[0001] 本发明涉及用于隔离血清衰老因子的天然产物提取物，该提取物可被内部或局部给药。 更具体地，本发明涉及用于美容上抑制或改善衰老相关氧化的试剂及其组合物，和其用作护肤产品的方法。

[0002] 发明背景

[0003] 质膜NADH氧化酶(NOX)是具有氢醌(NADH)氧化酶和蛋白质二硫化物-硫醇交换活性的独特的细胞表面蛋白质，其通常对荷尔蒙和生长因子作出反应。 NOX(或CLOX)是与衰老细胞有关的生长相关蛋白质家族。命名为tNOX的NOX的对激素不敏感且药物反应性形式已被述及，该形式对癌细胞特异。 例如，参见美国专利号5,605,810，在此引入其全部作为参考。

[0004] NADH氧化酶(arNOX)的衰老相关同种型是该蛋白质家族的一员。 arNOX的循环形式在人血清和个体淋巴细胞中显著增加，尤其年龄在30至65之间。 arNOX蛋白质独特的特点在于产生超氧基的能力，其可显著有助于衰老相关的变化，包括动脉粥样化形成和其他超距作用衰老现象。 衰老细胞和血清中arNOX的活性之前已述。 参见如PCT公开申请号WO 00/57871，在此引入其全部作为参考。

[0005] 该arNOX效应的模型与线粒体衰老理论(Mitrochondrial Theory of Aging)一致，该理论认为衰老过程中，线粒体中增加的活性氧物质造成线粒体DNA突变，并且损伤线粒体组分，导致衰老。线粒体衰老理论提出线粒体DNA(mtDNA)中自然产生的体细胞突变的累积造成了mtDNA编码的多肽链的错误(Manczak M et al.，J Neurochem.2005 Feb；92(3)：494-504)。 这些产生在mtDNA编码的多肽链中的错误是随机的，并在线粒体和细胞分裂期间随机地传递。 这些改变的结果是缺陷型氧化磷酸化作用。 呼吸链缺陷可能与放大原损伤的增大的氧化应激有关(Ozawa，1995，Biochim.Biophys.Acta 1271：
177-189；和Lenaz，1998，Biochim.Biophys.Acta 1366：53-67)。 因此由此可见，尽管以非常微量存在于机体中，但变异的线粒体DNA可能是氧化应激的主要发生体。

[0006] mtDNA体细胞突变的累积造成缺陷型氧化磷酸化作用时，提出了质膜氧化还原酶(PMOR)体系，通过氧化吡啶核苷酸的再生增大线粒体缺陷细胞的存活率(de Grey，1997，BioEssays 19：161-166；de Grey，1998，Anti-Aging Med.1：53-66；Yoneda等，1995，Biochem.Biophys.Res.Comm，209：723-729；Schon 等，1996，Cellular Aging and Cell Death，Wiley and Sons，New York，pp.19-34；Ozawa，1997，Physiol.Rev.77：425-464；和Lenaz，1998，BioFactors 8：195-204)。 将mtDNA的损伤累积与胞外反应——如低密度脂蛋白(LDLs)中脂质的氧化和伴随的动脉变化——连接的模型，以rho°细胞被首次提出(Larm等，1994，Biol.Chem.269：30097-30100；Lawen等，1994，Mol.Aspects.Med.15：s13-s27；de Grey，1997，BioEssays 19：161-166；和de Grey，1998，Anti-Aging Med.1：53-66)。 已用培养中转化的人细胞进行类似的研究(Vaillant等，1996，Bioenerg.Biomemb.28：531-540)。

[0007] 质膜氧化还原酶(PMOR)过表达的情况下，电子通过限定的电子传递链从NADH转移到外部受体，造成细胞表面活性氧物质(ROS)产生。 然后这些细胞表面产生的ROS可将源自线粒体的衰老级联反应传递到相邻细胞和如低密度脂蛋白的循环血液组分。 参见PCT公开申请号WO 00/57871，在此引入其全部作为参考。

[0008] 因此，需要找到这样的试剂：其降低arNOX产生活性氧物质(ROS)的能力，以达到减少或治疗所产生的如低密度脂蛋白(LDLs)中脂质的氧化和伴随的动脉变化的生理学状况的目的。 已经显示衰老细胞的arNOX活性受到如辅酶Q(泛醌)的天然存在剂的抑制。 参见PCT公开申请号WO 00/57871、WO 01/72318和WO 01/72319，在此引入其全部内容作为参考。 但是，由于以下几个原因，辅酶Q的应用不完全令人满意：其价格高昂，其容易氧化失去其效力，并且包含辅酶Q的制备物必须被特殊包裹以防止功能损失。因此，尽管一些可抑制arNOX活性的试剂和方法目前存在，但挑战也仍存在。由此，用抑制arNOX且无毒性并天然存在的试剂和技术增大或甚至取代之前公开的试剂和技术将是本领域中的进步。

[0009] 特别是皮肤容易受到活性氧物质损伤。皮肤由两个主要层组成。 角质层或表皮是上层，为皮肤形成防护层和控制水和物质进出皮肤的流动。 真皮是皮肤的下层，为皮肤提供力度、弹性和厚度。 真皮的主要细胞类型是成纤维细胞，其负责如胶原蛋白、弹性蛋白和粘多糖的所有真皮基质组分的合成和分泌。 胶原蛋白提供力度，弹性蛋白提供弹性，粘多糖提供皮肤的湿度和饱满度。

[0010] 除了被活性氧物质损伤，皮肤遭受各种损伤应激物。 皮肤可能被环境中多种因素损伤或伤害。一些是自然产生的，如太阳UV辐射、风甚至机械伤害，如切割、刮擦及类似伤害。另外，人为伤害也日常发生。 这些伤害包括肥皂、乳化剂基化妆品、热水、有机溶剂、空调和集中供热的使用。 此外，其他对皮肤的伤害可源于皮肤疾病或正常的衰老过程(慢性衰老)或其一部分，其可通过皮肤暴露于各种外部应激物(例如光衰老)而加快。

[0011] 每个人的皮肤随时间衰老。 然而，现代社会里人们生命更长，并且正常的衰老效应有机会得到累积。 该效应可能是完全美容上的，如皱纹或“老年斑”的增加；或其可能对健康有影响，如暴露于UV光造成的皮肤癌的发生。 随着人变老，皮肤变薄，皮肤的结缔组织、胶原蛋白和弹性蛋白发生改变，导致皮肤失去硬度并变得干燥。 并且，皮肤的汗腺和油腺活性减小，从而导致皮肤失去湿度并干燥。 进一步，皮肤血管变得更加脆弱，从而其破裂并漏进皮肤里。

[0012] 衰老皮肤的症状包括皮肤干燥、瘙痒、变薄或增厚、皱纹和细纹、常指肝斑的色素沉着区和血管破裂(毛细血管扩张)皮肤下的区域。

[0013] 需要“抗衰老”的美容和医疗产品，其治疗或延缓实际衰老和风化皮肤的可见迹象，如皱纹、细纹、松垂、色素沉着和老年斑。 但是，大多数美容或医疗产品没有解决这些症状的根本，例如得自ROS的arNOX相关自由基的产生和累积。 因此，需要有效的天然皮肤治疗和防护组合物及其应用方法。

[0014] 发明概述

[0015] 本发明涉及用于隔离(或螯合)血清衰老因子的试剂及其应用方法。更具体地，本发明涉及本文中称为“Naractin”的试剂，表示存在于水仙(N.tazetta)粉末中或能够增强水仙粉末至匹敌鲜水仙提取物的抑制水平的几种天然存在arNOX抑制剂中的任意一种；和涉及应用“Naractins”预防或治疗由NADH氧化酶(arNOX)的衰老相关同种型引起的细胞损伤而产生的疾病和疾病并发症的方法。 在一个示例性实施方式中，本发明的试剂包括至少一种天然存在的Naractin。 这种天然存在的naratins也能增强其他天然存在arNOX抑制剂的抗arNOX作用。

[0016] 因此，在一个示例性实施方式中，本发明包括用于改善衰老效应的局部组合物，该组合物包含有效量的至少一种arNOX抑制剂。根据该示例性实施方式，arNOX抑制剂是naractin，naractin有效减少衰老效应。一些根据本发明的示例性实施方式中，从水仙、柳树、玉米、中横棒、杨树、荚蒾、霉菌特别是曲霉(Aspergillus)、八角枫、桦树、柴胡、秋水仙、大戟(spurge)、filipendulum、栀子、紫草(lithospermum)、烟草或槲寄生中提取和/或提纯naractin。

[0017] 在不同的其他实施方式中，naractin是水杨酸盐及其衍生物。 在一些示例性实施方式中，水杨酸盐是水杨酸盐是水杨苷、水杨酸、水杨基异羟肟酸盐(salicyl hydroxamate)、其衍生物或其组合。 在不同的示例性实施方式中，naractin得自中国八角枫(Alangium chinense)、三裂八角枫(A.platanifolium)、日本八角枫(A.premnifolium)、黑曲霉(Aspergillus niger)、白桦(Betula alba)、银柴胡(Bupleurum falcatum)、长春花(Catharanthus roseus)、朝鲜柳(Chosenia bracteosa)、秋水仙(Colchicum autumnale)、中横棒(Crepis foetida)、C.rhoeadifolia、毛叶曼陀罗(Datura inoxia)、澳洲茄(Duboisia myoporoides)、Eleutherococcus setchuensis、Euphorbia salicifolia、Filipendula ulmaria、Foeniculum vulgare、栀子(Gardenia jasminoides)、紫草(lithospermum erythrorhizon)、红花烟草(Nicotiana tabacum)、银白杨(Populus alba)、香脂杨(P.balsamifera)、山杨(P.davidiana)、美洲黑杨(P.deltoides)、胡杨(P.euphratica)、大齿杨(P.grandidentata)、P.heterophylla、 大 叶杨(P.lasiocarpa)、 辽 杨(P.maximowiczii)、钻 天 杨(P.nigra)、P.sieboldii、小叶杨(P.simonii)、青杨(P.tacamahaca)、毛白杨(P.tomentosa)、欧洲山杨(P.tremula)、美洲山杨(P.tremuloides)、毛果杨(P.trichocarpa)、尖叶柳(Salix acutifolia)、白柳(S.alba)、S.americana、北极柳(S.arctica)、耳柳(S.aurita)、垂柳(S.babylonica)、S.basfordiana、欧杞柳(S.caesia)、芸香科美柳(S.calodendron)、圆头柳(S.capitata)、黄花柳(S.caprea)、腺柳(S.chaenomeloides)、灰柳(S.cinerea)、瑞香柳(S.daphnoides)、爆竹柳(S.fragilis)、S.geminata、细柱柳(S.gracilis)、细柱柳(S.gracilistyla)、S.gracilistyloides、S.gymnolepis、戟柳(S.hastata)、矮柳(S.herbacea)、S.incana、 尖 叶 紫 柳 (S.koriyanagi)、S.lapponum、S.lasiandra、S.lasiolepis、 旱柳 (S.matsudana)、S.myrsinifolia、S.nigricans、S.orestera、 五 蕊 柳 (S.pentandra)、S.pentandroides、S.petiolaris、深山柳(S.phylicifolia)、红皮柳(S.purpurea)、匍匐柳(S.repens)、S.rubra、蒿柳(S.schwerinii)、斯考勒氏柳(S.scouleriana)、S.smithiana、准噶尔柳(S.songarica)、S.species、S.stipularis、四子柳(S.tetrasperma)、S.tremuloides、三蕊柳(S.triandra)、蒿柳(S.viminalis)、Toisusu urbaniana、巴东荚蒾(Viburnum henryi)、樱叶荚蒾(V.prunifolium)、皱叶荚蒾(V.rhytidophyllum)或白果槲寄生(Viscum album)。

[0018] 在不同的其他实施方式中，naractin是水杨酸盐及其衍生物。在一些示例性实施方式中，水杨酸盐是水杨苷、水杨酸、水杨基异羟肟酸盐、其衍生物或其组合。

[0019] 在不同的其他实施方式中，该组合物进一步包括美容或药学可接受的载体。 在一些示例性实施方式中，naractin抑制剂与其他得自天然存在来源的arNOX抑制剂共存，该来源包括但不限于花椰菜、香菇、彩叶草(coleus)、迷迭香(rosemary)、莲花、朝鲜蓟(artichoke)、海玫瑰、柑橘、月见草(Oenothera biennis)、虾青素、红桔、五味子(Schisandra chinensis)、忍冬(Lonicera)、荞麦(Fagopyrum)、胡萝卜或橄榄。 在不同的示例性实施方式中，naractin增强附加arNOX抑制剂的作用。

