中药特征指纹谱的建立及其应用
阅读：593发布：2023-01-16
专利汇可以提供中药特征指纹谱的建立及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及中药技术领域。具体涉及一种中药特征指纹谱的建立及其应用。用本发明方法建立的特征指纹谱不仅能用于含有相同有效成分的不同中药间区分和 鉴别 ，并能用于品种的鉴定，还能为中成药所含药味的鉴定提供依据。，下面是中药特征指纹谱的建立及其应用专利的具体信息内容。
1.一种中药特征指纹谱的建立，其特征在于该指纹谱的建立包括下 列步骤：
(1)标准药材的选取，收集业经生药鉴定的该品种药材五个以 上的批号，能有更多的批号则更佳，因为考虑到生物样品的个体差异， 只有在相当数量的样品中，才能清楚地显现出它的特征，此时还需注 意中药样品批号的含义，除样品的产地、采收时间和季节，以及药用 部位外，气侯的影响，储运保管条件以及某些人为因素均应顾及，因 此样品批号宜多不宜少；
(2)规范化的操作条件和步骤：应从两方面的工作于以规范化， 一是样品的预处理，生物样品都需经预处理后方能进行色谱分析，预 处理的方法有多种，例如超声萃取，加热萃取，pH萃取等各种萃取 技术，二是萃取样品量的大小和样品粉碎程度，以及萃取液是否再经 处理等因素，总之所有样品处理过程都必须保持一致以保证样品液的 分析具有良好的精密度、正确性、重现性和相互间的可比性；
(3)最佳色谱条件的建立：色谱条件包括色谱柱、流动相、检 测器等的选择，要建立良好色谱条件使中药样品中所含之成分尽可能 地获得分离，也即分得的色谱峰愈多愈好，可以说是多多益善，使中 药的内在特性都显现出来，为鉴定提供足够的信息，色谱柱的选择可 根据中药所含的主要成分而定，例如含生物碱类化合物为主的中药， 可选用离子交换柱；含多糖类化合物为主的中药可选用凝胶柱，含甾 体类化合物为主的中药可选用c-18反相柱；......等，流动相的组成 除应考虑化合物的性质外，因为中药所含成分多而杂，采用常规的等 梯度洗脱难以使各种性质的成分获得分离，使色谱图中所出现的峰数 较少，不能给出足够的鉴定所需的信息，在大多数的情况下以采用梯 度洗脱为宜，在合适的梯度条件下，使性质差异较大的各种化合物均 被分离，可充分提供鉴定所需的信息，分得的色谱峰越多越有利于鉴 定，目前可供选择的检测器，在气相色谱中有氢火焰离子化检测器 (FID)、热导检测器(TCD)、电子捕获检测器(ECD)、火焰光度检 测器(FPD)等，其中以FID最为常用，凡以碳、氢、氧等元素组成 的有机化合物均可被检出，对中药所含之挥发性成分的分析是十分有 效的，在高效液相色谱中有可变紫外-可见光(UV-VIS)检测器、荧 光检测器、电化学检测器、示差折射检测器(RID)、蒸发光散射光 检测器(ELSD)等，其中紫外-可见光检测器用得较多，适宜于化合 物中有共轭双键的成分分析，而大量的不含共轭双键的化合物不能被 检出，近十年来，ELSD检测器的发展，使中药中甾体类、皂甙类、 多糖类等化合物均可采用ELSD作检测；
(4)特征指纹的确立：对上述五个以上批号的标准药材，在优 化的提取条件下制备供试液，以及在最佳色谱条件下进行分析，每个 样品同品种的中药五个以上的批号，分别进样三次，由此获得五个批 号样品的十五张色谱图，并转化为十五张色谱指纹谱，现将这十五张 色谱指纹谱中的相对保留值汇集并列成表，以便选择特征色谱峰来建 立特征指纹。
表I 色谱指纹谱汇集表(面积归一化值) 药材 α 0.084 0.100 0.109 0.128 0.141 0.168 0.198 0.222 0.252 0.284 0.404 0.446 0.496 1 0.33 0.15 0.36 1.04 0.89 1.30 1.12 0.60 0.74 0.45 0.96 2 0.45 0.38 0.38 1.06 0.82 1.26 1.08 0.49 0.73 0.40 1.01 3 0.26 0.24 0.45 1.10 0.84 1.31 1.07 0.48 0.75 0.51 1.15 4 0.33 0.29 0.89 0.78 0.98 1.01 0.71 0.69 0.49 5 0.15 0.47 0.34 0.92 0.70 0.96 1.05 0.65 0.72 0.52 0.99 6 0.40 0.26 0.90 0.68 0.99 0.99 0.73 0.70 0.51 0.97 7 0.07 0.75 0.32 0.41 1.11 0.92 0.90 0.98 0.57 0.81 0.39 0.93 0.89 8 0.03 0.68 0.28 0.37 1.09 0.88 0.94 0.96 0.64 0.78 0.43 0.88 0.96 9 0.70 0.09 0.34 1.06 0.95 0.94 0.96 0.64 0.76 0.45 0.75 1.03 10 0.89 0.21 0.22 0.84 0.76 1.15 1.18 0.70 0.77 0.57 1.08 11 0.17 0.72 0.18 0.27 0.90 0.88 1.18 1.17 0.65 0.71 0.50 1.12 12 0.04 0.77 0.16 0.18 0.92 0.80 1.20 1.17 0.66 0.73 0.52 0.92 0.96 13 0.22 0.29 0.90 0.86 1.24 1.18 0.68 0.75 0.44 0.86 0.88 14 0.01 0.30 0.48 0.96 0.87 1.24 1.19 0.67 0.79 0.42 0.94 1.00 15 0.36 0.50 0.99 0.82 1.20 1.23 0.65 0.78 0.41 1.05 共有样 品数 9 6 15 15 15 15 15 15 15 15 15 6 14 药材 α 0.548 0.576 0.684 0.804 0.895 1.000 1.127 1.289 1.356 1.419 1.506 1.573 1.607 1.790 1 0.32 0.28 1.000 1.01 0.03 0.30 1.67 2 0.54 0.21 1.000 0.93 0.07 0.28 1.54 1.31 3 0.40 0.25 1.000 0.90 0.05 0.32 1.60 1.28 4 1.94 0.20 1.000 0.88 0.40 1.81 0.02 1.35 5 1.88 0.24 1.000 0.78 0.38 1.76 0.03 1.30 6 2.00 0.27 1.000 0.84 0.41 1.70 0.01 1.32 7 0.40 1.56 0.30 1.000 0.94 0.35 1.59 1.44 8 0.32 1.66 0.26 1.000 1.04 0.36 1.63 1.41 9 0.38 1.66 0.25 1.000 0.61 0.37 1.67 1.29 10 0.77 1.000 0.21 0.67 0.28 1.56 1.48 11 0.23 0.70 1.000 0.18 0.73 0.30 1.65 1.45 12 0.27 0.75 1.000 0.12 0.86 0.29 1.71 1.47 13 0.26 1.000 0.87 0.31 0.32 1.78 1.35 14 0.20 1.000 1.01 0.31 0.34 1.76 1.37 15 0.22 1.000 1.04 0.33 0.35 1.74 1.33 共有样 品数 3 6 3 14 3 15 3 15 3 3 15 15 3 14 药材 α 1.820 1.882 2.002 2.056 2.166 2.222 2.300 2.397 2.560 2.670 2.735 2.966 3.021 3.140 3.238 1 0.66 1.530 1.44 0.11 0.34 0.38 0.24 2 0.63 0.54 1.590 1.50 0.10 0.36 0.41 0.02 0.28 3 0.65 0.55 1.530 1.46 0.09 0.38 0.42 0.22 4 0.77 0.74 0.60 1.480 1.25 0.11 0.37 0.45 5 0.75 0.73 0.58 1.41 0.08 0.40 0.43 6 0.68 0.76 0.57 1.450 1.42 0.09 0.35 0.41 7 0.78 0.63 0.04 1.430 1.48 0.10 0.39 0.39 8 0.80 0.62 1.400 1.49 0.08 0.11 0.33 0.41 0.01 9 0.81 0.59 1.550 1.51 0.10 0.34 0.41 0.02 10 0.63 0.10 0.66 1.570 1.43 0.08 0.38 0.35 11 0.65 0.11 1.600 1.45 0.07 0.35 0.38 12 0.61 0.15 0.68 1.580 1.46 0.10 0.40 0.39 13 0.60 0.68 1.500 1.21 1.51 0.09 0.16 0.33 0.40 14 63.00 0.67 1.510 1.15 1.53 0.08 0.13 0.37 0.43 0.06 15 0.63 1.53 1.20 1.50 0.10 0.15 0.36 0.43 共有样 品数 3 14 3 13 1 14 3 15 1 15 3 15 15 3 4 药材 α 3.298 3.384 3.460 3.526 3.580 3.742 3.789 3.822 3.902 4.068 4.179 4.436 4.503 4.579 1 0.67 1.10 0.58 0.50 0.06 2 0.65 0.09 1.14 0.57 0.56 0.04 0.78 0.05 0.03 3 0.68 0.11 1.19 0.60 0.53 0.03 0.77 4 0.66 0.61 1.740 0.79 5 0.67 0.60 1.700 0.27 0.80 0.93 6 0.69 0.59 1.760 0.76 0.80 7 0.66 0.57 0.31 0.44 0.78 8 0.65 0.56 0.29 0.77 9 0.67 0.58 0.28 0.47 0.79 10 0.60 0.76 0.01 11 0.70 0.61 0.03 0.81 12 0.69 0.60 0.01 0.79 13 0.67 0.59 0.16 0.78 14 0.71 0.60 0.18 0.76 15 0.69 0.61 0.13 0.77 共有样 品数 14 2 3 15 3 3 2 5 4 3 14 3 1 1 药材 α 4.632 5.175 5.530 5.650 5.764 1 2.14 0.12 2 2.18 0.08 3 2.20 0.09 4 2.08 0.66 5 2.10 0.67 6 2.14 0.63 7 1.96 0.07 8 1.98 0.04 9 2.06 0.10 10 0.04 2.10 11 0.03 1.94 0.83 12 0.01 1.99 0.88 13 2.00 14 2.09 15 2.07 共有样 品数 3 15 5 3 3
总峰数：61
2.一种如权利要求1所述的一种中药特征指纹谱在中药品种鉴定、 中药区分和鉴别及中成药所含药味的鉴定中的应用。
技术领域
本发明涉及中药分析方法，具体涉及一种中药特征指纹谱的建立 及其应用。
发明背景
中药的鉴定是比较复杂的工作，色谱指纹谱的诞生，为中药的鉴 定指出了新的研究方向。色谱指纹谱是将波动性较大的色谱图转换成 稳定性较好的数据化色谱指纹谱。本发明人曾在《中药质量标准的现 代化与色谱指纹谱》世界科学科技技术——中药现代化2000年第二 卷第六期第20页，《从中医药中来，回到中医药中去》上海中医药杂 志2000年第一期第7页，《中药质量控制的新技术、新趋势——数据 化的色谱指纹谱》现代中医药2001年第一期第28页，《柴胡属19种 植物挥发油的GC分析》药学学报1988年(11)839，《GC-FPS在 檀香木质量研究中的应用》上海中医药大学学报1990(2)54，《HPLC 相对保留值指纹谱鉴别大黄》中国中药杂志(11)650，《麝香质量标 准初探》中国中药杂志1991(4)230上公开了色谱指纹谱的建立情 况。但由于中药及其产品的组分十分复杂，如何根据色谱分析所提供 的大量信息对它们进行鉴定和进行质控，建立质标，目前尚无可行、 可信的方法，是中药现代化必须解决的问题。色谱峰的分离状况是否 完全，每个色谱峰是否只包含一个组分等等，还存在一定的问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于利用色谱分析提供的信息，创建一 整套原理来解决上述问题，根据中药生物品在色谱指纹谱中所反映的特 性和共性，构成中药生物体所特有的指纹，来鉴定中药和鉴别中成药所 含药味。
本发明提供了一种中药特征指纹的建立及根据特征指纹进行鉴 定时所运用的计算公式和相关术语、定义。
现将特征指纹的选择原则和操作步骤叙述于下。
(1)标准药材的选取，收集业经生药鉴定的该品种药材五个以上 的批号。能有更多的批号则更佳。因为考虑到生物样品的个体差异， 只有在相当数量的样品中，才能清楚地显现出它的特征。此时还需注 意中药样品批号的含义，除样品的产地、采收时间和季节，以及药用 部位外，气侯的影响，储运保管条件以及某些人为因素均应顾及。因 此样品批号宜多不宜少。
(2)规范化的操作条件和步骤：应从两方面的工作于以规范化。 一是样品的预处理，生物样品都需经预处理后方能进行色谱分析。预 处理的方法有多种，例如超声萃取，加热萃取，pH萃取等各种萃取 技术。二是萃取样品量的大小和样品粉碎程度，以及萃取液是否再经 处理等因素，总之所有样品处理过程都必须保持一致以保证样品液的 分析具有良好的精密度、正确性、重现性和相互间的可比性。
(3)最佳色谱条件的建立：色谱条件包括色谱柱、流动相、检测 器等的选择。要建立良好色谱条件使中药样品中所含之成分尽可能地 获得分离，也即分得的色谱峰愈多愈好，可以说是多多益善，使中药 的内在特性都显现出来，为鉴定提供足够的信息。色谱柱的选择可根 据中药所含的主要成分而定，例如含生物碱类化合物为主的中药，可 选用离子交换柱；含多糖类化合物为主的中药可选用凝胶柱，含甾体 类化合物为主的中药可选用c-18反相柱；......等。流动相的组成除 应考虑化合物的性质外，因为中药所含成分多而杂，采用常规的等梯 度洗脱难以使各种性质的成分获得分离，使色谱图中所出现的峰数较 少，不能给出足够的鉴定所需的信息。在大多数的情况下以采用梯度 洗脱为宜。在合适的梯度条件下，使性质差异较大的各种化合物均被 分离，可充分提供鉴定所需的信息。分得的色谱峰越多越有利于鉴定。 目前可供选择的检测器，在气相色谱中有氢火焰离子化检测器(FID)、 热导检测器(TCD)、电子捕获检测器(ECD)、火焰光度检测器(FPD) 等，其中以FID最为常用，凡以碳、氢、氧等元素组成的有机化合物 均可被检出，对中药所含之挥发性成分的分析是十分有效的。在高效 液相色谱中有可变紫外-可见光(UV-VIS)检测器、荧光检测器、电 化学检测器、示差折射检测器(RID)、蒸发光散射光检测器(ELSD) 等。其中紫外-可见光检测器用得较多，适宜于化合物中有共轭双键 的成分分析，而大量的不含共轭双键的化合物不能被检出。近十年来， ELSD检测器的发展，使中药中甾体类、皂甙类、多糖类等化合物均 可采用ELSD作检测。
(4)特征指纹的确立：对上述五个以上批号的标准药材，在优化 的提取条件下制备供试液，以及在最佳色谱条件下进行分析，每个样 品同品种的中药五个以上的批号，分别进样三次，由此获得五个批号 样品的十五张色谱图，并转化为十五张色谱指纹谱。现将这十五张色 谱指纹谱中的相对保留值汇集并列成表(见表1)，以便选择特征色 谱峰来建立特征指纹。
表1 色谱指纹谱汇集表(面积归一化值) 药材 α 0.084 0.100 0.109 0.128 0.141 0.168 0.198 0.222 0.252 0.284 0.404 0.446 0.496 1 0.33 0.15 0.36 1.04 0.89 1.30 1.12 0.60 0.74 0.45 0.96 2 0.45 0.38 0.38 1.06 0.82 1.26 1.08 0.49 0.73 0.40 1.01 3 0.26 0.24 0.45 1.10 0.84 1.31 1.07 0.48 0.75 0.51 1.15 4 0.33 0.29 0.89 0.78 0.98 1.01 0.71 0.69 0.49 5 0.15 0.47 0.34 0.92 0.70 0.96 1.05 0.65 0.72 0.52 0.99 6 0.40 0.26 0.90 0.68 0.99 0.99 0.73 0.70 0.51 0.97 7 0.07 0.75 0.32 0.41 1.11 0.92 0.90 0.98 0.57 0.81 0.39 0.93 0.89 8 0.03 0.68 0.28 0.37 1.09 0.88 0.94 0.96 0.64 0.78 0.43 0.88 0.96 9 0.70 0.09 0.34 1.06 0.95 0.94 0.96 0.64 0.76 0.45 0.75 1.03 10 0.89 0.21 0.22 0.84 0.76 1.15 1.18 0.70 0.77 0.57 1.08 11 0.17 0.72 0.18 0.27 0.90 0.88 1.18 1.17 0.65 0.71 0.50 1.12 12 0.04 0.77 0.16 0.18 0.92 0.80 1.20 1.17 0.66 0.73 0.52 0.92 0.96 13 0.22 0.29 0.90 0.86 1.24 1.18 0.68 0.75 0.44 0.86 0.88 14 0.01 0.30 0.48 0.96 0.87 1.24 1.19 0.67 0.79 0.42 0.94 1.00 15 0.36 0.50 0.99 0.82 1.20 1.23 0.65 0.78 0.41 1.05 共有样 品数 9 6 15 15 15 15 15 15 15 15 15 6 14 药材 α 0.548 0.576 0.684 0.804 0.895 1.000 1.127 1.289 1.356 1.419 1.506 1.573 1.607 1.790 1 0.32 0.28 1.000 1.01 0.03 0.30 1.67 2 0.54 0.21 1.000 0.93 0.07 0.28 1.54 1.31 3 0.40 0.25 1.000 0.90 0.05 0.32 1.60 1.28 4 1.94 0.20 1.000 0.88 0.40 1.81 0.02 1.35 5 1.88 0.24 1.000 0.78 0.38 1.76 0.03 1.30 6 2.00 0.27 1.000 0.84 0.41 1.70 0.01 1.32 7 0.40 1.56 0.30 1.000 0.94 0.35 1.59 1.44 8 0.32 1.66 0.26 1.000 1.04 0.36 1.63 1.41 9 0.38 1.66 0.25 1.000 0.61 0.37 1.67 1.29 10 0.77 1.000 0.21 0.67 0.28 1.56 1.48 11 0.23 0.70 1.000 0.18 0.73 0.30 1.65 1.45 12 0.27 0.75 1.000 0.12 0.86 0.29 1.71 1.47 13 0.26 1.000 0.87 0.31 0.32 1.78 1.35 14 0.20 1.000 1.01 0.31 0.34 1.76 1.37 15 0.22 1.000 1.04 0.33 0.35 1.74 1.33 共有样 品数 3 6 3 14 3 15 3 15 3 3 15 15 3 14 药材 α 1.820 1.882 2.002 2.056 2.166 2.222 2.300 2.397 2.560 2.670 2.735 2.966 3.021 3.140 3.238 1 0.66 1.530 1.44 0.11 0.34 0.38 0.24 2 0.63 0.54 1.590 1.50 0.10 0.36 0.41 0.02 0.28 3 0.65 0.55 1.530 1.46 0.09 0.38 0.42 0.22 4 0.77 0.74 0.60 1.480 1.25 0.11 0.37 0.45 5 0.75 0.73 0.58 1.41 0.08 0.40 0.43 6 0.68 0.76 0.57 1.450 1.42 0.09 0.35 0.41 7 0.78 0.63 0.04 1.430 1.48 0.10 0.39 0.39 8 0.80 0.62 1.400 1.49 0.08 0.11 0.33 0.41 0.01 9 0.81 0.59 1.550 1.51 0.10 0.34 0.41 0.02 10 0.63 0.10 0.66 1.570 1.43 0.08 0.38 0.35 11 0.65 0.11 1.600 1.45 0.07 0.35 0.38 12 0.61 0.15 0.68 1.580 1.46 0.10 0.40 0.39 13 0.60 0.68 1.500 1.21 1.51 0.09 0.16 0.33 0.40 14 63.00 0.67 1.510 1.15 1.53 0.08 0.13 0.37 0.43 0.06 15 0.63 1.53 1.20 1.50 0.10 0.15 0.36 0.43 共有样 品数 3 14 3 13 1 14 3 15 1 15 3 15 15 3 4 药材 α 3.298 3.384 3.460 3.526 3.580 3.742 3.789 3.822 3.902 4.068 4.179 4.436 4.503 4.579 1 0.67 1.10 0.58 0.50 0.06 2 0.65 0.09 1.14 0.57 0.56 0.04 0.78 0.05 0.03 3 0.68 0.11 1.19 0.60 0.53 0.03 0.77 4 0.66 0.61 1.740 0.79 5 0.67 0.60 1.700 0.27 0.80 0.93 6 0.69 0.59 1.760 0.76 0.80 7 0.66 0.57 0.31 0.44 0.78 8 0.65 0.56 0.29 0.77 9 0.67 0.58 0.28 0.47 0.79 10 0.60 0.76 0.01 11 0.70 0.61 0.03 0.81 12 0.69 0.60 0.01 0.79 13 0.67 0.59 0.16 0.78 14 0.71 0.60 0.18 0.76 15 0.69 0.61 0.13 0.77 共有样 品数 14 2 3 15 3 3 2 5 4 3 14 3 1 1 药材 α 4.632 5.175 5.530 5.650 5.764 1 2.14 0.12 2 2.18 0.08 3 2.20 0.09 4 2.08 0.66 5 2.10 0.67 6 2.14 0.63 7 1.96 0.07 8 1.98 0.04 9 2.06 0.10 10 0.04 2.10 11 0.03 1.94 0.83 12 0.01 1.99 0.88 13 2.00 14 2.09 15 2.07 共有样 品数 3 15 5 3 3 总峰数：61
列表的原则与鉴定原则相同，首先设定一窗口，设定为1％，即 各样品中相对保留值的差异在1％的范围内者，可列于同一项中，可 认为它们是相同化合物的色谱峰。表中α值为该项中相对保留值的平 均值，表格中数字为色谱峰的归一化面积值。
表1清楚地表明了有些色谱峰可在所有样品中均存在，而有些色 谱峰则不然，仅在部分样品中出现。那些所有样品中均存在着的色谱 峰可以认定是这品种所特有，由于它们并非系一、二个色谱峰，而是 有相当数量的一大群色谱峰所构成，对一个个色谱峰称为特征指纹 峰，由一大群特征指纹峰构成了特征指纹。由此实现了从多组分的角 度来反映中药样品的内在特征。因此，根据中药的色谱指纹谱中的特 征指纹来判别和鉴定中药时，使它的结论将具有更客观、更科学和更 公正的特点。
特征指纹峰的入选条件，首先应是全部样品所共有，其次是百分 之九十以上样品所共有者，在比较分散的情况下，可以考虑百分之八 十以上样品所共有者。另外，已被认定是这类药材的有效成分或特殊 成分。例如麝香中的麝香酮，牛膝中的齐墩果酸，何首乌中的白藜芦 醇甙，细辛中的黄樟醚、黄芪中的黄芪甲甙。这些成分有些是药效成 分，有些是能获得其标准品的特征成分。它们的存在对药物的鉴定具 有重要的意义。在表1中也看到有些色谱峰仅为个别或少数中药样品 所含有，可认为是样品的个体差异或其他特殊情况，对中药的品种鉴 定无实质性意义，作模糊处理，可予以忽略。此外，尚需考虑特征指 纹峰在总数中所占比例，如所占比例较小，则说明只抓小头放了大头。 因此要求特征指纹中色谱峰数目以大于总数的百分之六十为宜。如达 不到该指标，说明在取样中存在问题，即所选的这些标准药材间有较 大差异，需进一步探究它们的来源，包括品种的基源，产地，采集时 间，药用部位，保存方式和时间等诸因素。也需对操作步骤，色谱条 件，数据处理等诸方面进行复核。还需指出，由于中药为生物样品， 其指纹特征不可能一成不变，随着时日变迁，尽管都是同一品种、统 一产地，相同采集、保管方式，但生物体的变异是绝对的。所以，对 特征指纹要经常修正。建议，在做鉴定时应随行由中国药品生物制品 检定所提供的标准药材同步测试，使统一在国家标准范围内。按上述 原则所确立的特征指纹和对各待鉴药材的鉴定情况列于表2。
表2 七个药材的特征指纹谱鉴定表 *α 0.109 0.128 0.141 0.168 0.198 0.222 0.252 0.284 0.404 0.496 0.804 1.000 1.289 1.506 1.573 1.790 1.882 2.050 **Ar 0.272 0.342 0.978 0.830 1.120 1.089 0.632 0.747 0.460 1.003 0.246 1.000 0.874 0.336 1.678 1.368 0.691 0.615 ***特征指纹值 0.15 0.38 1.24 0.89 1.34 1.12 0.59 0.74 0.45 0.96 0.28 1.000 0.21 0.34 1.67 1.35 0.77 0.67 ****特征指纹 差异率 0.448 0.111 0.268 0.072 0.196 0.028 0.066 0.009 0.022 0.043 0.138 0 0.760 0.012 0.005 0.013 0.114 0.089 鉴1 0.40 1.20 0.95 1.41 1.22 0.65 0.80 0.51 0.50 0.93 0.34 1.00 0.30 0.46 1.81 1.49 1.83 0.79 0.470 2.509 0.028 0.699 0.089 0.403 0.266 0.317 0.087 0.073 0.382 0 0.657 0.369 0.078 0.089 1.648 0.284 鉴2 0.32 0.53 0.99 0.95 1.25 0.98 0.71 0.82 0.39 0 0.30 1.00 0.25 0.38 1.72 1.28 0 0.72 0.176 0.550 0.012 1.440 0.116 0.100 0.123 0.098 0.152 1.000 0.219 0 0.714 0.131 0.025 0.640 1.000 0.171 鉴3 0.09 0.33 1.34 0.95 1.40 1.07 0.57 0.81 0.43 0.98 0.30 1.00 0.18 0.29 1.59 1.29 0.83 0.64 0.669 0.035 0.370 0.144 0.250 0.017 0.098 0.084 0.065 0.023 0.219 0 0.794 0.137 0.052 0.057 0.201 0.040 鉴4 0 0.32 1.20 0.81 1.29 1.10 0.68 0 0 0 0 1.00 0 0 0 0 0 0 1.000 0.064 0.227 0.024 0.152 0.010 0.076 1.000 1.000 1.000 1.000 0 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 鉴5 0.13 0 1.22 0.93 1.38 1.08 0.58 0.83 0.40 1.00 0.31 1.00 0.25 0.30 1.56 1.31 1.20 1.50 0.522 1.000 0.247 0.120 0.232 0.008 0.082 0.111 0.130 0.003 0.260 0 0.714 0.107 0.070 0.042 0.736 1.439 鉴6 0.21 0.40 1.19 0.70 1.27 1.10 0 0.70 0.48 0.90 0.20 1.00 0.23 0.35 1.70 1.31 0.75 0.63 0.228 0.169 0.001 0.156 0.134 0.010 1.000 0.063 0.043 0.102 0.187 0 0.737 0.041 0.013 0.042 0.085 0.024 2.222 2.397 2.670 2.966 3.021 3.298 3.581 4.179 5.175 合计 特征指纹检出率 总差异率 重叠率 1.518 1.456 0.094 0.356 0.406 0.676 0.591 0.779 2.068 27 1.53 1.44 0.11 0.34 0.38 0.67 0.60 0.78 2.14 27 100％ 0.008 0.011 0.170 0.045 0.064 0.009 0.015 0.001 0.035 0.102 0.102％ 100％ 1.59 1.50 0 0.40 0.45 0.71 0.58 0.70 2.18 26 96％ 0.047 0.030 1.000 0.123 0.108 0.050 0.018 0.101 0.054 0.370 0.370％ 83.3％ 1.53 1.40 0.11 0.39 0.43 0.69 0.61 0.75 0 24 89％ 0.008 0.038 0.170 0.095 0.059 0.021 0.032 0.037 1.000 0.231 0.231％ 74.3％ 1.48 1.35 0.08 0.29 0.41 0.63 0.55 0.70 1.98 27 100％ 0.250 0.073 0.149 0.185 0.010 0.068 0.069 0.101 0.042 0.135 0.135％ 89.5％ 0 1.25 0 0.48 0.39 0 0 0 0 10 37％ 1.000 0.141 1.000 0.248 0.039 1.000 1.000 1.000 1.000 0.669 0.669％ 54.0％ 1.48 1.38 0.08 0.31 0.41 0.70 1.76 0.72 2.15 26 96％ 0.025 0.052 0.149 0.129 0.010 0.035 1.978 0.075 0.039 0.308 0.308％ 85.7％ 1.60 1.40 0.07 0.30 0.35 0.66 0.58 0.84 1.94 26 96％ 0.054 0.038 0.255 0.157 0.138 0.023 0.018 0.078 0.062 0.143 0.143％ 85.3％
*α-标准药材特征指纹峰的相对保留值。
**Ar-标准药材特征指纹峰的归一化面积均值。
***特征指纹值—国家标准药材特征指纹归一化面积值。
*****特征指纹差异率—国家标准药材与标准药材特征指纹归一化面 积值差异率。
表2以某中药为例，列出了经统计处理后标准药材的特征指纹及 每个特征指纹峰的面积归一化均值，同时还列出了国家标准药材和6 个待检药材的特征指纹与标准药材的差异率和总差异率以及各药材 的特征指纹检出率。该表将各项重要的鉴定参数综合在一起，便于分 析研究。表2充分显示了国家标准药材在指纹谱鉴定中的良好表现， 其总差异率为0.102％，特征指纹检出率为100％，重叠率也为100％； 而待鉴药材4，其总差异率为0.669％，特征指纹检出率为37％，重叠 率为54％，将被判为不合格品种。为了直观地看到鉴定的情况，还可 以特征指纹为基准，绘出他们的差异率折线图，见图一。
本发明又提供了上述一种中药特征指纹谱的相似率和差异率。
以上内容所涉及的共有峰、重叠峰、n强峰、特征指纹和归一化 面积值等参数分别从定性鉴别和量化描述两个方面反映了中药样品 的内在特性。但在对中药作出明确的鉴定时，尚需有数据作依据。为 此需将上述各项参数按其贡献予以综合表达。
相似率和差异率是一个表示待检药材与标准药材间的相似程度 的数据，它将定性信息与定量数据综合于一体，作为最终鉴定的重要 依据。
相似率，是以特征指纹为基础，对此求出待检药材与标准药材间 相似或差异，通过它可显示出两者在特征指纹上的相似性。首先计算 每个特征指纹间的相似率，见下式：
某个特征指纹的相似率＝AI鉴/AI标*100％
然后对所有的特征指纹相似率求和得其总相似率，见下式：
总相似率＝∑(AI鉴/AI标)/n...........................................(1)
Ai鉴：待检药材中某个特征指纹的归一化面积值
Ai标：标准药材中某个特征指纹的归一化面积值
n：特征指纹的总数
∑：求和符号
按(1)式计算时，可能会遇到下列两种情况，当Ai鉴都小于 Ai标时，结果很清楚，其求和后之相似率比小于“1”，其间各值在 求和过程中虽有一定的“拉平”作用，但这都是在标准以下的平均。 但若出现多个Ai鉴大于Ai标时，且大出好几倍时，该求和过程已不 再是拉平作用，而变成“填平”作用，因为它可以将许多小坑，即较 小的差异都填平了，这有违于建吕相似率时的原意。此外，按相似率 的含义，当相似率等于1时，表示两者完全相同；若小于1时，则表 示两者的相似程度；当大于1时，就不易解释清楚了。为能客观地表 示待检药材的鉴定结果，在此基础上提出了差异率的概念。差异率的 定义是以每个特征指纹峰与其相应的标准特征指纹峰的面积归一化 值间的比值来表示两者间的差异程度，总差异率则是将每个特征指纹 峰的差异率求和即得总差异率愈大，表示比较双方相差愈大，说明 待检药材不可能是欲鉴定的品种，而总差异率愈小，则为欲鉴定品种 的可能性愈大。另外，待鉴药材与标准特征指纹相比较，可得到特征 指纹检出率，此也是表示差异的重要数据。现对每个特征指纹计算其 差异率，计算式如下：
特征指纹差异＝|AI标-AI鉴|AI标........................................(2)
材中无某个相应的特征指纹时，Ai鉴＝0，则该特征指纹差异率为 1；若Ai标＜Ai鉴时，则取绝对值。因此，在计算总差异率时是所有 差异的求和，避免了填平作用，能客观地反映待鉴药材的差异情况， 总差异率可按下式计算：
总差异率＝∑(|AI标-AI鉴|/AI标)/n..................................(3)
本发明所要解决的另一技术问题是提供了上述一种中药特征指 纹谱的应用。
共有峰和重叠率是中药鉴定中的重要参数，也是构成色谱指纹谱 的基础。共有峰是重叠率的基础，它反映了待鉴药材中有多少成分与 标准药材相同，显示了两者间的相似程度。可以说，在所有涉及的参 数中，重叠率是最全面、最客观地反映了两个参与比较药材间的相似 或差异。由于所有的色谱峰均被计入重叠率计算之中，因此一些反映 个体特性的色谱峰也计入，这对品种的鉴定将会造成一定的干扰使重 叠率偏低。这情况在前期的应用中已时有遭遇，有些药材在鉴定过程 中证明其与标准药材同样含有那些有效成分、主要成分(含量较高的 成分)或指标成分、特殊成分，在内在特性的重要内容方面是相符的， 但两者的重叠率较低。此时若轻率地作出否定的结论，显然不合适。 若能将反映个体差异的色谱群予以模糊处理使品种的特征被显示出 来，则将会得到更真实的鉴定结果。
特征指纹，是模糊处理的结果，作为植物种属的代表性特征。使 进一步的鉴定工作更客观和合理，必须有一规范化的设计。首先是取 材问题，要有几个批号的标准药材，所谓几个批号是指同一产地和不 同产地在不同的取样点取多批样品。样本数大小的问题，原则上是愈 大愈好，一般说来，应符合统计学的要求，至少5个以上，建议在 20左右，使符合中药质量分析要求。因此使特征指纹并非得自某一 标准药材，而是十个、二十个样品的统计值，特别是每个α值所对应 的面积归一化只是个样品的均值，其次是标准化的色谱操作条件，以 增强其可比性。
特征指纹峰检出率，这是在鉴定工作中经常用的，即在待鉴药材 与特征指纹作比较时，能在待鉴药材中找到的特征指纹峰数与特征指 纹峰总数的比值。
特征指纹检出率＝待鉴药材中的特征指纹峰数/特征指纹峰总数
该检出率是鉴定药材时的重要依据，检出率达100％者，说明该 药材在内在品质的主要方面已达到该品种的质量要求，但这还不能作 为鉴定的唯一依据，尚需对其所含各特征指纹峰进一步作量的方面考 察，以保证药用的安全性。
特征指纹的差异率，特征指纹的检出率，仅指明了特征指纹峰的 有或无，“无”为零是显而易见的，“有”则究竟有多少，这也是个重 要的问题，在目前，一不知它们为何物，二不具有它们的标准品，怎 样进行量化。显然，不可能绝对定量，但相对定量是完全可能的。上 节对差异率和总差异率均已有详细说明，具体的运作可见下章所列各 例。特别提请读者注意的是，在中药鉴定过程中会遇到各种特殊情况， 需谨慎处之。
特征指纹曲线
特征指纹曲线是由特征指纹和各指纹峰相应的面积归一化值所 构成，以曲线图的方式说明某中药特征指纹的情况。它是一种直观图， 以曲线的形式同时将每个特征指纹峰的质和量显示出来。如在同一坐 标系统内将待鉴药材与相应标准的特征指纹峰同时显示出来，则将清 楚地看到两者的相似程度。虽然，这是一种直观感觉，进一步的阐明 尚有赖于其它参数的应用，但他对鉴定的结果可起到良好的辅助作 用。
特征指纹的用途不仅限于含有相同有效成分的不同中药间区分 和鉴别，而主要用于品种的鉴定，因为同属不同品种间的区分和鉴定 需要更多而细致的信息，特征指纹正好满足这一要求。特征指纹还能 为中成药所含药味的鉴定提供依据，解决了长期来一直令人困惑的难 题。它不仅可以明确地告知该味中药的存在与否，还能区分掺伪作假 或误用同属植物。
附图说明 图1 黔岭淫羊藿叶(贵州黔岭山)HPLC图谱 图2 黔岭淫羊藿叶(上海市药材公司)HPLC图谱 图3 黔岭淫羊藿茎(贵州黔岭山)HPLC图谱 图4 巫山淫羊藿叶茎(贵州)HPLC图谱 图5 巫山淫羊藿根(陕西安康)HPLC图谱 图6 巫山淫羊藿茎(陕西安康)HPLC图谱 图7 巫山淫羊藿叶(陕西安康)HPLC图谱 图8 煎叶淫羊藿茎(陕西安康)HPLC图谱 图9 煎叶淫羊藿叶(陕西安康)HPLC图谱 图10 煎叶淫羊藿叶(安徽)HPLC图谱 图11 煎叶淫羊藿茎(安徽)HPLC图谱 图12 煎叶淫羊藿叶茎(广西灵山)HPLC图谱 图13 宝兴淫羊藿叶(云南)HPLC图谱 图14 宝兴淫羊藿茎(云南)HPLC图谱 图15 宝兴淫羊藿叶茎(湖南)HPLC图谱 图16 柔毛淫羊藿茎(四川灌县)HPLC图谱 图17 柔毛淫羊藿叶(四川灌县)HPLC图谱 图18 朝鲜淫羊藿叶(河南洛阳)HPLC图谱 图19 朝鲜淫羊藿叶茎(辽宁)HPLC图谱 图20 朝鲜淫羊藿叶茎(青海药检所)HPLC图谱 图21 淫羊藿叶茎(江苏无锡)HPLC图谱 图22 淫羊藿叶茎(浙江临安)HPLC图谱 图23 淫羊藿叶茎(陕西)HPLC图谱 图24 1号样品生半夏的HPLC图谱 图25 2号样品生半夏的HPLC图谱 图26 3号样品生半夏的HPLC图谱 图27 4号样品生半夏的HPLC图谱 图28 5号样品制半夏的HPLC图谱 图29 6号样品制半夏的HPLC图谱 图30 11号样品制半夏的HPLC图谱
具体实施方式 实施例1
植物样品 1.北柴胡 Bupleurum chinense DC 2.多枝柴胡 B.polycloxum Y.LIetS.L.Pan 3.线叶柴胡 B.angustissmum[Franch]Ditagawa 4.窄竹叶柴胡 B.margInatum Wall.Ex DC var stenophyllum
[Wolff]shan et Li 5.泸西柴胡 B.luxiense Y.LI et S.L.Pan 6.丽江柴胡 B.rocfkiI Wolff 7.韭叶柴胡 B.kunmingense Y.Li et S.L.Pan 8.小柴胡 B.hamiltonii Belak 9.空心柴胡 B.longicaule Woll.ex DC.var.franchetii de Boiss 10.柴首柴胡 B.chaIshoui Shan et Sheh 11.红柴胡 B.scorzonerifolIum Willa 12.汶川柴胡 B.wenchuanse Shau et Y.Li 13.马尔康柴胡 B.malconense Shan et Y.Li 14.黑柴胡 B.Smithii Wolff 15.大苞柴胡 B.euphorbIoIdes Nakai 16.小叶黑柴胡 B.Smithii Wolff var.parvIfoluim Shan et Y.Li 17.竹叶柴胡 B.marginatum Wall.ex DC 18.大叶柴胡 B.1ongiradiatum Turcz 19.青海柴胡 B.qinghaiense Y.Li et Guo sp.nov.
