本发明涉及含有250-1180μm(16-60目)糖球、水溶性聚合物和难 溶的降脂剂的包衣膜和密闭包衣层的微丸(pellets)、含有所述微丸的药 物剂型和制备所述微丸的方法。降脂剂可以给药于患有高脂血症、肥 胖或动脉粥样硬化症的哺乳动物，其中单一的该剂型可以每天给药一 次。

由于所述降脂剂极难溶于水，明显阻碍了降脂剂(如以前公开于 WO-96/13499)的有效的药物组合物的开发。

早期公开于WO-96/13499的降脂剂具有式 其N-氧化物、一种或多种立体化学异构体形式及其药学上可接受的酸 加成盐，

其中A和B一起形成下式的二价基团：

-N=CH-        (a),    -CH=CH-     (d),

-CH=N-        (b),    -C(=O)-CH2-(e),

-CH2-CH2-  (c),    -CH2-C(=O)-(f), 而在式(a)和(b)的二价基团中，氢原子可以被C1-6烷基所替换；在式(c)、 (d)、(e)、(f)的二价基团中，一个或二个氢原子可以被C1-6烷基所替换；

R1为氢、C1-6烷基或卤素；

R2为氢或卤素；

R3为氢；C1-8烷基；C3-6环烷基；或被羟基、氧代、C3-6环烷基 或芳基取代的C1-8烷基；

Het为选自下列的杂环：吡啶；所述吡啶由1个或2个选自C1-6 烷基、羟基、C1-6烷氧基、三卤代甲基、氨基、单或双(C1-6烷基)氨基 或芳基的取代基所取代；嘧啶；所述嘧啶由1个或2个选自C1-6烷基、 羟基、C1-6烷氧基、三卤代甲基、氨基、单或双(C1-6烷基)氨基或芳基 的取代基所取代；四唑；所述四唑由C1-6烷基或芳基所取代；三唑； 所述三唑由1个或2个选自C1-6烷基、羟基、C1-6烷氧基、三卤代甲 基、氨基、单或双(C1-6烷基)氨基的取代基所取代；噻二唑；所述噻二 唑由1或2个选自C1-6烷基、羟基、C1-6烷氧基、三卤代甲基、氨基、 单或双(C1-6烷基)氨基的取代基所取代；由1个或2个选自C1-6烷基、 羟基、C1-6烷氧基、三卤代甲基、氨基、单或双(C1-6烷基)氨基的取代 基所取代的噁二唑；咪唑；由1个或2个选自C1-6烷基、羟基、C1-6 烷氧基、三卤代甲基、氨基、单或双(C1-6烷基)氨基的取代基所取代的 咪唑；噻唑；所述噻唑由1个或2个选自C1-6烷基、羟基、C1-6烷氧 基、三卤代甲基、氨基、单或双(C1-6烷基)氨基的取代基所取代；噁唑； 所述噁唑由1个或2个选自C1-6烷基、羟基、C1-6烷氧基、三卤代甲 基、氨基、单或双(C1-6烷基)氨基的取代基所取代；并且芳基为苯基或 由C1-6烷基或卤素取代的苯基。

式(Ⅰ)化合物及其盐具有非常有限的水溶解性(于pH3[10-3N HCl] 时，＜0.5mg/ml)，当以结晶形式存在时几乎不溶。为了保证式(Ⅰ)化合物 具有足够的生物利用度，可以在增溶剂如环糊精衍生物像2-羟基丙基 -β-环糊精存在下将它们溶于水中。本发明提供了一种选择，它不需要 使用增溶剂但仍然可以提供具有足够生物利用度的剂型。

在前面所定义的式(Ⅰ)化合物中，杂环基团“Het”通过碳原子与 硫原子相连。

在前面定义中所使用的卤素是指氟、氯、溴和碘；C1-6烷基指具 有1-6个碳原子的直链或支链饱和的烃类基团，如甲基、乙基、丙基、 丁基、戊基、己基、1-甲基乙基、2-甲基丙基等；C1-8烷基指C1-6烷 基和其含有7或8个碳原子的较高的同系物，如庚基或辛基及其支链 异构体。C3-6环烷基指具有3-6个碳原子的饱和的环烃基团，如环丙 基、环丁基、环戊基或环己基。

Het可以特别为下式基团： 其中：

R4为氢或C1-6烷基；

R5和R6为氢、C1-6烷基或氨基；

R7为氢或C1-6烷基；

每一个R8独立为氢或C1-6烷基；

每一个R9独立为氢、C1-6烷基、三氟甲基、氨基或羟基；

R10和R11分别独立为氢或C1-6烷基；

R13为氢或C1-6烷基；

R14为氢、C1-6烷基或羟基；

R15为氢或C1-6烷基。

前面所提到的药学上可接受的酸加成盐是指包括式(Ⅰ)化合物能 够形成的具有治疗活性的非毒性酸加成盐形式。通过采用适当的酸处 理碱形式可以方便地获得后者。适当的酸包括，例如，无机酸如氢卤 酸像盐酸或氢溴酸；硫酸；硝酸；磷酸等；或有机酸，例如，乙酸、 丙酸、羟乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富 马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯 磺酸、环己氨磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸等。前面所使用的 术语加成盐也包括式(Ⅰ)化合物及其盐能够形成的溶剂合物。该溶剂合 物为例如水合物、醇化物等。相反地，用碱处理可以将盐形式转化为 游离碱形式。

此前所用的术语“立体化学异构体形式”指式(Ⅰ)化合物可以存在 的所有可能的立体化学形式，所以也包括所有的对映体、对映体混合 物和非对映体混合物。除非特别提及或指明，化合物的化学命名是指 所有可能的立体化学异构体形式的混合物，所述混合物含有基本分子 结构的所有的非对映体和对映体。它同样适用于在此所述的用于制备 式(Ⅰ)终产物的中间体。

式(Ⅰ)化合物的纯对映体形式定义为基本上不含有所述化合物相 同分子结构的其它对映体或非对映体形式。

不对称中心具有R-或S-构型。在此所用术语顺式和反式与化学文 摘命名法相同，指取代基在环上的位置，更具体地说是指在式(Ⅰ)化合 物中取代基在二氧戊环上的位置。在后一种情况下，当建立了顺式或 反式构型时，可以认为二氧戊环2位碳原子上的取代基具有最高优先 次序，并且二氧戊环4位碳原子上的取代基具有最高优先次序(根据 Cahn-Ingold-Prelog序列原则确定取代基的优先次序)。当所述具有最 高优先次序的两个取代基位于环的相同一侧时，则该构型称为顺式， 否则，该构型称为反式。

特别优选其中二氧戊环2位上产生立体异构的碳原子具有S-构型 的式(Ⅰ)化合物。

式(Ⅰ)化合物也可以其互变异构形式存在。例如，被羟基、氨基或 C1-6烷基氨基所取代的杂环如吡啶、嘧啶、三唑、噻二唑、噁二唑、 咪唑、噻唑和噁唑可以其互变异构形式存在。尽管该形式在上式中没 有明确说明但仍然包括在本发明的范围内。

