1.一种液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果的评价方法，包括：(1)样品提取及消毒剂最低有效浓度确定；(2)设备选型及试剂、培养基配制；(3)菌种保藏、活化及菌悬液制备；(4)ATP浓度对数值lgCA-相对荧光强度对数值lgIA标准曲线建立及接种菌液的活菌ATP浓度CA标定；(5)中和剂鉴定及定量悬液试验；(6)回收液相对荧光强度值IA测定；(7)回收液活菌ATP浓度CA和TA推算及杀灭率R和灭菌指数A计算；(8)结果判定；其特征在于，应用ATP荧光光度计对以杀灭率R或灭菌指数A表征的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果进行精准定量评价的ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法，具体的：
在回收液相对荧光强度值IA测定中：
明确样品提取要求，确定消毒剂10min内抑杀指示菌的最低有效浓度，将试验标准菌株进行传代、活化后，取连续转接2次的新鲜细菌培养物制备菌悬液并对其菌数进行初筛，用指示菌种培养液将1.0×10-3mol/L的ATP标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：8.5×-9 -8 -7 -7
10 mol/L、8.5×10 mol/L、8.5×10 mol/L(如果仪器检测上限无法达到10 mol/L量级或高浓度标准曲线的线性较差，可将其ATP浓度系列改为8.5×10-10mol/L、8.5×10-9mol/L、
8.5×10-8mol/L)和1.0×10-11mol/L、1.0×10-10mol/L、1.0×10-9mol/L，并测定其相对荧光强度值IA；绘制两条相应浓度的lgCA-lgIA标准曲线，推导得出曲线方程式Y＝aA0X+bA0(高浓度)、Y＝aAX+bA(低浓度)和线性相关系数RA02(高浓度)、RA2(低浓度)，对细菌总量为6.0×
108CFU/mL的菌悬液进行连续10倍梯度稀释后，测定其相对荧光强度值IA，根据高浓度曲线方程式Y＝aA0X+bA0推算相应的活菌ATP浓度CA；经调整得到CA范围为8.0×10-8mol/L～9.0×
10-8mol/L的接种菌液，然后，以待测消毒剂的最低有效浓度进行中和剂鉴定试验，确定中和剂种类及浓度；同时将3.5mL不同浓度的试验样液和对照样液置于(20±2)℃水浴中并使其与0.5mL接种菌液混合；待灭菌作用持续t1、t2、t3、t4四段不同时间后，将0.4mL染菌样液分别与3.6mL中和剂溶液混合，中和作用进行10min后将其混匀液作为回收液；应用ATP荧光光度计测定回收液的相对荧光强度值 和
并根据低浓度标准曲线方程式Y＝aAX+bA推算相应的活菌ATP
浓度 和
在杀灭率R或灭菌指数A计算中：
根据ATP低浓度标准曲线lgCA-lgIA的线性方程式Y＝aAX+bA，针对t1、t2、t3、t4四段不同灭菌时间，以每次定量悬液试验中各浓度试验样液及对照样液回收活菌的相对荧光强度测定值作为基础数据；计算其对细菌繁殖体的杀灭率 或灭菌指数
并取其五次试验的算术平均值作为相应浓度待测液体消毒剂
样品在相同灭菌时间内对细菌繁殖体的杀灭率 或灭菌指数
同时明确相关数据修约和测量不确定度要求；
在结果判定中：
参考卫生行业通用做法和相关消毒效果生物学评价标准，如果某浓度待测液体消毒剂样液在单次定量悬液试验中，经ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法测得的特定灭菌时间内细菌繁殖体杀灭率≥99.9％或灭菌指数≥3.0，则判定其在此次试验中消毒效果合格，当该浓度待测液体消毒剂样液在5次定量悬液试验中相同灭菌时间内的消毒效果均合格时，方可确定其对细菌繁殖体具有消毒效果的最低浓度和最短时间(在实际应用中以有机物保护试验的最低浓度和最短时间为待测液体消毒剂样品达到实用消毒效果所需的浓度和时间)。
