一种透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物及其制备方法与应用
专利汇可以提供一种透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物及其制备方法与应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及透明质酸修饰的 磁性 中空介孔硫化 铜 的药物组合物及其制备方法与应用，可有效解决 生物 相容性 好、磁靶向性强、毒 副作用 小，以提高 肿瘤 治疗 效果的问题，方法是，在中空介孔硫化铜 纳米粒子 与巯基乙胺反应得到的 氨 基化的硫化铜上负载抗肿瘤药物，硫化铜表面静电 吸附 上四 氧 化三 铁 纳米粒，经酰胺键反应在表面修饰上透明质酸，成透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物；所述的四氧化三铁和硫化铜的 质量 含量比为1~8︰1，磁性中空介孔硫化铜的粒径为50~300nm，本发明操作方便，方法稳定可靠，具有生物相容性好、磁靶向性强、毒副作用小等优点，在肿瘤治疗方面可发挥 热疗 、肿瘤诊断、 磁场 缓 控释 药等作用。，下面是一种透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物及其制备方法与应用专利的具体信息内容。
1.一种透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物，其特征在于，在中空介孔硫化铜纳米粒子与巯基乙胺反应得到的氨基化的硫化铜上负载抗肿瘤药物，硫化铜表面静电吸附上四氧化三铁纳米粒，经酰胺键反应在表面修饰上透明质酸，成透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物；所述的四氧化三铁和硫化铜的质量含量比为1~8︰1，磁性中空介孔硫化铜的粒径为50~300nm。
2.权利要求1所述的透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现：
（1）、将0.7-0.8g的CuSO4·5H2O溶解于180-220ml水中，搅拌，加入5-7g聚乙烯吡咯烷酮，反应10~20min，加入1.1-1.3g氢氧化钠，搅拌均匀，再滴加11-13ml水合肼，搅拌
5~10min，加入1.2-1.4ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水12000-15000rpm（即12000-15000r/min）离心5-10min水洗至中性，冷冻干燥48h，得中空介孔硫化铜纳米颗粒；
（2）、将中空介孔硫化铜纳米粒90-110mg超声分散于90-110ml超纯水中，超声
10~30min，搅拌下加入180-220mg巯基乙胺，搅拌24h，12000-15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀加超纯水复溶，再在12000-15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀加超纯水复溶，如此重复2~3遍，直至为中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH2)；
（3）、合成四氧化三铁纳米粒：取0.8-0.9 g FeCl2和2.3-2.4 g FeCl3搅拌下溶解于
35-45ml水中，氮气保护下加热至80℃，缓慢滴加4-6ml氨水，油浴搅拌30min，加入质量浓-1
度0.5g·ml 的柠檬酸1.8-2.2ml，升温至95℃，反应90min，搅拌下冷却至室温，透析除去未反应物质，冷冻干燥，即得水溶性四氧化三铁纳米粒；
（4）、取将步骤（2）得到的氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH2)4.5-5.5mg，分散于pH7-9的磷酸盐缓冲液4.5-5.5ml中，冰浴下超声10~30 min，与含有抗肿瘤药物的磷酸盐缓冲液混合，每3ml磷酸盐缓冲液中含有9g抗肿瘤药物，室温搅拌24h，离心用水洗涤3次，探头超声分散于水中，冷冻干燥即得负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜；
（5）、将负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜分散于18-22ml水中，搅拌下加入四氧化三铁纳米粒，室温搅拌6-48h，12000-15000rpm离心5-10min得沉淀，冷冻干燥，即得负载抗肿瘤药物的磁性中空介孔硫化铜；
（6）、将上述负载药物的磁性中空介孔硫化铜超声分散于18-22ml水中，加入用水溶液的透明质酸180-220mg，搅拌反应6-48h，即成透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物。
3.根据权利要求2所述的透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现：
