锰离子诊断/测定试剂盒及锰离子浓度测定方法
专利汇可以提供锰离子诊断/测定试剂盒及锰离子浓度测定方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种利用酶比色法及酶联法技术的锰离子诊断/测定 试剂 盒 ，同时本发明还涉及测定锰离子浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学/食品/环境检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要成分包括：缓冲液、还 原型 辅酶、 草酸 、丙 酮 酸 、草酸 氧 化酶 、苹果酸脱氢酶及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶促反应，再将反应物置于紫外/可见光分析仪下，检测主 波长 340nm处吸光度下降的速度，就能测算出锰离子的浓度大小。，下面是锰离子诊断/测定试剂盒及锰离子浓度测定方法专利的具体信息内容。
1.一种利用酶比色法及酶联法技术的锰离子浓度测定方法，其方法原 理如下：
草酸+氧草酸氧化酶/Mn 2+ 二氧化碳+过氧化氢
二氧化碳+丙酮酸+还原型辅酶苹果酸脱氢酶(脱羧化)
L-苹果酸+辅酶
将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪 下，检测主波长340nm吸光度下降的速度，测算出锰离子的浓 度大小测定结果。
2.一种锰离子诊断/测定试剂盒，主要成分包括：
缓冲液 20-500mmol/L
稳定剂 1-4000mmol/L
还原型辅酶 0.1-0.35mmol/L
草酸 1-50mmol/L
丙酮酸 1-50mmol/L
草酸氧化酶 1000-80000U/L
苹果酸脱氢酶 1000-80000U/L
其特征在于：试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用； 也可以配制成液体试剂，直接使用。
3.根据权利要求2所述锰离子诊断/测定试剂盒，其特征在于：
由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、草酸、丙酮酸、草酸氧化酶、苹 果酸脱氢酶组成单剂试剂。
4.根据权利要求2所述锰离子诊断/测定试剂盒，其特征在于：
由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、草酸、丙酮酸、草酸氧化酶、苹 果酸脱氢酶组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、还原型辅 酶、草酸、丙酮酸组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、草酸氧化酶、 苹果酸脱氢酶组成。还原型辅酶、草酸、丙酮酸、草酸氧化酶、苹 果酸脱氢酶在试剂1或试剂2中的位置可以不限。
5.根据权利要求2所述锰离子诊断/测定试剂盒，其特征在于：
由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、草酸、丙酮酸、草酸氧化酶、苹 果酸脱氢酶组成多剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、还原型辅 酶、草酸、丙酮酸组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、苹果酸脱氢 酶组成；试剂3，由缓冲液、稳定剂、草酸氧化酶组成。还原型辅 酶、草酸、丙酮酸、草酸氧化酶、苹果酸脱氢酶在试剂1、试剂2 或试剂3中的位置可以不限。
6.根据权利要求2所述锰离子诊断/测定试剂盒，其特征在于：还包 括稳定剂1-4000mmol/L或0.1％-100％体积比。所述稳定剂为： 硫酸铵(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethylene glycol)及防腐剂中的至少一种。
技术领域
本发明涉及一种锰离子诊断/测定试剂盒，同时本发明还涉及测定 锰离子浓度的方法，属于医学/食品/环境检验测定技术领域。
背景技术
常用石墨炉原子吸收分光光度测定法、原子发射ICP-OES。中子激 发分析(NAA)是最好的方法，但仅能在一些条件好的实验室才能测 定。
发明内容
本发明锰离子浓度测定方法原理如下：
草酸+氧草酸氧化酶/Mn 2+ 二氧化碳+过氧化氢
二氧化碳+丙酮酸+还原型辅酶苹果酸脱氢酶(脱羧化)
L-苹果酸+辅酶
这种方法应用需要锰离子激活的草酸氧化酶(oxalate oxidase；EC 1.2.3.4)酶(偶)联苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase；EC 1.1.1.38； EC 1.1.1.39；EC 1.1.1.40；EC 1.1.1.83)酶促反应连续监测法/速率比色 法。草酸氧化酶，在锰离子的激活下，酶解草酸反应产生二氧化碳， 再通过(偶)联合苹果酸脱氢酶脱羧化的作用，最终将还原型辅酶(在 340nm处有吸收峰)氧化成为辅酶(在340nm处没有吸收峰)，从而 得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度下降的速度，通过测量340nm 处吸光度下降的速度，可以测算锰离子的浓度大小。
实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考 虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明锰离子诊断/ 测定试剂盒较为理想：
缓冲液 100mmol/L
稳定剂 500mmol/L
还原型辅酶 0.25mmol/L
草酸 20mmol/L
丙酮酸 20mmol/L
草酸氧化酶 10000U/L
苹果酸脱氢酶 10000U/L
本发明的锰离子诊断/测定试剂盒可以是单剂，包括：
缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、草酸、丙酮酸、草酸氧化酶、 苹果酸脱氢酶。
试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成 液体试剂，直接使用。
也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂：
试剂1
缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、草酸、丙酮酸。
试剂2
缓冲液、稳定剂、草酸氧化酶、苹果酸脱氢酶。