2.根据权利要求1所述的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果的评价方法，其特征在于，所述的样品提取及最低有效浓度确定，按下述步骤进行：
(1)对照样品：以指示菌种培养液作为对照样品；
(2)试验样品：从某生产批号1个完整运输包装中随机抽取1件最小销售包装的液体消毒剂样品，用于中和剂鉴定和定量悬液试验；每组试验样品选择一组对照样品作为参照物并有效标识；
(3)消毒剂样品最低有效浓度的确定：按照待测消毒剂样品使用说明书标注的有效浓度范围，将其用无菌水稀释为高、中、低三个适宜浓度；用灭菌移液枪将3.5mL不同浓度的稀释液分装三支无菌试管，并向各试管中分别滴加0.5mL接种菌液；3000r/min振摇试管30s后，将其置于(20±2)℃水浴中，待试管内溶液温度与水浴温度平衡后开始计时，使消毒剂对细菌繁殖体的杀灭作用持续10min；然后，以其混匀液作为回收液，按照本专利中相对荧光强度值IA测定方法，测定并记录回收液的相对荧光强度值，同时，以3.5mL指示菌种培养液作为对照样品，替代消毒液重复上述杀菌试验及回收液IA测定过程；并依据本专利中杀灭率R计算公式，对不同浓度稀释液的杀灭率进行计算；若某浓度的杀灭率为99.9％，则将此浓度设定为待测消毒剂样品的最低有效浓度。
3.根据权利要求1所述的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果的评价方法，其特征在于，所述的设备选型及试剂、培养基配制，按下述步骤进行：
(1)通用要求：试验用分析纯试剂及符合GB/T 6682-2008规定的三级水(蒸馏水或去离子水)，实验室具备二级生物安全资质，人员具有正规微生物实验室工作经验；
(2)仪器设备：二级生物安全柜；含ATP荧光光度计、配套试剂盒、专用试管等的ATP生物荧光快速检测系统，其中ATP荧光光度计波长量程300nm～650nm，ATP浓度检测范围10-
13mol/L～10-7mol/L；(37±1)℃的恒温培养箱；(10～50)℃±1℃的恒温水浴箱；(121±2)℃、(103±5)kPa的压力蒸汽灭菌器；-20℃～-70℃的低温冰箱；0℃～5℃的冷藏箱；感量
0.001g的电子天平；频率(30～50)kHz的超声波清洗器；转速(500～3000)r/min的旋涡振荡器；精度±0.1(25℃)的pH计；电炉；
(3)材料器具：1mL、10mL的无菌刻度吸管；0.05mL、0.1mL、0.2mL、1mL、5mL、10mL(计量误差小于1％)的单道可变量程移液枪和无菌移液枪头；容量250mL、500mL的无菌锥形瓶；直径
90mm的无菌培养皿；麦氏细菌标准比浊管及配套试管；无菌试管；直径不大于4mm的接种环；
酒精灯；分度值1mm的直尺； 的温度计；精度0.01s的秒表；A6白色复印
纸；0.7mm芯黑色中性笔；
(4)试剂：小牛血清；下列试剂分装后121℃高压灭菌30min，5℃～10℃存放30d：85％的生理盐水；将5g硫代硫酸钠溶于1000mL水(用于氯型消毒剂)；将1.36g磷酸二氢钾、2.83g磷酸氢二钠、10g卵磷脂、10g甘氨酸、30g吐温(80)溶于1000mL水或将1.36g磷酸二氢钾、2.83g磷酸氢二钠、3g卵磷脂、20g吐温(80)溶于1000mL水(用于非氧化型消毒剂)；将20g吐温(80)、1g硫代硫酸钠溶于1000mL磷酸盐缓冲溶液(用于氧型消毒剂)等(或针对待测液体消毒剂样品类型，选择其它相适用的中和剂)；
(5)培养基/液(可用市售培养基/液)：所配培养基/液分装后经121℃高压灭菌15min，2℃～8℃存放30d；
营养琼脂(NA)：将5g牛肉膏、10g蛋白胨、5g氯化钠、15g琼脂加热溶解于1000mL水中，调节pH至7.0～7.2；