[0020] 本领域技术人员会理解，本文所述arNOX抑制组合物可以以任何便捷的方式给药。 在一些示例性实施方式中，这样的给药形式包括脂质或聚合微球体或纳米球体或囊泡的膏剂、乳液、洗液、凝胶、悬浮液；肥皂、洗发水或防晒剂。 在不同的示例性实施方式中，由本发明改善的衰老效应包括但不限于细纹、皱纹、色素沉着、脱水、失去弹性、血管瘤、干燥、瘙痒、毛细血管扩张、光化性紫癜、脂溢性角化病、缺乏水化、胶原蛋白减少或光化性角化病。 在本发明这些和其他示例性实施方式中，提供了浓度在约5μg/ml至约500μg/ml之间的arNOX抑制剂。

[0021] 在还有其他示例性实施方式中，本发明包括抑制由NADH氧化酶衰老相关同种型引起的活性氧物质产生以改善衰老效应的方法，包括：向其所需患者给予治疗有效量的组合物，该组合物包括水杨苷、水杨酸、水杨基异羟肟酸盐中至少一种，从而抑制了由NADH氧化酶衰老相关同种型引起的活性氧物质的产生，其中衰老效应得到改善。在不同的示例性实施方式中，本方法进一步包括以下物质中至少一种的提取物或纯化提取物：花椰菜、香菇、彩叶草、迷迭香、莲花、朝鲜蓟、海玫瑰、柑橘、月见草、虾青素、红桔、五味子、忍冬、荞麦、胡萝卜、水仙、橄榄、柳树、燕麦或玉米。 在根据本发明所述的不同示例性实施方式中，组合物作为脂质或聚合微球体或纳米球体或囊泡的膏剂、乳液、洗液、凝胶、悬浮液；肥皂、洗发水或防晒剂施用。 在这些示例性实施方式中，衰老效应包括但不限于细纹、皱纹、色素沉着、脱水、失去弹性、血管瘤、干燥、瘙痒、毛细血管扩张、光化性紫癜、脂溢性角化病、缺乏水化、胶原蛋白减少或光化性角化病。

[0022] 在还有其他示例性实施方式中，本发明包括改善衰老效应的美容方法，包括对皮肤施用美容组合物，该组合物包括：足以抑制arNOX的有效量naractin，其中至少一种arNOX介导的衰老效应受到抑制。在这些实施方式中，naractin是水杨酸盐或其衍生物。在不同的示例性实施方式中，水杨酸盐是水杨苷、水杨基异羟肟酸盐或水杨酸。 在根据本发明所述方法的其他不同实施方式中，美容组合物进一步包括植物提取物，包括：
胡萝卜提取物、橄榄提取物、花椰菜提取物、香菇提取物、彩叶草提取物、迷迭香提取物、莲花提取物、朝鲜蓟提取物、海玫瑰提取物、柑橘提取物、月见草提取物、红桔提取物、五味子提取物、忍冬提取物、荞麦提取物、柳树提取物、玉米、燕麦或水仙提取物。 在这些示例性实施方式中，naractin与美容可接受的载体一并提供。

[0023] 在不同的示例性实施方式中，由根据本发明所述的方法改善的衰老效应包括细纹、皱纹、色素沉着、脱水、失去弹性、血管瘤、干燥、瘙痒、毛细血管扩张、光化性紫癜、脂溢性角化病、缺乏水化、胶原蛋白减少或光化性角化病。

[0024] 在根据本发明所述方法的不同实施方式中，至少一天一次施用naractin。 在一些示例性实施方式中，在美容制品中以约5μg/ml至约500μg/ml之间的浓度提供naractin。 在这些示例性实施方式中，将以脂质或聚合微球体或纳米球体或囊泡的膏剂、乳液、洗液、凝胶、悬浮液；肥皂、洗发水或防晒剂给予根据本发明所述的美容组合物。

[0025] 在还有根据本发明的其他实施方式中，本发明包括试剂盒，该试剂盒用于施用对改善衰老效应有用的美容品，该试剂盒包括：至少一种naractin；和使用说明。在一些示例性实施方式中，该试剂盒进一步包括这样的美容制品，其适于作为至少一种arNOX抑制植物提取物的载体。

[0026] 在以下说明书和所附权利要求书中本发明的这些和其他特征和优势将被阐述或将变得更加充分清晰可见。 通过所附权利要求书中具体指出的设备和组合可以实现和获得该特征和优势。 此外，本发明的特征和优势可通过本发明的实践认识到，或由说明书清晰可见，如下文所述。

[0027] 附图简述

[0028] 参考下图将详细说明根据本发明所述组合物和方法的不同示例性实施方式，其中：

[0029] 图1a显示72岁(y/o)男性唾液样本中arNOX同种型的活性图(BL＝基线)和添加水仙粉末提取物后的部分抑制(中间图)。右图显示添加水杨基异羟肟酸盐(SHAM)(Naractin 1)成分到水仙粉末后几乎完全的活性抑制。除了替代SHAM，图1b与图1a相同，水仙粉末的抑制效果随水杨苷(Naractin 3)增强。Naractins与铁形成具有类似红色的光谱性质的红色复合物，该性质表征如图2所示的水仙鳞茎部分的一部分和包含arNOX抑制物的提取物。

[0030] 图2a-f表明水仙鳞茎区域和包含arNOX活性抑制物的提取物。 抑制物不存在于颜色不变成红色或粉色的鳞茎部分和/或提取物中。 图2a是鳞茎图，该鳞茎被分成由叶区和茎区组成的区域。 图2b是显示与arNOX抑制相关的红色化合物定位于茎区中的照片。图2c显示提取物形成的不同鳞茎区域，不同区域中具有不同红色形成水平，如图2d、2e和2f所示。 颜色形成迅速。 提取物不抑制arNOX活性的水仙种类的鳞茎也不会形成红色。

[0031] 图3表明添加氯化铁后，玉米维管体(steeles)(根部的中央导水组织)维管结构的类似红色。 产生红色的物质是天然存在的异羟肟酸盐(氧肟酸盐，hydroxamate)。

[0032] 图4在基线(BL)图中显示唾液(72岁，男性)中arNOX活性的抑制，并显示通过添加由玉米维管体所制匀浆引起的抑制。 玉米鞘(包围维管体的组织)不因铁的添加而上色，也不抑制arNOX活性。

[0033] 图5显示与商品水仙粉末(A)相比，水仙鳞茎甲醇提取物(B)的薄层色谱分析实例。蓝色(UV)背景的平板显示紫外荧光。光背景(BB)的平板被柏林蓝染色。TLC系统是二氯甲烷∶甲醇∶NH4OH(10∶1∶0.2)。在实验室提取的样本中，红色组分——其在上，但与原点的物质明确分开，并且暗示异羟肟酸盐的存在——在实验室提取样本中比商品粉末中明显得多。 这对于甲醇(图5a)和水(图5b)提取物均显而易见。 推定的异羟肟酸盐在商品粉末中也可见，但在远低于实验室提取样本的水平上，再次与arNOX抑制活性的水平相关。

[0034] 图6显示添加氯化铁形成红色铁异羟肟酸盐后，与已知的异羟肟酸盐(SHAM)相比，水仙鳞茎和玉米维管体及鞘提取物的光谱分析。水仙鳞茎的arNOX抑制提取物为红色，并在550nm左右呈现最大吸光度。 没有抑制活性的喇叭水仙(N.pseudo narcissus)鳞茎提取物无色，并在550nm不显示吸光度。 没有添加氯化铁(-FeCl2)时，玉米根维管体(活性)和玉米根鞘(无活性)部分很大程度上未着色。 但是，氯化铁存在(+FeCl2)时，玉米维管体提取物出现红色，在约550nm具有最大吸光度，而玉米鞘在550nm没有最大吸光度。 水杨基异羟肟酸盐(SHAM)，一种市售稳定的异羟肟酸盐，也给出在约550nm具有最大吸光度的红色。 阴性对照未着色，并在550nm不显示吸光度。

[0035] 图7是高铁细胞色素c的arNOX活性图，arNOX活性为SHAM稀释液(log)的函数。该图表明了商业可获得的SHAM制品(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)对唾液(72岁，男性)arNOX活性的剂量依赖型抑制。 在11mg/ml基本完全抑制。

[0036] 图8是高铁细胞色素c的arNOX活性图，arNOX活性为水杨酸稀释液(log)的函数。 该图表明了对唾液(72岁，男性)arNOX活性的剂量依赖型抑制，arNOX活性为水杨酸浓度的函数。 水杨酸在1mg/ml浓度下抑制约50％。

[0037] 图9是高铁细胞色素c的arNOX活性图，arNOX活性为水杨苷稀释液(log)的函数。 该图表明了对唾液(72岁，男性)arNOX活性的剂量依赖型抑制，arNOX活性为水杨苷浓度的函数。 在1mg/ml浓度达到最大arNOX活性抑制。

[0038] 图10a和10b是显示多种“Naractin”组合的arNOX抑制的图。 图10a表明1mg/ml水杨苷存在下4mg/ml五味子(Schizandra)粉末和水仙提取物(20μl)的混合物的arNOX抑制的水杨苷增强作用。 图10b表明1mg/ml水杨苷存在下4mg/ml五味子粉末和1mg/ml水仙粉末的混合物引起的arNOX抑制。 向总量3ml包含唾液(72岁，男性)的检测混合物添加60μl混合物，该唾液作为arNOX活性来源。

[0039] 发明详述

[0040] 本发明涉及用于隔离血清衰老因子的试剂及其应用方法。 更具体地，本发明涉及本文中称为“Naractin”的试剂，表示几种天然存在arNOX抑制剂中其中任意一种，其存在于水仙粉末中或能够增强水仙粉末至匹敌鲜水仙提取物的抑制水平；和涉及应用“Naractins”预防或治疗由NADH氧化酶(arNOX)的衰老相关同种型引起的细胞损伤而造成的疾病和疾病并发症的方法。 在一个示例性实施方式中，本发明的试剂包括至少一种天然存在的Naractin。这种天然存在的naratins也能增强其他天然存在arNOX抑制剂的抗arNOX作用。

[0041] 术语“Naractin”在本文用于表示存在于水仙粉末中(商业上可从例如Xian Aojing Science and Technology Developing CO.，LTD，西安，陕西，中国获得)或能够增强水仙粉末至可匹敌鲜水仙提取物的抑制水平的几种天然存在arNOX抑制剂中的任意一种。 发明人目前已经确认三种已知的具有“Naractin”活性的化学纯物质。 进一步应当注意，虽然本文已将“Naractins”从水仙提取物中鉴别出来，但其可能存在于其他天然来源，如柳树、玉米和燕麦，当然，本发明包括Naractins，不论其来源如何。

[0042] 如本文所用，术语“美容品”指意图用于机体清洁、美化、提高魅力或改变外观的物质。

[0043] 如本文所用，术语“提取物”指通过在溶剂中浸渍或浸泡物质并除去活性成分所得到的溶液。溶剂可以是任何适当的溶剂，包括但不限于醇、水或类似物。在一些实例中，提取物可浓缩或溶剂可蒸发，并且活性成分可悬浮或溶解在不同的溶剂中。 如本文所述，通过从鳞茎分离茎区并在3ml蒸馏水中均质化一个茎区来制成水仙提取物。

[0044] 如本文所用，术语“疾病”指活动物或植物机体或其一部分正常机能削弱的任何状态，包括任何疾病(ailment，disease，illness)、临床状态、病理状态、变弱状态、不健全状态和任何异常或不期望的生理状态。

[0045] 如本文所用，术语“活性氧物质”指来自氧代谢或自由电子转移的氧衍生物，导致自由基的形成(如过氧化物或羟基自由基)。

[0046] 如本文所用，术语“抗氧化剂”指消除活性氧物质的活性或抑制由所述活性物引起的细胞损伤的化合物。

[0047] 如本文所用，术语“药学可接受的载体”指这样的载体介质：其不阻碍活性成分的生物活性效力，具有化学惰性，并且对将其给药的患者无毒性。

[0048] 如本文所用，术语“药学可接受的衍生物”指与本申请所述制剂相应的任何同系物、类似物或片段，其呈抗氧化活性，并且对被试者相对无毒性。

[0049] 术语“治疗剂”指任何辅助预防或治疗由活性氧物质引起的疾病或疾病并发症的分子、化合物或治疗剂，优选抗氧化剂。

[0050] 术语“隔离arNOX的试剂”指任何这样的分子、化合物或治疗剂：其与arNOX相互作用，从而减少arNOX与其他物质的反应并抑制arNOX产生活性氧物质的能力。

[0051] 本文所用术语“水杨酸盐”指水杨苷的盐、偶联物或衍生物，无论得自天然存在来源或重新合成。 这些水杨酸盐包括，如水杨酸、水杨基异羟肟酸盐和水杨苷本身、其衍生物、盐和偶联物。