样品制备
分别取上述19种植物样品粗粉各300克，以水蒸汽蒸馏法提取 挥发油，然后配成1％乙醚溶液备用。
仪器及色谱条件
仪器 GC-R1A[日本-岛津]
色谱条件 色谱柱Chromosorb W AW DMCS 10％PEG-20M；
柱温 170c 进样温度 220c
载气 N2 40ml/min 检测器 FID
灵敏度 1 衰减 2
进样量 0.5微升 分析时间 60min
定量方法 面积归一化法
气相色谱相对保留值指纹谱的建立
由于植物挥发油的组成十分复杂，色谱峰多而密集，难以插入一 个合适的外参照物。为此，本研究采用内参照物，选择一个在19个 挥发油样品中均存在的成分作为内参照烽，它的出峰时间接近中心出 峰时间，又与邻近组分能较好地分离，且有一定的峰面积。按前面章 节所介绍的方法对各样品中之待定内参照峰进行定位，即在19个样 品中分别加入相同的标准品，分别进样分析，由所得色谱数据求出各 样品中待定位内参照峰与加入标淮品的相对保留值，核对各样品的α 值使它们的内参照峰获得正确定位，保证所有的样品色谱指纹谱均建 立在统一内标峰的基础上，大大增强了它们间的可比性。在建立色谱 指纹谱时，首先将各色谱峰的相对保留值按大小依次排队，并在每个 α值项下标出该色谱峰所对应的相对百分含量。随即得到某样品的 GC-相对保留值指纹谱，见表3。
表3 GC-FPS of species of Bupleurum genus Sample No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Relative retention value 0.046 0.052 0.057 0.062 0.066 0.070 0.081 0.086 0.093 0.098 0.109 0.118 0.130 0.140 0.147 0.155 0.166 0.173 0.184 0.195 0.209 Content(％) 0.90 21.3 4.15 6.32 7.57 4.90 35.2 0.52 1.87 21.8 0.14 3.10 11.7 0.11 5.40 6.13 0.47 2.30 133 0.31 0.23 21.6 0.60 0.88 1.65 2.17 7.97 0.58 7.87 0.39 17.3 20.6 18.4 5.70 1.70 0.04 0.69 1.71 0.24 5.60 0.40 7.19 2.36 2.30 2.04 0.22 1.17 18.7 2.90 2.95 6.77 1.64 0.23 6.90 0.38 0.49 4.36 1.69 3.51 12.2 2.25 1.30 0.30 0.09 0.10 0.30 0.20 0.80 0.12 0.38 0.21 0.53 0.66 0.17 0.07 0.65 0.01 0.91 0.87 0.90 1.30 0.20 2.05 0.05 2.10 0.64 0.60 0.44 0.27 1.32 7.80 0.30 0.80 5.02 0.37 3.40 0.30 0.53 0.57 0.13 0.05 0.14 0.08 0.70 0.40 0.39 0.33 0.20 0.31 3.39 0.75 4.74 0.43 1.52 0.82 2.00 1.04 3.90 0.70 2.90 2.77 3.50 0.90 5.60 3.66 2.52 2.19 2.50 0.96 0.70 1.52 0.25 0.70 0.52 1.20 0.50 2.30 3.37 0.95 0.86 1.35 1.56 1.96 1.10 0.83 0.35 1.16 0.80 1.06 0.91 1.42 0.81 0.24 1.94 8.37 1.20 1.76 0.45 1.62 1.40 4.40 15.2 1.71 1.11 0.90 3.61 1.51 7.76 1.61 5.41 3.00 7.80 1.46 2.10 5.40 9.85 5.06 6.40 4.12 0.80 0.65 1.68 2.81 134 3.44 4.65 3.38 10.1 6.09 2.80 1.40 5.10 1.10 1.80 2.14 1.21 2.31 1.81 7.49 0.90 Peak number 6 7 7 12 6 16 8 3 18 11 14 13 17 10 8 4 3 13 7 12 10
表3 GC-FPS of species of Bupleurum genus continued Sample No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Relative retention value(a) 0.222 0.229 0.252 0.274 0.291 0.310 0.321 0.350 0.370 0.397 0.423 0.459 0.478 0.497 0.535 0.550 0.602 0.660 0.715 0.737 0.788 Content(％) 8.30 13.5 4.80 0.94 16.5 1.46 0.80 4.00 6.40 2.66 4.00 3.35 2.30 18.3 1.71 0.89 4.92 0.70 3.36 1.60 1.30 4.20 1.19 2.70 6.11 0.62 9.19 5.29 7.16 3.29 12.0 4.30 3.51 2.40 1.32 1.50 1.50 1.94 3.59 2.49 3.97 4.85 9.66 12.5 2.30 1.70 3.80 3.55 2.05 0.60 3.73 3.40 1.57 1.47 2.58 3.87 0.60 3.47 1.60 0.88 0.48 2.67 2.95 4.90 2.29 0.80 2.80 1.66 0.95 0.90 0.83 1.84 1.73 1.97 2.37 1.90 2.04 0.20 1.06 0.73 3.07 1.11 8.60 1.41 0.99 1.89 0.80 1.30 4.20 6.70 0.20 4.84 2.30 1.12 4.22 1.81 11.0 1.86 0 80 0.50 0.65 0.50 0.80 0.96 0.65 0.77 0.24 1.53 0.82 0.50 0.30 0.60 0.30 1.37 0.40 0.22 0.28 0.46 0.06 0.04 0.11 0.61 0.25 0.77 0.29 0.60 0.40 0.53 1.96 0.44 0.05 0.50 0.06 0.01 0.46 1.70 0.92 0.03 0.05 0.08 0.40 0.02 0.31 2.05 0.37 0.38 2.30 5.72 0.20 2.10 0.70 1.20 5.27 4.91 0.85 0.87 2.58 1.00 2.90 2.20 2.12 1.80 0.50 3.40 1.21 2.72 1.82 0.26 0.40 0.05 0.30 0.30 0.30 0.53 0.42 0.26 0.15 1.06 0.03 14.6 10.9 0.60 22.6 2.65 6.20 4.10 4.90 13.8 11.2 9.68 2.97 7.22 2.39 2.82 3.22 11.7 4.37 2.10 5.21 0.90 0.70 1.99 0.70 1.70 1.79 3.00 4.47 2.30 0.45 3.33 2.05 0.91 0.20 4.01 2.13 0.90 1.81 1.80 2.10 0.80 0.60 4.20 2.92 9.22 1.33 0.73 1.97 1.00 3.77 4.47 3.56 0.50 Peak number 5 13 14 12 14 6 10 13 10 13 10 16 4 7 12 8 12 19 14 4 16
表3 GC-FPS of specieS of Bupleurum genus continued Sample No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Relative retention value Peak Number Content(％) 0.88 0.10 2.03 0.82 1.21 1.70 0.20 0.06 1.50 0.37 1.30 21.6 4.30 1.75 9.60 5.91 15.0 7.20 25.0 20.4 15.4 8.56 1.76 9.93 14.8 3.29 5.66 5.20 2.24 2.10 22.97 20.27 20.25 19.96 20.34 20.64 20.07 20.16 20.29 20.41 20.15 21.42 21.83 22.41 22.45 22.27 22.32 22.42 22.02 0.70 0.26 1.96 1.03 1.63 1.54 0.67 2.29 0.44 1.33 0.20 2.39 0.03 4.03 2.90 1.60 2.10 1.02 2.55 0.60 2.28 0.27 0.20 0.30 10.1 2.58 4.40 3.51 0.40 3.89 0.58 0.35 2.72 1.86 1.27 1.70 2.59 0.60 0.37 0.25 1.29 0.48 0.59 0.56 0.90 0.31 1.69 0.24 0.14 5.14 3.10 0.30 1.40 2.96 2.10 4.30 6.07 5.20 2.47 0.67 2.52 1.79 5.67 0.23 2.21 0.75 0.70 1.48 3.70 4.40 1.31 0.32 0.46 0.30 0.80 0.40 1.01 4.86 0.32 1.24 8.06 0.62 0.42 18.3 3.19 0.84 5.08 3.00 2.90 2.41 16.0 2.00 4.81 5.10 4.61 4.75 0.74 3.19 1.79 4.50 1.87 2.10 1.39 1.20 0.39 2.13 1.30 3.10 4.90 1.70 0.90 1.61 2.50 2.61 3.84 0.48 2.06 0.56 0.22 2.54 1.12 3.30 0.85 5.21 1.10 1.60 1.69 3.10 3.36 1.36 0.71 7.55 0.39 1.09 0.71 1.72 1.12 3.00 4.56 3.20 1.90 2.00 3.10 2.07 3.33 1.12 0.27 1.88 1.04 0.33 0.44 2.23 32 32 30 32 32 31 28 32 34 32 35 31 26 37 33 41 35 33 30 Peak number 6 1 4 19 11 12 9 11 6 18 7 11 1 18 1 16 14 14 3
由表3所列数据可看到许多有意义的情况。首先，19个样品所 显示的色谱峰是有差异的，其中有的仅为少数样品所共有，甚至仅为 某个样品所独有。当然，其中也有为18或19个样品所共有的，显示 了柴胡属或某个品种植物的特征。
指纹谱的各项参数
重叠率 以北柴胡的指纹谱为基准，将北柴胡出峰数与欲对比样 品出峰数之和作为分母，两者相互共有峰数之两倍作分子，以此分别 求出18种柴胡属植物挥发油色谱峰的重叠率，见表4。由表列数据 可知，一般柴胡属植物的重叠率均低于70％，仅14号，16号，18 号，19号四个样品超过70％。因此需格外关注这四个样品的其它指 纹谱参数。
表4 柴胡属植物与北柴胡的重叠率 样品序号 重叠率 序号 重叠率 样品序号 重叠率 2 56.3 8 59.4 14 78.3 3 64.5 9 48.5 15 61.3 4 59.6 10 59.4 16 74 5 62.5 11 68.6 17 62.7 6 63.5 12 50.8 18 75.8 7 66.7 13 58.6 19 74.2
八强峰综合各样品的出峰情况，出峰总数为68，大部分样品 的出峰数在32个左右，其中有两个样品的差异较大，小叶黑柴胡出 峰多达41个，马尔康柴胡最少，仅26个。因此在决定n强峰时，规 定n＝8。现将19个样品的八强峰情况列表于下。
表5 柴胡属19个样品的八强峰 产品 1 2 3 4 5 6 7 8 序号 ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α 1 21.6 1.00 14.6 .660 5.72 .535 5.21 .715 5.14 1.44 5.08 1.80 4.12 .195 3.51 .274 2 18.4 .066 10.9 .660 8.30 .222 7.80 .184 5.40 .057 4.30 1.00 3.90 .130 3.10 1.44 3 35.2 .052 21.6 .062 5.60 .070 4.40 .173 2.40 .274 1.90 .350 1.75 1.00 1.70 .291 4 22.6 .660 15.2 .173 9.60 1.00 5.10 .209 4.20 .525 4.20 .366 4.00 .229 3.80 .291 5 13.5 .222 7.19 .070 6.13 .057 5.91 1.00 5.70 .066 5.21 2.20 5.02 .109 4.90 2.07 6 16.0 1.80 15.0 1.00 6.70 .370 6.40 .229 6.20 .660 3.50 .130 3.20 2.35 2.90 1.16 7 7.20 1.00 4.80 .222 4.10 .660 3.40 .109 2.30 .070 2.10 .098 2.00 1.80 1.90 2.35 8 25.0 1.00 6.07 1.44 4.90 .660 4.86 .159 4.84 .370 4.81 1.80 4.40 1.54 2.58 1.20 9 20.4 1.00 13.8 .660 5.60 .130 5.40 .184 5.20 1.44 5.10 1.80 4.40 1.20 4.20 .788 10 15.4 1.00 11.2 .660 9.85 .184 6.11 .252 4.61 1.80 4.47 .715 3.66 1.30 3.51 1.20 11 9.68 .660 9.22 .788 8.56 1.00 8.06 1.59 4.91 .535 4.75 1.80 4.22 .370 3.84 2.07 12 21.3 .046 18.7 .070 16.5 .222 5.06 .184 3.39 .118 2.97 .660 2.19 .130 2.17 .062 13 18.3 .229 13.4 .195 11.0 .370 9.93 1.00 7.22 .660 4.36 .081 3.37 .140 3.19 1.80 14 14.8 1.00 13.3 .057 9.19 .252 7.97 .062 7.76 .173 4.15 .046 3.87 .291 3.59 .274 15 18.3 1.59 8.60 .350 7.55 2.20 5.67 1.44 5.29 .252 4.74 .118 4.65 .195 4.50 1.80 16 21.8 .052 7.87 .062 7.16 .252 6.77 .070 6.32 .046 5.66 1.00 5.41 .173 3.97 .274 17 12.2 .081 11.7 .660 10.1 .195 7.57 .046 5.20 1.00 4.92 .229 4.85 .274 3.29 .252 18 17.3 .062 12.0 .252 9.66 .274 7.49 .209 6.40 .184 6.09 .195 4.90 .046 4.37 .660 19 20.6 .062 12.5 .274 11.7 .052 8.37 .155 6.90 .070 4.90 .310 4.30 .252 3.00 .173
结果与讨论
由于北柴胡的样品批号太少，仅一个，无法从统计角度得出其特 征指纹，只能直接从各样品与北柴胡的重叠率和八强峰间的比较来判 断它们与北柴胡的相似程度。虽然显得较粗糙，但还是能说明一定问 题。有四个样品，14，16，18，19等，它们与北柴胡的重叠率均超 过70％，说明它们所含的组分与北柴胡很相似，但从八强峰观之，则 差异较大。说明主要组分的含量有较大差异，因此，在作品种鉴定时 将可据此给出待鉴样品非北柴胡的结沦。以有毒的大叶柴胡[18号] 为例，其重叠率高达75.8％，其八强峰中有三个与北柴胡相同，但三 者在大叶柴胡的挥发油总量中仅占20.1％，说明该三个组分并非是大 叶柴胡挥发油的主成分。八强峰的比较结果明确显示了两者间的差 异，为鉴定堤供判断依据。又，当判定青海柴胡为柴胡属植物的新种 时，单凭外形鉴定感到困难，色谱指纹谱将为此堤供必要的证明。青 海柴胡虽有高达74.2％的重叠率，但在八强峰的比较中仅一个与北柴 胡相同，其量仅为12.5％，据此判断青海柴胡为柴胡属植物的一个新 种。
表3的指纹谱还提供了各色谱峰在19个样品中的出现情况，其 中α值为0.66和1.00两个色谱峰系19种植物挥发油所共有的组分， α值为1.44和1.80两个色谱峰为18个样品所共有，α值为0.13色 谱峰为17种样品所共有，α值为0.070，0.788，和2.07三个色谱峰 系16种样品所共有。这些色谱峰可以考虑作为柴胡属植物挥发油的 特征峰，并可认作柴胡属植物的特征指纹。至於北柴胡的特征指纹必 须从多个批号的样品获得[见下节内容]。但此处所得结伦与以下章 节内容也是相互呼应的。
柴胡属植物的HPLC相对保留值指纹谱研究
本研究在上海医科大学生药教研室的支持配合下，提供了十九个 不同产地的北柴胡和柴胡属二十五个品种共四十五个样品，为研究工 作的开展创造了不可多得的机会，在此再次向潘胜利教授表示深深的 感谢和由衷的敬意。下列各样品不仅给出了它们的学名，并标出了它 们的产地。特别是十九个不同产地的北柴胡样品形成了不同批号的样 品，为北柴胡的指纹谱研究提供了极好的机会，使北柴胡样品的色 谱指纹谱具有统计意义，并大大增强了特征指纹的适应性，实用性， 代表性。其它的柴胡属植物样品，例如窄竹叶柴胡有来自五个产地的 样品，银州柴胡有来自四个产地的样品，线叶柴胡有来自三个产地的 样品，红柴胡[窄叶柴胡]有来自三个产地的样品，小叶黑柴胡有来自 八个产地的样品，多枝柴胡和锥叶柴胡也各有二个产地的样品。这为 同品种不同产地的样品间的比较提供了可能，也为今后建立GMP基 地提供重要的信息和选择产地的依据。现将各样品按不同品种分列于 下：
柴胡属植物样品
1.北柴胡B.chinese D C共十九个样品 编号 1 31 32 33 34 35 产地 石家庄 福州 泉州 西安 厦门 洛阴 编号 36 37 38 39 40 41 产地 天津 沈阳 庆安 赞皇 郑州 高安 编号 42 43 44 45 46 47 产地 萍乡 承德 武汉 阜阳 太原 南宁 编号 48 产地 临安
2.窄竹叶柴胡B.marginatum var.stenophyllum共五个样品 编号 14 55 56 57 58 产地 会泽 广州 电白 南宁 柳州
3.银州柴胡B.yinchowense共四个样品 编号 4 27 59 60 产地 吴中 合水 黑水 镇宁
4.线叶柴胡B.angustissimum共三个样品 编号 3 28 64 产地 固阳 包头 礼县
5.狭叶柴胡[红柴胡]B.scorzonerifolium共三个样品 编号 8 62 63 产地 天津 金华 承德
6.锥叶柴胡B.bicaule共二个样品 编号 5 65 产地 锡林浩特 锥叶
7.多枝柴胡B.polyclomum共二个样品 编号 11 61 产地 会泽 多枝
8.小叶黑柴胡B.smithii var.parvifolium 编号 6 29 49 50 51 52 产地 同仁 榆中 榆中 包头 同仁 银川 编号 53 54 产地 玉山 天祝
9.其他不同品种柴胡共十八个样品 编号 样品品种 产地 2 大叶柴胡B.longiradiatum 通化 7 黑柴胡B.smithii 沈阳 9 阿尔泰柴胡 乌鲁木齐 10 四川柴胡B.sIchuanense 汶川 12 韭叶柴胡B.kunmIngense 昆明 13 泸西柴胡B.luxiense 建水 15 川滇柴胡B.candollei 会泽 16 柴首柴胡B.chaishoui 汶川 17 空心柴胡B.longicaule var 毕节
franchetii 18 汶川柴胡B.wenchuanense 汶川 19 丽江柴胡B.rockii 丽江 20 细茎有柄柴胡B.petiolulatum 丽江
var.tenerum 21 小柴胡B.hamiltonii 昆明 22 矮小柴胡 昆明 23 马尔康柴胡B.malconense 汶川 24 黄花鸭跖柴胡B.commelynoideum
var.flavifloum湟中 湟中 25 三岛柴胡B.falacatum 日本 26 韩国柴胡 韩国
标品与试剂
标准品 柴胡皂甙A，C，D[简写为Ssa，SSc，SSd]购自中国药
品生物制品检定所
试剂 甲醇，乙晴[以上均为色谱纯试剂]，呲啶，氨水[以上均
为A.R.级试剂]，重蒸水
标品与样品液的制备
柴胡皂甙单体标准品溶液的制备
准确称取柴胡皂甙A，C，D标准品各约1mg，用甲醇溶解后分 别置于1ml容量并中，定容至刻度。
柴胡皂甙混合标准品溶液的制备
准确称取柴胡皂甙A，C，D标准品5.10mg，5.15mg，5.255mg， 用甲醇溶解后置于5ml容量瓶中，定容至刻度。
柴胡样品溶液的制备
分别取各编号已干燥的柴胡样品适量，粉碎，过20目筛。准确 称取各样品粗粉0.25mg，置10ml容量瓶中，加5％氨水-甲醇溶液 8ml，润湿0.5小时，定容至10ml，密闭，超声提取1小时。离心， 取上清液8ml，室温挥干，加适量甲醇溶液，移入2ml容量瓶内，定 容至刻度。临用前过0.45微米滤膜，作进样溶液。
仪器与色谱条件
仪 器 高效液相色谱仪PERKIN ELMER[series 200
LCpump，DAD235C]，超声波器，离心机。
色谱条件 色谱柱 LUNA C-18[2] 250mm-4.6mm 5微米
流动相 乙睛-水 梯度洗脱，梯度变化见下表
时间[min] 0 10 15 30 40 55
乙睛％ 5 25 28 40 60 80
UV检测波长 210nm 柱温 室温[25c]
灵敏度 0.2AUFS 流速 1ml/min
进样量 20微升
不同产地北柴胡HPLC相对保留值指纹谱的建立
按上述实验条件对各样品进样分析，得到它们的色谱图和相应的 数据，根据前述的指纹谱原理建立各样品的色谱指纹谱。首先要做的 工作是对各样品中的内标峰进行定位，接着求取各样品中每个色谱峰 的相对保留值，以大小为序排列，然后附上各色谱峰相对应的相对面 积值或归一化面积值，即得各样品的相对保留值指纹谱。现将十九个 不同产地的北柴胡样品的指纹谱汇集于表6。 不同产地北柴胡指纹谱的各项参数
根据前述定义建立不同产地北柴胡指纹谱的各项参数，分述如 下：
共有峰在十九个样品中全可检测到的色谱峰，它们的α值分别 为0.123，0.821，1.000和1.204等四个，在十八个样品中可检测到的 有α值为0.284，0.309，0.350等三个，在十七个样品中可检测到的 有α值为0.039，0.050，0.400，0.420，0.475，0.513，0.676和0.859 等八个，在十六个样品中可检测到的有α值为1.063，0.708和0.456 等三个，在十五个样品中可检测到的有α值为0.088，0.244，0.388， 0.572，0.604和0.761等六个，由于十五个样品已占样品数的78.9％， 因此以上各α值的色谱峰在大多数样品中具有较高的出现机率，这些 色谱峰对北柴胡的品种鉴定具有特别重要的意义，为北柴胡特征指纹 的选择和确定提供依据。
重叠率 此处的样品均为同品种的北柴胡，只是产地不同，很难 判定以何者做基准，暂以柴胡皂甙A，C，D含量较高的48号样品为 基准，计算北柴胡不同产地各样品与48号样品间的重叠率。见表6。
表6不同产地北柴胡的HPLC-FPS 样品α 相对面积 1 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 共有峰数 0.039 1.45 2.20 1.23 3.18 1.07 1.07 1.17 1.75 1.41 2.75 2.47 2.01 0.98 1.68 2.77 1.59 2.22 17 0.055 19.82 3.04 9.97 3.70 4.79 2.56 4.00 7.54 2.26 4.56 3.03 4.16 2.83 8.07 6.49 5.53 2.38 17 0.070 6.92 6.15 11.28 7.00 7.54 7.38 6.99 8.54 7.30 5.18 10 0.074 16.61 9.03 7.94 7.91 6.38 13.73 8.47 13.46 7.34 11.36 10 0.079 0.86 0.58 1.24 0.87 2.86 1.30 1.43 1.88 1.10 1.05 1.19 0.77 0.90 0.50 14 0.084 4.92 10.32 0.42 6.03 1.25 5 0.088 2.09 5.29 5.63 5.08 6.29 6.16 4.63 5.94 5.21 6.27 0.42 4.79 6.13 5.00 3.17 15 0.108 1.28 0.55 2 0.123 1.42 1.60 1.00 2.24 2.30 0.49 1.74 2.48 2.37 1.42 1.03 3.58 1.27 1.47 0.84 2.12 1.24 1.17 1.46 19 0.141 0.87 1.09 1.11 1.04 4 0.150 0.86 1.56 0.89 3 0.183 1.68 0.55 2.45 1.92 0.57 5 0.192 1.10 0.69 2 0.204 0.76 0.79 0.95 0.78 4 0.219 0.88 1.41 0.49 1.44 2.22 0.99 0.96 0.83 8 0.230 2.30 0.62 1.52 0.86 5.56 1.57 1.63 1.77 8 0.244 1.13 1.35 0.71 1.61 1.32 1.74 0.99 1.38 1.82 2.01 1.62 1.24 2.39 0.93 1.28 15 0.258 1.79 1.44 1.06 1.06 2.15 1.42 0.96 7 0.265 2.69 1.45 1.05 3 0.273 3.30 0.82 2.44 0.84 1.09 1.82 0.86 1.73 0.79 9 0.284 1.39 1.98 1.64 2.52 0.65 0.84 3.20 0.82 2.11 1.92 5.28 2.33 1.36 2.31 1.20 1.57 1.70 2.09 18 0.309 1.68 2.70 3.61 1.40 2.45 2.66 2.37 3.14 2.69 2.05 4.11 1.52 1.09 3.26 2.44 1.96 1.26 3.30 18 0.326 0.78 1.51 2.67 1.27 2.04 4.30 1.67 1.79 2.23 1.83 1.58 14.70 1.53 2.02 14 0.335 1.20 2.29 1.82 1.99 1.16 1.21 0.87 0.82 1.14 9 0.350 2.44 3.85 4.05 3.24 1.69 2.59 5.46 1.39 1.39 1.35 3.24 2.83 2.77 1.59 4.79 1.37 1.70 1.38 18 0.360 1.52 1.60 1.59 3 0.367 2.53 2.38 2.75 1.01 1.25 0.60 2.11 2.50 2.77 1.36 5.80 3.45 3.46 4.93 14 0.372 .361 1.49 1.12 2.66 4.30 2.59 1.04 2.05 8 0.388 4.37 2.04 1.97 1.74 1.42 3.69 3.53 2.63 3.25 2.78 0.81 2.22 1.34 2.49 0.87 15 0.393 2.28 1.38 2.70 3 0.400 0.90 2.84 3.11 1.22 3.40 1.05 1.76 1.26 2.95 3.11 1.36 2.10 1.15 4.42 2.76 1.30 2.15 17 0.420 1.96 2.52 1.52 2.64 2.76 2.87 1.45 4.26 2.54 2.67 8.53 2.40 1.20 0.79 2.41 1.49 3.07 17 0.434 1.24 3.28 1.88 2.72 2.97 2.54 4.95 0.72 2.11 1.12 10 0.443 2.27 1.00 1.56 3.09 1.44 4.33 2.17 0.87 4.86 2.36 4.41 3.99 2.06 3.43 14 0.456 1.91 1.76 2.04 2.34 1.93 2.01 2.11 0.91 1.29 1.80 2.42 4.43 1.09 1.11 1.64 3.45 16 0.466 0.77 0.93 3.29 3.02 2.20 0.80 6 0.475 0.66 3.62 1.16 0.90 3.14 2.31 3.25 2.19 2.25 3.80 2.95 1.23 2.66 1.42 1.52 1.45 1.40 17 0.494 1.51 2.04 2.03 1.74 1.20 2.19 0.96 2.83 1.32 2.32 1.50 11 0.504 0.81 1.75 2.16 0.76 1.28 0.79 0.67 1.60 1.19 1.29 3.37 1.30 4.55 13
continued 样品α 相对面积 1 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 共有 峰数 0.513 1.97 3.22 3.21 3.42 1.25 0.71 2.18 1.39 1.24 1.41 4.03 0.93 1.42 2.38 2.28 1.51 2.06 17 0.537 2.01 1.75 1.05 0.94 1.32 0.90 0.88 2.18 1.14 0.68 1.00 0.97 3.09 1.17 14 0.556 1.06 0.91 1.14 0.79 0.93 4.71 1.23 2.12 0.79 2.53 1.89 11 0.572 1.02 1.37 0.74 1.02 0.98 0.85 0.87 1.52 0.77 2.14 0.96 1.78 1.08 0.77 2.63 15 0.588 2.03 0.84 1.48 1.27 1.35 1.35 6 0.604 1.46 0.76 1.42 0.65 0.86 1.26 1.48 1.65 1.53 2.26 1.03 0.92 0.61 0.58 3.02 15 0.623 .22 1.14 1.33 1.11 2.08 0.87 2.51 0.92 2.65 1.79 1.50 1.53 12 0.637 1.27 0.72 1.07 1.17 0.97 1.22 1.07 1.31 8 0.652 1.33 1.69 1.02 1.48 0.55 1.24 2.21 1.01 2.17 9 0.665 1.03 0.98 2.94 0.85 0.85 1.20 1.12 7 0.676 1.60 1.58 0.85 1.50 2.55 2.46 0.86 1.72 1.07 1.05 2.11 1.03 0.56 2.35 0.89 0.99 1.55 17 0.692 1.36 0.84 1.10 1.67 0.81 0.91 4.24 0.63 0.96 1.01 10 0.708 1.81 0.72 0.89 0.96 0.56 0.72 3.63 1.41 2.77 1.21 1.67 2.14 1.01 1.37 0.56 2.80 16 0.723 1.76 1.41 1.57 0.83 1.13 1.21 0.93 7 0.741 1.13 1.22 1.42 1.00 1.24 2.05 0.75 0.92 0.73 1.32 0.63 1.67 1.53 13 0.761 1.74 0.80 1.06 2.01 0.83 0.59 2.05 0.86 0.77 0.52 0.38 0.91 1.34 0.80 1.09 15 0.773 0.86 0.91 0.80 5.19 0.85 1.00 0.59 1.63 1.38 9 0.782 0.52 1.21 1.06 0.95 0.88 0.70 2.98 1.22 0.93 1.39 0.92 1.97 12 0.804 1.37 0.73 1.71 1.76 1.34 1.06 1.32 0.69 0.71 1.89 1.84 0.79 0.38 1.43 14 0.821 ssc 1.98 1.64 1.18 1.81 0.92 1.38 1.42 0.80 1.39 1.13 1.47 3.51 1.02 0.97 2.97 1.31 0.78 0.76 1.80 19 0.838 1.39 0.72 0.90 3 0.859 1.08 0.78 0.61 0.54 0.83 1.77 1.54 0.90 0.61 3.54 0.86 0.62 1.34 1.08 1.17 0.55 1.97 17 0.879 0.73 0.92 1.39 1.19 0.92 0.69 2.27 0.58 0.49 0.62 0.86 0.98 12 0.895 2.17 0.32 0.87 1.07 4 0.916 2.07 0.43 0.64 3 0.935 0.23 0.65 0.83 0.95 1.28 0.72 0.89 0.49 0.83 2.77 0.82 0.53 1.17 0.93 14 0.973 1.15 0.67 1.12 0.78 0.62 0.68 0.81 2.50 2.09 9 1ssa 3.28 2.91 1.77 3.26 3.87 3.17 2.60 3.67 2.19 3.77 4.73 8.03 2.28 1.91 2.99 1.53 2.15 1.47 5.47 19 1.018 2.79 1.01 2 1.038 0.49 0.69 1.73 1.24 0.38 0.51 2.16 0.85 0.48 9 1.063 1.51 1.25 0.97 0.76 0.71 0.56 1.24 4.07 0.64 0.74 0.57 0.52 1.72 0.76 2.23 0.29 16 1.095 1.07 0.46 1.27 0.68 0.76 1.40 0.91 0.74 0.90 3.00 10 1.127 0.68 0.85 0.70 1.25 0.75 0.89 1.22 0.87 0.35 0.75 0.79 0.88 0.57 0.70 14 1.139 1.44 0.32 0.93 0.57 0.90 0.54 0.42 7 1.161 0.38 0.29 0.60 0.99 0.57 0.57 0.32 0.74 1.19 0.78 0.44 0.54 0.67 0.60 14 0.183 1.23 0.52 1.21 3 1.204 ssd 4.72 2.73 2.43 2.97 1.99 3.60 2.69 2.14 2.55 3.67 3.90 8.02 2.27 1.73 3.86 2.11 2.21 1.79 4.75 19 总峰数 36 46 42 47 49 46 46 47 43 43 42 45 42 44 40 46 46 44 45 839 重叠率 66.7％ 74.7％ 73.6％ 69.6％ 80.9％ 70.3％ 74.7％ 73.9％ 72.7％ 70.5％ 71.3％ 75.6％ 71.3％ 74.2％ 70.6％ 74.7％ 81.3％ 71.9％ 100％ -
十强峰 根据各样品的出峰数在36-49个之间，在选择n强峰时，认为以n＝10为宜。现从各样品的指纹谱中 选出含量较高的前十个色谱峰，列于表7。
表7 不同产地北柴胡样品的十强峰 α值 相对面积 十强峰 相对 总面积 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 样 品 编 号 1 0.074/16.61 1.204/4.72 0.388/4.37 0.274/3.30 1/3.28 0.35/2.44 0.443/2.27 0.088/2.09 0.588/2.03 0.539/2.01 43.12 31 0.155/19.82 0.07/6.92 0.088/5.29 0.35/3.85 0.513/3.22 1/2.91 0.4/2.84 1.204/2.73 0.309/2.70 0.367/2.53 52.81 32 0.07/6.1 0.088/5.63 0.35/4.05 0.475/3.62 0.372/3.61 0.309/3.61 0.434/3.28 0.4/3.11 0.055/3.04 1.204/2.43 38.52 33 0.055/9.97 0.074/9.03 0.088/5.08 1/3.26 0.513/3.21 1.204/2.97 0.42/2.64 0.284/2.52 0.367/2.38 0.456/2.34 43.40 34 0.074/7.94 0.88/6.29 1/3.87 0.055/3.70 0.513/3.42 0.4/3.40 0.466/3.29 0.35/3.24 0.039/3.18 0.443/3.09 41.42 35 0.07/11.28 0.074/7.91 0.088/6.16 1.204/3.60 1/3.17 0.475/3.14 0.42/2.87 0.309/2.66 0.676/2.46 0.456/2.01 45.26 36 0.074/6.38 0.084/4.92 0.055/4.97 0.434/2.72 1.204/2.69 0.372/2.66 1/2.60 0.35/2.59 0.309/2.37 0.475/2.31 34.02 37 0.074/13.73 0.084/10.32 0.23/5.56 0.35/5.46 0.443/4.33 0.42/4.26 0.388/3.69 1/3.67 0.284/3.20 0.309/3.14 57.38 38 0.07/7.00 0.088/4.63 0.326/4.30 1.063/4.07 0.055/4.00 0.708/3.63 0.388/3.53 0.475/3.25 1.204/2.55 0.434/2.54 39.51 39 0.07/7.54 0.055/7.54 0.088/5.94 0.434/4.95 1/3.77 1.204/3.67 0.4/2.95 0.309/2.69 0.388/2.63 0.475/2.19 43.86 40 0.074∥8.47 0.088/5.21 1/4.73 1.204/3.90 0.388/3.25 0.4/3.11 0.42/2.67 0.367/2.50 0.456/2.42 0.055/2.26 38.52 41 0.074/18.46 0.42/8.53 1/8.03 1.204/8.02 0.084/6.03 0.284/5.28 0.773/5.19 0.556/4.71 0.055/4.56 0.456/4.43 68.25 42 0.07/7.38 0.088/6.27 0.443/4.86 0.055/3.03 0.475/2.95 0.35/2.83 0.372/2.59 0.039/2.47 0.42/2.40 0.284/2.33 37.09 43 0.07/6.99 0.055/4.16 0.35/2.77 0.443/2.36 0.388/2.22 0.219/2.22 0.466/2.20 0.039/2.01 1/1.91 1.204/1.73 28.57 44 0.074/7.34 0.367/5.80 0.088/4.97 0.443/4.41 1.204/3.86 0.504/3.37 0.309/3.26 0.539/3.09 1/2.99 0.821/2.97 41.88 45 0.07/8.54 0.055/8.07 0.088/6.13 0.35/4.97 0.4/4.42 0.443/3.99 0.309/2.44 0.513/2.38 0.494/2.32 0.123/2.12 45.22 46 0.326/14.7 0.07/7.30 0.055/6.49 0.088/5.00 0.367/3.45 0.039/2.77 0.4/2.76 0.556/2.53 0.388/2.49 0.42/2.41 49.90 47 0.055/5.53 0.07/5.18 0.367/3.46 0.088/3.17 1.063/2.23 0.556/1.89 1.204/1.79 0.284/1.70 0.35/1.70 0.741/1.67 28.32 48 0.074/11.36 1/5.47 0.367/4.93 1.204/4.75 0.504/4.55 0.456/3.45 0.443/3.43 0.309/3.30 0.42/3.07 0604/3.02 47.33