营养肉汤(NB)：将3g牛肉膏、10g蛋白胨、5g氯化钠加热溶解于1000mL水中，调节pH至
7.0～7.2；
大肠埃希氏菌/金黄色葡萄球菌培养液：将1:500/1:100的营养肉汤(NB)与85％的无菌生理盐水溶液混合，调节pH至7.0～7.2；
(6)ATP荧光反应试剂(或用市售试剂)：除磷酸盐缓冲溶液外，所配ATP荧光反应试剂-
20℃～-70℃保存，6个月内使用；
稀释缓冲溶液：0.005mol/L且含0.037％蔗糖的磷酸氢二钠溶液，调节pH至7.2±0.2；
121℃高压灭菌15min，2℃～8℃存放30d；
ATP荧光试剂缓冲溶液：将1117mg三羟甲基氨基甲烷、183mg乙二胺四乙酸二钠、808mg乙酸镁、6.7mg二巯基苏糖醇、25000mg的β-环糊精和925mg葡萄糖加热溶解于250mL水中，调节pH至7.5±0.2；8h内使用；
ATP裂解液：将4.6国际单位/ml的三磷酸腺苷双磷酸酶(EC:3.6.1.5)和46国际单位/ml的磷酸腺苷脱氨酶(EC:3.5.4.6或EC:3.5.4.17)、37mg蔗糖、20mg牛血清蛋白溶解于10mL浓度为0.05mol/L的2-吗啉乙磺酸缓冲溶液中，调节pH至6.0±0.5，8h内使用(1mL裂解液在
15min内可将营养肉汤中的ATP浓度降至10-13mol/L以下)；
ATP提取液：将45mg三羟甲基氨基甲烷加热溶解于9.8ml水中，与0.2ml浓度为10％的苯扎氯铵溶液混匀后，调节pH至12.0±0.5；
ATP荧光试剂：将16mg荧光素酶(EC:1.13.12.7)、12.6mg的D-荧光素、56mg牛血清蛋白溶解于30mL的ATP荧光试剂缓冲液中，混匀后室温静置15min，3h内使用。
4.根据权利要求1所述的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果的评价方法，其特征在于，所述的菌种保藏、活化及菌悬液制备，按下述步骤进行：
(1)指示菌种：大肠埃希氏菌ATCC 8099；金黄色葡萄球菌ATCC 6538(或由国家相应菌种保藏管理中心提供并可溯源的其他菌种)；
(2)菌种保藏：以无菌操作打开冻干菌种管，用毛细吸管加入适量营养肉汤，吹吸数次使菌种融化分散，然后，将少许指示菌种悬浮液滴入装有5mL～10mL营养肉汤的试管中，(37±1)℃培养24h～48h；用作斜面保藏菌，(5±1)℃存放(不超过1个月)，接种次数不超过14代；
(3)菌种活化：将斜面保藏菌转接营养琼脂斜面培养基，(37±1)℃培养18h～24h；每天转接1次，连续转接不超过15d，试验使用第3代～第14代且于24h内转接的新鲜细菌培养物；
(4)菌悬液制备：用接种环从菌种活化培养基上刮取少量新鲜细菌，加入适量指示菌种培养液制成菌悬液；1000r/min振摇试管1min或以30cm摆幅振摇试管80次，确保细菌悬浮均匀，将一定量菌液移至与麦氏标准比浊管配套无菌试管中，用0.7mm芯黑色中性笔在A6白色
8
复印纸上划3条长度为10cm的平行线；目测试管与标准比浊管(标称含量6.0×10CFU/mL)的浊度差异，滴加培养液直至二者浊度相同为止。
5.根据权利要求1所述的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果的评价方法，其特征在于，所述的ATP浓度对数值lgCA-相对荧光强度对数值lgIA标准曲线建立及接种菌液的活菌ATP浓度CA标定，按下述步骤进行：
(1)标准系列溶液确定和ATP生物荧光测试样制备：用指示菌种培养液将1.0×10-3mol/L的ATP标准原液稀释为高、低浓度标准系列溶液：8.5×10-9mol/L、8.5×10-8mol/L、8.5×
