技术领域
[0001] 本
发明属于保健品领域，尤其涉及一种杞龙SOD营养口服液的加工工艺及配方。
背景技术
[0002] SOD是Super Oxide Dismutase缩写，中文名称超
氧化物歧化酶，是
生物体内重要的抗
氧化酶，在生物界的分布极广，几乎从动物到
植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内的
水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的
疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。由于现代生活压
力，环境污染，各种
辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要。
[0003] 超氧化物歧化酶按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含
铜(Cu)锌(Zn)金属辅基的称(Cu、ZnSOD)，最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机
体细胞浆中；第二种是是含锰(Mn)金属辅基的称(Mn、SOD)，呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含
铁(Fe)金属辅基的称(Fe、SOD)，呈黄褐色，存在于原核细胞中。
[0004] 目前，我国一般从
牛、
马、猪、鸡狗等动物血中提取SOD丰富，消耗的成本比较高，T通过检索发现，目前还没有从地龙中提取SOD制成保健口服液的案例。
发明内容
[0005] 本发明针对上述技术问题，提供了一种从地龙中提取SOD制成保健口服液的杞龙SOD营养口服液的加工工艺及配方。
[0006] 本发明所采用的技术方案为：
[0007] 一种杞龙SOD营养口服液的加工工艺，其特征在于：包括如下步骤：
[0008] 一、地龙SOD的提取
[0009] (1)养殖：以蔬菜、秸秆、菌棒、蔗渣、薯渣经特殊工艺处理后做
饲料养殖蚯蚓；
[0010] (2)除污：将所述步骤(1)中所得的养殖活蚯蚓洗净，置于新鲜水中或含量≤0.3％(以重量计)的
有机酸钠盐中清洗消毒，直至其消化道内的污物被彻底清除，然后再除去其表面躯体上的所有污物；
[0011] (3)蚓汁制备：将所述步骤(2)中所得的除污后活蚯蚓进行湿磨，得到的蚓汁在-60℃～-10℃的
温度下冷冻后储存；
[0012] (4)粗酶液的提取：将所述步骤(3)中所得的新鲜蚓汁或其冷冻物在PH值7.4-7.8、20-30mmol/LTris-Gly缓冲液中匀浆至1-3L/kg，搅拌1～2小时，然后在
10000-20000r/min下离心15-45分钟，弃沉淀物得清液；
[0013] (5)热变性、丙
酮沉淀：将所述步骤(4)中所得的清液在60-70℃加热5～25分钟，然后冷却至2-6℃，过滤后的滤液中加入1-2倍体积的丙酮，收集沉淀，沉淀物用少量的PH值7.4-7.8、20-30mmol/L Tris-Gly缓冲液溶解，弃沉淀物得上清液；
[0014] (6)粗提纯：将所述步骤(5)中所得的上清液在搅拌下加入内含5-15molMg2+、2+ 2+
5-15molCu 、5-15molZn 的化合物，使上清液的
饱和度达40-50％，继续搅拌10-20分钟，然后在1500-2500r/min下离心20-40分钟，弃去沉淀，向上清液中继续加入
硫酸铵溶液，使其饱和度达60-70％，离心收集沉淀；
[0015] (7)柱层析：将所述步骤(6)中所得的沉淀溶解在PH值7.4-7.8、20-30mmol/L缓2-
冲液中，接着
透析至无SO 4为止，