（1）、将0.75g的CuSO4·5H2O溶解于200ml水中，搅拌，加入6.0g聚乙烯吡咯烷酮，反应10~20min，加入1.2g氢氧化钠，搅拌均匀后，用注射器滴加12ml水合肼，搅拌5~10min，最后加入1.29ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水15000rpm离心5-10min水洗至中性，冷冻干燥
48h，得到中空介孔硫化铜纳米颗粒；
（2）、将中空介孔硫化铜纳米粒100mg探头超声分散于100ml超纯水中，超声10~30min，搅拌条件下加入200mg巯基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，加超纯水复溶，再离心，如此重复2~3遍，直至为中性，冷冻干燥，得到氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH2)；
（3）、合成四氧化三铁纳米粒：取0.86 g FeCl2和2.35 g FeCl3搅拌下溶解于40ml水中，氮气保护下加热至80℃，用注射器缓慢滴加5ml氨水，油浴搅拌30min，之后加入质量浓-1
度0.5g·ml 的柠檬酸2ml，升温至95℃，反应90min，搅拌下冷却至室温，透析除去未反应物质，冷冻干燥，即得水溶性四氧化三铁纳米粒；
（4）、取氨基化中空介孔硫化铜复合物5mg，分散于5ml磷酸盐缓冲液中，冰浴下探头超声10~30 min，与含有抗肿瘤药物的磷酸盐缓冲液混合，每3ml磷酸盐缓冲液中含有9g抗肿瘤药物，室温搅拌24h，15000rpm离心5-10min用水洗涤3次，探头超声分散于水中，冷冻干燥即得负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜；
（5）、将负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜分散于20ml水中，搅拌条件下加入分散于水中的四氧化三铁，室温搅拌24h，离心得沉淀，冷冻干燥，即得负载抗肿瘤药物的磁性中空介孔硫化铜；
（6）、将负载药物的磁性中空介孔硫化铜探头超声分散于20ml水中，加入200mg透明质酸水溶液，搅拌反应24h，即得透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物。
4.权利要求1所述的透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物在制备治疗肿瘤药物注射剂、口服剂或植入给药剂中的应用。
5.权利要求1所述的透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用，将透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物和药学活性或药理活性分子相结合制成纳米载药系统，所述的药学活性或药理活性分子为抗肿瘤药物的阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、羟基喜树碱、米托蒽醌。
6.权利要求1所述的透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物在制备肿瘤光热治疗联合化疗、磁场远距离调控释药、磁共振成像药物中的应用。
一种透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物及
其制备方法与应用
技术领域
背景技术
发明内容
5~10min，加入1.2-1.4ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水12000-15000rpm（即12000-15000r/min）离心5-10min水洗至中性，冷冻干燥48h，得中空介孔硫化铜纳米颗粒；
（2）、将中空介孔硫化铜纳米粒90-110mg超声分散于90-110ml超纯水中，超声
10~30min，搅拌下加入180-220mg巯基乙胺，搅拌24h，12000-15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀加超纯水复溶，再在12000-15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀加超纯水复溶，如此重复2~3遍，直至为中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH2)；
（3）、合成四氧化三铁纳米粒：取0.8-0.9 g FeCl2和2.3-2.4 g FeCl3搅拌下溶解于
35-45ml水中，氮气保护下加热至80℃，缓慢滴加4-6ml氨水，油浴搅拌30min，加入质量浓-1
度0.5g·ml 的柠檬酸1.8-2.2ml，升温至95℃，反应90min，搅拌下冷却至室温，透析除去未反应物质，冷冻干燥，即得水溶性四氧化三铁纳米粒；
（4）、取将步骤（2）得到的氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH2)4.5-5.5mg，分散于pH7-9的磷酸盐缓冲液4.5-5.5ml中，冰浴下超声10~30 min，与含有抗肿瘤药物的磷酸盐缓冲液混合，每3ml磷酸盐缓冲液中含有9g抗肿瘤药物，室温搅拌24h，离心用水洗涤3次，探头超声分散于水中，冷冻干燥即得负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜；
