鱿鱼墨多糖的提取方法
专利汇可以提供鱿鱼墨多糖的提取方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了鱿鱼墨多糖的提取方法，其具体步骤为：将鱿鱼墨热 水 浸提后冷水浸提，离心获得的上清液过 超滤 膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液；将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶进行酶解，酶解上清液中加入正丁醇、氯仿和三 乙醇 胺的混合溶液剧烈搅拌，离心，浓缩后醇沉得鱿鱼墨粗多糖；将鱿鱼墨粗多糖上已活化固相萃取柱，浓缩收集液，然后将浓缩收集液上 纤维 素离子交换柱，浓缩收集液， 透析 ， 冷冻干燥 ，即得鱿鱼墨多糖。有益效果为：本发明提取方法简单可行，资源利用率高，提取速率快，提取率高，杂蛋白和色素除去率高，多糖纯度高，不影响多糖活性。，下面是鱿鱼墨多糖的提取方法专利的具体信息内容。
1.鱿鱼墨多糖的提取方法，包括鱿鱼墨粗多糖提取液制备、初步纯化、固相萃取柱层析、离子交换柱层析，其特征在于：所述初步纯化步骤为：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶酶解，灭酶，离心，将上清液中加入正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌后离心，浓缩，再加入无水乙醇醇沉，静置过夜，进行沉淀多糖，离心，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖。
2.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述初步纯化步骤中酶解的pH为6.5-7.5、温度为55-65℃、时间为8-15min，灭酶温度为90-100℃、时间为10-
20min。
3.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述初步纯化步骤中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液的添加量为上清液体积的0.2-0.3倍。
4.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述初步纯化步骤中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的体积比为1:0.2-0.3:0.02-
0.03。
5.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述鱿鱼墨粗多糖提取液制备步骤为：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:1.5-2.5向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在35-45℃下热水浸提3-5h，然后在0-5℃下继续浸提10-15h，离心，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液。
6.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述固相萃取柱层析步骤为：按料液比为1:4-6（g/mL）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在70-90℃下加热溶解20-
30min，离心，沉淀物重复上述操作2-3次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，用超纯水洗柱2-4个柱体积，浓缩收集液，备用。
7.根据权利要求5所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述固相萃取柱层析步骤中固相萃取柱中的填料为微波改性活性炭。
8.根据权利要求6所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述微波改性活性炭的制备方法为：将活性炭置于浓度为3-6%的盐酸溶液中煮沸，并保持40-50min，滤去水分后用去离子水反复冲洗至中性，接着在100-120℃下烘干20-30h，然后将活性炭在微波功率为
600-700W的条件下微波辐射4-6min，即得改性活性炭。
9.根据权利要求7所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述盐酸溶液中含有
0.021-0.025%的马兜铃酸。
10.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述离子交换柱层析步骤为：将浓缩收集液上DEAE-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-2mol/L的NaCl溶液分段梯度洗脱，控制流速为1-2mL/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经6000-10000Da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。
鱿鱼墨多糖的提取方法
技术领域
背景技术
发明内容
鱿鱼墨粗多糖提取液制备：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:1.5-2.5向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在35-45℃下热水浸提3-5h，然后在0-5℃下继续浸提10-15h，在
8000-10000rpm下离心22-28min，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用，水提取粗多糖具有条件温和、简单等特点，超滤可以除去小分子无机盐、低聚糖等杂质，不需要采用其他方法，节约生产成本和能耗；
初步纯化：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶，在pH为6.5-7.5、55-65℃下酶解8-15min，酶解结束后在90-100℃下灭酶10-20min，然后在转速为8000-12000r/min的离心机中离心15-25min，将上清液中加入0.2-0.3倍体积的正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌20-40min，直至除去杂质蛋白，然后在转速为8000-12000r/min的离心机中离心15-25min，再浓缩至原体积的18-25%，再加入3-5倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，然后在转速为
8000-12000r/min的离心机中离心15-25min，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖，脂肪和蛋白质的存在不仅会影响鱿鱼墨多糖的纯度，还会影响鱿鱼墨多糖的理化性质、结构及活性，因此除去蛋白质是多糖提取过程中一个必不可少的环节，该步骤结合酶法和正丁醇、氯仿、三乙醇胺方法，能使鱿鱼墨粗多糖中的脂肪被水解成甘油和脂肪酸、蛋白质被水解成氨基酸和低分子肽，进而可初步除去脂肪和蛋白质，同时能够有效的脱除多糖液中游离及酶解的蛋白质，并保证多糖的存在，有效的降低了多糖的损失率；
固相萃取柱层析：按料液比为1:4-6（g/mL）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在70-90℃下加热溶解20-30min，然后在转速为4000-6000r/min的离心机中离心3-8min，沉淀物重复上述操作2-3次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，用超纯水洗柱2-4个柱体积，浓缩收集液，备用，鱿鱼墨粗多糖中含有较多色素杂质，如果直接上色谱柱容易堵塞填料，很难继续上样，增加了分离纯化的难度，该步骤可除去鱿鱼墨粗多糖中的色素，利于后续试验的顺利进行，且该方法使得多糖的损失率较低；
离子交换柱层析：将浓缩收集液上DEAE-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-2mol/L的NaCl溶液分段梯度洗脱，控制流速为1-2mL/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经6000-10000Da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。
