本发明涉及一种中药提取物、其制备方法及用途，特别涉及一种具有α- 糖苷酶抑制剂活性的中药提取物、其制备方法及用途。

随着社会经济的发展，人类生活方式的改变和饮食结构的改变，糖尿病患 者(主要是II型糖尿病)的数量迅速增加，其发病率在全球范围内呈逐渐增高 趋势，其死亡率已居肿瘤和心血管疾病之后的第3位。糖尿病(Diabetes Mellitus) 是一类由遗传、环境、免疫等因素引起的、具有明显异质性的慢性高血糖及并 发症所组成的综合症，主要分为I型和II型两种。I型即胰岛β细胞破坏而导致 的胰岛素绝对缺乏，也称胰岛素依赖型(IDDM)。II型系由于胰岛素抵抗并胰 岛素分泌不足所致，亦称非胰岛素依赖型(NIDDM)。目前，糖尿病的治疗主 要分饮食疗法、运动疗法、胰岛素疗法、口服降糖药及中医药治疗等。在II型 糖尿病的治疗中口服降糖药占主要地位，主要分为三类：磺脲类、双胍类和α- 糖苷酶抑制剂等。α-糖苷酶抑制剂的作用机理是竞争性地抑制小肠刷状缘的近 腔上皮细胞内的α-糖苷酶，延缓碳水化合物的消化吸收，延迟双糖、低聚糖和 多糖的吸收，延迟并减轻餐后血糖的升高。α-糖苷酶包括胰淀粉酶、麦芽糖酶 和蔗糖酶等，在体内承担将多糖转化为单糖的功能。其抑制剂的研究始于60年 代，当时从链球菌的发酵培养液中发现了2-羟甲基-3，4，5，6-四羟基吡啶， 命名为Nojirimycin(野尻霉素)。其后又不断有新的抑制剂被发现，大多为生 物碱类。各类α-糖苷酶抑制剂结构上共同的特点是存在拟单糖结构，亦即有一 个多羟基的六元环或五元环结构。以六元环为例，其可为环己烷、环己烯、吡 喃或吡啶等。若环中带有氮原子则为生物碱类，这是一类最主要的α-糖苷酶抑 制剂，结构上大致可分为七类：多羟哌啶类、四氢吡咯类、二氢吡咯类、吲哚 拉西啶类、吡咯双烷类和托烷类等。除生物碱类外，某些黄酮类、环烷类等也 具有抑制α-糖苷酶活性的效应。中国专利ZL98107147介绍了“用噻唑烷二酮、 促胰岛素分泌剂和α-葡糖苷酶抑制剂治疗糖尿病”，但该专利没有涉及到如何 从中药中提取和制造α-葡糖苷酶抑制剂。中国有丰富的中药资源，如何利用这 个资源与西医相结合，采用中药提取而不是化工合成的方法制造药品是一个非 常好的中西医结合的方向。桑白皮为桑科植物桑(Morus L.)的除去栓皮的根皮。 性味甘，寒。入肺、脾经。功用主治为泻肺平喘，行水削肿。治肺热咳喘，吐 血，水肿，脚气，小便不利。近年来对其植物化学研究亦十分深入，其所含黄 酮类成分已得到揭示，其甙类成分也逐渐受到重视。成分含有如含伞形内酯、 东莨素和黄酮成分的桑根皮素(Morusin)、桑素(Mulberrin)、桑色烯 (Mulberrechromene)、环桑素(Cyclomulberrin)、环桑色烯 (Cyclomulberrochromene)等，并含有鞣质和粘液素。药理作用有利尿作用、 降压作用和其他如镇静作用。但其中生物碱类成分研究较少。盖因其脂溶性生 物碱成分含量极少，以氯仿萃取几乎得不到东西，因其所含的是极性较大亲水 性强的多羟基吡啶类。七十年代日本学者发现桑白皮中生物碱主要含1-羟甲基 -2，3，4-三羟基吡啶，此即1-脱氧野尻霉素(1-deoxy-nojirimycin)，又称 moranoline。后又进一步发现了moranoline的系列衍生物。至于桑白皮治疗糖尿 病的记载和研究较少。《上海常用中草药》中记载：治糖尿病：桑白皮四钱、枸 杞子五钱。煎汤服。桑叶为桑科植物桑Morus alba L.的干燥叶。性味甘，苦， 寒。归肺、肝经。具有疏散风热，清肺润燥，清肝名目。用于风热感冒，头晕 头痛，目赤昏花。成分主要含有甾体及三萜类化合物；黄酮化合物；香豆精化 合物挥发油；生物碱；氨基酸；有机酸和其他化合物等。药理作用主要抗菌作 用、降血糖作用、抑制肠肌等作用。桑椹为桑科植物桑Morus alba L.的干燥果 穗。性味甘、酸、寒，归心、肝、肾经。具有补血滋阴，生津润燥。用于眩晕 耳鸣，心悸失眠，须发早白，津伤口渴，内热消渴，血虚便秘。成分含有芦丁、 维生素、蛋白质、氨基酸、生物碱等。药理作用具有激发淋巴细胞转化作用。