式(Ⅰ)化合物的N-氧化物形式是指包括那些其中一个或多个氮原 子被氧化为所谓的N-氧化物的式(Ⅰ)化合物，尤其其中一个或多个哌嗪 氮被N-氧化的那些N-氧化物。

重要的化合物是那些其中R1为氯或氟尤其是氯的式(Ⅰ)化合物。

更重要的化合物是那些其中R1为C1-6烷基尤其是甲基的式(Ⅰ)化合 物。

其他重要的化合物是那些其中R2为氢、氯或氟优选氢的式(Ⅰ)化合 物。

其它类重要的式(Ⅰ)化合物是那些其中二价基团-A-B-为 -CH=CH-、-N=CH-或-CH=N-，特别为-CH=N-或-N=CH-的化合物。在 所述二价基团中，氢原子可以被C1-6烷基特别是甲基所替换。

一类特殊的化合物包括那些其中R3为C1-8烷基或C3-6环烷基，优 选丁基、戊基或环戊基的化合物。

一类优选的式(Ⅰ)化合物包括那些其中Het为三唑、取代的三唑、 咪唑、取代的咪唑、噻唑或取代的噻唑的化合物。

更优选的式(Ⅰ)化合物为那些重要的或其中Het为2-噻唑基、4- 甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基、4H-1,2,4-三唑-3-基、2-甲基-2H-1,2,4-三唑 -3-基或2H-1,2,4-三唑-3-基的特殊的化合物。

最优选的化合物为顺-4-[4-[4-[4-[[2-(4-氯苯基)-2-[[(4-甲基-4H- 1,2,4-三唑-3-基)硫代]甲基]-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基] 苯基]-2,4-二氢-2-(1-甲基丙基)-3H-1,2,4-三唑-3-酮；更特殊的是表3中 的非对映体(-)-[2S-[2α,4α(s*)]]化合物40，在本文后面将其称为化合 物A；顺-2-[4-[4-[4-[[2-(4-氯苯基)-2-[[(4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫 代]甲基]-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-2,4-二氢-4- (1-甲基丙基)-3H-1,2,4-三唑-3-酮；

顺-2-[4-[4-[4-[[2-(4-氟苯基)-2-[[(4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫代] 甲基]-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-4-环戊基-2,4- 二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮；

顺-2-[4-[4-[4-[[2-(4-氯苯基)-2-[[(4-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫代] 甲基]-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-2,4-二氢-4-戊 基-3H-1,2,4-三唑-3-酮；

顺-4-(1-乙基丙基)-2-[4-[4-[4-[[2-(4-氟苯基)-2-[[(4-甲基-4H-1,2,4- 三唑-3-基)硫代]甲基]-1,3-二氧戊环-4-基]甲氧基]苯基]-1-哌嗪基]苯 基]-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮；其药学上可接受的酸加成盐或立体 化学异构体形式。

考虑到其载脂蛋白B抑制活性和同时伴随的脂质降低活性，本化 合物可用作药物，特别是在治疗患有高脂血症、肥胖或动脉粥样硬化 症的患者的方法中。具体地讲，本化合物可以用于药物的生产，该药 物可以用于治疗由极低密度脂蛋白(VLDL)或低密度脂蛋白(LDL)过量 所导致的疾病，尤其是由与所述VLDL和LDL相关的胆固醇所导致的 疾病。

许多先天性和获得性疾病可以导致高脂血症。它们可以分类为原 发性和继发性高脂血症状态。继发性高脂血症最常见的原因为糖尿 病、酗酒、药物滥用、甲状腺机能减退、慢性肾衰、肾病综合征、胆 汁郁积和食欲过盛。原发性高脂血症为普通血胆甾醇过多、家族混合 型高脂血症、家族型血胆甾醇过多、遗传型(remnant)高脂血症、乳糜 微粒血症综合征、家族型高甘油三酸酯血症。本化合物也可以用于预 防和治疗患有肥胖或动脉粥样硬化症尤其是冠状动脉粥样硬化症的患 者，更通常用于与动脉粥样硬化症有关的疾病如局部缺血性心脏病、 外周血管性疾病、脑血管疾病。本化合物可以使动脉粥样硬化症消退 并阻止动脉粥样硬化症的临床后果，特别是发生率和死亡率。

剂量依赖于所使用的具体的式(Ⅰ)化合物及其制剂、被治疗疾病的 具体情况及其严重程度、患者的年龄、体重和一般身体状况和患者是 否禁食或进食，以及患者可能服用的其他药物，正如本领域技术人员 所熟知的那样。另外，显而易见的是所述有效的日剂量可以根据接受 治疗患者的反应和/或医师给予本发明化合物处方的评价而减少或增 加。所以后面所提到的有效的日剂量范围仅为指导性的。

根据后面所述的实验结果，在高脂血症、肥胖或动脉粥样硬化症 的治疗过程中，技术人员可以确定化合物A的有效的日剂量。通常， 治疗有效剂量的范围为每公斤体重0.01mg-5mg，更优选为每公斤体 重0.1mg-3mg。它能够满足每天一次口服给药单一剂量。所述每天一 次的剂量优选配制成单位剂型，例如，每单位剂型含有25mg-200mg 特别是100-150mg的化合物A。

正如已经提到的，式(Ⅰ)化合物及其盐具有非常有限的水溶解性并 且在结晶形式下几乎不溶。在增溶剂如环糊精衍生物存在下它们可以 溶于水中。然而，除了液体制剂外，我们迫切需要式(Ⅰ)化合物的固体 药物剂型。在药物发展中，具有高药物含量的剂型是另一个期望的目 标，一个单位的该剂型含有活性成分的需要的日剂量而不是二个或多 个这样的单位。理想的，剂型的生物利用度应与患者摄取的食物或禁 食无关从而可以在每天的任何时候给药于患者(或任何哺乳动物)，特 别是它可以给药于在禁食状态中的患者(哺乳动物)。本发明提供了每 天给药一次(o.d)的式(Ⅰ)化合物的固体剂型，它在禁食和进食的志愿者 中具有几乎相同的生物利用度。

在此情况下，应该强调的是降脂剂或其活性代谢物的治疗有效血 浆水平可以轻易维持至少24小时。主要条件是降脂剂一定要达到该血 浆水平。在胃中溶解的降脂剂的吸收本身不是问题。所以，我们不需 要式(Ⅰ)化合物的缓释剂型，速释剂型也是如此。换句话说，以治疗有 效量的降脂剂给药是第一位要考虑的主要问题，从而保证足够量的降 脂剂保留在溶液中足够长的时间以便于使其进入循环，并且它不会转 化为不易于生物可利用的形式，特别是转化为晶体降脂剂(例如，当降 脂剂在水介质中沉淀时产生该形式)。