具体实施方式
鱿鱼墨多糖的提取方法，包括鱿鱼墨粗多糖提取液制备、初步纯化、固相萃取柱层析、离子交换柱层析，其具体步骤为：
1）鱿鱼墨粗多糖提取液制备：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:2.5向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在35℃下热水浸提5h，然后在0℃下继续浸提15h，在8000rpm下离心
28min，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用，水提取粗多糖具有条件温和、简单等特点，超滤可以除去小分子无机盐、低聚糖等杂质，不需要采用其他方法，节约生产成本和能耗；
2）初步纯化：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶，在pH为6.5、65℃下酶解8min，酶解结束后在100℃下灭酶10min，然后在转速为12000r/min的离心机中离心
15min，将上清液中加入0.3倍体积的正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌20min，直至除去杂质蛋白，然后在转速为12000r/min的离心机中离心15min，再浓缩至原体积的
25%，再加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，然后在转速为12000r/min的离心机中离心15min，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖，脂肪和蛋白质的存在不仅会影响鱿鱼墨多糖的纯度，还会影响鱿鱼墨多糖的理化性质、结构及活性，因此除去蛋白质是多糖提取过程中一个必不可少的环节，该步骤结合酶法和氯仿、正丁醇方法，能使墨汁中的脂肪被水解成甘油和脂肪酸、蛋白质被水解成氨基酸和低分子肽，进而可初步除去脂肪和蛋白质，同时能够有效的脱除多糖液中游离及酶解的蛋白质，并保证多糖的存在，有效的降低了多糖的损失率；
3）固相萃取柱层析：按料液比为1:6（g/mL）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在70℃下加热溶解30min，然后在转速为4000r/min的离心机中离心8min，沉淀物重复上述操作2次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，以除去部分色素，用超纯水洗柱4个柱体积，浓缩收集液，备用；
4）离子交换柱层析：将浓缩收集液上DEAE-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-
2mol/L的NaCl溶液分段梯度洗脱，控制流速为1mL/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经10000Da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。
1）鱿鱼墨粗多糖提取液制备：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:1.5向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在45℃下热水浸提3h，然后在5℃下继续浸提10h，在10000rpm下离心
22min，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用；
2）初步纯化：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶，在pH为7.5、55℃下酶解15min，酶解结束后在90℃下灭酶20min，然后在转速为8000r/min的离心机中离心
25min，将上清液中加入0.2倍体积的正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌40min，直至除去杂质蛋白，然后在转速为8000r/min的离心机中离心25min，再浓缩至原体积的
18%，再加入5倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，然后在转速为8000r/min的离心机中离心25min，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖，上述正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的体积比为1:0.2:0.03；
3）固相萃取柱层析：按料液比为1:4（g/mL）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在90℃下加热溶解20min，然后在转速为6000r/min的离心机中离心3min，沉淀物重复上述操作3次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，以除去部分色素，用超纯水洗柱2个柱体积，浓缩收集液，备用；
4）离子交换柱层析：将浓缩收集液上DEAE-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-
2mol/L的NaCl溶液分段梯度洗脱，控制流速为2mL/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经6000Da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。
1）鱿鱼墨粗多糖提取液制备：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:2.0向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在40℃下热水浸提4h，然后在4℃下继续浸提12h，在9000rpm下离心
25min，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用；
2）初步纯化：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶，在pH为7.0、60℃下酶解10min，酶解结束后在95℃下灭酶15min，然后在转速为10000r/min的离心机中离心
20min，将上清液中加入0.25倍体积的正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌
30min，直至除去杂质蛋白，然后在转速为10000r/min的离心机中离心20min，再浓缩至原体积的20%，再加入4倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，然后在转速为10000r/min的离心机中离心20min，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖，上述正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的体积比为1:0.25:0.025；
3）固相萃取柱层析：按料液比为1:5（g/mL）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在80℃下加热溶解25min，然后在转速为5000r/min的离心机中离心5min，沉淀物重复上述操作2次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，用超纯水洗柱3个柱体积，浓缩收集液，备用，上述固相萃取柱中的填料为微波改性活性炭，其制备方法为：将活性炭置于浓度为4%的盐酸溶液中煮沸，并保持48min，滤去水分后用去离子水反复冲洗至中性，接着在110℃下烘干24h，然后将活性炭在微波功率为650W的条件下微波辐射5min，即得改性活性炭，上述盐酸溶液中含有0.024%的马兜铃酸；
4）离子交换柱层析：将浓缩收集液上DEAE-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-
2mol/L的NaCl溶液分段梯度洗脱，控制流速为1.5mL/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经8000Da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