特征指纹综合共有峰和十强峰所提供的信息，可从中挑选合 适的色谱峰作为特征指纹。十九个样品合计共出峰76个。现按下列 三个条件进行初选，共有样品数超过十五个者，凡进入十强峰者，具 有特殊活性和具有标准品者。按此要求列出特征指纹初选表，见表8。
表8 特征指纹初选表
α 十强峰中出现频次/十强峰中排列名次 共有样品数
.039 2/8、1/9、 1/6 17
.070 3/1、、3/2、2/3、2/4、1/5、2/9、1/10 17
.055 3/2、1/7 10
.074 8/1、2/2 10
.084 2/2、1/5 5
.088 5/2、6/3、2/4、1/8 15
.123 1/10 19
.230 1/3 8
.273 1/4 9
.284 1/6、2/8、1/9、1/10 18
.309 1/6、2/7、3/8、2/9、1/10 18
.326 1/1、1/3、 14
.350 2/3、3/4、3/6、1/7、2/8、1/9 18
.367 1/2、2/3、1/5、1/8、1/9、1/10 14
.372 1/5、1/6、1/7 8
.388 1/3、2/5、2/7、2/9 15
.400 2/6、3/7、1/8 17
.420 1/2、1/6、3/7、2/9、1/10 17
.434 2/4、1/7 10
.443 1/3、2/4、1/5、1/6、2/7、1/10 14
.456 1/6、1/9、3/10 16
.466 2/7、 6
.475 1/4、1/5、1/6、1/8、2/10 17
.494 1/9 11
.504 1/6 13
.513 3/5、1/8 17
.537 1/8、1/10 14
.556 1/6、2/8 11
.604 1/10 15
.676 1/9 17
.708 1/6 16
.741 1/10 13
.773 1/7 15
.821 1/10 19
1.000 1/2、3/3、1/4、3/5、1/6、1/8、2/9 19
1.063 1/4、1/5 16
1.204 4/4、2/5、2/6、1/7、1/8、1/9、2/10 19
表8说明有37个色谱峰进入特征指纹的初选行列。对此再作进 一步挑选，那些在十强峰中出现频次不高者，或名次靠后者，或共有 样品数较低者可作进一步筛除。例如α值为0.070者在十强峰中出现 的频次仅为4，样品共有数也仅达10个；α值为0.084者，在十强峰 中出现的频次为3，样品共有数为5个；α值为0.230，0.273，0.372， 0.434，0.466，0.494，0.504，0.741，0.773等色谱峰均因上述相同原 因而被删除。有些色谱峰虽在十强峰中出现频次较低，甚至根本就没 列入过十强峰，但它是许多样品所共有，例如α值为0.244，0.572， 0.761和0.859者，均因它们的样品共有数达到或超过15而被入选特 征指纹。另，三个已知成分，并具有其相应的标准品者，柴胡皂甙A， C，D均被选入特征指纹。现将三十个特征指纹列表于下：
表9北柴胡的特征指纹 α 十强峰出现频次 样品共有数 α 十强峰出现频次 样品共有数 .039 4 17 .456 5 16 .055 14 17 .475 6 17 .074 10 10 .513 4 17 .088 14 15 .537 2 14 .123 1 19 .556 3 11 .244 0 15 .572 0 15 .284 5 18 .604 1 15 .309 9 18 .676 1 17 .326 2 14 .708 1 16 .350 12 18 .761 0 15 .367 7 14 .821 1 19 .388 7 15 .859 0 17 .400 6 17 1.000 12 19 .420 8 17 1.063 2 16 .443 8 14 1.204 13 19
表9是根据十九个不同产地北柴胡的指纹谱综合而得，具有一定 的统计意义，是北柴胡在鉴定时可于依赖的特征。北柴胡样品几乎遍 及东西南北中，表明全国各地都有北柴胡资源。因而有关北柴胡的质 控和质标工作已为燃眉之事。
表10列出了十九个不同产地北柴胡的特征指纹检出情况，在30 个特征指纹中，石家庄[1]，福州[31]，天津[36]和高安[41]产的北柴胡 可检出23个特征指纹，是各样品中检出最少的。检出数最高的是西 安[33]产北柴胡，共检出29个特征指纹，沈阳[37]，太原[46]，二地 所产北柴胡均可检出28个特征指纹，厦门[34]，郑州[40]和临安[48]， 三地所产的均可检出27个特征指纹，承德[43]和赞皇[39]均可检出26 个特征指纹，洛阳[35]，阜阳[45]和南宁[47]三地所产的也均可检出 25个特征指纹。它们的特征指纹检出率在76.6％-96.6％的范围内，这 些数据为北柴胡品种的鉴定提供了判断的依据。现以上述实验数据为 基础，建议凡特征指纹检出率大于75％时，应考虑待鉴药材是北柴胡。 另，上表清楚显示，有四个成分在十九个北柴胡样品中均存在，它们 的α值分别为0.123，0.821，1.000和1.204，后三个经标准品核对分 别是柴胡皂甙C，柴胡皂甙A和柴胡皂甙D，它们是北柴胡品种必定 具有的成分，也即是鉴定中必须检出的成分。
表10 不同产地北柴胡样品的特征指纹检出表 .\编号 1 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 共有数 0.039 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.055 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.074 V V V V V V V V V V 10 0.088 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.123 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.244 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.284 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 18 0.309 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 18 0.326 V V V V V V V V V V V V V V 15 0.350 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 18 0.367 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.388 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.400 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.420 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.443 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.456 V V V V V V V V V V V V V V V V 16 0.475 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.513 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.537 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.556 V V V V V V V V V V V 11 0.572 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.604 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.676 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.708 V V V V V V V V V V V V V V V V 16 0.761 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.821 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.859 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 1.000 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 1.063 V V V V V V V V V V V V V V V V 16 1.204 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 检出数 23 23 23 29 27 25 24 28 25 26 27 24 25 26 23 24 28 25 27
在上述十九个北柴胡样品色谱指纹谱分析的基础上，建立了一系 列可供鉴定分析作依据的指纹谱参数，其中特征指纹，特征指纹差异 率和总差异率为北柴胡的鉴定创立基础。通过柴胡属其它26个品种 植物样品的色谱指纹谱与之比较分析，更进一步证明色谱指纹谱用于 中药鉴定是可信的，可行的。
26个柴胡属植物样品的色谱实验条件，样品的制备，数据的处 理等均与北柴胡的完全相同。据此建立了26个柴胡属植物的色谱指 纹谱和十强峰等参数，分别见表11和表12。
表11 不同品种北柴胡的HPLC-FPS
Continued
表12 不同品种北柴胡样品的十强峰 α值相 对面积 十强峰 相对 总面积 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 样 品 编 号 2 0.074/12.75 0.088/6.96 1.369/6.73 0.36/5.36 0.081/5.23 0.535/3.76 0.378/3.43 0.063/3.40 0.309/3.36 0.284/3.26 54.23 5 0.055/9.89 0.07/9.88 0.088/6.46 0.039/5.91 0.284/4.83 0.434/3.24 0.475/3.19 0.326/2.96 0.388/2.55 0.367/2.51 51.41 7 1.375/50.5 1.458/26.68 1.341/22.43 1.369/16.63 0.07/13.84 0.055/10.70 1.436/9.14 0.488/9.00 0.326/8.62 0.088/8.39 175.94 9 0.665/11.34 0.07/10.18 0.466/5.80 0.504/4.95 0.088/4.13 0.244/4.09 0.335/3.90 1/3.87 0.367/3.68 0.055/3.54 55.46 10 0.055/11.47 1.204/8.33 0.066/7.86 1/7.11 0.275/4.66 0.388/4.01 0.35/3.60 0.088/3.60 0.326/3.07 0.079/1.94 55.66 11 0.063/38.56 1/23.72 1.204/21.73 0.074/10.56 0.821/4.85 0.434/3.63 0.367/2.77 0.088/2.64 0.36/2.17 0.513/2.06 112.68 12 1.204/15.46 1/13.13 0.07/8.22 0.055/7.36 0.434/4.88 0.088/4.77 0.821/4.47 0.378/4.02 0.524/3.27 0.4/2.20 67.79 13 1.341/9.60 0.055/7.87 0.066/7.72 0.258/6.63 0.504/6.13 0.692/6.11 0.42/5.72 0.088/5.09 1.204/4.96 1/4.54 64.36 15 0.066/7.55 0.275/2.44 0.088/2.35 0.388/2.20 0.434/2.01 0.804/1.97 0.074/1.85 0.466/1.74 0.244/1.67 0.723/1.63 25.40 16 0.055/8.09 1/5.60 1.204/5.50 0.07/5.37 0.088/3.08 0.388/2.36 0.434/2.34 0.821/2.17 0.513/1.98 0.504/1.98 38.45 17 0.35/3.15 0.07/2.89 0.456/2.38 0.676/2.29 0.084/2.29 0.782/2.17 0.761/2.00 0.588/1.70 0.055/1.60 0.708/1.37 21.85 18 1.204/16.82 0.074/12.51 0.183/9.83 1/9.63 0.063/5.28 0.088/4.98 0.258/4.74 0.821/4.36 0.443/4.17 1.369/3.52 75.83 19 0.443/11.27 1/10.41 0.07/9.37 0.35/8.65 0.101/8.09 1.204/7.28 0.434/5.14 0.088/4.58 0.36/4.46 0.335/4.22 73.46 20 1/7.27 1.204/6.96 0.07/6.76 1.378/6.70 0.367/4.52 0.088/4.04 0.504/3.99 0.434/3.91 0.275/3.75 0.4/3.59 51.47 21 0.244/4.60 0.084/3.12 0.074/2.60 0.367/2.14 0.434/2.11 0.275/1.99 0.4/1.97 0.36/1.93 0.335/1.53 0.443/1.45 23.44 22 0.07/5.42 0.275/4.95 0.309/3.70 0.335/3.56 0.084/2.62 0.42/2.45 0.123/2.29 0.388/2.23 0.36/2.16 0.150/2.04 31.41 23 0.055/31.31 0.723/15.44 0.07/6.22 1.204/4.64 0.420/4.17 0.676/4.13 0.079/3.74 1/3.73 0.088/3.31 0.326/3.13 79.83 24 1.352/20.84 0.063/9.70 0.434/6.21 0.335/4.93 0.088/4.92 1.375/4.23 0.360/4.12 0.475/4.04 0.055/3.82 0.192/3.70 66.52 25 0.07/15.11 0.079/12.49 0.084/9.95 0.063/7.41 0.326/6.11 0.123/4.22 0.258/2.49 0.219/2.47 0.192/2.29 0.284/2.26 64.83 26 0.07/9.02 0.088/6.60 0.063/5.80 0.275/4.01 1/3.91 0.079/3.76 0.204/3.36 0.230/2.98 0.326/2.41 0.420/2.38 44.25 28 0.07/11.80 0.055/6.26 0.088/5.05 0.36/4.30 0.326/4.28 0.244/3.12 0.284/2.95 1.204/2.66 0.475/2.35 0.275/2.32 45.08 48 0.074/11.36 1/5.47 0.367/4.93 1.204/4.75 0.504/4.55 0.456/3.45 0.443/3.43 0.309/3.30 0.42/3.07 0.604/3.02 47.33 51 1.458/18.36 1.436/16.95 0.079/14.58 0.084/12.73 1.472/5.98 0.434/5.40 1.498/5.29 0.513/5.21 0.378/4.93 0.488/4.38 93.82 58 0.074/11.46 1/5.84 0.400/5.78 1.204/5.53 0.055/4.97 0.088/4.28 0.367/3.79 0.271/3.47 0.556/3.19 0.466/3.13 51.45 59 0.074/7.56 0.088/5.20 0.443/4.51 0.475/3.99 0.335/3.63 1/3.26 1.204/3.18 0.367/2.92 0.388/2.68 0.4/2.27 39.21 63 0.074/6.37 0.084/5.42 0.488/4.51 0.309/4.30 0.244/3.30 1.204/3.28 1/3.26 0.271/2.83 0.475/2.70 0.434/2.56 38.53
本研究的目的是北柴胡的鉴别和鉴定，因而以不同产地的北柴胡 样品作为不同批号的北柴胡样品，建立了北柴胡的特征指纹，其它柴 胡属植物以其指纹谱与此作对照，在它们各自的指纹谱中寻找北柴胡 的特征指纹，考察特征指纹的检出率，该项数据可为北柴胡的鉴定 提供依据。表13列出了26个不同品种柴胡属植物的北柴胡特征指纹 检出表。
表13 不同品种柴胡属植物的北柴胡特征指纹检出表 .\编号 2 5 7 9 10 11 12 13 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 28 48 51 58 59 63 共有数 0.039 V V V V V V V V 8 0.055 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.074 V V V V V V V V 4 0.088 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 21 0.123 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 25 0.244 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.248 V V V V V V V V V 19 0.309 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.326 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 22 0.350 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.367 V V V V V V V V V V V 11 0.388 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.400 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 23 0.420 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.443 V V V V V V V V V V V V 12 0.456 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.475 V V V V V V V V V V V 4 0.513 V V V V V V V V V V V 11 0.537 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.556 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.572 V V V V V V V 7 0.604 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.676 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 18 0.708 V V V V V V V V V V V V 12 0.761 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.821 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 22 0.859 V V V V V V V V V V V V V V 14 1.000 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 24 1.063 V V V V V 5 1.204 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 24 检出数 18 22 23 21 17 17 19 20 14 21 15 19 18 15 18 12 18 14 12 15 18 26 14 19 24 15 检出率％ 60 73 76 70 56 56 63 66 46 70 50 63 60 50 60 46 40 46 40 50 60 86 46 63 80 50
由表13可知，.值为0.123，0.821，1.000和1.204四个色谱峰 为绝大多数柴胡属植物所共有，由此提示，该四个色谱峰是柴胡属植 物的特征，当然，对北柴胡的鉴定而言，这是必备条件，但并非是完 全条件。在与柴胡属植物色谱指纹谱的比较中将可观察到两者的差 异，尤其是在特征指纹方面所显示的差异。虽然在19个不同产地的 北柴胡样品间也观察到差异，然而这些个体差异所产生的特征指纹差 异是较小的，它们的特征指纹检出率均较高，最高的达96.6％[一个 样品]，最低的为76.6％，[四个样品]，其余均在80％-93.3％之间[十 四个样品]。而对26个不同品种的柴胡属植物样品以北柴胡的特征指 纹作检测时，检出率明显降低，与北柴胡的相比有显著性差异。柴胡 属植物中检出率最低者仅为36.6％[一个样品]，46.6％-43.3％者有三个 样品，50％-56.6％者有七个样品，60％-66.6％者有七个样品， 70％-76.6％者有六个样品，80％-86.6％者有一个样品，达90％者有一 个样品.若以75％为界，则有23个样品低于此线，仅三个样品高于此 界限，其中48号为北柴胡，另二个分别为7号样品黑柴胡和59号样 品银州柴胡。说明这二个不同品种的柴胡在其内在特性，化学成分方 面，与北柴胡较相似。以上特征指纹的检识只是从各样品所含化学成 分的角度进行了比较，至于有关各成分的含量情况则尚需通过其它参 数于以说明。
差异率正如前文所述，差异率是一综合性的参数，它将每个特 征指纹的检出及其含量状况[归一化面积值]结合起来，并形成一个可 供比较的数据，使北柴胡的鉴定能同时兼顾质和量两个方面。现将其 具体运作述于下。
首先以19个北柴胡样品的色谱指纹谱为基础，各样品均以柴胡 皂甙A的面积值为基准，计算每个特征指纹的面积归一化值，列入 各自的指纹谱。其次，对19个样品中个相对应的特征指纹面积归一 化值求其均值，得X均值。见表14。
表14 北柴胡样品特征指纹面积归一化值[N值]及其均值 α样品 1 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 均值 .039 0 .489 1.24 .377 .822 0 .411 .291 .543 .464 .298 .342 1.08 1.05 .328 1.10 1.29 1.08 .406 .682 .055 0 6.81 1.72 3.06 .956 0 1.84 .697 1.82 2.00 .478 .568 1.33 2.18 .946 5.27 3.02 3.76 .435 2.133 .074 5.06 0 0 2.77 2.05 2.49 2.45 3.74 0 0 1.79 1.67 0 0 2.45 0 0 0 2.07 2.656 .088 .637 1.82 3.18 1.56 1.62 1.94 0 0 2.11 1.57 1.10 0 2.75 .220 1.60 4.00 2.32 2.15 0 1.907 .123 .433 .550 .565 .687 .705 .154 .669 .676 1.08 .377 .218 .446 .557 .769 .281 1.38 .577 .796 .267 .589 .244 0 0 0 .347 .414 .224 .619 .359 .794 .262 .292 .226 .881 .848 0 .810 1.11 .632 .234 .537 .284 .424 .680 .926 .773 0 .205 .323 .872 .374 .559 .406 .657 1.02 .712 .772 .784 .730 1.15 .382 .652 .309 .512 .928 2.04 .429 .633 .839 .911 .855 0 .713 .433 .512 .666 .570 1.09 1.59 .911 .857 .603 .839 .326 0 0 .440 .463 .670 .400 0 .556 1.96 .443 .378 .278 .802 .827 0 0 6.84 1.04 .369 1.03 .350 .744 1.32 2.29 0 .994 .533 .996 1.49 .635 .369 .285 .403 1.24 1.45 .532 3.13 .637 1.15 .252 1.02 .367 0 .869 0 .730 .710 .318 0 .340 .274 .559 .528 .345 0 .712 1.94 0 1.60 2.35 .901 .870 .388 1.33 .701 0 .604 .449 0 .546 1.00 1.61 .697 .687 .346 .355 1.16 0 .876 1.16 0 .159 .730 .400 .274 .976 1.76 .374 .878 .331 0 .479 .575 .782 .657 .169 .921 0 .384 2.89 1.28 .884 .393 .824 .420 .597 .866 .859 .810 .713 .905 .558 1.16 1.16 0 .564 1.06 1.05 .628 0 .516 1.12 1.01 .561 .831 .443 .692 0 .565 .478 .798 0 .554 1.18 .991 0 .184 0 2.13 1.23 1.47 2.61 .958 0 .627 1.04 .456 .582 .605 1.15 .718 .499 .634 .811 .248 .589 .477 .512 .551 0 0 0 .712 .516 1.11 .631 .431 .475 .201 0 2.04 .356 .232 .990 .888 0 1.48 .581 .475 .473 1.29 .644 .889 .928 .707 .986 .256 .790 .513 .600 1.10 0 .984 .884 .394 .273 .594 .635 .329 .298 .502 .408 .743 0 1.55 1.06 1.07 .376 .692 .537 .613 .601 .593 .280 .884 .284 .338 .594 .520 .180 .211 0 .425 0 1.03 0 0 .796 0 .490 .556 0 0 0 .325 0 .287 0 .310 0 .209 .196 .586 0 .644 .709 .516 1.18 1.28 0 .621 .572 .311 .471 .418 .313 .253 .268 .334 414 0 .204 0 .266 0 .502 .595 .706 .358 0 .481 .432 .604 .445 .261 .802 .199 .222 .397 .569 .449 .698 0 .478 0 .452 .481 0 0 .284 .394 .552 .445 .676 .488 .543 .480 .460 .659 .776 .331 .468 .488 .278 .446 0 .455 .293 .786 0 .414 .673 .283 .489 .708 .552 .247 0 273 .248 .176 0 .196 1.66 .374 0 .345 .531 .874 .716 .660 .637 .381 .512 .523 .761 .530 0 .452 .325 .519 .186 .227 .558 0 .228 .162 0 .228 .199 .304 .876 .372 0 .199 .357 .821 1.65 .563 .666 .555 .238 .435 .546 .218 .635 .300 .311 .437 .455 .508 .993 .856 .363 .517 .329 .557 .859 .329 .268 .344 .165 0 0 .319 .482 .703 .239 .129 .441 .337 .324 .448 .706 .544 .374 .360 .385 1.000 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.063 0 .519 .706 .297 .196 .224 .215 .338 1.86 .170 0 0 .324 .298 .174 1.12 .353 1.52 .053 .523 1.204 1.44 .938 1.37 .911 .514 1.13 1.03 1.58 1.16 .973 .824 1.00 1.00 .905 1.29 1.38 1.03 1.22 .868 1.03
X均值从统计的角度反映各个特征指纹在样品中存在量的平均 状况，由于它在各样品中均以同一成分作基准，所得之比值反映了它 们在各自样品中的含量比例，为各样品相互间的比较奠定基础，并可 据此求取各样品的差异率，差异率的计算见下式。
X均值-Xi 差异率
差异率＝ 总差异率＝
X均值 N
X均值 每个特征指纹的面积归一化值的平均值[19个北柴胡样
品的均值]
Xi 各样品中相应特征指纹的面积归一化值
N 北柴胡的特征指纹数，现为30
按上述操作，也可得到26个柴胡属植物样品中各个特征指纹的 面积归一化值，及其相应的差异率.这些数据显示了各个特征指纹与 均值间的差异，是待鉴样品与标准样品间产生差异的根本所在。因而 对所有特征指纹的差异进行求和，然后除以特征指纹数即得待鉴样品 与标准药材[此处为19个北柴胡样品的均值]间的总差异率。为清楚 地说明北柴胡和柴胡属植物间特征指纹的比较情况，将所有45个样 品的特征指纹检出率和总差异率列于表15。
表15 北柴胡和柴胡属植物样品的特征指纹检出率％和总差异率％ 样品编品 检出率 总差异率 样品编号 捡出率 总差异率 样品编号 检出率 总差异率 1 76.6 .537 45 80 .865 17 50 1.20 31 76.6 .442 46 93.3 .580 18 63.3 .760 32 76.6 .664 47 83.3 .577 19 60 .728 33 96. .6.367 48 90 .484 20 50 .741 3 34 90 .422 2 60 1.42 21 60 1.16 35 83.3 .507 5 73 2.62 22 36.6 ＞＞1 36 80 .434 7 76.6 .834 23 60 .746 37 93.3 .396 9 70 .535 24 56.6 1.594 3 38 83.3 .579 63 50 .668 25 43.3 .890 39 86.6 .478 10 56.6 1.828 26 56.6 .638 40 90 .503 11 56.6 .888 41 80 .528 12 63.3 .853 28 66.6 .715 42 83.3 .390 13 70 .539 51 46.6 1.13 43 86.6 .400 15 46.6 ＞＞1 58 70 .645 44 76.6 .571 16 70 .713 59 80 .408
现对上表内容作下列探讨
1.北柴胡与柴胡属植物间，在总差异率方面有明显的不同，北 柴胡有19个不同产地的样品，但它们的总差异率在0.367-0.865之间， 其中有两个样品[32号和45号]的总差异率大于0.600，占样品总数的 10.5％。在柴胡属植物的26个样品中有22个的总差异率超过此值。 因此在北柴胡与柴胡属中其它品种的药材间的区分与鉴定时，特征指 纹的总差异率作为考察的首要条件，根据以上实验数据，建议暂定为 小于0.600。
2.对于北柴胡和柴胡属植物样品中所出现的异常现象作如下检 讨。
北柴胡中的32号[泉州产]和45[阜阳产]两个样品的总差异率分 别为0.664和0.865均已超过0.600的界线，但两者的特征指纹检出 率却分别高达76.6％和80％，是符合北柴胡鉴定所要求的。对此相互 矛盾的情况如何解释.对此可仔细分析两者特征指纹的面积归一化 值，32号样品有九个特征指纹的面积归一化值超过1，其中有的高达 3.18，2.04和2.29。45号样品则有十一个特征指纹的面积归一化值超 过1，其中有高达5.27，4.00，3.13，2.89和2.61者，显然这是导致 它们总差异率较高的基本原因，同时也反映了这两个北柴胡中所含成 分是合格的，但在成分的含量比例方面存在较大差异，建议临床用药 遇到这类北柴胡药材时要慎重，尤其对用药剂量的大小要多加小心。 柴胡属植物中有四个样品9号[阿尔泰柴胡]，13号[泸西柴胡]，48号 [北柴胡]，59号[银州柴胡]，它们的总差异率均低于0.600。其中48 号是北柴胡属正常情况。9号和13号两者的特征指纹检出率均为 70％，该值低于拟定的特征指纹检出率界线76％，随即可排除在北柴 胡品种之外。59号的特征指纹鉴出率为80％，高于上述界线，它的 十强峰有九个都被收入特征指纹之列。以上各项参数均说明59号样 品与北柴胡极相似，从色谱指纹谱的角度而言，有可能被定为北柴胡， 因而被误作药用。但从另方面来看，银州柴胡有可能被纳入药用，扩 大柴胡属药用植物的范围。当然，要达到此目的尚需做大量的药理， 药效，毒理等实验，以保证用药安全有效。另，值得注意同被药典收 载的柴胡属植物窄叶柴胡[红柴胡B.scorzonerifolium]，其特征指纹检 出率50％，总差异率0.668，说明它与北柴胡有明显的差别，对此应 引起注意。
3.现将上述整个指纹谱鉴定过程归纳为下列几个步骤
首先是建立各样品的色谱指纹谱，对这项工作应特别指出的是作 为标准药材的品种，产地，批号等各项内容都应标明，且必须有一定 的样本数，以减少生物样品个体差异所致的影响。当然，对于饮片， 制剂，成药一类样品，除应保证一定数量的样本外，更要注意最终产 品，中间品和原料药材间的一致性。
其次是共有峰，重叠率，n强峰，特征指纹，特征指纹检出率， 特征指纹差异率和总差异率等。前三项是产生各项参数的依据，应予 特别注意。至于重叠率，在具有明确的标准药材时，或在无法获得具 统计意义的样本数时，它还是一个颇具实用价值的参数。因为它比特 征指纹所反映的化学成分状况更全面而充份，在中药如此复杂的情况 下会有其特定的意义。例如将样品的选择限定在一个极小的范围内 时，它的作用将比特征指纹更具实用意义。
当获得上述各项参数后，首先考察待鉴样品的特征指纹检出率和 总差异率，针对该两项指标可能出现的情况作出判断，一是两项指标 全部符合鉴定要求，二是两项指标均不符合鉴定要求，三是只有一项 符合鉴定要求。前二种情况给出的结论是明确的，前者为合格，后者 为不合格，对第三种情况则需作进一步探讨。若为特征指纹检出率不 合格，表明该样品在化学成分方面存在较大差异，其总差异率之所以 合格，可能是在各特征指纹求取总差异率的过程中被平均化了..若为 一般的平均化且总差异率相差在0.1范围内，可以考虑给出合格鉴定.. 若为既有严重特征指纹检出率差异，其特征指纹总差异率虽相差不 大，对此也应给出不合格鉴定。若为总差异率不合格，而特征指纹检 出率合格，此时应小心地察看导致总差异率不合格的原因，若为少数 几个特征指纹的含量较高所致，则，只要不是特殊的高，且总差异率 相差在0.1范围内，可以考虑给出合格鉴定.进一步还可考察其n强峰， 其中有几个被纳入特征指纹，若达90％以上，则应考虑给出合格鉴定， 若较低，则应给出不合格鉴定。
