美汉草制剂的制备方法及其抗氧化用途
阅读：918发布：2023-02-21
专利汇可以提供美汉草制剂的制备方法及其抗氧化用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及美汉草制剂的制备方法及其抗 氧 化用途。称取美汉草干燥粗粉，以美汉草粗粉10倍量的50％ 乙醇 浸泡10h后，然后超声提取30min-35min，超声 温度 为30℃-32℃，超声功率为80W，超声提取三次，静置过滤，经抽滤后合并滤液，将滤液置于 旋转 蒸发 仪 中回收乙醇后置于4℃ 冰 箱 中48h-60h，抽滤，得流浸膏；将流浸膏加适量 水 稀释成混悬液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液，减压浓缩， 冷冻干燥 ，得到美汉草乙酸乙酯提取物制剂。美汉草制剂用于制备抗氧化作用的制剂。，下面是美汉草制剂的制备方法及其抗氧化用途专利的具体信息内容。
美汉草制剂的制备方法及其抗氧化用途
技术领域
[0001] 本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及美汉草制剂的制备方法及其抗氧化用途。
背景技术
[0002] 目前，大量资料已经证明：炎症、肿瘤、衰老、血液病、以及心、肝、肺、皮肤等各方面疑难疾病的发生机理与体内自由基产生过多或清除自由基的能力下降有着密切的关系。由于抗氧化剂对由自由基引起的机体损伤有干扰作用，而被公认为是一种新的治疗途径，在预防医学领域里，对抗氧化剂研究兴趣空前高涨。合成的抗氧化剂虽然抗氧化性能较好，但有一定的副作用。所以，开发研究抗氧化作用的天然药物是目前研究的重中之重。
[0003] 美汉草为唇形科(Labiatae)龙头草属(Meehania)植物芝麻花Meehania urticifolia(Miq.)Makino的干燥地上部分，别名荨麻叶龙头草，芝麻花(辽宁)、美汉花，异名水升麻(四川)，为多年生草本植物，分布于通化、浑江、柳河、集安、抚松、靖宇、蛟河、舒兰、安图、敦化、长白朝鲜族自治区、通化县等地，朝鲜、日本也有分布。美汉草味辛、苦、性微寒，全草入药，可作为民间药，具有清热解表，利水消肿等功效。用于感冒发热，泻痢腹痛，肝炎，胆囊炎，小便不利，蛇咬伤等症。在民间作美汉草药用，全草可入药，作为寒药，具有发表清热，利湿解毒等功效，其天然资源极为丰富，且蕴含量大。
[0004] 经查阅文献发现，国内外对美汉草的抗氧化作用研究鲜见报道。通过本文的研究，为深入研究美汉草植物提供理论依据。为其在食品、药品等领域开发新的天然抗氧化剂提供参考依据。
发明内容
[0005] 1、美汉草制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程：
[0006] 步骤(1)：称取美汉草干燥粗粉，以美汉草粗粉10倍量的50％乙醇浸泡10h后，然后超声提取30min-35min，超声温度为30℃-32℃，超声功率为80W，超声提取三次，静置过滤，经抽滤后合并滤液，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后置于4℃冰箱中48h-60h，抽滤，得流浸膏；
[0007] 步骤(2)：将步骤(1)中的流浸膏加适量水稀释成混悬液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，得到美汉草乙酸乙酯提取物制剂，备用。
[0008] 2、美汉草制剂具有抗氧化作用。
[0009] 根据本发明，本发明中的“％”是重量百分比。
具体实施方式
[0010] 本发明所述的美汉草制剂的制备方法及其抗氧化用途包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0011] 实施例1：
[0012] 1、美汉草制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程：
[0013] 步骤(1)：称取美汉草干燥粗粉，以美汉草粗粉10倍量的50％乙醇浸泡10h后，然后超声提取30min，超声温度为30℃，超声功率为80W，超声提取三次，静置过滤，经抽滤后合并滤液，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后置于4℃冰箱中48h，抽滤，得流浸膏；