[0052] 在其研究期间，发明人发现某些水仙提取物商业制品包含具有抗arNOX活性的活性剂。 通过观察提示本发明，IBR-DORMIN 水仙鳞茎提取物(Israeli Biotechnology Research，Ltd.，以色列)的一些样本实际上对arNOX不具有抑制活性，而该厂商其他多种样本具有强抑制性。 发明人猜测arNOX抑制剂在特定防腐剂缺失下不稳定或arNOX抑制剂在水仙提取物提纯过程已受到损失。应当注意的是，然而商标IBR-Dormin 所售的市售水仙粉末经过特殊加工，水仙鳞茎处于休眠期。 原理是在生长期鳞茎产生大量未确认的化合物，称为“休眠素”。 进一步猜测这种“休眠素”引起细胞或组织的休眠状态。 因此，从本公开的数据显示，水仙“休眠素”不是与本文所确认的“Naractins”相同的试剂。

[0053] 为了检验这些可能性，发明人得到少量纯白(水仙)鳞茎。 水和乙醇提取物抑制arNOX。与很大程度上不具有活性的N.pseudo-narcissus(喇叭水仙)和N.jonquilla(黄水仙)进行对比。 活性与由添加三价铁增强的红色着色——天然存在的异羟肟酸盐的一个特性——有关，该异羟肟酸盐被发现于玉米和燕麦的秧苗(数据未显示)，其也抑制arNOX。 异羟肟酸盐具有这样的化学性质：预期可能有益于arNOX抑制。 评价最易获得的异羟肟酸盐是水杨基异羟肟酸盐(Naractin 1)，也被称为SHAM，已知的植物交替氧化酶抑制剂。 检测SHAM，并发现其增强水仙粉末的arNOX抑制反应。 随着水仙粉末随低水平的SHAM增强，得到高于90％的抑制水平。 虽然水仙鳞茎不足以完成活性组分的表征，但是用水仙粉末(提取物)(Xi’an Aojing Science and Technology Developing Co.，LTD.，西安，陕西，中国；20∶1可获得的鳞茎和花提取物)继续进行研究。 水仙粉末确实呈现含低水平的天然存在的异羟肟酸盐，但在远低于水仙鳞茎所制提取物的水平上。

[0054] 引起的问题是异羟肟酸盐还是水杨酸部分对于arNOX抑制剂的活性最重要。 结果表明二者均重要。 水杨酸(Naractin 2)其本身是非常有效的arNOX抑制剂，当与三价铁反应时，其也呈红色。 水杨酸酯或阿司匹林不抑制arNOX。 检测柳树皮——水杨酸盐的天然来源——的水提取物，也发现其抑制arNOX。 柳树皮的主要水杨酸盐——水杨苷——糖苷，作为抑制剂(Naractin 3)也有效。

[0055] 因此，在一个示例性实施方式中，本发明包括用于改善衰老效应的局部组合物，包含有效量的至少一种arNOX抑制剂。 根据该示例性实施方式，arNOX抑制剂是naractin，naractin有效减少衰老效应。在一些根据本发明的示例性实施方式中，从水仙、柳树、玉米、中横棒、杨树、荚蒾、霉菌特别是曲霉(Aspergillus)、八角枫、桦树、柴胡、秋水仙、大戟、filipendulum、栀子、紫草、烟草或槲寄生中提纯naractin。

[0056] 在不同的其他实施方式中，naractin是水杨酸盐及其衍生物。 在一些示例性实施方式中，水杨酸盐是水杨酸盐是水杨苷、水杨酸、水杨基异羟肟酸盐、其衍生物或组合。 在不同的示例性实施方式中，naractin得自中国八角枫(Alangium chinense)、 三裂八角 枫(A.platanifolium)、日 本八角枫(A.premnifolium)、黑曲霉(Aspergillus niger)、 白桦(Betula alba)、银 柴胡(Bupleurum falcatum)、长春花(Catharanthus roseus)、朝鲜柳(Chosenia bracteosa)、秋水仙(Colchicum autumnale)、中横棒(Crepis foetida)、C.rhoeadifolia、毛叶曼陀罗(Datura inoxia)、澳洲茄(Duboisia myoporoides)、Eleutherococcus setchuensis、Euphorbia salicifolia、Filipendula ulmaria、Foeniculum vulgare、栀子(Gardeniajasminoides)、紫草(Lithospermum erythrorhizon)、红花烟草(Nicotiana tabacum)、银白杨(Populus alba)、香脂杨(P.balsamifera)、山杨(P.davidiana)、美洲黑杨(P.deltoides)、胡杨(P.euphratica)、大齿杨(P.grandidentata)、P.heterophylla、 大 叶杨(P.lasiocarpa)、 辽 杨(P.maximowiczii)、钻 天 杨(P.nigra)、(P.sieboldii)、小叶杨(P.simonii)、青杨(P.tacamahaca)、毛白杨(P.tomentosa)、欧洲山杨(P.tremula)、美洲山杨(P.tremuloides)、毛果杨(P.trichocarpa)、尖叶柳(Salix acutifolia)、白柳(S.alba)、S.americana、北极柳(S.arctica)、耳柳(S.aurita)、垂柳(S.babylonica)、S.basfordiana、欧杞柳(S.caesia)、芸香科美柳(S.calodendron)、圆头柳(S.capitata)、黄花柳(S.caprea)、腺柳(S.chaenomeloides)、灰柳(S.cinerea)、瑞香柳(S.daphnoides)、爆竹柳(S.fragilis)、S.geminata、细柱柳(S.gracilis)、细柱柳(S.gracilistyla)、S.gracilistyloides、S.gymnolepis、戟柳(S.hastata)、矮柳(S.herbacea)、S.incana、 尖 叶 紫 柳 (S.koriyanagi)、S.lapponum、S.lasiandra、S.lasiolepis、 旱柳 (S.matsudana)、S.myrsinifolia、S.nigricans、S.orestera、 五 蕊 柳 (S.pentandra)、S.pentandroides、S.petiolaris、深山柳(S.phylicifolia)、红皮柳(S.purpurea)、匍匐柳(S.repens)、S.rubra、蒿柳(S.schwerinii)、斯考勒氏柳(S.scouleriana)、S.smithiana、准噶尔柳(S.songarica)、S.species、S.stipularis、四子柳(S.tetrasperma)、S.tremuloides、三蕊柳(S.triandra)、蒿柳(S.viminalis)、Toisusu urbaniana、巴东荚蒾(Viburnum henryi)、樱叶荚蒾(V.prunifolium)、皱叶荚蒾(V.rhytidophyllum)或白果槲寄生(Viscum album)。

[0057] 在不同的其他实施方式中，naractin是水杨酸盐及其衍生物。在一些示例性实施方式中，水杨酸盐是水杨苷、水杨酸、水杨基异羟肟酸盐、其衍生物或组合。

[0058] 在不同的其他实施方式中，组合物进一步包括美容或药学可接受的载体。 在一些示例性实施方式中，naractin抑制剂与得自天然来源的其他arNOX抑制剂共存，该来源包括但不限于花椰菜、香菇、彩叶草、迷迭香、莲花、朝鲜蓟、海玫瑰、柑橘、月见草、虾青素、红桔、五味子、忍冬、荞麦、胡萝卜或橄榄。 在不同的示例性实施方式中，naractin增强附加arNOX抑制剂的作用。

[0059] 本领域技术人员会认识到，可将本文所述的arNOX抑制组合物以任何便捷方式给药。 在一些示例性实施方式中，这些给药形式包括脂质或聚合微球体或纳米球体或囊泡的膏剂、乳液、洗液、凝胶、悬浮液；肥皂、洗发水或防晒剂。 在不同的示例性实施方式中，由本发明改善的衰老效应包括但不限于细纹、皱纹、色素沉着、脱水、失去弹性、血管瘤、干燥、瘙痒、毛细血管扩张、光化性紫癜、脂溢性角化病、缺乏水化、胶原蛋白减少或光化性角化病。 在本发明这些和其他示例性实施方式中，以约5μg/ml至约500μg/ml之间的浓度提供arNOX抑制剂。

[0060] 在还有其他示例性实施方式中，本发明包括抑制由NADH氧化酶衰老相关同种型引起的活性氧物质产生以改善衰老效应的方法，包括：向其所需患者给予治疗有效量的组合物，该组合物包括水杨苷、水杨酸、水杨基异羟肟酸盐中至少一种，由此抑制由NADH氧化酶衰老相关同种型引起的活性氧物质产生，其中衰老效应得到改善。 在不同的示例性实施方式中，本方法进一步包括以下物质中至少一种的提取物或纯化提取物：花椰菜、香菇、彩叶草、迷迭香、莲花、朝鲜蓟、海玫瑰、柑橘、月见草、虾青素、红桔、五味子、忍冬、荞麦、胡萝卜、水仙、橄榄、柳树、燕麦、玉米、中横棒、杨树、荚蒾、霉菌特别是曲霉(Aspergillus)、八角枫、桦树、柴胡、秋水仙、大戟、filipendulum、栀子、紫草、烟草或槲寄生。 在根据本发明所述的不同示例性实施方式中，组合物作为脂质或聚合微球体或纳米球体或囊泡的膏剂、乳液、洗液、凝胶、悬浮液；肥皂、洗发水、配剂或防晒剂施用。 在这些示例性实施方式中，衰老效应包括但不限于细纹、皱纹、色素沉着、脱水、失去弹性、血管瘤、干燥、瘙痒、毛细血管扩张、光化性紫癜、脂溢性角化病、缺乏水化、胶原蛋白减少或光化性角化病。

[0061] 在还有其他示例性实施方式中，本发明包括改善衰老效应的美容方法，包括向皮肤施用美容组合物，该组合物包含：有效量足以抑制arNOX的naractin，其中至少一种arNOX介导的衰老效应受到抑制。 在这些实施方式中，naractin是水杨酸盐及其衍生物。 在不同的示例性实施方式中，水杨酸盐是水杨苷、水杨基异羟肟酸盐或水杨酸。 在根据本发明所述方法的其他不同实施方式中，美容组合物进一步包含植物提取物，包括：胡萝卜提取物、橄榄提取物、花椰菜提取物、香菇提取物、彩叶草提取物、迷迭香提取物、莲花提取物、朝鲜蓟提取物、海玫瑰提取物、柑橘提取物、月见草提取物、红桔提取物、五味子提取物、忍冬提取物、荞麦提取物、柳树提取物、玉米、中横棒、杨树、荚蒾、霉菌特别是曲霉(Aspergillus)、八角枫、桦树、柴胡、秋水仙、大戟、filipendulum、栀子、紫草、烟草、槲寄生、燕麦或水仙提取物。 在这些示例性实施方式中，naractin与美容可接受的载体一起提供。

[0062] 在不同的示例性实施方式中，由根据本发明所述的方法改善的衰老效应包括细纹、皱纹、色素沉着、脱水、失去弹性、血管瘤、干燥、瘙痒、毛细血管扩张、光化性紫癜、脂溢性角化病、缺乏水化、胶原蛋白减少或光化性角化病。

[0063] 在根据本发明所述方法的不同实施方式中，至少一天一次施用naractin。 在一些示例性实施方式中，在美容制品中以约5μg/ml至约500μg/ml之间的浓度提供naractin。 在这些示例性实施方式中，将根据本发明所述的美容组合物以脂质或聚合微球体或纳米球体或囊泡的膏剂、乳液、洗液、配剂、悬浮液；肥皂、洗发水或防晒剂给药。

[0064] 在还有根据本发明的其他实施方式中，本发明包括试剂盒，该试剂盒用于施用对改善衰老效应有用的美容品，该试剂盒包括：至少一种naractin；和使用说明。在一些示例性实施方式中，该试剂盒进一步包括这样的美容制品：适于作为至少一种arNOX抑制植物提取物的载体。

[0065] 本文定义的抗氧化剂、细胞组分和目标蛋白简写如下：

[0066] 线粒体DNA mtDNA

[0067] 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 NADH

[0068] 具有蛋白质二硫键硫醇异构酶活性的

[0069] 细胞表面氢醌(NADH)氧化酶 NOX

[0070] 针对非癌细胞特异的NOX cNOX

[0071] 针对衰老细胞特异的NOX arNOX

[0072] 针对癌细胞特异的NOX tNOX

[0073] 低密度脂蛋白 LDL

[0074] 质膜氧化还原酶链 PMOR

[0075] 泛醌或辅酶Q CoQ

[0076] 辅Q10 CoQ10

[0077] 活性氧物质 ROS

[0078] 本发明

[0079] 本发明涉及从水仙鳞茎和玉米中鉴定和提纯的天然存在试剂，并可内部或局部给药。 这些药剂特异性地抑制arNOX并改善一些其衰老相关效应。 这些试剂可采取分离试剂或植物提取物的形式。进一步，虽然arNOX抑制剂可单独使用，其也可作为包含多种arNOX抑制剂和/或包括对机体具有其他有益作用的化合物的制剂的组合物使用。特别是，发明人发现通过将arNOX抑制剂添加到美容品，抑制剂具有增强正常皮肤护理方案的有益作用。