10-7mol/L(如果仪器检测上限无法达到10-7mol/L量级或高浓度标准曲线的线性较差，可将其ATP浓度系列改为8.5×10-10mol/L、8.5×10-9mol/L、8.5×10-8mol/L)和1.0×10-11mol/L、1.0×10-10mol/L、1.0×10-9mol/L并混匀，然后，用灭菌移液枪将0.1mL的ATP标准系列溶液分别移至三只无菌试管中，依次滴加0.9mL含0.037％蔗糖的磷酸盐缓冲液并混匀；再将
0.1mL不同浓度的混合溶液分别移至三支仪器专用无菌试管中，作为ATP生物荧光测试平行样；
(2)相对荧光强度值IA测定：根据本专利中相对荧光强度值IA测定方法，以指示菌种培养液作为空白样液验证仪器及试剂组本底后；按照浓度从低到高的顺序，向不同浓度ATP标准溶液三个平行样中分别滴加0.1mL的ATP提取试剂，混匀后滴入0.1mL的ATP荧光试剂；再次混匀，立即用ATP荧光光度计测定其相对荧光强度值并记录(确保各环节操作时间一致，避免交叉污染)，每个平行样测定时间不超过15s，以各浓度ATP标准溶液三个平行样相对荧光强度值的算术平均值为其IA测定值；
(3)ATP浓度对数值lgCA-相对荧光强度对数值lgIA标准曲线建立：以ATP标准系列溶液的相对荧光强度对数值lgIA作为横坐标，以其相应的ATP浓度对数值lgCA为纵坐标作图；对二者之间的数学关系进行曲线标定，绘制两条相应浓度的lgCA-lgIA标准曲线；并应用最小二乘拟合法推导得出曲线的线性方程式Y＝aA0X+bA0(高浓度)、Y＝aAX+bA(低浓度)和相关系数RA02(高浓度)、RA2(低浓度)，当RA02及RA2≥0.98、置信水平≥0.95时，按照本专利所做的测定有效；
(4)接种菌液活菌ATP浓度CA标定：按照本专利中相对荧光强度值IA测定方法，对经麦氏比浊法初筛后细菌总量为6.0×108CFU/mL的菌悬液10倍稀释液的相对荧光强度值IA进行测定；根据高浓度标准曲线方程式Y＝aA0X+bA0推算并标定其活菌ATP浓度CA，然后，经指示菌种培养液调整，得到CA范围为8.0×10-8mol/L～9.0×10-8mol/L的接种菌液。
6.根据权利要求1所述的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果的评价方法，其特征在于，所述的中和剂鉴定及定量悬液试验，按下述步骤进行：
(1)中和剂鉴定试验：选取作用10min抑杀指示菌99.9％的消毒剂最低有效浓度作为中和剂鉴定试验的样液浓度，并将1mL试验样液与9mL中和剂溶液混合；作用10min形成中和产物后，进行试验分组如下：将0.5mL接种菌液(与曲线lgCA-lgIA标定用菌液取自同一支指示菌种原液试管，2℃±0.2℃保存，2h内使用)分装五支含3.5mL试验样液(1#、2#)、3.5mL中和# # #
产物溶液(3)、3.5mL指示菌种培养液(4)、3.5mL中和剂溶液(5)的无菌试管中，1000r/min振摇试管10min，使其溶液充分混匀，然后，用灭菌移液枪将0.4mL各组混匀液分装五支含
3.6mL指示菌种培养液(1#、3#、4#、5#)、3.6mL中和剂溶液(2#)的无菌试管中，同时将另外一支无菌试管中的4mL指示菌种培养液作为第6#组试验样液，1000r/min振摇各组试管10min后，将其混匀液作为试验样液的回收液，按照本专利中相对荧光强度值IA测定方法，测定并记录上述6组回收液相对荧光强度值；
(2)中和效果评价：如果第1#、6#组回收液的相对荧光强度测定值IA1≥0、IA6＝0，第2#～
5#组回收液的相对荧光强度测定值之间关系为：IA2≥0且IA2＜IA3、IA2＜IA4、IA2＜IA5；第3#、
4#、5#组回收液的相对荧光强度测定值接近，即IA3≈IA4≈IA5，其按照公式(1)计算得到的活菌ATP浓度CA3、CA4、CA5组间误差率Δ≤10％；说明所选中和剂种类可用于待测液体消毒剂样品细菌繁殖体杀灭效果试验，并依据等当量中和原则，调整中和剂浓度后重复上述中和剂鉴定试验，确定消毒剂试验浓度所对应的中和剂浓度；
