer (Biotage)进行微波辐射。薄层色谱(TLC)在硅胶60F254(Merck)上进行，制备性薄层色谱(制备性TLC)在PK6F硅胶60A1mm板(Whatman)上进行及柱色谱使用Kieselgel 60,0.063-0.200mm(Merck)在硅胶柱上进行。蒸发在Büchi旋转蒸发仪上减压进行。硅藻土545用于钯的过滤。
质子核磁共振(H NMR)光谱也在配备有BBI(宽带反向)和z梯度的Bruker Avance-500上记录。化学位移以百万分数(ppm)给出，其中残余溶剂信号用作参考。以下所示使用NMR缩写：s＝单峰、d＝二重峰、dd＝双二重峰、t＝三重峰、q＝四重峰、m＝多重峰、bs＝宽TM TM
单峰。使用Smith Synthesizer 或Emrys Optimizer (Biotage)进行微波辐射。薄层色谱(TLC)在硅胶60F254(Merck)上进行，制备性薄层色谱(制备性TLC)在PK6F硅胶60A1mm板(Whatman)上进行及柱色谱使用Kieselgel 60,0.063-0.200mm(Merck)在硅胶柱上进行。蒸发在Büchi旋转蒸发仪上减压进行。硅藻土545用于钯的过滤。
[0458] LCMS说明：HPLC泵：LC-10AD VP,Shimadzu Inc.；HPLC系统控制器：SCL-10A VP,Shimadzu Inc；UV检测器：SPD-10A VP,Shimadzu Inc；自动进样器：CTC HTS,PAL,Leap Scientific；质谱仪：带有Turbo Ion Spray Source,AB/MDS Sciex的API 150EX；软件：Analyst 1.2。
[0459] 实施例1.1：2-(7-(3-氰基-5-(三氟甲氧基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物4)的制备
[0460] 步骤A：1-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2-氧代环戊烷羧酸乙酯的制备
[0461] 向2- 氧 代 环 戊 烷 羧 酸 乙 酯 (93.27g,597mmol) 和2- 溴 乙 酸 乙 酯(144.64g,866mmol)在丙酮(1.2L)中的溶液中加入K2CO3(165g,1194mmol)。将混合物在56℃加热24小时。将固体滤出且滤饼用丙酮(3×100ml)洗涤。将滤液浓缩且所得液体通+
过硅胶塞来纯化，得到标题化合物，其为浅黄色液体(54.7g)。LCMS m/z＝243.3[M+H]。
1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.23(t,J ＝ 7.14Hz,3H),1.24(t,J ＝ 7.14Hz,3H),1.9
5-2.03(m,1H),2.06-2.15(m,2H),2.35-2.50(m,2H),2.55-2.60(m,1H),2.80(dd,J ＝
15.2,2.09Hz,1H),2.95(dd,J＝15.2,2.09Hz,1H),4.09(q,J＝7.14Hz,2H),4.12(q,J ＝
7.14Hz,2H)。
过硅胶塞来纯化，得到标题化合物，其为浅黄色液体(54.7g)。LCMS m/z＝243.3[M+H]。
1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.23(t,J ＝ 7.14Hz,3H),1.24(t,J ＝ 7.14Hz,3H),1.9
5-2.03(m,1H),2.06-2.15(m,2H),2.35-2.50(m,2H),2.55-2.60(m,1H),2.80(dd,J ＝
15.2,2.09Hz,1H),2.95(dd,J＝15.2,2.09Hz,1H),4.09(q,J＝7.14Hz,2H),4.12(q,J ＝
7.14Hz,2H)。
[0462] 步骤B：2-(2-氧代环戊基)乙酸的制备
[0463] 将1-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2-氧代环戊烷羧酸乙酯(50.0g,206mmol)在HOAc(500ml)和6M HCl(250ml)中的溶液在100℃加热6小时。将溶剂减压除去并将残留物在EtOAc(500ml)和H2O(200ml)之间分配。分离水层并用EtOAc(2×250ml)萃取。合并的有机层用H2O(300ml)和盐水(300ml)洗涤，经Na2SO4干燥，倾出并浓缩，得到标题化合物，1
其为白色固体(22g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.59-1.72(m,1H),1.75-1.90(m,1H),2.03-2.10(m,1H),2.20(dd,J＝ 10.9,8.9Hz,1H),2.30-2.40(m,2H),2.40-2.50(m,2H),2.8
0(dd,J＝15.7,7.2Hz,1H),11.5(s,1H)。
其为白色固体(22g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.59-1.72(m,1H),1.75-1.90(m,1H),2.03-2.10(m,1H),2.20(dd,J＝ 10.9,8.9Hz,1H),2.30-2.40(m,2H),2.40-2.50(m,2H),2.8
0(dd,J＝15.7,7.2Hz,1H),11.5(s,1H)。
[0464] 步骤C：2-(2-氧代环戊基)乙酸乙酯的制备
[0465] 向2-(2-氧代环戊基)乙酸(23.6g,166mmol)在无水乙醇(400ml)中的溶液中加入H2SO4(16.28g,166mmol)。将所得溶液加热回流过夜。将反应混合物浓缩并将液体残留物加到冰-水(200ml)中。水性混合物用DCM(3×200ml)萃取。合并的有机层用H2O(300ml)和盐水(300ml)洗涤，经Na2SO4干燥，倾出，浓缩并真空干燥，得到标题化合物，其为浅黄色+ 1液体(27.2g)。LCMS m/z＝171.3[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.19(t,J＝7.14Hz,3H),1.50-1.62(m,1H),1.65-1.80(m,1H),1.92-2.02(m,1H),2.12(dd,J ＝ 16.7,8.86Hz,1H),2.19-2.29(m,2H),2.30-2.44(m,2H),2.65(dd,J ＝ 15.12,2.6Hz,1H),4.07(q,J ＝
7.14Hz,2H)。
7.14Hz,2H)。
[0466] 步骤D：2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备[0467] 将2-碘-4-甲氧基苯胺(2.0g,8.03mmol)和2-(2-氧代环戊基)乙酸乙酯(2.05g,12.1mmol)在DMF(30ml)中溶解并加入原硅酸四乙酯(2.12g,10.4mmol)和吡啶鎓对甲苯磺酸盐(PPTS)(0.081g,0.321mmol)。将反应混合物在135℃加 热并搅拌4小时。冷却至120℃后，加入DIEA(3.11g,24.09mmol)和二乙酸钯(II)(0.054g,0.241mmol)。将反应混合物搅拌3小时，然后在乙酸乙酯和水之间分配。水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。所得溶液用50％乙酸乙酯在己烷中的溶液稀释并经硅胶垫过滤。将滤液浓缩并通过硅胶柱色谱来纯化，得到1.9g
2-(7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯，其含有残留的2-(2-氧代环戊基)乙酸乙酯。将混合物在DCM(80ml)中溶解并冷却至0℃。加入三溴化硼(21.0ml,21.0mmol,1.0M在DCM中)并将反应混合物搅拌1.5小时。加入冰水并使反应混合物达到室温。水性混合物用DCM萃取三次。合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓+
缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物(650mg)。LCMS m/z＝260.3[M+H]。
1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.29(t,J ＝ 7.2Hz,3H),2.05-2.14(m,1H),2.50(dd,J ＝
16.8,11.2Hz,1H),2.68-2.86(m,4H),3.48-3.58(m,1H),4.16-4.24(m,2H),6.66(dd,J ＝
8.6,2.4Hz,1H),6.85(d,J＝2.4Hz,1H),7.15(d,J＝8.7Hz,1H),8.4(s,1H)。
2-(7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯，其含有残留的2-(2-氧代环戊基)乙酸乙酯。将混合物在DCM(80ml)中溶解并冷却至0℃。加入三溴化硼(21.0ml,21.0mmol,1.0M在DCM中)并将反应混合物搅拌1.5小时。加入冰水并使反应混合物达到室温。水性混合物用DCM萃取三次。合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓+
缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物(650mg)。LCMS m/z＝260.3[M+H]。
1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.29(t,J ＝ 7.2Hz,3H),2.05-2.14(m,1H),2.50(dd,J ＝
16.8,11.2Hz,1H),2.68-2.86(m,4H),3.48-3.58(m,1H),4.16-4.24(m,2H),6.66(dd,J ＝
8.6,2.4Hz,1H),6.85(d,J＝2.4Hz,1H),7.15(d,J＝8.7Hz,1H),8.4(s,1H)。
[0468] 步骤E：3-氰基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰氯的制备
[0469] 将草酰氯(2.0M在DCM中,0.636ml,1.272mmol)加到无水3-氰基-5-(三氟甲氧基)苯甲酸(98mg,0.424mmol)中并加入一滴DMF。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后减压浓缩。
[0470] 步骤F：3-(羟基甲基)-5-(三氟甲氧基)苯甲腈的制备
[0471] 将3-氰基-5-(三氟甲氧基)苯甲酰氯(844mg,3.38mmol)在THF(10ml)中溶解并冷却至0℃。加入硼氢化钠(320mg,8.45mmol)，接着加入甲醇(2ml)并将反应混合物在0℃搅拌20分钟，然后将其温热至室温。2小时后，反应混合物用1.0M HCl酸化至pH 3。水性混合物用乙酸乙酯萃取，合并的萃取物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶+
柱色谱来纯化，得到标题化合物(440mg)。LCMS m/z＝218.3[M+H]。
柱色谱来纯化，得到标题化合物(440mg)。LCMS m/z＝218.3[M+H]。
[0472] 步骤G：2-(7-(3-氰基-5-(三氟甲氧基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0473] 将2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(100mg,0.386mmol)和3-(羟基甲基)-5-(三氟甲氧基)苯甲腈(84mg,0.386mmol)在THF(3.0ml)中溶解并冷却至0℃。加入三苯基膦(202mg,0.771mmol)和偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD)(0.15ml,0.771mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1小时。再加入DIAD(0.15ml,0.771mmol)和三苯基膦(202mg,0.771mmol)并将反 应混合物搅拌1小时。反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到50.8mg不纯的2-(7-(3-氰基-5-(三氟甲氧基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯。将物质在二噁烷(1.3ml)中溶解并加入1.0M LiOH水溶液(0.33ml,0.33mmol)。反应通过HPLC来监测直到判断反应完全，然后用1.0M HCl酸化至pH 2。水性混合物用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物先后通过硅胶柱色谱和HPLC来纯+ 1化，得到标题化合物(1.1mg)。LCMS m/z＝431.2[M+H]。H NMR(400MHz,CD3OD)δppm
2.11-2.20(m,1H),2.50(dd,J＝ 15.8,8.0Hz,1H),2.66-2.84(m,4H),3.51-3.60(m,1H),5.
18(s,2H),6.78(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.95(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.9Hz,1H),7.64(s,1H),7.73(s,1H),7.84(s,1H)。
2.11-2.20(m,1H),2.50(dd,J＝ 15.8,8.0Hz,1H),2.66-2.84(m,4H),3.51-3.60(m,1H),5.
18(s,2H),6.78(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.95(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.9Hz,1H),7.64(s,1H),7.73(s,1H),7.84(s,1H)。
[0474] 实施例1.2：2-(7-(3,5-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物10)的制备
[0475] 步骤A：2-(7-(3,5-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0476] 将2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(61mg,0.235mmol)在DMF(1.0ml)中溶解并加入碳酸铯(77mg,0.235mmol)和1-(溴甲基)-3,5-二(三氟甲基)苯(72mg,0.235mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时，然后经硅藻土垫过滤。滤液用水稀释并用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物(28.6mg)。LCMS m/z＝+486.4[M+H]。
[0477] 步骤B：2-(7-(3,5-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0478] 将2-(7-(3,5-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(28.6mg,0.059mmol)在二噁烷(1.0ml)中溶解并加入1.0M LiOH水溶液(0.166ml,0.166mmol)。将溶液在室温搅拌3小时，然后其用1.0M HCl酸化至pH 3并用乙酸乙酯萃取两次。合并的萃取物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到标题化合物(23mg)。+ 1
LCMS m/z ＝ 458.3[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.12-2.24(m,1H),2.61(dd,J＝ 17.0,10.7Hz,1H),2.73-2.89(m,4H),3.53-3.63(m,1H),5.19(s,2H),6.86(dd,J ＝
8.6,2.5Hz,1H),7.0(d,J＝2.5Hz,1H),7.24(d,J＝8.8Hz,1H),7.82(s,1H),7.94(s,2H),8.33(s,1H)。
LCMS m/z ＝ 458.3[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.12-2.24(m,1H),2.61(dd,J＝ 17.0,10.7Hz,1H),2.73-2.89(m,4H),3.53-3.63(m,1H),5.19(s,2H),6.86(dd,J ＝
8.6,2.5Hz,1H),7.0(d,J＝2.5Hz,1H),7.24(d,J＝8.8Hz,1H),7.82(s,1H),7.94(s,2H),8.33(s,1H)。
[0479] 实施例1.3：2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲 哚-3-基)乙酸(化合物5)的制备
[0480] 步骤A：5-(羟基甲基)-2-异丙氧基苯甲腈的制备
[0481] 由3-氰基-4-异丙氧基苯甲酸以与实施例1.1步骤E和F中所述相似的方式得1
到标题化合物。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.40(d,J＝6.2Hz,6H),1.72(t,J＝5.6Hz,
1H),4.6-4.69(m,3H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.50(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),7.55(d,J ＝
2.3Hz,1H)。
到标题化合物。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.40(d,J＝6.2Hz,6H),1.72(t,J＝5.6Hz,
1H),4.6-4.69(m,3H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.50(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),7.55(d,J ＝
2.3Hz,1H)。
[0482] 步骤B：5-(氯甲基)-2-异丙氧基苯甲腈的制备
[0483] 将5-(羟基甲基)-2-异丙氧基苯甲腈(5.96g,31.2mmol)在甲苯(90ml)中溶解并加入亚硫酰氯(13.65ml,187mmol)。将反应混合物温热至75℃并搅拌20分钟。反应混合物用己烷稀释并用水和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。己烷溶液经硫酸钠干燥，
1
过滤并减压浓缩，得到标题化合物(5.6g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.41(d,J＝
6.1Hz,6H),4.52(s,2H),4.66(七重峰,J＝6.1Hz,1H),6.95(d,J＝8.6Hz,1H),7.51(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.57(d,J＝2.3Hz,1H)。
1
过滤并减压浓缩，得到标题化合物(5.6g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.41(d,J＝
6.1Hz,6H),4.52(s,2H),4.66(七重峰,J＝6.1Hz,1H),6.95(d,J＝8.6Hz,1H),7.51(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.57(d,J＝2.3Hz,1H)。
[0484] 步骤C：2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0485] 将2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(1.237g,4.77mmol)在DMF(12ml)中溶解并加入碳酸铯(1.554g,4.77mmol)。将反应混合物在室温搅拌10分钟并加入5-(氯甲基)-2-异丙氧基苯甲腈(1.0g,4.77mmol)。将反应混合物在40℃搅拌2小时，然后将其冷却至室温。异质混合物经硅藻土过滤并将滤液减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物(1.32g)。LCMS m/z＝+ 1433.5[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.29(t,J＝7.2Hz,3H),1.40(d,J＝6.1Hz,6H),2.05-2.16(m,1H),2.50(dd,J＝ 16.7,11.1Hz,1H),2.69-2.88(m,4H),3.50-3.59(m,1H),4.16-4.26(m,2H),4.65(七重峰,J＝6.1Hz,1H),5.00(s,2H),6.80(dd,J＝8.7,2.5Hz,
1H),6.94-6.97(m,2H),7.20(d,J＝8.8Hz,1H),7.58(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),7.64(d,J＝
2.0Hz,1H),8.45(s,1H)。
1H),6.94-6.97(m,2H),7.20(d,J＝8.8Hz,1H),7.58(dd,J＝8.7,2.3Hz,1H),7.64(d,J＝
2.0Hz,1H),8.45(s,1H)。
[0486] 步骤D：2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0487] 将2-(7-(3-氰基-4-异丙氧基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(1.32g,3.05mmol)在二噁烷(34ml)中溶解并加入1.0M LiOH水溶液(9.16ml,9.16mmol)。将反应混合物在室温搅拌6小时，然后温热至35℃并再搅拌一小时。
冷却至室温后，反应混合物用1.0M HCl酸化至pH 3并在水 和乙酸乙酯之间分配。取出有机物且水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的萃取物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化+ 1
合物(1.23g)。LCMS m/z＝405.6[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.32(d,J＝5.
9Hz,6H),2.03-2.13(m,1H),2.35(dd,J＝ 15.9,9.0Hz,1H),2.58-2.77(m,4H),3.41-3.51(m,1H),4.79(七重峰,J＝5.9Hz,1H),5.01(s,2H),6.69(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.91(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.19(d,J ＝ 8.6Hz,1H),7.28(d,J ＝ 8.8Hz,1H),7.70(dd,J ＝
8.8,2.3Hz,1H),7.76(d,J＝2.1Hz,1H),10.45(s,1H),12.1(宽单峰,1H)。
冷却至室温后，反应混合物用1.0M HCl酸化至pH 3并在水 和乙酸乙酯之间分配。取出有机物且水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的萃取物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化+ 1
合物(1.23g)。LCMS m/z＝405.6[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.32(d,J＝5.
9Hz,6H),2.03-2.13(m,1H),2.35(dd,J＝ 15.9,9.0Hz,1H),2.58-2.77(m,4H),3.41-3.51(m,1H),4.79(七重峰,J＝5.9Hz,1H),5.01(s,2H),6.69(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.91(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.19(d,J ＝ 8.6Hz,1H),7.28(d,J ＝ 8.8Hz,1H),7.70(dd,J ＝
8.8,2.3Hz,1H),7.76(d,J＝2.1Hz,1H),10.45(s,1H),12.1(宽单峰,1H)。
[0488] 通过手性HPLC进行拆分
[0489] 柱：正相制备性ChiralCel OD,50×500mm ID,20μm粒度
[0490] 洗脱剂：75％己烷/25％异丙醇(含有0.05％三氟乙酸)
[0491] 梯度：恒组成
[0492] 流速：60ml/min
[0493] 检测器：254nm
[0494] 保留时间：第1种对映异构体：33分钟；第2种对映异构体：40分钟。
[0495] 实施例1.4：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物12)的制备
[0496] 步骤A：4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的制备
[0497] 向4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸(10.37g,46.2mmol)在甲醇(100ml)中的溶液中加入浓硫酸(0.51ml,9.24mmol)。将混合物加热回流过夜。将混合物冷却至室温并减压浓缩，得到固体。将固体过滤并用水洗涤。然后将固体与饱和碳酸氢钠水溶液一起搅拌，除去任意残留的硫酸，过滤并真空干燥，得到标题化合物，其为白色固体(10.18g)。1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.96(s,3H),7.60(d,J ＝ 8.34Hz,1H),8.14(dd,J ＝
8.34,2.02Hz,1H),8.37(d,J＝2.02Hz,1H)。
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.96(s,3H),7.60(d,J ＝ 8.34Hz,1H),8.14(dd,J ＝
8.34,2.02Hz,1H),8.37(d,J＝2.02Hz,1H)。
[0498] 步骤B：4-环戊基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的制备
[0499] 向氯化锌(II)(0.5M在四氢呋喃中的溶液,88.0ml,44.0mmol)中加入环戊基氯化镁(2M在乙醚中的溶液,20.5ml,41.1mmol)。将所得混悬液在室温搅拌1小时。在室温向上述混悬液中加入4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(7.00g,29.3mmol)和二(三叔丁基膦)钯(1.35g,2.64mmol)。将混合物加热回流2小时。将混合物冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭并过滤。滤液用乙酸乙酯萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩并通+过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，其为油状物(7.64g)。LCMS m/z＝273.2[M+H]。
1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.57-1.66(m,2H),1.68-1.82(m,2H),1.82-1.94(m,2H),
2.04-2.21(m,2H),3.33-3.49(m,1H),3.93(s,3H),7.54(d,J ＝ 8.21Hz,1H),8.13(dd,J ＝
8.34,1.77Hz,1H),8.27(s,1H)。
1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.57-1.66(m,2H),1.68-1.82(m,2H),1.82-1.94(m,2H),
2.04-2.21(m,2H),3.33-3.49(m,1H),3.93(s,3H),7.54(d,J ＝ 8.21Hz,1H),8.13(dd,J ＝
8.34,1.77Hz,1H),8.27(s,1H)。
[0500] 步骤C：(4-环戊基-3-(三氟甲基)苯基)甲醇的制备
[0501] 向4-环戊基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(8.16g,30.0mmol)在1,4-二噁烷(200ml)中的溶液中加入硼氢化锂溶液(2M在四氢呋喃中,30.0ml,59.9mmol)。将混合物加热回流2.5小时。将混合物冷却至室温并小心用1NHCl水溶液淬灭至pH 5。分离有机层且水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩并通过1
硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，其为无色油状物(1.21g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.56-1.63(m,2H),1.66-1.77(m,2H),1.81-1.91(m,2H),2.03-2.15(m,2H),3.3
7(五 重 峰,J ＝ 8.00Hz,1H),4.71(d,J＝ 4.29Hz,2H),7.45-7.47(m,1H),7.49(d,J＝
1.14Hz,1H),7.60(s,1H)。
硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，其为无色油状物(1.21g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.56-1.63(m,2H),1.66-1.77(m,2H),1.81-1.91(m,2H),2.03-2.15(m,2H),3.3
7(五 重 峰,J ＝ 8.00Hz,1H),4.71(d,J＝ 4.29Hz,2H),7.45-7.47(m,1H),7.49(d,J＝
1.14Hz,1H),7.60(s,1H)。
[0502] 步骤D：4-(氯甲基)-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯的制备
[0503] 向(4-环戊基-3-(三氟甲基)苯基)甲醇(1.21g,4.95mmol)中加入亚硫酰氯(5.5ml,74.2mmol)。将混合物在50℃加热2小时，然后将其冷却至室温并在室温搅拌过夜。将混合物倒入冰中，搅拌5分钟，然后其用二氯甲烷萃取。有机萃取物用饱和碳酸氢1
钠水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到标题化合物，其为油状物(1.16g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.55-1.63(m,2H),1.69-1.77(m,2H),1.82-1.90(m,2H),2.05-2.
13(m,2H),3.37(五重峰,J＝8.59Hz,1H),4.58(s,2H),7.46(d,J＝8.00Hz,1H),7.52(d,J＝8.00Hz,1H),7.61(d,J＝1.52Hz,1H)。
钠水溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到标题化合物，其为油状物(1.16g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.55-1.63(m,2H),1.69-1.77(m,2H),1.82-1.90(m,2H),2.05-2.