（5）、将负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜分散于18-22ml水中，搅拌下加入四氧化三铁纳米粒，室温搅拌6-48h，12000-15000rpm离心5-10min得沉淀，冷冻干燥，即得负载抗肿瘤药物的磁性中空介孔硫化铜；
（6）、将上述负载药物的磁性中空介孔硫化铜超声分散于18-22ml水中，加入用水溶液的透明质酸180-220mg，搅拌反应6-48h，即成透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物。
具体实施方式
（1）、将0.75g的CuSO4·5H2O溶解于200ml水中，搅拌，加入6.0g聚乙烯吡咯烷酮，反应10~20min，加入1.2g氢氧化钠，搅拌均匀后，用注射器滴加12ml水合肼，搅拌5~10min，最后加入1.29ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水15000rpm离心5-10min水洗至中性，冷冻干燥
48h，得到中空介孔硫化铜纳米颗粒；
（2）、将中空介孔硫化铜纳米粒100mg探头超声分散于100ml超纯水中，超声10~30min，搅拌条件下加入200mg巯基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，加超纯水复溶，再离心，如此重复2~3遍，直至为中性，冷冻干燥，得到氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH2)；
（3）、合成四氧化三铁纳米粒：取0.86 g FeCl2和2.35 g FeCl3搅拌下溶解于40ml水中，氮气保护下加热至80℃，用注射器缓慢滴加5ml氨水，油浴搅拌30min，之后加入质量浓-1
度0.5g·ml 的柠檬酸2ml，升温至95℃，反应90min，搅拌下冷却至室温，透析除去未反应物质，冷冻干燥，即得水溶性四氧化三铁纳米粒；
（4）、取氨基化中空介孔硫化铜复合物5mg，分散于5ml磷酸盐缓冲液中，冰浴下探头超声10~30 min，与含有抗肿瘤药物的磷酸盐缓冲液混合，每3ml磷酸盐缓冲液中含有9g抗肿瘤药物，室温搅拌24h，15000rpm离心5-10min用水洗涤3次，探头超声分散于水中，冷冻干燥即得负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜；
（5）、将负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜分散于20ml水中，搅拌条件下加入分散于水中的四氧化三铁，室温搅拌24h，离心得沉淀，冷冻干燥，即得负载抗肿瘤药物的磁性中空介孔硫化铜；
（6）、将负载药物的磁性中空介孔硫化铜探头超声分散于20ml水中，加入200mg透明质酸水溶液，搅拌反应24h，即得透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物。
（1）、将0.7g的CuSO4·5H2O溶解于180ml水中，搅拌，加入5g聚乙烯吡咯烷酮，反应
10~20min，加入1.1g氢氧化钠，搅拌均匀，再滴加11ml水合肼，搅拌5~10min，加入1.2ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水12000rpm离心10min水洗至中性，冷冻干燥48h，得中空介孔硫化铜纳米颗粒；
（2）、将中空介孔硫化铜纳米粒90mg超声分散于90ml超纯水中，超声10~30min，搅拌下加入180mg巯基乙胺，搅拌24h，12000rpm离心10min得沉淀，沉淀加超纯水复溶，再在
12000rpm离心10min得沉淀，沉淀加超纯水复溶，如此重复2~3遍，直至为中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH2)；
（3）、合成四氧化三铁纳米粒：取0.8 g FeCl2和2.3 g FeCl3搅拌下溶解于35ml水中，-1
氮气保护下加热至80℃，缓慢滴加4-6ml氨水，油浴搅拌30min，加入质量浓度0.5g·ml的柠檬酸1.8ml，升温至95℃，反应90min，搅拌下冷却至室温，透析除去未反应物质，冷冻干燥，即得水溶性四氧化三铁纳米粒；
（4）、取将步骤（2）得到的氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH2)4.5mg，分散于pH7-9的磷酸盐缓冲液4.5ml中，冰浴下超声10~30 min，与含有抗肿瘤药物的磷酸盐缓冲液混合，每3ml磷酸盐缓冲液中含有9g抗肿瘤药物，室温搅拌24h，离心用水洗涤3次，探头超声分散于水中，冷冻干燥即得负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜；
（5）、将负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜分散于18ml水中，搅拌下加入四氧化三铁纳米粒，室温搅拌6-48h，12000rpm离心10min得沉淀，冷冻干燥，即得负载抗肿瘤药物的磁性中空介孔硫化铜；