式中：
Δ—第3#、4#、5#组回收液的活菌ATP浓度CA3、CA4、CA5组间误差率，％；
IA3、IA4、IA5—第3#、4#、5#组回收液的相对荧光强度测定值，RLU；
—第3#、4#、5#组回收液的活菌平均ATP浓度，其数值为
aA—低浓度标准曲线lgCA-lgIA斜率；bA—低浓度标准曲线lgCA-lgIA在纵轴截距；
(3)定量悬液试验：按照待测消毒剂使用说明中标注的有效浓度和作用时间范围，用无菌水将其稀释为高、中、低三个适宜浓度：C1、C2、C3(C1为产品说明中规定的最低使用浓度)，其中C2＝2C1、C3＝2C2；同时选取四段不同的灭菌时间t1、t2、t3、t4(t2为产品说明中规定的最短作用时间)，其中t1＝0.5t2、t3＝1.5t2、t4＝2t2，然后，用灭菌移液枪将3.5mL不同浓度的试验样液分装三支无菌试管中；并置于(20±2)℃水浴中，待试管内溶液温度与水浴温度平衡后，分别滴加0.5mL接种菌液，3000r/min振摇试管30s后开始计时，当灭菌作用持续至设定的t1、t2、t3、t4四段不同时间后，用灭菌移液枪将0.4mL不同浓度的混匀液分装三支含
3.6mL中和剂溶液的无菌试管中，3000r/min振摇试管30s后开始计时，待中和作用持续
10min后，将其混匀液作为各浓度试验样液的回收液，然后，用指示菌种培养液替代试验样液重复上述试验；
试验重复5次；
然后，将小牛血清加入菌悬液中，使其最终血清含量为10％并确保接种菌液CA为8.0×
10-8mol/L～9.0×10-8mol/L，重复上述定量悬液试验5次；确定待测液体消毒剂样品在有机物存在的条件下，对细菌繁殖体具备消毒效果的有效浓度和时间。
7.根据权利要求1所述的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果的评价方法，其特征在于，所述的回收液相对荧光强度值IA测定，按下述步骤进行：
(1)仪器及试剂组相对荧光强度本底值校准：用灭菌移液枪将0.1mL试验菌种培养液、
0.8mL含0.037％蔗糖的磷酸盐缓冲液和0.1mL的ATP裂解液分别加入同一支无菌试管中并充分混匀，然后将0.1mL上述混和溶液依次移至三支仪器专用无菌试管中，静置5min～
30min，作为空白测试平行样，向三个平行样中分别滴加0.1mL的ATP提取试剂，混匀后滴入
0.1mL的ATP荧光试剂；再次混匀，立即用ATP荧光光度计测定其相对荧光强度值IA并记录(确保各环节操作时间一致，避免交叉污染)，每个平行样测定时间不超过15s，以三个空白测试平行样相对荧光强度值的算术平均值作为仪器和试剂组本底值(或按照仪器使用说明校准本底值)；
(2)回收液相对荧光强度值IA测定：如本底水平符合仪器使用要求，用灭菌移液枪将
0.1mL回收液、0.8mL含0.037％蔗糖的磷酸盐缓冲液和0.1mL的ATP裂解液分别加入同一支无菌试管中，充分混匀后再将0.1mL上述混和溶液依次移至三支仪器专用无菌试管中，静置
5min～30min，作为ATP荧光测试平行样，向三个平行样中分别滴加0.1mL的ATP提取试剂，混匀后滴入0.1mL的ATP荧光试剂；再次混匀，立即用ATP荧光光度计测定其相对荧光强度值IA并记录(确保各环节操作时间一致，避免交叉污染)，每个平行样测定时间不超过15s，以三个ATP荧光测试平行样相对荧光强度值的算术平均值作为待测样品回收液的IA测定值(或使用仪器配套试剂盒，按照相关使用说明书要求，直接上机测定样品回收液三个平行样的相对荧光强度值IA)。
8.根据权利要求1所述的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果的评价方法，其特征在于，所述的回收液活菌ATP浓度CA和TA推算以及杀灭率R和灭菌指数A计算，按下述步骤进行：