透析液最后上DEAE-Sephadex A-50层析柱，收集洗脱液，浓缩、冷却、干燥，即得蓝绿色的Cu、ZnSOD。
[0016] 二、浓缩液的制备
[0017] (ⅰ)精选处理：人工挑选干净、无杂质、无污染的辅药；
[0018] (ⅱ)加水煎煮、浓缩：将所述步骤(ⅰ)中选出的辅药用砂锅或搪瓷锅加水煎煮，加水量以浸没药材2～3cm为宜，沸后改用文火慢煎40-60分钟，煎药时要搅拌药料2-3次，每剂一般煎二次，得到煎煮混合物；
[0019] (ⅲ)过滤：将所述步骤(ⅱ)中所得到的煎煮混合物进行过滤，除去药渣，得到煎煮药液；
[0021] (a)混合：将所述步骤(7)中所得的Cu、ZnSOD加入所述步骤(ⅲ)中所得的煎煮药液中，搅拌均匀，得到混合营养液；
[0022] (b)灭菌、过滤：将全玻璃
过滤器的过滤器和微孔滤膜在121℃度下灭菌30分钟，在无菌超净
工作台上取出后安装到位，然后再对所述步骤(a)中所得的混合营养液进行抽滤过滤，检验合格，得到无菌营养液；
[0023] (c)灌装：将所述步骤(b)中所得的无菌营养液经
电子计量灌装，得到灌装营养液；
[0024] (d)质检：对所述步骤(c)中所得的灌装营养液进行质检，质检合格，即得成品。
[0025] 所述步骤一中的最优地龙SOD的提取步骤为：
[0026] (1)养殖：以蔬菜、秸秆、菌棒、蔗渣、薯渣经特殊工艺处理后做饲料养殖蚯蚓；
[0027] (2)除污：将所述步骤(1)中所得的养殖活蚯蚓洗净，置于新鲜水中或含量≤0.3％(以重量计)的有机酸钠盐中清洗消毒，直至其消化道内的污物被彻底清除，然后再除去其表面躯体上的所有污物；
[0028] (3)蚓汁制备：将所述步骤(2)中所得的除污后活蚯蚓进行湿磨，得到的蚓汁在-60℃～-10℃的温度下冷冻后储存；
[0029] (4)粗酶液的提取：将所述步骤(3)中所得的新鲜蚓汁或其冷冻物在PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液中匀浆至2L/kg，搅拌1～2小时，然后在15000r/min下离心30分钟，弃沉淀物得清液；
[0030] (5)热变性、丙酮沉淀：将所述步骤(4)中所得的清液在65℃加热10～20分钟，然后冷却至4℃，过滤后的滤液中加入1.25倍体积的丙酮，收集沉淀，沉淀物用少量的PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液溶解，弃沉淀物得上清液；
[0031] (6)粗提纯：将所述步骤(5)中所得的上清液在搅拌下加入内含10molMg2+、2+ 2+
10molCu 、10molZn 的化合物，使上清液的饱和度达45％，继续搅拌15分钟，然后在
2000r/min下离心30分钟，弃去沉淀，向上清液中继续加入硫酸铵溶液，使其饱和度达
65％，离心收集沉淀；
[0032] (7)柱层析：将所述步骤(6)中所得的沉淀溶解在PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓2-
冲液中，接着透析至无SO 4为止，透析液最后上DEAE-Sephadex A-50层析柱(柱床体积为
2.5×50cm)，收集洗脱液，浓缩、冷却、干燥，即得蓝绿色的Cu、ZnSOD。
[0033] 所述步骤(1)中的地龙为养殖的鲜活赤子爱胜蚓。
[0034] 一种杞龙SOD营养口服液的配方，其特征在于：包括地龙SOD与辅药。
[0035] 所述辅药为茯苓、大枣、枸杞子、阿胶、桑椹、
银耳，杞龙SOD营养口服液中各成分及其
质量份数组成为：地龙SOD100-140份、茯苓45-85份、大枣20-60份、枸杞子60-100份、阿胶40-80份、桑椹25-65份、银耳60-100份。