本发明提供了降脂剂和水溶性聚合物的药用组合物，它可以给予 患有高脂血症、肥胖或动脉粥样硬化症的哺乳动物，尤其人，通过单 一的该剂型可以每日给药一次。在禁食和进食的哺乳动物中的这些剂 型的药物的生物利用度是可相比的。上述剂型含有如下面所详述的治 疗有效量的微丸。

为了获得预期的脂质降低效果，必须维持上述药物治疗有效的血 浆水平。因为药物基本不溶，应该设计有效的制剂以便于药物易于生 物利用。换句话说，所述试剂的治疗有效量给药的主要问题是保证足 够量的试剂保留在溶液中足够长的时间以便于使其进入循环，并且它 不会转化为不易于生物可利用的形式，特别是转化为结晶体药物(例 如，当试剂在水介质中沉淀时产生该形式)。为了该目的，药物最好在 饭中或饭后服用。然而，这样限制了患者根据处方治疗的依从性；例 如，由于疾病、呕吐或由于食道机会致病性感染，有些患者不能正常 进食或不能容易地吞咽药物。所以，我们迫切希望拥有可以在每天的 任何时间对患者给药而不依赖于食物摄取的药物剂型，例如，可以在 禁食状态给药的剂型。

幸运的是，现在已经发现可以较容易生产的、具有良好生物利用 度的降脂剂微丸。可以将如下面所详述的治疗有效量的新微丸填充入 胶囊或压制成片剂。

具体地讲，本发明所涉及的微丸包括(a)置于中间的、圆形或球形 丸芯，(b)水溶性聚合物和降脂剂的包衣膜，和可任选的(c)密闭包衣聚 合物层，其中丸芯直径为约250-约1180μm(16-60目)，优选为约300- 约1000μm(18-50目)，更优选为约355-约850μm(20-45目)，最理想 为约600-约710μm(25-30目)。

通过如在CRC Handbook第64版F-114页中所述的标定的标准实 验筛过筛可以获得此处所述直径的微丸、珠粒或丸芯。标定的标准筛 可以根据目/孔经(μm)分类，DIN 4188(mm)、ASTM E 11-70(No)、 Tyler(目)或BS 410(目)标准值。通过上述说明和要求，可以根据目/ 孔宽(μm)和在ASTM E 11-70标准中的相应的筛号确定颗粒大小。

适合用作本发明微丸丸芯的物质非常多，前提是所述物质是药学 上可接受的并且具有适当的尺寸(约16-60目)和硬度。该类物质的实例 有聚合物如塑料树脂；无机物如硅石、玻璃、羟基磷灰石盐(氯化钠或 氯化钾、碳酸钙或碳酸镁)等；有机物如活性炭、酸(柠檬酸、富马酸、 酒石酸、抗坏血酸等)和糖及其衍生物。特别适合的物质为糖类如糖、 寡糖多糖及其衍生物，如葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、乳糖、蔗糖、甘 露醇、山梨醇、糊精、麦芽糖糊精、纤维素、微晶纤维素、羧甲基纤 维素钠、淀粉(玉米、大米、马铃薯、小麦、木薯)和其他糖类。

适合用作本发明微丸丸芯的特别优选的物质为25-30目的糖球 (USP 22/NF ⅩⅦ第1989页)，它包括62.5％-91.5％(w/w)的蔗糖，其 次为淀粉并且也可能为糊精，并且它们是药学上惰性的或中性的。因 此，在本领域中这些丸芯也称为中性微丸。

基于微丸总重量，得到25-30目糖心的微丸大致包括：(a)20-60％ 的丸芯物质；(b)25-50％的水溶性聚合物；(c)10-25％的降脂剂；和(d) 2-5％的密闭包衣聚合物。

根据本发明的微丸中的水溶性聚合物为：当于20℃溶于2％水溶 液时，其表观粘度为1-100mPa.s的聚合物。例如，水溶性聚合物可以 选自：

-烷基纤维素如甲基纤维素，

-羟基烷基纤维素如羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素 和羟丁基纤维素，

-羟烷基烷基纤维素如羟乙基甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素，

-羧基烷基纤维素如羧甲基纤维素，

-羧基烷基纤维素的碱金属盐如羧甲基纤维素钠，

-羧烷基烷基纤维素如羧甲基乙基纤维素，

-羧基烷基纤维素酯，

-淀粉，

-果胶如羧甲基支链淀粉钠，

-壳多糖衍生物如脱乙酰壳多糖，

-多糖如海藻酸及其碱金属盐和铵盐、角叉菜胶、半乳甘露聚糖、 西黄蓍胶(traganth)、琼脂、阿拉伯胶、瓜尔胶和黄原胶，

-聚丙烯酸及其盐，

-聚甲基丙烯酸及其盐，甲基丙烯酸酯共聚物，

-聚乙烯醇，

-聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯吡咯烷酮和醋酸乙烯酯的共聚物，

-聚醚如聚环氧乙烷和聚环氧丙烷以及氧化乙烯和氧化丙烯的共 聚物。

药学上可接受的并具有如上所述的适当的物理-化学性质的没有 一一列举的聚合物也同样适用于制备本发明的微丸。

药物包衣层优选含有水溶性聚合物如羟丙基甲基纤维素 (Methocel,Pharmacoat)、甲基丙烯酸酯(Eudragit E)、羟丙基纤维素 (Klucel)或聚乙烯吡咯烷酮。优选的水溶性聚合物为羟丙基甲基纤维 素或HPMC。所述HPMC含有足够的羟丙基和甲氧基基团以保证其 水溶性。具有甲氧基取代度约0.8-约2.5和羟丙基摩尔取代约0.05-约 3.0的HPMC通常为水溶性。甲氧基取代度是指纤维素分子的每个无 水葡萄糖的甲基醚基团的平均数量。羟丙基摩尔取代是指与纤维素分 子的每个无水葡萄糖反应的氧化丙烯的平均摩尔数。羟丙基甲基纤维 素是hypromellose的United States Adopted Name(参见Martindale, The Extra Pharmacopoeia,第29版，1435页)。优选采用低粘度(如5 mPa.s)的羟丙基甲基纤维素如羟丙基甲基纤维素2910 5mPa.s。在 “2910”四位数值中，前二位数值代表甲氧基基团的大约百分数，第 三和四位数值代表羟丙氧基基团的大约百分组成。5mPa.s为于20℃ 的2％水溶液中的表观粘度值。

适当的HPMC包括那些粘度约1-约100mPa.s，特别是粘度约 3-15mPa.s的那些HPMC。最优选的具有约5mPa.s粘度的HPMC 类型为可得自商业的HMPC 2910 5mPa.s。

PVP-VA 64为可溶于水和醇的乙烯基吡咯烷酮-醋酸乙烯酯共聚 物，可得自商业的为BASF的KollidonVA 64。该共聚物衍生自重量 比为6∶4的1-乙烯基-2-吡咯烷酮和醋酸乙烯酯，它被指定为CAS nr 25086-89-9。该共聚物特别适合用作快速释放制剂的基质物质。它可 以与具有较差生物利用度的药物熔融和挤压以形成溶解迅速的分散 物。