(1)回收液的活菌ATP浓度CA和TA推算
根据ATP低浓度标准曲线lgCA-lgIA的线性方程式Y＝aAX+bA，推算各次不同浓度的试验样液及对照样液经t1～t4四段灭/染菌时间后，回收液的活菌ATP浓度CA和TA，相关计算(使用仪器配套试剂盒时，根据其实际进样量推算1mL回收液的活菌ATP浓度CA及TA)见公式(2)～(9)：
式中：
—每次不同浓度的试验样液经四段灭菌时间后回收活菌的
ATP浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—每次不同浓度的试验样液经四段灭菌时间后，回收活菌
的相对荧光强度测定值，RLU；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
aA—低浓度标准曲线lgCA-lgIA斜率；bA—低浓度标准曲线lgCA-lgIA在纵轴截距；
—每次不同浓度的对照样液经四段染菌时间后回收活菌的
ATP浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—每次不同浓度的对照样液经四段染菌时间后，回收活菌
的相对荧光强度测定值，RLU；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
(2)杀灭率R计算
在中和剂鉴定结果合格的条件下,每次不同浓度的试验样液在四段灭菌时间内对细菌繁殖体的杀灭率 以及相应浓度的待测液体消毒剂样品在同一
灭菌时间内的杀灭率 分别按照公式(10)～(17)计算：
式中：
—每次不同浓度的试验样液在四段灭菌时间内对细菌繁殖
体的杀灭率，％；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—相应浓度的待测液体消毒剂样品在四段灭菌时间内对细菌
繁殖体的杀灭率，％；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—每次不同浓度的对照样液经四段染菌时间后回收活菌的
ATP浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—每次不同浓度的试验样液经四段灭菌时间后回收活菌的
ATP浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—每次不同浓度的试验样液经四段灭菌时间后，回收活菌
的相对荧光强度测定值，RLU；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—每次不同浓度的对照样液经四段染菌时间后，回收活菌
的相对荧光强度测定值，RLU；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
aA—低浓度标准曲线lgCA-lgIA斜率；
(3)灭菌指数A的计算
在中和剂鉴定结果合格的条件下，每次不同浓度的试验样液在四段灭菌时间内对细菌繁殖体的灭菌指数 以及相应浓度的待测液体消毒剂样品在同
一灭菌时间内的灭菌指数 分别按照公式(18)～(25)计算：
式中：
—每次不同浓度的试验样液在四段灭菌时间内对细菌繁殖
体的灭菌指数；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—相应浓度的待测液体消毒剂样品在四段灭菌时间内对细菌
繁殖体的灭菌指数；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；；
—每次不同浓度的对照样液经四段染菌时间后回收活菌的
ATP浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—每次不同浓度的试验样液经四段灭菌时间后回收活菌的