本发明的目的就在于提供一种具有α-糖苷酶抑制剂活性的中药提取物，就 是一种由桑白皮、桑叶和桑葚制备的总生物碱，其制备方法是从中药中提取， 该中药提取物作为α-糖苷酶抑制剂应用于治疗糖尿病、肥胖症及爱滋等疾病。

本发明的目的是这样实现的：一种具有α-糖苷酶抑制剂活性的中药提取 物，涉及一种具有降血糖活性的中药有效部位，是由桑白皮、桑叶和桑葚制备 的总生物碱，主要包括多羟基生物碱。制备方法包括以下步骤：原药材经过适 当粉碎后，用水，甲醇或乙醇，或含水醇类在静态或动态下，室温或加热(包 括回流)提取，提取溶剂量为原药重量的5-12倍，可重复提取1-3次，然后滤 去药渣，滤液在常压或减压、动态状态下浓缩至一定浓度后，通过醇沉、絮凝 等方法，使杂质沉淀，再离心或过滤(包括常压、减压、微滤、超滤等)除去 不溶物。清液上阳离子交换树脂，以蒸馏水洗尽不吸附的杂质，再用0.2～1N的 氨水溶液洗脱，洗脱液浓缩后，上阴离子交换树脂，收集液浓缩，经真空干燥 或冷冻干燥成干粉，或将收集液直接喷雾干燥成型。提取溶剂以水最好，温度 为80～90℃，以80℃为佳，水用量为10～12倍药材重量，以10倍最好。醇沉能 有效去处提取液所含鞣质、多糖等杂质，可加入乙醇使总浓度为50％～80％，以 70％为好。絮凝效果更好，能更好降低有效成分的丢失。阳离子交换树脂可采 用苯乙烯系树脂，如001×4，001×7，Amberlite IR120等，也可使用大孔型树脂， 如Amberlite 252等。洗脱液以氨水最好，可用浓度0.2～1N，以0.5N最好。阴 离子交换树脂也可采用苯乙烯系树脂，如201×4，201×7等，或大孔树脂，如 Ambersep 900等。以上制备的干粉，为浅黄色固体物质，易吸潮，味甘。其中 所含生物碱约为总重量的50％～60％。以上制备的总生物碱干粉，加入相关辅料， 可制成片剂、胶囊等剂型。1)片剂：包括普通片、薄膜片、肠溶片等。用上述 总生物碱干粉，加入适量稀释剂如淀粉、糊精、甘露醇、微晶纤维等，适量的 粘合剂如水、乙醇、淀粉浆、明胶、纤维素等，适量的崩解剂如干淀粉、羧甲 基淀粉钠、底取代羟丙基纤维素、海藻酸钠等，以及适量的润滑剂如硬脂酸镁、 滑石粉、聚乙二醇等，按常规湿法制粒，干燥后整粒或干法制粒后压片。如是 包薄膜衣片，可用成膜材料如纤维素类、聚乙二醇类等，按常规包衣，分装入 密闭瓶或铝塑板中。2)胶囊剂：包括普通胶囊剂、肠溶胶囊剂等。将上述总生 物碱干粉加入适量辅料如碳酸钙、甘露醇、氧化镁、微粉硅胶等，适量润滑剂 如滑石粉、硬脂酸镁、乙二醇酯，聚硅酮类等，以及适量的黏合剂如矿物油、 食油等，混合成干粉或制成颗粒，填充入胶囊，分装如密闭铝塑包装中。以上 各剂型可加入适量甜味剂，如D-木糖、木糖醇、麦芽糖醇、甜叶菊素、天冬甜 母等。