(a)∶(b)的重量比的范围为1∶1-1∶35，优选1∶1-1∶5。在(化合物 A)：(HMPC 2910 5mPa.s)的情况下，所述比例范围可以为约1∶1-约 1∶3，理想值为约2∶3。降脂剂与其他水溶性聚合物的重量比可以由 本领域技术人员根据简单实验来确定。根据实际情况确定低限。的确， 当给定治疗有效量的降脂剂(每天约25mg-约200mg，优选约150 mg)时，上述比例的低限由可以加工成实际大小的一种剂型的混合物的 最大量决定。当水溶性聚合物的相对量太高时，则需要达到治疗水平 的混合物的绝对量将太高以至于不能加工成一个胶囊或片剂。片剂， 例如，最大重量约为1g，挤压物最大可以占其约90％(w/w)。结果， 降脂剂的量与水溶性聚合物之比的低限约为1∶35(25mg的降脂剂+ 875mg水溶性聚合物)。

另一方面，如果上述比例太高，它意味着与水溶性聚合物的量相 比降脂剂的量较高，则就会有降脂剂不能完全溶于水溶性聚合物中的 危险，结果将不能达到预期的生物利用度。化合物溶于水溶性聚合物 中的程度通常可以用肉眼检查：如果挤压物是清澈的则化合物很可能 已经完全溶于水溶性聚合物中。1∶1的上限由观察得自挤压降脂剂与 HPMC 2910 5mPa.s的挤压物形成固体溶液的上述比例的实际情况决 定，但在研磨过程中似乎部分形成结晶。可以理解的是对于某些特殊 的水溶性聚合物可能会低估1∶1的上限。因为除了实验时间外它可以 很容易确立，所以其中(a)∶(b)的比例大于1∶1的固体分散物也包括在 本发明的范围内。

上面上述的微丸的药物包衣层可以进一步包括一种或多种药学 上可接受的赋形剂如增塑剂、矫味剂、着色剂、防腐剂等。上述赋形 剂应为惰性的，换句话说，在生产条件下它们不会出现任何降解或分 解。

在当前的化合物A:HPMC 2910 5mPa.s制剂中，增塑剂优选少 量，适宜为0％-15％(w/w)，优选小于5％(w/w)，最优选0％(w/w)。 然而与其他水溶性聚合物共用时，增塑剂可以以不同的方式，通常以 较高的量使用。适当的增塑剂为药学上可接受的，包括低分子量的多 元醇如乙二醇、丙二醇、1,2-丁二醇、2,3-丁二醇、苯代乙二醇；聚 乙二醇如二甘醇、三甘醇、四甘醇；其他分子量低于1000g/mol的聚 乙二醇；分子量低于200g/mol的聚丙二醇；乙二醇醚类如单丙二醇 单异丙醚；丙二醇单乙醚；二甘醇单乙醚；酯类增塑剂如乳酸山梨醇 酯、乳酸乙酯、乳酸丁酯、甘醇酸乙酯、乙醇酸烯丙酯；胺类如单乙 醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、单异丙醇胺；三亚乙基四胺、2-氨基-2- 甲基-1,3-丙二醇等。其中，优选低分子量的聚乙二醇、乙二醇、低分 子量的聚丙二醇，特别是丙二醇。

密闭包衣聚合物层应用于药物包衣丸芯以防止微丸的附着，该附 着具有使溶出速度和生物利用度共同降低的副作用。优选采用聚乙二 醇(PEG)薄层，特别是聚乙二醇20000(Macrogol 20000)，作为密闭包 衣聚合物层。

优选的微丸主要包括：(a)41-44％糖球；(b)32-33％羟丙基甲基纤 维素2910 5mPa.s；(c)21-24％化合物A；和(d)3-4％聚乙二醇20000。

另外，本发明的微丸可以进一步含有各种添加剂如增稠剂、润滑 剂、表面活性剂、防腐剂、复合剂和螯合剂、电解质或其他活性成分， 如抗炎剂、抗菌剂、消毒剂或维生素。

本发明微丸可以下面的方法容易地制备。通过将适当量的降脂剂 和水溶性聚合物溶于适当的溶剂系统制备药物包衣溶液。适当的溶剂 系统包括二氯甲烷和醇(优选，用如丁酮变性的乙醇)的混合物。所述 混合物应包括至少50％(重量)的二氯甲烷作为药物的溶剂。因为羟丙 基甲基纤维素不能完全溶于二氯甲烷，至少需要加入10％的醇。在包 衣液中优选采用较低比例的二氯甲烷/醇，如，二氯甲烷/乙醇的比例范 围为75/25(w/w)-45/55(w/w)，具体讲约为50/50(w/w)。在药物包衣 液中固体如降脂剂和水溶性聚合物的量可以在7-10％(w/w)的范围，优 选约8.3-8.5％(w/w)。

在装备有Wurster底喷内插件(如18英寸Wurster喷雾插件(insert)) 的流化床制粒机(如Glatt type WSG-30或GPCG-30)中容易地进行药物 包衣过程(工业生产规模)。实验室规模的过程可以在装备有6英寸 Wurster底部插件的Glatt类型WSG-1上进行。很明显，过程参数依 赖于所使用的设备。

应仔细调节喷雾速度。太慢的喷雾速度可以药物包衣溶液的某些 喷雾干燥从而导致产品的损失。太高的喷雾速度会导致随后的凝聚过 湿。凝聚是最重要的问题，初期可以使用较低的喷雾速度，随着包衣 过程的进行而增加，微丸逐渐增大。

使用的药物包衣溶液的雾化空气的压力也影响包衣效果。低的雾 化气体压力导致较大的液滴形成并且凝聚趋势增加。高的雾化气体压 力很明显会带来药物溶液喷雾干燥的危险，但已经发现这不是一个问 题。因此，雾化空气压力可以设定为接近最大水平。

流化气体体积可以通过操作设备的排气阀来监测，它可以根据获 得理想的微丸循环的方式来设定。太低的气体体积会导致微丸流化不 充分；太高的气体体积会干扰微丸循环，因为在设备中形成了逆流空 气。在本过程中理想的条件为通过打开排气阀至约为其最大量的 50％，并随着包衣过程的进行逐渐增加至约为其最大量的60％。

包衣过程在进气温度范围为约50℃-约55℃下进行较为有利。较 高的温度可以加快该过程，但不利的是溶剂蒸发太快以至于包衣液体 不能均匀的分布于微丸的表面导致药物包衣层具有高的孔隙率。由于 包衣微丸的总容积增加，药物溶出会明显降低至无法接受的水平。明 显地，理想的过程温度进一步依赖于所使用的设备、丸芯和降脂剂的 性质、每批的体积、溶剂和喷雾速度。