[0080] 在还有另一个示例性实施方式中，本发明包括改善衰老效应的美容组合物，该组合物包含美容有效量的至少一种arNOX抑制剂，其中arNOX抑制剂有效减少皮肤衰老效应。 在该示例性实施方式的一种形式中，本发明包括美容可接受的载体。 在该实施方式中，载体可包括粉末、润滑剂、洗液、膏剂、液体及类似物。 在一些示例性实施方式中，arNOX抑制剂得自植物。 在特定的示例性实施方式中，植物选自花椰菜、香菇、彩叶草、迷迭香、莲花、朝鲜蓟、海玫瑰、柑橘、月见草、虾青素、红桔、五味子、忍冬、荞麦、胡萝卜、水仙、柳树、玉米、、玉米、中横棒、杨树、荚蒾、霉菌特别是曲霉(Aspergillus)、八角枫、桦树、柴胡、秋水仙、大戟、filipendulum、栀子、紫草、烟草、槲寄生、燕麦或橄榄。

[0081] 应当理解的是，可将根据该示例性实施方式所述的美容组合物以任何示例性方式给药。 例如，在一些示例性实施方式中，局部、口服、肠道外或经皮或经直肠施用根据本发明所述的美容组合物。 在一些示例性实施方式中，组合物被配制成脂质或聚合微球体或纳米球体或囊泡的膏剂、乳液、洗液、凝胶、悬浮液；肥皂或洗发水。

[0082] 在还有其他示例性实施方式中，本发明包括改善衰老效应的美容方法，包括向皮肤应用包含有效量arNOX抑制剂的美容组合物，其中至少一种arNOX介导的衰老效应受到抑制。在一些根据本发明的示例性实施方式中，arNOX抑制剂是植物提取物。在其他示例性实施方式中，从植物提取物中提纯arNOX抑制剂。 在根据本发明所述的不同示例性实施方式中，arNOX抑制剂以约5μg/ml至约500μg/ml之间的浓度存在。 在不同的示例性实施方式中，活性剂的浓度以约15至100μg/ml的浓度存在。在一些示例性实施方式中，局部、口服、肠道外、经皮、经直肠或通过任何有效方法施用根据本发明所述的美容组合物。 在一些示例性实施方式中，将组合物配制成脂质或聚合微球体或纳米球体或囊泡的膏剂、乳液、洗液、凝胶、悬浮液；肥皂或洗发水。

[0083] 在还有其他示例性实施方式中，本发明包括试剂盒。 在该实施方式中，试剂盒可包括一定量arNOX抑制剂和使用说明。 在不同的示例性实施方式中，试剂盒可进一步包括美容制品，从而可在使用前将arNOX抑制剂添加到美容制品。

[0084] 应当理解的是，虽然本发明的一些示例性实施方式中应用了一种arNOX抑制剂，但在其他示例性实施方式中，多于一种提取物或arNOX抑制剂共同应用。 进一步，应当理解的是，在本发明不同的示例性实施方式中，可以以多种方式应用或给予一种或多种arNOX抑制剂。 如例如局部给药，以脂质或聚合微球体或纳米球体或囊泡的膏剂、乳液、洗液、凝胶、悬浮液；肥皂、洗发水或防晒剂的方式，和以茶或胶囊的方式或任何其他有效方式。

[0085] 质膜氢醌(NADH)氧化酶(NOX)：

[0086] 质膜NADH氧化酶(NOX)是具有氢醌(NADH)氧化酶和蛋白质二硫化物-硫醇交换活性的独特的细胞表面蛋白质，其通常对激素和生长因子作出反应。命名为tNOX的对激素不敏感且活性的药物反应性形式已被述及，该形式对癌细胞特异。 有NOX蛋白质在某些情况下能产生ROS的证据存在。 例如，应用作为培养细胞中氧化应激来源的紫外线引起过氧化物产生(Morré等，1999，Biofactors 9：179-187)(参见美国专利号
5,605,810，在此引入其全部作为参考)。

[0087] 分离和表征来自水仙的arNOX抑制剂

[0088] 通过观察到某些商业上可获得水仙提取物(商业上可作为IBR-DORMIN ，IBR，Inc，以色列获得)样本通常对arNOX有强抑制性，而其他很大不同但同类型制品样本则没有，促进了引导本发明的系列研究。 发明人假设，arNOX抑制是由于一些物质在特定防腐剂缺失下不稳定，或活性制品的arNOX抑制组分已在提取物提纯过程中从无活性制品损失。 应当注意的是，最近被称为IBR-DORMIN 的产品已被述及，该产品涉及得自植物的抗增殖剂。参见Soudant等的美国专利申请公布号20060160702、申请序列号11/289,156(‘156申请)。 根据‘156申请，在植物中发现抗增殖剂，其能诱导植物器官进入休眠状态(摘要)。 因此，提出称为“休眠素”的抗增殖剂通过减缓细胞增殖来减缓衰老以此发挥作用。 通过制备已进入休眠期的植物提取物获得“休眠素”。 因此，只有休眠植物的提取物可以用作该性质的“休眠素”。

[0089] 由于发明人注意到商业上可获得的水仙鳞茎和花朵粉末的不同水仙提取物(Xian Aojing Science and Technology Developing CO.，LTD，西安，中国)具有不同程度的arNOX抑制作用，因此发明人进行一系列实验以鉴定arNOX抑制物。 为了检验上述可能性，从商业园艺供应商(Brent and Becky’s bulbs，Gloucester，VA)获得了纯白水仙(N.tazetta)的鳞茎。 与很大程度上不具有活性的N.pseudo-narcissus(喇叭水仙)和N.jonquilla(黄水仙)进行对比。 活性与由添加三价铁增强的红色着色——天然存在的异羟肟酸盐的一个特性——有关。 评价最易获得的异羟肟酸盐是水杨基异羟肟酸盐(SHAM)(Naractin 1)。 制备这样的水和乙醇提取物：其抑制arNOX及当结合低活性水仙花朵粉末时增强抑制(如图1a)。 图1b类似1a，显示水仙粉末的增强作用，该水仙粉末得自水提取的鳞茎(Xian Aojing，LTD)并用水杨苷(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)(Naractin 3)增强。与完全没有arNOX抑制活性的Narcissus pseudo-narcissus(喇叭水仙)和Narcissus jonquilla(黄水仙)提取物的类似提取物进行对比。

[0090] 如图2所示，水仙提取物的活性与由添加三价铁增强的红色着色——天然存在的异羟肟酸盐的一个特性——有关，异羟肟酸盐诸如被发现于玉米(图3)和燕麦(未显示)秧苗中的那些，其也抑制arNOX(图4)。 通过薄层色谱分析(图5)，从其铁加合物的光谱研究，从玉米根(图6)维管体(玉米根的中央维管结构，其中异羟肟酸盐相应于图2所示水仙鳞茎的潜在富异羟肟酸盐茎维管结构被浓缩)以及通过与商业上可获得异羟肟酸盐(水杨基异羟肟酸盐(SHAM)，商业上可获自如Sigma-Aldrich，St Louis，MO.)对比，提供水仙提取物活性组分包含天然存在的异羟肟酸盐的潜力的进一步证据。

[0091] 检测SHAM的arNOX活性抑制，并在浓度1mg/ml下得到高于90％的72岁男性唾液的arNOX活性抑制(图7)。 也发现SHAM增强部分活性水仙粉末的arNOX活性
抑制(图1)。 商业上可获得的水仙粉末确实呈现出含低水平的天然存在的异羟肟酸盐，该异羟肟酸盐可能类似于SHAM，但在远低于从鲜水仙鳞茎制备的提取物中所发现的异羟肟酸盐水平上(图5a和5b)。

[0092] 为了解答稳定水杨基异羟肟酸盐的水杨酸部分是否对arNOX活性抑制重要的问题，将水杨酸(Naractin 2，商业上可获自Sigma-Aldrich，St Louis，Mo.)作为唾液(72岁，男性)arNOX活性的抑制剂进行检测，并发现其抑制arNOX(图8)。 当与三价铁反应时，类似由异羟肟酸盐所呈现的，水杨酸也呈红色。 水杨酸酯和/或阿司匹林不抑制arNOX。 检测柳树皮——水杨酸盐的天然来源——的水提取物，发现其也抑制arNOX。随后也检测了水杨苷(Sigma-Aldrich，St Louis，Mo)(本文指定为Naractin 3)——柳树皮的主要水杨酸盐，并发现其在比SHAM(Naractin 1)或水杨酸(Naractin 2)低10倍的浓度下具有活性(图9)。

[0093] 水杨苷不仅作为单独试剂时具有活性(图9)，其也有增强其他arNOX抑制剂混合物的arNOX抑制的活性，该其他arNOX抑制剂来自如中国五味子粉末和来自水仙粉末的天然来源(图10a和10b)。鉴定并检测的三种化学纯Naractins(用以表示几种天然存在arNOX抑制剂其中任意一种的术语，该天然存在arNOX抑制剂或者存在于水仙粉末或者能增强水仙粉末至匹敌最具活性鲜水仙提取物的抑制水平)中，水杨苷呈现最有希望。进一步，水杨苷稳定、可溶于水、无刺激性且相对便宜。

[0094] 一般地，衰老细胞的特性包括其表达和/或流出arNOX的特性，且包括但不限于呈现一种或多种以下特性：衰老相关的PMOR体系、产生活性氧物质的能力和具有功能缺陷线粒体。 本发明一个实施方式是利用试剂降低衰老细胞的不利影响。

[0095] 衰老皮肤的症状包括干燥、瘙痒、皮肤变薄和增厚、皱纹和细纹、色素沉着区域(称老年斑或肝斑)和斑驳的外观。 已显示衰老皮肤胶原蛋白减少并伴有弹性降低。此外，衰老皮肤具有增加量的裂解胶原蛋白和交联蛋白质。 这些过程中已显示超氧自由基。 受伤时皮肤可能用更长时间愈合。血管更容易透过变薄皮肤可见，也是因为其随年龄扩展。 这些血管可见为皮肤上红色圆顶样结构(樱桃状血管瘤)或脸部上破损毛细血管(毛细血管扩张)。 许多人产生衰老性或光化性紫癜，该紫癜是由皮肤内少量出血产生的皮肤上紫色斑点或斑块。 老年皮肤对太阳损伤具有较少保护作用，因为名为黑色素细胞的保护细胞随年龄减少。 衰老皮肤也更可能产生多种良性和前期癌生长，如脂溢性和光化性角化病。脂溢性角化病通常具有粗糙、棕色外观，并看起来像疣。 它们是良性的。光化性角化病是受到太阳暴晒的皮肤区域上小的鳞片生长。 它们是皮肤癌的早期征兆。

[0096] 本发明包括天然植物提取物的局部给药应用，单独或以膏剂、润滑剂、洗液、凝胶、润滑剂或类似形式，以维持皮肤活力。 本发明的优选实施方式包括向患者皮肤局部给予包含arNOX抑制性提取物的膏剂，以维持和提高皮肤活力。

[0097] 皮肤的美容治疗

[0098] 本发明提供包含活性剂的组合物，该组合物预防和/或改善皮肤损伤和相关状况，尤其是由衰老引起和与arNOX相关的状况。进一步，本发明包括应用所述组合物的方法。 角质层是形成顶面层并当控制湿度和物质进出皮肤流动时起保护皮肤作用的皮肤层。当该屏障功能损坏时，皮肤受到损伤影响，从而进一步促使过早衰老。 这些引起皮肤过早衰老的损伤作用是许多希望保持健康、年轻外观和触感皮肤的个体的顾虑所在。活性氧物质参与多个对细胞潜在致死的破坏性反应。 活性氧物质部分负责有害的细胞相互作用，包括削弱成纤维细胞生成健康胶原蛋白和弹性蛋白的能力。 此外，皮肤通过皮肤疾病、环境伤害(风、空调、集中供热)或通过正常衰老过程(慢性衰老)遭受损害，该正常衰老过程可通过皮肤暴露于太阳(光衰老)而加快。

[0099] 本发明的优选实施方式提供天然存在的植物活性剂，用于治疗对组织，尤其是皮肤的arNOX相关损害。 该活性剂预防和/或改善皮肤损害和相关状况。 在本发明一个实施方式中，加工的植物产物隔绝arNOX活性。 在本发明另一个实施方式中，加工的植物产物抑制活性氧物质。 在另一个实施方式中，本发明的试剂和方法预防和/或改善皮肤健康。 例如，试剂可改善皮肤紧绷、颜色和毛孔表观、弹性、水合和/或有助于减少细纹出现及衰老可见征兆。 在本发明另一个示例性实施方式中，试剂积极影响身体自然产生胶原蛋白和弹性蛋白。 在另一个实施方式中，本发明的试剂使环境刺激如污染、日照、自由基和压力的影响最小化。