本发明的有益效果是：由于桑具有良好的降血糖作用，其物质基础和机理 多样，但其中主要的一种物质即其所含的总生物碱(多羟基生物碱)，机理为抑 制α-糖苷酶活性。本发明所得之总生物碱，作为α-糖苷酶抑制剂，具有疗效 好、成本低等特点。可用于治疗糖尿病、肥胖症、爱滋病。

实例l：桑白皮总生物碱提取实例：桑白皮1000g，加水8L，微沸状态下 保温2小时，过滤。滤渣再加6L水，微沸状态下保温2小时，过滤。合并两次 滤液，浓缩，絮凝，离心。离心后清液过Amberjet1200C阳离子交换柱，0.5N 氨水溶液洗脱，收集硅钨酸反应阳性部分，收集液浓缩，再上201×4阴离子交 换柱，收集不吸附部分，浓缩，干燥，得5g总生物碱。片剂的制作：包括普通 片、薄膜片、肠溶片等。用上述总生物碱干粉，加入适量稀释剂如淀粉、糊精、 甘露醇、微晶纤维等，适量的粘合剂如水、乙醇、淀粉浆、明胶、纤维素等， 适量的崩解剂如干淀粉、羧甲基淀粉钠、底取代羟丙基纤维素、海藻酸钠等， 以及适量的润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇等，可加入适量甜味剂，如 D-木糖、木糖醇、麦芽糖醇、甜叶菊素、天冬甜母等。按常规湿法制粒，干燥 后整粒或干法制粒后压片。如是包薄膜衣片，可用成膜材料如纤维素类、聚乙 二醇类等，按常规包衣，分装入密闭瓶或铝塑板中。

实例2：桑叶总生物碱提取实例：桑叶1000g，加水10L，浸泡过夜，煮沸 后95℃保温2小时，过滤。滤渣再加8L水，煮沸后95℃保温2小时，过滤。 合并两次滤液，浓缩，絮凝，离心。离心后清液过Amberlite IR120C阳离子交 换柱，以0.5N氨水溶液洗脱，收集液浓缩后再上201×7阴离子交换柱，收集 不吸附部分，浓缩，干燥，得3g总生物碱。胶囊剂的制作：包括普通胶囊剂、 肠溶胶囊剂等。将上述总生物碱干粉加入适量辅料如碳酸钙、甘露醇、氧化镁、 微粉硅胶等，适量润滑剂如滑石粉、硬脂酸镁、乙二醇酯，聚硅酮类等，以及 适量的黏合剂如矿物油、食油等，并可加入适量甜味剂，如D-木糖、木糖醇、 麦芽糖醇、甜叶菊素、天冬甜母等。混合成干粉或制成颗粒，填充入胶囊，分 装如密闭铝塑包装中。

实例3：体外糖苷酶抑制实验：大鼠α-1，4糖苷酶提自大鼠小肠上段黏膜： 正常雄性大鼠，禁食12小时，断头处死后取小肠上段(自十二指肠10cm)，用 预冷的生理盐水冲洗两次，取粘膜层，按1∶10用0.5mmol/l NaCl-KCl缓冲液 稀释后匀浆，20000g离心30分钟(4℃)，沉淀用预冷的生理盐水稀释，500g 离心10分钟(4℃)，上清分装供实验。以pNP(p-硝基苯酚)法测定其活性， 在405nm波长处测定反应中生成的硝基苯酚，硝基苯酚的形成速率与酶的活性 成正比，以不加酶上清液及受试药物的反应体系为空白管调零，以不加受试药 物反应体系管为100％，并设拜唐平(Acarbose)为阳性对照管，加入实例1、 实例2所得总生物碱(以相应缓冲液溶解)，计算该总生物碱对酶的抑制百分率。 结果得到当酶活性抑制率为20％-80％时，上述总生物碱的浓度为20-1000μ g/ml，结果见图1，其中，红点和黑点分别表示不同酶浓度。