为理想的包衣结果所设定的参数在后面的实施例中会更详细地 描述。已经发现在这些条件下进行包衣过程可以得到重现性非常好的 结果。

为了降低药物包衣层中残留的溶剂量，可以在任何适当的干燥设 备中方便地进行干燥。利用真空筒式干燥器可以获得良好的结果，该 干燥器操作的温度为约60℃-约90℃，优选约80℃，减压范围为约 150-400mbar(15-40kPa)，优选为200-300mbar(20-30kPa)，进行至少 24小时，优选约36小时。该真空筒式干燥器可方便地以其最小速度 如2-3rpm旋转，干燥后可以筛分药物包衣丸芯。

在配备Wurster底喷插件的流化床制粒机中将密闭包衣聚合物喷 涂于药物包衣丸芯。通过将适当量的密闭包衣聚合物溶解于适当的溶 剂系统中可以制备密闭包衣溶液。该系统为，如，二氯甲烷和醇(优选 乙醇)的混合物。使用的二氯甲烷和醇的比例可以与在药物包衣过程中 使用的比例相同，所以其范围可以为约75/25(w/w)-约45/55(w/w)， 并特别为约50/50(w/w)。在密闭包衣喷雾溶液中密闭包衣聚合物的量 可以在7％-12％(w/w)的范围，优选为约10-11％。在密闭包衣过程中 搅拌密闭包衣喷雾溶液是有利的。进行该最后一步所设定的参数与药 物包衣过程中所使用的参数基本相同。适当的条件在后面实施例中更 详细地进行描述。

密闭包衣聚合物层喷涂完成后可能需要另外的干燥步骤。喷雾完 成后以设定的参数操作设备约5-15分钟可以容易地除去过量的溶剂。

药物包衣过程和密闭包衣过程都优选在惰性环境如氮气下进 行。包衣设备最好是磨光的，前提是含有有效冷凝系统的适当的溶剂 回收系统。

本发明微丸可以制成含有治疗有效量的微丸的药物剂型。尽管， 首先考虑的是用于口服给药的药物剂型如片剂和胶囊，但本发明的微 丸也可以用于制备如直肠给药的药物剂型。优选，将微丸装填入硬明 胶胶囊中使得每个剂型中可用的活性成分的量为100mg或200mg。例 如，0号硬明胶胶囊适合于含有21-22％(重量)降脂剂的成品微丸，相 当于约100mg活性成分。

可以利用标准自动胶囊填充机将药物包衣和密闭包衣微丸填充 入硬明胶胶囊。适当的接地和去电离设备可以有利地防止静电电荷的 聚集。

胶囊填充的速度可以影响重量分布，所以应加以监测。当以最大 速度的约75％-85％操作设备并且在许多情况下以全速操作可以获得 好的结果。

采用上述过程参数，可以获得用于制备含有25-30目丸芯、降脂 剂和水溶性聚合物的药物包衣层以及薄的密闭包衣聚合物层的微丸的 方便的、重现性好的生产方法。药物动力学研究表明这样得到的微丸 具有优良的溶出和生物利用度特性。

片剂

适合于口服给药的其它剂型为片剂。通过常规片剂工艺，利用常 规成分或赋形剂和常规的片剂设备，由前面所述的微丸(密闭包衣，但 优选不包衣)可以生产它们。另外，它们可以较低的成本生产。如前所 述，降脂剂如化合物A的有效的日剂量范围为约25mg-约200mg o.d.，优选约100mg-约150mgo.d.。片剂的形状可以是圆形的、椭圆 形的或长方形的。为了患者容易吞服较大的剂型，最好使得片剂有适 当的形状。可以舒服吞服的片剂最好是长形的而不是圆形的。特别优 选的是双面凸出的扁圆形片剂。如后面所更详细讨论的，片剂上的薄 膜衣进一步使其更易吞服。

设计口服后立即释放降脂剂并具有良好生物利用度的片剂，其方 式使片剂在胃中迅速崩解(立即释放)，释放出来的微丸彼此分开以使 得它们不会相互粘连，从而使得降脂剂在局部达到高浓度，使药物得 到沉淀的机会(生物利用度)。通过将所述微丸均匀分布在崩解剂和稀 释剂的混合物中可以获得期望的效果。

适当的崩解剂具有大的膨胀系数。其实例为亲水性、不溶或难溶 于水的交联聚合物如交联聚乙烯吡咯烷酮(交联聚乙烯吡咯烷酮)和 croscarmellose(交联羧甲基纤维素钠)。在本发明速释片剂中崩解剂的 量的范围可以方便地为约3-约15％(w/w)，优选为约7-9％，特别是约 8.5％(w/w)。上述量较常规片剂中使用的量大以保证当进食时微丸在 大量的胃内容物中分布。当大量使用时，由于崩解剂的性质产生了延 缓释放制剂，将其用称为稀释剂或填充剂的惰性物质稀释是有利的。

许多物质都可以用作稀释剂或填充剂。实例为喷雾干燥的或无水 的乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、淀粉、纤维素(如微晶纤维 素AvicelTM)、二水或无水磷酸氢钙和本领域已知的其它物质以及它们 的混合物。优选的为可得自商业的乳糖一水合物(75％)和微晶纤维素 (25％)的喷雾干燥的混合物，得自商业的如MicrocelacTM。片剂中稀释 剂或填充剂的量的范围可以方便地为约20％-约40％(w/w)，优选范围 为约25％-约32％(w/w)。

所述片剂可以包括一种或多种其他传统赋形剂如粘合剂、缓冲 剂、润滑剂、助流剂、增稠剂、甜味剂、矫味剂和着色剂。某些赋形 剂具有多种作用。

在某些剂型的生产中可以使用润滑剂和助流剂，当生产片剂时通 常使用它们。润滑剂和助流剂的实例为氢化的植物油如氢化的棉籽 油、硬脂酸镁、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、胶体二 氧化硅、滑石粉、它们的混合物和其它本领域中的已知的物质。重要 的润滑剂和助流剂是硬脂酸镁和硬脂酸镁与胶体二氧化硅的混合物。 优选的润滑剂为氢化的植物油Ⅰ型(微粉化的)，最优选的为氢化的、去 味的棉籽油(可商业购自Karlshamns的Akofine NFTM(以前称作 SterotexTM))。润滑剂和助流剂一般占片剂总重量的0.2-7.0％。

其他赋形剂如着色剂和颜料也可以添加到本发明的片剂中。着色 剂和颜料包括二氧化钛和适用于食物的色素。在本发明的片剂中着色 剂是可任选的成分，但当使用时着色剂可以存在的量多至片剂总重量 的3.5％。

矫味剂在组成中是可任选的，可以自合成香料油和调味芳香或天 然油、植物叶、花、果实等的提取物等及其组合物中选择。它们可以 包括肉桂油、冬青油、薄荷油、月桂油、茴香油、桉树油、百里香油。 也可以用作矫味剂的有香草、柑橘类植物油(包括柠檬、橙、葡萄、酸 橙和柚子)和水果香精(包括苹果、香蕉、梨、桃、草莓、红莓、覆盆 子、樱桃、李子、菠萝、杏等)。矫味剂的量可以依赖于几种情况包括 特殊感官期望的效果。一般来说，矫味剂存在的量约为0％-3％(w/w)。

