一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束及其制备方法
专利汇可以提供一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了包裹疏 水 性抗癌药物的双亲性缓释靶向共聚物胶束及其制备方法。其制备方法为，先制备双 氨 基聚乙二醇 聚合物 ，后通过双氨基聚乙二醇聚合物制备单氨基聚乙二醇叔丁酯聚合物，后和丙交酯交联得到叔丁 氧 基酰胺基聚乙二醇-聚乳酸聚合物再与三氟乙酸反应得到端氨基聚乙二醇-聚乳酸聚合物，与活化的叶酸避光反应得叶酸-聚乙二醇-聚乳酸聚合物。该化合物具有疏水端的亲水性、 生物 相容性 和 水溶性 ，能减少 蛋白质 对材料的 吸附 和细胞的粘附，延长药物在血液中的循环时间，形成的共聚物具有可修饰性；低分子量的 肿瘤 靶向化合物与和亲水性的聚乙二醇-4000链段键合构成亲水段。疏水段为聚乳酸，疏水性抗癌药物包埋进疏水段，降低毒 副作用 。，下面是一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，其特征在于，由疏水性抗癌药物包埋在两亲型嵌段共聚物的疏水端即聚乳酸端中，且在聚乙二醇-4000端接上小分子的靶向剂而得。
2.根据权利要求1所述的一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，其特征在于，所述疏水性抗癌药物包括阿霉素或卡佩他滨；所述两亲型嵌段共聚物为聚乙二醇-聚乳酸；所述靶向剂为叶酸。
3.一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）双氨基聚乙二醇（NH2-PEG-NH2）的制备：
取15~25g聚乙二醇-4000溶于30~50ml的二氯甲烷溶液中，加入三乙胺，其中三乙胺和聚乙二醇-4000的质量比为1：12~14，于0~4℃下滴加浓度为0.3~0.4g/mL的对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，其中对甲苯磺酰氯与聚乙二醇-4000的质量比为1:2~3，在室温反应6~8h，旋转蒸发溶液，然后滴至无水乙醚中，经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，于真空干燥箱中干燥48~60h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品；
将得到的聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品和体积分数为25~30%氨水置于耐压容器中，其中聚乙二醇-对甲苯磺酸酯在氨水中的浓度为0.5~0.66g/mL，在100~140℃下密闭反应
6~8h，冷却至室温，用二氯甲烷萃取，在有机层中加入氢氧化钠调节pH至8.5~9，搅拌2~3h后静置，分出有机层，水洗至中性，蒸干后得到双氨基聚乙二醇（NH2-PEG-NH2）；
（2）单氨基聚乙二醇叔丁酯（BOC-PEG-NH2）的合成：
将步骤（1）得到的NH2-PEG-NH2溶于0.1~0.3M的NaHCO3水溶液中，其中NH2-PEG-NH2在NaHCO3水溶液的浓度为0.2~0.3g/mL，调节pH为8.5~9，在室温下搅拌1~2h；将二碳酸二叔丁酯溶于15~20mL二氧六环中，其中二碳酸二叔丁酯与NH2-PEG-NH2的质量比为
0.07~0.1:1，冷却后在冰水浴环境下滴加到NH2-PEG-NH2的水溶液中，再在室温下搅拌
2~8h，后调节溶液的pH值至10~11，通过旋转蒸发除去溶剂，剩下的固体用过量的二氯甲烷溶解，通过过滤除去不溶物，将溶液滴至0~4℃的冷乙醚中，真空干燥箱中干燥，得到单氨基聚乙二醇叔丁酯（BOC-PEG-NH2）；
（3）叔丁氧基酰胺-聚乙二醇-聚乳酸 （BOC-PEG-PLA）的制备：
将步骤（2）制得的BOC-PEG-NH2和丙交酯按质量比为1:10~15混合均匀，加入聚合管中，真空封闭聚合管聚合，在120~140℃反应36~48h，将得到的产物用二氯甲烷溶解，后滴加到0~4℃的冷甲醇中，析出的产物放到真空干燥箱中干燥，得到叔丁氧基酰胺基-乙二醇-聚乳酸 （BOC-PEG-PLA），备用；
（4）端氨基聚乙二醇-聚乳酸（NH2-PEG-PLA）的制备：
将制得的叔丁氧基酰胺基-聚乙二醇-聚乳酸 （BOC-PEG-PLA）置于20~30 mL二氯甲烷中，其中BOC-PEG-PLA在二氯甲烷中的浓度为0.04~0.05g/mL，滴入1~2 mL的三氟乙酸，室温下搅拌2~6h，然后滴入-20~0℃的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥；
（5）叶酸-聚乙二醇-聚乳酸（FA-PEG-PLA）的制备：
将叶酸溶于二甲基亚砜（DMSO）中，其中叶酸在二甲基亚砜（DMSO）的浓度为
0.05~0.1g/mL， N2保护下室温避光反应12h~18h，得到活化叶酸；
将制得的NH2-PEG-PLA和活化叶酸溶于二氯甲烷中，其中NH2-PEG-PLA和叶酸质量比为
6~10:1，NH2-PEG-PLA和活化叶酸在二氯甲烷的浓度为0.2~0.3g/mL，混合均匀，在N2的保护下于室温避光搅拌12~24h，然后滤出不溶物，旋转蒸发浓缩溶液，然后滴加到0~4℃的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥，得到叶酸-聚乙二醇-聚乳酸（FA-PEG-PLA）共聚物；