图1.桑白皮总生物碱体外抑制糖苷酶活性的效应

实例4：STZ诱导的糖尿病大鼠糖耐量实验：Wistar大鼠体重为180～200g， 禁食后尾静脉注射STZ 50mg/kg，72小时后测血糖值11.1mol/L以上者进行实 验，分组时各组动物平均血糖值相差不大于6mol/L，大鼠共分为6组，即空腹 组、对照组、拜糖平组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，均禁食过夜，除了 空腹组灌生理盐水外，其他各组均灌胃淀粉5g/kg，同时对照组灌胃生理盐水、 拜糖平组灌胃拜糖平50mg/kg、小剂量组灌胃桑白皮总生物碱100mg/kg、中剂 量组灌胃200mg/kg、大剂量组灌胃400mg/kg。给药后60min测血糖水平，结 果见表1。

表1.桑白皮总生物碱对STZ诱导的糖尿病大鼠糖耐量的影响     组别     剂量(mg/kg)   N       血糖值(mmol/L)     空腹组      -          5        3.56±1.06     对照组      -          7        26.96±4.01#     拜唐平组    50         8        16.42±6.77*     小剂量组    100        7        19.90±3.36*     中剂量组    200        7        18.76±3.64*     大剂量组    400        7        18.32±3.51*

   #P＜0.01v.s.空腹组，*P＜0.01v.s.对照组

实例5：正常小鼠糖耐量实验：昆明种雄性小鼠体重为22～25g，共分为6 组，即空腹组、对照组、拜糖平组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，均禁食 过夜，除了空腹组灌生理盐水外，其他各组均灌胃淀粉10g/kg，同时对照组灌 胃生理盐水、拜糖平组灌胃拜糖平50mg/kg、小剂量组灌胃桑白皮总生物碱 100mg/kg、中剂量组灌胃200mg/kg、大剂量组灌胃400mg/kg。给药后60min 测血糖水平，结果见表2。

     表2.桑白皮总生物碱对正常小鼠糖耐量的影响     组别     剂量(mg/kg)    N        血糖值(mmol/L)     空腹组      -           6          5.25±0.69     对照组      -           10         12.3±3.97#     拜唐平组    50          9          6.94±0.89*     小剂量组    100         9          7.94±1.77*     中剂量组    200         9          6.52±0.98*     大剂量组    400         9          6.06±1.36*

      #P＜0.01v.s.空腹组，*P＜0.01v.s.对照组

实例6：正常小鼠餐后血糖时间曲线：昆明种雄性小鼠体重为22～25g，禁 食过夜，灌胃淀粉10g/kg同时灌胃桑白皮总生物碱200mg/kg，给药后0min、 30min、60min、90min、120min测血糖水平，结果见图2。

图2.桑白皮总生物碱对小鼠餐后不同时间血糖的影响

按以下方法控制其质量：1)生物碱鉴别反应：取干粉少量，于适量水中溶 解，加入数滴6N HCl，滴加硅钨酸试液，有灰白色至黄色沉淀生成；或滴加碘 化铋钾试液，有棕黄色沉淀生成。2)酸碱滴定：取上述干粉0.5克，溶于20ml 冰乙酸中，以0.1N高氯酸为滴定液，测得其中N原子当量数。再取上述干粉 0.5克，溶于20ml水中，以0.1N NaOH为滴定液，测得其中羧酸根当量数。N原子当量数减去羧酸根当量数应为生物碱的摩尔数，生物碱分子量以180计， 所算得的生物碱重量应不低于总重量的30％。