4.在表3和表11中，可清楚地看到，有四个α值分别为0.123， 0.850，1.000和1.204者，几乎是所有样品共有的，它们是柴胡属植 物鉴定时必须检出的成分.经标准品对照，后三个成分分别是柴胡皂 甙D，柴胡皂甙A，柴胡皂甙C，经药效试验证明，它们都是柴胡中 的活性成分，且都已有标准品供应。 实施例2
淫羊藿属植物的HPLC指纹谱分析
淫羊藿(Herba Epimedii)是一味常用的补肾壮阳药，并已成为 近年来研究开发的热门药材。现代药理学研究证实，它不仅对心脑血 管有明显的药理作用，而且在抗衰老、抗肿瘤、抗骨质疏松和免疫调 节等方面都有明显的生物活性。
根据资料所载，我国共有23个品种的淫羊藿属植物，另有4个 为其变种。本研究收集得8种淫羊藿，其中5种为我国药典收载作药 用，包括不同产地和不同部位共23个样品，采用HPLC法作其指纹 谱研究，以期能为淫羊藿植物的区分和鉴定提供切实可行的方法，并 为建立药用淫羊藿植物的质量标准提供依据。 仪器和材料
PE 1022 LCPLDUS色谱工作站，PE 235C DAD DETECTOR紫 外检测器，PE SERDIES 200 LC PUMP泵(美国PE公司)，MD100-1 型电子天平(上海天平仪器厂)，80-1型离心机(上海手术器械厂)， 一次性有机溶剂微孔滤膜过滤(0.45μm，上海中惠公司)。
乙腈(色谱纯，上海星狮生物工程有限公司)，甲醇(分析纯， 上海振兴化工一厂)，冰乙酸(分析纯，上海试剂四厂)。
淫羊藿甙标准品(含量测定用，中国药品与生物制品检定所)。
样品由上海医科大学施大文教授鉴定并提供： 样品号 名称 部位 来源 1 黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum) 叶 贵州黔岭山 2 黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum) 叶 上海市药材公司 3 黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum) 茎 贵州黔岭山 4 巫山淫羊藿(E.Wushanense) 叶茎 贵州 5 巫山淫羊藿(E.wushanense) 根 陕西安康 6 巫山淫羊藿(E.wushanense) 茎 陕西安康 7 巫山淫羊藿(E.wushanense) 叶 陕西安康 8 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 茎 陕西安康 9 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 叶 陕西安康 10 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 叶 安徽 11 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 茎 安徽 12 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 叶茎 广西灵山 13 宝兴淫羊藿(E.davidii) 叶 云南 14 宝兴淫羊藿(E.davidii) 茎 云南 15 宝兴淫羊藿(E.davidii) 叶茎 湖南 16 柔毛淫羊藿(E.pubescens) 茎 四川灌县 17 柔毛淫羊藿(E.pubescens) 叶 四川灌县 18 朝鲜淫羊藿(E.koreanum) 叶 河南洛阳 19 朝鲜淫羊藿(E.koreanum) 叶茎 辽宁 20 朝鲜淫羊藿(E.koreanum) 叶茎 青海药检所 21 淫羊藿(E.brevicornum) 叶茎 江苏无锡 22 淫羊藿(E.brevicornum) 叶茎 浙江临安 23 淫羊藿(E.brevicornum) 叶茎 陕西 实验方法
色谱条件：
色谱柱：PERKIN-ELMER-SH/5 C18(5μm，250mm×4.6mm I.D.)，国产C18预保护柱(10μm，40mm×4.6mm I.D.)，检测波长A 为270nm，B为320nm，流动相由A、B两部分以线性梯度在仪器 内部的比例阀中混合而成，A为乙腈，B为0.7％乙酸溶液，线形 梯度为：
0min 10min 20min 20min
A 18％ 22％ 24％ 50％
B 82％ 78％ 76％ 50％
淫羊藿甙标准品溶液配置：称取1.0mg淫羊藿甙标准品，置入 10ml容量瓶中，加甲醇超声使溶解，配成0.10mg/ml标准品溶液。
样品供试液制备：
精密取淫羊藿叶、根或茎粉0.085克，置入10ml容量瓶中，加 10ml甲醇超声提取30min，冷却，定容，离心，上清液经0.45μm滤 膜滤过，即得。
样品分析：
将23个淫羊藿样品制成的供试液，按以上色谱条件进样分析， 得各样品的HPLC图谱，见图1-图23，以及相应的DAD信息。同 时用标准品溶液进样，确定淫羊藿甙峰的位置。
指纹谱分析
相对保留值指纹谱的建立
上述获得的23个样品的色谱图及其DAD信息，除了贵州产黔 岭淫羊藿叶与购自上海市药材公司的黔岭淫羊藿叶外，在约27分钟 处都有一个最大λmax、比吸收值ratio相同的共有峰。根据前述计算 21个样品的色谱峰的相对保留值α，以9号箭叶淫羊藿叶的总峰面 积为分母，根据相对面积值计算式计算各样品色谱峰与9号样品总色 谱峰面积间的相对RA。然后，以9号箭叶淫羊藿叶的各峰的α值为基 准，其它样品色谱峰α值按下列各要求与之相比，首先以1％为窗口 范围对各α值进行比照归纳，合条件者再结合DAD检测信息进行考 核，凡是α值相同或相近(误差≤±1％)，最大吸收波长λmax、比 吸收值ratio都相等的峰，即可认定为同一化合物峰。将各个样品每 个峰的RA值列在相应的α值项下，某α值项下无相应峰的样品，其 RA值记为零。由此得到以下21个样品的相对保留值指纹谱，见表16。
表16 21个淫羊藿样品的相对保留值指纹谱 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 共有峰 0.072 1.83 0 0 0.83 1.51 0.96 1.61 0 0 0 0.094 0 12.91 0.9 1.01 0 0 0 0 1.94 0.98 11 0.099 0 0 0 0.71 0.56 0 0.55 0 0 0 1.02 0 12.93 0 0.7 0 0.61 0.54 0 0.76 0 9 0.113 0 0 0 0 0 0 0.74 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0.172 1.72 2.91 0.48 0 0 0 1.51 0 0 0 1.03 0 0 0 0.36 0 0 0 0 0.95 0 7 0.272 0 1.08 0 0 0 0 0.2 0 0 0 0.25 0 0 0.12 0.16 0 0 0 0 0 0 5 0.328 0 0 0 0 0 0 0.58 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0.37 0 0 0 0 0 0 0.17 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0.418 0 0 0 0 0 0 0.51 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.26 0 0 0 2 0.463 0 0 0 0 0 0 0.24 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.66 0 0 0 2 0.496 2.9 0 6.24 0 1.61 0.59 0.98 0 0.94 0 0.68 0 0 0.77 0.69 1.72 0 0.74 0.13 1.4 1.18 14 0.549 2.37 0 8.81 0 0.55 1.4 1.18 0 0 0.27 0.41 0.21 0 3.01 1.29 0 0.61 1.18 0.58 0.52 0.62 15 0.635 0.27 0 0 0 0 0 0.32 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.24 0 0 0 3 0.756 0 0.4 0 0 0 0 0.15 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.14 0 0 0 3 0.868 0 0 1.72 0 1.08 6.54 7.52 0 0 1.61 1.08 0 0 0 2.15 0.61 0.46 0 0 3.77 0 10 0.939 0 0.78 1.29 0 1.18 1.08 22.63 0 0 0 1.29 0 0 0 0 7.64 0.38 0 1.83 16.14 10.76 11 1 15.12 10.83 41.92 1.61 2.37 3.98 6.03 6.93 6.46 9.58 8.81 0.83 2.37 1.61 14 1.29 1.51 1.08 2.69 5.16 1.94 21 1.12 0.15 0.75 0.28 0 8.5 0.17 21.91 0 0 6.78 3.02 0 0 0 20.9 5.06 4.41 6.24 1.72 9.36 10.3 14 1.23 0 0 0 0 1.04 0 1.61 0 0 0.44 0 0 0 0 0 0 1.05 0.63 6.24 0.23 1.61 8 1.26 0 0 0 0 0.2 0 1.02 0 0 0 0.93 0 0 0 0 0.34 0 0 0.81 0 0.74 6 1.31 0 0 0 0 0.69 0 0.51 0 0 0 0.36 0 0 0 0 0 2.26 0 0.23 0.57 0 6 1.34 0 0 0 0 0 0 1.29 0 0 0 1.35 0 0 0 1.08 0 0 0 0 0 0 3 1.42 1.26 1.47 0 0 0 0 7.12 0 0 0 0 0 0 0 2.8 0 1.51 1.61 0 2.04 1.29 8 1.5 3.98 0 538 0 0 1.51 0.87 0 0 1.94 1.29 0 0 0 0.34 0.39 0 0 1.94 0 0 9 1.52 0 1.18 0 0 0 0 0.67 0 0 0.71 0.14 0 0 0.19 0 0 0.48 0.43 0.36 0.96 0.46 10 1.59 1.72 0 1.61 0 0 0 0.99 0 1.08 0 0 0 0 0 1.01 2.15 0 0 0 0 0 6 1.63 0.25 0 0.31 0.42 0 0.42 1.01 0 0 0 0.48 0 0 0 0.95 0.38 1.29 0.44 0.58 0.81 0.56 13 1.67 1.02 0 1.72 0 2.26 0 2.37 0 3.34 0 0 0 0 0 0 0.61 0 0 3.01 1.94 0 8 1.72 5.49 0 3.77 0 0 0 4.2 0 0 2.69 0 0 0 0.61 1.51 0 0 3.77 0 0 1.4 8 1.74 0 0 0.24 0 0 0 0.71 0 0 0 0.29 0 0 0 3.01 0.61 0.25 0 0 0 0.2 7 1.83 0 0 0 0 0 0 3.01 0 0 1.83 0.62 0 0 0.28 0.12 0 0 3.44 2.04 0 1.18 8 1.88 0.14 0 0.15 0 0.28 1.29 0.5 0.19 0 0.66 0.45 0 0 0.29 4.09 0.15 0.82 0.38 0.28 0.22 0.28 16 1.92 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.48 0.36 0.14 0 0.18 0.22 0.24 0.17 0 0 0.12 0.19 9 总峰数 13 8 14 4 13 10 31 2 4 11 20 3 2 10 19 13 14 16 14 17 16 总峰面积 38.22 19.4 72.14 3.57 21.82 17.94 92.3 7.12 11.82 26.99 24.8 1.18 28.21 7.96 56.38 21.19 14.59 21.78 14.59 46.89 33.69
贵州黔岭淫羊藿叶与购自上海市药材公司的黔岭淫羊藿叶的HPLC图谱中无选定计算α值的内参照峰，没有建立其 相对保留值指纹谱。
样品之间的相似性
将21个淫羊藿样品按前述重叠率计算式计算两两之间的峰重叠率并列表，组成反映样品间相似性的峰重叠率 距阵，只需列出一半即可。见表17。
表17 21淫羊藿样品HPLC峰重叠率 3 100 4 28.6 100 5 74.1 36.4 100 6 35.4 16.7 22.2 100 7 46.2 28.6 59.2 35.3 100 8 60.9 33.3 75 42.8 78.3 100 9 59.1 41 62.2 22.8 59.1 48.7 100 10 26.7 20 12.5 33.3 26.7 16.7 12.1 100 11 53.3 16.7 44.4 25 35.3 28.6 22.8 33.3 100 12 41.7 31.6 56 13.3 50 54.5 47.6 30.7 13.3 100 13 48.5 42.8 64.7 33.3 66.7 66.7 74.5 18.2 16.7 56.3 100 14 25 18.2 23.5 28.6 25 30.8 11.8 40 28.6 28.6 17.4 100 15 26.7 20 12.5 85.7 37.5 30.8 17.6 40 28.6 14.3 26.1 13.3 100 16 52.2 33.3 41.7 28.6 43.5 50 43.9 33.3 28.6 66.7 60 46.2 30.8 100 17 68.8 37 72.7 34.8 50 62.1 72 19 26.1 60 82.1 27.3 27.3 62.1 100 18 53.8 28.6 81.5 23.5 61.5 69.6 54.5 26.7 47.1 50 66.7 25 12.5 43.5 62.5 100 19 37 45.5 57.1 33.3 66.7 58.3 57.8 25 11.1 64 70.6 35.5 23.5 41.7 60 59.3 100 20 55.2 41.7 46.7 30 48.3 46.2 68.1 22.2 20 59.3 50 21 23.5 53.8 51.7 34.5 60 100 21 51.9 36.4 64.3 22.2 74.1 66.7 62.2 25 33.3 64 70.6 23.5 11.8 50 48.5 66.7 64.3 60 100 22 60 48 64.5 38.1 80 66.7 66.7 21 28.6 57.1 75.7 30 30 51.8 66.7 60 83.9 58.8 71 23 55.2 41.7 60 30 62.1 61.5 63.8 22.2 20 66.7 72.2 31.6 21.1 69.2 68.6 46.2 73.3 68.8 73.3
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
12个样品的HPLC六强峰
自21个样品中挑选出峰数达13或13以上的样品共12个，每个 样品均选出其中峰面积最大的6个峰排列成表，得21个样品的六强 峰表。见表18。
表18 淫羊藿样品的六强峰 样 品 1 2 3 4 5 6 面积和 占总面 积％ α/RA 3 1.0/15.12 1.72/5.49 1.50/3.98 0.496/2.90 0.549/2.37 0.0716/1.83 31.69 1.0/41.92 0.549/8.81 0.496/6.234 1.50/5.38 1.72/3.77 1.12/1.28 67.4 1.12/8.50 1.0/2.37 1.67/2.26 0.496/1.61 0.0716/1.51 0.939/1.18 17.43 0.939/22.68 1.12/21.9 0.868/7.52 1.42/7.12 1.0/6.03 1.72/4.20 69.4 1.0/8.81 1.12/3.02 1.34/1.35 1.50/1.29 0.939/1.29 0.868/1.08 16.84 1.12/20.9 1.0/14.0 1.88/4.09 1.72/3.01 1.42/2.80 0.868/2.15 40.95 0.939/7.64 1.12/5.06 1.59/2.15 0.496/1.72 1.0/1.29 1.72/0.61 18.47 1.12/4.41 1.31/2.26 1.42/1.51 1.0/1.51 1.67/1.29 1.23/1.05 12.03 1.12/6.24 1.72/3.77 1.88/3.44 1.42/1.61 0.549/1.18 1.0/1.08 17.32 1.23/6.24 1.67/3.01 1.0/2.69 1.88/2.04 1.50/1.94 0.939/1.83 17.75 0.939/16.14 1.12/9.36 1.0/5.16 0.868/3.77 1.42/2.04 0.0716/1.94 38.41 0.939/10.76 1.12/10.30 1.0/1.94 1.23/1.61 1.72/1.40 1.42/1.29 27.3 83.2 5 90 7 79.8 9 75 13 67.9 17 83.3 18 87.2 19 82.5 20 79.5 21 79.1 22 81.9 23 81
特征指纹峰
以上述21个样品的六强峰为主体，并结合它们在21个样品中出 现的频率，选出α值为0.0716、0.496、0.549、0.868、0.939、1.000、 1.12、1.42、1.51、1.72和1.88等11个色谱峰为本文所研究淫羊藿植 物的特征指纹。现将21个样品的特征指纹峰检出情况列于表19中， 并列出样品中淫羊藿甙的含量，以观察两者之间的相关性。
表19 21样品的特征指纹检出率及淫羊藿甙的含量
α值 检出特 检出 淫羊藿甙 样品号
0.072 0.496 0.549 0.868 0.939 1 1.12 1.42 1.5 1.72 1.88 征峰数 率％ 含量％ 3 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 81.8 0.00367 4 √ √ √ √ √ 5 45.4 0.0753 5 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 54.5 0.0526 6 √ √ 2 18.2 0.0287 7 √ √ √ √ √ √ √ √ 8 72.7 0.443 8 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 81.8 0.0358 9 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 11 100 1.51 10 √ √ 2 18.2 0.0355 11 √ √ 2 18.2 0.00778 12 √ √ √ √ √ √ √ 7 63.6 0.334 13 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 0.562 14 √ √ 2 18.2 0.0395 15 √ √ 2 18.2 0.0373 16 √ √ √ √ √ √ √ 7 63.6 0.0521 17 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 1.53 18 √ √ √ √ √ √ √ √ 8 72.7 0.717 19 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 81.8 0.379 20 √ √ √ √ √ √ √ √ 8 72.7 0.405 21 √ √ √ √ √ √ √ 7 63.6 0.358 22 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 0.714 23 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 0.537 共有样品数 11 14 15 10 11 21 15 8 9 11 16
表19充分反映了淫羊藿的内在特性，这些特征峰可作为其指纹 特征用来区分淫羊藿，以供药用。特征指纹和特征指纹的检出率与淫 羊藿甙含量的相关性将构成淫羊藿药材质量标准的重要内容之一。 讨论
1.样品指纹谱之间的相似性。
(1)各种茎叶样品之间的相似性
中华人民共和国药典规定，淫羊藿的药用部位为地上部分的茎 叶，现选择其中淫羊藿甙含量最高的22号样品为基准，通过与一些 茎叶样品的指纹谱重叠率、特征指纹峰检出率以及淫羊藿甙含量作比 较研究(见表20)，发现重叠率、检出率以及淫羊藿甙含量之间呈正 相关关系。
表20 茎叶样品之间的相似性 样品编号 4 12 15 19 20 21 22 23 重叠率％ 48 57 48 83.9 58.8 71 100 72.7 特征指纹峰
45.4 63.6 18.2 81.8 72.7 63.6 90.9 90.9 检出率％ 淫羊藿甙
0.0753 0.334 0.037 0.379 0.405 0.358 0.714 0.537 含量％
4号虽属被药典收载品种，但从上述三项指标观之，不具备入药 的基本条件，而15号样品为非药典收载品种，不作药用是应是理所 当然的。而三项指标均高的19号和23号样品(包括22号)均为药 典收载品种，据此可判为优质药材。而三项指标表现一般的12号、 20和21号三个样品，其中12号系非药典收载品种，除淫羊藿甙含 量合格外，另二项均属偏低，还是应列入不能药用的范围，20号和 21号均为药典收载品种，但各有一项指标偏低，只能认可其药用， 但不能列入优质药材。
(2)各种叶样品的质量分析
以其中淫羊藿甙含量高的9号样品为基准，与其它的叶样品作重 叠率、特征指纹峰检出率以及淫羊藿甙含量的比较研究，结果(见表 21)表明三者之间也呈正相关关系。
表21 叶样品之间的相似性
样品编号 7 9 10 13 17 18
重叠率％ 59.1 100 12.1 74.5 72 54.5
特征指纹峰
72.7 100 18.2 90.9 90.9 72.7
检出率％
淫羊藿甙
0.443 1.51 0.0355 0.562 1.53 0.717
含量％
其中10号样品最为突出，它是安徽产的箭叶淫羊藿，虽属药典 收载品种，但指标均十分低，不仅应判为劣质药材，且不能入药，相 同品种但产地不同的9号样品(陕西安康产)，其三项指标均达最高。 17号样品，属药典收载品种，三项指标也均较高。因此，9号和17 号可判为优质药材，7号也为陕西产，但品种不同，其三项指标一般。 上述情况说明品种和产地的重要性，它们都会对药材质量产生显著的 影响。18号和7号，情况类似，也只能判为一般药材，13号药材是 云南产的宝兴淫羊藿，系非药典收载品种，但它的三项指标均处合格 以上，能否可作药用，尚需进一步作特征指纹的差异率和总差异率考 察。
(3)各种茎样品的质量分析
纵观各种茎样品中淫羊藿甙的含量，十分低下，从入药角度考虑， 茎是不足取的。因此，茎之间比较已无意义，现取9号叶样品与之比 较，结果(见表22)，表明茎与叶相比重叠率普遍低下，且重叠率低 的特征指纹峰检出率也低；充分揭示了茎和叶之间在化合物组成以及 甙含量方面有着明显差异。
表22 茎样品之间的相似性 样品编号 3 6 8 9 11 14 16 重叠率％ 55.2 22.8 48.7 100 22.8 11.8 43.9 特征指纹峰
81.8 18.2 81.8 100 18.2 18.2 63.6 检出率％ 淫羊藿甙
0.00363 0.0287 0.0358 1.51 0.00778 0.0395 0.0521 含量％
综合茎叶、叶和茎的淫羊藿甙含量可知，由于茎中甙的含量十分 低下，即使叶有较高的含量，茎叶合用的结果必然使茎叶中甙的含量 降低乃至不符和药典要求。因此，作者认为，为保证淫羊藿的临床疗 效，淫羊藿以叶入药为好。
2.在药典所收载的五个淫羊藿品种中，巫山、箭叶、柔毛、朝 鲜和淫羊藿等的叶或茎叶，它们的特征指纹检出率均在72.7％之上， 淫羊藿甙的含量也均在0.3％以上。若对品种、产地、药用部位等三 方面予以综合考虑，则以陕西安康产的箭叶淫羊藿叶和四川灌县产的 柔毛淫羊藿叶为最佳；若以习惯药用部位淫羊藿为地上部分时，则可 考虑浙江临安和陕西产的淫羊藿茎叶以及青海朝鲜淫羊藿、江苏无锡 淫羊藿、广西灵山箭叶淫羊藿茎叶。但各种茎叶的淫羊藿甙含量均低 于0.72％。由于未获得19、20、21、22、23等淫羊藿品种的叶，不 然，对单独以叶入药的结论会更有说服力和实验依据。从当前GAP 的要求来看，陕西、浙江、四川等省的有关地区应是首选的产地，品 种则以箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿和淫羊藿为宜，另两个品种可考虑从 药典收载品种中除名。
3.数据化了的色谱指纹谱可产生一系列的参数，包括重叠率、n 强峰、特征峰群以及特征指纹检出率等，为鉴定和区分药材的品质提 供了科学的、客观的、公正的依据。它可充分利用色谱分离所提供的 大量信息，使中药材的内在特性得以较全面地显示。进一步证明色谱 指纹谱对中药质量分析鉴定十分有效的。本实验中也存在一些问题， 例如样本数太小，即样品批号太少，使结论的代表性和公正性受到影 响，同时也因数据太少，没能进行特征指纹的差异率和总差异率计算， 这些情况将在以后的实验中加以弥补。 实施例3
半夏及其炮制品的色谱指纹谱
半夏因其有毒而在临床上常用其炮制品，能治疗痰多咳喘，痰饮 眩悸，胸脘痞闷，呕吐反胃，梅核气，头痛等病症。药理研究充分证 明半夏具有镇咳、镇吐、抗癌、利胆，调节肠胃，降低眼内压和抑制 心脏等作用。最近发现还具有抗炎、抗早孕的作用。
目前常用炮制品有制半夏、宋半夏、仙半夏、青盐半夏、竹沥半 夏等。由于其有毒，需进行炮制，但在半夏炮制时也没有一定的质控 指标，仅凭感觉判别，即麻舌程度，无客观的科学依据。由于依赖主 观判断所得的结果造成了质控的波动，极大地影响了半夏炮制品的质 量。目前尚未见有关半夏及其炮制品的质控研究报道，虽有涉及麻黄 碱、总生物碱、氨基酸、β-谷甾醇等化合物的含量测定，但缺乏针 对性和系统性的研究，且上述这些成分也是许多中药普遍含有的成 分，无突出的鉴别意义。因此用色谱指纹谱技术来分析半夏及其炮制 品的质量问题，也许会有所进展。
药品、试剂、仪器
药材 编号 品名 鉴定者 产地或来源 供应者 1 生半夏Pinellia ternata
(Thunb.)Breit 王志伟 四川 上海养和堂饮片厂
天南星科植物半夏 2 生半夏(同上) 王志伟 浙江磐安 3 生半夏(同上) 王志伟 四川梁平 4 生半夏(同上) 王志伟 信德中药厂 5 制半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 6 制半夏 王志伟 3号样品的炮制品 上海雷允上饮片厂 7 宋半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 8 仙半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 9 青盐半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 10 竹沥半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 11 制半夏 王志伟 4号样品的炮制品 信德中药厂
试剂：
甲醇(HPLC级)购于中国医药(集团)上海化学试剂公司，水 为重蒸去离子水试剂，乙腈(HPLC级)上海星狮生物有限公司。
色谱条件
色谱仪：PERKIN-ELMER series200 Ic pump
色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6*250 mm 5μm)
检测器：PERKIN-ELMER DAD 235C
检测波长：215nm
流动相：乙腈—水
梯度条件：时间(分钟) 0.2 13 3 14
乙腈(％) 5 15 75 75
流速：1mL/min
进样量：20μl
样品制备：
分别精密称取过10目筛的1-11号样品粉末各5.000克，置于50ml 三角烧瓶中，各加甲醇20ml，以超声提取45min，然后过滤，滤液浓 缩定容至5ml，得样品1-11号的进样溶液。
HPLC-FPS的建立
将分析所得色谱数据，按前述原则建立十一个样品的指纹谱，见 表23。十一个样品的揩纹谱，以1％为窗口范围，所有各样品的相对保 留值经归纳后，共计出峰数为六十二个。1号样品出峰数高达四十八 个，见色谱图-1，最少的为11号样品，仅出峰三十六个。从整体上 看，生品的出峰数较多，炮制品则较少。表24是以1号样品为基准 列出了其它十个样品的重叠率。生品的重叠率较高，均在81％以上， 而炮制品则在67.4％-73.4％之间。表25是它们的八强峰。
表23 11个样品的HPLC-FPS 相对面积 α值 样 品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 共有峰 0.080 0.03 1 0.092 0.02 0.65 2 0.101 1.98 1 0.105 6.04 9.85 4.24 6.38 5.91 1.61 1.15 5.84 6.15 4.41 5.60 11 0.118 1.08 0.80 0.19 0.31 0.44 5 0.129 1.92 1.17 1.31 7.44 2.90 1.22 1.57 0.62 0.85 0.88 1.39 11 0.134 4.15 3.76 4.22 2.27 2.04 5 0.160 1.36 0.52 2 0.185 0.40 0.43 0.53 1.35 0.73 0.36 0.95 0.20 0.63 9 0.195 2.10 2.12 1.95 3.02 0.20 0.51 0.62 1.52 0.26 9 0.211 1.60 1.43 1.50 2.05 0.96 0.05 0.21 0.75 0.13 9 0.226 0.46 0.41 0.06 1.19 0.39 0.21 0.27 0.06 8 0.230 0.26 1 0.244 0.56 0.38 0.50 0.43 0.19 0.08 0.37 0.35 8 0.263 0.54 0.65 0.35 0.35 0.13 5 0.285 0.41 0.46 0.43 1.16 0.75 0.75 1.60 054 0.85 0.50 0.05 11 0.308 2.91 1.92 2.81 2.97 0.36 0.42 0.32 0.58 0.06 0.12 10 0.334 0.84 0.23 0.63 0.82 0.32 0.87 0.15 0.47 8 0.345 3.27 2.32 3.31 3.58 1.84 0.67 1.91 0.09 8 0.366 0.31 0.18 0.23 0.32 0.07 0.34 0.20 0.56 8 0.384 0.20 1.17 0.88 0.19 0.41 0.77 0.21 0.49 8 0.403 0.77 0.58 0.89 0.90 4 0.419 0.29 1 0.436 0.93 0.20 0.60 0.96 0.41 0.24 0.19 0.82 1.73 0.11 10 0.467 0.16 0.06 0.19 0.26 0.79 0.11 0.11 7 0.492 0.19 0.13 0.36 0.42 0.14 0.13 6 0.513 1.74 1.46 2.34 3.14 0.58 0.89 0.15 0.15 0.34 0.99 10 0.546 0.18 0.51 0.55 0.60 0.05 0.63 6 0.579 0.46 0.07 1.04 0.44 0.31 0.75 0.17 7 0.610 0.14 031 0.53 0.59 0.05 0.08 0.92 7 0.630 0.21 0.03 0.42 0.13 0.87 0.06 6 0.652 0.14 0.11 0.14 0.52 0.05 0.55 0.28 0.04 0.99 9 0.678 0.15 0.17 0.07 0.96 0.35 5 0.692 0.05 0.14 2 0.714 0.15 0.10 0.25 0.33 1.29 0.60 0.41 0.10 0.02 0.36 10 0.735 0.08 0.32 0.32 3 0.750 0.23 0.20 0.04 0.09 0.21 0.04 6 0.767 0.43 1.09 0.65 0.24 0.67 1.53 6 0.775 2.13 2.92 3.43 3.97 1.50 3.04 6.15 4.12 4.78 5.81 3.31 11 0.777 1.17 3.97 10.53 3 0.782 3.60 2.75 2 0.788 1.61 1.76 1.24 1.73 1.70 1.45 2.05 3.32 1.36 2.35 10 0.796 1.36 2.21 1.11 1.04 1.59 3.39 1.86 3.22 1.84 0.99 1.56 11 0.805 1.41 1.51 1.09 1.08 1.46 12.17 3.32 1.73 10.99 1.46 10 0.819 1.32 1.29 1.51 0.14 2.34 1.21 8.47 1.45 2.58 9 0.824 4.01 0.74 2.68 0.84 7.34 5 0.835 4.42 4.51 3.74 4.90 5.81 12.34 4.98 5.42 4.37 8.51 10 0.851 0.75 1.30 1.03 3 0.867 33.81 35.75 35.08 31.18 36.11 29.55 21.70 28.97 34.57 29.11 38.56 11 0.887 3.04 2.03 1.64 2.87 4 0.904 2.32 1.40 2.56 3.09 2.47 1.80 10.12 3.78 7.40 10.91 3.07 11 0.919 1.09 4.01 1.23 2.13 2.14 2.46 1.22 2.19 1.07 1.47 1.71 11 0.937 1.56 1.02 1.20 2.87 0.70 1.44 1.14 1.97 8 0.948 0.72 0.71 23.17 0.62 2.43 0.78 1.04 1.45 8 0.965 2.08 1.79 2.67 2.86 2.00 2.51 1.99 1.47 1.86 2.09 2.55 11 0.988 1.55 0.48 2 1 6.61 6.71 7.00 6.09 7.20 6.19 4.02 6.08 5.80 4.19 8.12 11 1.02 2.10 1.98 2.22 1.73 3.75 3.85 1.14 1.76 2.33 1.79 2.30 11 1.037 0.67 0.60 1.33 0.98 0.42 0.73 1.58 1.76 8 1.058 0.29 0.76 0.55 1.07 4 1.073 1.19 0.92 0.61 0.55 0.68 1.26 0.41 1.31 1.20 1.34 10 1.089 0.54 3.12 0.82 3 1.109 0.41 0.13 2.32 0.54 0.54 0.66 0.09 0.25 0.95 9 1.128 0.19 1.38 1.86 3 1.147 0.22 0.04 0.32 0.21 0.19 5 1.170 0.04 0.03 0.16 0.14 3 1.192 0.06 0.05 0.05 0.03 3 0.211 0.05 1 总峰数 48 47 43 42 42 38 37 45 42 38 36
表24 十种样品的重叠率(％) 样品 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 重叠率 86.3 81.3 82.2 73.3 67.4 68.2 77.4 73.3 67.4 76.2
表25 样品的八强峰 α值/ 相对面积 1 2 3 4 5 6 7 8 相对总面积 样 品 1 0.867/33.81 1.000/6.61 0.105/6.04 0.835/4.42 0.134/4.15 0.782/3.60 0.345/3.27 0.308/2.91 64.81 2 0.867/35.75 0.105/9.85 1.000/6.71 0.835/4.51 0.919/4.01 0.134/3.76 0.775/2.91 0.782/2.75 56.78 3 0.867/35.08 1.000/7.00 0.105/4.24 0.134/4.22 0.824/4.01 0.775/3.43 0.345/3.31 0.308/2.81 64.10 4 0.867/31.18 0.129/7.44 0.105/6.38 1.000/6.09 0.775/3.97 0.835/3.74 0.345/3.58 0.513/3.14 65.52 5 0.867/36.11 1.000/7.20 0.105/5.91 0.835/4.90 1.020/3.75 0.777/3.17 0.887/3.04 0.129/2.90 66.97 6 0.867/29.55 0.948/23.17 1.000/6.19 0.835/5.81 1.020/3.85 0.796/3.39 0.775/3.04 0.965/2.51 77.51 7 0.867/21.70 0.836/12.34 0.805/12.17 0.904/10.12 0.819/8.47 0.775/4.02 1.000/3.12 1.089/1.99 78.1 8 0.867/28.97 0.777/10.53 1.000/6.08 0.105/5.84 0.835/4.98 0.775/4.12 0.904/3.78 0.805/3.32 67.71 9 0.867/34.57 0.904/7.40 0.105/6.15 1.000/5.80 0.835/5.42 0.775/4.78 0.788/3.32 1.020/2.33 69.78 10 0.867//29.11 0.805/10.99 0.904/10.91 0.824/7.34 0.775/5.81 0.105/4.37 0.835/4.19 1.000/2.09 74.82 11 0.867/38.56 0.835/8.51 1.000/8.12 0.105/5.60 0.775/3.31 0.904/3.07 0.887/2.87 0.819/2.58 72.61