ATP浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—每次不同浓度的试验样液经四段灭菌时间后，回收活菌
的相对荧光强度测定值，RLU；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
—每次不同浓度的对照样液经四段染菌时间后，回收活菌
的相对荧光强度测定值，RLU；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,3；
aA—低浓度标准曲线lgCA-lgIA斜率；
(4)数据修约要求：在标定ATP标准溶液浓度以及接种菌液、回收液的活菌ATP浓度CA时，参考GB 4789.2—2016中有关菌落数的数据修约规定；当CA小于100mol/L时，“四舍五入”取整数；当CA不小于100mol/L时，第3位数字“四舍五入”后取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式表示，“四舍五入”后采用两位有效数字，试验样液及对照样液经四段灭/染菌时间后，回收液的相对荧光强度测定值取整数，对细菌繁殖体的杀菌率计算结果取三位有效数字，灭菌指数计算结果取两位有效数字；
(5)测量不确定度：本专利方法通过计算5次定量悬液试验中不同浓度的试验样液和对照样液经四段不同的灭/染菌时间后，其回收液15个ATP荧光测试平行样相对荧光强度测定值的变异系数C·V＝σ÷μ×100％(μ、σ和C·V计算结果保留到小数点后两位)；判断将ATP生物荧光分析法应用于液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果测试的重现性，规定变异系数C·V≤10％，相关计算见公式(26)～(33)：
式中：
—经t1、t2、t3、t4四段不同灭菌时间后，5次试验中同一
浓度 的 试验 样 液1 5 个A T P荧 光 测试 平行 样的 相对 荧光 强 度 测定 值的算术平均值；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,
2,3；平行样编号k＝1,2,3；
—经t1、t2、t3、t4四段不同灭菌时间后，5次试验中同一
浓度的试验样液的回收液15个ATP荧光测试平行样相对荧光强度测定值
的标准偏差；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,2,
3；平行样编号k＝1,2,3；
—经t1、t2、t3、t4四段不同染菌时间后，5次试验中同一
浓度 的 对照 样 液1 5 个A T P荧 光 测试 平行 样的 相对 荧光 强 度 测定 值的算术平均值；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,
2,3；平行样编号k＝1,2,3；
—经t1、t2、t3、t4四段不同染菌时间后，5次试验中同一
浓度的对照样液的回收液15个ATP荧光测试平行样相对荧光强度测定值
的标准偏差；试验次数i＝1,2,3,4,5；浓度序号j＝1,
2,3；平行样编号k＝1,2,3；
9.根据权利要求1所述的液体消毒剂细菌繁殖体杀灭效果的评价方法，其特征在于，所述的结果判定，按下述步骤进行：
参考卫生行业通用做法和相关消毒效果生物学评价标准，如果某浓度待测液体消毒剂样液在单次定量悬液试验中，经ATP生物荧光lgCA-lgIA标准曲线法测得的特定灭菌时间内细菌繁殖体杀灭率≥99.9％或灭菌指数≥3.0，则判定其在此次试验中消毒效果合格，当该浓度待测液体消毒剂样液在5次定量悬液试验中相同灭菌时间内的消毒效果均合格时，方可确定其对细菌繁殖体具有消毒效果的最低浓度和最短时间(在实际应用中以有机物保护试验的最低浓度和最短时间为待测液体消毒剂样品达到实用消毒效果所需的浓度和时间)。