[0100] 本发明的一个实施方式提供预防和/或改善皮肤疾病及其影响的组合物及其应用方法。

[0101] 本发明的一个实施方式提供这样的组合物及其应用方法：其预防和降低产生活性氧物质的影响。 例如，本发明包括得自植物的活性剂的应用，以至少部分隔绝或抑制arNOX活性。进一步，本发明考虑其他合成及天然化合物的应用，以隔绝arNOX活性。

[0102] 本发明公开这样的组合物：其治疗皮肤和延缓实际衰老的可见征兆和风化皮肤如皱纹、细纹、松垂、色素沉着和老年斑。 本发明也减少敏感、干燥和/或薄皮肤的表观和状况，以纾缓红色和/或敏感皮肤，并治疗斑点、丘疹、伤疤及其他皮肤瑕疵。

[0103] 本发明提供药物或美容组合物、应用方法和药物或美容试剂盒，用于通过靶向NADH氧化酶(arNOX)的衰老相关同种型治疗由造成衰老的细胞氧化变化引起的疾病，所述同种型通过衰老细胞流入血清。组合物可包含从植物提取的试剂。 例如，本发明的组合物可包含至少一种提取物，所述提取物显示抑制arNOX活性，无论单独或与其他抑制剂一起，并且至少部分抑制或阻碍通过衰老细胞流入血清的NADH氧化酶衰老相关同种型的活性。 组合物可包含：泛醌、天然提取物或由其得到的试剂，该天然提取物已知包含对抑制arNOX有用的活性剂；和其他本领域已知的化合物来制备膏剂、洗液、润滑剂、凝胶及类似物。 这些其他化合物可包括树胶、填料、防腐剂及类似物。

[0104] 一个实施方式中，可将这些成分部分或全部与其他常发现于抗衰老和修复血清制剂中的成分结合。 介质，不同于水或除水外，可包括液体或固体润滑剂、溶剂、保湿剂、增稠剂和粉末。 介质可以是组合物重量的0.1％至99.9％，优选25％至80％，并且可在其他美容添加剂缺失下形成组合物平衡。 在一个实施方式中，按介质重量计，介质至少80％是水。 在另一个实施方式中，按重量计水构成组合物的约50％至85％之间。还有另一个实施方式中，水以组合物重量的约0.1％至55％存在。在其他实施方式中，以上述浓度应用其他介质。

[0105] 很大程度上取决于所用乳化剂的平均亲水-亲脂平衡(HLB)，油或油状物质可以与乳化剂共存，以提供油包水或水包油乳液。

[0106] 本发明的组合物也可包括防晒剂。 防晒剂包含那些常用于阻挡紫外线的物质。示例性化合物是PABA的衍生物、肉桂酸盐和水杨酸盐。 例如，甲氧肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮(也称为氧苯酮)可用。 甲氧肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮分别以商标名Parsol MCX和Benzophenone-3通过商业渠道获得。 乳液中应用的防晒剂的精确量可根据所需的太阳UV辐射防护程度而变化。

[0107] 可将润滑剂进一步引入本发明的美容组合物。 该润滑剂的水平可在总组合物重量的0.5％至50％范围内，优选5％至30％之间。可将润滑剂以一般化学种类分类为酯、脂肪酸和醇、多元醇和烃。

[0108] 酯可以是单酯或二酯。 可接受的脂肪酸二酯实例包括己二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、二异丙基二聚酯(diisopropyl dimerate)和琥珀酸二辛酯。 可接受的支链脂肪酸酯包括2-乙基-己基-豆蔻酸酯、硬脂酸异丙酯和棕榈酸异硬脂酸酯。 可接受的三元酸酯包括三亚油酸三异丙酯和柠檬酸三月桂酯。 可接受的直链脂肪酸酯包括棕榈酸月桂酯、乳酸豆蔻酯和油酸硬脂酸酯。 优选的酯包括椰油辛酸酯/癸酸酯(椰油辛酸酯和椰油癸酸酯的混合物)、丙二醇豆蔻醚醋酸酯(propylene glycol myristyl ether acetate)、己二酸二异丙酯和辛酸鲸蜡酯。

[0109] 适当的脂肪醇和酸包括具有10到20个碳原子的那些化合物。 特别优选的是如鲸蜡基、豆蔻基、棕榈基和硬脂基醇和酸这样的化合物。

[0110] 在这些多元醇中，其可用作润滑剂的为直链和支链烷基多羟基化合物。 例如，优选丙二醇、山梨醇和甘油。聚合多元醇也可用，如聚丙二醇和聚乙二醇。 丁二醇和丙二醇也特别优选作渗透促进剂。

[0111] 可用作润滑剂的示例性烃为具有任何12到30个碳原子烃链的化合物。 具体实例包括矿物油、凡士林、角鲨烯和异链烷烃。

[0112] 本发明组合物的其他实施方式包括增稠剂。增稠剂将通常以组合物重量的0.1％至20％，优选以组合物重量的约0.5％至10％的任意量存在。 示例性增稠剂是交联的聚丙烯酸酯材料，以商标名CARBOPOL 购自B.F.Goodrich Co.。 可以应用树胶，如黄原胶、卡拉胶、凝胶、刺梧桐树胶、果胶和刺槐豆胶。 在某种情况下，可通过也用作硅胶或润滑剂的物质实现增稠功能。例如，超过10厘沲的硅酮胶和诸如硬脂酸甘油酯的酯类具有双功能。

[0113] 可将粉末引入本发明的美容组合物。

[0114] 这些粉末包括白垩、滑石、高岭土、淀粉、蒙皂石粘土、化学改性的硅酸铝镁、有机改性的蒙脱石粘土、水合硅酸铝、热解法二氧化硅、淀粉辛烯基琥珀酸铝及其混合物。

[0115] 也可将其他附加次要组分掺入美容组合物。 这些成分可包括着色剂、遮光剂和香味剂。 这些其他附加次要组分的量可任意地在组合物重量的0.001％至20％范围内。

[0116] 本发明的组合物可用于人类皮肤的局部应用，作为调节、保湿和平滑皮肤，增加弹性(flexibility和elasticity)以及预防或减少皱纹、细纹或衰老皮肤的出现的试剂。 本发明的制剂提供对皮肤色调损失的响应，并助益于有效促进皮肤表面层的水合和坚固，与此同时用抗氧化剂和其他有益成分致力于修复皮肤底层以帮助减少细纹和皱纹出现和恢复可见色调和弹性。 在一些示例性实施方式中，这些抗氧化剂特别针对抑制arNOX。

[0117] 在一个实施方式中，可向皮肤施用少量包含约1至1000ml活性剂的组合物。 在示例性实施方式中，可向皮肤施用一定量包含约1至100ml活性剂的组合物。 该过程可在每天重复几次持续任何一段时间。 优选地，向皮肤早一次和晚一次施用组合物。

[0118] 本发明的局部皮肤护理组合物可配制成洗液、膏剂、凝胶或类似物。 可将组合物装入适当的容器以与其粘度和使用者的意图应用匹配。 例如，可将洗液或膏剂装入瓶或滚动球涂药器，或推进剂驱动的气溶胶装置或装有适于手指操作的泵的容器。 当组合物是膏剂时，其可简单储存在不可变形的瓶或挤压容器中，如管或有盖的罐。 本发明因此也提供含有本文限定的美容可接受组合物的封闭容器。

[0119] 以说明的方式，并非以限制方式提供以下实施例。

[0120] 实施例

[0121] 实施例1

[0122] 水仙提取物的表征

[0123] 为了检验水仙可能具有arNOX抑制剂的假设，从提供商(Brent and Becky’s Bulbs，Gloucester，VA)得 到 纯 白 水仙 (Narcissus tazetta)的 鳞茎。 制 备 抑 制arNOX活性和当结合低活性水仙粉末(Xian Aojing Science and Technology Developing CO.，LTD，Xian，中国)时增强抑制的水和醇提取物。 得自水仙鳞茎的粉末与SHAM(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)的增强作用在图1a中示出。 通过遵循相同的方案，确定naractins增强arNOX抑制的能力，但应用水杨苷(Sigma-Aldrich)和得自花朵的水仙粉末(Xian Aojing Science and Technology Developing CO.，LTD，Xian，中国)以增强arNOX抑制，图1b。 与缺少arNOX抑制活性的Narcissus pseudo-narcissus(喇叭水仙)和Narcissus jonquilla(黄水仙)提取物的类似提取物进行对比。如图2所示，水仙提取物的活性与由添加三价铁增强的红色着色——天然存在的异羟肟酸盐的一个特性——有关，该异羟肟酸盐被发现于玉米(corn(maize))(图3)和燕麦(未显示)秧苗中，同样抑制arNOX(图4)。 通过薄层色谱分析(图5)，及从其铁加合物的光谱研究，以及还从玉米根(图6)维管体(玉米根的中央维管结构，其中异羟肟酸盐被浓缩并相应于图2所示水仙鳞茎的潜在富异羟肟酸盐茎维管结构)以及通过与商业上可获得的异羟肟酸盐(水杨基异羟肟酸盐(SHAM)，Sigma-Aldrich)对比，提供水仙提取物活性组分代表天然存在异羟肟酸盐的潜力的进一步证据。

[0124] 检测SHAM——已知的植物可选氧化酶活性抑制剂——的arNOX活性抑制作用，在浓度1mg/ml下得到高于90％的72岁男性唾液的arNOX活性抑制(图7)。 发现SHAM也增强部分活性水仙粉末arNOX活性的抑制(图1)。 商业上可获得的水仙粉末(IBR-DORMIN ，以色列)确实呈现含低水平的天然存在的异羟肟酸盐，该异羟肟酸盐可能类似于SHAM但在远低于在由鲜水仙鳞茎所制提取物中发现的水平上(图5a和5b)。

[0125] 实施例2

[0126] arNOX抑制剂的确定

[0127] 为了解答稳定水杨基异羟肟酸盐的水杨酸部分是否对arNOX活性抑制重要的问题，将水杨酸(Naractin 2)作为72岁男性唾液arNOX活性的抑制剂进行检测，并发现其抑制arNOX活性(图8)。当与三价铁反应时，类似由异羟肟酸盐所呈现的，水杨酸也呈红色。水杨酸酯和/或阿司匹林不抑制arNOX活性。检测柳树皮——水杨酸盐的天然来源——的水提取物，并发现其也抑制arNOX。随后也检测了糖苷水杨苷(Naractin 3)——柳树皮的主要水杨酸盐，并发现其在比SHAM(Naractin 1)或水杨酸(Naractin 2)低10倍的浓度下具有活性(图9)。