由于个生半夏样品均为同一品种，仅产地有所不同，现以四个生 品作为基准，据建立生半夏的特征指纹。按要求，首先找出它们的共 有峰，有二十八个色谱峰为四个生品所共有，十一个为三个生品共有， 合计三十九个色谱峰，它们已全部包含了四个生品的八强峰。以此作 为生品半夏的特征指纹，见表26。现将各生只和炮制品与其进行比 较，并展开讨论。首先可看到四个生半夏的检出率在100-87.2％范围 内，可见其检出率较高，七个炮制品的检出率均低于85％，说明半夏 经炮制后确已发生了变化。由于各炮制品的生药来源可能有异，因此 在讨论炮制品的质量时应以各饮片厂所采用的生品与其炮制品间比 较为主。
表26 半夏的特征指纹 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 0.105 6.04 9.85 4.24 6.38 5.91 1.61 1.15 5.84 6.15 4.41 5.60 0.129 1.92 1.17 1.31 7.44 2.90 1.22 1.57 0.62 0.85 0.88 1.39 0.134 4.15 6.76 4.22 2.27 2.04 0.185 0.40 0.43 0.53 1.35 0.73 0.36 0.95 0.2 0.63 0.195 2.10 2.12 1.95 3.02 0.20 0.51 0.62 1.52 0.26 0.211 1.60 1.43 1.50 2.05 0.96 0.05 0.21 0.75 0.13 0.244 0.56 0.38 0.50 0.43 0.19 0.08 0.37 0.35 0.263 0.54 0.65 0.35 0.35 0.285 0.41 0.46 0.43 1.16 0.75 0.75 1.60 0.54 0.85 0.50 0.05 0.308 2.91 1.92 2.81 2.97 0.36 0.42 0.32 0.58 0.06 0.12 0.334 0.84 0.23 0.63 0.82 0.32 0.87 0.15 0.47 0.345 3.27 2.32 3.31 3.58 1.84 0.67 1.91 0.09 0.366 0.31 0.18 0.23 0.32 0.07 0.34 0.2 0.56 0.403 0.77 0.58 0.89 0.90 0.436 0.93 0.20 0.60 0.96 0.41 0.24 0.19 0.82 1.73 0.11 0.467 0.16 0.06 0.19 0.26 0.79 0.11 0.11 0.492 0.19 0.13 0.36 0.42 0.14 0.13 0.513 1.74 1.46 2.34 3.14 0.58 0.89 0.15 0.15 0.34 0.99 0.546 0.18 0.51 0.55 0.60 0.05 0.63 0.630 0.21 0.03 0.42 0.13 0.87 0.06 0.652 0.14 0.11 0.14 0.52 0.05 0.55 0.28 0.04 0.99 0.714 0.15 0.10 0.25 0.33 1.29 0.60 0.41 0.10 0.02 0.36 0.750 0.23 0.20 0.04 0.09 0.21 0.04 0.775 2.13 4.09 3.86 5.06 4.69 3.69 6.15 14.89 5.45 7.34 3.31 0.788 1.61 1.76 1.24 1.73 1.70 1.45 2.05 3.32 1.36 2.35 0.796 1.36 2.21 1.11 1.04 1.59 3.39 1.86 3.22 1.84 0.99 1.56 0.805 1.41 1.51 1.09 1.08 1.46 12.17 3.32 1.73 10.99 1.46 0.819 1.32 1.29 1.51 0.14 2.34 1.21 8.47 1.45 2.58 0.835 4.42 4.51 3.74 4.90 5.81 12.34 4.98 5.42 4.37 8.51 0.867 33.81 35.75 35.08 31.18 36.11 29.55 21.7 28.97 34.57 29.11 38.56 0.904 2.32 1.40 2.56 3.09 2.47 1.80 10.12 3.78 7.4 10.91 3.07 0.919 1.09 4.01 1.23 2.13 2.14 2.46 1.22 2.19 1.07 1.47 1.71 0.937 1.56 1.02 1.20 2.87 0.70 1.44 1.14 1.97 0.965 2.08 1.79 2.67 2.86 2 2.51 1.99 1.47 1.86 2.09 2.55 1 6.61 6.71 7 6.09 7.2 6.19 4.02 6.08 5.80 4.19 8.12 1.02 2.1 1.98 2.22 1.73 3.75 3.85 1.14 1.76 2.33 1.79 2.3 1.037 0.67 0.60 1.33 0.98 0.42 0.73 1.58 1.76 1.073 1.19 0.92 0.61 0.55 0.68 1.26 0.41 1.31 1.20 1.34 1.109 0.41 0.13 2.32 0.54 0.54 0.66 0.09 0.25 0.95 检出数 39 36 36 34 30 27 28 33 31 25 28 检出率％ 100 92.3 92.3 87.2 76.9 69.2 71.8 84.6 79.5 64.1 71.8
生品和炮制品的指纹谱分析
首先，根据共有峰和八强峰提供的信息，有些色谱峰可规定为半 夏所必须具有的色谱峰，如α值为0.867，1.000和0.105，这三色谱 峰均列入所有样品的八强峰，是中药半夏最为特征的标示。再如α值 为0.129，0.285，0.775，0.796，0.904，0.919，0.965和1.020个色谱 峰，虽然没有均列入所有样品的八强峰，但却是所有样品共有的，也 应作鉴定半夏的必要条件。其它如α值为0.308，0.436，0.513，0.714， 0.788，0.805，0.835，1.073等八个色谱峰是十个样品所共有，在半 夏鉴定时，对这些色谱峰应有90％以上的检出率。因此，不论是生半 夏抑或是各种半夏炮制品均应达到上述要求。上述十九个特征指纹峰 在对某些样品作进一步深入研讨时，有助于给出明确的鉴定结伦。
其次可对生品和炮制品作质量判别，先由重叠率观之，生品间的 重叠率均在81％以上，它们的特征指纹检出率也高，均在87％以上， 说明了生品间较好的相似性，而炮制品中重叠率最高者(8号)为 77.4％，特征指纹检出率最高者(8号)为84.6％。与其它各炮制品相 比，这两项指标均显得较高，说明8号样品与生品间的亲密关系，虽然 同时也说明了它们间的差异。因此，对这批试样而言，在作品种判定 时，重叠率可以80％为界，特征指纹检出率可以85％为界。而8号样 品则存在炮制不足的问题，值得引起注意。
对制半夏的质量控制，除上述的各项要求外，还应考虑下列各点。 从各制半夏与其对应的生品之间的指纹谱比较来看，1号与5号是一 组，它们间的重叠率为73.3％，特征指纹检出率由100％降至76.9％； 3号与6号是一组，它们间的重叠率为74.1％，特征指纹检出率由 92.3％降至69.2％；4号与11号是一组，它们间的重叠率为76.9％， 特征指纹检出率由87.2％降至71.8％。这三组数据反映了生品经炮制 后所发生的变化，上述两项参数客观地反应了这方面的变化，并可据 此作为控制炮制品的依据。由此可进一步认识到重叠率是反映了生品 和炮制品之间相关性的重要参数，如若炮制程度不够，两者的重叠率 必然很高，反之，若炮制过度，则两者的重叠率必然很低。而检出率 则更精细地反映了特征指纹的变化情况，为需作进一步深入探讨时提 供依据。此外，在根据炮制经验和临床用药的反响和决定最佳的炮制 工艺时，色谱指纹谱将可提供最全面的控制指标。现将色谱指纹谱用 于制半夏等炮制品的质量鉴定时所涉及的各项参数简要归纳如下：
1.特征指纹检出率：
高于64％者，再对其十一个必须具有的和八个可部分检出的色谱 峰进行核查。
2.八强峰：
α值为0.867者必须进入八强峰，并列首位。其余α值为1.000， 0.775，0.835者必须进入八强峰。
3.生品与炮制品的重叠率：
从三组生品与炮制品的重叠而言，它们的重叠率在73.3％-76.9％ 之间。从检出率的变化情况看，第一和第二两组均降低了23.1％，第三 组仅降低了10.3％，说明生品经炮制后特征指纹发生了明显的变化，那 些在炮制过程中失去的特征指纹峰应该引起注意，限于本研究的样本 数太少，难以得出有规律性的意见。但无沦如何这是两个反映炮制程 度的重要参数，在进一步扩大实验批号的基础上，将会得到更客观、 公正的数据，为最终获得控制炮制品的数据提供依据。
附：1、2、3、4、5、6、11号样品的色谱图，见图24-图30。
对于有些色谱峰经炮制后，含量升高或降低，或消失，或出现新 的成分，例如由养和堂的生品与炮制品可见，α值为0.160、0.630、 0.782、1.170、1.192、1.211、0.134、0.950、0.211、0.244、0.263、0.467、 0.652、1.000、0.308、0.345和0.513等均是生品比炮制品含量高；其 中α值为0.160、0.308、0.345和0.513者的变化更是显著，值得注意 研究。而α值为0.805、0.824、1.058、0.775和0.904等均是在炮制 品中含量有较明显升高，其中0.805者尤为显著，而0.226、0.610则 是炮制品中所独有。当然，由雷允上和信德厂的两组也可得出各自的 相应数据。因目前的数据均属个别样品间的比较，若要给出结论还需 通过更多批号的样品来证实。但应看到，这些数据反映了炮制前后的 变化情况和一些值得注意的变化规律。
本发明提供了一种中药特征指纹的建立及根据特征指纹进行鉴 定时所运用的计算公式和相关术语、定义。
现将特征指纹的选择原则和操作步骤叙述于下。
(1)标准药材的选取，收集业经生药鉴定的该品种药材五个以上 的批号。能有更多的批号则更佳。因为考虑到生物样品的个体差异， 只有在相当数量的样品中，才能清楚地显现出它的特征。此时还需注 意中药样品批号的含义，除样品的产地、采收时间和季节，以及药用 部位外，气侯的影响，储运保管条件以及某些人为因素均应顾及。因 此样品批号宜多不宜少。
(2)规范化的操作条件和步骤：应从两方面的工作于以规范化。 一是样品的预处理，生物样品都需经预处理后方能进行色谱分析。预 处理的方法有多种，例如超声萃取，加热萃取，pH萃取等各种萃取 技术。二是萃取样品量的大小和样品粉碎程度，以及萃取液是否再经 处理等因素，总之所有样品处理过程都必须保持一致以保证样品液的 分析具有良好的精密度、正确性、重现性和相互间的可比性。
(3)最佳色谱条件的建立：色谱条件包括色谱柱、流动相、检测 器等的选择。要建立良好色谱条件使中药样品中所含之成分尽可能地 获得分离，也即分得的色谱峰愈多愈好，可以说是多多益善，使中药 的内在特性都显现出来，为鉴定提供足够的信息。色谱柱的选择可根 据中药所含的主要成分而定，例如含生物碱类化合物为主的中药，可 选用离子交换柱；含多糖类化合物为主的中药可选用凝胶柱，含甾体 类化合物为主的中药可选用c-18反相柱；......等。流动相的组成除 应考虑化合物的性质外，因为中药所含成分多而杂，采用常规的等梯 度洗脱难以使各种性质的成分获得分离，使色谱图中所出现的峰数较 少，不能给出足够的鉴定所需的信息。在大多数的情况下以采用梯度 洗脱为宜。在合适的梯度条件下，使性质差异较大的各种化合物均被 分离，可充分提供鉴定所需的信息。分得的色谱峰越多越有利于鉴定。 目前可供选择的检测器，在气相色谱中有氢火焰离子化检测器(FID)、 热导检测器(TCD)、电子捕获检测器(ECD)、火焰光度检测器(FPD) 等，其中以FID最为常用，凡以碳、氢、氧等元素组成的有机化合物 均可被检出，对中药所含之挥发性成分的分析是十分有效的。在高效 液相色谱中有可变紫外-可见光(UV-VIS)检测器、荧光检测器、电 化学检测器、示差折射检测器(RID)、蒸发光散射光检测器(ELSD) 等。其中紫外-可见光检测器用得较多，适宜于化合物中有共轭双键 的成分分析，而大量的不含共轭双键的化合物不能被检出。近十年来， ELSD检测器的发展，使中药中甾体类、皂甙类、多糖类等化合物均 可采用ELSD作检测。
(4)特征指纹的确立：对上述五个以上批号的标准药材，在优化 的提取条件下制备供试液，以及在最佳色谱条件下进行分析，每个样 品同品种的中药五个以上的批号，分别进样三次，由此获得五个批号 样品的十五张色谱图，并转化为十五张色谱指纹谱。现将这十五张色 谱指纹谱中的相对保留值汇集并列成表(见表1)，以便选择特征色 谱峰来建立特征指纹。
表1 色谱指纹谱汇集表(面积归一化值) 药材 α 0.084 0.100 0.109 0.128 0.141 0.168 0.198 0.222 0.252 0.284 0.404 0.446 0.496 1 0.33 0.15 0.36 1.04 0.89 1.30 1.12 0.60 0.74 0.45 0.96 2 0.45 0.38 0.38 1.06 0.82 1.26 1.08 0.49 0.73 0.40 1.01 3 0.26 0.24 0.45 1.10 0.84 1.31 1.07 0.48 0.75 0.51 1.15 4 0.33 0.29 0.89 0.78 0.98 1.01 0.71 0.69 0.49 5 0.15 0.47 0.34 0.92 0.70 0.96 1.05 0.65 0.72 0.52 0.99 6 0.40 0.26 0.90 0.68 0.99 0.99 0.73 0.70 0.51 0.97 7 0.07 0.75 0.32 0.41 1.11 0.92 0.90 0.98 0.57 0.81 0.39 0.93 0.89 8 0.03 0.68 0.28 0.37 1.09 0.88 0.94 0.96 0.64 0.78 0.43 0.88 0.96 9 0.70 0.09 0.34 1.06 0.95 0.94 0.96 0.64 0.76 0.45 0.75 1.03 10 0.89 0.21 0.22 0.84 0.76 1.15 1.18 0.70 0.77 0.57 1.08 11 0.17 0.72 0.18 0.27 0.90 0.88 1.18 1.17 0.65 0.71 0.50 1.12 12 0.04 0.77 0.16 0.18 0.92 0.80 1.20 1.17 0.66 0.73 0.52 0.92 0.96 13 0.22 0.29 0.90 0.86 1.24 1.18 0.68 0.75 0.44 0.86 0.88 14 0.01 0.30 0.48 0.96 0.87 1.24 1.19 0.67 0.79 0.42 0.94 1.00 15 0.36 0.50 0.99 0.82 1.20 1.23 0.65 0.78 0.41 1.05 共有样 品数 9 6 15 15 15 15 15 15 15 15 15 6 14 药材 α 0.548 0.576 0.684 0.804 0.895 1.000 1.127 1.289 1.356 1.419 1.506 1.573 1.607 1.790 1 0.32 0.28 1.000 1.01 0.03 0.30 1.67 2 0.54 0.21 1.000 0.93 0.07 0.28 1.54 1.31 3 0.40 0.25 1.000 0.90 0.05 0.32 1.60 1.28 4 1.94 0.20 1.000 0.88 0.40 1.81 0.02 1.35 5 1.88 0.24 1.000 0.78 0.38 1.76 0.03 1.30 6 2.00 0.27 1.000 0.84 0.41 1.70 0.01 1.32 7 0.40 1.56 0.30 1.000 0.94 0.35 1.59 1.44 8 0.32 1.66 0.26 1.000 1.04 0.36 1.63 1.41 9 0.38 1.66 0.25 1.000 0.61 0.37 1.67 1.29 10 0.77 1.000 0.21 0.67 0.28 1.56 1.48 11 0.23 0.70 1.000 0.18 0.73 0.30 1.65 1.45 12 0.27 0.75 1.000 0.12 0.86 0.29 1.71 1.47 13 0.26 1.000 0.87 0.31 0.32 1.78 1.35 14 0.20 1.000 1.01 0.31 0.34 1.76 1.37 15 0.22 1.000 1.04 0.33 0.35 1.74 1.33 共有样 品数 3 6 3 14 3 15 3 15 3 3 15 15 3 14 药材 α 1.820 1.882 2.002 2.056 2.166 2.222 2.300 2.397 2.560 2.670 2.735 2.966 3.021 3.140 3.238 1 0.66 1.530 1.44 0.11 0.34 0.38 0.24 2 0.63 0.54 1.590 1.50 0.10 0.36 0.41 0.02 0.28 3 0.65 0.55 1.530 1.46 0.09 0.38 0.42 0.22 4 0.77 0.74 0.60 1.480 1.25 0.11 0.37 0.45 5 0.75 0.73 0.58 1.41 0.08 0.40 0.43 6 0.68 0.76 0.57 1.450 1.42 0.09 0.35 0.41 7 0.78 0.63 0.04 1.430 1.48 0.10 0.39 0.39 8 0.80 0.62 1.400 1.49 0.08 0.11 0.33 0.41 0.01 9 0.81 0.59 1.550 1.51 0.10 0.34 0.41 0.02 10 0.63 0.10 0.66 1.570 1.43 0.08 0.38 0.35 11 0.65 0.11 1.600 1.45 0.07 0.35 0.38 12 0.61 0.15 0.68 1.580 1.46 0.10 0.40 0.39 13 0.60 0.68 1.500 1.21 1.51 0.09 0.16 0.33 0.40 14 63.00 0.67 1.510 1.15 1.53 0.08 0.13 0.37 0.43 0.06 15 0.63 1.53 1.20 1.50 0.10 0.15 0.36 0.43 共有样 品数 3 14 3 13 1 14 3 15 1 15 3 15 15 3 4 药材 α 3.298 3.384 3.460 3.526 3.580 3.742 3.789 3.822 3.902 4.068 4.179 4.436 4.503 4.579 1 0.67 1.10 0.58 0.50 0.06 2 0.65 0.09 1.14 0.57 0.56 0.04 0.78 0.05 0.03 3 0.68 0.11 1.19 0.60 0.53 0.03 0.77 4 0.66 0.61 1.740 0.79 5 0.67 0.60 1.700 0.27 0.80 0.93 6 0.69 0.59 1.760 0.76 0.80 7 0.66 0.57 0.31 0.44 0.78 8 0.65 0.56 0.29 0.77 9 0.67 0.58 0.28 0.47 0.79 10 0.60 0.76 0.01 11 0.70 0.61 0.03 0.81 12 0.69 0.60 0.01 0.79 13 0.67 0.59 0.16 0.78 14 0.71 0.60 0.18 0.76 15 0.69 0.61 0.13 0.77 共有样 品数 14 2 3 15 3 3 2 5 4 3 14 3 1 1 药材 α 4.632 5.175 5.530 5.650 5.764 1 2.14 0.12 2 2.18 0.08 3 2.20 0.09 4 2.08 0.66 5 2.10 0.67 6 2.14 0.63 7 1.96 0.07 8 1.98 0.04 9 2.06 0.10 10 0.04 2.10 11 0.03 1.94 0.83 12 0.01 1.99 0.88 13 2.00 14 2.09 15 2.07 共有样 品数 3 15 5 3 3 总峰数：61
列表的原则与鉴定原则相同，首先设定一窗口，设定为1％，即 各样品中相对保留值的差异在1％的范围内者，可列于同一项中，可 认为它们是相同化合物的色谱峰。表中α值为该项中相对保留值的平 均值，表格中数字为色谱峰的归一化面积值。
表1清楚地表明了有些色谱峰可在所有样品中均存在，而有些色 谱峰则不然，仅在部分样品中出现。那些所有样品中均存在着的色谱 峰可以认定是这品种所特有，由于它们并非系一、二个色谱峰，而是 有相当数量的一大群色谱峰所构成，对一个个色谱峰称为特征指纹 峰，由一大群特征指纹峰构成了特征指纹。由此实现了从多组分的角 度来反映中药样品的内在特征。因此，根据中药的色谱指纹谱中的特 征指纹来判别和鉴定中药时，使它的结论将具有更客观、更科学和更 公正的特点。
特征指纹峰的入选条件，首先应是全部样品所共有，其次是百分 之九十以上样品所共有者，在比较分散的情况下，可以考虑百分之八 十以上样品所共有者。另外，已被认定是这类药材的有效成分或特殊 成分。例如麝香中的麝香酮，牛膝中的齐墩果酸，何首乌中的白藜芦 醇甙，细辛中的黄樟醚、黄芪中的黄芪甲甙。这些成分有些是药效成 分，有些是能获得其标准品的特征成分。它们的存在对药物的鉴定具 有重要的意义。在表1中也看到有些色谱峰仅为个别或少数中药样品 所含有，可认为是样品的个体差异或其他特殊情况，对中药的品种鉴 定无实质性意义，作模糊处理，可予以忽略。此外，尚需考虑特征指 纹峰在总数中所占比例，如所占比例较小，则说明只抓小头放了大头。 因此要求特征指纹中色谱峰数目以大于总数的百分之六十为宜。如达 不到该指标，说明在取样中存在问题，即所选的这些标准药材间有较 大差异，需进一步探究它们的来源，包括品种的基源，产地，采集时 间，药用部位，保存方式和时间等诸因素。也需对操作步骤，色谱条 件，数据处理等诸方面进行复核。还需指出，由于中药为生物样品， 其指纹特征不可能一成不变，随着时日变迁，尽管都是同一品种、统 一产地，相同采集、保管方式，但生物体的变异是绝对的。所以，对 特征指纹要经常修正。建议，在做鉴定时应随行由中国药品生物制品 检定所提供的标准药材同步测试，使统一在国家标准范围内。按上述 原则所确立的特征指纹和对各待鉴药材的鉴定情况列于表2。
表2 七个药材的特征指纹谱鉴定表 *α 0.109 0.128 0.141 0.168 0.198 0.222 0.252 0.284 0.404 0.496 0.804 1.000 1.289 1.506 1.573 1.790 1.882 2.050 **Ar 0.272 0.342 0.978 0.830 1.120 1.089 0.632 0.747 0.460 1.003 0.246 1.000 0.874 0.336 1.678 1.368 0.691 0.615 ***特征指纹值 0.15 0.38 1.24 0.89 1.34 1.12 0.59 0.74 0.45 0.96 0.28 1.000 0.21 0.34 1.67 1.35 0.77 0.67 ****特征指纹 差异率 0.448 0.111 0.268 0.072 0.196 0.028 0.066 0.009 0.022 0.043 0.138 0 0.760 0.012 0.005 0.013 0.114 0.089 鉴1 0.40 1.20 0.95 1.41 1.22 0.65 0.80 0.51 0.50 0.93 0.34 1.00 0.30 0.46 1.81 1.49 1.83 0.79 0.470 2.509 0.028 0.699 0.089 0.403 0.266 0.317 0.087 0.073 0.382 0 0.657 0.369 0.078 0.089 1.648 0.284 鉴2 0.32 0.53 0.99 0.95 1.25 0.98 0.71 0.82 0.39 0 0.30 1.00 0.25 0.38 1.72 1.28 0 0.72 0.176 0.550 0.012 1.440 0.116 0.100 0.123 0.098 0.152 1.000 0.219 0 0.714 0.131 0.025 0.640 1.000 0.171 鉴3 0.09 0.33 1.34 0.95 1.40 1.07 0.57 0.81 0.43 0.98 0.30 1.00 0.18 0.29 1.59 1.29 0.83 0.64 0.669 0.035 0.370 0.144 0.250 0.017 0.098 0.084 0.065 0.023 0.219 0 0.794 0.137 0.052 0.057 0.201 0.040 鉴4 0 0.32 1.20 0.81 1.29 1.10 0.68 0 0 0 0 1.00 0 0 0 0 0 0 1.000 0.064 0.227 0.024 0.152 0.010 0.076 1.000 1.000 1.000 1.000 0 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 鉴5 0.13 0 1.22 0.93 1.38 1.08 0.58 0.83 0.40 1.00 0.31 1.00 0.25 0.30 1.56 1.31 1.20 1.50 0.522 1.000 0.247 0.120 0.232 0.008 0.082 0.111 0.130 0.003 0.260 0 0.714 0.107 0.070 0.042 0.736 1.439 鉴6 0.21 0.40 1.19 0.70 1.27 1.10 0 0.70 0.48 0.90 0.20 1.00 0.23 0.35 1.70 1.31 0.75 0.63 0.228 0.169 0.001 0.156 0.134 0.010 1.000 0.063 0.043 0.102 0.187 0 0.737 0.041 0.013 0.042 0.085 0.024 2.222 2.397 2.670 2.966 3.021 3.298 3.581 4.179 5.175 合计 特征指纹检出率 总差异率 重叠率 1.518 1.456 0.094 0.356 0.406 0.676 0.591 0.779 2.068 27 1.53 1.44 0.11 0.34 0.38 0.67 0.60 0.78 2.14 27 100％ 0.008 0.011 0.170 0.045 0.064 0.009 0.015 0.001 0.035 0.102 0.102％ 100％ 1.59 1.50 0 0.40 0.45 0.71 0.58 0.70 2.18 26 96％ 0.047 0.030 1.000 0.123 0.108 0.050 0.018 0.101 0.054 0.370 0.370％ 83.3％ 1.53 1.40 0.11 0.39 0.43 0.69 0.61 0.75 0 24 89％ 0.008 0.038 0.170 0.095 0.059 0.021 0.032 0.037 1.000 0.231 0.231％ 74.3％ 1.48 1.35 0.08 0.29 0.41 0.63 0.55 0.70 1.98 27 100％ 0.250 0.073 0.149 0.185 0.010 0.068 0.069 0.101 0.042 0.135 0.135％ 89.5％ 0 1.25 0 0.48 0.39 0 0 0 0 10 37％ 1.000 0.141 1.000 0.248 0.039 1.000 1.000 1.000 1.000 0.669 0.669％ 54.0％ 1.48 1.38 0.08 0.31 0.41 0.70 1.76 0.72 2.15 26 96％ 0.025 0.052 0.149 0.129 0.010 0.035 1.978 0.075 0.039 0.308 0.308％ 85.7％ 1.60 1.40 0.07 0.30 0.35 0.66 0.58 0.84 1.94 26 96％ 0.054 0.038 0.255 0.157 0.138 0.023 0.018 0.078 0.062 0.143 0.143％ 85.3％
*α-标准药材特征指纹峰的相对保留值。
**Ar-标准药材特征指纹峰的归一化面积均值。
***特征指纹值—国家标准药材特征指纹归一化面积值。
*****特征指纹差异率—国家标准药材与标准药材特征指纹归一化面 积值差异率。
表2以某中药为例，列出了经统计处理后标准药材的特征指纹及 每个特征指纹峰的面积归一化均值，同时还列出了国家标准药材和6 个待检药材的特征指纹与标准药材的差异率和总差异率以及各药材 的特征指纹检出率。该表将各项重要的鉴定参数综合在一起，便于分 析研究。表2充分显示了国家标准药材在指纹谱鉴定中的良好表现， 其总差异率为0.102％，特征指纹检出率为100％，重叠率也为100％； 而待鉴药材4，其总差异率为0.669％，特征指纹检出率为37％，重叠 率为54％，将被判为不合格品种。为了直观地看到鉴定的情况，还可 以特征指纹为基准，绘出他们的差异率折线图，见图一。
本发明又提供了上述一种中药特征指纹谱的相似率和差异率。
以上内容所涉及的共有峰、重叠峰、n强峰、特征指纹和归一化 面积值等参数分别从定性鉴别和量化描述两个方面反映了中药样品 的内在特性。但在对中药作出明确的鉴定时，尚需有数据作依据。为 此需将上述各项参数按其贡献予以综合表达。
相似率和差异率是一个表示待检药材与标准药材间的相似程度 的数据，它将定性信息与定量数据综合于一体，作为最终鉴定的重要 依据。
相似率，是以特征指纹为基础，对此求出待检药材与标准药材间 相似或差异，通过它可显示出两者在特征指纹上的相似性。首先计算 每个特征指纹间的相似率，见下式：
某个特征指纹的相似率＝AI鉴/AI标*100％
然后对所有的特征指纹相似率求和得其总相似率，见下式：
总相似率＝∑(AI鉴/AI标)/n...........................................(1)
Ai鉴：待检药材中某个特征指纹的归一化面积值
Ai标：标准药材中某个特征指纹的归一化面积值
n：特征指纹的总数
∑：求和符号
按(1)式计算时，可能会遇到下列两种情况，当Ai鉴都小于 Ai标时，结果很清楚，其求和后之相似率比小于“1”，其间各值在 求和过程中虽有一定的“拉平”作用，但这都是在标准以下的平均。 但若出现多个Ai鉴大于Ai标时，且大出好几倍时，该求和过程已不 再是拉平作用，而变成“填平”作用，因为它可以将许多小坑，即较 小的差异都填平了，这有违于建吕相似率时的原意。此外，按相似率 的含义，当相似率等于1时，表示两者完全相同；若小于1时，则表 示两者的相似程度；当大于1时，就不易解释清楚了。为能客观地表 示待检药材的鉴定结果，在此基础上提出了差异率的概念。差异率的 定义是以每个特征指纹峰与其相应的标准特征指纹峰的面积归一化 值间的比值来表示两者间的差异程度，总差异率则是将每个特征指纹 峰的差异率求和即得总差异率愈大，表示比较双方相差愈大，说明 待检药材不可能是欲鉴定的品种，而总差异率愈小，则为欲鉴定品种 的可能性愈大。另外，待鉴药材与标准特征指纹相比较，可得到特征 指纹检出率，此也是表示差异的重要数据。现对每个特征指纹计算其 差异率，计算式如下：
特征指纹差异＝|AI标-AI鉴|AI标........................................(2)
材中无某个相应的特征指纹时，Ai鉴＝0，则该特征指纹差异率为 1；若Ai标＜Ai鉴时，则取绝对值。因此，在计算总差异率时是所有 差异的求和，避免了填平作用，能客观地反映待鉴药材的差异情况， 总差异率可按下式计算：
总差异率＝∑(|AI标-AI鉴|/AI标)/n..................................(3)
本发明所要解决的另一技术问题是提供了上述一种中药特征指 纹谱的应用。
共有峰和重叠率是中药鉴定中的重要参数，也是构成色谱指纹谱 的基础。共有峰是重叠率的基础，它反映了待鉴药材中有多少成分与 标准药材相同，显示了两者间的相似程度。可以说，在所有涉及的参 数中，重叠率是最全面、最客观地反映了两个参与比较药材间的相似 或差异。由于所有的色谱峰均被计入重叠率计算之中，因此一些反映 个体特性的色谱峰也计入，这对品种的鉴定将会造成一定的干扰使重 叠率偏低。这情况在前期的应用中已时有遭遇，有些药材在鉴定过程 中证明其与标准药材同样含有那些有效成分、主要成分(含量较高的 成分)或指标成分、特殊成分，在内在特性的重要内容方面是相符的， 但两者的重叠率较低。此时若轻率地作出否定的结论，显然不合适。 若能将反映个体差异的色谱群予以模糊处理使品种的特征被显示出 来，则将会得到更真实的鉴定结果。
特征指纹，是模糊处理的结果，作为植物种属的代表性特征。使 进一步的鉴定工作更客观和合理，必须有一规范化的设计。首先是取 材问题，要有几个批号的标准药材，所谓几个批号是指同一产地和不 同产地在不同的取样点取多批样品。样本数大小的问题，原则上是愈 大愈好，一般说来，应符合统计学的要求，至少5个以上，建议在 20左右，使符合中药质量分析要求。因此使特征指纹并非得自某一 标准药材，而是十个、二十个样品的统计值，特别是每个α值所对应 的面积归一化只是个样品的均值，其次是标准化的色谱操作条件，以 增强其可比性。
特征指纹峰检出率，这是在鉴定工作中经常用的，即在待鉴药材 与特征指纹作比较时，能在待鉴药材中找到的特征指纹峰数与特征指 纹峰总数的比值。
特征指纹检出率＝待鉴药材中的特征指纹峰数/特征指纹峰总数
该检出率是鉴定药材时的重要依据，检出率达100％者，说明该 药材在内在品质的主要方面已达到该品种的质量要求，但这还不能作 为鉴定的唯一依据，尚需对其所含各特征指纹峰进一步作量的方面考 察，以保证药用的安全性。
特征指纹的差异率，特征指纹的检出率，仅指明了特征指纹峰的 有或无，“无”为零是显而易见的，“有”则究竟有多少，这也是个重 要的问题，在目前，一不知它们为何物，二不具有它们的标准品，怎 样进行量化。显然，不可能绝对定量，但相对定量是完全可能的。上 节对差异率和总差异率均已有详细说明，具体的运作可见下章所列各 例。特别提请读者注意的是，在中药鉴定过程中会遇到各种特殊情况， 需谨慎处之。
特征指纹曲线
特征指纹曲线是由特征指纹和各指纹峰相应的面积归一化值所 构成，以曲线图的方式说明某中药特征指纹的情况。它是一种直观图， 以曲线的形式同时将每个特征指纹峰的质和量显示出来。如在同一坐 标系统内将待鉴药材与相应标准的特征指纹峰同时显示出来，则将清 楚地看到两者的相似程度。虽然，这是一种直观感觉，进一步的阐明 尚有赖于其它参数的应用，但他对鉴定的结果可起到良好的辅助作 用。
特征指纹的用途不仅限于含有相同有效成分的不同中药间区分 和鉴别，而主要用于品种的鉴定，因为同属不同品种间的区分和鉴定 需要更多而细致的信息，特征指纹正好满足这一要求。特征指纹还能 为中成药所含药味的鉴定提供依据，解决了长期来一直令人困惑的难 题。它不仅可以明确地告知该味中药的存在与否，还能区分掺伪作假 或误用同属植物。
附图说明 图1 黔岭淫羊藿叶(贵州黔岭山)HPLC图谱 图2 黔岭淫羊藿叶(上海市药材公司)HPLC图谱 图3 黔岭淫羊藿茎(贵州黔岭山)HPLC图谱 图4 巫山淫羊藿叶茎(贵州)HPLC图谱 图5 巫山淫羊藿根(陕西安康)HPLC图谱 图6 巫山淫羊藿茎(陕西安康)HPLC图谱 图7 巫山淫羊藿叶(陕西安康)HPLC图谱 图8 煎叶淫羊藿茎(陕西安康)HPLC图谱 图9 煎叶淫羊藿叶(陕西安康)HPLC图谱 图10 煎叶淫羊藿叶(安徽)HPLC图谱 图11 煎叶淫羊藿茎(安徽)HPLC图谱 图12 煎叶淫羊藿叶茎(广西灵山)HPLC图谱 图13 宝兴淫羊藿叶(云南)HPLC图谱 图14 宝兴淫羊藿茎(云南)HPLC图谱 图15 宝兴淫羊藿叶茎(湖南)HPLC图谱 图16 柔毛淫羊藿茎(四川灌县)HPLC图谱 图17 柔毛淫羊藿叶(四川灌县)HPLC图谱 图18 朝鲜淫羊藿叶(河南洛阳)HPLC图谱 图19 朝鲜淫羊藿叶茎(辽宁)HPLC图谱 图20 朝鲜淫羊藿叶茎(青海药检所)HPLC图谱 图21 淫羊藿叶茎(江苏无锡)HPLC图谱 图22 淫羊藿叶茎(浙江临安)HPLC图谱 图23 淫羊藿叶茎(陕西)HPLC图谱 图24 1号样品生半夏的HPLC图谱 图25 2号样品生半夏的HPLC图谱 图26 3号样品生半夏的HPLC图谱 图27 4号样品生半夏的HPLC图谱 图28 5号样品制半夏的HPLC图谱 图29 6号样品制半夏的HPLC图谱 图30 11号样品制半夏的HPLC图谱
具体实施方式 实施例1
植物样品 1.北柴胡 Bupleurum chinense DC 2.多枝柴胡 B.polycloxum Y.LIetS.L.Pan 3.线叶柴胡 B.angustissmum[Franch]Ditagawa 4.窄竹叶柴胡 B.margInatum Wall.Ex DC var stenophyllum
[Wolff]shan et Li 5.泸西柴胡 B.luxiense Y.LI et S.L.Pan 6.丽江柴胡 B.rocfkiI Wolff 7.韭叶柴胡 B.kunmingense Y.Li et S.L.Pan 8.小柴胡 B.hamiltonii Belak 9.空心柴胡 B.longicaule Woll.ex DC.var.franchetii de Boiss 10.柴首柴胡 B.chaIshoui Shan et Sheh 11.红柴胡 B.scorzonerifolIum Willa 12.汶川柴胡 B.wenchuanse Shau et Y.Li 13.马尔康柴胡 B.malconense Shan et Y.Li 14.黑柴胡 B.Smithii Wolff 15.大苞柴胡 B.euphorbIoIdes Nakai 16.小叶黑柴胡 B.Smithii Wolff var.parvIfoluim Shan et Y.Li 17.竹叶柴胡 B.marginatum Wall.ex DC 18.大叶柴胡 B.1ongiradiatum Turcz 19.青海柴胡 B.qinghaiense Y.Li et Guo sp.nov.