还原型辅酶、草酸、丙酮酸、草酸氧化酶、苹果酸脱氢酶在试剂1 或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水 溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。
还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂：
试剂1
缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、草酸、丙酮酸。
试剂2
缓冲液、稳定剂、苹果酸脱氢酶。
试剂3
缓冲液、稳定剂、草酸氧化酶。
还原型辅酶、草酸、丙酮酸、草酸氧化酶、苹果酸脱氢酶在试剂1、 试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用 前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。
无论是单剂、双剂还是三剂，本发明测定锰离子浓度的方法，其还 原型辅酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一种。
具体实施方式
实施例一
本实施例的锰离子诊断/测定试剂为单试剂，包括：
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 500mmol/L
还原型辅酶 0.25mmol/L
草酸 20mmol/L
丙酮酸 20mmol/L
草酸氧化酶 10000U/L
苹果酸脱氢酶 10000U/L
试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂； 使用前，加入纯净水，复溶后使用。
在全自动生化分析仪上设定：温度37℃，反应时间10分钟，起始 吸光度1.8±0.7，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测锰离 子样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为负反应(下降反应)，延 迟时间大约1分钟左右，检测时间5分钟左右。
加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化 分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的速度，从而测算出锰离子 的浓度大小。
实施例二
本实施例的锰离子诊断/测定试剂为双试剂，包括：
试剂1
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 50mmol/L
还原型辅酶 0.25mmol/L
草酸 20mmol/L
丙酮酸 20mmol/L
试剂2
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 500mmol/L
草酸氧化酶 10000U/L
苹果酸脱氢酶 10000U/L
试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体双试剂，可以直接使用。
在全自动生化分析仪上设定：温度37℃，反应时间10分钟，起始 吸光度1.8±0.7，测试主波长340nm，测试副波长405nm，被测锰离 子样品与试剂1、试剂2的体积比例为2/20/5，反应方向为负反应(下 降反应)，延迟时间大约1分钟左右，检测时间5分钟左右。
加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化 分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的速度，从而测算出锰离子 的浓度大小。
实施例三
本实施例的锰离子诊断/测定试剂为三试剂，包括：
试剂1
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 50mmol/L
还原型辅酶 0.25mmol/L
草酸 20mmol/L
丙酮酸 20mmol/L
试剂2
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 500mmol/L
苹果酸脱氢酶 10000U/L
试剂3
三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L
稳定剂 500mmol/L
草酸氧化酶 10000U/L
试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体三试剂，可以直接使用。
测定锰离子浓度时，在全自动生化分析仪上设定：温度37℃，反 应时间10分钟，起始吸光度1.8±0.7，测试主波长340nm，测试副波 长405nm，被测锰离子样品与试剂1、试剂2、试剂3的体积比例为 4/40/5/5，反应方向为负反应(下降反应)，延迟时间大约1分钟左右， 检测时间5分钟左右。
加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化 分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的速度，从而测算出锰离子 的浓度大小。
申请人经过实验验证，采用以上发明内容中记载的其他各种还原 型色原体组合均能达到本发明的目的，鉴于测定步骤等情况与以上实 施例类同，不另一一例举。
总之，实验证明，采用本发明的测定方法完全可以通过一般生化分 析仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好，便于推广应 用。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种质美味鲜无公害鲫鱼的养殖方法 | 2021-10-16 | 4 |
| 基于个性化人眼模型的角膜接触镜的设计 | 2020-11-16 | 3 |
| 重氢化(甲基)丙烯酸降冰片基酯、其制备方法、其聚合物以及光学元件 | 2021-05-14 | 2 |
| 多种水处理特性指示剂的同时监测方法 | 2021-07-04 | 1 |
| 肠道及口腔菌群多样性及差异性的分析方法 | 2021-12-09 | 2 |
| 用分光光度计测定糖化酶活力的方法 | 2020-05-22 | 3 |
| 基于核酸适体荧光探针AFP5的甲胎蛋白试剂盒及其检测方法 | 2020-09-27 | 4 |
| 化学需氧量检测方法 | 2020-05-26 | 5 |
| 可调屈光度调试眼 | 2021-02-12 | 0 |
| 小孔防疲劳护目镜 | 2021-04-09 | 5 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