13(m,2H),3.37(五重峰,J＝8.59Hz,1H),4.58(s,2H),7.46(d,J＝8.00Hz,1H),7.52(d,J＝8.00Hz,1H),7.61(d,J＝1.52Hz,1H)。
[0504] 步骤E：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0505] 向2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(50.0mg,0.193mmol)和4-(氯甲基)-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯(152.0mg,0.578mmol)在DMF(3ml)中的溶液中加入碳酸铯(75.0mg,0.231mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，经硅藻土过滤且减压浓缩。残留物通过HPLC来纯化，得到标题化合物，其为浅粉红色油状物+(38.7mg)。LCMS m/z＝486.5[M+H]。
[0506] 步骤F：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0507] 向2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(38.7mg,0.080mmol)在甲醇(1.5ml)、四氢呋喃(0.5ml)和水(0.5ml) 的混合溶剂中的溶液中加入LiOH水合物(11.7mg,0.279mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后混合物用1N HCl水溶液酸化至pH 4并用乙酸乙酯萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩并真空干燥。泡沫状物用水研磨，得到固体。将固体过滤，得到标题化合+ 1物，其为浅粉红色固体(25.7mg)。LCMS m/z＝458.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.56-1.70(m,4H),1.80-1.87(m,2H),1.95-2.11(m,3H),2.34(dd,J＝16.04,8.97Hz,1H),2.59-2.74(m,4H),3.21-3.25(m,1H),3.41-3.49(m,1H),5.11(s,2H),6.70(dd,J ＝ 8.72,2.40Hz,1H),6.92(d,J ＝ 2.27Hz,1H),7.19(d,J ＝ 8.72Hz,1H),7.61(d,J ＝
8.00Hz,1H),7.68(d,J＝8.00Hz,1H),7.70(s,1H),10.45(s,1H),12.18(宽单峰,1H)。
8.00Hz,1H),7.68(d,J＝8.00Hz,1H),7.70(s,1H),10.45(s,1H),12.18(宽单峰,1H)。
[0508] 通过手性HPLC进行拆分
[0509] 柱：正相制备性ChiralCel OD,50×500mm ID,20μm粒度
[0510] 洗脱剂：IPA(含有0.05％TFA)/己烷(含有0.05％TFA)(8/92)
[0511] 梯度：恒组成
[0512] 流速：60ml/min
[0513] 检测器：220nm
[0514] 保留时间：第1种对映异构体：38.9分钟；第2种对映异构体：48.4分钟。
[0515] 实施例1.5：2-(7-((5-异丙氧基吡嗪-2-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物11)的制备
[0516] 步骤A：2-异丙氧基-5-甲基吡嗪的制备
[0517] 向2-溴-5-甲基吡嗪(3g,17.34mmol)在丙-2-醇(14ml)中的溶液中加入丙-2-醇钠(3.56g,43.3mmol)并以微波辐射在115℃加热1.1小时。将有机溶剂蒸发，然后将水加到残留物中。混合物用二氯甲烷(2×75ml)萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，其为棕色油状物(1.0g)。LCMS m/+ 1z＝153.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.27(d,J＝6.19Hz,6H),2.39(s,3H),5.1
0-5.20(m,1H),7.84(s,1H),7.99(s,1H)。
0-5.20(m,1H),7.84(s,1H),7.99(s,1H)。
[0518] 步骤B：2-(溴甲基)-5-异丙氧基吡嗪的制备
[0519] 将2-异丙氧基-5-甲基吡嗪(0.250g,1.65mmol)、NBS(0.293g,1.65mmol)和AIBN(0.270g,1.65mmol)在甲苯(5ml)中的混合物回流1小时，然后加入1.0当量的NBS。将反应混合物加热回流20分钟，然后将其冷却至室温。过滤除去固体并将滤液真空浓缩。
残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合 物，其为棕色油状物(35mg)。
残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合 物，其为棕色油状物(35mg)。
[0520] 步骤C：2-(7-((5-异丙氧基吡嗪-2-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0521] 将2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(0.035g,0.135mmol)和碳酸铯(0.048g,0.148mmol)在DMF(0.5ml)中溶解并在室温搅拌5分钟。在0℃向该混合物中加入2-(溴甲基)-5-异丙氧基吡嗪(0.034g,0.148mmol)在DMF(0.20ml)中的溶液并在室温搅拌60小时。过滤除去固体。滤液通过HPLC来纯化，得到
2-(7-((5-异丙氧基吡嗪-2-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(11mg)。向酯在二噁烷(288μL)中的溶液中加入LiOH水溶液(1N,72μL)。将混合物在室温搅拌16小时，然后再加入LiOH水溶液(1N,200μL)。继续搅拌1小时。向反应混合物中加入水(1.5ml)且反应混合物用1N HCl酸化至pH 3。混合物通过HPLC来纯化，得到+ 1
标题化合物，其为黄色固体(7mg)。LCMS m/z＝382.4[M+H]。H NMR(500MHz,CDCl3)δppm
1.32(d,J＝ 6.31Hz,6H),1.95-2.18(m,1H),2.28-2.41(m,1H),2.56-2.79(m,4H),3.36-3.
56(m,1H),5.09(s,2H),5.15-5.33(m,1H),6.71(d,J＝ 8.83Hz,1H),6.94(s,1H),7.20(d,J＝8.83Hz,1H),8.20(s,1H),8.30(s,1H),10.37(s,1H)。
2-(7-((5-异丙氧基吡嗪-2-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(11mg)。向酯在二噁烷(288μL)中的溶液中加入LiOH水溶液(1N,72μL)。将混合物在室温搅拌16小时，然后再加入LiOH水溶液(1N,200μL)。继续搅拌1小时。向反应混合物中加入水(1.5ml)且反应混合物用1N HCl酸化至pH 3。混合物通过HPLC来纯化，得到+ 1
标题化合物，其为黄色固体(7mg)。LCMS m/z＝382.4[M+H]。H NMR(500MHz,CDCl3)δppm
1.32(d,J＝ 6.31Hz,6H),1.95-2.18(m,1H),2.28-2.41(m,1H),2.56-2.79(m,4H),3.36-3.
56(m,1H),5.09(s,2H),5.15-5.33(m,1H),6.71(d,J＝ 8.83Hz,1H),6.94(s,1H),7.20(d,J＝8.83Hz,1H),8.20(s,1H),8.30(s,1H),10.37(s,1H)。
[0522] 实施例1.6：2-(7-(3-氰基-4-(三氟甲氧基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物7)的制备
[0523] 步骤A：3-溴-4-(三氟甲氧基)苯甲酸的制备
[0524] 将4-(三氟甲氧基)苯甲酸(2g,9.70mmol)和三氯化铁(III)(1.574g,9.70mmol)在硝基甲烷(20ml)中混悬。在0℃向该混合物中加入溴(0.497ml,9.70mmol)。将溶液以微波辐射在110℃加热2小时。将反应混合物加到冷水(100ml)中并用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。有机相用硫代硫酸钠五水合物水溶液和盐水洗涤。将有机层浓缩且残+留物通过HPLC来纯化，得到标题化合物，其为白色固体(1.5g)。LCMS m/z＝287.0[M+H]。
1
H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.67(d,1H),8.06(d,1H),8.29(s,1H),13.47(s,1H)。
1
H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.67(d,1H),8.06(d,1H),8.29(s,1H),13.47(s,1H)。
[0525] 步骤B：3-氰基-4-(三氟甲氧基)苯甲酸的制备
[0526] 将3-溴-4-(三氟甲氧基)苯甲酸(1.4g,4.91mmol)和氰基铜(0.572g,6.39mmol)在N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(14ml)中混合。将混合物在200℃微波加热2小时。反应混合物用二氯甲烷(150ml)稀释。加入硅藻土并将混合物剧烈搅拌10分钟。过滤除去固体。有机层用水(125ml)洗涤并浓缩。残留物通 过HPLC来纯化，得到标题化合物，其为灰白色+
固体(0.979g)。LCMS m/z＝232.3[M+H]。
固体(0.979g)。LCMS m/z＝232.3[M+H]。
[0527] 步骤C：5-(羟基甲基)-2-(三氟甲氧基)苯甲腈的制备
[0528] 由3-氰基-4-(三氟甲氧基)苯甲酸以与实施例1.3步骤A中所述相似的方式得+ 1到标题化合物，其为澄清油状物。LCMS m/z＝218.2[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm
4.81(s,2H),7.40-7.44(m,1H),7.67-7.71(m,2H),7.78(s,1H)。
4.81(s,2H),7.40-7.44(m,1H),7.67-7.71(m,2H),7.78(s,1H)。
[0529] 步骤D：5-(氯甲基)-2-(三氟甲氧基)苯甲腈的制备
[0530] 将5-(羟基甲基)-2-(三氟甲氧基)苯甲腈(0.150g,0.691mmol)在甲苯(2ml)中吸收并加入亚硫酰氯(0.303ml,4.14mmol)。将混合物在75℃加热15分钟。加入水且混合物用己烷(2×75ml)萃取。有机物用NaHCO3水溶液处理。分离有机层，经硫酸镁干+ 1燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，其为无色油状物(120mg)。LCMS m/z＝236.2[M+H]。H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 1.98(s,1H),4.52(s,2H),7.32-7.34(m,1H),7.59-7.62(m,1H),
7.68(s,1H)。
7.68(s,1H)。
[0531] 步骤E：2-(7-(3-氰基-4-(三氟甲氧基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0532] 将2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(0.100g,0.386mmol)和碳酸铯(0.138g,0.424mmol)在DMF(1.0ml)中溶解，在室温搅拌10分钟，接着在0℃加入5-(氯甲基)-2-(三氟甲氧基)苯甲腈(0.100g,0.424mmol)在DMF(0.300ml)中的溶液。将该混合物在室温搅拌3小时。反应混合物用水淬灭并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有机相用盐水洗涤并浓缩。将残留物在二噁烷(4ml)中吸收，然后加入1N LiOH水溶液(1.3ml)。将混合物在室温搅拌2.5小时，然后其用水淬灭并用3N HCl水溶液酸化至pH 3。混合物通过HPLC来纯化，得到标题化合物(0.040g)。LCMS m/z＝+ 1
431.2[M+H]。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.00-2.20(m,1H),2.01-2.21(m,1H),2.23-2.43(m,1H),2.55-2.83(m,4H),3.33-3.57(m,1H),5.16(s,2H),6.73(dd,J＝ 8.83,2.52Hz,
1H),6.94(s,1H),7.21(d,J＝8.83Hz,1H),7.69(dd,J＝8.67,1.42Hz,1H),7.94(dd,J＝8.67,2.05Hz,1H),8.09(s,1H),10.40(s,1H)。
431.2[M+H]。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.00-2.20(m,1H),2.01-2.21(m,1H),2.23-2.43(m,1H),2.55-2.83(m,4H),3.33-3.57(m,1H),5.16(s,2H),6.73(dd,J＝ 8.83,2.52Hz,
1H),6.94(s,1H),7.21(d,J＝8.83Hz,1H),7.69(dd,J＝8.67,1.42Hz,1H),7.94(dd,J＝8.67,2.05Hz,1H),8.09(s,1H),10.40(s,1H)。
[0533] 实施例1.7：2-(7-(2,4-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物8)的制备
[0534] 步骤A：2-(7-(2,4-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0535] 向2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(0.130g,0.5mmol)和K2CO3(0.069g,0.500mmol)在DMF(1ml)中的混合物中加入1-(溴甲基)-2,4-二(三氟甲基)苯(0.154g,0.500mmol)。将混合物在70℃加热过夜，在EtOAc中吸收且用水(三次)和盐水洗涤。有机物经MgSO4干燥并浓缩。残留物通过硅胶柱色谱+来纯化，得到标题化合物，其为橙色固体(0.195g)。LCMS m/z＝486.3[M+H]。
[0536] 步骤B：2-(7-(2,4-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0537] 向2-(7-(2,4-二(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(0.191g,0.393mmol)在二噁烷(1.312ml)和水(0.656ml)中的溶液中加入NaOH(0.826ml,0.826mmol)。将混合物加热回流2小时，冷却至室温并用水稀释。用DCM洗涤后，水层用1M HCl酸化并用EtOAc(三次)萃取。将合并的萃取物用盐水洗涤，经MgSO4+ 1干燥并浓缩，得到标题化合物，其为紫红色固体(19.9mg)。LCMS m/z＝458.1[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.03-2.13(m,1H),2.35(dd,J ＝ 15.98,9.03Hz,1H),2.58-2.78(m,4H),3.41-3.52(m,1H),5.31(s,2H),6.72(dd,J ＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.92(d,J ＝
2.40Hz,1H),7.23(d,J＝8.72Hz,1H),7.99-8.19(m,3H),10.52(s,1H),12.19(s,1H)。
2.40Hz,1H),7.23(d,J＝8.72Hz,1H),7.99-8.19(m,3H),10.52(s,1H),12.19(s,1H)。
[0538] 实施例1.8：2-(7-(4-环己基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物2)的制备
[0539] 步骤A：1-氯-4-(氯甲基)-2-(三氟甲基)苯的制备
[0540] 分小份将(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)甲醇(5.1g,24.22mmol)加到亚硫酰氯(20ml,275mmol)中。将反应混合物在50℃搅拌18小时并加热回流23小时。将混合物浓缩1
并在高真空下干燥，得到标题化合物，其为无色液体(5.41g)。 H NMR(400MHz,CDCl3)δppm
4.58(s,2H),7.50-7.51(m,2H),7.71(s,1H)。
并在高真空下干燥，得到标题化合物，其为无色液体(5.41g)。 H NMR(400MHz,CDCl3)δppm
4.58(s,2H),7.50-7.51(m,2H),7.71(s,1H)。
[0541] 步骤B：2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0542] 将2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(222mg,0.856mmol)、1-氯-4-(氯甲基)-2-(三氟甲基)苯(240mg,1.048mmol)和碳酸铯(165mg,0.856mmol)在DMF(5ml)中的混合物在室温搅拌。3天后，再加入碳酸铯(165mg,0.856mmol)。再搅拌2天后，混合物用水和CH2Cl2萃取。有机物经MgSO4干燥，过滤并浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，其为白色固体(258mg)。LCMS + 1m/z＝452.1[M+H]。H NMR(400MHz, CDCl3)δppm 1.29(t,J＝7.2Hz,3H),2.06-2.14(m,
1H),2.47-2.54(m,1H),2.71-2.86(m,4H),3.51-3.57(m,1H),4.17-4.25(m,2H),5.10(s,2H),6.82(dd,J＝8.8,2.5,1H),6.96(d,J＝2.5Hz,1H),7.21(dd,J＝8.8,0.32Hz,1H),7.49-7.52(m,1H),7.58(dd,J＝8.2,2.6Hz,1H),7.80(d,J＝1.92Hz,1H),8.48(s,1H)。
1H),2.47-2.54(m,1H),2.71-2.86(m,4H),3.51-3.57(m,1H),4.17-4.25(m,2H),5.10(s,2H),6.82(dd,J＝8.8,2.5,1H),6.96(d,J＝2.5Hz,1H),7.21(dd,J＝8.8,0.32Hz,1H),7.49-7.52(m,1H),7.58(dd,J＝8.2,2.6Hz,1H),7.80(d,J＝1.92Hz,1H),8.48(s,1H)。
[0543] 步骤C：2-(7-(4-环己基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0544] 将2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(50mg,0.111mmol)、0.5M环己基溴化锌(II)(0.5M在THF中,3ml,1.5mmol)和二(三叔丁基膦)钯(3mg,5.87μmol)的混合物回流搅拌18小时。将混合物冷却至室温，然后加入水(1ml)、MeOH(1ml)和LiOH水合物(70mg,1.668mmol)。将混合物在室温搅拌2小时。混合物通过HPLC来纯化。含有产物的馏分用1M NaHCO3碱化并部分浓缩。残留物用0.5M枸橼酸和CH2Cl2萃取。有机物经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，其为褐+ 1色粘性固体(14.4mg)。LCMS m/z＝472.2[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.38-1.5
0(m,4H),1.76-1.85(m,6H),2.11-2.17(m,1H),2.58-2.65(m,1H),2.75-2.93(m,5H),3.56-
3.60(m,1H),5.07(s,2H),6.84(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.00(d,J＝2.4Hz,1H),7.21(d,J＝ 8.8Hz,1H),7.46(d,J ＝ 8.1Hz,1H),7.59(d,J ＝ 8.1Hz,1H),7.70(d,J ＝
1.2Hz,1H),8.27(s,1H)。
0(m,4H),1.76-1.85(m,6H),2.11-2.17(m,1H),2.58-2.65(m,1H),2.75-2.93(m,5H),3.56-
3.60(m,1H),5.07(s,2H),6.84(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.00(d,J＝2.4Hz,1H),7.21(d,J＝ 8.8Hz,1H),7.46(d,J ＝ 8.1Hz,1H),7.59(d,J ＝ 8.1Hz,1H),7.70(d,J ＝
1.2Hz,1H),8.27(s,1H)。
[0545] 实施例1.9：2-(7-(4-(吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物13)的制备
[0546] 步骤A：2-(7-(4-(吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0547] 将2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(50.9mg,0.113mmol)、吡咯烷(0.047ml,0.563mmol)、二乙酰氧基钯(1.264mg,5.63μmol)、联苯-2-基-二叔丁基膦(3.36mg,11.0μmol)和2-甲基丙-2-醇钠(27.1mg,0.282mmol)在二噁烷(3ml)中的混合物以微波辐射在120℃加热2小时。混合物通过HPLC来纯化。含有产物的馏分用1M NaHCO3碱化并浓缩。残留物用0.5M枸橼酸和CH2Cl2萃取。有机物经MgSO4干燥，过滤且浓缩，得到标题化合物，其为白色固体(17.8mg)。
+
LCMS m/z＝487.4[M+H]。
+
LCMS m/z＝487.4[M+H]。
[0548] 步骤B：2-(7-(4-(吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0549] 向2-(7-(4-(吡咯烷-1-基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b] 吲哚-3-基)乙酸乙酯(17.8mg,0.037mmol)在5ml(THF/水/MeOH 3:1:1)中的溶液中加入LiOH水合物(7.68mg,0.183mmol)。在室温搅拌2小时后，将混合物部分浓缩且残留物用0.5M枸橼酸和CH2Cl2萃取。有机物经MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到标题化合+ 1物，其为褐色粘性固体(16.3mg)。LCMS m/z＝459.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm
1.83-1.95(m,4H),2.09-2.16(m,1H),2.57-2.64(m,1H),2.73-2.90(m,4H),3.27-3.35(m,4H),3.53-3.59(m,1H),4.99(s,2H),6.82(dd,J＝ 8.8,2.4Hz,1H),6.96-7.01(m,2H),7.19(d,J＝8.7Hz,1H),7.45(dd,J＝8.6Hz,2.0Hz,1H),7.66(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(s,1H)。
1.83-1.95(m,4H),2.09-2.16(m,1H),2.57-2.64(m,1H),2.73-2.90(m,4H),3.27-3.35(m,4H),3.53-3.59(m,1H),4.99(s,2H),6.82(dd,J＝ 8.8,2.4Hz,1H),6.96-7.01(m,2H),7.19(d,J＝8.7Hz,1H),7.45(dd,J＝8.6Hz,2.0Hz,1H),7.66(d,J＝2.0Hz,1H),8.27(s,1H)。
[0550] 实施例1.10：2-(7-(4-异丁基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物14)的制备
[0551] 将2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(200mg,0.443mmol)在THF(7ml)中溶解并加入异丁基溴化锌(II)(2.66ml,1.328mmol)和二(三叔丁基膦)钯(0)(0.011g,0.022mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时并温热至50℃。搅拌24小时后，加入异丁基溴化锌(II)(4ml)并将混合物加热至90℃。将反应混合物冷却至室温且加入1.0MLiOH(5ml)和二噁烷(5ml)。将反应混合物在室温搅拌24小时，然后用1M HCl酸化至pH 3。水性混合物用EtOAc萃取三次。合并的萃取物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到+ 1
标题化合物(33mg)。LCMS m/z＝446.7[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.89(d,J＝ 6.6Hz,6H),1.87-1.98(m,1H),2.03-2.13(m,1H),2.35(dd,J ＝ 15.9,9.0Hz,1H),2.6
0-2.76(m,6H),3.42-3.50(m,1H),5.12(s,2H),6.71(dd,J ＝ 8.6,2.4Hz,1H),6.93(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.20(d,J ＝ 8.7Hz,1H),7.47(d,J ＝ 8.0Hz,1H),7.67(d,J ＝
8.2Hz,1H),7.75(d,J＝1.4Hz,1H),10.47(宽单峰,1H)。
标题化合物(33mg)。LCMS m/z＝446.7[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.89(d,J＝ 6.6Hz,6H),1.87-1.98(m,1H),2.03-2.13(m,1H),2.35(dd,J ＝ 15.9,9.0Hz,1H),2.6
0-2.76(m,6H),3.42-3.50(m,1H),5.12(s,2H),6.71(dd,J ＝ 8.6,2.4Hz,1H),6.93(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.20(d,J ＝ 8.7Hz,1H),7.47(d,J ＝ 8.0Hz,1H),7.67(d,J ＝
8.2Hz,1H),7.75(d,J＝1.4Hz,1H),10.47(宽单峰,1H)。
[0552] 实施例1.11：2-(7-(4-新戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物15)的制备
[0553] 将2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(200mg,0.443mmol)在THF(7.0ml)中溶解并加入新戊基碘化锌(II)(2.66ml浓度为0.5M的THF溶液)和二(三叔丁基膦)钯(0)(0.011g,0.022mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时，然后温热至50℃。搅拌24小时后，加入新戊基碘化锌(II)(5.0ml浓度为0.5M的THF溶液)并将反应混合物加热至90℃。将反应容器冷却至室温，然后加入1.0M LiOH(5ml)和二 噁烷(5.0ml)。搅拌24小时后，反应混合物用1.0M HCl酸化至pH 3并用EtOAc萃取三次。合并的萃取物经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过HPLC来纯化。经纯化的馏分用碳酸氢钠中和，然后用1.0M枸橼酸酸化至pH 5。水性混合物用EtOAc萃取且有机层用水洗涤两次。EtOAc层经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到标题化合物+ 1(12.3mg)。LCMS m/z＝460.6[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 0.96(s,9H),2.08-2.1
9(m,1H),2.61(dd,J＝ 17.0,10.9Hz,1H),2.73-2.90(m,6H),3.54-3.63(m,1H),5.09(s,2H),6.85(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.0(d,J＝2.5Hz,1H),7.22(d,J＝9.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(d,J＝8.1Hz,1H),7.74(d,J＝1.1Hz,1H),8.29(宽单峰,1H)。
9(m,1H),2.61(dd,J＝ 17.0,10.9Hz,1H),2.73-2.90(m,6H),3.54-3.63(m,1H),5.09(s,2H),6.85(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),7.0(d,J＝2.5Hz,1H),7.22(d,J＝9.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.0Hz,1H),7.55(d,J＝8.1Hz,1H),7.74(d,J＝1.1Hz,1H),8.29(宽单峰,1H)。
[0554] 实施例1.12：2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物16)的制备
[0555] 标题化合物由实施例1.11以副产物形式分离。LCMS m/z＝424.2[M+H]+。1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.09-2.19(m,1H),2.61(dd,J ＝ 17.3,11.0Hz,1H),2.72-2.89(m,4H),3.53-3.63(m,1H),5.10(s,2H),6.83(dd,J ＝ 8.7,2.4Hz,1H),6.97(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.22(d,J ＝ 8.6Hz,1H),7.50(d,J ＝ 8.2Hz,1H),7.57(dd,J ＝
8.2,1.6Hz,1H),7.80(d,J＝1.8Hz,1H),8.33(宽单峰,1H)。
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 2.09-2.19(m,1H),2.61(dd,J ＝ 17.3,11.0Hz,1H),2.72-2.89(m,4H),3.53-3.63(m,1H),5.10(s,2H),6.83(dd,J ＝ 8.7,2.4Hz,1H),6.97(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.22(d,J ＝ 8.6Hz,1H),7.50(d,J ＝ 8.2Hz,1H),7.57(dd,J ＝
8.2,1.6Hz,1H),7.80(d,J＝1.8Hz,1H),8.33(宽单峰,1H)。
[0556] 实施例1.13：2-(7-(3-氰基-4-环己基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物17)的制备
[0557] 步骤A：3-氰基-4-羟基苯甲酸甲酯的制备
[0558] 向3- 溴 -4- 羟 基 苯 甲 酸 甲 酯(1.78g,7.70mmol) 和 氰 化 亚 铜 (I)(0.897g,10.02mmol)的混合物中加入NMP(10ml)。将混合物以微波辐射加热至200℃且保持2小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用1N HCl水溶液淬灭。加入盐水后，分离有机层且水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩并通过硅胶柱色谱来纯化。将合并的馏分减压浓缩并用冷水研磨，得到标题化合物，其为灰白色固体(0.63g)。LCMS m/+ 1
z＝178.2[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.92(s,3H),6.55(宽单峰,1H),7.04(d,J＝8.72Hz,1H),8.15(dd,J＝8.72,2.15Hz,1H),8.23(d,J＝1.89Hz,1H)。
z＝178.2[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.92(s,3H),6.55(宽单峰,1H),7.04(d,J＝8.72Hz,1H),8.15(dd,J＝8.72,2.15Hz,1H),8.23(d,J＝1.89Hz,1H)。
[0559] 步骤B：3-氰基-4-(三氟甲基磺酰基氧基)苯甲酸甲酯的制备
[0560] 在0℃向3-氰基-4-羟基苯甲酸甲酯(1.24g,7.0mmol)在二氯甲烷(35ml)中的混悬液中加入三氟甲磺酸酐(1.8ml,10.7mmol)、二异丙基乙基胺(1.8ml,10.3mmol)和N,N-二甲基氨基吡啶(0.21g,1.75mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。反应混合物用1N HCl水溶液淬灭。分离有机层且水层用二氯甲烷萃取。 合并的有机层经无水硫酸镁干燥，减压浓缩并通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，其为棕色油状物(1.44g)。1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.99(s,3H),7.59(d,J ＝ 8.84Hz,1H),8.37(dd,J ＝
8.84,2.15Hz,1H),8.44(d,J＝2.02Hz,1H)。
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.99(s,3H),7.59(d,J ＝ 8.84Hz,1H),8.37(dd,J ＝
8.84,2.15Hz,1H),8.44(d,J＝2.02Hz,1H)。
[0561] 步骤C：3-氰基-4-环己基苯甲酸甲酯的制备
[0562] 在室温向3-氰基-4-(三氟甲基磺酰基氧基)苯甲酸甲酯(0.7g,2.26mmol)在四氢呋喃(30ml)中的溶液中加入0.5M环己基溴化锌(II)在四氢呋喃中的溶液(13.6ml,6.8mmol)和二(三叔丁基膦)钯(0.058g,0.113mmol)。将混合物加热回流2小时。将混合物冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭并经硅藻土过滤。滤液用乙酸乙酯萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩并通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合1
物，其为油状物(0.24g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.24-1.33(m,1H),1.42-1.53(m,4H),1.77-1.84(m,1H),1.86-1.95(m,4H),2.99-3.08(m,1H),3.93(s,3H),7.45(d,J ＝
8.34Hz,1H),8.17(dd,J＝8.15,1.71Hz,1H),8.27(d,J＝1.52Hz,1H)。
物，其为油状物(0.24g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.24-1.33(m,1H),1.42-1.53(m,4H),1.77-1.84(m,1H),1.86-1.95(m,4H),2.99-3.08(m,1H),3.93(s,3H),7.45(d,J ＝
8.34Hz,1H),8.17(dd,J＝8.15,1.71Hz,1H),8.27(d,J＝1.52Hz,1H)。
[0563] 步骤D：2-环己基-5-(羟基甲基)苯甲腈的制备
[0564] 向3-氰基-4-环己基苯甲酸甲酯(299.0mg,1.229mmol)在1,4-二噁烷(30ml)中的溶液中加入2M硼氢化锂在四氢呋喃中的溶液(1.23ml,2.46mmol)。将混合物加热回流2.5小时。将混合物冷却至0℃并用1N HCl水溶液缓慢淬灭至pH 5。加入盐水后，混合物用乙酸乙酯萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩并通过硅胶柱色谱来纯化，得到+ 1标题化合物，其为白色固体(190.5mg)。LCMS m/z＝216.5[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.23-1.33(m,1H),1.41-1.52(m,4H),1.76-1.83(m,1H),1.84-1.92(m,4H),2.90-3.05(m,1H),4.70(d,J ＝ 5.81Hz,2H),7.36(d,J ＝ 8.21Hz,1H),7.53(dd,J ＝
8.27,1.71Hz,1H),7.61(d,J＝1.39Hz,1H)。
8.27,1.71Hz,1H),7.61(d,J＝1.39Hz,1H)。
[0565] 步骤E：5-(氯甲基)-2-环己基苯甲腈的制备
[0566] 向2-环己基-5-(羟基甲基)苯甲腈(190.5mg,0.885mmol)中加入亚硫酰氯(5.0ml,68.1mmol)。将混合物在50℃加热2小时，然后在室温保持过夜。将混合物倒入冰中并搅拌5分钟。混合物用二氯甲烷萃取。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，经无水硫酸+钠干燥并减压浓缩，得到标题化合物，其为白色固体(184.9mg)。LCMS m/z＝234.1[M+H]。
1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.23-1.31(m,1H),1.40-1.52(m,4H),1.76-1.82(m,1H),1.