样品制备
分别取上述19种植物样品粗粉各300克，以水蒸汽蒸馏法提取 挥发油，然后配成1％乙醚溶液备用。
仪器及色谱条件
仪器 GC-R1A[日本-岛津]
色谱条件 色谱柱Chromosorb W AW DMCS 10％PEG-20M；
柱温 170c 进样温度 220c
载气 N2 40ml/min 检测器 FID
灵敏度 1 衰减 2
进样量 0.5微升 分析时间 60min
定量方法 面积归一化法
气相色谱相对保留值指纹谱的建立
由于植物挥发油的组成十分复杂，色谱峰多而密集，难以插入一 个合适的外参照物。为此，本研究采用内参照物，选择一个在19个 挥发油样品中均存在的成分作为内参照烽，它的出峰时间接近中心出 峰时间，又与邻近组分能较好地分离，且有一定的峰面积。按前面章 节所介绍的方法对各样品中之待定内参照峰进行定位，即在19个样 品中分别加入相同的标准品，分别进样分析，由所得色谱数据求出各 样品中待定位内参照峰与加入标淮品的相对保留值，核对各样品的α 值使它们的内参照峰获得正确定位，保证所有的样品色谱指纹谱均建 立在统一内标峰的基础上，大大增强了它们间的可比性。在建立色谱 指纹谱时，首先将各色谱峰的相对保留值按大小依次排队，并在每个 α值项下标出该色谱峰所对应的相对百分含量。随即得到某样品的 GC-相对保留值指纹谱，见表3。
表3 GC-FPS of species of Bupleurum genus Sample No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Relative retention value 0.046 0.052 0.057 0.062 0.066 0.070 0.081 0.086 0.093 0.098 0.109 0.118 0.130 0.140 0.147 0.155 0.166 0.173 0.184 0.195 0.209 Content(％) 0.90 21.3 4.15 6.32 7.57 4.90 35.2 0.52 1.87 21.8 0.14 3.10 11.7 0.11 5.40 6.13 0.47 2.30 133 0.31 0.23 21.6 0.60 0.88 1.65 2.17 7.97 0.58 7.87 0.39 17.3 20.6 18.4 5.70 1.70 0.04 0.69 1.71 0.24 5.60 0.40 7.19 2.36 2.30 2.04 0.22 1.17 18.7 2.90 2.95 6.77 1.64 0.23 6.90 0.38 0.49 4.36 1.69 3.51 12.2 2.25 1.30 0.30 0.09 0.10 0.30 0.20 0.80 0.12 0.38 0.21 0.53 0.66 0.17 0.07 0.65 0.01 0.91 0.87 0.90 1.30 0.20 2.05 0.05 2.10 0.64 0.60 0.44 0.27 1.32 7.80 0.30 0.80 5.02 0.37 3.40 0.30 0.53 0.57 0.13 0.05 0.14 0.08 0.70 0.40 0.39 0.33 0.20 0.31 3.39 0.75 4.74 0.43 1.52 0.82 2.00 1.04 3.90 0.70 2.90 2.77 3.50 0.90 5.60 3.66 2.52 2.19 2.50 0.96 0.70 1.52 0.25 0.70 0.52 1.20 0.50 2.30 3.37 0.95 0.86 1.35 1.56 1.96 1.10 0.83 0.35 1.16 0.80 1.06 0.91 1.42 0.81 0.24 1.94 8.37 1.20 1.76 0.45 1.62 1.40 4.40 15.2 1.71 1.11 0.90 3.61 1.51 7.76 1.61 5.41 3.00 7.80 1.46 2.10 5.40 9.85 5.06 6.40 4.12 0.80 0.65 1.68 2.81 134 3.44 4.65 3.38 10.1 6.09 2.80 1.40 5.10 1.10 1.80 2.14 1.21 2.31 1.81 7.49 0.90 Peak number 6 7 7 12 6 16 8 3 18 11 14 13 17 10 8 4 3 13 7 12 10
表3 GC-FPS of species of Bupleurum genus continued Sample No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Relative retention value(a) 0.222 0.229 0.252 0.274 0.291 0.310 0.321 0.350 0.370 0.397 0.423 0.459 0.478 0.497 0.535 0.550 0.602 0.660 0.715 0.737 0.788 Content(％) 8.30 13.5 4.80 0.94 16.5 1.46 0.80 4.00 6.40 2.66 4.00 3.35 2.30 18.3 1.71 0.89 4.92 0.70 3.36 1.60 1.30 4.20 1.19 2.70 6.11 0.62 9.19 5.29 7.16 3.29 12.0 4.30 3.51 2.40 1.32 1.50 1.50 1.94 3.59 2.49 3.97 4.85 9.66 12.5 2.30 1.70 3.80 3.55 2.05 0.60 3.73 3.40 1.57 1.47 2.58 3.87 0.60 3.47 1.60 0.88 0.48 2.67 2.95 4.90 2.29 0.80 2.80 1.66 0.95 0.90 0.83 1.84 1.73 1.97 2.37 1.90 2.04 0.20 1.06 0.73 3.07 1.11 8.60 1.41 0.99 1.89 0.80 1.30 4.20 6.70 0.20 4.84 2.30 1.12 4.22 1.81 11.0 1.86 0 80 0.50 0.65 0.50 0.80 0.96 0.65 0.77 0.24 1.53 0.82 0.50 0.30 0.60 0.30 1.37 0.40 0.22 0.28 0.46 0.06 0.04 0.11 0.61 0.25 0.77 0.29 0.60 0.40 0.53 1.96 0.44 0.05 0.50 0.06 0.01 0.46 1.70 0.92 0.03 0.05 0.08 0.40 0.02 0.31 2.05 0.37 0.38 2.30 5.72 0.20 2.10 0.70 1.20 5.27 4.91 0.85 0.87 2.58 1.00 2.90 2.20 2.12 1.80 0.50 3.40 1.21 2.72 1.82 0.26 0.40 0.05 0.30 0.30 0.30 0.53 0.42 0.26 0.15 1.06 0.03 14.6 10.9 0.60 22.6 2.65 6.20 4.10 4.90 13.8 11.2 9.68 2.97 7.22 2.39 2.82 3.22 11.7 4.37 2.10 5.21 0.90 0.70 1.99 0.70 1.70 1.79 3.00 4.47 2.30 0.45 3.33 2.05 0.91 0.20 4.01 2.13 0.90 1.81 1.80 2.10 0.80 0.60 4.20 2.92 9.22 1.33 0.73 1.97 1.00 3.77 4.47 3.56 0.50 Peak number 5 13 14 12 14 6 10 13 10 13 10 16 4 7 12 8 12 19 14 4 16
表3 GC-FPS of specieS of Bupleurum genus continued Sample No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Relative retention value Peak Number Content(％) 0.88 0.10 2.03 0.82 1.21 1.70 0.20 0.06 1.50 0.37 1.30 21.6 4.30 1.75 9.60 5.91 15.0 7.20 25.0 20.4 15.4 8.56 1.76 9.93 14.8 3.29 5.66 5.20 2.24 2.10 22.97 20.27 20.25 19.96 20.34 20.64 20.07 20.16 20.29 20.41 20.15 21.42 21.83 22.41 22.45 22.27 22.32 22.42 22.02 0.70 0.26 1.96 1.03 1.63 1.54 0.67 2.29 0.44 1.33 0.20 2.39 0.03 4.03 2.90 1.60 2.10 1.02 2.55 0.60 2.28 0.27 0.20 0.30 10.1 2.58 4.40 3.51 0.40 3.89 0.58 0.35 2.72 1.86 1.27 1.70 2.59 0.60 0.37 0.25 1.29 0.48 0.59 0.56 0.90 0.31 1.69 0.24 0.14 5.14 3.10 0.30 1.40 2.96 2.10 4.30 6.07 5.20 2.47 0.67 2.52 1.79 5.67 0.23 2.21 0.75 0.70 1.48 3.70 4.40 1.31 0.32 0.46 0.30 0.80 0.40 1.01 4.86 0.32 1.24 8.06 0.62 0.42 18.3 3.19 0.84 5.08 3.00 2.90 2.41 16.0 2.00 4.81 5.10 4.61 4.75 0.74 3.19 1.79 4.50 1.87 2.10 1.39 1.20 0.39 2.13 1.30 3.10 4.90 1.70 0.90 1.61 2.50 2.61 3.84 0.48 2.06 0.56 0.22 2.54 1.12 3.30 0.85 5.21 1.10 1.60 1.69 3.10 3.36 1.36 0.71 7.55 0.39 1.09 0.71 1.72 1.12 3.00 4.56 3.20 1.90 2.00 3.10 2.07 3.33 1.12 0.27 1.88 1.04 0.33 0.44 2.23 32 32 30 32 32 31 28 32 34 32 35 31 26 37 33 41 35 33 30 Peak number 6 1 4 19 11 12 9 11 6 18 7 11 1 18 1 16 14 14 3
由表3所列数据可看到许多有意义的情况。首先，19个样品所 显示的色谱峰是有差异的，其中有的仅为少数样品所共有，甚至仅为 某个样品所独有。当然，其中也有为18或19个样品所共有的，显示 了柴胡属或某个品种植物的特征。
指纹谱的各项参数
重叠率 以北柴胡的指纹谱为基准，将北柴胡出峰数与欲对比样 品出峰数之和作为分母，两者相互共有峰数之两倍作分子，以此分别 求出18种柴胡属植物挥发油色谱峰的重叠率，见表4。由表列数据 可知，一般柴胡属植物的重叠率均低于70％，仅14号，16号，18 号，19号四个样品超过70％。因此需格外关注这四个样品的其它指 纹谱参数。
表4 柴胡属植物与北柴胡的重叠率 样品序号 重叠率 序号 重叠率 样品序号 重叠率 2 56.3 8 59.4 14 78.3 3 64.5 9 48.5 15 61.3 4 59.6 10 59.4 16 74 5 62.5 11 68.6 17 62.7 6 63.5 12 50.8 18 75.8 7 66.7 13 58.6 19 74.2
八强峰综合各样品的出峰情况，出峰总数为68，大部分样品 的出峰数在32个左右，其中有两个样品的差异较大，小叶黑柴胡出 峰多达41个，马尔康柴胡最少，仅26个。因此在决定n强峰时，规 定n＝8。现将19个样品的八强峰情况列表于下。
表5 柴胡属19个样品的八强峰 产品 1 2 3 4 5 6 7 8 序号 ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α 1 21.6 1.00 14.6 .660 5.72 .535 5.21 .715 5.14 1.44 5.08 1.80 4.12 .195 3.51 .274 2 18.4 .066 10.9 .660 8.30 .222 7.80 .184 5.40 .057 4.30 1.00 3.90 .130 3.10 1.44 3 35.2 .052 21.6 .062 5.60 .070 4.40 .173 2.40 .274 1.90 .350 1.75 1.00 1.70 .291 4 22.6 .660 15.2 .173 9.60 1.00 5.10 .209 4.20 .525 4.20 .366 4.00 .229 3.80 .291 5 13.5 .222 7.19 .070 6.13 .057 5.91 1.00 5.70 .066 5.21 2.20 5.02 .109 4.90 2.07 6 16.0 1.80 15.0 1.00 6.70 .370 6.40 .229 6.20 .660 3.50 .130 3.20 2.35 2.90 1.16 7 7.20 1.00 4.80 .222 4.10 .660 3.40 .109 2.30 .070 2.10 .098 2.00 1.80 1.90 2.35 8 25.0 1.00 6.07 1.44 4.90 .660 4.86 .159 4.84 .370 4.81 1.80 4.40 1.54 2.58 1.20 9 20.4 1.00 13.8 .660 5.60 .130 5.40 .184 5.20 1.44 5.10 1.80 4.40 1.20 4.20 .788 10 15.4 1.00 11.2 .660 9.85 .184 6.11 .252 4.61 1.80 4.47 .715 3.66 1.30 3.51 1.20 11 9.68 .660 9.22 .788 8.56 1.00 8.06 1.59 4.91 .535 4.75 1.80 4.22 .370 3.84 2.07 12 21.3 .046 18.7 .070 16.5 .222 5.06 .184 3.39 .118 2.97 .660 2.19 .130 2.17 .062 13 18.3 .229 13.4 .195 11.0 .370 9.93 1.00 7.22 .660 4.36 .081 3.37 .140 3.19 1.80 14 14.8 1.00 13.3 .057 9.19 .252 7.97 .062 7.76 .173 4.15 .046 3.87 .291 3.59 .274 15 18.3 1.59 8.60 .350 7.55 2.20 5.67 1.44 5.29 .252 4.74 .118 4.65 .195 4.50 1.80 16 21.8 .052 7.87 .062 7.16 .252 6.77 .070 6.32 .046 5.66 1.00 5.41 .173 3.97 .274 17 12.2 .081 11.7 .660 10.1 .195 7.57 .046 5.20 1.00 4.92 .229 4.85 .274 3.29 .252 18 17.3 .062 12.0 .252 9.66 .274 7.49 .209 6.40 .184 6.09 .195 4.90 .046 4.37 .660 19 20.6 .062 12.5 .274 11.7 .052 8.37 .155 6.90 .070 4.90 .310 4.30 .252 3.00 .173
结果与讨论
由于北柴胡的样品批号太少，仅一个，无法从统计角度得出其特 征指纹，只能直接从各样品与北柴胡的重叠率和八强峰间的比较来判 断它们与北柴胡的相似程度。虽然显得较粗糙，但还是能说明一定问 题。有四个样品，14，16，18，19等，它们与北柴胡的重叠率均超 过70％，说明它们所含的组分与北柴胡很相似，但从八强峰观之，则 差异较大。说明主要组分的含量有较大差异，因此，在作品种鉴定时 将可据此给出待鉴样品非北柴胡的结沦。以有毒的大叶柴胡[18号] 为例，其重叠率高达75.8％，其八强峰中有三个与北柴胡相同，但三 者在大叶柴胡的挥发油总量中仅占20.1％，说明该三个组分并非是大 叶柴胡挥发油的主成分。八强峰的比较结果明确显示了两者间的差 异，为鉴定堤供判断依据。又，当判定青海柴胡为柴胡属植物的新种 时，单凭外形鉴定感到困难，色谱指纹谱将为此堤供必要的证明。青 海柴胡虽有高达74.2％的重叠率，但在八强峰的比较中仅一个与北柴 胡相同，其量仅为12.5％，据此判断青海柴胡为柴胡属植物的一个新 种。
表3的指纹谱还提供了各色谱峰在19个样品中的出现情况，其 中α值为0.66和1.00两个色谱峰系19种植物挥发油所共有的组分， α值为1.44和1.80两个色谱峰为18个样品所共有，α值为0.13色 谱峰为17种样品所共有，α值为0.070，0.788，和2.07三个色谱峰 系16种样品所共有。这些色谱峰可以考虑作为柴胡属植物挥发油的 特征峰，并可认作柴胡属植物的特征指纹。至於北柴胡的特征指纹必 须从多个批号的样品获得[见下节内容]。但此处所得结伦与以下章 节内容也是相互呼应的。
柴胡属植物的HPLC相对保留值指纹谱研究
本研究在上海医科大学生药教研室的支持配合下，提供了十九个 不同产地的北柴胡和柴胡属二十五个品种共四十五个样品，为研究工 作的开展创造了不可多得的机会，在此再次向潘胜利教授表示深深的 感谢和由衷的敬意。下列各样品不仅给出了它们的学名，并标出了它 们的产地。特别是十九个不同产地的北柴胡样品形成了不同批号的样 品，为北柴胡的指纹谱研究提供了极好的机会，使北柴胡样品的色 谱指纹谱具有统计意义，并大大增强了特征指纹的适应性，实用性， 代表性。其它的柴胡属植物样品，例如窄竹叶柴胡有来自五个产地的 样品，银州柴胡有来自四个产地的样品，线叶柴胡有来自三个产地的 样品，红柴胡[窄叶柴胡]有来自三个产地的样品，小叶黑柴胡有来自 八个产地的样品，多枝柴胡和锥叶柴胡也各有二个产地的样品。这为 同品种不同产地的样品间的比较提供了可能，也为今后建立GMP基 地提供重要的信息和选择产地的依据。现将各样品按不同品种分列于 下：
柴胡属植物样品
1.北柴胡B.chinese D C共十九个样品 编号 1 31 32 33 34 35 产地 石家庄 福州 泉州 西安 厦门 洛阴 编号 36 37 38 39 40 41 产地 天津 沈阳 庆安 赞皇 郑州 高安 编号 42 43 44 45 46 47 产地 萍乡 承德 武汉 阜阳 太原 南宁 编号 48 产地 临安
2.窄竹叶柴胡B.marginatum var.stenophyllum共五个样品 编号 14 55 56 57 58 产地 会泽 广州 电白 南宁 柳州
3.银州柴胡B.yinchowense共四个样品 编号 4 27 59 60 产地 吴中 合水 黑水 镇宁
4.线叶柴胡B.angustissimum共三个样品 编号 3 28 64 产地 固阳 包头 礼县
5.狭叶柴胡[红柴胡]B.scorzonerifolium共三个样品 编号 8 62 63 产地 天津 金华 承德
6.锥叶柴胡B.bicaule共二个样品 编号 5 65 产地 锡林浩特 锥叶
7.多枝柴胡B.polyclomum共二个样品 编号 11 61 产地 会泽 多枝
8.小叶黑柴胡B.smithii var.parvifolium 编号 6 29 49 50 51 52 产地 同仁 榆中 榆中 包头 同仁 银川 编号 53 54 产地 玉山 天祝
9.其他不同品种柴胡共十八个样品 编号 样品品种 产地 2 大叶柴胡B.longiradiatum 通化 7 黑柴胡B.smithii 沈阳 9 阿尔泰柴胡 乌鲁木齐 10 四川柴胡B.sIchuanense 汶川 12 韭叶柴胡B.kunmIngense 昆明 13 泸西柴胡B.luxiense 建水 15 川滇柴胡B.candollei 会泽 16 柴首柴胡B.chaishoui 汶川 17 空心柴胡B.longicaule var 毕节
franchetii 18 汶川柴胡B.wenchuanense 汶川 19 丽江柴胡B.rockii 丽江 20 细茎有柄柴胡B.petiolulatum 丽江
var.tenerum 21 小柴胡B.hamiltonii 昆明 22 矮小柴胡 昆明 23 马尔康柴胡B.malconense 汶川 24 黄花鸭跖柴胡B.commelynoideum
var.flavifloum湟中 湟中 25 三岛柴胡B.falacatum 日本 26 韩国柴胡 韩国
标品与试剂
标准品 柴胡皂甙A，C，D[简写为Ssa，SSc，SSd]购自中国药
品生物制品检定所
试剂 甲醇，乙晴[以上均为色谱纯试剂]，呲啶，氨水[以上均
为A.R.级试剂]，重蒸水
标品与样品液的制备
柴胡皂甙单体标准品溶液的制备
准确称取柴胡皂甙A，C，D标准品各约1mg，用甲醇溶解后分 别置于1ml容量并中，定容至刻度。
柴胡皂甙混合标准品溶液的制备
准确称取柴胡皂甙A，C，D标准品5.10mg，5.15mg，5.255mg， 用甲醇溶解后置于5ml容量瓶中，定容至刻度。
柴胡样品溶液的制备
分别取各编号已干燥的柴胡样品适量，粉碎，过20目筛。准确 称取各样品粗粉0.25mg，置10ml容量瓶中，加5％氨水-甲醇溶液 8ml，润湿0.5小时，定容至10ml，密闭，超声提取1小时。离心， 取上清液8ml，室温挥干，加适量甲醇溶液，移入2ml容量瓶内，定 容至刻度。临用前过0.45微米滤膜，作进样溶液。
仪器与色谱条件
仪 器 高效液相色谱仪PERKIN ELMER[series 200
LCpump，DAD235C]，超声波器，离心机。
色谱条件 色谱柱 LUNA C-18[2] 250mm-4.6mm 5微米
流动相 乙睛-水 梯度洗脱，梯度变化见下表
时间[min] 0 10 15 30 40 55
乙睛％ 5 25 28 40 60 80
UV检测波长 210nm 柱温 室温[25c]
灵敏度 0.2AUFS 流速 1ml/min
进样量 20微升
不同产地北柴胡HPLC相对保留值指纹谱的建立
按上述实验条件对各样品进样分析，得到它们的色谱图和相应的 数据，根据前述的指纹谱原理建立各样品的色谱指纹谱。首先要做的 工作是对各样品中的内标峰进行定位，接着求取各样品中每个色谱峰 的相对保留值，以大小为序排列，然后附上各色谱峰相对应的相对面 积值或归一化面积值，即得各样品的相对保留值指纹谱。现将十九个 不同产地的北柴胡样品的指纹谱汇集于表6。 不同产地北柴胡指纹谱的各项参数
根据前述定义建立不同产地北柴胡指纹谱的各项参数，分述如 下：
共有峰在十九个样品中全可检测到的色谱峰，它们的α值分别 为0.123，0.821，1.000和1.204等四个，在十八个样品中可检测到的 有α值为0.284，0.309，0.350等三个，在十七个样品中可检测到的 有α值为0.039，0.050，0.400，0.420，0.475，0.513，0.676和0.859 等八个，在十六个样品中可检测到的有α值为1.063，0.708和0.456 等三个，在十五个样品中可检测到的有α值为0.088，0.244，0.388， 0.572，0.604和0.761等六个，由于十五个样品已占样品数的78.9％， 因此以上各α值的色谱峰在大多数样品中具有较高的出现机率，这些 色谱峰对北柴胡的品种鉴定具有特别重要的意义，为北柴胡特征指纹 的选择和确定提供依据。
重叠率 此处的样品均为同品种的北柴胡，只是产地不同，很难 判定以何者做基准，暂以柴胡皂甙A，C，D含量较高的48号样品为 基准，计算北柴胡不同产地各样品与48号样品间的重叠率。见表6。
表6不同产地北柴胡的HPLC-FPS 样品α 相对面积 1 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 共有峰数 0.039 1.45 2.20 1.23 3.18 1.07 1.07 1.17 1.75 1.41 2.75 2.47 2.01 0.98 1.68 2.77 1.59 2.22 17 0.055 19.82 3.04 9.97 3.70 4.79 2.56 4.00 7.54 2.26 4.56 3.03 4.16 2.83 8.07 6.49 5.53 2.38 17 0.070 6.92 6.15 11.28 7.00 7.54 7.38 6.99 8.54 7.30 5.18 10 0.074 16.61 9.03 7.94 7.91 6.38 13.73 8.47 13.46 7.34 11.36 10 0.079 0.86 0.58 1.24 0.87 2.86 1.30 1.43 1.88 1.10 1.05 1.19 0.77 0.90 0.50 14 0.084 4.92 10.32 0.42 6.03 1.25 5 0.088 2.09 5.29 5.63 5.08 6.29 6.16 4.63 5.94 5.21 6.27 0.42 4.79 6.13 5.00 3.17 15 0.108 1.28 0.55 2 0.123 1.42 1.60 1.00 2.24 2.30 0.49 1.74 2.48 2.37 1.42 1.03 3.58 1.27 1.47 0.84 2.12 1.24 1.17 1.46 19 0.141 0.87 1.09 1.11 1.04 4 0.150 0.86 1.56 0.89 3 0.183 1.68 0.55 2.45 1.92 0.57 5 0.192 1.10 0.69 2 0.204 0.76 0.79 0.95 0.78 4 0.219 0.88 1.41 0.49 1.44 2.22 0.99 0.96 0.83 8 0.230 2.30 0.62 1.52 0.86 5.56 1.57 1.63 1.77 8 0.244 1.13 1.35 0.71 1.61 1.32 1.74 0.99 1.38 1.82 2.01 1.62 1.24 2.39 0.93 1.28 15 0.258 1.79 1.44 1.06 1.06 2.15 1.42 0.96 7 0.265 2.69 1.45 1.05 3 0.273 3.30 0.82 2.44 0.84 1.09 1.82 0.86 1.73 0.79 9 0.284 1.39 1.98 1.64 2.52 0.65 0.84 3.20 0.82 2.11 1.92 5.28 2.33 1.36 2.31 1.20 1.57 1.70 2.09 18 0.309 1.68 2.70 3.61 1.40 2.45 2.66 2.37 3.14 2.69 2.05 4.11 1.52 1.09 3.26 2.44 1.96 1.26 3.30 18 0.326 0.78 1.51 2.67 1.27 2.04 4.30 1.67 1.79 2.23 1.83 1.58 14.70 1.53 2.02 14 0.335 1.20 2.29 1.82 1.99 1.16 1.21 0.87 0.82 1.14 9 0.350 2.44 3.85 4.05 3.24 1.69 2.59 5.46 1.39 1.39 1.35 3.24 2.83 2.77 1.59 4.79 1.37 1.70 1.38 18 0.360 1.52 1.60 1.59 3 0.367 2.53 2.38 2.75 1.01 1.25 0.60 2.11 2.50 2.77 1.36 5.80 3.45 3.46 4.93 14 0.372 .361 1.49 1.12 2.66 4.30 2.59 1.04 2.05 8 0.388 4.37 2.04 1.97 1.74 1.42 3.69 3.53 2.63 3.25 2.78 0.81 2.22 1.34 2.49 0.87 15 0.393 2.28 1.38 2.70 3 0.400 0.90 2.84 3.11 1.22 3.40 1.05 1.76 1.26 2.95 3.11 1.36 2.10 1.15 4.42 2.76 1.30 2.15 17 0.420 1.96 2.52 1.52 2.64 2.76 2.87 1.45 4.26 2.54 2.67 8.53 2.40 1.20 0.79 2.41 1.49 3.07 17 0.434 1.24 3.28 1.88 2.72 2.97 2.54 4.95 0.72 2.11 1.12 10 0.443 2.27 1.00 1.56 3.09 1.44 4.33 2.17 0.87 4.86 2.36 4.41 3.99 2.06 3.43 14 0.456 1.91 1.76 2.04 2.34 1.93 2.01 2.11 0.91 1.29 1.80 2.42 4.43 1.09 1.11 1.64 3.45 16 0.466 0.77 0.93 3.29 3.02 2.20 0.80 6 0.475 0.66 3.62 1.16 0.90 3.14 2.31 3.25 2.19 2.25 3.80 2.95 1.23 2.66 1.42 1.52 1.45 1.40 17 0.494 1.51 2.04 2.03 1.74 1.20 2.19 0.96 2.83 1.32 2.32 1.50 11 0.504 0.81 1.75 2.16 0.76 1.28 0.79 0.67 1.60 1.19 1.29 3.37 1.30 4.55 13
continued 样品α 相对面积 1 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 共有 峰数 0.513 1.97 3.22 3.21 3.42 1.25 0.71 2.18 1.39 1.24 1.41 4.03 0.93 1.42 2.38 2.28 1.51 2.06 17 0.537 2.01 1.75 1.05 0.94 1.32 0.90 0.88 2.18 1.14 0.68 1.00 0.97 3.09 1.17 14 0.556 1.06 0.91 1.14 0.79 0.93 4.71 1.23 2.12 0.79 2.53 1.89 11 0.572 1.02 1.37 0.74 1.02 0.98 0.85 0.87 1.52 0.77 2.14 0.96 1.78 1.08 0.77 2.63 15 0.588 2.03 0.84 1.48 1.27 1.35 1.35 6 0.604 1.46 0.76 1.42 0.65 0.86 1.26 1.48 1.65 1.53 2.26 1.03 0.92 0.61 0.58 3.02 15 0.623 .22 1.14 1.33 1.11 2.08 0.87 2.51 0.92 2.65 1.79 1.50 1.53 12 0.637 1.27 0.72 1.07 1.17 0.97 1.22 1.07 1.31 8 0.652 1.33 1.69 1.02 1.48 0.55 1.24 2.21 1.01 2.17 9 0.665 1.03 0.98 2.94 0.85 0.85 1.20 1.12 7 0.676 1.60 1.58 0.85 1.50 2.55 2.46 0.86 1.72 1.07 1.05 2.11 1.03 0.56 2.35 0.89 0.99 1.55 17 0.692 1.36 0.84 1.10 1.67 0.81 0.91 4.24 0.63 0.96 1.01 10 0.708 1.81 0.72 0.89 0.96 0.56 0.72 3.63 1.41 2.77 1.21 1.67 2.14 1.01 1.37 0.56 2.80 16 0.723 1.76 1.41 1.57 0.83 1.13 1.21 0.93 7 0.741 1.13 1.22 1.42 1.00 1.24 2.05 0.75 0.92 0.73 1.32 0.63 1.67 1.53 13 0.761 1.74 0.80 1.06 2.01 0.83 0.59 2.05 0.86 0.77 0.52 0.38 0.91 1.34 0.80 1.09 15 0.773 0.86 0.91 0.80 5.19 0.85 1.00 0.59 1.63 1.38 9 0.782 0.52 1.21 1.06 0.95 0.88 0.70 2.98 1.22 0.93 1.39 0.92 1.97 12 0.804 1.37 0.73 1.71 1.76 1.34 1.06 1.32 0.69 0.71 1.89 1.84 0.79 0.38 1.43 14 0.821 ssc 1.98 1.64 1.18 1.81 0.92 1.38 1.42 0.80 1.39 1.13 1.47 3.51 1.02 0.97 2.97 1.31 0.78 0.76 1.80 19 0.838 1.39 0.72 0.90 3 0.859 1.08 0.78 0.61 0.54 0.83 1.77 1.54 0.90 0.61 3.54 0.86 0.62 1.34 1.08 1.17 0.55 1.97 17 0.879 0.73 0.92 1.39 1.19 0.92 0.69 2.27 0.58 0.49 0.62 0.86 0.98 12 0.895 2.17 0.32 0.87 1.07 4 0.916 2.07 0.43 0.64 3 0.935 0.23 0.65 0.83 0.95 1.28 0.72 0.89 0.49 0.83 2.77 0.82 0.53 1.17 0.93 14 0.973 1.15 0.67 1.12 0.78 0.62 0.68 0.81 2.50 2.09 9 1ssa 3.28 2.91 1.77 3.26 3.87 3.17 2.60 3.67 2.19 3.77 4.73 8.03 2.28 1.91 2.99 1.53 2.15 1.47 5.47 19 1.018 2.79 1.01 2 1.038 0.49 0.69 1.73 1.24 0.38 0.51 2.16 0.85 0.48 9 1.063 1.51 1.25 0.97 0.76 0.71 0.56 1.24 4.07 0.64 0.74 0.57 0.52 1.72 0.76 2.23 0.29 16 1.095 1.07 0.46 1.27 0.68 0.76 1.40 0.91 0.74 0.90 3.00 10 1.127 0.68 0.85 0.70 1.25 0.75 0.89 1.22 0.87 0.35 0.75 0.79 0.88 0.57 0.70 14 1.139 1.44 0.32 0.93 0.57 0.90 0.54 0.42 7 1.161 0.38 0.29 0.60 0.99 0.57 0.57 0.32 0.74 1.19 0.78 0.44 0.54 0.67 0.60 14 0.183 1.23 0.52 1.21 3 1.204 ssd 4.72 2.73 2.43 2.97 1.99 3.60 2.69 2.14 2.55 3.67 3.90 8.02 2.27 1.73 3.86 2.11 2.21 1.79 4.75 19 总峰数 36 46 42 47 49 46 46 47 43 43 42 45 42 44 40 46 46 44 45 839 重叠率 66.7％ 74.7％ 73.6％ 69.6％ 80.9％ 70.3％ 74.7％ 73.9％ 72.7％ 70.5％ 71.3％ 75.6％ 71.3％ 74.2％ 70.6％ 74.7％ 81.3％ 71.9％ 100％ -
十强峰 根据各样品的出峰数在36-49个之间，在选择n强峰时，认为以n＝10为宜。现从各样品的指纹谱中 选出含量较高的前十个色谱峰，列于表7。
表7 不同产地北柴胡样品的十强峰 α值 相对面积 十强峰 相对 总面积 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 样 品 编 号 1 0.074/16.61 1.204/4.72 0.388/4.37 0.274/3.30 1/3.28 0.35/2.44 0.443/2.27 0.088/2.09 0.588/2.03 0.539/2.01 43.12 31 0.155/19.82 0.07/6.92 0.088/5.29 0.35/3.85 0.513/3.22 1/2.91 0.4/2.84 1.204/2.73 0.309/2.70 0.367/2.53 52.81 32 0.07/6.1 0.088/5.63 0.35/4.05 0.475/3.62 0.372/3.61 0.309/3.61 0.434/3.28 0.4/3.11 0.055/3.04 1.204/2.43 38.52 33 0.055/9.97 0.074/9.03 0.088/5.08 1/3.26 0.513/3.21 1.204/2.97 0.42/2.64 0.284/2.52 0.367/2.38 0.456/2.34 43.40 34 0.074/7.94 0.88/6.29 1/3.87 0.055/3.70 0.513/3.42 0.4/3.40 0.466/3.29 0.35/3.24 0.039/3.18 0.443/3.09 41.42 35 0.07/11.28 0.074/7.91 0.088/6.16 1.204/3.60 1/3.17 0.475/3.14 0.42/2.87 0.309/2.66 0.676/2.46 0.456/2.01 45.26 36 0.074/6.38 0.084/4.92 0.055/4.97 0.434/2.72 1.204/2.69 0.372/2.66 1/2.60 0.35/2.59 0.309/2.37 0.475/2.31 34.02 37 0.074/13.73 0.084/10.32 0.23/5.56 0.35/5.46 0.443/4.33 0.42/4.26 0.388/3.69 1/3.67 0.284/3.20 0.309/3.14 57.38 38 0.07/7.00 0.088/4.63 0.326/4.30 1.063/4.07 0.055/4.00 0.708/3.63 0.388/3.53 0.475/3.25 1.204/2.55 0.434/2.54 39.51 39 0.07/7.54 0.055/7.54 0.088/5.94 0.434/4.95 1/3.77 1.204/3.67 0.4/2.95 0.309/2.69 0.388/2.63 0.475/2.19 43.86 40 0.074∥8.47 0.088/5.21 1/4.73 1.204/3.90 0.388/3.25 0.4/3.11 0.42/2.67 0.367/2.50 0.456/2.42 0.055/2.26 38.52 41 0.074/18.46 0.42/8.53 1/8.03 1.204/8.02 0.084/6.03 0.284/5.28 0.773/5.19 0.556/4.71 0.055/4.56 0.456/4.43 68.25 42 0.07/7.38 0.088/6.27 0.443/4.86 0.055/3.03 0.475/2.95 0.35/2.83 0.372/2.59 0.039/2.47 0.42/2.40 0.284/2.33 37.09 43 0.07/6.99 0.055/4.16 0.35/2.77 0.443/2.36 0.388/2.22 0.219/2.22 0.466/2.20 0.039/2.01 1/1.91 1.204/1.73 28.57 44 0.074/7.34 0.367/5.80 0.088/4.97 0.443/4.41 1.204/3.86 0.504/3.37 0.309/3.26 0.539/3.09 1/2.99 0.821/2.97 41.88 45 0.07/8.54 0.055/8.07 0.088/6.13 0.35/4.97 0.4/4.42 0.443/3.99 0.309/2.44 0.513/2.38 0.494/2.32 0.123/2.12 45.22 46 0.326/14.7 0.07/7.30 0.055/6.49 0.088/5.00 0.367/3.45 0.039/2.77 0.4/2.76 0.556/2.53 0.388/2.49 0.42/2.41 49.90 47 0.055/5.53 0.07/5.18 0.367/3.46 0.088/3.17 1.063/2.23 0.556/1.89 1.204/1.79 0.284/1.70 0.35/1.70 0.741/1.67 28.32 48 0.074/11.36 1/5.47 0.367/4.93 1.204/4.75 0.504/4.55 0.456/3.45 0.443/3.43 0.309/3.30 0.42/3.07 0604/3.02 47.33
特征指纹综合共有峰和十强峰所提供的信息，可从中挑选合 适的色谱峰作为特征指纹。十九个样品合计共出峰76个。现按下列 三个条件进行初选，共有样品数超过十五个者，凡进入十强峰者，具 有特殊活性和具有标准品者。按此要求列出特征指纹初选表，见表8。
表8 特征指纹初选表
α 十强峰中出现频次/十强峰中排列名次 共有样品数
.039 2/8、1/9、 1/6 17
.070 3/1、、3/2、2/3、2/4、1/5、2/9、1/10 17
.055 3/2、1/7 10
.074 8/1、2/2 10
.084 2/2、1/5 5
.088 5/2、6/3、2/4、1/8 15
.123 1/10 19
.230 1/3 8
.273 1/4 9
.284 1/6、2/8、1/9、1/10 18
.309 1/6、2/7、3/8、2/9、1/10 18
.326 1/1、1/3、 14
.350 2/3、3/4、3/6、1/7、2/8、1/9 18
.367 1/2、2/3、1/5、1/8、1/9、1/10 14
.372 1/5、1/6、1/7 8
.388 1/3、2/5、2/7、2/9 15
.400 2/6、3/7、1/8 17