如本领域中所已知的，在压片之前片剂混合物可以干法制粒或 湿法制粒。压片过程本身具有不同标准，采用传统的压片机通过将所 需的片剂混合物或各成分的混合物制成适当的形状可以轻易地完成。

本发明的片剂可以进一步薄膜包衣以改善味觉、使得吞服容易并 具有完美的外观。许多适当的聚合物薄膜包衣材料在本领域中是已知 的。优选的薄膜包衣材料为羟丙基甲基纤维素HPMC，特别是HPMC 2910 5mPa.s。其他适当的薄膜包衣聚合物也可以在此使用，包括羟 丙基纤维素以及丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的共聚物。除了薄膜包衣聚 合物外，薄膜包衣可以另外包括增塑剂(如丙二醇)和任选的颜料(如二 氧化钛)。薄膜包衣悬浮液也可以含有作为抗粘剂的滑石粉。在本发明 的速释片剂中，薄膜包衣是较少的，其占有的重量小于片剂总重量的 约3.5％(w/w)。

优选的剂型为其中微丸重量范围是全部剂型总重量的40％-60％ 的那些剂型，稀释剂的重量范围为20-40％，崩解剂的重量范围为3- 10％，剩余的由前面所述的一种或几种赋形剂所占有。

根据本发明的另一种优选剂型为：当该剂型按照USP实验<711> 要求进行实验，于USP-2溶出仪器中，在至少严格按照下列条件下： 900ml 0.1N HCl,37℃以50rpm采用浆法搅拌，在60分钟内至少 有40％的有用的降脂剂自上述剂型中溶出。符合上述定义的片剂可以 称作具有Q＞40％(60’)。优选本发明的片剂溶出较快，具有Q＞75％ (60’)，更优选Q＞75％(45’)。

本发明另一个目的是提供制备如前面所述的药物剂型的方法，其 特征是将如前所述的治疗有效量的微丸与药学上可接受的赋形剂混 合，并将所述混合物压制成片剂。

另外，本发明涉及如前所述的微丸在制备口服给药予患有高脂血 症、肥胖或动脉粥样硬化症的哺乳动物的药物剂型中的应用，其中单 一的该剂型可以每天给药一次于所述哺乳动物。

本发明也涉及如前所述的微丸在制备口服给药予患有高脂血 症、肥胖或动脉粥样硬化症的哺乳动物的药物剂型中的应用，其中所 述剂型可以在每天的任何时候给药，不依赖于所述哺乳动物摄取的食 物。

本发明也涉及如前所述的微丸用于制备口服给药予患有高脂血 症、肥胖或动脉粥样硬化症的哺乳动物的药物剂型，其中单一的该剂 型可以每天给药一次于所述哺乳动物。

本发明也涉及如前所述的微丸用于制备口服给药于患有高脂血 症、肥胖或动脉粥样硬化症的哺乳动物的药物剂型，其中所述剂型可 以在每天的任何时候给药，不依赖于所述哺乳动物所摄取的食物。

本发明也涉及在哺乳动物中治疗高脂血症、肥胖或动脉粥样硬化 症的方法，该方法包括以可以每天给药一次的单一口服剂型给予所述 哺乳动物有效量的降脂剂。

本发明也涉及在哺乳动物中治疗高脂血症、肥胖或动脉粥样硬化 症的方法，该方法包括以单一口服剂型给予所述哺乳动物有效量的降 脂剂，上述口服剂型可以在每天的任何时候给药，不依赖于所述哺乳 动物所摄取的食物。

本发明也涉及适用于商业销售的药物的包装，包括容器、如前所 述的降脂剂的口服剂型以及与所述包装有关的说明书(不限于有或无 食物时是否可以服用该剂型)。 实验部分

下表表示式(Ⅰ)化合物的结构式、其物理数据和在WO-96/13499中 实施例的参数，根据上述实施例可以制备目标化合物。在药理实施例 中，阐明了式(Ⅰ)化合物的脂质降低作用。然后下列实施例证明了化合 物A(化合物40)怎样转化为微丸并制成具有良好生物利用度的胶囊。

        表1  Co.  No  Ex.  No. R1  R2  R3 物理数据 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 133 134 136 137 3 3 3 4 4 3 3 3 4 4 4 4 4 4 3 3 3 3 4 4 4 3 3 3 3 Cl Cl Cl F F Cl Cl Cl F F F F F F Cl Cl Cl Cl Cl Cl Cl CH3 Br Cl Cl H H H H H H H H H F H H F F H H H H H H H H H H H CH(CH3)2 CH(CH3)CH2CH3 CH2-CH(CH3)2 CH(CH3)2 CH2-CH(CH3)2 环(C5H9) CH(CH2CH3)2 (CH2)2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 环(C5H9) CH(CH2CH3)2 环(C5H9) CH(CH2CH3)2 (CH2)3CH3 CH2-CH3 CH2-CH(OH)-C(CH3)3 (CH2)4CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH3 CH(CH3)CH(OH)(CH3) (CH2)4CH3 (CH2)4CH3 环(C5H9) (CH2)4CH3 mp.194.8℃/顺式 mp.147.8℃/顺式 mp.182.5℃/顺式 mp.181.1℃/顺式 mp.166.4℃/顺式 mp.198.8℃/顺式 mp.139.6℃/顺式 mp.184.6℃/顺式 mp.180.0℃/顺式 mp.180.7℃/顺式 mp.194.2℃/顺式 mp.144.3℃/顺式 mp.202.4℃/顺式 mp.166.7℃/顺式 mp.194.6℃/顺式 mp.218.3℃/顺式 mp.205.9℃/顺式 mp.173.8℃/顺式 mp.140.9℃/反式 mp.208.6℃/顺式 mp.202.4℃/顺式 mp.147.4℃/顺式 mp.152.5℃/顺式 2S-顺式 2S-顺式

表2

                             表3  Co.  No.  Ex.  No. R9  R8 物理数据  49  50  51  52  53  54  55  56  57  58  59  3  3  3  3  3  3  3  3  3  3  3  CF3  CF3  H  H  H  H  H  CH3  NH2  OH  OH H CH3 (CH2)3CH3 CH(CH3)2 CH2CH3 CH2CH(CH3)2 (CH2)2CH3 CH3 H CH3 CH(CH3)2  mp.133.3℃  mp.159.6℃  mp.173.5℃  mp.159.1℃  mp.175.6℃  mp.186.4℃  mp.168.5℃  mp.170.0℃   -  -  -

