一种聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复合材料制备方法和应用
专利汇可以提供一种聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复合材料制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于 生物 医学技术领域，涉及一种聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒 复合材料 制备方法和应用。本发明聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复合材料[(Au0)n-G5.NHAc-mPEG]DENPs，所述[(Au0)n-G5.NHAc-mPEG]DENPs为黑色粉末状固体，n为Au和G5.NH2的摩尔比，n=50-400。本发明[(Au0)n-G5.NHAc-mPEG]DENPs具有貌尺寸可控，分散性和 稳定性 好，良好的细胞相容性、无细胞毒性，良好的CT成像效果等优点；本发明可作为 造影剂 应用于CT成像，本发明制备方法操作简单。，下面是一种聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复合材料制备方法和应用专利的具体信息内容。
1.一种聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复合材料制备方法和应用，其特征在于：所述[(Au0)n-G5.NHAc-mPEG]DENPs为黑色粉末状固体，n为Au和G5.NH2的摩尔比，n=50-400。
2.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复合材料制备方法和应用，其特征在于：所述[(Au0)n-G5.NHAc-mPEG]DENPs是通过第五代树状大分子G5.NH2作为起始原料，将一端被马来酰亚胺活化的聚乙二醇单甲酸mPEG化学键合在第五代树状大分子G5.NH2的表面，调节控制G5.NH2-mPEG和HAuCl4的摩尔比，再进行乙酰化修饰。
3.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复合材料制备方法和应用，其特征在于：所述[(Au0)n-G5.NHAc-mPEG]DENPs的mPEG和G5.NH2的摩尔比为16.7:1。
4.一种根据权利要求1-3所述的任一聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复合材料制备方法和应用，其特征在于：步骤如下：
第一步 G5.NH2- mPEG的制备
在良好搅拌下，向G5.NH（2 20mg，0.0007mmol），的DMSO溶液（10mL）中滴加一端被马来酰亚胺活化的聚乙二醇单甲醚（30.76mg，0.0154 mmol，Mw=2000），的DMSO溶液（5mL），搅拌反应3d后溶液由无色变为浅黄色，将反应液放入透析袋（Mw=1000）中，分别用磷酸盐缓冲液简称PBS、蒸馏水（各4次，2L）透析三天，冷冻干燥，得到淡黄色粉末状固体G5.NH2- mPEG；
第二步 制备[(Au0)50-G5.NHAc-mPEG]DENPs
分别按以下表1中指定的配比，将相应含量的HAuCl4的水溶液（10-15mg/ml）在良好搅拌下加入G5.NH2- mPEG的水溶液（1-2mg/ml）中，反应液瞬间变成浅黄色，搅拌混合30-40min后，向反应液中加入相应量的冰的NaBH（4 1ml，V水：V甲醇=2:1）溶液，反应液瞬间变成深酒红色，搅拌反应2h，随后向上述反应液中加入相应量的三乙胺（TEA）继续搅拌30-40min后，向反应体系中加入相应量的乙酸酐（Ac2O），搅拌反应24h后将反应液放入透析袋中，分别用磷酸盐缓冲液（PBS），蒸馏水透析3-4天（各3-4次，每次2-3L），经冷冻干燥，即得[(Au0)50-G5.NHAc-mPEG]DENPs，为黑色粉末状固体。
5.根据权利要求1-3所述聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复合材料制备方法和应用，其特征在于：将[(Au0)n-G5.NHAc-mPEG]DENPs分散在PBS缓冲液中，PBS缓冲液的 pH值为7.2，配制浓度为5-20mg mL-1的分散液，分别经由腹腔注射和瘤内注射到荷瘤鼠体内，在注射前后不同时间点分别利用Mico-CT扫描肿瘤部位获取图像。
一种聚乙二醇修饰的第五代树状大分子包裹的纳米金颗粒复