83-1.92(m,4H),2.93-3.03(m,1H),4.55(s,2H),7.37(d,J ＝ 8.08Hz,1H),7.55(dd,J ＝
8.02,1.83Hz, 1H),7.62(d,J＝1.64Hz,1H)。
1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.23-1.31(m,1H),1.40-1.52(m,4H),1.76-1.82(m,1H),1.
83-1.92(m,4H),2.93-3.03(m,1H),4.55(s,2H),7.37(d,J ＝ 8.08Hz,1H),7.55(dd,J ＝
8.02,1.83Hz, 1H),7.62(d,J＝1.64Hz,1H)。
[0567] 步骤F：2-(7-(3-氰基-4-环己基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0568] 向2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(166.0mg,0.641mmol)和5-(氯甲基)-2-环己基苯甲腈(147.0mg,0.629mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(15ml)中的溶液中加入碳酸铯(246.0mg,0.755mmol)。将混合物在室温搅拌41小时。混合物用乙酸乙酯稀释，经硅藻土过滤，减压浓缩并通过硅胶柱色谱来+ 1纯化，得到标题化合物，其为黄色泡沫状物(185.3mg)。LCMS m/z＝457.5[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.18-1.28(m,1H),1.30(t,J ＝ 7.20Hz,3H),1.41-1.52(m,4H),1.79(dd,J ＝ 12.82,1.33Hz,1H),1.85-1.93(m,4H),2.06-2.15(m,1H),2.50(dd,J ＝
16.80,11.24Hz,1H),2.68-2.86(m,4H),2.94-3.04(m,1H),3.49-3.61(m,1H),4.16-4.25(m,2H),5.06(s,2H),6.82(dd,J ＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.97(d,J ＝ 2.53Hz,1H),7.21(d,J＝ 8.72Hz,1H),7.37(d,J ＝ 8.21Hz,1H),7.62(dd,J ＝ 8.15,1.71Hz,1H),7.71(d,J ＝
1.52Hz,1H),8.47(宽单峰,1H)。
16.80,11.24Hz,1H),2.68-2.86(m,4H),2.94-3.04(m,1H),3.49-3.61(m,1H),4.16-4.25(m,2H),5.06(s,2H),6.82(dd,J ＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.97(d,J ＝ 2.53Hz,1H),7.21(d,J＝ 8.72Hz,1H),7.37(d,J ＝ 8.21Hz,1H),7.62(dd,J ＝ 8.15,1.71Hz,1H),7.71(d,J ＝
1.52Hz,1H),8.47(宽单峰,1H)。
[0569] 步骤G：2-(7-(3-氰基-4-环己基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0570] 向2-(7-(3-氰基-4-环己基苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(185.3mg,0.406mmol)在1,4-二噁烷(5.0ml)中的溶液中加入1M LiOH水溶液(1.22ml,1.22mmol)。将混合物在室温搅拌5小时。将混合物减压浓缩。将残留物在乙酸乙酯中溶解，然后用1N HCl水溶液酸化至pH 4。分离有机层，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。浓缩物用二氯甲烷研磨，得到标题化合物，其为粉红色固体(98.9mg)。LCMS + 1m/z ＝ 429.6[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.21-1.31(m,1H),1.33-1.54(m,
4H),1.68-1.74(m,1H),1.74-1.88(m,4H),2.08(dd,J ＝ 4.93,3.54Hz,1H),2.34(dd,J＝ 16.04,8.97Hz,1H),2.61-2.76(m,4H),2.81-2.89(m,1H),3.45( 宽 单
峰,1H),5.07(s,2H),6.70(dd,J＝8.78,2.46Hz,1H),6.91(d,J＝2.40Hz,1H),7.19(d,J＝ 8.72Hz,1H),7.52(d,J ＝ 8.08Hz,1H),7.72(dd,J ＝ 8.15,1.71Hz,1H),7.81(d,J ＝
1.52Hz,1H),10.46(s,1H),12.18(宽单峰,1H)。
4H),1.68-1.74(m,1H),1.74-1.88(m,4H),2.08(dd,J ＝ 4.93,3.54Hz,1H),2.34(dd,J＝ 16.04,8.97Hz,1H),2.61-2.76(m,4H),2.81-2.89(m,1H),3.45( 宽 单
峰,1H),5.07(s,2H),6.70(dd,J＝8.78,2.46Hz,1H),6.91(d,J＝2.40Hz,1H),7.19(d,J＝ 8.72Hz,1H),7.52(d,J ＝ 8.08Hz,1H),7.72(dd,J ＝ 8.15,1.71Hz,1H),7.81(d,J ＝
1.52Hz,1H),10.46(s,1H),12.18(宽单峰,1H)。
[0571] 实施例1.14：2-(7-(4-丙基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物18)的制备
[0572] 步骤A：2-(7-(4-丙基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚 -3-基)乙酸乙酯的制备
[0573] 向2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(213.8mg,0.473mmol)在四氢呋喃(5ml)中的溶液中加入0.5M丙基溴化锌在四氢呋喃中的溶液(4.7ml,2.4mmol)和二(三叔丁基膦)钯(24.7mg,0.047mmol)。将混合物在90℃加热64小时。将混合物冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭并过滤。滤液用乙酸乙酯萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，减压浓缩并通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合+物，其为黄色泡沫状物(69.1mg)。LCMS m/z＝460.5[M+H]。
[0574] 步骤B：2-(7-(4-丙基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0575] 向2-(7-(4-丙基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(75.8mg,0.165mmol)在1,4-二噁烷(2ml)中的溶液中加入1M LiOH水溶液(0.495ml,0.495mmol)。将混合物在室温搅拌5小时。然后混合物用1N HCl水溶液淬灭至pH 5。加入盐水后，混合物用乙酸乙酯萃取，经无水硫酸钠干燥，减压浓缩并通过硅+胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，其为紫色泡沫状物(9.7mg)。LCMS m/z＝432.5[M+H]。
1
H NMR(400MHz,CD3CN)δppm 0.98(t,J ＝ 7.33Hz,3H),1.57-1.71(m,2H),2.04-2.18(m,
1H),2.60(d,J ＝ 7.45Hz,2H),2.66-2.83(m,5H),3.46-3.57(m,1H),5.10(s,2H),6.76(dd,J ＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.96(d,J ＝2.40Hz,1H),7.23(d,J ＝ 8.84Hz,1H),7.44(d,J＝
7.96Hz,1H),7.62(d,J＝7.96Hz,1H),7.73(s,1H),8.86(宽单峰,1H)。
1
H NMR(400MHz,CD3CN)δppm 0.98(t,J ＝ 7.33Hz,3H),1.57-1.71(m,2H),2.04-2.18(m,
1H),2.60(d,J ＝ 7.45Hz,2H),2.66-2.83(m,5H),3.46-3.57(m,1H),5.10(s,2H),6.76(dd,J ＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.96(d,J ＝2.40Hz,1H),7.23(d,J ＝ 8.84Hz,1H),7.44(d,J＝
7.96Hz,1H),7.62(d,J＝7.96Hz,1H),7.73(s,1H),8.86(宽单峰,1H)。
[0576] 实施例1.15：2-(7-(4-环丁基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物21)的制备
[0577] 在室温向2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(202.8mg,0.449mmol)在四氢呋喃(1ml)中的溶液中加入0.5M环丁基溴化锌(II)在四氢呋喃中的溶液(8.98ml,4.49mmol)和二(三叔丁基膦)钯(46.8mg,0.090mmol)。将混合物在90℃加热63小时。然后混合物用1N HCl水溶液淬灭并经硅藻土过滤。滤液用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，除去过量的HCl并减压浓缩。残留物通过HPLC来纯化。合并的馏分用饱和碳酸氢钠水溶液研磨为碱性溶液并减压浓缩。将残留物在乙酸乙酯中溶解并酸化至pH 4。有机层用水洗涤直到水层为中性。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到标题化合物，其为粉红色固体(32.3mg)。LCMS m/z+ 1＝444.6[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.78-1.87(m,1H), 1.93-2.02(m,1H),2.
03-2.12(m,1H),2.16-2.28(m,4H),2.34(dd,J＝ 15.98,9.03Hz,1H),2.60-2.75(m,4H),3.
41-3.51(m,1H),3.74-3.84(m,1H),5.12(s,2H),6.70(dd,J＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.92(d,J＝ 2.40Hz,1H),7.19(d,J ＝ 8.84Hz,1H),7.66-7.78(m,3H),10.46(s,1H),12.20( 宽 单峰,1H)。
03-2.12(m,1H),2.16-2.28(m,4H),2.34(dd,J＝ 15.98,9.03Hz,1H),2.60-2.75(m,4H),3.
41-3.51(m,1H),3.74-3.84(m,1H),5.12(s,2H),6.70(dd,J＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.92(d,J＝ 2.40Hz,1H),7.19(d,J ＝ 8.84Hz,1H),7.66-7.78(m,3H),10.46(s,1H),12.20( 宽 单峰,1H)。
[0578] 实施例1.16：2-(7-(4-环丙基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物22)的制备
[0579] 在室温向2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(200.5mg,0.444mmol)在四氢呋喃(1ml)中的溶液中加入0.5M环丙基溴化锌(II)在四氢呋喃中的溶液(8.87ml,4.44mmol)和二(三叔丁基膦)钯(46.3mg,0.089mmol)。将混合物在90℃加热63小时。然后混合物用1N HCl水溶液淬灭并经硅藻土过滤。滤液用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，除去过量的HCl并减压浓缩。残留物通过HPLC来纯化。合并的馏分用饱和碳酸氢钠水溶液研磨为碱性溶液并减压浓缩。将残留物在乙酸乙酯中溶解并酸化至pH 4。有机层用水洗涤直到水层为中性。有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到标题化合物，其为浅棕色固体(36.6mg)。LCMS m/z＝+ 1
430.5[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.74-0.88(m,2H),0.98-1.07(m,2H),2.02-2.12(m,2H),2.34(dd,J＝ 15.98,9.03Hz,1H),2.59-2.76(m,4H),3.39-3.52(m,1H),5.10(s,2H),6.69(dd,J＝8.72,2.53Hz,1H),6.91(d,J＝2.40Hz,1H),7.10-7.26(m,2H),7.61(d,J＝8.34Hz,1H),7.72(d,J＝1.14Hz,1H),10.45(s,1H),12.20(宽单峰,1H)。
430.5[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.74-0.88(m,2H),0.98-1.07(m,2H),2.02-2.12(m,2H),2.34(dd,J＝ 15.98,9.03Hz,1H),2.59-2.76(m,4H),3.39-3.52(m,1H),5.10(s,2H),6.69(dd,J＝8.72,2.53Hz,1H),6.91(d,J＝2.40Hz,1H),7.10-7.26(m,2H),7.61(d,J＝8.34Hz,1H),7.72(d,J＝1.14Hz,1H),10.45(s,1H),12.20(宽单峰,1H)。
[0580] 实 施 例 1.17：2-(7-((6- 环 戊 基-5-(三 氟 甲 基 )吡 啶-3- 基) 甲 氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物19)的制备
[0581] 步骤A：2-氯-5-(氯甲基)-3-(三氟甲基)吡啶的制备
[0582] 向冷的5-(氯甲基)-2-甲氧基-3-(三氟甲基)吡啶(0.3g,1.33mmol)在DMF(0.6ml)中的溶液中滴加POCl3(1.02g,6.65mmol)。在封闭管中将反应混合物在100℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温且倒入冰水(10ml)中。反应混合物用DCM(三次)萃取且合并的有机层用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来+ 1纯化，得到标题化合物(0.20g)。LCMS m/z＝230.1[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm
4.62(s,2H),8.06(d,J＝2.3Hz,1H),8.57(d,J＝2.3Hz,1H)。
4.62(s,2H),8.06(d,J＝2.3Hz,1H),8.57(d,J＝2.3Hz,1H)。
[0583] 步骤B：2-[7-{(6-氯-5-三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸乙酯的制备
[0584] 由2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯和2-氯-5-(氯甲基)-3-(三氟甲基)吡啶以与实施例1.4步骤E中所述相似的方式得到标题化合物。+ 1
LCMS m/z＝453.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.29(t,J＝7.1Hz,3H),2.06-2.1
4(m,1H),2.50(dd,J＝ 16.9,11.2Hz,1H),2.71-2.86(m,4H),3.50-3.58(m,1H),4.16-4.24(m,2H),5.14(s,2H),6.81(dd,J＝8.7和2.4Hz,1H),6.97(d,J＝2.4Hz,1H),7.22(d,J＝
8.6Hz,1H),8.14(d,J＝2.1Hz,1H),8.52(宽单峰,1H),8.63(d,J＝2.1Hz,1H)。
LCMS m/z＝453.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.29(t,J＝7.1Hz,3H),2.06-2.1
4(m,1H),2.50(dd,J＝ 16.9,11.2Hz,1H),2.71-2.86(m,4H),3.50-3.58(m,1H),4.16-4.24(m,2H),5.14(s,2H),6.81(dd,J＝8.7和2.4Hz,1H),6.97(d,J＝2.4Hz,1H),7.22(d,J＝
8.6Hz,1H),8.14(d,J＝2.1Hz,1H),8.52(宽单峰,1H),8.63(d,J＝2.1Hz,1H)。
[0585] 步骤C：2-[7-{(6-环戊基-5-三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸乙酯的制备
[0586] 由2-[7-{(6-氯-5-三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸乙酯和环戊基溴化锌(II)以与实施例1.8步骤C中所述相似的方式得+到标题化合物。LCMS m/z＝487.4[M+H]。
[0587] 步骤D：2-[7-{(6-环戊基-5-三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸的制备
[0588] 由2-[7-{(6-环戊基-5-三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸乙酯以与实施例1.4步骤F中所述相似的方式得到标题化合物。LCMS + 1m/z＝459.5[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.68-1.75(m,2H),1.87-1.95(m,4H),1.9
8-2.05(m,2H),2.10-2.19(m,1H),2.62(dd,J＝17.1和10.8Hz,1H),2.72-2.88(m,4H),3.4
4-3.50(m,1H),3.55-3.62(m,1H),5.11(s,2H),6.83(dd,J＝8.8和2.4Hz,1H),7.01(d,J＝
2.4Hz,1H),7.22(d,J＝8.7Hz,1H),8.00(d,J＝1.8Hz,1H),8.35(宽单峰,1H),8.80(d,J＝1.8Hz,1H)。
8-2.05(m,2H),2.10-2.19(m,1H),2.62(dd,J＝17.1和10.8Hz,1H),2.72-2.88(m,4H),3.4
4-3.50(m,1H),3.55-3.62(m,1H),5.11(s,2H),6.83(dd,J＝8.8和2.4Hz,1H),7.01(d,J＝
2.4Hz,1H),7.22(d,J＝8.7Hz,1H),8.00(d,J＝1.8Hz,1H),8.35(宽单峰,1H),8.80(d,J＝1.8Hz,1H)。
[0589] 实施例1.18：2-(7-((6-(吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物23)的制备
[0590] 步 骤A：2-[7-{(6- 吡 咯 烷-1-基 )-5-(三 氟 甲 基) 吡 啶-3-基} 甲 氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸乙酯的制备
[0591] 在厚壁管中将2-[7-{(6-氯-5-三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸乙酯(60mg,0.132mmol)、吡咯烷(47mg,0.66mmol)、Et3N(67mg,0.66mmol)和IPA(0.7ml)以微波辐射在180℃加热2小时。混合物通过HPLC来+纯化，得到标题化合物(20mg)。LCMS m/z＝488.5[M+H]。
[0592] 步 骤B：2-[7-{(6- 吡 咯 烷-1-基 )-5-(三 氟 甲 基) 吡 啶-3-基} 甲 氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸的制备
[0593] 由2-[7-{(6-吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环 戊并[b]吲哚-3-基]乙酸乙酯以与实施例1.4步骤F中所述相似的方式得到标题化+ 1合物。LCMS m/z＝460.6[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.92-1.96(m,4H),2.10-2.1
7(m,1H),2.60(dd,J＝ 17.1,10.6Hz,1H),2.74-2.87(m,4H),3.55-3.62(m,5H),4.97(s,2H),6.80(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.00(d,J＝2.4Hz,1H),7.19(d,J＝8.6Hz,1H),7.91(d,J＝2.2Hz,1H),8.30(宽单峰,1H),8.34(d,J＝2.2Hz,1H)。
7(m,1H),2.60(dd,J＝ 17.1,10.6Hz,1H),2.74-2.87(m,4H),3.55-3.62(m,5H),4.97(s,2H),6.80(dd,J＝8.7,2.4Hz,1H),7.00(d,J＝2.4Hz,1H),7.19(d,J＝8.6Hz,1H),7.91(d,J＝2.2Hz,1H),8.30(宽单峰,1H),8.34(d,J＝2.2Hz,1H)。
[0594] 实施例1.19：2-(7-((6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物20)的制备
[0595] 步骤A：2-(7-((6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0596] 由2-[7-{(6-氯-5-三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸乙酯和3,3-二氟吡咯烷盐酸盐以与实施例1.18步骤A中所述相似的方+式得到标题化合物。LCMS m/z＝524.4[M+H]。
[0597] 步骤B：2-[7-{(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸的制备
[0598] 2-[7-{(6-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)-5-(三氟甲基)吡啶-3-基}甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基]乙酸乙酯以与实施例1.4步骤F中所述相似的方+ 1
式用1N LiOH水解，得到标题化合物。LCMS m/z＝496.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm
2.09-2.18(m,1H),2.35-2.46(m,2H),2.60(dd,J＝ 17.1,10.8Hz,1H),2.74-2.88(m,4H),3.54-3.61(m,1H),3.84(t,J＝7.3Hz,2H),3.94(t,J＝13.4Hz,2H),5.00(s,2H),6.80(dd,J＝ 8.6,2.4Hz,1H),6.99(d,J ＝ 2.5Hz,1H),7.20(d,J ＝ 8.7Hz,1H),7.96(d,J ＝
2.2Hz,1H),8.32(宽单峰,1H),8.39(d,J＝2.2Hz,1H)。
式用1N LiOH水解，得到标题化合物。LCMS m/z＝496.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm
2.09-2.18(m,1H),2.35-2.46(m,2H),2.60(dd,J＝ 17.1,10.8Hz,1H),2.74-2.88(m,4H),3.54-3.61(m,1H),3.84(t,J＝7.3Hz,2H),3.94(t,J＝13.4Hz,2H),5.00(s,2H),6.80(dd,J＝ 8.6,2.4Hz,1H),6.99(d,J ＝ 2.5Hz,1H),7.20(d,J ＝ 8.7Hz,1H),7.96(d,J ＝
2.2Hz,1H),8.32(宽单峰,1H),8.39(d,J＝2.2Hz,1H)。
[0599] 实施例1.20：2-(7-(4-(甲基磺酰基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物30)的制备
[0600] 步骤A：2-(7-(4-(甲基磺酰基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0601] 向搅拌的2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(50mg,0.19mmol)和碳酸铯(94mg,0.29mmol)在DMF(1.5ml)中的混合物中加入1-(溴甲基)-4-(甲基磺酰基)苯(72mg,0.29mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时且将固体过滤。将滤液浓缩且残留物通过制备性TLC来纯化，得到标题化合物(40mg)，其为灰白+ 1
色固体。LCMS m/z＝428.3[M+H]。H NMR(400MHz, CDCl3)δ1.30(t,J＝7.2Hz,3H),2.07-2.15(m,1H),2.50(dd,J ＝ 16.7 和 11.2Hz,1H),2.70-2.86(m,4H),3.05(s,3H),3.52-3.58(m,1H),4.17-4.25(m,2H),5.20(s,2H),6.84(dd,J ＝ 8.8 和 2.4Hz,1H),6.96(d,J＝ 2.1Hz,1H),7.21(d,J ＝ 8.8Hz,1H),7.68(d,J ＝ 8.1Hz,2H),7.95(d,J ＝
8.3Hz,2H),8.49(s,1H)。
色固体。LCMS m/z＝428.3[M+H]。H NMR(400MHz, CDCl3)δ1.30(t,J＝7.2Hz,3H),2.07-2.15(m,1H),2.50(dd,J ＝ 16.7 和 11.2Hz,1H),2.70-2.86(m,4H),3.05(s,3H),3.52-3.58(m,1H),4.17-4.25(m,2H),5.20(s,2H),6.84(dd,J ＝ 8.8 和 2.4Hz,1H),6.96(d,J＝ 2.1Hz,1H),7.21(d,J ＝ 8.8Hz,1H),7.68(d,J ＝ 8.1Hz,2H),7.95(d,J ＝
8.3Hz,2H),8.49(s,1H)。
[0602] 步骤B：2-(7-(4-(甲基磺酰基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0603] 向搅拌的2-(7-(4-(甲基磺酰基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(40mg,0.094mmol)在二噁烷中的溶液中加入1M LiOH水溶液(0.47ml,0.47mmol)。将反应混合物在室温搅拌24小时。将溶剂部分除去，用水稀释且用HCl溶液酸化。收集粉红色固体并干燥，得到标题化合物(26mg)。LCMS m/+ 1z ＝ 400.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.04-2.08(m,1H),2.35(dd,J ＝ 16.0和 9.0Hz,1H),2.63-2.75(m,4H),3.20(s,3H),3.45-3.50(m,1H),5.21(s,2H),6.73(dd,J ＝ 8.7 和 2.4Hz,1H),6.92(d,J ＝ 2.4Hz,1H),7.20(d,J ＝ 8.7Hz,1H),7.71(d,J ＝
8.3Hz,2H),7.92(d,J＝8.3Hz,2H),10.47(s,1H),12.18(s,1H)。
8.3Hz,2H),7.92(d,J＝8.3Hz,2H),10.47(s,1H),12.18(s,1H)。
[0604] 实施例1.21：2-(7-(4-(环己基甲基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物28)的制备
[0605] 步骤A：4-(环己基甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的制备
[0606] 在室温向搅拌的4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(238mg,1.0mmol)和二(三叔丁基膦)钯(0)(51mg,0.10mmol)在THF(2ml)中的溶液中加入(环己基甲基)溴化锌(II)(6ml,3.00mmol)。将反应混合物加热回流2小时，用饱和NaHCO3溶液淬灭且经硅藻土过滤。滤液用乙酸乙酯萃取。将合并的有机物干燥，浓缩且残留物通过柱色+ 1谱来纯化，得到标题化合物(280mg)，其为无色油状物。LCMS m/z＝301.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.96-1.06(m,2H),1.14-1.22(m,3H),1.62-1.72(m,6H),2.71(d,J ＝