[0036] 杞龙SOD营养口服液中各成分及其最优质量分数组成为：地龙SOD120份、茯苓65份、大枣40份、枸杞子80份、阿胶60份、桑椹45份、银耳80份。
[0037] 所述辅药为砂仁、肉桂、丁香，杞龙SOD营养口服液中各成分及其质量分数组成为：地龙SOD160-200份、砂仁90-130份、肉桂110-150份、丁香100-140份。
[0038] 杞龙SOD营养口服液中各成分及其最优质量分数组成为：地龙SOD180份、砂仁110份、肉桂130份、丁香120份。
[0039] 所述辅药为山楂、芦荟、决明子、荷叶、沙棘，杞龙SOD营养口服液中各成分及其质量分数组成为：地龙SOD120-160份、山楂60-100份、芦荟100-140份、决明子65-105份、荷叶50-90份、沙棘100-140份。
[0040] 杞龙SOD营养口服液中各成分及其最优质量分数组成为：地龙SOD140份、山楂80份、芦荟120份、决明子85份、荷叶70份、沙棘120份。
[0041] 本发明的有益效果为：
[0042] 1、开创了从地龙中提取SOD并制成保健口服液的先河，本发明口感好、保健效果好、无不良影响；
[0043] 2、辅药为茯苓、大枣、枸杞子、阿胶、桑椹、银耳或砂仁、肉桂、丁香或山楂、芦荟、决明子、荷叶、沙棘，辅料不同，适于不同病症，应用范围广；
[0044] 3、当杞龙SOD营养口服液中各成分及其质量份数组成为：地龙SOD100-140份、茯苓45-85份、大枣20-60份、枸杞子60-100份、阿胶40-80份、桑椹25-65份、银耳60-100份时，本品具有辅助保健功能，能增强人体免疫调节功能，同时具有清热、息
风、通络、平喘、利尿功能；
[0045] 4、当杞龙SOD营养口服液中各成分及其质量分数组成为：地龙SOD160-200份、砂仁90-130份、肉桂110-150份、丁香100-140份时，本品具有辅助保健功能，服用后缓解体力疲劳，同时具有清热、息风、通络、平喘、利尿功能；
[0046] 5、当杞龙SOD营养口服液中各成分及其质量分数组成为：地龙SOD120-160份、山楂60-100份、芦荟100-140份、决明子65-105份、荷叶50-90份、沙棘100-140份时，本品具有辅助保健功能，具有辅助降血脂功能，同时具有清热、息风、通络、平喘、利尿功能；
[0047] 6、杞龙SOD营养口服液加工工艺简单、实用，易于推广，具有很高的经济效益；
[0048] 7、地龙SOD提取效率高，利于地龙SOD的充分利用，节约原料；
[0049] 8、地龙为养殖的鲜活赤子爱胜蚓，成本低、SOD提取效率高。
具体实施方式
[0050] 本发明中各中药成分的作用如下：
[0051] 1、茯苓
[0052] 性味归经：甘、淡、平，归心、脾、肾经；
[0053] 功能主治：利水渗湿、补中健脾、宁心安神。
[0054] 2、大枣
[0055] 性味归经：甘、温，归脾、胃经；
[0056] 功能主治：补中益气，养血安神。
[0057] 3、枸杞子
[0058] 性味归经：甘、平，归肝、肾经；
[0059] 功能主治：滋补肝肾，益精明目。
[0060] 4、阿胶、
[0063] 5、桑椹
[0064] 性味归经：味甘、酸，性寒，入肝、肾经；
[0065] 功能主治：滋阴补血、生津润燥、润肠排毒。
[0066] 6、银耳
[0067] 性味归经：味甘、淡，性平、无毒，归肺经、胃经、肾经；
[0068] 功能主治：具有强精、补肾、润肠、益胃、补气、和血、强心、壮身、补脑、提神、美容、嫩肤、延年益寿之功效；提高肝脏解毒能力，保护肝脏功能，它不但能增强
机体抗
肿瘤的免疫能力，还能增强肿瘤患者对放疗、化疗的耐受力；滋补生津、润肺养胃、补肺益气。
[0069] 7、砂仁
[0070] 性味归经：味辛、性温，归脾、胃、肾经；
[0071] 功能主治：行气健胃、化湿止呕、安胎。
[0072] 8、肉桂