                                表4  Co.  No.  Ex.  No. R1  R2  R3  A-B 物理数据  60  61  62  63  64  65  3  3  4  4  3  3 Cl Cl  F  F  F  F  H  H  F  H  H  F  CH(CH3)CH2CH3  CH2CH(CH3)2  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH2CH3)2  CH(CH2CH3)2  CH=N  CH=N  CH=N  CH=N  CH=N  CH=N  mp.147.7℃  mp.159.4℃  mp.100.6℃  mp.138.8℃  mp.132.3℃  mp.120.4℃

 Co.  No.  Ex.  No. R1  R2  R3  A-B 物理数据  66  67  68  69  70  71  72  73  74  75  3  3  3  3  4  4  4  4  3  3  F  F  Cl  Cl  F  F  F  F  F  F  H  F  H  H  H  F  F  F  H  H 环(C5H9) 环(C5H9) CH(CH3)2 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 环(C5H9) CH(CH2CH3)2 环(C5H9) CH(CH2CH3)2  CH=N  CH=N  N=CH  N=CH  N=CH  N=CH  N=CH  N=CH  N=CH  N=CH  mp.163.0℃  mp.150.7℃  mp.170.1℃  mp.176.2℃  mp.157.3℃  mp.162.4℃  mp.183.3℃  mp.158.9℃  mp.201.2℃  mp.117.4℃

                             表5  Co.  No.  Ex.  No. R9  R8  R1  A-B  R3 物理数据  76  77  78  79  80  81  82  83  84  85  86  87  114  115  116  3  3  3  3  3  3  5  3  3  5  3  3  3  3  3 H H CH2CH3 H H CH3 H H H H H H H H H  H  CH2CH3  (CH2)2CH3  (CH2)3CH3  (CH2)2CH3  CH3  CH(CH3)2  H  H  CH(CH3)2  H  CH3  CH3  CH3  CH3 Cl Cl Cl Cl Cl Cl Cl Cl Cl Cl F Cl Cl Cl Cl  CH=N  CH=N  CH=N  CH=N  CH=N  CH=N  CH=N  N=CH  N=CH  N=CH  CH=N  N=CH  CH=CH  CH=CH  CH=CH CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH2CH(CH3)2 CH(CH3)CH2CH3 CH(CH3)CH2CH3 CH2CH(CH3)2 CH(CH3)CH2CH3 CH(C2H5)CH2CH3 环(C5H9)  mp.179.6℃  mp.119.3℃  mp.97.8℃  mp.108.6℃  mp.87.3℃  mp.85.6℃  mp.141.2℃  mp.160.1℃  mp.160.6℃  mp.134.9℃  mp.101.3℃  mp.154.3℃  mp.125.2℃  mp.147.7℃  mp.154.2℃

 Co.  No.  Ex.  No. R9  R8  R1   A-B  R3 物理数据  117  118  119  120  121  3  3  3  5  3  H  H  H  H  H  H  CH3  CH3  CH(CH3)2  CH3  Cl  F  Cl  Cl  F  CH=CH  CH=CH  CH=N  CH=CH  CH=CH CH(CH3)CH2CH3 CH(C2H5)CH2CH3 环(C5H9) CH(CH3)CH2CH3 环(C5H9)  mp.186.8℃  mp.134.1℃  mp.161.1℃  mp.137.5℃  mp.166.2℃

                               表6   Co.   No.  Ex.  No. R7 物理数据  88  89  3  3 CH3 苯基 - -

                               表7  Co.  No.  Ex.  No.  A-B 物理数据  90  91  92  93  94  3  3  3  4  4  C(CH3)=N  C(CH3)2CO  CO-C(CH3)2  CH=CH  CH2-CH2  mp.98.3℃/1/2 H2O  mp.96.0℃  mp.127.1℃  mp.171.8℃  mp.147-3℃

                              表8  Co.  No.  Ex.  No. R12  A-B R2 物理数据  95  96  97  98  99  100  3  3  3  3  3  3  CH3  CH3  H  CH3  CH3  CH3  CH=N  CH=N  CH=N  N=CH  N=CH  N=CH  CH(CH3)CH2CH3  CH2CH(CH3)2  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)2  CH(CH3)CH2CH3  CH2CH(CH3)2  mp.134.2℃  mp.164.9℃   -  mp.187.7℃  mp.150.4℃  mp.146.8℃

                                  表9  Co.  No.  Ex.  No. R5  R6 物理数据  101  102  103  3  3  3  H  CH3  NH2  H  CH3  NH2  mp.159.6℃  mp.157.4℃  mp.248.5℃

                            表10  Co.  No.  Ex.  No. Het   A-B  R3 物理数据 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 122 123 124 125  3  3  3  3  3  3  3  3  5  5  3  3  5  3 5-甲基-1,3,4-噻二 唑-2-基 2-吡啶基 4-吡啶基 4-甲基-2-噁唑基 2-噻唑基 4-氯代-2-噻唑基 2-噻唑基 2-噻唑基 (1-甲基乙基)-2H- 1,2,4-三唑基-3-基 (1-甲基乙基)-1H- 1,2,4-三唑基-3-基 4-甲基-4H-1,2,4-三 唑基-3-基 4-甲基-4H-1,2,4-三 唑基-3-基 (1-甲基乙基)-1H- 1,2,4-三唑基-3-基 4-甲基-4H-1,2,4-三 唑基-3-基 CH=N CH=N CH=N CH=N CH=N CH=N N=CH N=CH CH=N N=CH CH=CH CH=CH CH=CH CH=N  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)CH2CH3  CH2CH(CH3)2  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)CH2CH3  CH(C2H5)CH2CH3  环(C5H9)  CH(CH3)CH2CH3  CH(C2H5)CH2CH3  -  mp.154.1℃  mp.174.9℃  mp.115.3℃  mp.158.6℃  -  mp.157.8℃  mp.167.9℃  mp.128.8℃  -  mp.150.0℃  mp.134.4℃  mp.202.8℃  mp.155.7℃  mp.123.2℃

                            表11  Co.  No. Ex. No.  R2  R3  A-B 物理数据  126  127  128  129  130  131  132  3  3  3  3  3  3  3  H  F  H  F  H  F  H  CH(CH3)CH2CH3  CH(CH3)CH2CH3  环(C5H9)  环(C5H9)  CH(C2H5)CH2CH3  CH(C2H5)CH2CH3  (CH2)4CH3  CH=CH  CH=CH  CH=CH  CH=CH  CH=CH  CH=CH  N=CH  mp.175.4℃  mp.155.5℃  mp.192.0℃  mp.181.8C  mp.145.5℃  mp.139.1℃  mp.153.1℃ 药理 实施例1：载脂蛋白B(apo B)印制实验