6.7Hz,2H),3.94(s,3H),7.39(d,J＝8.1Hz,1H),8.10(dd,J＝8.0和1.5Hz,1H),8.30(d,J＝1.4Hz,1H)。
6.7Hz,2H),3.94(s,3H),7.39(d,J＝8.1Hz,1H),8.10(dd,J＝8.0和1.5Hz,1H),8.30(d,J＝1.4Hz,1H)。
[0607] 步骤B：(4-(环己基甲基)-3-(三氟甲基)苯基)甲醇的制备
[0608] 向搅拌的4-(环己基甲基)-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(280mg,0.93mmol)在二噁烷(8ml)中的溶液中加入2M硼氢化锂在THF中的溶液(0.93ml,1.86mmol)。将反应混合物在80℃加热2小时，冷却，倒入水中，用HCl溶液酸化至pH 4且用乙酸乙酯萃取。合并的有机物用饱和NaHCO3溶液和水洗涤，干燥并浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标1
题化合物(190mg)， 其为无色油状物。H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.96-1.06(m,2H),1.14-1.
22(m,3H),1.62-1.72(m,6H),2.67(d,J＝6.7Hz,2H),4.71(d,J＝5.7Hz,2H),7.29(d,J＝
7.9Hz,1H),7.45(dd,J＝8.0和1.6Hz,1H),7.62(d,J＝1.6Hz,1H)。
题化合物(190mg)， 其为无色油状物。H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.96-1.06(m,2H),1.14-1.
22(m,3H),1.62-1.72(m,6H),2.67(d,J＝6.7Hz,2H),4.71(d,J＝5.7Hz,2H),7.29(d,J＝
7.9Hz,1H),7.45(dd,J＝8.0和1.6Hz,1H),7.62(d,J＝1.6Hz,1H)。
[0609] 步骤C：4-(溴甲基)-1-(环己基甲基)-2-(三氟甲基)苯的制备
[0610] 在0℃向搅拌的(4-(环己基甲基)-3-(三氟甲基)苯基)甲醇(80mg,0.29mmol)在无水DCM(1ml)中的溶液中加入三溴化磷(11μl,0.12mmol)。将反应混合物缓慢温热至室温，搅拌1小时，倒入水中且用DCM萃取。合并的有机物用饱和NaHCO3溶液和盐水洗1
涤，干燥并浓缩。残留物通过柱色谱来纯化，得到标题化合物(80mg)，其为无色油状物。H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.96-1.06(m,2H),1.14-1.22(m,3H),1.55-1.72(m,6H),2.65(d,J ＝
6.5Hz,2H),4.49(s,2H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),7.47(dd,J＝8.0和1.7Hz,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H)。
涤，干燥并浓缩。残留物通过柱色谱来纯化，得到标题化合物(80mg)，其为无色油状物。H NMR(400MHz,CDCl3)δ0.96-1.06(m,2H),1.14-1.22(m,3H),1.55-1.72(m,6H),2.65(d,J ＝
6.5Hz,2H),4.49(s,2H),7.28(d,J＝8.0Hz,1H),7.47(dd,J＝8.0和1.7Hz,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H)。
[0611] 步骤D：2-(7-(4-(环己基甲基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0612] 向搅拌的2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(40mg,0.15mmol)和碳酸铯(75mg,0.23mmol)在DMF(1ml)中的反应混合物中加入4-(溴甲基)-1-(环己基甲基)-2-(三氟甲基)苯(78mg,0.23mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。将固体过滤并用乙酸乙酯洗涤。将合并的滤液浓缩且残留物通过制备性TLC来纯化，+ 1
得到标题化合物(40mg)，其为油状物。LCMS m/z＝514.5[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δ
0.96-1.06(m,2H),1.14-1.22(m,3H),1.30(t,J＝ 7.2Hz,3H),1.55-1.72(m,6H),2.07-2.1
5(m,1H),2.50(dd,J＝16.7和11.2Hz,1H),2.66(d,J＝6.8Hz,2H),2.70-2.86(m,4H),3.
52-3.58(m,1H),4.18-4.25(m,2H),5.08(s,2H),6.85(dd,J＝8.8和2.4Hz,1H),7.00(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.21(d,J ＝ 8.8Hz,1H),7.31(d,J ＝ 7.9Hz 和 1.6Hz,1H),7.55(d,J ＝
7.8Hz,1H),7.72(d,J＝1.6Hz,1H),8.46(s,1H)。
得到标题化合物(40mg)，其为油状物。LCMS m/z＝514.5[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δ
0.96-1.06(m,2H),1.14-1.22(m,3H),1.30(t,J＝ 7.2Hz,3H),1.55-1.72(m,6H),2.07-2.1
5(m,1H),2.50(dd,J＝16.7和11.2Hz,1H),2.66(d,J＝6.8Hz,2H),2.70-2.86(m,4H),3.
52-3.58(m,1H),4.18-4.25(m,2H),5.08(s,2H),6.85(dd,J＝8.8和2.4Hz,1H),7.00(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.21(d,J ＝ 8.8Hz,1H),7.31(d,J ＝ 7.9Hz 和 1.6Hz,1H),7.55(d,J ＝
7.8Hz,1H),7.72(d,J＝1.6Hz,1H),8.46(s,1H)。
[0613] 步骤E：2-(7-(4-(环己基甲基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0614] 向搅拌的2-(7-(4-(环己基甲基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(40mg,0.078mmol)在二噁烷中的溶液中加入1M LiOH水溶液(0.39ml,0.39mmol)。将反应混合物在室温搅拌5小时。将溶剂部分除去，然后用水稀释且用HCl溶液酸化。收集粉红色固体并干燥，得到标题化合物(19.5mg)。LCMS m/z＝+ 1486.3[M+H]。H NMR(400MHz, DMSO-d6)δ0.96-1.06(m,2H),1.14-1.22(m,3H),1.55-1.70(m,6H),2.05-2.10(m,1H),2.40(dd,J＝16.0和9.0Hz,1H),2.62-2.75(m,6H),3.42-3.50(m,1H),5.12(s,2H),6.72(dd,J＝8.7和2.4Hz,1H),6.94(d,J＝2.4Hz,1H),7.21(d,J＝
8.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.75(s,1H),10.48(s,1H),12.
20(宽峰,1H)。
8.8Hz,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(d,J＝7.8Hz,1H),7.75(s,1H),10.48(s,1H),12.
20(宽峰,1H)。
[0615] 实施例1.22：2-(7-(4-(乙基氨基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物27)的制备
[0616] 向2-(7-(4-氯-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(50mg,0.11mmol)在二噁烷中的混合物中加入2-二环己基膦基-2’-(N,N-二甲基氨基)联苯(4.4mg,0.011mmol)、Pd2dba3(5mg,5.5μmol)、2M乙胺在THF中的溶液(0.28ml,0.55mmol)和叔丁醇钠(21mg,0.22mmol)。将反应混合物以微波辐射在120℃加热2小时，用饱和NH4Cl溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机物干燥并浓缩。残留物先后通过制备性TLC和制备性HPLC来纯化，得到标题化合物(7mg)，其为白色固体。LCMS + 1m/z ＝ 433.5[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.30(t,J ＝ 7.1Hz,3H),2.10-2.17(m,1H),2.62(dd,J＝ 17.0和 10.9Hz,1H),2.75-2.86(m,4H),3.23(q,J＝ 7.1Hz,2H),3.54-3.6
2(m,1H),4.96(s,2H),6.73(d,J＝ 8.6Hz,1H),6.83(dd,J＝ 8.8和 2.4Hz,1H),7.00(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.19(d,J ＝ 8.8Hz,1H),7.46(dd,J ＝ 8.5 和 1.7Hz,1H),7.53(d,J ＝
1.7Hz,1H),8.28(s,1H)。
2(m,1H),4.96(s,2H),6.73(d,J＝ 8.6Hz,1H),6.83(dd,J＝ 8.8和 2.4Hz,1H),7.00(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.19(d,J ＝ 8.8Hz,1H),7.46(dd,J ＝ 8.5 和 1.7Hz,1H),7.53(d,J ＝
1.7Hz,1H),8.28(s,1H)。
[0617] 实施例1.23：2-(7-(4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物26)的制备
[0618] 步骤A：4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸环丙基甲基酯的制备[0619] 向4-羟基-3-(三氟甲基)苯甲酸(0.483g,2.343mmol)在DMF(10ml)中的溶液中加入Cs2CO3(2.29g,7.03mmol)，接着加入(溴甲基)环丙烷(0.568ml,5.86mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16小时。将混合物过滤。将滤液真空浓缩并在EtOAc中吸收。有机溶液用水(三次)洗涤，经MgSO4干燥并浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，其+ 1为油状物(0.643g)。LCMS m/z＝315.3[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 0.33-0.44(m,4H),0.59-0.69(m,4H),1.21-1.34(m,2H),4.01(d,J ＝ 6.57Hz,2H),4.15(d,J ＝
7.20Hz,2H),6.99(d,J ＝ 8.84Hz,1H),8.18(dd,J ＝ 8.72,2.15Hz,1H),8.28(d,J ＝
2.02Hz,1H)。
7.20Hz,2H),6.99(d,J ＝ 8.84Hz,1H),8.18(dd,J ＝ 8.72,2.15Hz,1H),8.28(d,J ＝
2.02Hz,1H)。
[0620] 步骤B：4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸的制备
[0621] 向4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸环丙基甲基酯(0.642g,2.043mmol)在THF:MeOH(1:1,10ml)中的溶液中加入LiOH(1M水溶液)(12.26mmol)。将反应混合物搅拌过夜，用HCl(1M水溶液)淬灭并用EtOAc(两次)萃取。合并的萃取物经MgSO4+ 1干燥并浓缩，得到标题化合物，其为白色固体(0.502g)。LCMS m/z＝261.1[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 0.39-0.46(m,2H),0.62-0.71(m,2H),1.23-1.38(m,1H),4.03(d,J＝6.57Hz,2H),7.02(d,J＝8.72Hz,1H),8.23(dd,J＝8.72,2.15Hz,1H),8.34(d,J＝
2.02Hz,1H)。
2.02Hz,1H)。
[0622] 步骤C：(4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苯基)甲醇的制备
[0623] 在0℃向4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸在THF(7ml)中的溶液中缓慢加入BH3·DMS(2.0M在THF中)(1.592ml,3.18mmol)。在0℃搅拌0.5小时后，使反应混合物回到室温并搅拌过夜。在0℃将反应混合物缓慢加到饱和NaHCO3溶液中并用EtOAc(三次)萃取。合并的萃取物经MgSO4干燥并通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，其为固1
体 (0.358g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 0.34-0.43(m,2H),0.57-0.67(m,2H),1.22-1.32(m,1H),3.94(d,J＝6.57Hz,2H),4.66(s,2H),6.96(d,J＝ 8.46Hz,1H),7.46(dd,J＝
8.46,2.02Hz,1H),7.57(s,1H)。
体 (0.358g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 0.34-0.43(m,2H),0.57-0.67(m,2H),1.22-1.32(m,1H),3.94(d,J＝6.57Hz,2H),4.66(s,2H),6.96(d,J＝ 8.46Hz,1H),7.46(dd,J＝
8.46,2.02Hz,1H),7.57(s,1H)。
[0624] 步骤D：4-(氯甲基)-1-(环丙基甲氧基)-2-(三氟甲基)苯的制备
[0625] 向(4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苯基)甲醇(0.258g,1.454mmol)在甲苯(4ml)中的溶液中加入亚硫酰氯(0.637ml,8.72mmol)。将反应混合物在75℃搅拌1.5小时。将反应混合物倒入冰水中并用己烷(两次)萃取。合并的萃取物用NaHCO3(三次)洗涤，经MgSO4干燥并浓缩，得到标题化合物，其为白色固体(0.275g)。1
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 0.36-0.43(m,2H),0.59-0.67(m,2H),1.21-1.34(m,1H),3.95(d,J ＝ 6.44Hz,2H),4.56(s,2H),6.95(d,J ＝ 8.59Hz,1H),7.48(dd,J ＝
8.53,2.34Hz,1H),7.58(d,J＝2.15Hz,1H)。
H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 0.36-0.43(m,2H),0.59-0.67(m,2H),1.21-1.34(m,1H),3.95(d,J ＝ 6.44Hz,2H),4.56(s,2H),6.95(d,J ＝ 8.59Hz,1H),7.48(dd,J ＝
8.53,2.34Hz,1H),7.58(d,J＝2.15Hz,1H)。
[0626] 步骤E：2-(7-(4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0627] 向2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(0.069g,0.264mmol)在DMF(1ml)中的溶液中加入Cs2CO3(0.086g,0.264mmol)，接着加入4-(氯甲基)-1-(环丙基甲氧基)-2-(三氟甲基)苯(0.070g,0.264mmol)。将反应混合物搅拌16小时并过滤。将滤液真空浓缩并通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，+ 1其为浅黄色油状物(0.023g)。LCMS m/z＝488.2[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm
0.35-0.44(m,2H),0.58-0.67(m,2H),1.24-1.34(m,4H),2.04-2.16(m,1H),2.51(dd,J ＝
16.74,11.05Hz,1H),2.68-2.90(m,4H),3.49-3.61(m,1H),3.94(d,J＝6.44Hz,2H),4.15-
4.27(m,2H),5.03(s,2H),6.82(dd,J ＝8.72,2.40Hz,1H),6.93-7.02(m,2H),7.20(d,J ＝
8.84Hz,1H),7.56(dd,J＝8.53,1.96Hz,1H),7.67(d,J＝1.89Hz,1H),8.45(宽单峰,1H)。
0.35-0.44(m,2H),0.58-0.67(m,2H),1.24-1.34(m,4H),2.04-2.16(m,1H),2.51(dd,J ＝
16.74,11.05Hz,1H),2.68-2.90(m,4H),3.49-3.61(m,1H),3.94(d,J＝6.44Hz,2H),4.15-
4.27(m,2H),5.03(s,2H),6.82(dd,J ＝8.72,2.40Hz,1H),6.93-7.02(m,2H),7.20(d,J ＝
8.84Hz,1H),7.56(dd,J＝8.53,1.96Hz,1H),7.67(d,J＝1.89Hz,1H),8.45(宽单峰,1H)。
[0628] 步骤F：2-(7-(4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0629] 向2-(7-(4-(环丙基甲氧基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(22.9mg,0.047mmol)在二噁烷中的溶液中加入1M LiOH(0.188ml,0.188mmol)。将反应混合物搅拌3小时，在EtOAc中吸收且用1M HCl洗涤。EtOAc萃取物经MgSO4干燥并浓缩。残留物通过制备性HPLC/MS来纯化，得到标题化+ 1合物，其为固体。LCMS m/z＝460.3[M+H]。 H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 0.30-0.38(m,2H),0.52-0.59(m,2H),1.17-1.27(m,1H),2.03-2.13(m,1H),2.35(dd,J ＝ 15.98,
8.91Hz,1H),2.59-2.76(m,4H),3.99(d,J ＝ 6.69Hz,2H),5.05(s,2H),6.69(dd,J ＝
8.84,2.40Hz,1H),6.91(d,J＝2.53Hz,1H),7.19(d,J＝8.72Hz,1H),7.24(d,J＝8.46Hz,
1H),7.62-7.71(m,2H),10.45(s,1H)。
8.91Hz,1H),2.59-2.76(m,4H),3.99(d,J ＝ 6.69Hz,2H),5.05(s,2H),6.69(dd,J ＝
8.84,2.40Hz,1H),6.91(d,J＝2.53Hz,1H),7.19(d,J＝8.72Hz,1H),7.24(d,J＝8.46Hz,
1H),7.62-7.71(m,2H),10.45(s,1H)。
[0630] 实施例1.24：2-(7-(4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物24)的制备
[0631] 步骤A：4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸环戊酯的制备
[0632] 标题化合物由溴环丙烷使用与实施例1.23步骤A中所述相似的方法来制备，+ 1得到油状物。LCMS m/z＝343.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.58-1.72(m,4H),1.75-1.88(m,6H),1.88-2.02(m,6H),4.87-4.99(m,1H),5.32-5.45(m,1H),7.00(d,J ＝
8.72Hz,1H),8.12(dd,J＝8.72,2.02Hz,1H),8.20(d,J＝1.89Hz,1H)。
8.72Hz,1H),8.12(dd,J＝8.72,2.02Hz,1H),8.20(d,J＝1.89Hz,1H)。
[0633] 步骤B：4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸的制备
[0634] 标题化合物由4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸环戊酯使用与实施例1.23+步骤B中所述相似的方法来制备，得到白色固体。LCMS m/z＝275.4[M+H]。
[0635] 步骤C：(4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苯基)甲醇的制备
[0636] 标题化合物由4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苯甲酸使用与实施例1.23步1
骤C中所述相似的方法来制备，得到油状物。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.61-1.68(m,
2H),1.76-1.86(m,2H),1.86-1.96(m,4H),4.64(s,2H),4.84-4.91(m, 1H),6.98(d,J ＝
8.59Hz,1H),7.45(dd,J＝8.59,2.15Hz,1H),7.55(d,J＝1.89Hz,1H)。
骤C中所述相似的方法来制备，得到油状物。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.61-1.68(m,
2H),1.76-1.86(m,2H),1.86-1.96(m,4H),4.64(s,2H),4.84-4.91(m, 1H),6.98(d,J ＝
8.59Hz,1H),7.45(dd,J＝8.59,2.15Hz,1H),7.55(d,J＝1.89Hz,1H)。
[0637] 步骤D：4-(氯甲基)-1-(环戊基氧基)-2-(三氟甲基)苯的制备
[0638] 标题化合物由(4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苯基)甲醇使用与实施例1.231
步骤D中所述相似的方法来制备，得到油状物。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.58-1.70(m,2H),1.76-1.86(m,2H),1.86-1.95(m,4H),4.56(s,2H),4.84-4.90(m,1H),6.96(d,J ＝
8.59Hz,1H),7.47(dd,J＝8.53,2.34Hz,1H),7.57(d,J＝2.15Hz,1H)。
步骤D中所述相似的方法来制备，得到油状物。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.58-1.70(m,2H),1.76-1.86(m,2H),1.86-1.95(m,4H),4.56(s,2H),4.84-4.90(m,1H),6.96(d,J ＝
8.59Hz,1H),7.47(dd,J＝8.53,2.34Hz,1H),7.57(d,J＝2.15Hz,1H)。
[0639] 步骤E：2-(7-(4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0640] 标题化合物由4-(氯甲基)-1-(环戊基氧基)-2-(三氟甲基)苯使用与实施+ 1例1.23步骤E中所述相似的方法来制备，得到油状物。LCMS m/z＝502.4[M+H]。 H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.30(t,J ＝ 7.14Hz,3H),1.57-1.69(m,2H),1.76-1.97(m,6H),2.05-2.16(m,1H),2.51(dd,J ＝ 16.74,11.18Hz,1H),2.68-2.89(m,4H),3.49-3.61(m,1H),4.14-4.28(m,2H),4.84-4.91(m,1H),5.02(s,2H),6.83(dd,J ＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.94-7.04(m,2H),7.21(d,J ＝ 8.72Hz,1H),7.55(dd,J ＝ 8.59,2.02Hz,1H),7.65(d,J ＝
2.02Hz,1H),8.45(宽单峰,1H)。
2.02Hz,1H),8.45(宽单峰,1H)。
[0641] 步骤F：2-(7-(4-(环戊基氧基)-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0642] 标题化合物使用与实施例1.23步骤F中所述相似的方法来制备，得到固体。LCMS + 1m/z ＝ 474.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.53-1.79(m,6H),1.82-1.97(m,2H),2.00-2.15(m,1H),2.35(dd,J ＝ 15.92,8.97Hz,1H),2.58-2.79(m,4H),3.41-3.51(m,1H),4.94-5.08(m,3H),6.69(dd,J ＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.92(d,J ＝ 2.40Hz,1H),7.19(d,J＝ 8.72Hz,1H),7.25(d,J ＝ 9.22Hz,1H),7.61-7.72(m,2H),10.45(s,1H),12.18( 宽 单峰,1H)。
[0643] 实施例1.25：2-(7-(4-氰基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物25)的制备
[0644] 步骤A：4-(羟基甲基)-2-(三氟甲基)苯甲腈的制备
[0645] 向(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)甲醇(0.300g,1.425mmol)在DMA中的溶液中加入二氰基锌(0.335g,2.85mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.165g,0.142mmol)。将反应烧瓶脱气，充入氮气，然后以微波辐射在150℃加热6小时。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取。EtOAc萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干 燥并通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物，+ 1其为白色固体(0.105g)。LCMS m/z＝202.1[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.98(宽单峰,1H),4.87(s,2H),7.69(d,J＝0.88Hz,1H),7.77-7.88(m,2H)。
[0646] 步骤B：4-(氯甲基)-2-(三氟甲基)苯甲腈的制备
[0647] 标题化合物由4-(羟基甲基)-2-(三氟甲基)苯甲腈使用与实施例1.23步骤D中+ 1所述相似的方法来制备，得到油状物。LCMS m/z＝220.2[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 4.65(s,2H),7.73(d,J＝1.39Hz,1H),7.84(d,J＝7.71Hz,2H)。
[0648] 步骤C：2-(7-(4-氰基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0649] 标题化合物由4-(氯甲基)-2-(三氟甲基)苯甲腈使用与实施例1.23步骤E中+ 1所述相似的方法来制备，得到油状物。LCMS m/z＝443.3[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.30(t,J ＝ 7.14Hz,3H),2.03-2.18(m,1H),2.50(dd,J ＝ 16.80,11.24Hz,1H),2.68-2.91(m,4H),3.48-3.63(m,1H),4.13-4.28(m,2H),5.21(s,2H),6.83(dd,J ＝
8.72,2.53Hz,1H),6.96(d,J＝2.40Hz,1H),7.23(d,J＝8.72Hz,1H),7.73-7.81(m,1H),7.