[0128] 实施例3

[0129] 产生水杨酸盐的植物的鉴定

[0130] 进行研究以鉴定作为水杨酸盐天然生产者的植物。应用在University of Illinois in Chicago由Norman Farnsworth教授创建的Natural Products数据库(在napralert.org可用)进行研究。 研究鉴定了下列在不同的鉴定组织产生水杨酸盐的植物：A.chinense(八角枫科(alangiaceae))中国干叶片、A.chinense(八角枫科)日本干叶(cult)、A.platanifolium(八角枫科)法国干叶片、A.platanifolium var.platanifolium(八角枫科)日本干叶片、A.platanifolium var.trilobum(八角枫科)日本干叶片、A.platanifolium var.trilobum(八角枫科)日本干叶片、A.premnifolium(八角枫科)日本叶片、A.premnifolium(八角枫科)日本干茎、黑曲霉(Aspergillus niger)(丝孢纲(hyphomycetes))韩国培养物滤液、betula alba(桦木科(betulaceae))德国干树皮、Bupleurum falcatum(伞形科(apiaceae))日本秧苗悬浮培养物、Catharanthus roseus(夹竹桃科(apocynaceae))日本叶片的悬浮培养物、Chosenia bracteosa(杨柳科(salicaceae))日本干树皮、Colchicum autumnale(百合科(liliaceae))日本鲜球茎、Crepis foetida(菊科(asteraceae))波兰干根、Crepis rhoeadifolia(菊科)波兰干根(cult)、Datura inoxia(茄科(solanaceae))日本花粉囊悬浮培养物、D.inoxia(茄科)日本根悬浮培养物、Duboisia myoporoides(茄科)日本叶片悬浮培养物、Eleutherococcus setchuensis(五加科(araliaceae))中国干茎、Euphorbia salicifolia(大戟科)匈牙利鲜植物整株、Filipendula ulmaria(蔷薇科(rosaceae))欧洲干气生部分、F.ulmaria(蔷薇科)干植物整株、F.ulmaria(蔷薇科)瑞士干植物整株、F.ulmaria(蔷薇科)USSR干花、Foeniculum vulgare(伞形科)中国果实商品样本、Gardenia jasminoides(茜草科)日本叶片悬浮培养物、Lithospermum erythrorhizon(紫草科)日本秧苗悬浮培养物、Nicotiana tabacum(茄科)日本根悬浮培养物、P.alba(杨柳科)USA干树皮、P.balsamifera(杨柳科)USA-WI干树皮、P.balsamifera(杨柳科)USA-WI鲜树皮、P.balsamifera(杨柳科)USA-WI干树皮+细枝、P.balsamifera(杨柳科)法国干芽、P.balsamifera(杨柳科)USA-AK冻干叶片、P.balsamifera(杨柳科)USA-WI鲜叶片、P.balsamifera(杨柳科)芬兰烘干叶片(cult)、P.balsamifera(杨柳科)USA-WI干树干皮、P.davidiana(杨柳科)中国干树皮、P.davidiana(杨柳科)韩国干茎皮、P.deltoides(杨柳科)USA-WI干树皮、P.deltoides(杨柳科)USA-WI鲜树皮、P.deltoides(杨柳科)USA-WI鲜叶片、P.deltoides var.deltoides(杨柳科)加拿大干树皮(cult)、P.deltoides var.occidentalis(杨柳科)加拿大干树皮(cult)、P.euphratica(杨柳科)中国干树皮、P.euphratica(杨柳科)土耳其干芽、P.grandidentata(杨柳科)USA-WI干树皮、P.grandidentata(杨柳科)USA-WI干叶片、P.heterophylla(杨柳科)USA-WI干树皮、P.lasiocarpa(杨柳科)英格兰干芽、P.maximowiczii(杨柳科)日本干树皮、P.nigra(杨柳科)德国鲜树皮、P.nigra(杨柳科)英格兰干叶片(cult)、P.nigra(杨柳科)德国干叶片、P.sieboldii(杨柳科)日本干芽、P.simonii(杨柳科)中国干树皮、P.tacamahaca(杨柳科)USA-WI干树皮、P.tomentosa(杨柳科)中国干树皮、P.tomentosa(杨柳科)中国植物整株、P.tomentosa(杨柳科)中国干叶片、P.tremula(杨柳科)德国干树皮、P.tremula(杨柳科)瑞士干叶片、P.tremula(杨柳科)芬兰烘干叶片、P.tremula(杨柳科)法国真菌感染茎皮、P.tremula(杨柳科)芬兰干枝、P.tremuloides(杨柳科)USA干树皮、P.tremuloides(杨柳科)USA-WI干树皮、P.tremuloides(杨柳科)年轻植物整株、P.tremuloides(杨柳科)USA-AK冻干节间、P.tremuloides(杨柳科)USA-WI干叶片、P.tremuloides三倍体(杨柳科)USA-WI鲜叶片、P.tremuloides三倍体型(杨柳科)USA-WI干树皮、P.trichocarpa(杨柳科)USA-WA干树皮、P.trichocarpa(杨柳科)USA-WI干树皮、P.trichocarpa(杨柳科)USA-WI鲜叶片、P.trichocarpa x P.deltoides(杨柳科)比利时鲜叶片(cult)、S.acutifolia(杨柳科)俄罗斯干树皮、S.alba(杨柳科)干树皮、S.alba(杨柳科)法国干树皮、S.alba(杨柳科)德国干树皮、S.alba(杨柳科)USA干树皮、S.alba(杨柳科)USA-AR干树皮、
S.alba(杨柳科)USA-UT干树皮、S.alba(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.alba(杨柳科)芬兰烘干叶片(cult)、S.alba cv.cardinalis(杨柳科)英格兰干叶片、S.alba雌性(杨柳科)德国干树皮、S.alba雄性(杨柳科)德国干树皮、S.alba x s.babylonica(s.sepula(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.alba x s.fragilis(s.russellia(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.alba x s.pentadra(s.ehrhardt(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.alba x S.babylonica(杨柳科)USSR植物整株、S.americana(杨柳科)英格兰干叶片、S.arctica(杨柳科)冰岛干叶片、S.aurita(杨柳科)德国干树皮、S.aurita(杨柳科)芬兰烘干叶片、S.aurita雌性(杨柳科)德国干树皮、S.babylonica(杨柳科)印度干叶片、S.babylonica(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.babylonica cv.fardon weeping(杨柳科)英格兰干叶片、S.babylonica x s.fragills(s.blanda)(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.basfordiana(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.basfordiana(杨柳科)冰冻叶片、S.caesia(杨柳科)法国鲜枝、S.caesia(杨柳科)法国鲜叶片、S.caesia(杨柳科)法国鲜茎、S.calodendron(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.calodendron(杨柳科)冰冻叶片、S.capitata(杨柳科)中国干叶片、S.caprea(杨柳科)芬兰干树皮、S.caprea(杨柳科)德国干树皮、S.caprea(杨柳科)墨西哥干树皮、S.caprea(杨柳科)墨西哥干叶片、S.caprea(杨柳科)USSR干叶片、S.caprea(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.caprea(杨柳科)芬兰烘干叶片、S.caprea雌性(杨柳科)德国干树皮、S.caprea雄性(杨柳科)德国干树皮、S.caprea var.lanata(杨柳科)英格兰干叶片、S.caprea x s.lanata(s.balfourii)(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.caprea x s.viminalis(s.serican(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.chaenomeloides(杨柳科)日本干叶片、S.cinerea(杨柳科)德国干树皮、S.cinerea(杨柳科)瑞士干树皮、S.cinerea(杨柳科)芬兰烘干花、S.cinerea(杨柳科)英格兰干叶片、S.cinerea(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.cinerea雌性(杨柳科)德国干树皮、S.cinerea雄性(杨柳科)德国干树皮、S.daphnoides(杨柳科)干树皮、S.daphnoides(杨柳科)瑞士干树皮、S.daphnoides(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.daphnoides(杨柳科)冰冻叶片、S.daphnoides克隆1(杨柳科)芬兰干枝、S.daphnoides克隆2(杨柳科)芬兰干枝、S.daphnoides ssp.cordaph(杨柳科)马德拉干树皮、S.daphnoides var.acutifolia(杨柳科)英格兰干叶片、S.fragilis(杨柳科)德国干树皮、S.fragilis(杨柳科)英格兰干叶片、S.fragilis(杨柳科)德国干叶片、S.fragilis(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.fragilis(杨柳科)冰冻叶片、S.fragilis(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.fragilis(杨柳科)芬兰烘干叶片(cult)、S.fragilis(杨柳科)芬兰干枝、S.fragilis雄性(杨柳科)德国干树皮、S.fragilis雄性(杨柳科)德国干叶片、S.fragilis var.latifolia(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.fragilis var.latifolia(杨柳科)冰冻叶片、S.fragilis x s.pentandra(s.meyeran(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.fragilis x s.triandra(s.decipien(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.geminata杂种(杨柳科)英格兰干叶片、S.geminata杂种(s.cinerea x s.vi(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.gracilis var.textoris(杨柳科)加拿大烘干树皮、S.gracilistyla(杨柳科)日本干树皮、S.gracilistyla(杨柳科)日本干叶片、S.gracilistyloides(杨柳科)日本干树皮、S.gymnolepis(杨柳科)日本干树皮、S.hastata(杨柳科)瑞士干树皮、S.herbacea x s.phylicifolla(s.moore(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.incana(杨柳科)英格兰干叶片、S.koriyanagi(杨柳科)日本干树皮、S.lapponum(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.lapponum(杨柳科)芬兰烘干叶片、S.lapponum(杨柳科)芬兰干枝、S.lasiandra(杨柳科)USA-AK冻干叶片+茎、S.lasiolepis(杨柳科)USA-CA干叶片、S.matsudana(杨柳科)中国干叶片、S.myrsinifolia(杨柳科)德国干树皮、S.myrsinifolia(杨柳科)芬兰干叶片(cult)、S.myrsinifolia(杨柳科)德国干叶片、S.myrsinifolia(杨柳科)芬兰鲜叶片、S.myrsinifolia(杨柳科)芬兰烘干叶片、S.myrsinifolia(杨柳科)芬兰干茎(cult)、S.myrsinifolia(杨柳科)芬兰鲜茎、S.myrsinifolia(杨柳科)芬兰干枝、S.myrsinifolia雄性(杨柳科)德国干树皮、S.nigricans(杨柳科)英格兰干叶片、S.nigricans(杨柳科)瑞士干叶片、S.nigricans(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.nigricans(杨柳科)冰冻叶片、S.orestera(杨柳科)USA-CA干叶片、S.pentandra(杨柳科)德国干树皮、S.pentandra(杨柳科)USA叶片、S.pentandra(杨柳科)德国干叶片、S.pentandra(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.pentandra(杨柳科)冰冻叶片、S.pentandra(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.pentandra(杨柳科)芬兰烘干叶片、S.pentandra(杨柳科)芬兰干枝、S.pentandra cv.lumley(杨柳科)英格兰干叶片、S.pentandra雌性(杨柳科)德国干树皮、S.pentandra x s.fragilis(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.pentandra x s.fragilis(杨柳科)冰冻叶片、S.pentandroides(杨柳科)USSR干叶片、S.pentandroides(杨柳科)USSR鲜根皮、S.petiolaris(杨柳科)加拿大干树皮、S.phylicifolia(杨柳科)英格兰干叶片、S.phylicifolia(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.phylicicolia(杨柳科)芬兰烘干叶片、S.phylicifolia(杨柳科)芬兰干枝、S.phylicifolia x S.myrsinifolia(杨柳科)芬兰烘干叶片、S.purpurea(杨柳科)干树皮、S.purpurea(杨柳科)德国干树皮、S.purpurea(杨柳科)瑞士干树皮、S.purpurea(杨柳科)德国干叶片、S.purpurea(杨柳科)德国干叶片(cult)、S.purpurea(杨柳科)瑞士干叶片、S.purpurea(杨柳科)鲜叶片、S.purpurea(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.purpurea(杨柳科)冰冻叶片、S.purpurea(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.purpurea雌性(杨柳科)德国干树皮、S.purpurea雌性(杨柳科)德国干叶片、S.purpurea雄性(杨柳科)德国干树皮、S.purpurea var.goldstones(杨柳科)英格兰干叶片、S.purpurea xs.triandra(s.leiophyl(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.repens(杨柳科)法国干树皮、S.repens(杨柳科)德国干树皮、S.repens(杨柳科)德国干叶片、S.repens(杨柳科)英格兰鲜叶片、S.repens(杨柳科)冰冻叶片、S.repens雌性(杨柳科)德国干树皮、S.repens雄性(杨柳科)德国干树皮、S.rubra杂种(杨柳科)英格兰干叶片、S.rubra杂种(s.purpurea x vimi(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.schwerinii(杨柳科)USSR干树皮、S.scouleriana(杨柳科)USA-UT干树皮、S.smithiana(杨柳科)英格兰干叶片、S.songarica(杨柳科)USSR叶片、S.songarica(杨柳科)USSR干叶片、S.species(杨柳科)瑞士干植物整株、S.species(杨柳科)法国干茎皮、S.stipularis杂种(s.viminalis x un(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.tetrasperma(杨柳科)泰国干根、S.tetrasperma(杨柳科)泰国干茎皮、S.tremuloides(杨柳科)USA干树皮、S.triandra(杨柳科)德国干树皮、S.triandra(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.triandra cv.black maul(杨柳科)英格兰干叶片、S.triandra雌性(杨柳科)德国干树皮、S.triandra雄性(杨柳科)德国干树皮、S.triandra x.s.viminalls(s.hippopha(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.viminalis(杨柳科)德国干树皮、S.viminalis(杨柳科)英格兰干叶片、S.viminalis(杨柳科)英格兰烘干叶片、S.viminalis(杨柳科)芬兰烘干叶片(cult)、S.viminalis(杨柳科)芬兰干枝(cult)、S.viminalis cv.aquatica(杨柳科)芬兰烘干枝(cult)、S.viminalis雌性(杨柳科)德国干树皮、Toisusu urbaniana(杨柳科)日本干树皮、Viburnum henryi (caprifoliaceae)叶片、Viburnum prunifolium(caprifoliaceae)USA根皮、Viburnum rhytidophyllum(caprifoliaceae)埃及干花、Viscum album e/S.alba(loranthaceae)法国叶茎。