[0014] 步骤(2)：将步骤(1)中的流浸膏加适量水稀释成混悬液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，得到美汉草乙酸乙酯提取物制剂，备用。
[0015] 2、美汉草制剂具有抗氧化作用。
[0016] 实施例2：
[0017] 1、美汉草制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程：
[0018] 步骤(1)：称取美汉草干燥粗粉，以美汉草粗粉10倍量的50％乙醇浸泡10h后，然后超声提取35min，超声温度为32℃，超声功率为80W，超声提取三次，静置过滤，经抽滤后合并滤液，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后置于4℃冰箱中60h，抽滤，得流浸膏；
[0019] 步骤(2)：将步骤(1)中的流浸膏加适量水稀释成混悬液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，得到美汉草乙酸乙酯提取物制剂，备用。
[0020] 2、美汉草制剂具有抗氧化作用。
[0021] 药理试验 美汉草制剂的抗氧化作用
[0022] 1 材料与方法
[0023] 1.1 实验样品来源
[0024] 药材采于吉林省临江市，由吉林农业大学园艺学院胡全德教授鉴定美汉草为唇形科(Labiatae)龙头草属(Meehania)植物芝麻花Meehania urticifolia(Miq.)Makino的干燥地上部分。
[0025] 1.2 仪器
[0026] T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；百灵LA114型电子天平(110g/0.0001g，常熟市百灵天平仪器有限公司)；电子计数天平(500g/0.001g，金羊天平仪器厂)；KQ-250DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；101-2A型数显电热鼓吹干燥箱(上海锦屏仪器仪表有限公司通州分公司)；RE 52-05旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；电子恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司)；移液枪(20ul，上海肯强贸易有限公司)。
[0027] 1.3 试剂
[0028] DPPH溶液，蒸馏水，无水乙醇，甲醇，ABTS，过硫酸钾，铁氰化钾，磷酸盐缓冲液(PH＝6.6)，三氯乙酸，三氯化铁，抗坏血酸(以下用Vc表示)(上海惠世生化试剂有限公司，批号：080408)，Folin-Ciocalteu试剂，无水碳酸钠。
[0029] 2 实验方法与步骤
[0030] 2.1 药材组分的提取
[0031] 取美汉草样品粉末2.25kg，分别以美汉草粉末10倍量的50％乙醇浸泡10h后，超声35min，温度为30℃，功率为80W，超声提取三次，静置过滤，经抽滤后合并滤液，将滤液置于旋转蒸发仪中回收乙醇后置于4℃冰箱中60h，抽滤，得流浸膏，将此流浸膏加适量水稀释成混悬液，再以流浸膏4-5倍量的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次，合并乙酸乙酯层萃取液，减压浓缩，冷冻干燥，得到美汉草乙酸乙酯提取物制剂，备用。
[0032] 2.2 DPPH法测定抗氧化活性
[0033] 2.2.1 样品溶液的制备
[0034] 准确称取干燥至恒重的美汉草乙酸乙酯提取物制剂30mg，用无水乙醇定容于10mL容量瓶中，配成浓度为3mg/mL的样品母液，将样品母液用无水乙醇逐级稀释成浓度为 0.000mg/ml，0.018mg/mL，0.037mg/mL，0.075mg/mL，0.15mg/mL，0.31mg/mL，0.62mg/mL，
1.25mg/mL的样品溶液待用。
1.25mg/mL的样品溶液待用。
[0035] 2.2.2 DPPH溶液的制备
[0036] 精密称取DPPH样品0.01g，加入无水乙醇定容至50ml容量瓶中，得到DPPH母液(浓度0.2mg/mL)。从母液中移取10mL，用无水乙醇定容置50mL容量瓶中，得到DPPH溶液(浓度0.04mg/mL)，整个过程都需要避光。
[0037] 2.2.3 样品测定