81-7.88(m,1H),7.91(s,1H),8.52(宽单峰,1H)。
8.72,2.53Hz,1H),6.96(d,J＝2.40Hz,1H),7.23(d,J＝8.72Hz,1H),7.73-7.81(m,1H),7.
81-7.88(m,1H),7.91(s,1H),8.52(宽单峰,1H)。
[0650] 步骤D：2-(7-(4-氰基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0651] 标题化合物使用与实施例1.23步骤F中所述相似的方法来制备，得到固体。+ 1
LCMS m/z ＝ 415.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.01-2.14(m,1H),2.35(dd,J＝ 15.98,9.03Hz,1H),2.57-2.78(m,4H),3.38-3.53(m,1H),5.29(s,2H),6.75(dd,J ＝
8.78,2.46Hz,1H),6.94(d,J＝2.53Hz,1H),7.22(d,J＝8.72Hz,1H),7.97(s,1H),8.07(s,
1H),8.19(d,J＝7.96Hz,1H),10.50(s,1H),12.18(宽单峰,1H)。
LCMS m/z ＝ 415.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm2.01-2.14(m,1H),2.35(dd,J＝ 15.98,9.03Hz,1H),2.57-2.78(m,4H),3.38-3.53(m,1H),5.29(s,2H),6.75(dd,J ＝
8.78,2.46Hz,1H),6.94(d,J＝2.53Hz,1H),7.22(d,J＝8.72Hz,1H),7.97(s,1H),8.07(s,
1H),8.19(d,J＝7.96Hz,1H),10.50(s,1H),12.18(宽单峰,1H)。
[0652] 实施例1.26：2-(7-(4-氨甲酰基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物29)的制备
[0653] 向2-(7-(4-氰基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(9.0mg,0.022mmol)在二噁烷(1ml)中的溶液中加入1M LiOH(水溶液)(3.0ml)。将反应混合物在50℃搅拌48小时。加入1M HCl(水溶液)以将pH调至3。混合物用EtOAc萃取。EtOAc萃取物经MgSO4干燥且残留物通过制备性HPLC/MS来纯化，得+ 1到标题化合物，其为固体(2.1mg)。LCMS m/z＝433.2[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.01-2.14(m,1H),2.32-2.42(m,1H),2.57-2.78(m,4H),5.20(s,2H),6.72(d,J ＝
11.37Hz,1H),6.93(d,J＝2.40Hz,1H),7.20(d,J＝8.72Hz,1H),7.50-7.59(m,2H),7.76(d,J＝7.58Hz,1H),7.82(s,1H),7.91(s,1H),10.47(s,1H),12.17(宽单峰,1H)。
11.37Hz,1H),6.93(d,J＝2.40Hz,1H),7.20(d,J＝8.72Hz,1H),7.50-7.59(m,2H),7.76(d,J＝7.58Hz,1H),7.82(s,1H),7.91(s,1H),10.47(s,1H),12.17(宽单峰,1H)。
[0654] 实施例1.27：2-(7-(4-(吡嗪-2-基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物31)的制备
[0655] 步骤A：(4-(吡嗪-2-基)苯基)甲醇的制备
[0656] 将2-氯吡嗪(0.230ml,2.62mmol)、4-(羟基甲基)苯基硼酸(517mg,3.41mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(303mg,0.262mmol)和2M磷酸钾水溶液(2.62ml,5.24mmol)在二噁烷(10ml)中的混合物在80℃和氮气下加热过夜。使混合物冷却下来，倒入水中并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥并浓缩。残留物通过制备性HPLC来纯化，得到标+ 1题化合物(350mg)，其为灰白色固体。LCMS m/z＝187.0[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.79(s,2H),7.52(d,J ＝ 8.1Hz,2H),8.02(d,J ＝ 8.1Hz,2H),8.51(d,J ＝
2.5Hz,1H),8.63(dd,J＝2.4和1.6Hz,1H),9.03(d,J＝1.6Hz,1H)。
2.5Hz,1H),8.63(dd,J＝2.4和1.6Hz,1H),9.03(d,J＝1.6Hz,1H)。
[0657] 步骤B：甲磺酸4-(吡嗪-2-基)苄基酯的制备
[0658] 在0 ℃ 向 搅 拌 的(4-( 吡 嗪 -2-基 )苯 基 )甲 醇(40mg,0.22mmol) 和DIEA(56μl,0.32mmol)在DCM(1ml)中的溶液中加入甲磺酰氯(29.5mg,0.258mmol)。将反应混合物在该温度搅拌1小时，倒入水中并用DCM萃取。将合并的有机物干燥并浓缩，得到+标题化合物(50mg)，其不经进一步纯化。LCMS m/z＝265.1[M+H]。
[0659] 步骤C：2-(7-(4-(吡嗪-2-基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0660] 向2-(7- 羟 基 -1,2,3,4- 四 氢 环 戊 并 [b]吲 哚 -3- 基 ) 乙 酸 乙 酯(20mg,0.077mmol)和碳酸铯(38mg,0.12mmol)在DMF(1ml)中的混合物中加入甲磺酸4-(吡嗪-2-基)苄基酯(41mg,0.15mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将固体过滤且将滤液浓缩。残留物通过制备性TLC来纯化，得到标题化合物(15mg)。LCMS m/+ 1
z ＝ 428.3[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.30(t,J ＝ 7.1Hz,3H),2.07-2.14(m,1H),
2.50(dd,J ＝ 16.7 和 11.2Hz,1H),2.70-2.87(m,4H),3.50-3.57(m,1H),4.18-4.24(m,
2H),5.18(s,2H),6.87(dd,J ＝ 8.8 和 2.4Hz,1H),7.01(d,J ＝ 2.3Hz,1H),7.21(d,J ＝
8.7Hz,1H),7.62(d,J ＝ 8.2Hz,2H),8.03(d,J ＝ 8.3Hz,2H),8.46(s,1H),8.51(d,J ＝
2.5Hz,1H),8.64(dd,J＝2.3和1.6Hz,1H), 9.04(d,J＝1.4Hz,1H)。
z ＝ 428.3[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.30(t,J ＝ 7.1Hz,3H),2.07-2.14(m,1H),
2.50(dd,J ＝ 16.7 和 11.2Hz,1H),2.70-2.87(m,4H),3.50-3.57(m,1H),4.18-4.24(m,
2H),5.18(s,2H),6.87(dd,J ＝ 8.8 和 2.4Hz,1H),7.01(d,J ＝ 2.3Hz,1H),7.21(d,J ＝
8.7Hz,1H),7.62(d,J ＝ 8.2Hz,2H),8.03(d,J ＝ 8.3Hz,2H),8.46(s,1H),8.51(d,J ＝
2.5Hz,1H),8.64(dd,J＝2.3和1.6Hz,1H), 9.04(d,J＝1.4Hz,1H)。
[0661] 步骤D：2-(7-(4-(吡嗪-2-基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0662] 向搅拌的2-(7-(4-(吡嗪-2-基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(15mg,0.035mmol)在二噁烷(1ml)中的溶液中加入1M氢氧化锂溶液(0.175ml,0.175mmol)。将反应混合物在室温搅拌5小时并用HCl溶液酸化。混合物+通过HPLC来纯化，得到标题化合物(8mg)，其为粉红色固体。LCMS m/z＝400.4[M+H]。
1
H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.04-2.12(m,1H),2.35(dd,J ＝ 16.0 和 9.0Hz,1H),2.62-
2.75(m,4H),3.44-3.50(m,1H),5.17(s,2H),6.74(dd,J ＝ 8.7 和 2.4Hz,1H),6.95(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.21(d,J ＝ 8.7Hz,1H),7.62(d,J ＝ 8.2Hz,2H),8.15(d,J ＝
8.3Hz,2H),8.61(d,J＝2.5Hz,1H),8.72(dd,J＝2.3和1.6Hz,1H),9.26(d,J＝1.5Hz,1H),10.47(s,1H),12.20(s,1H)。
1
H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.04-2.12(m,1H),2.35(dd,J ＝ 16.0 和 9.0Hz,1H),2.62-
2.75(m,4H),3.44-3.50(m,1H),5.17(s,2H),6.74(dd,J ＝ 8.7 和 2.4Hz,1H),6.95(d,J＝ 2.4Hz,1H),7.21(d,J ＝ 8.7Hz,1H),7.62(d,J ＝ 8.2Hz,2H),8.15(d,J ＝
8.3Hz,2H),8.61(d,J＝2.5Hz,1H),8.72(dd,J＝2.3和1.6Hz,1H),9.26(d,J＝1.5Hz,1H),10.47(s,1H),12.20(s,1H)。
[0663] 实施例1.28：2-(7-(4-(1,2,3-噻二唑-4-基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物32)的制备
[0664] 步骤A：2-(7-(4-(1,2,3-噻二唑-4-基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0665] 向4ml小瓶中加入2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(64.8mg,0.250mmol)、碳酸铯(81mg,0.250mmol)和4-(4-(溴甲基)苯基)-1,2,3-噻二唑(63.8mg,0.250mmol)。加入DMA(1ml)并将反应混合物在室温搅拌过夜。过滤除去固体并用EtOAc洗涤。将滤液减压浓缩且残留物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物(42.7mg)。+
LCMS m/z＝434.2[M+H]。
LCMS m/z＝434.2[M+H]。
[0666] 步骤B：2-(7-(4-(1,2,3-噻二唑-4-基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0667] 向2-(7-(4-(1,2,3- 噻 二 唑 -4- 基) 苄 基 氧 基)-1,2,3,4- 四 氢 环 戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(42.7mg,0.030mmol)在二噁烷中的溶液中加入1MLiOH(0.394ml,0.394mmol)。将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在EtOAc中吸收并用1M HCl洗涤。EtOAc萃取物经MgSO4干燥并浓缩。残留物通过硅胶柱色谱来纯化，+ 1
得到标题化合物，其为固体。LCMS m/z＝406.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm
2.03-2.12(m,1H),2.36(dd,J ＝ 16.04,8.97Hz,1H),2.58-2.79(m,4H),3.41-3.51(m,1H),5.16(s,2H),6.74(dd,J ＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.95(d,J ＝ 2.40Hz,1H),7.21(d,J ＝
8.72Hz,1H),7.63(d,J＝8.21Hz,2H),8.15(d,J＝8.21Hz,2H),9.61(s,1H),10.46(s,1H),
12.19(宽单峰,1H)。
得到标题化合物，其为固体。LCMS m/z＝406.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm
2.03-2.12(m,1H),2.36(dd,J ＝ 16.04,8.97Hz,1H),2.58-2.79(m,4H),3.41-3.51(m,1H),5.16(s,2H),6.74(dd,J ＝ 8.78,2.46Hz,1H),6.95(d,J ＝ 2.40Hz,1H),7.21(d,J ＝
8.72Hz,1H),7.63(d,J＝8.21Hz,2H),8.15(d,J＝8.21Hz,2H),9.61(s,1H),10.46(s,1H),
12.19(宽单峰,1H)。
[0668] 实施例1.29：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物12)的制备
[0669] 步骤A：4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的制备
[0670] 向4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸(200g,891mmol)在MeOH(600ml,14.8mol)中的溶液中加入硫酸(27ml,445mmol)。将混合物回流搅拌6小时，冷却并将溶剂减压蒸发。将所得液体残留物(～250ml)倒入冰水中，因此形成白色混悬液。将固体过滤，用0.05N NaOH(3×200ml)洗涤，接着用H2O(3×200ml)洗涤。将固体真空干燥16小时，接着在40℃
1
真空干燥4小时，得到标题化合物，其为灰白色固体(197.0g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm,3.98(s,3H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),8.16(dd,J＝8.8Hz,2.0Hz,1H),8.39(d,J ＝
2.0Hz,1H)。
1
真空干燥4小时，得到标题化合物，其为灰白色固体(197.0g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm,3.98(s,3H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),8.16(dd,J＝8.8Hz,2.0Hz,1H),8.39(d,J ＝
2.0Hz,1H)。
[0671] 步骤B：4-环戊基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的制备
[0672] 在7.8℃向4-氯-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(196.7g,824mmol)在THF(100ml)中的溶液中滴加环戊基溴化锌(II)(1979ml,989mmol)。加完后，温度升至22℃。在相同温度将二(三叔丁基膦)钯(21.07g,41.2mmol)加到深棕色溶液中且将所得混合物在70℃搅拌8小时。在0℃将混合物加到饱和NaHCO3水溶液(100ml)中，在相同温度搅拌30分钟，然后在22℃搅拌2小时。所得混悬液经硅藻土过滤并将滤液真空浓缩。固体用EtOAc(3×300ml)洗涤，将滤液与上述浓缩物合并，合并的有机物用H2O(2×600ml)和盐水(2×500ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，倾出并减压浓缩，得到标题化合物，其为橙色油状物(227g)，其不经+ 1
进 一 步 纯 化。LCMS m/z＝ 273.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.71-1.60(m,2H),1.83-1.75(m,2H),1.95-1.87(m,2H),2.21-2.11(m,2H),3.46( 五 重 峰 ,J ＝
8.8Hz,1H),3.97(s,3H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),8.18(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),8.31(d,J＝1.6Hz,1H)。
进 一 步 纯 化。LCMS m/z＝ 273.4[M+H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.71-1.60(m,2H),1.83-1.75(m,2H),1.95-1.87(m,2H),2.21-2.11(m,2H),3.46( 五 重 峰 ,J ＝
8.8Hz,1H),3.97(s,3H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),8.18(dd,J＝8.0Hz,1.6Hz,1H),8.31(d,J＝1.6Hz,1H)。
[0673] 步骤C：(4-环戊基-3-(三氟甲基)苯基)甲醇的制备
[0674] 在22℃向4-环戊基-3-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(224g,823mmol)在1,4-二噁烷(600ml)中的溶液中滴加LiBH4(494ml,987mmol,2M在THF中的溶液)。将所得混悬液在85.5℃搅拌5.5小时。将深棕色溶液冷却至0℃并通过缓慢加入6N HCl(130ml)将pH调至
5。分离各层并向水相中加入H2O(250ml)和NaCl(20g)。合并的水层用EtOAc(2×250ml)萃取。将EtOAc层加到上述分离的有机相中并将合并的有机物减压浓缩。所得混悬液经硅藻土/Na2SO4垫过滤且固体用EtOAc(3×400ml)洗涤。将合并的有机物旋转蒸发且深棕色油状残留物通过硅胶色谱来纯化，得到标题化合物，其为无色液体(110g)。LCMS m/z＝+ 1
243.3[M-H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.67-1.55(m,2H),1.82-1.69(m,2H),1.95-1.8
3(m,2H),2.19-2.04(m,2H),3.39(五重峰,J＝8.0Hz,1H),4.72(s,2H),7.55-7.46(m,2H),
7.62(s,1H)。
5。分离各层并向水相中加入H2O(250ml)和NaCl(20g)。合并的水层用EtOAc(2×250ml)萃取。将EtOAc层加到上述分离的有机相中并将合并的有机物减压浓缩。所得混悬液经硅藻土/Na2SO4垫过滤且固体用EtOAc(3×400ml)洗涤。将合并的有机物旋转蒸发且深棕色油状残留物通过硅胶色谱来纯化，得到标题化合物，其为无色液体(110g)。LCMS m/z＝+ 1
243.3[M-H]。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.67-1.55(m,2H),1.82-1.69(m,2H),1.95-1.8
3(m,2H),2.19-2.04(m,2H),3.39(五重峰,J＝8.0Hz,1H),4.72(s,2H),7.55-7.46(m,2H),
7.62(s,1H)。
[0675] 步骤D：4-(氯甲基)-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯的制备
[0676] 以使内部温度保持在10-25℃(用冰-水冷却)的速率向(4-环戊基-3-(三氟甲基)苯基)甲醇(110g,113mmol)中滴加亚硫酰氯(329ml,4.50mol)。将所得混合物在50℃搅拌3.5小时，接着在25℃搅拌6小时。将混合物减压浓缩并在剧烈搅拌下将所得油状残留物倒入冰-水(450ml)中。分离各层且水相用CH2Cl2(3×400ml)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3(400ml)和盐水(2×400ml)洗涤，干燥(Na2SO4)。经新鲜Na2SO4过滤且真空浓缩，1
得到标题化合物，其为淡黄色油状物(113.3g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.67-1.57(m,2H),1.81-1.71(m,2H),1.94-1.84(m,2H),2.16-2.07(m,2H),3.39( 五 重 峰 ,J ＝
8.6Hz,1H),4.61(s,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H)。
得到标题化合物，其为淡黄色油状物(113.3g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.67-1.57(m,2H),1.81-1.71(m,2H),1.94-1.84(m,2H),2.16-2.07(m,2H),3.39( 五 重 峰 ,J ＝
8.6Hz,1H),4.61(s,2H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H)。
[0677] 步骤E：2-(7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备[0678] 向2-碘-4-甲氧基苯胺(20.0g,80mmol)、2-(2-氧代环戊基)乙酸乙酯(20.5g,120mmol,1.5当量)和原硅酸四乙酯(21.7g,104mmol,1.3当量 )在无水DMF(100ml)中的溶液中加入吡啶鎓对甲苯磺酸盐(0.807g,3.21mmol,0.04当量)。将深棕色溶液在135℃和氮气下搅拌5小时，冷却至100℃，然后加入DIPEA(31.1g,241mmol,3当量)，接着加入Pd(OAc)2(0.541g,2.41mmol,0.03当量)。将所得混合物在120℃和氮气下搅拌22小时且减压浓缩。将残留物在DCM中吸收，经硅胶塞过滤并将溶剂减压蒸发。残留+物通过硅胶柱色谱来纯化，得到标题化合物。LCMS m/z＝274.4[M+H]。
[0679] 步骤F：2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备[0680] 将DCM(305ml)加到1L三颈圆底烧瓶中并冷却至-11℃(内部)(冰-丙酮浴)。在搅拌下将BBr3(72.0ml,761mmol)加到DCM中。滴加2-(7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(41.62g,152mmol)在DCM(145ml)中的溶液且使内部温度保持在-5至0℃。加完后，将反应混合物在低于0℃的温度搅拌1小时。将反应混合物缓慢倒入冰(400ml)和饱和K2CO3(400ml)的混合物中并充分搅拌(使pH保持在9-7)。分离有机层，用盐水(1×100ml)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残留的棕色油状物通过硅胶垫来纯化，得到标题化合物(8.03g)。LCMS m/z＝260.2。
[0681] 步骤G：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0682] 在氮气气氛下向2L三颈圆底烧瓶中加入2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(55.85g,215mmol)、碳酸铯(84.2g,258mmol)和4-(氯甲基)-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯(68g,259mmol)在DMA(670ml)中的溶液。将混合物在室温搅拌15分钟并在50℃加热过夜。将混合物冷却至室温并过滤。将滤液真空浓缩。向残留物中加入己烷(400ml)并加热至40℃，得到深色溶液。将溶液冷却至室温且保持过周末。将混合物真空浓缩并真空干燥，得到标题化合物(129.7g)。LCMS m/z＝486.2。
[0683] 步骤H：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0684] 向3L三颈圆底烧瓶中加入2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(139.4g,287mmol)在二噁烷(1.8L)中的溶液。向混合物中加入2N氢氧化锂(0.431L,861mmol)并加热至45-55℃且保持3小时。将混合物真空浓缩。向残留物中加入MTBE/水并用浓HCl酸化(直到pH为3)同时用冰浴使温度保持在20℃以下。分离水层并用MTBE萃取。合并的有机层用水洗涤几次直到洗完后pH为3。将乙腈和水加到MTBE溶液中并将混合物真空浓缩，得到标题化合物(130g)，其不经进一步纯化。LCMS m/z＝458.4。
[0685] 通过手性HPLC进行拆分(由Chiral Technologies Inc进行)
[0686] 柱：正相制备性
[0687] 洗脱剂：CO2/MeOH(75-25％)
[0688] 梯度：恒组成
[0689] 流速：400ml/min
[0690] 检测器：254nm
[0691] 保留时间：第1种对映异构体：9.1分钟(认为相应于在实施例1.4中所述手性HPLC条件下纯化的第2种对映异构体)；第2种对映异构体：13.9分钟(认为相应于在实施例1.4中所述手性HPLC条件下纯化的第1种对映异构体)。
[0692] 手性拆分后，将相应纯化的馏分浓缩至干。
[0693] 向实施例1.29中描述的化合物12的第1种对映异构体在乙腈和乙醇中 的溶液中加入(S)-1-苯乙胺(1当量)。将混合物短暂加热并通过缓慢蒸发来浓缩。形成沉淀物，过滤并干燥。得到化合物12的第1种对映异构体(如实施例1.29中所述)的单晶并对其进行X射线晶体学分析。对所述单晶的观察结果如图21中所示。
[0694] 实施例1.30：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(化合物12)的制备
[0695] 步骤A：1-(2-(三氟甲基)苯基)环戊醇的制备
[0696] 在氩气气氛下将1-溴-2-(三氟甲基)苯(0.5g,2.222mmol)在无水THF(10ml)中的溶液冷却至-78℃(干冰-IPA浴)。在充分搅拌下滴加BuLi(2.5M在己烷中,1.068ml,2.67mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌40分钟。在-78℃缓慢滴加环戊酮(0.243g,2.89mmol)在无水THF(1.5ml)中的溶液。将反应混合物在-78℃搅拌30分钟，逐渐达到室温且搅拌1小时。反应混合物通过冰浴来冷却，用水淬灭且通过加入浓HCl来酸化至pH 4-5。将溶剂减压除去。将残留物在二氯甲烷中溶解，用水(2次)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。残留物通过硅胶色谱来纯化，得到标题化合物，其为油状物(250mg)。
+
LCMS m/z＝213.1[M-H2O+H]。
+
LCMS m/z＝213.1[M-H2O+H]。
[0697] 步骤B：1-环戊基-2-(三氟甲基)苯的制备
[0698] 向1-(2-(三氟甲基)苯基)环戊醇(5.1g,22.15mmol)在乙醇(32ml)中的溶液中加入10％Pd-C(500mg；Degussa；湿的)且混合物用氢气气囊氢化过夜。反应混合物经硅藻土过滤。将滤液倒入冰-水(100ml)中并用CH2Cl2(2×70ml)萃取。合并的CH2Cl2层1
用水(1×75ml)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并将溶剂减压除去，得到标题化合物(4.3g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.58-1.67(m,4H),1.81-1.90(m,2H),2.06-2.15(m,2H),3.32-3.43(m,1H),7.22-7.26(m,1H),7.45-7.51(m,2H),7.58(d,J＝8Hz,1H)。
用水(1×75ml)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并将溶剂减压除去，得到标题化合物(4.3g)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.58-1.67(m,4H),1.81-1.90(m,2H),2.06-2.15(m,2H),3.32-3.43(m,1H),7.22-7.26(m,1H),7.45-7.51(m,2H),7.58(d,J＝8Hz,1H)。
[0699] 步骤C：4-溴-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯的制备
[0700] 向1-环戊基-2-(三氟甲基)苯(0.5g,2.334mmol)在乙酸(2.5ml)中的溶液中加入溴(1.202ml,23.34mmol)。将混合物充分搅拌，加入浓H2SO4(2.5ml)且在40℃搅拌1.5小时。将反应混合物倒入冰-水中并用CH2Cl2萃取。CH2Cl2层用水洗涤，接着用硫代硫酸钠溶液洗涤，然后用水洗涤。有机层经Na2SO4干燥并将溶剂减压除去。残留物通过硅胶色1
谱来纯化，得到标题化合物(250mg)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.52-1.75(m,4H),1.