.420 1/2、1/6、3/7、2/9、1/10 17
.434 2/4、1/7 10
.443 1/3、2/4、1/5、1/6、2/7、1/10 14
.456 1/6、1/9、3/10 16
.466 2/7、 6
.475 1/4、1/5、1/6、1/8、2/10 17
.494 1/9 11
.504 1/6 13
.513 3/5、1/8 17
.537 1/8、1/10 14
.556 1/6、2/8 11
.604 1/10 15
.676 1/9 17
.708 1/6 16
.741 1/10 13
.773 1/7 15
.821 1/10 19
1.000 1/2、3/3、1/4、3/5、1/6、1/8、2/9 19
1.063 1/4、1/5 16
1.204 4/4、2/5、2/6、1/7、1/8、1/9、2/10 19
表8说明有37个色谱峰进入特征指纹的初选行列。对此再作进 一步挑选，那些在十强峰中出现频次不高者，或名次靠后者，或共有 样品数较低者可作进一步筛除。例如α值为0.070者在十强峰中出现 的频次仅为4，样品共有数也仅达10个；α值为0.084者，在十强峰 中出现的频次为3，样品共有数为5个；α值为0.230，0.273，0.372， 0.434，0.466，0.494，0.504，0.741，0.773等色谱峰均因上述相同原 因而被删除。有些色谱峰虽在十强峰中出现频次较低，甚至根本就没 列入过十强峰，但它是许多样品所共有，例如α值为0.244，0.572， 0.761和0.859者，均因它们的样品共有数达到或超过15而被入选特 征指纹。另，三个已知成分，并具有其相应的标准品者，柴胡皂甙A， C，D均被选入特征指纹。现将三十个特征指纹列表于下：
表9北柴胡的特征指纹 α 十强峰出现频次 样品共有数 α 十强峰出现频次 样品共有数 .039 4 17 .456 5 16 .055 14 17 .475 6 17 .074 10 10 .513 4 17 .088 14 15 .537 2 14 .123 1 19 .556 3 11 .244 0 15 .572 0 15 .284 5 18 .604 1 15 .309 9 18 .676 1 17 .326 2 14 .708 1 16 .350 12 18 .761 0 15 .367 7 14 .821 1 19 .388 7 15 .859 0 17 .400 6 17 1.000 12 19 .420 8 17 1.063 2 16 .443 8 14 1.204 13 19
表9是根据十九个不同产地北柴胡的指纹谱综合而得，具有一定 的统计意义，是北柴胡在鉴定时可于依赖的特征。北柴胡样品几乎遍 及东西南北中，表明全国各地都有北柴胡资源。因而有关北柴胡的质 控和质标工作已为燃眉之事。
表10列出了十九个不同产地北柴胡的特征指纹检出情况，在30 个特征指纹中，石家庄[1]，福州[31]，天津[36]和高安[41]产的北柴胡 可检出23个特征指纹，是各样品中检出最少的。检出数最高的是西 安[33]产北柴胡，共检出29个特征指纹，沈阳[37]，太原[46]，二地 所产北柴胡均可检出28个特征指纹，厦门[34]，郑州[40]和临安[48]， 三地所产的均可检出27个特征指纹，承德[43]和赞皇[39]均可检出26 个特征指纹，洛阳[35]，阜阳[45]和南宁[47]三地所产的也均可检出 25个特征指纹。它们的特征指纹检出率在76.6％-96.6％的范围内，这 些数据为北柴胡品种的鉴定提供了判断的依据。现以上述实验数据为 基础，建议凡特征指纹检出率大于75％时，应考虑待鉴药材是北柴胡。 另，上表清楚显示，有四个成分在十九个北柴胡样品中均存在，它们 的α值分别为0.123，0.821，1.000和1.204，后三个经标准品核对分 别是柴胡皂甙C，柴胡皂甙A和柴胡皂甙D，它们是北柴胡品种必定 具有的成分，也即是鉴定中必须检出的成分。
表10 不同产地北柴胡样品的特征指纹检出表 .\编号 1 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 共有数 0.039 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.055 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.074 V V V V V V V V V V 10 0.088 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.123 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.244 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.284 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 18 0.309 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 18 0.326 V V V V V V V V V V V V V V 15 0.350 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 18 0.367 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.388 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.400 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.420 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.443 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.456 V V V V V V V V V V V V V V V V 16 0.475 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.513 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.537 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.556 V V V V V V V V V V V 11 0.572 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.604 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.676 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.708 V V V V V V V V V V V V V V V V 16 0.761 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.821 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.859 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 1.000 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 1.063 V V V V V V V V V V V V V V V V 16 1.204 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 检出数 23 23 23 29 27 25 24 28 25 26 27 24 25 26 23 24 28 25 27
在上述十九个北柴胡样品色谱指纹谱分析的基础上，建立了一系 列可供鉴定分析作依据的指纹谱参数，其中特征指纹，特征指纹差异 率和总差异率为北柴胡的鉴定创立基础。通过柴胡属其它26个品种 植物样品的色谱指纹谱与之比较分析，更进一步证明色谱指纹谱用于 中药鉴定是可信的，可行的。
26个柴胡属植物样品的色谱实验条件，样品的制备，数据的处 理等均与北柴胡的完全相同。据此建立了26个柴胡属植物的色谱指 纹谱和十强峰等参数，分别见表11和表12。
表11 不同品种北柴胡的HPLC-FPS
Continued
表12 不同品种北柴胡样品的十强峰 α值相 对面积 十强峰 相对 总面积 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 样 品 编 号 2 0.074/12.75 0.088/6.96 1.369/6.73 0.36/5.36 0.081/5.23 0.535/3.76 0.378/3.43 0.063/3.40 0.309/3.36 0.284/3.26 54.23 5 0.055/9.89 0.07/9.88 0.088/6.46 0.039/5.91 0.284/4.83 0.434/3.24 0.475/3.19 0.326/2.96 0.388/2.55 0.367/2.51 51.41 7 1.375/50.5 1.458/26.68 1.341/22.43 1.369/16.63 0.07/13.84 0.055/10.70 1.436/9.14 0.488/9.00 0.326/8.62 0.088/8.39 175.94 9 0.665/11.34 0.07/10.18 0.466/5.80 0.504/4.95 0.088/4.13 0.244/4.09 0.335/3.90 1/3.87 0.367/3.68 0.055/3.54 55.46 10 0.055/11.47 1.204/8.33 0.066/7.86 1/7.11 0.275/4.66 0.388/4.01 0.35/3.60 0.088/3.60 0.326/3.07 0.079/1.94 55.66 11 0.063/38.56 1/23.72 1.204/21.73 0.074/10.56 0.821/4.85 0.434/3.63 0.367/2.77 0.088/2.64 0.36/2.17 0.513/2.06 112.68 12 1.204/15.46 1/13.13 0.07/8.22 0.055/7.36 0.434/4.88 0.088/4.77 0.821/4.47 0.378/4.02 0.524/3.27 0.4/2.20 67.79 13 1.341/9.60 0.055/7.87 0.066/7.72 0.258/6.63 0.504/6.13 0.692/6.11 0.42/5.72 0.088/5.09 1.204/4.96 1/4.54 64.36 15 0.066/7.55 0.275/2.44 0.088/2.35 0.388/2.20 0.434/2.01 0.804/1.97 0.074/1.85 0.466/1.74 0.244/1.67 0.723/1.63 25.40 16 0.055/8.09 1/5.60 1.204/5.50 0.07/5.37 0.088/3.08 0.388/2.36 0.434/2.34 0.821/2.17 0.513/1.98 0.504/1.98 38.45 17 0.35/3.15 0.07/2.89 0.456/2.38 0.676/2.29 0.084/2.29 0.782/2.17 0.761/2.00 0.588/1.70 0.055/1.60 0.708/1.37 21.85 18 1.204/16.82 0.074/12.51 0.183/9.83 1/9.63 0.063/5.28 0.088/4.98 0.258/4.74 0.821/4.36 0.443/4.17 1.369/3.52 75.83 19 0.443/11.27 1/10.41 0.07/9.37 0.35/8.65 0.101/8.09 1.204/7.28 0.434/5.14 0.088/4.58 0.36/4.46 0.335/4.22 73.46 20 1/7.27 1.204/6.96 0.07/6.76 1.378/6.70 0.367/4.52 0.088/4.04 0.504/3.99 0.434/3.91 0.275/3.75 0.4/3.59 51.47 21 0.244/4.60 0.084/3.12 0.074/2.60 0.367/2.14 0.434/2.11 0.275/1.99 0.4/1.97 0.36/1.93 0.335/1.53 0.443/1.45 23.44 22 0.07/5.42 0.275/4.95 0.309/3.70 0.335/3.56 0.084/2.62 0.42/2.45 0.123/2.29 0.388/2.23 0.36/2.16 0.150/2.04 31.41 23 0.055/31.31 0.723/15.44 0.07/6.22 1.204/4.64 0.420/4.17 0.676/4.13 0.079/3.74 1/3.73 0.088/3.31 0.326/3.13 79.83 24 1.352/20.84 0.063/9.70 0.434/6.21 0.335/4.93 0.088/4.92 1.375/4.23 0.360/4.12 0.475/4.04 0.055/3.82 0.192/3.70 66.52 25 0.07/15.11 0.079/12.49 0.084/9.95 0.063/7.41 0.326/6.11 0.123/4.22 0.258/2.49 0.219/2.47 0.192/2.29 0.284/2.26 64.83 26 0.07/9.02 0.088/6.60 0.063/5.80 0.275/4.01 1/3.91 0.079/3.76 0.204/3.36 0.230/2.98 0.326/2.41 0.420/2.38 44.25 28 0.07/11.80 0.055/6.26 0.088/5.05 0.36/4.30 0.326/4.28 0.244/3.12 0.284/2.95 1.204/2.66 0.475/2.35 0.275/2.32 45.08 48 0.074/11.36 1/5.47 0.367/4.93 1.204/4.75 0.504/4.55 0.456/3.45 0.443/3.43 0.309/3.30 0.42/3.07 0.604/3.02 47.33 51 1.458/18.36 1.436/16.95 0.079/14.58 0.084/12.73 1.472/5.98 0.434/5.40 1.498/5.29 0.513/5.21 0.378/4.93 0.488/4.38 93.82 58 0.074/11.46 1/5.84 0.400/5.78 1.204/5.53 0.055/4.97 0.088/4.28 0.367/3.79 0.271/3.47 0.556/3.19 0.466/3.13 51.45 59 0.074/7.56 0.088/5.20 0.443/4.51 0.475/3.99 0.335/3.63 1/3.26 1.204/3.18 0.367/2.92 0.388/2.68 0.4/2.27 39.21 63 0.074/6.37 0.084/5.42 0.488/4.51 0.309/4.30 0.244/3.30 1.204/3.28 1/3.26 0.271/2.83 0.475/2.70 0.434/2.56 38.53
本研究的目的是北柴胡的鉴别和鉴定，因而以不同产地的北柴胡 样品作为不同批号的北柴胡样品，建立了北柴胡的特征指纹，其它柴 胡属植物以其指纹谱与此作对照，在它们各自的指纹谱中寻找北柴胡 的特征指纹，考察特征指纹的检出率，该项数据可为北柴胡的鉴定 提供依据。表13列出了26个不同品种柴胡属植物的北柴胡特征指纹 检出表。
表13 不同品种柴胡属植物的北柴胡特征指纹检出表 .\编号 2 5 7 9 10 11 12 13 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 28 48 51 58 59 63 共有数 0.039 V V V V V V V V 8 0.055 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.074 V V V V V V V V 4 0.088 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 21 0.123 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 25 0.244 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.248 V V V V V V V V V 19 0.309 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.326 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 22 0.350 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.367 V V V V V V V V V V V 11 0.388 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19 0.400 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 23 0.420 V V V V V V V V V V V V V V V 15 0.443 V V V V V V V V V V V V 12 0.456 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.475 V V V V V V V V V V V 4 0.513 V V V V V V V V V V V 11 0.537 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.556 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.572 V V V V V V V 7 0.604 V V V V V V V V V V V V V V V V V 17 0.676 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 18 0.708 V V V V V V V V V V V V 12 0.761 V V V V V V V V V V V V V V 14 0.821 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 22 0.859 V V V V V V V V V V V V V V 14 1.000 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 24 1.063 V V V V V 5 1.204 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 24 检出数 18 22 23 21 17 17 19 20 14 21 15 19 18 15 18 12 18 14 12 15 18 26 14 19 24 15 检出率％ 60 73 76 70 56 56 63 66 46 70 50 63 60 50 60 46 40 46 40 50 60 86 46 63 80 50
由表13可知，.值为0.123，0.821，1.000和1.204四个色谱峰 为绝大多数柴胡属植物所共有，由此提示，该四个色谱峰是柴胡属植 物的特征，当然，对北柴胡的鉴定而言，这是必备条件，但并非是完 全条件。在与柴胡属植物色谱指纹谱的比较中将可观察到两者的差 异，尤其是在特征指纹方面所显示的差异。虽然在19个不同产地的 北柴胡样品间也观察到差异，然而这些个体差异所产生的特征指纹差 异是较小的，它们的特征指纹检出率均较高，最高的达96.6％[一个 样品]，最低的为76.6％，[四个样品]，其余均在80％-93.3％之间[十 四个样品]。而对26个不同品种的柴胡属植物样品以北柴胡的特征指 纹作检测时，检出率明显降低，与北柴胡的相比有显著性差异。柴胡 属植物中检出率最低者仅为36.6％[一个样品]，46.6％-43.3％者有三个 样品，50％-56.6％者有七个样品，60％-66.6％者有七个样品， 70％-76.6％者有六个样品，80％-86.6％者有一个样品，达90％者有一 个样品.若以75％为界，则有23个样品低于此线，仅三个样品高于此 界限，其中48号为北柴胡，另二个分别为7号样品黑柴胡和59号样 品银州柴胡。说明这二个不同品种的柴胡在其内在特性，化学成分方 面，与北柴胡较相似。以上特征指纹的检识只是从各样品所含化学成 分的角度进行了比较，至于有关各成分的含量情况则尚需通过其它参 数于以说明。
差异率正如前文所述，差异率是一综合性的参数，它将每个特 征指纹的检出及其含量状况[归一化面积值]结合起来，并形成一个可 供比较的数据，使北柴胡的鉴定能同时兼顾质和量两个方面。现将其 具体运作述于下。
首先以19个北柴胡样品的色谱指纹谱为基础，各样品均以柴胡 皂甙A的面积值为基准，计算每个特征指纹的面积归一化值，列入 各自的指纹谱。其次，对19个样品中个相对应的特征指纹面积归一 化值求其均值，得X均值。见表14。
表14 北柴胡样品特征指纹面积归一化值[N值]及其均值 α样品 1 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 均值 .039 0 .489 1.24 .377 .822 0 .411 .291 .543 .464 .298 .342 1.08 1.05 .328 1.10 1.29 1.08 .406 .682 .055 0 6.81 1.72 3.06 .956 0 1.84 .697 1.82 2.00 .478 .568 1.33 2.18 .946 5.27 3.02 3.76 .435 2.133 .074 5.06 0 0 2.77 2.05 2.49 2.45 3.74 0 0 1.79 1.67 0 0 2.45 0 0 0 2.07 2.656 .088 .637 1.82 3.18 1.56 1.62 1.94 0 0 2.11 1.57 1.10 0 2.75 .220 1.60 4.00 2.32 2.15 0 1.907 .123 .433 .550 .565 .687 .705 .154 .669 .676 1.08 .377 .218 .446 .557 .769 .281 1.38 .577 .796 .267 .589 .244 0 0 0 .347 .414 .224 .619 .359 .794 .262 .292 .226 .881 .848 0 .810 1.11 .632 .234 .537 .284 .424 .680 .926 .773 0 .205 .323 .872 .374 .559 .406 .657 1.02 .712 .772 .784 .730 1.15 .382 .652 .309 .512 .928 2.04 .429 .633 .839 .911 .855 0 .713 .433 .512 .666 .570 1.09 1.59 .911 .857 .603 .839 .326 0 0 .440 .463 .670 .400 0 .556 1.96 .443 .378 .278 .802 .827 0 0 6.84 1.04 .369 1.03 .350 .744 1.32 2.29 0 .994 .533 .996 1.49 .635 .369 .285 .403 1.24 1.45 .532 3.13 .637 1.15 .252 1.02 .367 0 .869 0 .730 .710 .318 0 .340 .274 .559 .528 .345 0 .712 1.94 0 1.60 2.35 .901 .870 .388 1.33 .701 0 .604 .449 0 .546 1.00 1.61 .697 .687 .346 .355 1.16 0 .876 1.16 0 .159 .730 .400 .274 .976 1.76 .374 .878 .331 0 .479 .575 .782 .657 .169 .921 0 .384 2.89 1.28 .884 .393 .824 .420 .597 .866 .859 .810 .713 .905 .558 1.16 1.16 0 .564 1.06 1.05 .628 0 .516 1.12 1.01 .561 .831 .443 .692 0 .565 .478 .798 0 .554 1.18 .991 0 .184 0 2.13 1.23 1.47 2.61 .958 0 .627 1.04 .456 .582 .605 1.15 .718 .499 .634 .811 .248 .589 .477 .512 .551 0 0 0 .712 .516 1.11 .631 .431 .475 .201 0 2.04 .356 .232 .990 .888 0 1.48 .581 .475 .473 1.29 .644 .889 .928 .707 .986 .256 .790 .513 .600 1.10 0 .984 .884 .394 .273 .594 .635 .329 .298 .502 .408 .743 0 1.55 1.06 1.07 .376 .692 .537 .613 .601 .593 .280 .884 .284 .338 .594 .520 .180 .211 0 .425 0 1.03 0 0 .796 0 .490 .556 0 0 0 .325 0 .287 0 .310 0 .209 .196 .586 0 .644 .709 .516 1.18 1.28 0 .621 .572 .311 .471 .418 .313 .253 .268 .334 414 0 .204 0 .266 0 .502 .595 .706 .358 0 .481 .432 .604 .445 .261 .802 .199 .222 .397 .569 .449 .698 0 .478 0 .452 .481 0 0 .284 .394 .552 .445 .676 .488 .543 .480 .460 .659 .776 .331 .468 .488 .278 .446 0 .455 .293 .786 0 .414 .673 .283 .489 .708 .552 .247 0 273 .248 .176 0 .196 1.66 .374 0 .345 .531 .874 .716 .660 .637 .381 .512 .523 .761 .530 0 .452 .325 .519 .186 .227 .558 0 .228 .162 0 .228 .199 .304 .876 .372 0 .199 .357 .821 1.65 .563 .666 .555 .238 .435 .546 .218 .635 .300 .311 .437 .455 .508 .993 .856 .363 .517 .329 .557 .859 .329 .268 .344 .165 0 0 .319 .482 .703 .239 .129 .441 .337 .324 .448 .706 .544 .374 .360 .385 1.000 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.063 0 .519 .706 .297 .196 .224 .215 .338 1.86 .170 0 0 .324 .298 .174 1.12 .353 1.52 .053 .523 1.204 1.44 .938 1.37 .911 .514 1.13 1.03 1.58 1.16 .973 .824 1.00 1.00 .905 1.29 1.38 1.03 1.22 .868 1.03
X均值从统计的角度反映各个特征指纹在样品中存在量的平均 状况，由于它在各样品中均以同一成分作基准，所得之比值反映了它 们在各自样品中的含量比例，为各样品相互间的比较奠定基础，并可 据此求取各样品的差异率，差异率的计算见下式。
X均值-Xi 差异率
差异率＝ 总差异率＝
X均值 N
X均值 每个特征指纹的面积归一化值的平均值[19个北柴胡样
品的均值]
Xi 各样品中相应特征指纹的面积归一化值
N 北柴胡的特征指纹数，现为30
按上述操作，也可得到26个柴胡属植物样品中各个特征指纹的 面积归一化值，及其相应的差异率.这些数据显示了各个特征指纹与 均值间的差异，是待鉴样品与标准样品间产生差异的根本所在。因而 对所有特征指纹的差异进行求和，然后除以特征指纹数即得待鉴样品 与标准药材[此处为19个北柴胡样品的均值]间的总差异率。为清楚 地说明北柴胡和柴胡属植物间特征指纹的比较情况，将所有45个样 品的特征指纹检出率和总差异率列于表15。
表15 北柴胡和柴胡属植物样品的特征指纹检出率％和总差异率％ 样品编品 检出率 总差异率 样品编号 捡出率 总差异率 样品编号 检出率 总差异率 1 76.6 .537 45 80 .865 17 50 1.20 31 76.6 .442 46 93.3 .580 18 63.3 .760 32 76.6 .664 47 83.3 .577 19 60 .728 33 96. .6.367 48 90 .484 20 50 .741 3 34 90 .422 2 60 1.42 21 60 1.16 35 83.3 .507 5 73 2.62 22 36.6 ＞＞1 36 80 .434 7 76.6 .834 23 60 .746 37 93.3 .396 9 70 .535 24 56.6 1.594 3 38 83.3 .579 63 50 .668 25 43.3 .890 39 86.6 .478 10 56.6 1.828 26 56.6 .638 40 90 .503 11 56.6 .888 41 80 .528 12 63.3 .853 28 66.6 .715 42 83.3 .390 13 70 .539 51 46.6 1.13 43 86.6 .400 15 46.6 ＞＞1 58 70 .645 44 76.6 .571 16 70 .713 59 80 .408
现对上表内容作下列探讨
1.北柴胡与柴胡属植物间，在总差异率方面有明显的不同，北 柴胡有19个不同产地的样品，但它们的总差异率在0.367-0.865之间， 其中有两个样品[32号和45号]的总差异率大于0.600，占样品总数的 10.5％。在柴胡属植物的26个样品中有22个的总差异率超过此值。 因此在北柴胡与柴胡属中其它品种的药材间的区分与鉴定时，特征指 纹的总差异率作为考察的首要条件，根据以上实验数据，建议暂定为 小于0.600。
2.对于北柴胡和柴胡属植物样品中所出现的异常现象作如下检 讨。
北柴胡中的32号[泉州产]和45[阜阳产]两个样品的总差异率分 别为0.664和0.865均已超过0.600的界线，但两者的特征指纹检出 率却分别高达76.6％和80％，是符合北柴胡鉴定所要求的。对此相互 矛盾的情况如何解释.对此可仔细分析两者特征指纹的面积归一化 值，32号样品有九个特征指纹的面积归一化值超过1，其中有的高达 3.18，2.04和2.29。45号样品则有十一个特征指纹的面积归一化值超 过1，其中有高达5.27，4.00，3.13，2.89和2.61者，显然这是导致 它们总差异率较高的基本原因，同时也反映了这两个北柴胡中所含成 分是合格的，但在成分的含量比例方面存在较大差异，建议临床用药 遇到这类北柴胡药材时要慎重，尤其对用药剂量的大小要多加小心。 柴胡属植物中有四个样品9号[阿尔泰柴胡]，13号[泸西柴胡]，48号 [北柴胡]，59号[银州柴胡]，它们的总差异率均低于0.600。其中48 号是北柴胡属正常情况。9号和13号两者的特征指纹检出率均为 70％，该值低于拟定的特征指纹检出率界线76％，随即可排除在北柴 胡品种之外。59号的特征指纹鉴出率为80％，高于上述界线，它的 十强峰有九个都被收入特征指纹之列。以上各项参数均说明59号样 品与北柴胡极相似，从色谱指纹谱的角度而言，有可能被定为北柴胡， 因而被误作药用。但从另方面来看，银州柴胡有可能被纳入药用，扩 大柴胡属药用植物的范围。当然，要达到此目的尚需做大量的药理， 药效，毒理等实验，以保证用药安全有效。另，值得注意同被药典收 载的柴胡属植物窄叶柴胡[红柴胡B.scorzonerifolium]，其特征指纹检 出率50％，总差异率0.668，说明它与北柴胡有明显的差别，对此应 引起注意。
3.现将上述整个指纹谱鉴定过程归纳为下列几个步骤
首先是建立各样品的色谱指纹谱，对这项工作应特别指出的是作 为标准药材的品种，产地，批号等各项内容都应标明，且必须有一定 的样本数，以减少生物样品个体差异所致的影响。当然，对于饮片， 制剂，成药一类样品，除应保证一定数量的样本外，更要注意最终产 品，中间品和原料药材间的一致性。
其次是共有峰，重叠率，n强峰，特征指纹，特征指纹检出率， 特征指纹差异率和总差异率等。前三项是产生各项参数的依据，应予 特别注意。至于重叠率，在具有明确的标准药材时，或在无法获得具 统计意义的样本数时，它还是一个颇具实用价值的参数。因为它比特 征指纹所反映的化学成分状况更全面而充份，在中药如此复杂的情况 下会有其特定的意义。例如将样品的选择限定在一个极小的范围内 时，它的作用将比特征指纹更具实用意义。
当获得上述各项参数后，首先考察待鉴样品的特征指纹检出率和 总差异率，针对该两项指标可能出现的情况作出判断，一是两项指标 全部符合鉴定要求，二是两项指标均不符合鉴定要求，三是只有一项 符合鉴定要求。前二种情况给出的结论是明确的，前者为合格，后者 为不合格，对第三种情况则需作进一步探讨。若为特征指纹检出率不 合格，表明该样品在化学成分方面存在较大差异，其总差异率之所以 合格，可能是在各特征指纹求取总差异率的过程中被平均化了..若为 一般的平均化且总差异率相差在0.1范围内，可以考虑给出合格鉴定.. 若为既有严重特征指纹检出率差异，其特征指纹总差异率虽相差不 大，对此也应给出不合格鉴定。若为总差异率不合格，而特征指纹检 出率合格，此时应小心地察看导致总差异率不合格的原因，若为少数 几个特征指纹的含量较高所致，则，只要不是特殊的高，且总差异率 相差在0.1范围内，可以考虑给出合格鉴定.进一步还可考察其n强峰， 其中有几个被纳入特征指纹，若达90％以上，则应考虑给出合格鉴定， 若较低，则应给出不合格鉴定。
4.在表3和表11中，可清楚地看到，有四个α值分别为0.123， 0.850，1.000和1.204者，几乎是所有样品共有的，它们是柴胡属植 物鉴定时必须检出的成分.经标准品对照，后三个成分分别是柴胡皂 甙D，柴胡皂甙A，柴胡皂甙C，经药效试验证明，它们都是柴胡中 的活性成分，且都已有标准品供应。 实施例2
淫羊藿属植物的HPLC指纹谱分析
淫羊藿(Herba Epimedii)是一味常用的补肾壮阳药，并已成为 近年来研究开发的热门药材。现代药理学研究证实，它不仅对心脑血 管有明显的药理作用，而且在抗衰老、抗肿瘤、抗骨质疏松和免疫调 节等方面都有明显的生物活性。
根据资料所载，我国共有23个品种的淫羊藿属植物，另有4个 为其变种。本研究收集得8种淫羊藿，其中5种为我国药典收载作药 用，包括不同产地和不同部位共23个样品，采用HPLC法作其指纹 谱研究，以期能为淫羊藿植物的区分和鉴定提供切实可行的方法，并 为建立药用淫羊藿植物的质量标准提供依据。 仪器和材料
PE 1022 LCPLDUS色谱工作站，PE 235C DAD DETECTOR紫 外检测器，PE SERDIES 200 LC PUMP泵(美国PE公司)，MD100-1 型电子天平(上海天平仪器厂)，80-1型离心机(上海手术器械厂)， 一次性有机溶剂微孔滤膜过滤(0.45μm，上海中惠公司)。
乙腈(色谱纯，上海星狮生物工程有限公司)，甲醇(分析纯， 上海振兴化工一厂)，冰乙酸(分析纯，上海试剂四厂)。
淫羊藿甙标准品(含量测定用，中国药品与生物制品检定所)。
样品由上海医科大学施大文教授鉴定并提供： 样品号 名称 部位 来源 1 黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum) 叶 贵州黔岭山 2 黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum) 叶 上海市药材公司 3 黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum) 茎 贵州黔岭山 4 巫山淫羊藿(E.Wushanense) 叶茎 贵州 5 巫山淫羊藿(E.wushanense) 根 陕西安康 6 巫山淫羊藿(E.wushanense) 茎 陕西安康 7 巫山淫羊藿(E.wushanense) 叶 陕西安康 8 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 茎 陕西安康 9 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 叶 陕西安康 10 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 叶 安徽 11 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 茎 安徽 12 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 叶茎 广西灵山 13 宝兴淫羊藿(E.davidii) 叶 云南 14 宝兴淫羊藿(E.davidii) 茎 云南 15 宝兴淫羊藿(E.davidii) 叶茎 湖南 16 柔毛淫羊藿(E.pubescens) 茎 四川灌县 17 柔毛淫羊藿(E.pubescens) 叶 四川灌县 18 朝鲜淫羊藿(E.koreanum) 叶 河南洛阳 19 朝鲜淫羊藿(E.koreanum) 叶茎 辽宁 20 朝鲜淫羊藿(E.koreanum) 叶茎 青海药检所 21 淫羊藿(E.brevicornum) 叶茎 江苏无锡 22 淫羊藿(E.brevicornum) 叶茎 浙江临安 23 淫羊藿(E.brevicornum) 叶茎 陕西 实验方法
色谱条件：
色谱柱：PERKIN-ELMER-SH/5 C18(5μm，250mm×4.6mm I.D.)，国产C18预保护柱(10μm，40mm×4.6mm I.D.)，检测波长A 为270nm，B为320nm，流动相由A、B两部分以线性梯度在仪器 内部的比例阀中混合而成，A为乙腈，B为0.7％乙酸溶液，线形 梯度为：
0min 10min 20min 20min
A 18％ 22％ 24％ 50％
B 82％ 78％ 76％ 50％
淫羊藿甙标准品溶液配置：称取1.0mg淫羊藿甙标准品，置入 10ml容量瓶中，加甲醇超声使溶解，配成0.10mg/ml标准品溶液。
样品供试液制备：
精密取淫羊藿叶、根或茎粉0.085克，置入10ml容量瓶中，加 10ml甲醇超声提取30min，冷却，定容，离心，上清液经0.45μm滤 膜滤过，即得。
样品分析：
将23个淫羊藿样品制成的供试液，按以上色谱条件进样分析， 得各样品的HPLC图谱，见图1-图23，以及相应的DAD信息。同 时用标准品溶液进样，确定淫羊藿甙峰的位置。
指纹谱分析
相对保留值指纹谱的建立
上述获得的23个样品的色谱图及其DAD信息，除了贵州产黔 岭淫羊藿叶与购自上海市药材公司的黔岭淫羊藿叶外，在约27分钟 处都有一个最大λmax、比吸收值ratio相同的共有峰。根据前述计算 21个样品的色谱峰的相对保留值α，以9号箭叶淫羊藿叶的总峰面 积为分母，根据相对面积值计算式计算各样品色谱峰与9号样品总色 谱峰面积间的相对RA。然后，以9号箭叶淫羊藿叶的各峰的α值为基 准，其它样品色谱峰α值按下列各要求与之相比，首先以1％为窗口 范围对各α值进行比照归纳，合条件者再结合DAD检测信息进行考 核，凡是α值相同或相近(误差≤±1％)，最大吸收波长λmax、比 吸收值ratio都相等的峰，即可认定为同一化合物峰。将各个样品每 个峰的RA值列在相应的α值项下，某α值项下无相应峰的样品，其 RA值记为零。由此得到以下21个样品的相对保留值指纹谱，见表16。