[0073] 性味归经：味辛、甘，性热，归肾、心、脾、肝经；
[0074] 功能主治：补元阳、暖脾胃、除积冷、通血脉、降压。
[0075] 9、丁香
[0076] 性味归经：味辛、温、无毒，入胃、脾、肾经；
[0077] 功能主治：温中、暖肾、降逆，治呃逆、呕吐、反胃、痢疾、心腹冷痛、痃癖、疝气、癣症。
[0078] 10、山楂
[0079] 性味归经：酸甘、微温，入脾、胃、肝经；
[0080] 功能主治：消食积、散瘀血、驱绦虫、消食健胃、行气散瘀。
[0081] 11、芦荟
[0082] 性味归经：苦、寒，归肺、大肠经；
[0083] 功能主治：清热通便、清肝除烦、杀虫消疳。
[0084] 12、决明子
[0085] 性味归经：苦、微寒，归肝、大肠经；
[0086] 功能主治：清热明目、润肠通便、减肥。
[0087] 13、荷叶
[0088] 性味归经：味苦辛微涩、性凉性味寒凉，归心、肝、脾经；
[0089] 功能主治：清香升散、消暑利湿、健脾升阳、散瘀止血。
[0090] 14、沙棘
[0091] 性味归经：性温味酸涩；
[0092] 功能主治：活血散淤、化痰宽胸、生津止渴、清热止泻。
[0094] 实施例1-9
[0095] 一种杞龙SOD营养口服液的加工工艺，包括如下步骤：
[0096] 一、地龙SOD的提取
[0097] (1)养殖：以蔬菜、秸秆、菌棒、蔗渣、薯渣经特殊工艺处理后做饲料养殖鲜活的赤子爱胜蚓；
[0098] (2)除污：将所述步骤(1)中所得的养殖活蚯蚓洗净，置于新鲜水中或含量≤0.3％(以重量计)的有机酸钠盐中清洗消毒，直至其消化道内的污物被彻底清除，然后再除去其表面躯体上的所有污物，有机酸钠盐选用
次氯酸钠；
[0099] (3)蚓汁制备：将所述步骤(2)中所得的除污后活蚯蚓进行湿磨，得到的蚓汁在-60℃～-10℃的温度下冷冻后储存；
[0100] (4)粗酶液的提取：将所述步骤(3)中所得的新鲜蚓汁或其冷冻物在PH值7.5、22mmol/LTris-Gly缓冲液中匀浆至2.5L/kg，搅拌1～2小时，然后在18000r/min下离心
18分钟，弃沉淀物得清液；
[0101] (5)热变性、丙酮沉淀：将所述步骤(4)中所得的清液在63℃加热15～25分钟，然后冷却至3℃，过滤后的滤液中加入1.5倍体积的丙酮，收集沉淀，沉淀物用少量的PH值7.5、22mmol/L Tris-Gly缓冲液溶解，弃沉淀物得上清液；
[0102] (6)粗提纯：将所述步骤(5)中所得的上清液在搅拌下加入内含8molMg2+、8mol2+ 2+
Cu 、8molZn 的化合物，使上清液的饱和度达48％，继续搅拌15分钟，然后在2200r/min下离心35分钟，弃去沉淀，向上清液中继续加入硫酸铵溶液，使其饱和度达62％，离心收集沉淀；
[0103] (7)柱层析：将所述步骤(6)中所得的沉淀溶解在PH值7.5、22mmol mmol/L缓冲2-
液中，接着透析至无SO 4为止，透析液最后上DEAE-Sephadex A-50层析柱，收集洗脱液，浓缩、冷却、干燥，即得蓝绿色的Cu、ZnSOD。
[0104] 二、浓缩液的制备
[0105] (ⅰ)精选处理：人工挑选干净、无杂质、无污染的辅药；
[0106] (ⅱ)加水煎煮、浓缩：将所述步骤(ⅰ)中选出的辅药用砂锅或搪瓷锅加水煎煮，加水量以浸没药材2～3cm为宜，沸后改用文火慢煎40-60分钟，煎药时要搅拌药料2-3次，每剂一般煎二次，得到煎煮混合物；
[0107] (ⅲ)过滤：将所述步骤(ⅱ)中所得到的煎煮混合物进行过滤，除去药渣，得到煎煮药液；
[0108] 三、口服营养液的制备
[0109] (a)混合：将所述步骤(7)中所得的Cu、ZnSOD加入所述步骤(ⅲ)中所得的煎煮药液中，搅拌均匀，得到混合营养液；