78-1.88(m,2H),1.95-2.04(m,2H),3.16-3.26(m,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.76(d,J＝
2Hz, 1H),7.81(dd,J＝8.4Hz,2Hz,1H)。
谱来纯化，得到标题化合物(250mg)。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.52-1.75(m,4H),1.
78-1.88(m,2H),1.95-2.04(m,2H),3.16-3.26(m,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.76(d,J＝
2Hz, 1H),7.81(dd,J＝8.4Hz,2Hz,1H)。
[0701] 步骤D：4-环戊基-3-(三氟甲基)苯甲醛的制备
[0702] 在氩气气氛下向15ml圆底烧瓶中加入4-溴-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯(0.186g,0.635mmol)和无水THF(1.86ml)。将溶液充分搅拌并冷却至-78℃(干冰-IPA浴)。缓慢滴加BuLi(2.5M在己烷中,0.281ml,0.703mmol)并将反应混合物在低温搅拌25分钟。在-78℃缓慢滴加无水DMF(0.1ml,0.766mmol)。将混合物在-78℃搅拌20分钟，然后在室温搅拌30分钟。反应混合物用水淬灭，用2M HCl酸化并用EtOAc萃取。EtOAc层用水洗涤，经Na2SO4干燥且真空浓缩，得到标题化合物，其为油状物(60mg)。LCMS m/z＝+ 1243.3[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.55-1.7(m,4H),1.79-1.94(m,2H),1.95-
2.09(m,2H),3.29-3.37(m,1H),7.86(d,J ＝ 8Hz,1H),8.12(d,J ＝ 8Hz,1H),8.16(d,J ＝
1.2Hz,1H),10.46(s,1H)。
2.09(m,2H),3.29-3.37(m,1H),7.86(d,J ＝ 8Hz,1H),8.12(d,J ＝ 8Hz,1H),8.16(d,J ＝
1.2Hz,1H),10.46(s,1H)。
[0703] 步骤E：(4-环戊基-3-(三氟甲基)苯基)甲醇的制备
[0704] 向4-环戊基-3-(三氟甲基)苯甲醛(0.25g,1.032mmol)在乙醇(2.5ml)中的溶液中加入硼氢化钠(0.047g,1.238mmol)并将混合物在室温搅拌2小时。混合物用水淬灭，用6N HCl酸化，再用水稀释并用CH2Cl2萃取。CH2Cl2层用水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真+ 1空浓缩，得到标题化合物(0.22g)。LCMS m/z＝227.5[M-H2O+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.54-1.72(m,4H),-1.77-1.89(m,2H),1.93-2.05(m,2H),3.19-3.28(m,1H),4.52(d,J＝6Hz,2H),5.28(t,J＝5.6Hz,1H),7.52-7.6(m,3H)。
[0705] 步骤F：4-(氯甲基)-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯的制备
[0706] 以使内部温度保持在10-25℃(用冰-水冷却)的速率向(4-环戊基-3-(三氟甲基)苯基)甲醇(110g,113mmol)中滴加亚硫酰氯(329ml,4.50mol,10当量)。将所得混合物在50℃搅拌3.5小时，接着在25℃搅拌6小时。将混合物减压浓缩并在剧烈搅拌下将所得油状残留物倒入冰-水(450ml)中。分离各层且水相用CH2Cl2(3×400ml)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO3(400ml)和盐水(2×400ml)洗涤，干燥(Na2SO4)，经新鲜Na2SO4过滤且真空浓缩，得到4-(氯甲基)-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯，其为淡黄色油状1
物(113.3g,96％)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.67-1.57(m,2H),1.81-1.71(m,2H),1.
94-1.84(m,2H),2.16-2.07(m,2H),3.39(五重峰,J＝8.6Hz,1H),4.61(s,2H),7.49(d,J＝
8.4Hz,1H),7.54(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H)。
物(113.3g,96％)。H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 1.67-1.57(m,2H),1.81-1.71(m,2H),1.
94-1.84(m,2H),2.16-2.07(m,2H),3.39(五重峰,J＝8.6Hz,1H),4.61(s,2H),7.49(d,J＝
8.4Hz,1H),7.54(dd,J＝8.4Hz,1.6Hz,1H),7.63(d,J＝1.6Hz,1H)。
[0707] 步骤G：3-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚 -3-羧酸乙酯的制备
[0708] 向(4-甲氧基苯基)肼盐酸盐(379.5g,2.17mol)和1-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2-氧代环戊烷羧酸乙酯(526g,2.17mol)在EtOH(2.0L)中的混悬液中加入AcOH(131g,124ml,2.17mol)并将混合物在75℃和氮气下搅拌18小时。将微细深棕色混悬液冷却并用饱和NaHCO3水溶液中和。将溶剂减压蒸发。将棕色油状残留物在EtOAc(2L)中吸收，过滤且有机物用水(3×500ml)和盐水(2×500ml)洗涤。合并的水层用EtOAc反萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)并将溶剂减压蒸发，得到标题化合物(703.4g)，其为稠+ 1厚深棕色油状物。LCMS m/z＝346.2[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.15(t,J＝
7.2Hz,3H),1.17(t,J＝7.2Hz,3H),2.48-2.42(m,1H),2.81(d,J＝16.6Hz,1H),2.82-2.70(m,2H),3.05-2.99(m,1H),3.18(d,J＝ 16.6Hz,1H),3.73(s,3H),4.12-4.00(m,4H),6.67(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.85(d,J＝2.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,1H),10.57(s,1H)。
7.2Hz,3H),1.17(t,J＝7.2Hz,3H),2.48-2.42(m,1H),2.81(d,J＝16.6Hz,1H),2.82-2.70(m,2H),3.05-2.99(m,1H),3.18(d,J＝ 16.6Hz,1H),3.73(s,3H),4.12-4.00(m,4H),6.67(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.85(d,J＝2.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,1H),10.57(s,1H)。
[0709] 步骤H：3-(羧基甲基)-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-羧酸的制备
[0710] 将50wt％NaOH水溶液(346g,4.32mol,4当量)缓慢加到3-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-羧酸乙酯(373g,1.08mol)在EtOH(2.0L)中的溶液中并将所得混合物在60℃和氮气下搅拌18小时。棕色混悬液在0℃用6N HCl中和并将溶剂蒸发。将棕色残留物在H2O(2L)和EtOAc(1L)之间分配并分离各层。水层再用EtOAc(3×500ml)洗涤且水相的pH用6N HCl调至3-4。收集沉淀物并在环境温度真空干燥过夜，得到标题化合物(191.4g)，其为棕色固体。LCMS m/z＝+ 1
290.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.43-2.36(m,1H),2.68(d,J＝16.9Hz,1H),2.82-2.69(m,2H),3.07-3.01(m,1H),3.12(d,J＝16.9Hz,1H),3.72(s,3H),6.66(dd,J＝
8.7,2.4Hz,1H),6.84(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.6Hz,1H),10.55(s,1H),12.30(s,2H)。
290.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 2.43-2.36(m,1H),2.68(d,J＝16.9Hz,1H),2.82-2.69(m,2H),3.07-3.01(m,1H),3.12(d,J＝16.9Hz,1H),3.72(s,3H),6.66(dd,J＝
8.7,2.4Hz,1H),6.84(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝8.6Hz,1H),10.55(s,1H),12.30(s,2H)。
[0711] 步骤I：2-(7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备[0712] 将3-(羧基甲基)-7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-羧酸(191g,0.66mol)在AcOH(1.0L)中的溶液在60℃和氮气下搅拌4.5小时。将深棕色溶液浓缩。收集沉淀物，用H2O(3×500ml)洗涤并在40℃真空干燥过夜，得到标题化合物+ 1
(126.4g)，其为棕色固体。LCMS m/z＝246.1[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm
2.12-2.04(m,1H),2.35(dd,J＝ 16.0,9.1Hz,1H),2.77-2.60(m,4H),3.50-3.43(m,1H),3.
72(s,3H),6.62(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.81(d,J＝2.3Hz,1H),7.18(d,J＝8.7Hz,1H),1
0.42(s,1H),12.16(s,1H)。
(126.4g)，其为棕色固体。LCMS m/z＝246.1[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm
2.12-2.04(m,1H),2.35(dd,J＝ 16.0,9.1Hz,1H),2.77-2.60(m,4H),3.50-3.43(m,1H),3.
72(s,3H),6.62(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.81(d,J＝2.3Hz,1H),7.18(d,J＝8.7Hz,1H),1
0.42(s,1H),12.16(s,1H)。
[0713] 步骤J：2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备[0714] 向BBr3(115g,43.3ml,458mmol,3当量)在CH2Cl2(70ml)中的溶液中缓慢加入2-(7-甲氧基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸(37.44g,153mmol)在CH2Cl2(300ml)中的混悬液同时使反应混合物的温度保持在-5℃至0℃。将所得深棕色混悬液在-5至0℃再搅拌1小时。将EtOH(187ml)滴加到反应混合物中同时使温度保持在0-10℃。将所得溶液在40℃加热30分钟。将溶液冷却并通过缓慢加入10N NaOH(142.9ml,1.43mol)将pH调至8同时使温度保持在0-3℃。将溶剂减压除去直到剩余200ml浓缩物。用浓HCl将pH调至约7，将混悬液过滤，固体用H2O(3×200ml)洗涤并在环境温度真空干燥过夜。将浅棕色物质在EtOAc(200ml)中溶解，过滤且固体用EtOAc洗涤。
合并的有机物用饱和NaHCO3水溶液(2×200ml)和盐水(200ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并将+ 1
溶剂旋转蒸发，得到标题化合物(35.2g)，其为浅棕色固体。LCMS m/z＝260.1[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.20(t,J＝7.1Hz,3H),2.11-2.03(m,1H),2.42(dd,J＝15.7,8.9Hz,1H),2.71-2.55(m,3H),2.76(dd,J＝ 15.7,5.5Hz,1H),3.49-3.42(m,1H),4.11(q,J＝7.1Hz,2H),6.49(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),6.62(d,J＝2.1Hz,1H),7.07(d,J＝8.6Hz,
1H),8.47(s,1H),10.25(s,1H)。
合并的有机物用饱和NaHCO3水溶液(2×200ml)和盐水(200ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并将+ 1
溶剂旋转蒸发，得到标题化合物(35.2g)，其为浅棕色固体。LCMS m/z＝260.1[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.20(t,J＝7.1Hz,3H),2.11-2.03(m,1H),2.42(dd,J＝15.7,8.9Hz,1H),2.71-2.55(m,3H),2.76(dd,J＝ 15.7,5.5Hz,1H),3.49-3.42(m,1H),4.11(q,J＝7.1Hz,2H),6.49(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),6.62(d,J＝2.1Hz,1H),7.07(d,J＝8.6Hz,
1H),8.47(s,1H),10.25(s,1H)。
[0715] 步骤K：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯的制备
[0716] 向4-(氯甲基)-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯(46.2g,176mmol,1.2当量)在DMF(400ml)中的溶液中一次性加入2-(7-羟基-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(38.0g,147mmol)，接着加入Cs2CO3(71.6g,220mmol,1.5当量)。在前15分钟观察到放热(温度升至72.8℃)，然后将混合物在50℃和氮气下再搅拌13.5小时。将反应混合物冷却，抽吸过滤，固体用EtOAc洗涤并将滤液减压蒸发。将深棕色油状残留物在EtOAc中吸收，用H2O(3×300ml)洗涤且水相用EtOAc反萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并旋转蒸发，得到标题化合物(77g)，其为稠厚深棕色油状物，所述油状物不+ 1经进一步纯化即用于下一步骤。LCMS m/z＝486.4[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm
1.19(t,J＝ 7.2Hz,3H),1.73-1.54(m,4H),1.89-1.77(m,2H),2.12-1.94(m,3H),2.44(dd,J＝17.2,8.4Hz,1H),2.81-2.60(m,4H),3.30-3.20(m,1H),3.54-3.44(m,1H),4.12(q,J＝
7.2Hz,2H),5.12(s,2H),6.72(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.94(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝
8.8Hz,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.73-7.67(m,2H), 10.47(s,1H)。
1.19(t,J＝ 7.2Hz,3H),1.73-1.54(m,4H),1.89-1.77(m,2H),2.12-1.94(m,3H),2.44(dd,J＝17.2,8.4Hz,1H),2.81-2.60(m,4H),3.30-3.20(m,1H),3.54-3.44(m,1H),4.12(q,J＝
7.2Hz,2H),5.12(s,2H),6.72(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.94(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(d,J＝
8.8Hz,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,1H),7.73-7.67(m,2H), 10.47(s,1H)。
[0717] 步骤L：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0718] 向2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯(71.2g,147mmol)在1,4-二噁烷(400ml)中的溶液中加入LiOH·H2O水溶液(220ml,2M,3当量)。将所得二相混合物在50℃和氮气下搅拌5小时。将反应混合物冷却并用6N HCl将pH调至3-4。将溶剂旋转蒸发并向二相水层/产物混合物中加入CH2Cl2。分离各层且有机物用H2O(2×300ml)洗涤。合并的水相用CH2Cl2反萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤并旋转蒸发。将深棕色油状残留物在MeOH中吸收并将溶剂减压蒸发。将深棕色残留物再次在最少量的MeOH中吸收并在冰箱中静置16小时。抽吸收集沉淀物，固体用己烷洗涤且在高真空下干燥，得到产物(34.5g,51％)，其为灰白色固体。将含有产物的滤液浓缩至干，得到深棕色蓬松固体(33.6g)，将其进一步分开处理。LCMS m/z+ 1＝458.2[M+H]。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 1.76-1.57(m,4H),1.93-1.81(m,2H),2.1
6-1.97(m,3H),2.38(dd,J＝ 15.2,8.8Hz,1H),2.80-2.62(m,4H),3.32-3.23(m,1H),3.54-
3.44(m,1H),5.15(s,2H),6.74(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.96(d,J＝2.4Hz,1H),7.23(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.76-7.70(m,2H),10.48(s,1H),12.20(s,1H)。
6-1.97(m,3H),2.38(dd,J＝ 15.2,8.8Hz,1H),2.80-2.62(m,4H),3.32-3.23(m,1H),3.54-
3.44(m,1H),5.15(s,2H),6.74(dd,J＝8.8,2.4Hz,1H),6.96(d,J＝2.4Hz,1H),7.23(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.76-7.70(m,2H),10.48(s,1H),12.20(s,1H)。
[0719] 实施例1.31：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0720] 步骤A：1-环戊基-2-(三氟甲基)苯的制备
[0721] 在氮气下向配备有机械搅拌器、温度探头、干燥氮气入口、冷凝器和加料漏斗的5L三颈圆底烧瓶中加入无水THF(750ml)和镁(40.5g,1667mmol)。将浆液在冰浴中冷却至10℃。经由注射器将FeCl3(18.02g,111mmol)在无水THF(80ml)中的溶液(注意：FeCl3在THF中的溶解是放热的)滴加到镁浆液中。在15℃将N1,N1,N2,N2-四甲基乙-1,2-二胺(201ml,1333mmol)经由500ml加料漏斗加到反应混合物中，这使温度升至22.5℃。将反应混合物冷却至18℃并在该温度搅拌1小时45分钟。然后将其加热至44-45℃，搅拌1小时，冷却至5-10℃且滴加1-溴-2-(三氟甲基)苯(150ml,1111mmol)和溴环戊烷(143ml,1333mmol)的混合物同时使内部温度保持在30℃以下(使温度保持在22至30℃)。
加完后，将反应混合物冷却至17-18℃并在室温搅拌过夜。将 该主要反应混合物冷却至
10℃并加入镁(15g)。与此同时，在氮气下在另一个1L圆底烧瓶中向Mg(20g,0.5当量)在THF(300ml)中的溶液中加入与上述相似的FeCl3(9g,0.5当量)在无水THF(30ml)中的溶液。将所得混合物在室温搅拌30分钟，加热至45℃且保持1小时，冷却至室温且经由加料漏斗滴加到主要反应混合物中(残留的镁用药匙转移)同时使内部温度保持在30℃以下。使反应在室温继续进行1小时，冷却至5℃(冰浴)并用饱和NH4Cl溶液(150ml)缓慢淬灭(淬灭是放热的，因此在充分搅拌下缓慢加入饱和NH4Cl)。淬灭反应混合物后，加入硅藻土且充分搅拌。混合物经3L烧结漏斗过滤。滤饼用THF洗涤。将滤液在37℃(浴温)/155托的条件下减压浓缩，得到棕色油状物。油状物通过冰浴来冷却并在充分搅拌下将6N HCl(500ml)缓慢倒入其中(HCl的加入最初是放热的，然后放热减弱)。混合物用己烷(2×400ml)萃取。将己烷层分离出来并经硅藻土垫过滤。滤液(己烷层)用水(3×300ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并加入硅胶(550g)；充分浆化。将浆液过滤并将滤液(浅黄色)减压浓缩(旋转蒸发器；浴温37℃,185-188托)，得到标题化合物，其为浅橙色油状物(190g,
1
纯度为91.4％(LC,214nm))。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.56-1.71(m,4H),1.80-1.88(m,