合材料制备方法和应用
技术领域
背景技术
发明内容
在良好搅拌下，向G5.NH（2 20mg，0.0007mmol），的DMSO溶液（10mL）中滴加一端被马来酰亚胺活化的聚乙二醇单甲醚（30.76mg，0.0154 mmol，Mw=2000），的DMSO溶液（5mL），搅拌反应3d后溶液由无色变为浅黄色，将反应液放入透析袋（Mw=1000）中，分别用磷酸盐缓冲液简称PBS、蒸馏水（各4次，2L）透析三天，冷冻干燥，得到淡黄色粉末状固体G5.NH2- mPEG。
40min后，向反应液中加入相应量的冰的NaBH（4 1ml，V水：V甲醇=2:1）溶液，反应液瞬间变成深酒红色，搅拌反应2h，随后向上述反应液中加入相应量的三乙胺（TEA）继续搅拌30-40min后，向反应体系中加入相应量的乙酸酐（Ac2O），搅拌反应24h后将反应液放入透析袋中，分别用磷酸盐缓冲液（PBS），蒸馏水透析3-4天（各3-4次，每次2-3L），经冷冻干燥，即得[(Au0)50-G5.NHAc-mPEG]DENPs，为黑色粉末状固体。
具体实施方式
在良好搅拌下，向G5.NH（2 20mg，0.0007mmol），的DMSO溶液（10mL）中滴加一端被马来酰亚胺活化的聚乙二醇单甲醚（30.76mg，0.0154 mmol，Mw=2000），的DMSO溶液（5mL），搅拌反应3d后溶液由无色变为浅黄色，将反应液放入透析袋（Mw=1000）中，分别用磷酸盐缓冲液简称PBS、蒸馏水（各4次，2L）透析三天，冷冻干燥，得到淡黄色粉末状固体G5.NH2- mPEG。
按以下表1中指定的的配比重复实施例1的方法，即得[(Au0)100-G5.NHAc-mPEG]DENPs，为黑色粉末状固体。
按以下表1中指定的的配比重复实施例1的方法，即得[(Au0)150-G5.NHAc-mPEG]DENPs，为黑色粉末状固体。
按以下表1中指定的的配比重复实施例1的方法，即得[(Au0)200-G5.NHAc-mPEG]DENPs，为黑色粉末状固体。
按以下表1中指定的的配比重复实施例1的方法，即得[(Au0)250-G5.NHAc-mPEG]DENPs，为黑色粉末状固体。
按以下表1中指定的的配比重复实施例1的方法，即得[(Au0)300-G5.NHAc-mPEG]DENPs，为黑色粉末状固体。
制备[(Au)350-G5.NHAc-mPEG]DENPs
按以下表1中指定的的配比重复实施例1的方法，即得[(Au0)350-G5.NHAc-mPEG]DENPs，为黑色粉末状固体。
制备[(Au)400-G5.NHAc-mPEG]DENPs
按以下表1中指定的的配比重复实施例1的方法，即得[(Au0)400-G5.NHAc-mPEG]DENPs，为黑色粉末状固体。
1、本发明的细胞相容性测试
（1）MTT比色法
本发明使用MTT比色法，首先将SPC-A1细胞以1×104密度接种于96孔细胞培养板内培养24h，吸去上层培养液，加入含有不同浓度的[(Au0)300-G5.NHAc-mPEG]DENPs（材料浓度为
200、500、1000、2000、3000nM，每组做六个平行样）新培养液后在37℃，CO2恒温培养箱中孵育4h。吸去上层培养液后加入新鲜培养液200μL，并加入20μL MTT溶液（5mg/mL）,混合均匀后将培养板置于37℃CO2恒温培养箱中孵育4h后吸去上层培养液，加入20μL DMSO溶液，于水平振荡器振荡20min使甲臜充分溶解后用酶标仪测试溶液在570nM处的吸光值，细胞相对增殖率=（实验孔吸光值-空白孔吸光值）/(阴性对照孔吸光值-空白孔吸光值)。不同浓度的本发明实施例6[(Au0)300-G5.NHAc-mPEG]DENPs的MTT比色法测试结果如图5所示。
本发明使用流式细胞术细胞周期及调亡检测，首先，将SPC-A1细胞以3×10密度接种于6孔细胞培养板内培养24h至细胞长满培养板底部的80%后，吸去上层培养液，加入含有材料浓度1000nM和2000nM的[(Au0)300-G5.NHAc-mPEG]DENPs的新鲜培养液，将培养板在37℃恒温培养箱中孵育4h（每种浓度平行做组）；随后，吸去培养板内上层培养基，用PBS冲洗3次后用0.25%的乙二胺四乙胺胰酶消化后收集细胞于10mL Eppendorf管，1000rpm离心5min，吸去上层胰酶，用PBS洗3次后使细胞重悬于PBS中，加入适量碘化丙啶溶液染色15min以上细胞悬浮液用200目尼龙网过滤后上机，将样品加入流式细胞仪的样品室进行测试。测试结果如表2所示。
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