[0131] 实施例4

[0132] arNOX抑制剂的增强作用

[0133] 水杨苷不仅作为单一试剂具有活性(图9)，其也具有这样的活性：增强来自诸如五味子粉末和水仙粉末的天然来源的其他arNOX抑制剂混合物的arNOX抑制作用(图10a和10b)。如图10a所示，显示4mg/ml五味子粉末加水仙提取物(20μl)和附加1mg/ml水杨苷的混合物的arNOX抑制作用。 图1b表示在1mg/ml水杨苷存在下，4mg/ml五味子粉末加1mg/ml水仙粉末的混合物的arNOX抑制作用。 经鉴定并检测的三种化学纯“Naractins”(用于表示几种天然存在arNOX抑制剂其中任意一种的术语，该天然存在arNOX抑制剂存在于水仙粉末或能增强水仙粉末至匹敌最具活性鲜水仙提取物的抑制水平)中，水杨苷呈现出最有希望的。 水杨苷稳定、可溶于水、无刺激性、相对便宜并且可从多个商品提供商，如Sigma-Aldrich，St.Louis，Mo.获得。 进一步，图1a和1b清楚显示低活性水仙粉末的增强，其中SHAM和水杨苷都显著降低arNOX活性。

[0134] 实施例5

[0135] arNOX的表征

[0136] 由暗黄覆盖层(Buffy coat)引起的过氧化物产生：暗黄覆盖层，淋巴细胞和血小板的混合物。 该暗黄覆盖层商业上可获自，例如Rockland ImmunoChemicals7
(Gilbertsville，PA)。收集和分析前将血液样本保持在4℃。将Ca.10 细胞添加到各试验中。 应用血细胞计数器测定细胞数量。

[0137] 应用由过氧化物引起的高铁细胞色素c的减少作为过氧化物形成的测量标准(Mayo，L.A和Cumutte，J.(1990)Meth.Enzyme.186，567-575.7.Butler，J，Koppenol，W.H.和Margollash，E.(1982)J.Biol.Chem.257，10747)。当与过氧化物歧化酶抑制偶联以测量过氧化物生成时，这是广泛被接受的方法。该试验由PBSG缓冲液(8.06g NaCl、0.2g KCl、0.18g Na2HPO4、0.26g KH2PO4、0.13g CaCl2、0.1g MgCl2、1.35g葡萄糖溶于1000ml去离子水，调节至pH7.4，过滤并于4℃保存)中150μl血清或40μl暗黄覆盖层组成。应用SLM Aminco DW-2000分光光度计(Milton Roy，Rochester，NY，USA)在双波长操作模式下测定速率，每1.5分钟连续检测1分钟。 45分钟后，添加检测化合物，并且反-1
应持续45分钟。 45分钟后，应用毫摩尔消光系数19.1cm 检测减少的高铁细胞色素c。
表1提供了检测化合物的结果。 除非另有所示，提取物均由该化合物制成。

[0138] 表1提供一些arNOX抑制实验的结果。

[0139] 表1

[0140]

[0141] 实施例6

[0142] 局部美容制品

[0143] 就其相对于两种(2)载体对照的效力和耐受性，进行八周裂面受控临床应用研究以筛选四种(4)原型抗衰老制剂，该制剂包含具有arNOX抑制特性的植物提取物。 通过临床分级、生物设备测量(色度仪(Chroma Meter)、表皮含水量检测
仪(Corneometer)、皮肤弹性检测仪(Cutometer))和自我评估调查(Self-Assessment Questionnaires)评价效力。 通过刺激分级和监测不良事件评价耐受性。

[0144] 共23个被试者完成参与研究。眼周区域具有轻微到中等细纹和粗纹以及面部右侧和左侧具有色素沉着的被试者有资格参与研究。 根据随机设计，将被试者分配到两种下列检测物质(一种是对照，一种是检测物质)：

[0145] 对照：

[0146] A.arNOX对照凝胶A(无标签)，AB-87-04A，无色、透明凝胶(12个被试者)[0147] B.arNOX对照凝胶B(红标签)，JZ-91-40，无色、透明凝胶(含甘油)(11个被试者)

[0148] 检测物质：

[0149] 1.arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(未封装)，水仙提取物和水杨苷(绿标签)，JZ 91-39，粉红色、透明凝胶(6个被试者)

[0150] 2.arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(蓝标签)，TL-90-59，无色、透明凝胶(6个被试者)

[0151] 3.arNOX对照凝胶B w/五味子(Schizanda)(未封装)，水仙提取物和水杨苷(黄标签)，TL-90-58(含甘油)，粉红色、透明凝胶(6个被试者)

[0152] 4.arNOX对照凝胶B w/水杨苷(一半黄标签、一半黑标签)，KK-89-49，无色、透明凝胶(含甘油)(5个被试者)

[0153] 指示被试者每天两次(早和晚)在清洁其面部后施用分配的检测物质到面部右侧或左侧，并施用分配的对照到面部对侧。

[0154] 在基线(观察1)、第4周(观察2)和第8周(观察3)进行临床评价。 被试者在每次观察时参与下列临床分级和设备程序(除非另有所示)。

[0155] 效力/性能参数

[0156] 就下列参数将被试者在面部右侧和左侧进行临床分级：细纹(眼周)、粗纹(眼周)、皮肤纹理(面颊)、整体变色、亮度(面颊)、皮肤透明度、毛孔大小(前额和鼻子区域)、毛孔分布/结构和整体皮肤辐射(光泽)。

[0157] 刺激/安全参数分级

[0158] 就客观刺激参数(红斑、水肿、脱屑)和主观刺激参数(灼烧、针刺、瘙痒、憋闷、麻刺)将被试者在面部右侧和左侧进行临床分级。

[0159] 皮肤表面水合测量

[0160] 应用表皮含水量检测仪Corneometer CM 825(Courage+Khazaka，德国)含水分析器进行皮肤表面含水测量。在左颊和右颊较低中心进行测量(三次)，以定量角质层水分含量。

[0161] 皮肤亮度测量

[0162] 应用色度仪Chroma Meter CR400(Konica-Minolta，日本)皮肤亮度分析器进行皮肤亮度测量三次，并且在面部右侧和左侧的色素性病变(由研究者选择)上进行皮肤亮度测量以通过设备评价皮肤颜色/色调的变化。 在面部一侧无色素(正常)区域进行另外的皮肤亮度测量。

[0163] 皮肤粘弹性测量

[0164] 应用皮肤弹性检测仪Cutometer SEM 575(Courage+Khazaka，德国)粘弹性计进行单独的皮肤粘弹性测量。 在各被试者右颊和左颊的中心进行测量，以评价皮肤的粘弹性。

[0165] 调查

[0166] 被试者在第4周和第8周完成下列调查。

[0167] 研究开始后关于皮肤状况参数变化的被试者皮肤变化评价(Subject Skin Change Evaluation)调查

[0168] 关于皮肤状况参数的当前情况以及检测物质属性和耐受性的被试者评价调查(Subject Evaluation Questionnaire)

[0169] 总体上，本研究结果显示与基线分数相比时，所有检测物质和对照在细纹表观、触觉粗糙度、皮肤色调和整体变色/色素沉着上均产生显著改善；检测物质1——arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(绿标签)JZ-91-39和检测物质3——arNOX对照凝胶B w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(黄标签)TL-90-58(含甘油)改善粗纹表观。检测物质或对照任何一种的客观或主观刺激没有明显增加。

[0170] 皮肤亮度测量表明仅检测物质1，arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(未*封装)、水仙提取物和水杨苷(绿)JZ-91-39的b 值在无色素位置于第8周产生明显减*
少。 在色素性病变位置所取的皮肤亮度b 值表示检测物质1——arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(绿)JZ-91-39在减少病变暗沉上优于检测物质2——arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(蓝)TL-90-59和检测物质
3——arNOX对照凝胶B w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(黄)TL90-58(含甘油)。 皮肤表面水合测量显示，所有检测物质和对照在第4周显著改善皮肤水合。 粘弹性测量未显示检测物质和对照之间任何有意义的差异。

[0171] 知情同意书

[0172] 在研究登记前从各被试者获得符合21 CFR 50.25(Federal Regulations的编码)的书面知情同意书。 参与本研究的各被试者签署的知情同意书原件会被保留在研究文件中。 各被试者收到已签署的同意书复本。 (请参见附录IV样本表格)

[0173] 损耗

[0174] 二十三(23)个被试者完成本研究。 二十六(26)个被试者登记参与本研究，三个(3)被试者由于下列原因退出参与本研究：

[0175] ·自愿退出/不良事件：被试者021

[0176] ·不能参加预定调查：被试者004和026

[0177] ·自愿退出/行程冲突：020、022、029

[0178] ·不能参加预定调查：009、034

[0179] ·研究者决定：010

[0180] 被试者人口统计

[0181] 二十三(23)个女性被试者完成本研究。 表2提供所有被试者人口统计信息(年龄、种族和Fitzpatrick皮肤分类)的总结。对于种族和Fitzpatrick皮肤类型，列出了各类被试者的数量，括号中为被试者人数的百分率。 种族信息从各被试者的资格和健康调查(Eligibility and Health Questionnaire)中获得。

[0182] 表2：人口统计信息总结

[0183]

[0184] Fitzpatrick皮肤分类基于皮肤在冬季无太阳暴晒后对前30-45分钟太阳暴晒的无保护反应。 皮肤类型的种类如下：

[0185] 类型I.始终易灼烧；从不晒黑(tan)；

[0186] 类型II.始终易灼烧；最低程度晒黑；

[0187] 类型III.中等灼烧；逐渐晒黑；

[0188] 类型IV.最低程度灼烧；始终充分晒黑

[0189] 类型V.几乎不灼烧；完全晒黑；

[0190] 类型VI.从不晒黑；深度形成色素；

[0191] Fitzpatrick报道了可选的分类系统，其用于评价口周和眼眶(眼周)皱纹(角膜皱缩)的程度：

[0192] I级-细纹；

[0193] II级-细纹到中等深纹和中等数量的纹线；

[0194] III级-细纹到深(粗)纹，大量纹线及可能存在多皱褶

[0195] 实施例7

[0196] 程序和方法

[0197] 研究开始前，预期被试者参与三天洗脱期，在期间没有向面部施用面部保湿剂。

[0198] 在基线(观察1)，预期的被试者在抵达诊所至少30分钟前清洗其面部，并清除所有化妆用品。预期的被试者带来其常规皮肤护理方法产品以进行资格考虑。 被试者完成资格和健康调查，并签署知情同意书，机密协议(Confidentiality Agreement)和摄影发布表格(Photography Release Form)。

[0199] 被试者参与下列临床分级程序：

[0200] 效力/性能参数

[0201] 就下列参数，将被试者在面部右侧和左侧进行临床分级：

[0202] 细纹-眼周区域

[0203] 粗纹-眼周区域

[0204] 皮肤纹理(可见表观)-面颊

[0205] 触觉粗糙度-面颊

[0206] 整体变色

[0207] 整体皮肤光泽

[0208] 应用下列1至10分等级记录效力/性能参数分级的结果：

[0209] 1＝正(1至3＝良好/期望的)

[0210] 10＝负(8至10＝非期望的)

[0211] 如需要，应用半分分数

[0212] 被试者通过具有轻微至中等分数有资格参与继续研究，该分数为眼周细纹3至7；眼周粗纹2至5；和面部右侧和左侧上色素沉着2至7。

[0213] 刺激/安全参数分级

[0214] 就客观刺激参数(红斑、水肿、脱屑)和主观刺激参数(灼烧、针刺、瘙痒、憋闷、麻刺)将被试者在面部右侧和左侧进行临床分级。 应用下列等级记录刺激分级的结果：

[0215] 0＝无

[0216] 1＝轻微

[0217] 2＝中等

[0218] 3＝严重

[0219] 如必要，应用半分

[0220] 有资格的被试者参与下列设备测量：

[0221] 实施例8

[0222] 皮肤表面水合测量

[0223] 应用表皮含水量检测仪Corneometer CM 825(Courage+Khazaka，德国)含水分析器进行皮肤表面含水测量。 测量进行三次并在左颊和右颊的较低中心进行，以定量角质层水分含量。 表皮含水量检测仪Corneometer 的测量原理是基于电介质的电容测量。由皮肤表面含水变化引起的任何介电常数变化改变精密测量电容器的电容。 这些测量可检测到皮肤含水水平最微小的变化，并有极高的重复性。 读数与皮肤电容量成正比，并且测量值随皮肤更加湿润而增加。

[0224] 实施例9

[0225] 皮肤亮度测量

[0226] 应用色度仪Chroma Meter CR400(Konica-Minolta，日本)皮肤亮度分析器进行皮肤亮度测量三次并在面部右侧和左侧的色素性病变(由研究者选择)上进行皮肤亮度测量。 色度仪设备地(并且客观地)评价皮肤颜色/色调的变化。 在面部一侧无色素(正常)区域进行另外的色度仪测量。 色度仪是灵敏的色度计，其允许色差目标颜色的设置和校准。 色度仪具有可分离的头部，以易于并独立分析所选区域。 记录以下值：