2H),1.96-2.05(m,2H),3.22-3.29(m,1H),7.35-7.40(m,1H),7.16-7.65(m,2H)。
加完后，将反应混合物冷却至17-18℃并在室温搅拌过夜。将 该主要反应混合物冷却至
10℃并加入镁(15g)。与此同时，在氮气下在另一个1L圆底烧瓶中向Mg(20g,0.5当量)在THF(300ml)中的溶液中加入与上述相似的FeCl3(9g,0.5当量)在无水THF(30ml)中的溶液。将所得混合物在室温搅拌30分钟，加热至45℃且保持1小时，冷却至室温且经由加料漏斗滴加到主要反应混合物中(残留的镁用药匙转移)同时使内部温度保持在30℃以下。使反应在室温继续进行1小时，冷却至5℃(冰浴)并用饱和NH4Cl溶液(150ml)缓慢淬灭(淬灭是放热的，因此在充分搅拌下缓慢加入饱和NH4Cl)。淬灭反应混合物后，加入硅藻土且充分搅拌。混合物经3L烧结漏斗过滤。滤饼用THF洗涤。将滤液在37℃(浴温)/155托的条件下减压浓缩，得到棕色油状物。油状物通过冰浴来冷却并在充分搅拌下将6N HCl(500ml)缓慢倒入其中(HCl的加入最初是放热的，然后放热减弱)。混合物用己烷(2×400ml)萃取。将己烷层分离出来并经硅藻土垫过滤。滤液(己烷层)用水(3×300ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并加入硅胶(550g)；充分浆化。将浆液过滤并将滤液(浅黄色)减压浓缩(旋转蒸发器；浴温37℃,185-188托)，得到标题化合物，其为浅橙色油状物(190g,
1
纯度为91.4％(LC,214nm))。H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.56-1.71(m,4H),1.80-1.88(m,
2H),1.96-2.05(m,2H),3.22-3.29(m,1H),7.35-7.40(m,1H),7.16-7.65(m,2H)。
[0722] 步骤B：4-(氯甲基)-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯的制备
[0723] 向配备有机械搅拌器、温度探头、加料漏斗和干燥氮气入口的1L三颈反应烧瓶中加入1-环戊基-2-(三氟甲基)苯(50g,233mmol)。将物质搅拌并冷却至-12℃(干冰/IPA浴)。滴加浓硫酸(100ml,1877mmol)，从而使温度保持在-12℃至-10℃。将混合物冷却至-15℃并分三批(每批9.1g)加入均三噁烷(27.3g,303mmol)同时使温度保持在-15℃至-10℃。将混合物在-10℃搅拌并几乎立刻缓慢加入sulfurochloridic acid(28.1ml,420mmol)同时使温度保持在-10℃至-5℃。将混合物在-5℃搅拌20分钟并在-2℃至-3℃保持3小时。将反应混合物在充分搅拌下缓慢倒入冰-水(1L)中。加入MTBE(700ml)并将混合物充分搅拌。加入硅藻土(300g)并充分搅拌。将硅藻土浆液过滤且硅藻土床用MTBE洗涤。分离滤液中的水层并用MTBE(1×700ml)萃取。合并的MTBE层用水(1×500ml)洗涤，接着用饱和NaHCO3(2×350ml)洗涤。然后MTBE层用水(2×500ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并过滤。将滤液浓缩(浴温38℃；200托)，得到黄色油状物。将油状物在己烷(500ml)中吸收并经硅胶床过滤；然后硅胶床用己烷洗涤。将滤液减压浓缩(浴温38℃；200托)，得到标题化合物，其为浅 黄色油状物(36.2g；纯度为89％(LC,214nm))。1
H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.55-1.72(m,4H),1.78-1.89(m,2H),1.94-2.04(m,2H),3.19-3.28(m,1H),4.82(s,2H),7.62-7.72(m,3H)。
H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.55-1.72(m,4H),1.78-1.89(m,2H),1.94-2.04(m,2H),3.19-3.28(m,1H),4.82(s,2H),7.62-7.72(m,3H)。
[0724] 步骤C：1-环戊基-4-((4-硝基苯氧基)甲基)-2-(三氟甲基)苯的制备[0725] 向配备有搅拌器、热电偶、冷凝器和氮气入口的1L烧瓶中加入硝基苯酚(28g,201mmol)在DMA(150ml)中的溶液和碳酸钾粉末(28.7g,207mmol)。加入4-(氯甲基)-1-环戊基-2-(三氟甲基)苯(45.4g,173mmol)并用DMA(120ml)洗涤。将反应混合物在80℃(浴温,内部温度为77℃)加热过夜。将混合物冷却并倒入冰水(1L)中。在搅拌下使所形成的固体沉降4小时并过滤收集。将所收集的固体在碳酸氢钠溶液(300ml)中搅拌，过滤，用水洗涤且风干。淡黄色残留物用己烷(250ml)洗涤并将固体在真空烘箱中干+燥过夜，得到标题化合物(41.4g,纯度为～85％(LC))。LCMS m/z＝366.2[M+H]。
[0726] 步骤D：4-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)苯胺盐酸盐的制备
[0727] 向配备有搅拌器和热电偶的2L烧瓶中加入1-环戊基-4-((4-硝基苯氧基)甲基)-2-(三氟甲基)苯(40g,109mmol)在ACN(520ml)中的溶液。加入氯化铵(3M,520ml)，将混合物搅拌并冷却至2.5℃。分批加入锌(35.8g,547mmol)且使温度保持低于5℃。加完后，将反应混合物温热至室温并搅拌过夜。混合物经硅藻土床(50g)过滤且滤床用ACN(150ml)洗涤。分离滤液中的水层并用乙酸异丙酯(200ml)反萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥(50g)，过滤并浓缩。将残留物在乙醇(120ml)中溶解，加入HCl(1.25M在EtOH中,140ml)且在环境温度搅拌2.5小时。除去溶剂后，残留的固体用ACN(120ml)研磨，过滤，用ACN(2×50ml)洗涤且真空干燥，得到标题化合物(29.8g)。
[0728] 步骤E：(4-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)苯基)肼盐酸盐的制备[0729] 将4-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)苯胺盐酸盐(30g,81mmol)在水(285ml)中混悬且加入浓HCl(18ml)。将混悬液充分搅拌并在冰/IPA浴中冷却至-0℃。加入亚硝酸钠(5.57g,81mmol)在水(12ml)中的溶液。加完后，将反应混合物在2℃搅拌40分钟。侧壁上的一些固体用ACN(10ml)洗涤。将混合物冷却至-1℃并缓慢加入二氯化锡(II)(45.9g,242mmol)在浓HCl(30ml)中的溶液。形成稠厚沉淀物并继续搅拌30分钟。将混合物温热至室温并搅拌3小时。将混合物过滤，用HCl(0.1M)洗涤并将固体真空干燥，得到标题化合物(40.6g)。
[0730] 步骤F：7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-3-(2-乙氧基-2-氧代乙 基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-羧酸乙酯的制备
[0731] 向1L烧瓶中加入EtOH(500ml)。在40℃加入硫酸(2.4g,23.98mmol)，接着加入1-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-2-氧代环戊烷羧酸乙酯(15.2g,62.7mmol)。加入(4-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)苯基)肼盐酸盐(24.0g,62.0mmol)且溶液变为浅黄色和均质。在连接有Dean-Starks冷凝器的情况下将反应混合物回流过夜。将混合物冷却并在乙酸乙酯(3×100ml)中萃取。有机物用水(200ml)、碳酸氢钠溶液(2×70ml)和水(100ml)洗涤，经硫酸镁干燥且浓缩。将残留物在己烷/乙酸乙酯(80:20,300ml)中溶解，加入硅胶(30g)并搅拌35分钟。将浆液过滤，用相同的洗脱溶剂(100ml)洗涤并将滤液浓缩，得到标+
题化合物(26.7g)。LCMS m/z＝558.5[M+H]。
题化合物(26.7g)。LCMS m/z＝558.5[M+H]。
[0732] 步骤G：3-(阴离子羧基甲基)-7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-羧酸钠[sodium3-(Carboxylatomethyl)-7-(4-cyclopentyl-3-(trifluoromethyl)benzyloxy)-1,2,3,4-t etrahydrocyclopenta[b]indole-3-carboxylate]的制备
[0733] 向500ml烧瓶中加入7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-3-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-羧酸乙酯(24.1g,43.2mmol)在异丙醇(275ml)中的溶液。加入氢氧化钠溶液(20％,129.5ml,130mmol)并将混合物在100℃(浴温)加热2.5小时。将混合物冷却，过滤，用异丙醇洗涤且在40℃真空干燥过夜，+
得到标题化合物(17.5g)。LCMS m/z＝502.6[M-2Na+3H]。
得到标题化合物(17.5g)。LCMS m/z＝502.6[M-2Na+3H]。
[0734] 步骤H：2-(7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-基)乙酸的制备
[0735] 在40℃向搅拌的3-(阴离子羧基甲基)-7-(4-环戊基-3-(三氟甲基)苄基氧基)-1,2,3,4-四氢环戊并[b]吲哚-3-羧酸钠(16.5g,30.2mmol)在水中的溶液中加入氯化铵溶液(9.71％,100ml)。将反应混合物在92℃(浴温)加热4.4小时。将混合物冷冻过夜，倾出并用冰冷的6N HCl(100ml)研磨。过滤收集固体，用稀HCl(100ml)洗涤并在+40℃的真空烘箱中干燥过夜，得到标题化合物(8.5g)。LCMS m/z＝458.3[M+H]。
[0736] 实施例1.32：化合物12的第2种对映异构体的钙盐的制备
[0737] 使用前，将实施例1.29中描述的化合物12的第2种对映异构体在乙腈中浆化过夜，过滤并干燥，得到结晶形式。向结晶形式(40mg)中加入乙腈(1ml)并将混合物温热至60℃。抗衡离子如下引入：加入20μL乙酸钙溶液(2M)和20μL水，然后用结晶盐种晶并缓慢冷却至室温。将所得固体过滤并干燥， 得到白色固体。
[0738] 实施例1.33：化合物12的第2种对映异构体的L-精氨酸盐的制备
[0739] 将实施例1.29中描述的化合物12的第2种对映异构体(174.7mg,0.381mmol)在IPA(1.57ml)中溶解并加入L-精氨酸(66.4mg,0.381mmol)在水(263μL)中的溶液。将均质溶液温热至40℃。在该温度保持15分钟后，形成沉淀物。将反应混合物温热至70℃，这使沉淀物溶解。关闭加热浴。沉淀物在40℃开始形成，将反应混合物冷却至28℃，然后过滤收集固体。固体用14％水在IPA中的溶液洗涤，得到L-精氨酸盐即标题化合物(130mg)。
[0740] 实施例1.34：化合物12的第1种对映异构体的D-赖氨酸盐的制备
[0741] 向实施例1.29中描述的化合物12的第1种对映异构体在乙腈(含有3％水)中的溶液中加入D-赖氨酸(1M水溶液)。在环境温度搅拌过夜后，将所得固体过滤并干燥。
[0742] 实施例1.35：化合物12的第2种对映异构体的(R)-1-苯乙胺盐的乙腈溶剂化物的制备
[0743] 向实施例1.29中描述的化合物12的第2种对映异构体在乙腈中的溶液中加入(R)-1-苯乙胺(1当量)。将混合物短暂加热并冷却。形成沉淀物，过滤并干燥。化合物12的第2种对映异构体(如实施例1.29中所述)的(R)-1-苯乙胺盐的单晶通过从乙腈和丙酮中缓慢蒸发来重结晶并对其进行X射线晶体学分析。观察到比例为4份盐部分:1份乙腈分子的乙腈溶剂化物。
[0744] 实施例2：用于直接测量cAMP的均相时间分辨荧光(Homogeneous Time-Resolved Fluorescence, )测定
[0745] 使用用于直接测量cAMP的 测定(Gabriel et al,Assay and DrugDevelopment Technologies,1:291-303,2003)和用S1P1受体稳定转染的重组CHO-K1细胞针对S1P1受体(例如人S1P1受体)激动剂对化合物进行筛选。CHO-K1细胞得自
(Manassas,VA；目录号CCL-61)。在用于直接测量cAMP的 测定中检测S1P1受体激动剂，其为使cAMP浓度降低的化合物。 测定也用于确定S1P1受体激动剂的EC50值。
(Manassas,VA；目录号CCL-61)。在用于直接测量cAMP的 测定中检测S1P1受体激动剂，其为使cAMP浓度降低的化合物。 测定也用于确定S1P1受体激动剂的EC50值。
[0746] 测定原理： 测定试剂盒购自Cisbio-US,Inc.(Bedford,MA；目录号62AM4PEC)。通过所述试剂盒进行的 测定是在由CHO-K1细胞产生的内源性cAMP和用染料d2标记的示踪剂cAMP之间进行的竞争性免疫测定。示踪剂结合通过用穴合物(Cryptate)标记的单克隆抗cAMP抗体来观察。 在标准品或样品中，特异性信号(即荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET))与未标记的cAMP的浓度成反比例。
[0747] 标准曲线：根据试剂盒制造商提供的说明书，对测定中包括的标准品(0.17至712nM cAMP)的荧光比例(665nm/620nm)进行计算且用于得到cAMP标准曲线。对样品(测试化合物或化合物缓冲液)的荧光比例进行计算且用于通过参考所述cAMP标准曲线来推导相应的cAMP浓度。
[0748] 测 定 设 置：在384孔 板 (ProxiPlates；PerkinElmer,Fremont,CA；目 录 号6008280)中以20μl总体积/孔基本根据试剂盒制造商提供的说明书使用两步方案来进行 测定。将1500个重组CHO-K1细胞/5μl磷酸盐缓冲盐水转移至每个实验孔
中，所述磷酸盐缓冲盐水含有氯化钙和氯化镁(“PBS+”；Invitrogen,Carlsbad,CA；目录号14040)且补充有IBMX(250μM)和咯利普兰(rolipram)(20μM)(磷酸二酯酶抑制剂；
Sigma-Aldrich,St.Louis,MO；目录号分别为I5879和R6520)，接着加入测试化合物在5μl化合物缓冲液(补充有10μl NKH477(水溶性福斯高林(forskolin)衍生物；SignaGen Laboratories,Gaithersburg,MD；目录号PKI-NKH477-010)的PBS+)中的溶液或5μl化合物缓冲液。然后将板在室温孵育1小时。然后根据试剂盒制造商提供的说明书向每个孔中加入5μl cAMP-d2结合物在溶胞缓冲液中的溶液和5μl穴合物结合物在溶胞缓冲液中的溶液。然后将板在室温再孵育1小时，然后对测定板进行读取。
中，所述磷酸盐缓冲盐水含有氯化钙和氯化镁(“PBS+”；Invitrogen,Carlsbad,CA；目录号14040)且补充有IBMX(250μM)和咯利普兰(rolipram)(20μM)(磷酸二酯酶抑制剂；
Sigma-Aldrich,St.Louis,MO；目录号分别为I5879和R6520)，接着加入测试化合物在5μl化合物缓冲液(补充有10μl NKH477(水溶性福斯高林(forskolin)衍生物；SignaGen Laboratories,Gaithersburg,MD；目录号PKI-NKH477-010)的PBS+)中的溶液或5μl化合物缓冲液。然后将板在室温孵育1小时。然后根据试剂盒制造商提供的说明书向每个孔中加入5μl cAMP-d2结合物在溶胞缓冲液中的溶液和5μl穴合物结合物在溶胞缓冲液中的溶液。然后将板在室温再孵育1小时，然后对测定板进行读取。
[0749] 测定读取： 读取使用PHERAstar(BMG LABTECH Inc.,Durham,NC)或TM
EnVision (PerkinElmer,Fremont CA)微量板读取器来进行。
EnVision (PerkinElmer,Fremont CA)微量板读取器来进行。
[0750] 本发明某些化合物及其相应的活性值示于表B中。
[0751] 表B
[0752]化合物编号 EC50S1P1(HTRF)
4 16nM
8 9nM
10 26nM
4 16nM
8 9nM
10 26nM
[0753] 本发明某些其它化合物在该测定中的活性值范围为约35pM至约362nM。
[0754] 实施例3：针对S1P3受体激动剂活性的细胞性/功能性Ca2+测定
[0755] 本发明化合物可如下显示出对S1P3受体不具有或基本不具有激动剂活性：基于mRNA分析而在测定中使用内源性表达S1P3受体(主要)、S1P2受体和S1P5受体但不表达S1P1受体或S1P4受体的人成神经细胞瘤细胞系 (Villullas et al,J Neurosci Res,73:215-226,2003)。在上述受体中，S1P3受体和S1P2受体响应于激动剂例如S1P伴有细胞内钙增加。在对测试化合物的响应中细胞内钙不增加或基本不增加表明测试化合物对S1P3受体不显示出或基本不显示出激动剂活性。上述测定在商业上可例如通过Caliper LifeSciences(Hopkinton,MA)来进行。
[0756] 测定：对人成神经细胞瘤细胞进行洗涤且重新混悬在生理缓冲液中。然后细胞用测量细胞内钙的染料加载。S1P用作参考激动剂。加入S1P或测试化合物后，每2秒以485nm激发/525nm发射测量一次荧光且如此进行至少60秒。然后加入钙离子载体A23187作为内部阳性对照。
[0757] 实施例4：化合物在外周淋巴细胞降低(Peripheral Lymphocyte Lowering,PLL)测定中的作用
[0758] 可证实本发明化合物诱导外周淋巴细胞降低(PLL)。
[0759] A.小鼠PLL测定
[0760] 动物：将雄性BALB/c小鼠(Charles River Laboratories,Wilmington,MA)圈养(四只/笼)并置于湿度受控(40-60％)和温度受控(68-72°F)的12小时:12小时明/暗循环(在早上6:30开灯)实验室中，其中自由进食(Harlan Teklad,Orange,CA,啮齿类动物食物8604)和饮水。使小鼠在试验前适应动物实验室一周。
[0761] PLL测定：以10ml总体积/kg向小鼠给药口服剂量的化合物5、化合物7或给药媒介物(0.5％甲基纤维素)。在给药后5小时收集外周血液样品。小鼠用异氟烷麻醉且通过心脏穿刺来收集血液。全细胞计数(CBC)(包括淋巴细胞计数)使用(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)仪器来得到。结果示于图1和2中，其中显示了
5小时组的外周血淋巴细胞(PBL)计数。测试化合物与媒介物相比使PBL计数降低，这表明测试化合物显示出诱导外周淋巴细胞降低的活性。由图1和2的检查结果显而易见的是，化合物5和化合物7在小鼠中显示出诱导PBL降低(淋巴细胞减少)的活性。
5小时组的外周血淋巴细胞(PBL)计数。测试化合物与媒介物相比使PBL计数降低，这表明测试化合物显示出诱导外周淋巴细胞降低的活性。由图1和2的检查结果显而易见的是，化合物5和化合物7在小鼠中显示出诱导PBL降低(淋巴细胞减少)的活性。
[0762] PLL测定：以10ml总体积/kg向小鼠给药1.00mg/kg口服剂量的化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])或给药媒介物(0.5％甲基纤维素/无菌水)。在给药后5小时收集外周血液样品。小鼠用异氟烷麻醉且通过心脏穿刺来收集血液。全细胞计数(CBC)(包括淋巴细胞计数)使用 (Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)仪器来得到。结果示于图7中，其中显示了5小时组的外周血淋巴细胞(PBL)计数。测试化合物与媒介物相比使PBL计数降低，这表明测试化合物显示出诱导外周淋巴细胞降低的活性。由图7的检查结果显而易见的是，化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])在小鼠中显示出诱导PBL降低(淋巴细胞减少)的活性。
[0763] B.大鼠PLL测定
[0764] 动物：将雄性Sprague-Dawley大鼠(当研究开始时为7周龄)(Charles River Laboratories)圈养(两只/笼)并置于湿度受控(40-60％)和温度受控(68-72°F)的12小时:12小时明/暗循环(在早上6:30开灯)实验室中，其中自由进食(Harlan Teklad,Orange,CA,啮齿类动物食物8604)和饮水。使大鼠在试验前适应动物实验室一周。
[0765] PLL测定：以1.00ml总体积/kg向大鼠给药1.00mg/kg口服剂量的化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])或给药媒介物(0.5％甲基纤维素/无菌水)。在给药后5小时收集外周血液样品。血液通过留置导管来收集。全细胞计数(CBC)(包括淋巴细胞计数)使用 3700(Abbott Laboratories,Abbott Park,IL)仪器来得到。结果
示于图8中，其中显示了5小时组的外周血淋巴细胞(PBL)计数。测试化合物与媒介物相比使PBL计数降低，这表明测试化合物显示出诱导外周淋巴细胞降低的活性。由图8的检查结果显而易见的是，化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])在大鼠中显示出诱导PBL降低(淋巴细胞减少)的活性。
示于图8中，其中显示了5小时组的外周血淋巴细胞(PBL)计数。测试化合物与媒介物相比使PBL计数降低，这表明测试化合物显示出诱导外周淋巴细胞降低的活性。由图8的检查结果显而易见的是，化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])在大鼠中显示出诱导PBL降低(淋巴细胞减少)的活性。
[0766] 实施例5：化合物对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的作用
[0767] 可如下证实本发明化合物对多发性硬化具有治疗功效：证实本发明化合物对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)(多发性硬化的一种动物模型)具有治疗功效。在某些示例性公知模型中，EAE在啮齿类动物中如下诱发：注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)肽，注射髓鞘碱性蛋白(MBP)或注射蛋白脂质蛋白(PLP)肽。