（6）、将上述负载药物的磁性中空介孔硫化铜超声分散于18ml水中，加入用水溶液的透明质酸180mg，搅拌反应6-48h，即成透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物。
（1）、将0.8g的CuSO4·5H2O溶解于220ml水中，搅拌，加入7g聚乙烯吡咯烷酮，反应
10~20min，加入1.3g氢氧化钠，搅拌均匀，再滴加13ml水合肼，搅拌5~10min，加入1.4ml硫酸铵，搅拌1h，用超纯水13000rpm离心8min水洗至中性，冷冻干燥48h，得中空介孔硫化铜纳米颗粒；
（2）、将中空介孔硫化铜纳米粒110mg超声分散于110ml超纯水中，超声10~30min，搅拌下加入220mg巯基乙胺，搅拌24h，13000rpm离心8min得沉淀，沉淀加超纯水复溶，再在
13000rpm离心8min得沉淀，沉淀加超纯水复溶，如此重复2~3遍，直至为中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物(CuS-NH2)；
（3）、合成四氧化三铁纳米粒：取0.9 g FeCl2和2.4 g FeCl3搅拌下溶解于45ml水中，-1
氮气保护下加热至80℃，缓慢滴加6ml氨水，油浴搅拌30min，加入质量浓度0.5g·ml 的柠檬酸2.2ml，升温至95℃，反应90min，搅拌下冷却至室温，透析除去未反应物质，冷冻干燥，即得水溶性四氧化三铁纳米粒；
（4）、取将步骤（2）得到的氨基化中空介孔硫化铜复合物5.5mg，分散于pH7-9的磷酸盐缓冲液5.5ml中，冰浴下超声10~30 min，与含有抗肿瘤药物的磷酸盐缓冲液混合，每3ml磷酸盐缓冲液中含有9g抗肿瘤药物，室温搅拌24h，离心用水洗涤3次，探头超声分散于水中，冷冻干燥即得负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜；
（5）、将负载抗肿瘤药物的氨基化硫化铜分散于22ml水中，搅拌下加入四氧化三铁纳米粒，室温搅拌6-48h，13000rpm离心8min得沉淀，冷冻干燥，即得负载抗肿瘤药物的磁性中空介孔硫化铜；
（6）、将上述负载药物的磁性中空介孔硫化铜超声分散于22ml水中，加入用水溶液的透明质酸220mg，搅拌反应6-48h，即成透明质酸修饰的磁性中空介孔硫化铜的药物组合物。
配制一系列浓度的负载阿霉素的磁性中空介孔硫化铜溶液，硫化铜浓度分别为：
200ug/ml、100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml、0ug/ml。采用808 nm 近红外激光以
2
2 W/cm 的能量密度进行照射，并于0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5 min分别测量溶液的温度，记录结果显示，制剂浓度为200ug/ml、100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml、
0ug/ml时，5min内温度分别升高了54℃，38.9℃，28.5℃，19.4℃，11.2℃，2.5℃。结果表明，磁性中空介孔硫化铜具有优良的光热转化作用，并且其光热转换效应呈现浓度依赖性。
采用SRB法，选择对数生长期的MCF-7人乳腺癌细胞，调整细胞数为5×10/ml接种于
96孔培养板，每孔100μ1（边缘孔用无菌PBS填充），细胞贴壁生长24h后加药，依次为空白组、CuS-IONP-HA组、DOX组、CuS-IONP-HA /DOX组，药物终浓度设为4μg/ml，并分设激光组
2
（2W/cm，3min，加药4h后照激光）和非激光组，每组设6个复孔。24 h后，每孔加入50μl
4℃预冷的50%三氯乙酸（TCA）固定细胞，固定10min后移入4℃冰箱固定1h，取出弃去固定液，用去离子水洗5遍，甩干，室温自然干燥。室温晾干后，每孔加入SRB染液50μ1，室温避光放置15~30min染色，弃染液，用1%的冰醋酸洗5遍，室温干燥。之后，用150μl非缓冲Tris碱液（10mM，pH=10.5）溶解与细胞蛋白结合的染料，摇床微振荡（37℃，100rpm，10min）后，于酶标仪515 nm波长处测每个小孔的OD值，计算肿瘤细胞生长抑制率(% )= (1-实验组OD值/对照组OD值)×100%，计算得到CuS-IONP-HA组、CuS-IONP-HA -laser组、 DOX组、DOX-laser组、CuS-IONP-HA /DOX组、CuS-IONP-HA /DOX-laser组各组的细胞生长抑制率分别为： 4.9%，25.8%，49.7%，53.3%， 51.2%，77.4%。结果表明，载体CuS-IONP在实验剂量下对细胞无明显毒性，但在近红外光（808nm）照射下有明显的光热效应；在无近红外光照射时制剂组与原料药组的细胞毒性差别不大，而在近红外光照射时CuS-IONP-HA /DOX对肿瘤细胞的抑制作用最强，则是化疗与热疗协同治疗的结果。
3
7天后测量肿瘤体积，取肿瘤体积≥100 mm 且肿瘤体积和体重相似的小鼠，将其随机
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