[0038] 美汉草乙酸乙酯提取物制剂样品溶液按表1加入反应液，摇匀后于室温避光静置30min，在515nm处测定吸光度值。用Vc作对照。
[0039] 表1 美汉草乙酸乙酯提取物制剂样品溶液加样表
[0040]
[0041] DPPH清除率％＝(A-B+C)/A*100
[0042] 2.3 ABTS法测定抗氧化活性
[0043] 2.3.1 样品溶液的制备
[0044] 精确称取干燥至恒重的美汉草乙酸乙酯提取物制剂30mg，用水定容于10mL容量瓶中，配成浓度为3mg/mL的样品母液，将样品母液用水逐级稀释成浓度0.000mg/ml，0.018mg/mL，0.037mg/mL，0.075mg/mL，0.15mg/mL，0.31mg/mL，0.62mg/mL，1.25mg/mL，的样品溶液待用。
[0045] 2.3.2 ABTS·+溶液的制备
[0046] 5mL，14mM的ABTS和5mL，4.9mMk2S2O8混合产生ABTS+，黑暗中静止16h，使用之前+用乙醇稀释成备用的ABTS，要求其在734nm波长下的吸光度为0.70±0.02。
[0047] 2.3.3 样品测定
[0048] 取3ml样品溶液加入158μLABTS+(Asample)，用乙醇做空白，158μLABTS+和3ml水为标准液(Acontrol)，6min后在734nm波长下测定吸光度，用Vc作对照。
[0049] 清除率(％)＝[(Acontrol-Asample)/Acontrol]×100％
[0050] 2.4 半数抑制率的计算
[0051] 半数抑制率(IC50)指清除率为50％时所需抗氧化剂的浓度，根据不同浓度抗氧化剂的清除率作曲线求出。
[0052] 2.5 总酚含量测定
[0053] 2.5.1 标准曲线的绘制
[0054] 精密称取对照品没食子酸0.0040g，甲醇溶解转入100ml容量瓶，制成浓度为0.04mg/ml的标准品溶液，备用。
[0055] 分 别 吸 取 0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、8.0ml 于25ml 容 量 瓶 中 加 2.5ml Folin-Ciocalteu试剂，摇匀，在0-8min再加入2ml7.5％Na2CO3溶液，于50℃水浴反应5min，冷却至室温加蒸馏水定容。以空白溶液为参比溶液，于760nm测定吸光度。对所测得的数据采用直线回归法计算出标准曲线的回归方程，并以对照品的质量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。将数据进行回归分析得到标准曲线的回归方程为：Y＝
2
6.2168X-0.0421，R ＝0.9991，在0.02-0.32mg范围内线性关系良好。
2
6.2168X-0.0421，R ＝0.9991，在0.02-0.32mg范围内线性关系良好。
[0056] 2.5.2 样品测定
[0057] 取样品20mg于10mL容量瓶中，用甲醇定容，取0.5ml样品溶液于25mL容量瓶中，加入Folin-Ciocalteu(福林酚试剂)2.5mL，在0.5至8分钟范围内间断加入2mL无水Na2co3(75g/L)，在50℃水浴中加热5min，冷却后用蒸馏水配平，760nm处测吸光度值，用蒸馏水作对照。
[0058] 3 结果与讨论
[0059] 3.1 结果
[0060] 3.1.1 DPPH法测定抗氧化活性结果
[0061] 见表2。
[0062] 表2 DPPH法测定抗氧化活性结果 清除率％
[0063]
[0064] 美汉草乙酸乙酯提取物制剂样品对DPPH·自由基有很强的清除作用。随着样品浓度的增加，清除自由基能力呈逐渐上升趋势，具有良好的量效关系。
[0065] 3.1.2 ABTS法清除自由基作用结果
[0066] 见表3。
[0067] 表3 ABTS法清除自由基作用结果
[0068]·+
[0069] 美汉草乙酸乙酯提取物制剂样品对ABTS 自由基有很强的清除作用。随着样品浓度的增加，美汉草的抗氧化能力随之增强，呈现良好的量效关系。
[0070] 3.1.3 美汉草乙酸乙酯提取物制剂清除DPPH和ABTS的IC50值及总酚含量[0071] 见表4。
[0072] 表4 美汉草乙酸乙酯提取物制剂的抗氧化活性及总酚含量
[0073]
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