[0768] A.由MOG在小鼠中诱发的EAE
[0769] 动物：将雌 性C57BL/6小鼠(当研究开始时为8至10周龄)(JacksonLaboratory,Bar Harbor,ME)圈养(四只/笼)并置于湿度受控(40-60％)和温度受控(68-72°F)的12小时:12小时明/暗循环(在早上6:30开灯)实验室中，其中自由进食(Harlan Teklad,Orange,CA,啮齿类动物食物8604)和饮水。使小鼠在试验前适应动物实验室一周。
[0770] EAE的诱发：小鼠用总计100μg MOG35-55肽[用完全弗氏佐剂(Complete Freund’s adjuvant)以1:1乳化]进行皮下免疫[50μl/后胁腹(hind flank)]，所述完全弗氏佐剂含有4mg/ml经加热灭活的结核分枝杆菌。小鼠在免疫当天和48小时后还以腹膜内方式接受200ng百日咳毒素。
[0771] 临床评分：疾病症状的严重程度如下评分(按严重程度增加的顺序)：0＝正常；1＝尾部软弱或后肢无力；2＝尾部软弱和肢无力/两个或更多个肢无力；3＝严重肢无力或单肢瘫痪；4＝两个或更多个肢瘫痪；5＝死亡。
[0772] 药物处置：从第3天直到第21天每天一次向小鼠口服给药媒介物或化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])。给药体积为5ml/kg。化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])以0.3mg/kg、1mg/kg和3mg/kg给药。小鼠每天称重。从第7天开始每天针对疾病症状对小鼠进行监测。在第21天最后一次给药后，每天监测疾病进展且再持续2周。化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])与媒介物相比使疾病症状的严重程度降低，这表明测试化合物对EAE显示出治疗功效。由图10的检查结果显而易见的是，化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])在小鼠EAE测定中显示出活性。
[0773] B.由PLP在小鼠中诱发的EAE
[0774] 动 物：将 雌 性SJL/J小 鼠 (当 研 究 开 始 时 为8至10周 龄 )(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)圈养(四只/笼)并置于湿度受控(40-60％)和温度受控(68-72°F)的12小时:12小时明/暗循环(在早上6:30开灯)实验室中，其中自由进食(Harlan Teklad,Orange,CA,啮齿类动物食物8604)和饮水。使小鼠在试验前适应动物实验室一周。
[0775] EAE的诱发：小鼠用100μg PLP139-151肽[用完全弗氏佐剂以1:1乳化]进行皮下免疫，所述完全弗氏佐剂含有4mg/ml经加热灭活的结核分枝杆菌。小鼠在免疫当天还以静脉内方式接受200ng百日咳毒素。
[0776] 临床评分：疾病症状的严重程度如下评分(按严重程度增加的顺序)：0＝正常；1＝尾部软弱或后肢无力；2＝尾部软弱和肢无力/两个或更多个肢无力；3＝严重肢无力或单肢瘫痪；4＝两个或更多个肢瘫痪；5＝死亡。
[0777] 药物处置：从第3天直到第21天每天一次向小鼠口服给药媒介物或测试化合物。给药体积为5ml/kg。测试化合物以例如1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg给药。小鼠每天称重。从第7天开始每天针对疾病症状对小鼠进行监测。在第21天最后一次给药后，每天监测疾病进展且再持续2周。
[0778] C.由MBP在大鼠中诱发的EAE
[0779] 动物：将雄性路易鼠(Lewis rat)(当研究开始时为325-375g)(Harlan,San Diego,CA)圈养(两只/笼)并置于湿度受控(30-70％)和温度受控(20-22℃)的12小时:12小时明/暗循环(在早上6:30开灯)实验室中，其中自由进食(Harlan Teklad,Orange,CA,啮齿类动物食物8604)和饮水。使大鼠在试验前适应动物实验室一周。
在研究期间每天在上午11点在临床评分前对大鼠进行称重。
在研究期间每天在上午11点在临床评分前对大鼠进行称重。
[0780] EAE的诱发：将髓鞘碱性蛋白(MBP；豚鼠)以1mg/ml的浓度溶解在无菌盐水中，然后用完全弗氏佐剂(1mg/ml)以1:1乳化。50μl该乳液通过足蹠内(ipl)注射而给药到每只大鼠的两个后爪中，其中总注射体积为100μl/大鼠且总剂量为50μg MBP/大鼠。
[0781] 临床评分：每天在称量体重后和在给药药物前对疾病症状的严重程度进行评分。疾病症状的严重程度如下评分(按严重程度增加的顺序)：0＝正常；1＝尾部无力或肢无力；2＝尾部无力和肢无力；3＝严重后肢无力或单肢瘫痪；4＝尾部健康情况丧失和两个或更多个肢瘫痪；5＝死亡。
[0782] 药物处置：在第0天在注射MBP前1小时和在第0天后的每天在临床评分后向大鼠口服给药媒介物或测试化合物且在研究期间如此进行。给药体积为5ml/kg。测试化合物以例如1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg给药。测试化合物与媒介物相比使疾病症状的严重程度降低，这表明测试化合物对EAE显示出治疗功效。
[0783] 实施例6：化合物对I型糖尿病的作用
[0784] 可使用I型糖尿病动物模型例如由环磷酰胺在小鼠中诱发的I型糖尿病 来证实本发明化合物对I型糖尿病具有治疗功效。
[0785] 动物：在实验开始前由9-10周龄雌性NOD/Ltj小鼠(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)得到基线血糖测量结果以确保它们具有正常血糖(血糖为80-120mg/dL)。血糖通过尾部取血使用 计量器和试验条(LifeScan,Milpitas,CA)来测量。
[0786] 由环磷酰胺诱发的I型糖尿病：在第0天和第14天以腹膜内方式向具有正常血糖的NOD小鼠注射溶解在0.9％盐水中的4mg环磷酰胺一水合物(200mg/kg)。如果小鼠患上糖尿病(血糖>250mg/dL)，则在第14天不向它们给药加强剂量的环磷酰胺。
[0787] 药物处置：从第0天直到第25天每天一次向小鼠口服给药媒介物或测试化合物。将化合物混悬在0.5％甲基纤维素媒介物中，其中使用超声波仪以确保均匀混悬。小鼠每周称重两次且根据体重来给药。给药体积为5ml/kg。测试化合物以例如1mg/kg、3mg/kg、
10mg/kg或30mg/kg给药。血糖每周测量两次。在第25天完成给药后，继续监测小鼠且血糖每周测量一次并如此进行3周。测试化合物与媒介物相比促进正常血糖，这表明测试化合物对I型糖尿病显示出治疗功效。
10mg/kg或30mg/kg给药。血糖每周测量两次。在第25天完成给药后，继续监测小鼠且血糖每周测量一次并如此进行3周。测试化合物与媒介物相比促进正常血糖，这表明测试化合物对I型糖尿病显示出治疗功效。
[0788] 实施例7：同种异体移植物存活
[0789] 可如下证实本发明化合物对延长同种异体移植物存活具有治疗功效：证实本发明化合物在动物模型中对延长例如皮肤同种异体移植物存活具有治疗功效。
[0790] 动物：将 雌性Balbc/J 小鼠(当 研究 开始 时为 6至7周龄 )(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)圈养(四只/笼)并置于湿度受控(40-60％)和温度受控(68-72°F)的12小时:12小时明/暗循环(在早上6:30开灯)实验室中，其中自由进食(Harlan Teklad,Orange,CA,啮齿类动物食物8604)和饮水。将雌性C57BL/6小鼠(当研究开始时为8至10周龄)(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)类似地圈养和放置。使小鼠在试验前适应动物实验室一周。
[0791] 皮肤同种异体移植物：在皮肤同种异体移植物移植模型中Balbc/J小鼠和C57BL/6小鼠分别用作供体和受体。对供体Balbc/J小鼠进行麻醉且以手术方式取下直径为0.5cm的完整厚度的腹部皮肤区域。将由Balbc/J小鼠得到的皮肤移植物缝合到经麻醉的受体C57BL/6小鼠的背部上。缝合的同种异体移植物用凡士林油纱布和软垫敷料覆盖7天。将经同种异体移植的小鼠分 成8组(每组8只)。
[0792] 临床评分：每天对皮肤同种异体移植物进行检查并记录数字图像直到出现排斥反应，将所述排斥反应的出现定义为超过80％的移植物发生坏死的第一天。在用苏木精和伊红(H&E)染色的切片上对被排斥的移植物进行组织学分析。在任选的相关研究中在移植后第5天通过流式细胞术对从外周淋巴结和脾中分离的淋巴细胞进行计数并针对活化标志物(例如T细胞活化标志物)进行表征。也在第5天，从经移植的受体中取下移植物，切成小的片段，用胶原酶消化且用Ficoll-Paque(Pharmacia Biotech,Uppsala,Sweden)沉降以分离浸润移植物的淋巴细胞，通过流式细胞术对所述细胞进行计数并针对活化标志物(例如T细胞活化标志物)进行表征。在第5天在用苏木精和伊红(H&E)染色的切片上对移植物进行组织学分析。
[0793] 药物处置：从移植当天直到研究结束(例如直到第14、21或28天)每天一次向小鼠口服给药媒介物或测试化合物。给药体积为5ml/kg。测试化合物以例如1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg给药。测试化合物与媒介物相比使对皮肤同种异体移植物出现排斥的时间延迟，这表明测试化合物对延长皮肤同种异体移植物存活显示出治疗功效。
[0794] 实施例8：化合物对结肠炎的作用
[0795] 可使用结肠炎动物模型来证实本发明化合物对结肠炎具有治疗功效。合适的动物模型是本领域已知的(Boismenu et al,J Leukoc Biol,67:267-278,2000)。第一种示例性结肠炎动物模型为由三硝基苯磺酸(TNBS)诱发的结肠炎，其显示出的临床和组织病理学结果与克罗恩病中的那些临床和组织病理学结果相似(Neurath et al.,J.Exp.Med.,182:1281-1290,1995；Boismenu et al.,J.Leukoc.Biol.,67:267-278,2000)。第二种示例性结肠炎动物模型为由右旋糖酐硫酸酯钠(DSS)诱发的结肠炎，其显示出的临床和组织病理学结果与溃疡性结肠炎中的那些临床和组织病理学结果相似(Okayasu et al.,Gastroenterology,98:694-702,1990；Boismenu et al.,J.Leukoc.Biol.,67:267-278,2000)。化合物在至少由DSS诱发的结肠炎和由TNBS诱发的结肠炎中的功效在商业上可例如通过Jackson Laboratory(Bar Harbor,ME)来测试。
[0796] A.小鼠结肠炎模型
[0797] 动物：将雌性BALB/c小鼠(当研究开始时为6周龄)(Jackson Laboratory, Bar Harbor,ME)圈养(四只/笼)并置于湿度受控(40-60％)和温度受控(68-72°F)的12小时:12小时明/暗循环(在早上6:30开灯)实验室中，其中自由进食(Harlan Teklad,Orange,CA,啮齿类动物食物8604)和饮水。使小鼠在试验前适应动物实验室一周。
[0798] 由TNBS诱发的结肠炎：就基线体重对小鼠进行称重且在当天晚些时候始于6:15pm恰在关灯前禁食(第0天)。下一天早上(第1天)在约7:30am再次称量体重。小鼠用异氟烷麻醉，然后诱发结肠炎。结肠炎在小鼠中如下诱发：使用完全插入肛门的插管针(22g,1.5in)在结肠内注射约150mg/kg TNBS/50％乙醇(体积为150μl)，其中通过尾部将小鼠保持在垂直位。将小鼠再垂直保持30秒以使吸收完全且使泄漏最小化，然后将小鼠放回到其笼中。然后饲喂小鼠，接着禁食约14小时。然后每天上午对小鼠进行称重。在对照实验中，小鼠使用相同的方案来仅接受50％乙醇。
[0799] 药物处置：药物处置在第2天开始。从第2天直到实验结束(例如第7、14或21天)每天一次向小鼠口服给药媒介物或测试化合物。给药体积为5ml/kg。测试化合物以例如1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg给药。
[0800] 临床评分：实验结束后，取出结肠并测量。小鼠用CO2安乐死且取下结肠(从肛门至盲肠)。对所切结肠的全长、从肛门至发炎区域末端的长度和发炎区域(受影响区域)的长度进行测量。测量后，结肠中的粪便通过用盐水冲洗来清洁，然后切开以更充分地清洁。然后对结肠进行称重且保存在中性缓冲福尔马林(NBF；10％福尔马林,pH 6.7-7.0)中。将结肠组织埋在石蜡中且用苏木精和伊红(H&E)对切片进行染色。疾病症状的严重程度如下由经染色的切片进行组织学评分：0＝没有炎症迹象；1＝低水平白细胞浸润(在<10％的高倍视野中观测到浸润)且没有结构改变；2＝中度白细胞浸润(在10％至25％的高倍视野中观测到浸润)且隐窝延伸且肠壁变厚但未延伸超过粘膜层且无溃疡形成；3＝高水平白细胞浸润(在25％至50％的高倍视野中观测到)且隐窝延伸且浸润超过粘膜层且肠壁变厚且表浅性溃疡形成；4＝显著程度的透壁性白细胞浸润(在>50％的高倍视野中观测到)且隐窝延伸和扭曲且肠壁变厚且广泛性溃疡形成。测试化合物与媒介物相比使疾病症状的严重程度降低，这表明测试化合物对结肠炎显示出治疗功效。
[0801] B.大鼠结肠炎模型
[0802] 动物：将雄性Wistar大鼠(当研究开始时为175-200g)(Charles River Laboratories,Wilmington,MA)圈养(两只/笼)并置于湿度受控(40-60％)和温度受控(68-72°F)的12小时:12小时明/暗循环(在早上6:30开灯)实验室中，其中自由进食(Harlan Teklad,Orange,CA,啮齿类动物食物8604)和饮水。使大鼠在试验前适应动物实验室一周。
[0803] 由TNBS诱发的结肠炎：就基线体重对大鼠进行称重且在当天晚些时候始于6:15pm恰在关灯前禁食(第0天)。下一天早上(第1天)在约7:30am再次称量体重。
大鼠用异氟烷麻醉，然后诱发结肠炎。结肠炎在大鼠中如下诱发：使用插入肛门8cm的装配插管针(7.5Fr脐插管和14g针座)在结肠内注射约60mg/kg TNBS/50％乙醇(体积为
500μl)，其中通过尾部将大鼠保持在垂直位。将大鼠再垂直保持30秒以使吸收完全且使泄漏最小化，然后将大鼠放回到其笼中。然后饲喂大鼠，接着禁食约14小时。然后每天上午对大鼠进行称重。在对照实验中，大鼠使用相同的方案来仅接受50％乙醇。
大鼠用异氟烷麻醉，然后诱发结肠炎。结肠炎在大鼠中如下诱发：使用插入肛门8cm的装配插管针(7.5Fr脐插管和14g针座)在结肠内注射约60mg/kg TNBS/50％乙醇(体积为
500μl)，其中通过尾部将大鼠保持在垂直位。将大鼠再垂直保持30秒以使吸收完全且使泄漏最小化，然后将大鼠放回到其笼中。然后饲喂大鼠，接着禁食约14小时。然后每天上午对大鼠进行称重。在对照实验中，大鼠使用相同的方案来仅接受50％乙醇。
[0804] 药物处置：药物处置在第2天开始。从第2天直到实验结束(例如第7、14或21天)每天一次向大鼠口服给药媒介物或测试化合物。给药体积为5ml/kg。测试化合物以例如1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg或30mg/kg给药。
[0805] 临床评分：实验结束后，取出结肠并测量。大鼠用CO2安乐死且取下结肠(从肛门至盲肠)。对所切结肠的全长、从肛门至发炎区域末端的长度和发炎区域(受影响区域)的长度进行测量。测量后，结肠中的粪便通过用盐水冲洗来清洁，然后切开以更充分地清洁。然后对结肠进行称重且保存在中性缓冲福尔马林(NBF；10％福尔马林,pH 6.7-7.0)中。将结肠组织埋在石蜡中且用苏木精和伊红(H&E)对切片进行染色。疾病症状的严重程度如下由经染色的切片进行组织学评分：0＝没有炎症迹象；1＝低水平白细胞浸润(在<10％的高倍视野中观测到浸润)且没有结构改变；2＝中度白细胞浸润(在10％至25％的高倍视野中观测到浸润)且隐窝延伸且肠壁变厚但未延伸超过粘膜层且无溃疡形成；3＝高水平白细胞浸润(在25％至50％的高倍视野中观测到)且隐窝延伸且浸润超过粘膜层且肠壁变厚且表浅性溃疡形成；4＝显著程度的透壁性白细胞浸润(在>50％的高倍视野中观测到)且隐窝延伸和扭曲且肠壁变厚且广泛性溃疡形成。测试化合物与媒介物相比使疾病症状的严重程度降低，这表明测试化合物对结肠炎显示出治疗功效。
[0806] 实施例9：化合物在大鼠中对心脏遥测(cardiac telemetry)的作用
[0807] 动物：Charles River Laboratories(Wilmington,MA)用插到降主动脉中的 压力传感导管在雄性Sprague-Dawley大鼠(当手术时为250-300g)中将心脏传送装置(Data Sciences PhysioTel C50-PXT)植入到腹膜腔中。使大鼠恢复至少一周。将大鼠圈养在单独的笼中并置于湿度受控(30-70％)和温度受控(20-22℃)的12小时:12小时明/暗循环(在早上7:00开灯)实验室中，其中自由进食(Harlan Teklad,Orange,CA,啮齿类动物食物8604)和饮水。使大鼠在试验前适应动物实验室一周。
[0808] 心血管参数的测量：所植入的传送装置传送可自由活动的有意识动物中以下参数的连续测量结果：血压(收缩压、舒张压、平均动脉压和脉压)、心率、体温和运动活性。这些数据经由射频来传送到计算机中，所述计算机使用DataSciences ART软件将所述数据二进化(bin)为1分钟平均值。历时21小时(始于中午并继续直到第二天9:00am)记录遥测结果。一次对最多八只大鼠进行试验且相同的八只大鼠在科目设计中用于所有治疗组。
[0809] 药物处置：在1:00pm以经口方式向大鼠注射媒介物(PEG400)或化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])。完整的研究(媒介物+3个剂量)需要4个分开的试验期，这发生在周一-周二和周四-周五。在每个试验期，将八只大鼠分成四个治疗组，从而就任意给定的试验期而言每组包含n＝2只大鼠。在随后的试验期以交叉设计再次对大鼠进行测试，从而在四个试验期结束后所有动物以假随机顺序接受所有治疗且每组包含n＝8只大鼠。
[0810] 示例性心动过缓测定：明确预期的是，大鼠可用于证实本发明化合物对心动过缓没有或基本没有活性。例如但不限于此，向大鼠给药媒介物(PEG400)或化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])，然后历时120分钟对心率进行测量。结果示于图11中。由图11的检查结果显而易见的是，与媒介物相比，当大鼠响应于用化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])进行的治疗时，心率没有或基本没有降低。心率没有或基本没有降低，这表明化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])对心动过缓不显示出或基本不显示出活性。
[0811] 实施例10：化合物对关节炎的作用
[0812] 雌性路易鼠用于该研究。经适应的动物用异氟烷麻醉且进行第一次胶原注射(第0天)。在第6天，它们被再次麻醉以进行第二次胶原注射。胶原如下制备：在0.01N乙酸中配制浓度为4mg/ml的溶液。等体积的胶原和不完全弗氏佐剂通过手动混合来乳化直到当置于水中时该物质珠粒保持其形式。每只动物每次接受300μl混合物，其中涂铺在背部上的3个皮下部位。
[0813] 治疗(口服,每天,5ml/kg给药体积)在第0天开始且持续到第16天，其中以24小时间隔给药媒介物或化合物。在第0、3、6和9至17天对大鼠进行称重且在第9至17天用测径器对踝进行测量。化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])以0.3、1和3mg/kg给药。结果示于图9中。由图9的检查结果显而易见的是，化合物12的第2种对映异构体(在通过HPLC对化合物12进行拆分后分离到[在实施例1.29中报道的条件下保留时间为13.9分钟])对减小大鼠平均踝直径显示出活性。
[0814] 实施例11：粉末X射线衍射(PXRD)
[0815] 在X’Pert PRO MPD粉末衍射仪(PANalytical,Inc.)上采集粉末X射线衍射(PXRD)数据，其中使用设定在45kV和40mA的Cu源、用于除去Cu Kβ辐射的Ni过滤器和X’Celerator检测器。仪器由供应商使用硅粉末标准品NIST#640c来校准。当其用NIST#675低角度衍射标准品测试时，确定校准是正确的。用于PXRD扫描的样品如下准备：将几毫克经温和研磨的化合物置于样品容器上且用平的物品将称量纸向下压在样品上，从而使样品尽可能平坦。使用旋转样品台对样品进行分析。扫描范围为5°至40°2θ。使用连续扫描模式，其中步长为0.0167°2θ。用X’Pert Data Viewer软件(1.0a版)和X’PertHighScore软件(1.0b版)对衍射数据进行可视化和分析。
[0816] 实施例12：差示扫描量热法(DSC)
[0817] 在TA Instruments,Inc.DSC Q2000上以10℃/分钟从～25℃至～210℃进行差示扫描量热法(DSC)。供应商使用铟标准品的熔点和熔化焓以该扫描速率来校准仪器的温度和能量。样品如下准备：样品盘盖用图钉或其它尖锐工具刺穿并在Mettler Toldeo MX5天平上称量样品盘盖及样品盘底的皮重。将样品置于经称量皮重的样品盘底中。将样品盘盖浮盖于样品盘底上。再次对样品和盘进行称量，得到样品重量。使用Universal Analysis2000软件(4.1D,Build 4.1.0.16版)来计算热事件(起始温度、熔化焓等)。
[0818] 实施例13：热重量分析(TGA)
[0819] 在TA Instruments,Inc.TGA Q500上进行热重量分析(TGA)。供应商使用铁磁性标准品的居里点以10℃/分钟来校准仪器的温度。天平用重量标准品校准。以10℃/分钟从～25℃至～250℃进行样品扫描。将样品置于敞口样品盘(其预先在TGA天平上称量皮重)中。使用Universal Analysis 2000软件(4.1D,Build 4.1.0.16版)来对热事件例如重量损失进行计算。
[0820] 实施例14：蒸汽吸收分析
[0821] 吸湿性使用动态吸湿分析仪(VTI Corporation,SGA-100)来测量。在VTI天平上将样品按原样置于经称量皮重的样品容器中。干燥步骤在40℃和1％RH的条件下进行20分钟。等温条件为在25℃以20％RH的步幅从10％RH上升至90％RH，然后返回到10％RH。每5分钟检查1次重量。在继续进行下一步骤前，需要<0.01％的重量连续变化百分比(％)或2小时(无论哪种情况首先发生)。
[0822] 本领域技术人员应该理解的是，可对本申请描述的说明性实施例进行各种修饰、添加、代替和变化而不背离本发明主旨且因此认为所述修饰、添加、代替和变化在本发明范围内。将上文引用的所有参考文献(包括但不限于公开印刷出版物及临时专利申请和正规专利申请)全文并入本申请作为参考。
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