[0110] (b)灭菌、过滤：将全玻璃过滤器的过滤器和微孔滤膜在121℃度下灭菌30分钟，在无菌超净工作台上取出后安装到位，然后再对所述步骤(a)中所得的混合营养液进行抽滤过滤，检验合格，得到无菌营养液；
[0111] (c)灌装：将所述步骤(b)中所得的无菌营养液经电子计量灌装，得到灌装营养液；
[0112] (d)质检：对所述步骤(c)中所得的灌装营养液进行质检，质检合格，即得成品。
[0113] 口服营养液中的各成分按照表1的用量配制并按照上述工艺制备：
[0114] 表1口服营养液中的各成分及其用量
[0115]
[0116]
[0117] 实施例10-18
[0118] 一种杞龙SOD营养口服液的加工工艺，包括如下步骤：
[0119] 一、地龙SOD的提取
[0120] (1)养殖：以蔬菜、秸秆、菌棒、蔗渣、薯渣经特殊工艺处理后做饲料养殖鲜活的赤子爱胜蚓；
[0121] (2)除污：将所述步骤(1)中所得的养殖活蚯蚓洗净，置于新鲜水中或含量≤0.3％(以重量计)的有机酸钠盐中清洗消毒，直至其消化道内的污物被彻底清除，然后再除去其表面躯体上的所有污物，有机酸钠盐选用
柠檬酸钠；
[0122] (3)蚓汁制备：将所述步骤(2)中所得的除污后活蚯蚓进行湿磨，得到的蚓汁在-60℃～-10℃的温度下冷冻后储存；
[0123] (4)粗酶液的提取：将所述步骤(3)中所得的新鲜蚓汁或其冷冻物在PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液中匀浆至2L/kg，搅拌1～2小时，然后在15000r/min下离心30分钟，弃沉淀物得清液；
[0124] (5)热变性、丙酮沉淀：将所述步骤(4)中所得的清液在65℃加热10～20分钟，然后冷却至4℃，过滤后的滤液中加入1.25倍体积的丙酮，收集沉淀，沉淀物用少量的PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓冲液溶解，弃沉淀物得上清液；
[0125] (6)粗提纯：将所述步骤(5)中所得的上清液在搅拌下加入内含10molMg2+、2+ 2+
10molCu 、10molZn 的化合物，使上清液的饱和度达45％，继续搅拌15分钟，然后在
2000r/min下离心30分钟，弃去沉淀，向上清液中继续加入硫酸铵溶液，使其饱和度达
65％，离心收集沉淀；
[0126] (7)柱层析：将所述步骤(6)中所得的沉淀溶解在PH值7.6、25mmol/LTris-Gly缓2-
冲液中，接着透析至无SO 4为止，透析液最后上DEAE-Sephadex A-50层析柱(柱床体积为
2.5×50cm)，收集洗脱液，浓缩、冷却、干燥，即得蓝绿色的Cu、ZnSOD。
[0127] 步骤二、三同实施例1-9。
[0128] 口服营养液中的各成分按照表2的用量配制并按照上述工艺制备：
[0129] 表2口服营养液中的各成分及其用量
[0130]
[0131] 实施例19-27
[0132] 一种杞龙SOD营养口服液的加工工艺，包括如下步骤：
[0133] 一、地龙SOD的提取
[0134] (1)养殖：以蔬菜、秸秆、菌棒、蔗渣、薯渣经特殊工艺处理后做饲料养殖鲜活的赤子爱胜蚓；
[0135] (2)除污：将所述步骤(1)中所得的养殖活蚯蚓洗净，置于新鲜水中或含量≤0.3％(以重量计)的有机酸钠盐中清洗消毒，直至其消化道内的污物被彻底清除，然后再除去其表面躯体上的所有污物，有机酸钠盐选用次氯酸钠；
[0136] (3)蚓汁制备：将所述步骤(2)中所得的除污后活蚯蚓进行湿磨，得到的蚓汁在-60℃～-10℃的温度下冷冻后储存；
[0137] (4)粗酶液的提取：将所述步骤(3)中所得的新鲜蚓汁或其冷冻物在PH值7.7、28mmol/LTris-Gly缓冲液中匀浆至2.5L/kg，搅拌1～2小时，然后在12000r/min下离心