[0227] L*：以从黑至白的灰度描述相对明亮度；值随皮肤变得更加明亮和更加光亮而增加

[0228] a*：从红至绿的范围内描述色调；值随皮肤血管生成的改善、血流增加和皮肤色调提高而增加

[0229] b*：从蓝到黄范围内描述色调；值一般随皮肤变得光亮而减小。

[0230] 在各被试者面部一侧无色素(正常)区域进行附加的皮肤亮度测量。

[0231] 实施例10

[0232] 皮肤粘弹性测量

[0233] 应用皮肤弹性检测仪Cutometer SEM 575(Courage+Khazaka，德国)粘弹性计进行单独的粘弹性测量。 在各被试者右颊和左颊的中心进行测量，以评价皮肤的粘弹性。测量原理基于吸力。装置中创造负压，皮肤被吸入探针孔里。 在探针中，通过非接触性光学测量系统测定穿入深度。 光强度由于皮肤的穿入深度而变化。 在设备上在各测量结束时以曲线显示负压吸入皮肤的阻力(坚硬性与其返回其原位的能力(弹性))。 应用
300mbar负压，并通过8毫米(mm)的探针释放。 在吸力的应用和释放期间记录皮肤进出探针的运动，并计算弹性和伸展性。

[0234] 根据随机设计分配给被试者下列检测物质组的其中一种：

[0235] 对照

[0236] A.arNOX对照凝胶A(无标签)——AB-87-04A

[0237] B.arNOX对照凝胶B(红标签)JZ-91-40(含甘油)

[0238] 检测物质

[0239] 1.arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(绿标签)JZ91-39

[0240] 2.arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(蓝标签)TL-90-59

[0241] 3.arNOX对照凝胶B w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(黄标签)TL-90-58(含甘油)

[0242] 4.arNOX对照凝胶B w/水杨苷(一半黄标签、一半黑标签)——KK-89-49(含甘油)

[0243] 根据下列使用说明指示被试者施用分配的检测物质到面部右侧或左侧，并施用分配的对照到面部对侧：

[0244] 每天两次在早晚清洁你的面部后施用薄层。

[0245] 在检测物质施用后可施用保湿剂和化妆品。

[0246] 提供被试者书面使用说明、未来观察日历和记录检测物质施用次数和注释的日记。

[0247] 被试者在第4周(观察2)和第8周(观察3)返回诊所，在每次观察至少30分钟前清洗其面部并清除所有化妆用品。 将日记和检测物质返还诊所，并检查使用适应性；在第4周分发新日记簿(和检测物质，如需要)。根据基线程序，被试者接受临床分级和生物设备测量(色度仪、表皮含水量检测仪和皮肤弹性检测仪)。各被试者也要完成关于检测物质属性、耐受性和面部右侧和左侧皮肤状况改良的被试者皮肤变化评价调查和被试者评价调查。

[0248] 表3提供了各组合物的配料，如下：

[0249]

[0250]

[0251]

[0252]

[0253]

[0254]

[0255]

[0256]

[0257]

[0258] **Noveon IP Holdings Corp.Cleveland，Ohio，U.S.

[0259] Clariant，Corp.Charlotte，N.C.，U.S.

[0260] Angus Chemical Co.，Buffalo Grove Il，U.S.

[0261] Unigema，New Castle，DE，U.S.

[0262] Symrise Inc.，Teterboro，NJ

[0263] Draco Natural Products，Inc.，San Jose，CA，U.S.A.

[0264] Xuancheng Baicao Plants Industry and Trade CO.，LTD，Anhui，China[0265] 提供给被试者书面使用说明、未来观察日历和记录检测物质应用次数和注释的日记。

[0266] 被试者在第4周(观察2)和第8周(观察3)返回诊所。 被试者在去检测机构进行每次观察前至少30分钟清洗其面部并清除化妆用品。被试者也要将他们的检测物质带到每次观察，以检查使用适应性。 被试者在每次观察时参与下列程序：

[0267] 效力/性能参数分级

[0268] 刺激/安全参数分级

[0269] 皮肤表面含水(表皮含水量检测仪Corneometer )测量

[0270] 皮肤亮度(色度仪Chroma Meter)测量

[0271] 皮肤粘弹性(皮肤弹性检测仪Curtometer )测量

[0272] 被试者也要完成关于检测物质属性、耐受性和面部右侧和左侧皮肤状况参数提高的被试者皮肤变化评价调查和被试者评价调查。

[0273] 每次观察时将日记返还诊所，并在观察2时分发新日记簿。 被试者在完成本研究时向诊所返还检测物质单元。 诊所人员审查日记，并在每次观察时称重检测物质单元以保证适应性。

[0274] 实施例11

[0275] 生物统计和数据管理

[0276] 用p≤0.05显著性水平下的配对t-检验(t-test)将第4周(观察2)和第8周(观察3)临床分级和设备测量的平均值与基线(观察1)平均值在统计学上对比。 对于所有属性，计算从基线出发的平均百分率变化和改善发生率。 应用方差分析(ANOVA)和配对比较(Fisher′s LSD)在检测物质和对照间进行对比。

[0277] 将被试者在第4周和第8周完成的自我评价调查列表，并进行顶盒(top box)分析。

[0278] 实施例12

[0279] 局部施用数据

[0280] 在基线(观察1)、第4周(观察2)和第8周(观察3)，被试者在面部进行临床分级和生物设备测量(色度仪、表皮含水量检测仪和皮肤弹性检测仪)。表4显示各检测物质和对照的结果。 将第4周和第8周的平均值与基线平均值进行统计学对比，得到显著差异。 括号中列出从基线出发的平均百分率变化。

[0281]

[0282]

[0283] 指与基线相比统计学显著(p≤0.05)减少

[0284] 指与基线相比统计学显著(p≥0.05)增加

[0285] *由于重新安排观察时设备校准错误，被试者010被从第8周皮肤弹性检测仪分析中去除；第8周皮肤弹性检测仪测量n值等于11。

[0286]

[0287] 指与基线相比统计学显著(p≤0.05)减少

[0288] 指与基线相比统计学显著(p≥0.05)增加

[0289]

[0290] 指与基线相比统计学显著(p≤0.05)减少

[0291] 指与基线相比统计学显著(p≥0.05)增加

[0292]

[0293] 指与基线相比统计学显著(p≤0.05)减少

[0294] 指与基线相比统计学显著(p≥0.05)增加

[0295]

[0296] 指与基线相比统计学显著(p≤0.05)减少

[0297] 指与基线相比统计学显著(p≥0.05)增加

[0298]

[0299] 指与基线相比统计学显著(p≤0.05)减少

[0300] 指与基线相比统计学显著(p≥0.05)增加

[0301] 实施例13

[0302] 从基线的平均变化

[0303] 表5提供了临床分级和设备研究从基线平均变化的比较。

[0304] 表5

[0305]

[0306]

[0307] 表5(续)

[0308]

[0309]

[0310] *由于重新安排观察时设备校准错误，被试者010被从第8周皮肤弹性检测仪分析中去除；第8周皮肤弹性检测仪测量n值等于11。

[0311] 实施例14

[0312] 组间比较

[0313] 基于从基线的平均变化，应用方差分析(ANOVA)和配对比较(Fisher′s LSD)在治疗(检测物质和对照)间进行对比。 表6中提供的以下分级说明了实验组间统计学显著(p≤0.05)差异。 以最大至最小提高水平的顺序表现分级情况，无显著差异的参数没有列出。 在各治疗下列出从基线的平均变化。

[0314] 表6

[0315]

[0316] 实施例15

[0317] 设备检测的统计学比较结果

[0318] 被试者被以面部右侧和左侧上细纹(眼周)、粗纹/皮肤皱褶(眼周)、触觉粗糙度(面颊)、皮肤色调、整体变色/色素沉着和整体皮肤光泽进行分级。 与基线相比时，该临床分级结果显示下列显著改善，如表7所示。

[0319]

[0320] 指统计学显著(p≤0.05)减少，与基线相比的改善

[0321] W4＝第4周

[0322] W8＝第8周

[0323] 实施例16

[0324] 刺激/安全性

[0325] 被试者被以面部右侧和左侧上的红斑、水肿、脱屑、灼烧、针刺、瘙痒、憋闷和麻刺进行分级。

[0326] 与基线相比时，临床分级结果显示显著的改善，如表8所示，例如：

[0327]

[0328] 指出与基线相比的统计学显著(p≤0.05)减少——改善

[0329] W4＝第4周

[0330] W8＝第8周

[0331] 实施例17

[0332] 皮肤亮度检测

[0333] 应用皮肤亮度分析器(色度仪Chroma Meter CR400，Konica-Minolta，日本)测量皮肤亮度三次。 对面部右侧和左侧的色素性病变(由研究者选择)进行测量，以经设备评价皮肤颜色/色调的变化。 在面部一侧无色素(正常)区域进行另外的皮肤亮度测量。

[0334] 表9显示皮肤亮度测量的结果，并显示与基线相比时的显著差异，例如：

[0335]

[0336] 指与基线相比的统计学显著(p≤0.05)减少

[0337] 指与基线相比的统计学显著(p≤0.05)增加

[0338] W4＝第4周

[0339] W8＝第8周

[0340] 实施例18

[0341] 皮肤表面含水检测

[0342] 进行皮肤表面含水测量三次(表皮含水量检测仪Corneometer CM 825，Courage+Khazaka，德国)。 在右颊和左颊较低中心进行测量，以定量角质层水分含量。

[0343] 皮肤表面含水测量显示与基线相比时，第4周各治疗保湿作用的显著增加(改善)。 第8周未发现显著差异。

[0344] 实施例19

[0345] 皮肤粘弹性测量

[0346] 应用皮肤弹性检测仪Cutometer MPA 580(Courage+Khazaka，德国)进行单独的皮肤粘弹性测量。 在各被试者右颊和左颊的中心进行测量，以评价皮肤的粘弹性。

[0347] 表10所示的粘弹性测量结果显示与基线相比时的下列显著差异，例如：

[0348]

[0349] 指与基线相比的统计学显著(p≤0.05)减少

[0350] 指与基线相比的统计学显著(p≤0.05)增加

[0351] W4＝第4周

[0352] W8＝第8周

[0353] 实施例20

[0354] 总体结论

[0355] 本试验性研究的结果显示所有检测物质和对照与基线分数相比时，在细纹、触觉粗糙度、皮肤色调和整体变色/色素沉着表观上产生显著改善。 特别注意，检测物质1——arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(绿标签)JZ-91-39和检测物质3——arNOX对照凝胶B w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(黄标签)TL-90-58(含甘油)甚至对粗纹表观具有积极效果，在第4周(检测物质3，黄标签)和第8周(检测物质1，绿标签；和检测物质3，黄标签)呈
显著改善。 任何检测物质或对照在客观或主观刺激上没有显著增加。

[0356] 皮肤亮度测量表明仅检测物质1——arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)*(未封装)、水仙提取物和水杨苷(绿标签)JZ-91-39的b 值在无色素部位于第8周产生*
明显减少。 在色素性病变部位所取的皮肤亮度b 值表明检测物质1——arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(绿标签)JZ-91-39在减少病变暗沉上优于检测物质2——arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(蓝标签)TL-90-59和检测物质3——arNOX对照凝胶B w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(黄标签)TL-90-58(含甘油)。

[0357] 皮肤表面含水测量表明，所有检测物质和对照在第4周显著提高皮肤水合作用。

[0358] 皮肤粘弹性测量没有显示检测物质和对照之间任何有意义的差异。

[0359] 检测物质和对照之间的ANOVA比较表明，检测物质1(arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(绿标签)JZ-91-39)和检测物质
2(arNOX对照凝胶A w/五味子(Schizanda)(蓝标签)TL-90-59)于第4周在改善整体
变色上优于对照A(arNOX对照凝胶A(无标签)AB-87-04A)和对照B(arNOX对照凝胶
B(红标签)JZ-91-40(含甘油))。 进一步，检测物质1和2于第8周优于对照B(arNOX对照凝胶B(红标签)JZ-91-40(含甘油))。 检测物质2(arNOX对照凝胶A w/五味子
(Schizanda)(蓝标签)TL-90-59)、检测物质3(arNOX对照凝胶B w/五味子(Schizanda)(未封装)、水仙提取物和水杨苷(黄标签)TL-90-58(含甘油))和检测物质4(arNOX对照凝胶B w/水杨苷(一半黄标签、一半黑标签)KK-89-49(含甘油))于第8周在改善
表观上优于对照A(arNOX对照凝胶A(无标签)AB-87-04A)和对照B(arNOX对照凝胶
B(红标签)JZ-91-40(含甘油))。