表16 21个淫羊藿样品的相对保留值指纹谱 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 共有峰 0.072 1.83 0 0 0.83 1.51 0.96 1.61 0 0 0 0.094 0 12.91 0.9 1.01 0 0 0 0 1.94 0.98 11 0.099 0 0 0 0.71 0.56 0 0.55 0 0 0 1.02 0 12.93 0 0.7 0 0.61 0.54 0 0.76 0 9 0.113 0 0 0 0 0 0 0.74 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0.172 1.72 2.91 0.48 0 0 0 1.51 0 0 0 1.03 0 0 0 0.36 0 0 0 0 0.95 0 7 0.272 0 1.08 0 0 0 0 0.2 0 0 0 0.25 0 0 0.12 0.16 0 0 0 0 0 0 5 0.328 0 0 0 0 0 0 0.58 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0.37 0 0 0 0 0 0 0.17 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0.418 0 0 0 0 0 0 0.51 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.26 0 0 0 2 0.463 0 0 0 0 0 0 0.24 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.66 0 0 0 2 0.496 2.9 0 6.24 0 1.61 0.59 0.98 0 0.94 0 0.68 0 0 0.77 0.69 1.72 0 0.74 0.13 1.4 1.18 14 0.549 2.37 0 8.81 0 0.55 1.4 1.18 0 0 0.27 0.41 0.21 0 3.01 1.29 0 0.61 1.18 0.58 0.52 0.62 15 0.635 0.27 0 0 0 0 0 0.32 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.24 0 0 0 3 0.756 0 0.4 0 0 0 0 0.15 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.14 0 0 0 3 0.868 0 0 1.72 0 1.08 6.54 7.52 0 0 1.61 1.08 0 0 0 2.15 0.61 0.46 0 0 3.77 0 10 0.939 0 0.78 1.29 0 1.18 1.08 22.63 0 0 0 1.29 0 0 0 0 7.64 0.38 0 1.83 16.14 10.76 11 1 15.12 10.83 41.92 1.61 2.37 3.98 6.03 6.93 6.46 9.58 8.81 0.83 2.37 1.61 14 1.29 1.51 1.08 2.69 5.16 1.94 21 1.12 0.15 0.75 0.28 0 8.5 0.17 21.91 0 0 6.78 3.02 0 0 0 20.9 5.06 4.41 6.24 1.72 9.36 10.3 14 1.23 0 0 0 0 1.04 0 1.61 0 0 0.44 0 0 0 0 0 0 1.05 0.63 6.24 0.23 1.61 8 1.26 0 0 0 0 0.2 0 1.02 0 0 0 0.93 0 0 0 0 0.34 0 0 0.81 0 0.74 6 1.31 0 0 0 0 0.69 0 0.51 0 0 0 0.36 0 0 0 0 0 2.26 0 0.23 0.57 0 6 1.34 0 0 0 0 0 0 1.29 0 0 0 1.35 0 0 0 1.08 0 0 0 0 0 0 3 1.42 1.26 1.47 0 0 0 0 7.12 0 0 0 0 0 0 0 2.8 0 1.51 1.61 0 2.04 1.29 8 1.5 3.98 0 538 0 0 1.51 0.87 0 0 1.94 1.29 0 0 0 0.34 0.39 0 0 1.94 0 0 9 1.52 0 1.18 0 0 0 0 0.67 0 0 0.71 0.14 0 0 0.19 0 0 0.48 0.43 0.36 0.96 0.46 10 1.59 1.72 0 1.61 0 0 0 0.99 0 1.08 0 0 0 0 0 1.01 2.15 0 0 0 0 0 6 1.63 0.25 0 0.31 0.42 0 0.42 1.01 0 0 0 0.48 0 0 0 0.95 0.38 1.29 0.44 0.58 0.81 0.56 13 1.67 1.02 0 1.72 0 2.26 0 2.37 0 3.34 0 0 0 0 0 0 0.61 0 0 3.01 1.94 0 8 1.72 5.49 0 3.77 0 0 0 4.2 0 0 2.69 0 0 0 0.61 1.51 0 0 3.77 0 0 1.4 8 1.74 0 0 0.24 0 0 0 0.71 0 0 0 0.29 0 0 0 3.01 0.61 0.25 0 0 0 0.2 7 1.83 0 0 0 0 0 0 3.01 0 0 1.83 0.62 0 0 0.28 0.12 0 0 3.44 2.04 0 1.18 8 1.88 0.14 0 0.15 0 0.28 1.29 0.5 0.19 0 0.66 0.45 0 0 0.29 4.09 0.15 0.82 0.38 0.28 0.22 0.28 16 1.92 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.48 0.36 0.14 0 0.18 0.22 0.24 0.17 0 0 0.12 0.19 9 总峰数 13 8 14 4 13 10 31 2 4 11 20 3 2 10 19 13 14 16 14 17 16 总峰面积 38.22 19.4 72.14 3.57 21.82 17.94 92.3 7.12 11.82 26.99 24.8 1.18 28.21 7.96 56.38 21.19 14.59 21.78 14.59 46.89 33.69
贵州黔岭淫羊藿叶与购自上海市药材公司的黔岭淫羊藿叶的HPLC图谱中无选定计算α值的内参照峰，没有建立其 相对保留值指纹谱。
样品之间的相似性
将21个淫羊藿样品按前述重叠率计算式计算两两之间的峰重叠率并列表，组成反映样品间相似性的峰重叠率 距阵，只需列出一半即可。见表17。
表17 21淫羊藿样品HPLC峰重叠率 3 100 4 28.6 100 5 74.1 36.4 100 6 35.4 16.7 22.2 100 7 46.2 28.6 59.2 35.3 100 8 60.9 33.3 75 42.8 78.3 100 9 59.1 41 62.2 22.8 59.1 48.7 100 10 26.7 20 12.5 33.3 26.7 16.7 12.1 100 11 53.3 16.7 44.4 25 35.3 28.6 22.8 33.3 100 12 41.7 31.6 56 13.3 50 54.5 47.6 30.7 13.3 100 13 48.5 42.8 64.7 33.3 66.7 66.7 74.5 18.2 16.7 56.3 100 14 25 18.2 23.5 28.6 25 30.8 11.8 40 28.6 28.6 17.4 100 15 26.7 20 12.5 85.7 37.5 30.8 17.6 40 28.6 14.3 26.1 13.3 100 16 52.2 33.3 41.7 28.6 43.5 50 43.9 33.3 28.6 66.7 60 46.2 30.8 100 17 68.8 37 72.7 34.8 50 62.1 72 19 26.1 60 82.1 27.3 27.3 62.1 100 18 53.8 28.6 81.5 23.5 61.5 69.6 54.5 26.7 47.1 50 66.7 25 12.5 43.5 62.5 100 19 37 45.5 57.1 33.3 66.7 58.3 57.8 25 11.1 64 70.6 35.5 23.5 41.7 60 59.3 100 20 55.2 41.7 46.7 30 48.3 46.2 68.1 22.2 20 59.3 50 21 23.5 53.8 51.7 34.5 60 100 21 51.9 36.4 64.3 22.2 74.1 66.7 62.2 25 33.3 64 70.6 23.5 11.8 50 48.5 66.7 64.3 60 100 22 60 48 64.5 38.1 80 66.7 66.7 21 28.6 57.1 75.7 30 30 51.8 66.7 60 83.9 58.8 71 23 55.2 41.7 60 30 62.1 61.5 63.8 22.2 20 66.7 72.2 31.6 21.1 69.2 68.6 46.2 73.3 68.8 73.3
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
12个样品的HPLC六强峰
自21个样品中挑选出峰数达13或13以上的样品共12个，每个 样品均选出其中峰面积最大的6个峰排列成表，得21个样品的六强 峰表。见表18。
表18 淫羊藿样品的六强峰 样 品 1 2 3 4 5 6 面积和 占总面 积％ α/RA 3 1.0/15.12 1.72/5.49 1.50/3.98 0.496/2.90 0.549/2.37 0.0716/1.83 31.69 1.0/41.92 0.549/8.81 0.496/6.234 1.50/5.38 1.72/3.77 1.12/1.28 67.4 1.12/8.50 1.0/2.37 1.67/2.26 0.496/1.61 0.0716/1.51 0.939/1.18 17.43 0.939/22.68 1.12/21.9 0.868/7.52 1.42/7.12 1.0/6.03 1.72/4.20 69.4 1.0/8.81 1.12/3.02 1.34/1.35 1.50/1.29 0.939/1.29 0.868/1.08 16.84 1.12/20.9 1.0/14.0 1.88/4.09 1.72/3.01 1.42/2.80 0.868/2.15 40.95 0.939/7.64 1.12/5.06 1.59/2.15 0.496/1.72 1.0/1.29 1.72/0.61 18.47 1.12/4.41 1.31/2.26 1.42/1.51 1.0/1.51 1.67/1.29 1.23/1.05 12.03 1.12/6.24 1.72/3.77 1.88/3.44 1.42/1.61 0.549/1.18 1.0/1.08 17.32 1.23/6.24 1.67/3.01 1.0/2.69 1.88/2.04 1.50/1.94 0.939/1.83 17.75 0.939/16.14 1.12/9.36 1.0/5.16 0.868/3.77 1.42/2.04 0.0716/1.94 38.41 0.939/10.76 1.12/10.30 1.0/1.94 1.23/1.61 1.72/1.40 1.42/1.29 27.3 83.2 5 90 7 79.8 9 75 13 67.9 17 83.3 18 87.2 19 82.5 20 79.5 21 79.1 22 81.9 23 81
特征指纹峰
以上述21个样品的六强峰为主体，并结合它们在21个样品中出 现的频率，选出α值为0.0716、0.496、0.549、0.868、0.939、1.000、 1.12、1.42、1.51、1.72和1.88等11个色谱峰为本文所研究淫羊藿植 物的特征指纹。现将21个样品的特征指纹峰检出情况列于表19中， 并列出样品中淫羊藿甙的含量，以观察两者之间的相关性。
表19 21样品的特征指纹检出率及淫羊藿甙的含量
α值 检出特 检出 淫羊藿甙 样品号
0.072 0.496 0.549 0.868 0.939 1 1.12 1.42 1.5 1.72 1.88 征峰数 率％ 含量％ 3 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 81.8 0.00367 4 √ √ √ √ √ 5 45.4 0.0753 5 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 54.5 0.0526 6 √ √ 2 18.2 0.0287 7 √ √ √ √ √ √ √ √ 8 72.7 0.443 8 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 81.8 0.0358 9 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 11 100 1.51 10 √ √ 2 18.2 0.0355 11 √ √ 2 18.2 0.00778 12 √ √ √ √ √ √ √ 7 63.6 0.334 13 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 0.562 14 √ √ 2 18.2 0.0395 15 √ √ 2 18.2 0.0373 16 √ √ √ √ √ √ √ 7 63.6 0.0521 17 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 1.53 18 √ √ √ √ √ √ √ √ 8 72.7 0.717 19 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 81.8 0.379 20 √ √ √ √ √ √ √ √ 8 72.7 0.405 21 √ √ √ √ √ √ √ 7 63.6 0.358 22 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 0.714 23 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 0.537 共有样品数 11 14 15 10 11 21 15 8 9 11 16
表19充分反映了淫羊藿的内在特性，这些特征峰可作为其指纹 特征用来区分淫羊藿，以供药用。特征指纹和特征指纹的检出率与淫 羊藿甙含量的相关性将构成淫羊藿药材质量标准的重要内容之一。 讨论
1.样品指纹谱之间的相似性。
(1)各种茎叶样品之间的相似性
中华人民共和国药典规定，淫羊藿的药用部位为地上部分的茎 叶，现选择其中淫羊藿甙含量最高的22号样品为基准，通过与一些 茎叶样品的指纹谱重叠率、特征指纹峰检出率以及淫羊藿甙含量作比 较研究(见表20)，发现重叠率、检出率以及淫羊藿甙含量之间呈正 相关关系。
表20 茎叶样品之间的相似性 样品编号 4 12 15 19 20 21 22 23 重叠率％ 48 57 48 83.9 58.8 71 100 72.7 特征指纹峰
45.4 63.6 18.2 81.8 72.7 63.6 90.9 90.9 检出率％ 淫羊藿甙
0.0753 0.334 0.037 0.379 0.405 0.358 0.714 0.537 含量％
4号虽属被药典收载品种，但从上述三项指标观之，不具备入药 的基本条件，而15号样品为非药典收载品种，不作药用是应是理所 当然的。而三项指标均高的19号和23号样品(包括22号)均为药 典收载品种，据此可判为优质药材。而三项指标表现一般的12号、 20和21号三个样品，其中12号系非药典收载品种，除淫羊藿甙含 量合格外，另二项均属偏低，还是应列入不能药用的范围，20号和 21号均为药典收载品种，但各有一项指标偏低，只能认可其药用， 但不能列入优质药材。
(2)各种叶样品的质量分析
以其中淫羊藿甙含量高的9号样品为基准，与其它的叶样品作重 叠率、特征指纹峰检出率以及淫羊藿甙含量的比较研究，结果(见表 21)表明三者之间也呈正相关关系。
表21 叶样品之间的相似性
样品编号 7 9 10 13 17 18
重叠率％ 59.1 100 12.1 74.5 72 54.5
特征指纹峰
72.7 100 18.2 90.9 90.9 72.7
检出率％
淫羊藿甙
0.443 1.51 0.0355 0.562 1.53 0.717
含量％
其中10号样品最为突出，它是安徽产的箭叶淫羊藿，虽属药典 收载品种，但指标均十分低，不仅应判为劣质药材，且不能入药，相 同品种但产地不同的9号样品(陕西安康产)，其三项指标均达最高。 17号样品，属药典收载品种，三项指标也均较高。因此，9号和17 号可判为优质药材，7号也为陕西产，但品种不同，其三项指标一般。 上述情况说明品种和产地的重要性，它们都会对药材质量产生显著的 影响。18号和7号，情况类似，也只能判为一般药材，13号药材是 云南产的宝兴淫羊藿，系非药典收载品种，但它的三项指标均处合格 以上，能否可作药用，尚需进一步作特征指纹的差异率和总差异率考 察。
(3)各种茎样品的质量分析
纵观各种茎样品中淫羊藿甙的含量，十分低下，从入药角度考虑， 茎是不足取的。因此，茎之间比较已无意义，现取9号叶样品与之比 较，结果(见表22)，表明茎与叶相比重叠率普遍低下，且重叠率低 的特征指纹峰检出率也低；充分揭示了茎和叶之间在化合物组成以及 甙含量方面有着明显差异。
表22 茎样品之间的相似性 样品编号 3 6 8 9 11 14 16 重叠率％ 55.2 22.8 48.7 100 22.8 11.8 43.9 特征指纹峰
81.8 18.2 81.8 100 18.2 18.2 63.6 检出率％ 淫羊藿甙
0.00363 0.0287 0.0358 1.51 0.00778 0.0395 0.0521 含量％
综合茎叶、叶和茎的淫羊藿甙含量可知，由于茎中甙的含量十分 低下，即使叶有较高的含量，茎叶合用的结果必然使茎叶中甙的含量 降低乃至不符和药典要求。因此，作者认为，为保证淫羊藿的临床疗 效，淫羊藿以叶入药为好。
2.在药典所收载的五个淫羊藿品种中，巫山、箭叶、柔毛、朝 鲜和淫羊藿等的叶或茎叶，它们的特征指纹检出率均在72.7％之上， 淫羊藿甙的含量也均在0.3％以上。若对品种、产地、药用部位等三 方面予以综合考虑，则以陕西安康产的箭叶淫羊藿叶和四川灌县产的 柔毛淫羊藿叶为最佳；若以习惯药用部位淫羊藿为地上部分时，则可 考虑浙江临安和陕西产的淫羊藿茎叶以及青海朝鲜淫羊藿、江苏无锡 淫羊藿、广西灵山箭叶淫羊藿茎叶。但各种茎叶的淫羊藿甙含量均低 于0.72％。由于未获得19、20、21、22、23等淫羊藿品种的叶，不 然，对单独以叶入药的结论会更有说服力和实验依据。从当前GAP 的要求来看，陕西、浙江、四川等省的有关地区应是首选的产地，品 种则以箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿和淫羊藿为宜，另两个品种可考虑从 药典收载品种中除名。
3.数据化了的色谱指纹谱可产生一系列的参数，包括重叠率、n 强峰、特征峰群以及特征指纹检出率等，为鉴定和区分药材的品质提 供了科学的、客观的、公正的依据。它可充分利用色谱分离所提供的 大量信息，使中药材的内在特性得以较全面地显示。进一步证明色谱 指纹谱对中药质量分析鉴定十分有效的。本实验中也存在一些问题， 例如样本数太小，即样品批号太少，使结论的代表性和公正性受到影 响，同时也因数据太少，没能进行特征指纹的差异率和总差异率计算， 这些情况将在以后的实验中加以弥补。 实施例3
半夏及其炮制品的色谱指纹谱
半夏因其有毒而在临床上常用其炮制品，能治疗痰多咳喘，痰饮 眩悸，胸脘痞闷，呕吐反胃，梅核气，头痛等病症。药理研究充分证 明半夏具有镇咳、镇吐、抗癌、利胆，调节肠胃，降低眼内压和抑制 心脏等作用。最近发现还具有抗炎、抗早孕的作用。
目前常用炮制品有制半夏、宋半夏、仙半夏、青盐半夏、竹沥半 夏等。由于其有毒，需进行炮制，但在半夏炮制时也没有一定的质控 指标，仅凭感觉判别，即麻舌程度，无客观的科学依据。由于依赖主 观判断所得的结果造成了质控的波动，极大地影响了半夏炮制品的质 量。目前尚未见有关半夏及其炮制品的质控研究报道，虽有涉及麻黄 碱、总生物碱、氨基酸、β-谷甾醇等化合物的含量测定，但缺乏针 对性和系统性的研究，且上述这些成分也是许多中药普遍含有的成 分，无突出的鉴别意义。因此用色谱指纹谱技术来分析半夏及其炮制 品的质量问题，也许会有所进展。
药品、试剂、仪器
药材 编号 品名 鉴定者 产地或来源 供应者 1 生半夏Pinellia ternata
(Thunb.)Breit 王志伟 四川 上海养和堂饮片厂
天南星科植物半夏 2 生半夏(同上) 王志伟 浙江磐安 3 生半夏(同上) 王志伟 四川梁平 4 生半夏(同上) 王志伟 信德中药厂 5 制半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 6 制半夏 王志伟 3号样品的炮制品 上海雷允上饮片厂 7 宋半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 8 仙半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 9 青盐半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 10 竹沥半夏 王志伟 1号样品的炮制品 上海养和堂饮片厂 11 制半夏 王志伟 4号样品的炮制品 信德中药厂
试剂：
甲醇(HPLC级)购于中国医药(集团)上海化学试剂公司，水 为重蒸去离子水试剂，乙腈(HPLC级)上海星狮生物有限公司。
色谱条件
色谱仪：PERKIN-ELMER series200 Ic pump
色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6*250 mm 5μm)
检测器：PERKIN-ELMER DAD 235C
检测波长：215nm
流动相：乙腈—水
梯度条件：时间(分钟) 0.2 13 3 14
乙腈(％) 5 15 75 75
流速：1mL/min
进样量：20μl
样品制备：
分别精密称取过10目筛的1-11号样品粉末各5.000克，置于50ml 三角烧瓶中，各加甲醇20ml，以超声提取45min，然后过滤，滤液浓 缩定容至5ml，得样品1-11号的进样溶液。
HPLC-FPS的建立
将分析所得色谱数据，按前述原则建立十一个样品的指纹谱，见 表23。十一个样品的揩纹谱，以1％为窗口范围，所有各样品的相对保 留值经归纳后，共计出峰数为六十二个。1号样品出峰数高达四十八 个，见色谱图-1，最少的为11号样品，仅出峰三十六个。从整体上 看，生品的出峰数较多，炮制品则较少。表24是以1号样品为基准 列出了其它十个样品的重叠率。生品的重叠率较高，均在81％以上， 而炮制品则在67.4％-73.4％之间。表25是它们的八强峰。
表23 11个样品的HPLC-FPS 相对面积 α值 样 品 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 共有峰 0.080 0.03 1 0.092 0.02 0.65 2 0.101 1.98 1 0.105 6.04 9.85 4.24 6.38 5.91 1.61 1.15 5.84 6.15 4.41 5.60 11 0.118 1.08 0.80 0.19 0.31 0.44 5 0.129 1.92 1.17 1.31 7.44 2.90 1.22 1.57 0.62 0.85 0.88 1.39 11 0.134 4.15 3.76 4.22 2.27 2.04 5 0.160 1.36 0.52 2 0.185 0.40 0.43 0.53 1.35 0.73 0.36 0.95 0.20 0.63 9 0.195 2.10 2.12 1.95 3.02 0.20 0.51 0.62 1.52 0.26 9 0.211 1.60 1.43 1.50 2.05 0.96 0.05 0.21 0.75 0.13 9 0.226 0.46 0.41 0.06 1.19 0.39 0.21 0.27 0.06 8 0.230 0.26 1 0.244 0.56 0.38 0.50 0.43 0.19 0.08 0.37 0.35 8 0.263 0.54 0.65 0.35 0.35 0.13 5 0.285 0.41 0.46 0.43 1.16 0.75 0.75 1.60 054 0.85 0.50 0.05 11 0.308 2.91 1.92 2.81 2.97 0.36 0.42 0.32 0.58 0.06 0.12 10 0.334 0.84 0.23 0.63 0.82 0.32 0.87 0.15 0.47 8 0.345 3.27 2.32 3.31 3.58 1.84 0.67 1.91 0.09 8 0.366 0.31 0.18 0.23 0.32 0.07 0.34 0.20 0.56 8 0.384 0.20 1.17 0.88 0.19 0.41 0.77 0.21 0.49 8 0.403 0.77 0.58 0.89 0.90 4 0.419 0.29 1 0.436 0.93 0.20 0.60 0.96 0.41 0.24 0.19 0.82 1.73 0.11 10 0.467 0.16 0.06 0.19 0.26 0.79 0.11 0.11 7 0.492 0.19 0.13 0.36 0.42 0.14 0.13 6 0.513 1.74 1.46 2.34 3.14 0.58 0.89 0.15 0.15 0.34 0.99 10 0.546 0.18 0.51 0.55 0.60 0.05 0.63 6 0.579 0.46 0.07 1.04 0.44 0.31 0.75 0.17 7 0.610 0.14 031 0.53 0.59 0.05 0.08 0.92 7 0.630 0.21 0.03 0.42 0.13 0.87 0.06 6 0.652 0.14 0.11 0.14 0.52 0.05 0.55 0.28 0.04 0.99 9 0.678 0.15 0.17 0.07 0.96 0.35 5 0.692 0.05 0.14 2 0.714 0.15 0.10 0.25 0.33 1.29 0.60 0.41 0.10 0.02 0.36 10 0.735 0.08 0.32 0.32 3 0.750 0.23 0.20 0.04 0.09 0.21 0.04 6 0.767 0.43 1.09 0.65 0.24 0.67 1.53 6 0.775 2.13 2.92 3.43 3.97 1.50 3.04 6.15 4.12 4.78 5.81 3.31 11 0.777 1.17 3.97 10.53 3 0.782 3.60 2.75 2 0.788 1.61 1.76 1.24 1.73 1.70 1.45 2.05 3.32 1.36 2.35 10 0.796 1.36 2.21 1.11 1.04 1.59 3.39 1.86 3.22 1.84 0.99 1.56 11 0.805 1.41 1.51 1.09 1.08 1.46 12.17 3.32 1.73 10.99 1.46 10 0.819 1.32 1.29 1.51 0.14 2.34 1.21 8.47 1.45 2.58 9 0.824 4.01 0.74 2.68 0.84 7.34 5 0.835 4.42 4.51 3.74 4.90 5.81 12.34 4.98 5.42 4.37 8.51 10 0.851 0.75 1.30 1.03 3 0.867 33.81 35.75 35.08 31.18 36.11 29.55 21.70 28.97 34.57 29.11 38.56 11 0.887 3.04 2.03 1.64 2.87 4 0.904 2.32 1.40 2.56 3.09 2.47 1.80 10.12 3.78 7.40 10.91 3.07 11 0.919 1.09 4.01 1.23 2.13 2.14 2.46 1.22 2.19 1.07 1.47 1.71 11 0.937 1.56 1.02 1.20 2.87 0.70 1.44 1.14 1.97 8 0.948 0.72 0.71 23.17 0.62 2.43 0.78 1.04 1.45 8 0.965 2.08 1.79 2.67 2.86 2.00 2.51 1.99 1.47 1.86 2.09 2.55 11 0.988 1.55 0.48 2 1 6.61 6.71 7.00 6.09 7.20 6.19 4.02 6.08 5.80 4.19 8.12 11 1.02 2.10 1.98 2.22 1.73 3.75 3.85 1.14 1.76 2.33 1.79 2.30 11 1.037 0.67 0.60 1.33 0.98 0.42 0.73 1.58 1.76 8 1.058 0.29 0.76 0.55 1.07 4 1.073 1.19 0.92 0.61 0.55 0.68 1.26 0.41 1.31 1.20 1.34 10 1.089 0.54 3.12 0.82 3 1.109 0.41 0.13 2.32 0.54 0.54 0.66 0.09 0.25 0.95 9 1.128 0.19 1.38 1.86 3 1.147 0.22 0.04 0.32 0.21 0.19 5 1.170 0.04 0.03 0.16 0.14 3 1.192 0.06 0.05 0.05 0.03 3 0.211 0.05 1 总峰数 48 47 43 42 42 38 37 45 42 38 36
表24 十种样品的重叠率(％) 样品 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 重叠率 86.3 81.3 82.2 73.3 67.4 68.2 77.4 73.3 67.4 76.2
表25 样品的八强峰 α值/ 相对面积 1 2 3 4 5 6 7 8 相对总面积 样 品 1 0.867/33.81 1.000/6.61 0.105/6.04 0.835/4.42 0.134/4.15 0.782/3.60 0.345/3.27 0.308/2.91 64.81 2 0.867/35.75 0.105/9.85 1.000/6.71 0.835/4.51 0.919/4.01 0.134/3.76 0.775/2.91 0.782/2.75 56.78 3 0.867/35.08 1.000/7.00 0.105/4.24 0.134/4.22 0.824/4.01 0.775/3.43 0.345/3.31 0.308/2.81 64.10 4 0.867/31.18 0.129/7.44 0.105/6.38 1.000/6.09 0.775/3.97 0.835/3.74 0.345/3.58 0.513/3.14 65.52 5 0.867/36.11 1.000/7.20 0.105/5.91 0.835/4.90 1.020/3.75 0.777/3.17 0.887/3.04 0.129/2.90 66.97 6 0.867/29.55 0.948/23.17 1.000/6.19 0.835/5.81 1.020/3.85 0.796/3.39 0.775/3.04 0.965/2.51 77.51 7 0.867/21.70 0.836/12.34 0.805/12.17 0.904/10.12 0.819/8.47 0.775/4.02 1.000/3.12 1.089/1.99 78.1 8 0.867/28.97 0.777/10.53 1.000/6.08 0.105/5.84 0.835/4.98 0.775/4.12 0.904/3.78 0.805/3.32 67.71 9 0.867/34.57 0.904/7.40 0.105/6.15 1.000/5.80 0.835/5.42 0.775/4.78 0.788/3.32 1.020/2.33 69.78 10 0.867//29.11 0.805/10.99 0.904/10.91 0.824/7.34 0.775/5.81 0.105/4.37 0.835/4.19 1.000/2.09 74.82 11 0.867/38.56 0.835/8.51 1.000/8.12 0.105/5.60 0.775/3.31 0.904/3.07 0.887/2.87 0.819/2.58 72.61
由于个生半夏样品均为同一品种，仅产地有所不同，现以四个生 品作为基准，据建立生半夏的特征指纹。按要求，首先找出它们的共 有峰，有二十八个色谱峰为四个生品所共有，十一个为三个生品共有， 合计三十九个色谱峰，它们已全部包含了四个生品的八强峰。以此作 为生品半夏的特征指纹，见表26。现将各生只和炮制品与其进行比 较，并展开讨论。首先可看到四个生半夏的检出率在100-87.2％范围 内，可见其检出率较高，七个炮制品的检出率均低于85％，说明半夏 经炮制后确已发生了变化。由于各炮制品的生药来源可能有异，因此 在讨论炮制品的质量时应以各饮片厂所采用的生品与其炮制品间比 较为主。
表26 半夏的特征指纹 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 0.105 6.04 9.85 4.24 6.38 5.91 1.61 1.15 5.84 6.15 4.41 5.60 0.129 1.92 1.17 1.31 7.44 2.90 1.22 1.57 0.62 0.85 0.88 1.39 0.134 4.15 6.76 4.22 2.27 2.04 0.185 0.40 0.43 0.53 1.35 0.73 0.36 0.95 0.2 0.63 0.195 2.10 2.12 1.95 3.02 0.20 0.51 0.62 1.52 0.26 0.211 1.60 1.43 1.50 2.05 0.96 0.05 0.21 0.75 0.13 0.244 0.56 0.38 0.50 0.43 0.19 0.08 0.37 0.35 0.263 0.54 0.65 0.35 0.35 0.285 0.41 0.46 0.43 1.16 0.75 0.75 1.60 0.54 0.85 0.50 0.05 0.308 2.91 1.92 2.81 2.97 0.36 0.42 0.32 0.58 0.06 0.12 0.334 0.84 0.23 0.63 0.82 0.32 0.87 0.15 0.47 0.345 3.27 2.32 3.31 3.58 1.84 0.67 1.91 0.09 0.366 0.31 0.18 0.23 0.32 0.07 0.34 0.2 0.56 0.403 0.77 0.58 0.89 0.90 0.436 0.93 0.20 0.60 0.96 0.41 0.24 0.19 0.82 1.73 0.11 0.467 0.16 0.06 0.19 0.26 0.79 0.11 0.11 0.492 0.19 0.13 0.36 0.42 0.14 0.13 0.513 1.74 1.46 2.34 3.14 0.58 0.89 0.15 0.15 0.34 0.99 0.546 0.18 0.51 0.55 0.60 0.05 0.63 0.630 0.21 0.03 0.42 0.13 0.87 0.06 0.652 0.14 0.11 0.14 0.52 0.05 0.55 0.28 0.04 0.99 0.714 0.15 0.10 0.25 0.33 1.29 0.60 0.41 0.10 0.02 0.36 0.750 0.23 0.20 0.04 0.09 0.21 0.04 0.775 2.13 4.09 3.86 5.06 4.69 3.69 6.15 14.89 5.45 7.34 3.31 0.788 1.61 1.76 1.24 1.73 1.70 1.45 2.05 3.32 1.36 2.35 0.796 1.36 2.21 1.11 1.04 1.59 3.39 1.86 3.22 1.84 0.99 1.56 0.805 1.41 1.51 1.09 1.08 1.46 12.17 3.32 1.73 10.99 1.46 0.819 1.32 1.29 1.51 0.14 2.34 1.21 8.47 1.45 2.58 0.835 4.42 4.51 3.74 4.90 5.81 12.34 4.98 5.42 4.37 8.51 0.867 33.81 35.75 35.08 31.18 36.11 29.55 21.7 28.97 34.57 29.11 38.56 0.904 2.32 1.40 2.56 3.09 2.47 1.80 10.12 3.78 7.4 10.91 3.07 0.919 1.09 4.01 1.23 2.13 2.14 2.46 1.22 2.19 1.07 1.47 1.71 0.937 1.56 1.02 1.20 2.87 0.70 1.44 1.14 1.97 0.965 2.08 1.79 2.67 2.86 2 2.51 1.99 1.47 1.86 2.09 2.55 1 6.61 6.71 7 6.09 7.2 6.19 4.02 6.08 5.80 4.19 8.12 1.02 2.1 1.98 2.22 1.73 3.75 3.85 1.14 1.76 2.33 1.79 2.3 1.037 0.67 0.60 1.33 0.98 0.42 0.73 1.58 1.76 1.073 1.19 0.92 0.61 0.55 0.68 1.26 0.41 1.31 1.20 1.34 1.109 0.41 0.13 2.32 0.54 0.54 0.66 0.09 0.25 0.95 检出数 39 36 36 34 30 27 28 33 31 25 28 检出率％ 100 92.3 92.3 87.2 76.9 69.2 71.8 84.6 79.5 64.1 71.8
生品和炮制品的指纹谱分析
首先，根据共有峰和八强峰提供的信息，有些色谱峰可规定为半 夏所必须具有的色谱峰，如α值为0.867，1.000和0.105，这三色谱 峰均列入所有样品的八强峰，是中药半夏最为特征的标示。再如α值 为0.129，0.285，0.775，0.796，0.904，0.919，0.965和1.020个色谱 峰，虽然没有均列入所有样品的八强峰，但却是所有样品共有的，也 应作鉴定半夏的必要条件。其它如α值为0.308，0.436，0.513，0.714， 0.788，0.805，0.835，1.073等八个色谱峰是十个样品所共有，在半 夏鉴定时，对这些色谱峰应有90％以上的检出率。因此，不论是生半 夏抑或是各种半夏炮制品均应达到上述要求。上述十九个特征指纹峰 在对某些样品作进一步深入研讨时，有助于给出明确的鉴定结伦。
其次可对生品和炮制品作质量判别，先由重叠率观之，生品间的 重叠率均在81％以上，它们的特征指纹检出率也高，均在87％以上， 说明了生品间较好的相似性，而炮制品中重叠率最高者(8号)为 77.4％，特征指纹检出率最高者(8号)为84.6％。与其它各炮制品相 比，这两项指标均显得较高，说明8号样品与生品间的亲密关系，虽然 同时也说明了它们间的差异。因此，对这批试样而言，在作品种判定 时，重叠率可以80％为界，特征指纹检出率可以85％为界。而8号样 品则存在炮制不足的问题，值得引起注意。
对制半夏的质量控制，除上述的各项要求外，还应考虑下列各点。 从各制半夏与其对应的生品之间的指纹谱比较来看，1号与5号是一 组，它们间的重叠率为73.3％，特征指纹检出率由100％降至76.9％； 3号与6号是一组，它们间的重叠率为74.1％，特征指纹检出率由 92.3％降至69.2％；4号与11号是一组，它们间的重叠率为76.9％， 特征指纹检出率由87.2％降至71.8％。这三组数据反映了生品经炮制 后所发生的变化，上述两项参数客观地反应了这方面的变化，并可据 此作为控制炮制品的依据。由此可进一步认识到重叠率是反映了生品 和炮制品之间相关性的重要参数，如若炮制程度不够，两者的重叠率 必然很高，反之，若炮制过度，则两者的重叠率必然很低。而检出率 则更精细地反映了特征指纹的变化情况，为需作进一步深入探讨时提 供依据。此外，在根据炮制经验和临床用药的反响和决定最佳的炮制 工艺时，色谱指纹谱将可提供最全面的控制指标。现将色谱指纹谱用 于制半夏等炮制品的质量鉴定时所涉及的各项参数简要归纳如下：
1.特征指纹检出率：
高于64％者，再对其十一个必须具有的和八个可部分检出的色谱 峰进行核查。
2.八强峰：
α值为0.867者必须进入八强峰，并列首位。其余α值为1.000， 0.775，0.835者必须进入八强峰。
3.生品与炮制品的重叠率：
从三组生品与炮制品的重叠而言，它们的重叠率在73.3％-76.9％ 之间。从检出率的变化情况看，第一和第二两组均降低了23.1％，第三 组仅降低了10.3％，说明生品经炮制后特征指纹发生了明显的变化，那 些在炮制过程中失去的特征指纹峰应该引起注意，限于本研究的样本 数太少，难以得出有规律性的意见。但无沦如何这是两个反映炮制程 度的重要参数，在进一步扩大实验批号的基础上，将会得到更客观、 公正的数据，为最终获得控制炮制品的数据提供依据。
附：1、2、3、4、5、6、11号样品的色谱图，见图24-图30。
对于有些色谱峰经炮制后，含量升高或降低，或消失，或出现新 的成分，例如由养和堂的生品与炮制品可见，α值为0.160、0.630、 0.782、1.170、1.192、1.211、0.134、0.950、0.211、0.244、0.263、0.467、 0.652、1.000、0.308、0.345和0.513等均是生品比炮制品含量高；其 中α值为0.160、0.308、0.345和0.513者的变化更是显著，值得注意 研究。而α值为0.805、0.824、1.058、0.775和0.904等均是在炮制 品中含量有较明显升高，其中0.805者尤为显著，而0.226、0.610则 是炮制品中所独有。当然，由雷允上和信德厂的两组也可得出各自的 相应数据。因目前的数据均属个别样品间的比较，若要给出结论还需 通过更多批号的样品来证实。但应看到，这些数据反映了炮制前后的 变化情况和一些值得注意的变化规律。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种质美味鲜无公害鲫鱼的养殖方法 | 2021-10-16 | 4 |
| 基于个性化人眼模型的角膜接触镜的设计 | 2020-11-16 | 3 |
| 重氢化(甲基)丙烯酸降冰片基酯、其制备方法、其聚合物以及光学元件 | 2021-05-14 | 2 |
| 多种水处理特性指示剂的同时监测方法 | 2021-07-04 | 1 |
| 肠道及口腔菌群多样性及差异性的分析方法 | 2021-12-09 | 2 |
| 用分光光度计测定糖化酶活力的方法 | 2020-05-22 | 3 |
| 基于核酸适体荧光探针AFP5的甲胎蛋白试剂盒及其检测方法 | 2020-09-27 | 4 |
| 化学需氧量检测方法 | 2020-05-26 | 5 |
| 可调屈光度调试眼 | 2021-02-12 | 0 |
| 小孔防疲劳护目镜 | 2021-04-09 | 5 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
光度学热门专利
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