于37℃在含有放射活性标记的亮氨酸的液体介质中，将合成和 分泌低密度脂蛋白的培养的人肝细胞(Hep G2-细胞)孵育过夜。由此放 射活性标记的亮氨酸结合进载脂蛋白B中。将液体介质倾倒，通过双 免疫沉淀方法分离载脂蛋白，如，首先将载脂蛋白B-特殊抗体(抗体1) 加至液体介质中，随后加入第二种抗体(抗体2)，它特定地与apoB-抗 体1-复合物结合。这样形成的apoB-抗体1-抗体2复合物沉淀，通过 离心分离。根据测定分离的复合物的放射活性从而对过夜过程中合成 的载脂蛋白B进行定量。为了测定实验化合物的抑制活性，将该实验 化合物以不同的浓度加至液体介质中，将有实验化合物存在下的合成 的载脂蛋白B的浓度(浓度apoB(后))与无实验化合物存在下的合成的 载脂蛋白B的浓度(浓度apoB(对照))相比。对于每一个实验，载脂蛋 白-B形成的抑制表达为

抑制％=100×(1-浓度apoB(后))/浓度apoB(对照)

当对于同一浓度进行多次实验时，对这些实验进行计算可以计算 出抑制的平均值。也可以计算IC50-值(降低apoB分泌至对照的50％所 需要的药物的浓度)。

表12列出了某些式(Ⅰ)的实例化合物的IC50-值。没有列于表12的 式(Ⅰ)的实例化合物具有1×10-6M或更大的IC50-值，对于它们数据是 有用的。

                     表12  Comp.   No. IC50 (×10-8M)     1     2     3     4     9.2     4.7     9.1     26

 Comp.   No. IC50 (×10-8M)     54     55     56     58     7.9     7.8     23     31

 Comp.   No. IC50 (×10-8M)     89     93     94     95     51     2.7     19    1.8

 Comp.   No.     IC50 (×10-8M)     5     6     7     8     9     12     13     15     18     22     23     24     28     32     33     35     37     38     40     43     44     49     50     51     52     53     20     12     7.9     13     11     19     51     4.8     4.1     7.1     14     5.8     9.7     18     9.1     7.7     23     6.5     2.3     11     5.1     85     26     4.7     25     8.4

 Comp.   No. IC50 (×10-8M)  60  61  62  63  64  65  66  67  68  69  71  72  73  74  75  76  77  78  79  80  81  82  83  84  87  88  4.6  8.1  19  4.6  16  29  13  18  8.1  2.6  12  19  18  14  12  2.4  7.1  5.3  4.6  7.2  4.9  3.1  1.5  2.8  6.9  45

 Comp.   No. IC50 (×10-8M)      96      98      99     100     101     102     105     106     107     108     110     111     112     113     114     115     116     117     118     119     121     122     123     126     128     130     4.7     2.0     1.5     2.1     16     37     9.9     88     4.5     2.6     2.7     6.2     98     3.0     5.3     5.7     5.8     1.6     9.1     4.6     14     8.8     7.4     14     18     14 组合物实施例

实施例2 a)化合物A喷雾溶液

将二氯甲烷(141kg)和变性乙醇(153kg)通过过滤器(5μ)注入不锈 钢容器中。在搅拌的同时加入化合物A(10.75kg)和羟丙基甲基纤维素 29105mPs.a(16.13kg)。继续搅拌直到完全溶解。

b)密闭包衣喷雾溶液

在搅拌的同时将二氯甲烷(7.95kg)和聚乙二醇20000(Macrogol 20000)(1.935kg)注入不锈钢容器中。加入变性乙醇(8.622kg)，搅拌上 述溶液直到均匀。

c)药物包衣过程

将25-30目(600-700μm)的糖球(20.64kg)置于装备有18英寸 Wurster(底喷)插件的流化床制粒机(GPCG30)中。用50℃-55℃的干 燥空气温热上述糖球。在开始时打开排气阀至约为其最大体积的 50％，在喷雾过程结束时增加至60％，通过上述操作控制流化气体的 体积。然后将前面所制备的化合物A喷雾溶液喷雾到在设备中运动的 微球上。在雾化气体压力约3.5kg/cm2(0.343Mpa)时，将上述溶液以 初始输出速度约600-700g.min-1进行喷雾。当喷雾溶液输出约30％ 后，输出速度增加至700-800g/min。

当喷雾过程完成后，用50℃-55℃的干燥空气将包衣的微球进一 步干燥约10分钟。然后在设备中用20-25℃的干燥空气将包衣的微球 冷却约10-20分钟。清空设备并收集包衣微球。

d)期间干燥

为了减少残留溶剂的水平，将包衣的微球进行进一步的干燥。将 包衣的微球置于真空筒式干燥机中，并于温度约80℃、压力约200-300 mbar(20-30kPa)，干燥至少24小时，优选约36小时。以其最小转动 速度(2-3rpm)操作筒式干燥机。采用筛(Sweco S24C；筛目宽1.14mm) 将干燥的包衣微球过筛。

e)密闭包衣过程

将干燥的包衣微球再次置于装备有Wurster插件的流化床制粒机 中，并用50℃-55℃的干燥空气温热。然后将前面所制备的密闭包衣 喷雾溶液喷雾到在设备中运动的包衣的微球上。在雾化气体压力约2.5 bar(0.25Mpa)时，将上述溶液以约400-500 g.min-1的初始输出速度进 行喷雾。当喷雾过程完成后，用50℃-55℃的干燥空气将珠粒进一步 干燥约10分钟。然后在设备中用20-25℃的干燥空气将包衣的微球冷 却约5-15分钟。自设备中取出珠粒并用适当的容器储存。

f)胶囊填充

采用标准自动胶囊填充机(如Model GFK-1500,Hffliger和Karg. 德国)，将药物包衣珠粒填充进硬明胶胶囊(在0号囊中460mg微丸相 当于100mg活性成分)(在4号囊中115mg微丸相当于25mg活性成 分)。为了获得良好重量分布的胶囊，胶囊填充速度降低至约75-85％ 的最大速度。采用上述过程参数，获得符合所有要求(特别是溶出标准) 的化合物A 100mg的硬明胶胶囊。

实施例3：微丸填充的胶囊与口服溶液的相对生物利用度以及食 物的影响

在开放型的、随机的、平行组的、三方交叉的实验中，将含有100 mg化合物A的胶囊的口服生物利用度与口服水溶液的生物利用度进 行对比。上述口服水溶液含有0.63mg/ml化合物A、100mg/ml 2-羟 丙基环糊精、2.5μl HCl(12N)和氢氧化钠，最终pH为2.0±0.1。三组 (每组六人)健康男性志愿者分别服用胶囊制剂的单剂量100mg化合物 A(在禁食情况下服用、标准早餐后立即服用)和口服溶液(在禁食情况 下)。只对未变化的药物进行药物动力学评价并总结于下表。     参数     禁食胶束     餐后胶束     禁食溶液 tmax,h  Cmax,ng/ml  FrelCmax,％ AUC∞,ng.h/ml  FrelAUC∞,％   1.9±0.3  17.2±12.6  17.4±9.4 *  148±72  27.3±8.5*   2.3±0.6  45.3±24.0 356±186# 252±131 257±105#   1.3±0.5  90.6±38.7     100  399±175     100

*：禁食胶囊与禁食溶液对比

#：进食胶囊与禁食胶囊对比