40分钟，弃沉淀物得清液；
[0138] (5)热变性、丙酮沉淀：将所述步骤(4)中所得的清液在68℃加热5分钟，然后冷却至3℃，过滤后的滤液中加入1.8倍体积的丙酮，收集沉淀，沉淀物用少量的PH值7.7、28mmol/L Tris-Gly缓冲液溶解，弃沉淀物得上清液；
[0139] (6)粗提纯：将所述步骤(5)中所得的上清液在搅拌下加入内含12molMg2+、12mol2+ 2+
Cu 、12molZn 的化合物，使上清液的饱和度达43％，继续搅拌16分钟，然后在1600r/min下离心35分钟，弃去沉淀，向上清液中继续加入硫酸铵溶液，使其饱和度达68％，离心收集沉淀；
[0140] (7)柱层析：将所述步骤(6)中所得的沉淀溶解在PH值7.7、28mmol/L缓冲液中，2-
接着透析至无SO 4为止，透析液最后上DEAE-Sephadex A-50层析柱，收集洗脱液，浓缩、冷却、干燥，即得蓝绿色的Cu、ZnSOD。
[0141] 步骤二、三同实施例1-9。
[0142] 口服营养液中的各成分按照表3的用量配制并按照上述工艺制备：
[0143] 表3口服营养液中的各成分及其用量
[0144]
[0145]
[0146] 药效试验：
[0147] 共选取270名不同疾病患者，其中免疫调节功能低下类、身体疲劳类、高血脂类各90例，实施例1-3、10-12、19-21分别由10名免疫调节功能低下类患者服用，实施例4-6、
13-15、22-24分别由10名身体疲劳类患者服用，实施例7-9、16-18、25-27分别由10名高血脂类患者服用，30天为1个
疗程，连续服用1个疗程，症状改善效果如表4。
[0148] 如表4症状改善效果
[0149]
[0150]
[0151]
[0153] 免疫调节功能低下类：
[0154] 效果明显指免疫性能显著提高，如胃炎、
乳腺炎、腺体
炎症具有显著缓解；
[0155] 基本痊愈指免疫性能有很大提高，如胃炎、乳腺炎、腺体炎症具有很大缓解；
[0156] 效果一般指免疫性能有一般改善，如胃炎、乳腺炎、腺体炎症具有一般缓解；
[0157] 身体疲劳类：
[0158] 效果明显指身体疲劳显著缓解，如晚上睡眠质量显著提高；
[0159] 基本痊愈指身体疲劳很大缓解，如晚上睡眠质量很大提高；
[0160] 效果一般指身体疲劳一般改善，如晚上睡眠质量一般提高；
[0161] 高血脂类：进行血脂数值测定
[0162] 效果明显指血脂显著降低；
[0163] 基本痊愈指血脂降低幅度比较大；
[0164] 效果一般指血脂降低幅度比较小；
[0165] 总有效率的计算方式为：总有效率＝效果明显+基本痊愈
[0166] 由以上数据可以看出，实施例1-3、10-12、19-21的总有效率达均到了90％以上，由此说明当杞龙SOD营养口服液中各成分及其质量份数组成为：地龙SOD100-140份、茯苓45-85份、大枣20-60份、枸杞子60-100份、阿胶40-80份、桑椹25-65份、银耳60-100份，具有很好的免疫调节功能；在患者使用过程中，还发现具有清热、息风、通络、平喘、利尿功能；在相同的制作工艺条件下，其中以实施例2、11、20的有效率最高，说明杞龙SOD营养口服液中各成分及其最优质量分数组成为：地龙SOD120份、茯苓65份、大枣40份、枸杞子80份、阿胶60份、桑椹45份、银耳80份；
[0167] 实施例4-6、13-15、22-24的总有效率达均到了90％以上，由此说明当杞龙SOD营养口服液中各成分及其质量分数组成为：地龙SOD160-200份、砂仁90-130份、肉桂110-150份、丁香100-140份，具有很好的缓解身体疲劳功能；在患者使用过程中，还发现具有清热、息风、通络、平喘、利尿功能；在相同的制作工艺条件下，其中以实施例5、14、23的