（6）将FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物溶于二甲基甲酰胺中，其中FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物的质量比5~10:1，FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物在二甲基甲酰胺中的浓度为0.12~2.2g/mL，不断地搅拌至溶解；
（7）将溶液移至透析袋中，用蒸馏水透析24~36 h，每3~4h换一次蒸馏水；
（8）将透析袋中的胶束溶液高速离心，抽滤除杂，除去未包埋的药物，冷冻干燥得包裹阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，干燥器中保存。
4.根据权利要求3所述的一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的制备方法，其特征在于，步骤（6）中所述疏水性抗癌药物包括阿霉素或卡佩他滨。
5.根据权利要求3所述的一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束的制备方法，其特征在于，步骤（7）中所述透析袋的截留分子量（MwCO）低于聚合物分子量，分子量选用3500~4000。
一种包裹疏水性抗癌药物的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段
共聚物胶束及其制备方法
技术领域
背景技术
引入聚乙二醇-4000增加了聚乳酸的亲水性，可提高载体的生物相容性和分散性;引入疏水段的聚乳酸控制药物的释放速度。中科院、成都有机化学所都已经用该材料制备空白微球并包封膜蛋白和白蛋白，证明了该共聚物可以较好的包封蛋白；但是经查阅文献，尚无该种共聚物包裹卡培他滨的有关实验研究的报道。另外，在共聚物的亲水段（聚乙二醇-4000）接上叶酸，叶酸的主动靶向性是通过叶酸受体介导细胞内化将叶酸摄入。在这种核壳胶束的亲水性表面连接叶酸分子能明显的增加和叶酸受体的肿瘤细胞之间的亲和力和选择性，也增强对肿瘤细胞的细胞毒性。
发明内容
取15~25g聚乙二醇-4000溶于30~50ml的二氯甲烷溶液中，加入三乙胺，其中三乙胺和聚乙二醇-4000的质量比为1：12~14，于0~4℃下滴加浓度为0.3~0.4g/mL的对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，其中对甲苯磺酰氯与聚乙二醇-4000的质量比为1:2~3，在室温反应6~8h，旋转蒸发溶液，然后滴至无水乙醚中，经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，于真空干燥箱中干燥48~60h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品；
将得到的聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品和体积分数为25~30%氨水置于耐压容器中，其中聚乙二醇-对甲苯磺酸酯在氨水中的浓度为0.5~0.66g/mL，在100~140℃下密闭反应
6~8h，冷却至室温，用二氯甲烷萃取，在有机层中加入氢氧化钠调节pH至8.5~9，搅拌2~3h后静置，分出有机层，水洗至中性，蒸干后得到双氨基聚乙二醇（NH2-PEG-NH2）；
（2）单氨基聚乙二醇叔丁酯（BOC-PEG-NH2）的合成：
将步骤（1）得到的NH2-PEG-NH2溶于0.1~0.3M的NaHCO3水溶液中，其中NH2-PEG-NH2在NaHCO3水溶液的浓度为0.2~0.3g/mL，调节pH为8.5~9，在室温下搅拌1~2h；将二碳酸二叔丁酯溶于15~20mL二氧六环中，其中二碳酸二叔丁酯与NH2-PEG-NH2的质量比为
0.07~0.1:1，冷却后在冰水浴环境下滴加到NH2-PEG-NH2的水溶液中，再在室温下搅拌
2~8h，后调节溶液的pH值至10~11，通过旋转蒸发除去溶剂，剩下的固体用过量的二氯甲烷溶解，通过过滤除去不溶物，将溶液滴至0~4℃的冷乙醚中，真空干燥箱中干燥，得到单氨基聚乙二醇叔丁酯（BOC-PEG-NH2）；
（3）叔丁氧基酰胺-聚乙二醇-聚乳酸 （BOC-PEG-PLA）的制备：
将步骤（2）制得的BOC-PEG-NH2和丙交酯按质量比为1:10~15混合均匀，加入聚合管中，真空封闭聚合管聚合，在120~140℃反应36~48h，将得到的产物用二氯甲烷溶解，后滴加到0~4℃的冷甲醇中，析出的产物放到真空干燥箱中干燥，得到叔丁氧基酰胺基-乙二醇-聚乳酸 （BOC-PEG-PLA），备用；
（4）端氨基聚乙二醇-聚乳酸（NH2-PEG-PLA）的制备：
将制得的叔丁氧基酰胺基-聚乙二醇-聚乳酸 （BOC-PEG-PLA）置于20~30 mL二氯甲烷中，其中BOC-PEG-PLA在二氯甲烷中的浓度为0.04~0.05g/mL，滴入1~2 mL的三氟乙酸，室温下搅拌2~6h，然后滴入-20~0℃的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥。
0.05~0.1g/mL， N2保护下室温避光反应12h~18h，得到活化叶酸；
将制得的NH2-PEG-PLA和活化叶酸溶于二氯甲烷中，其中NH2-PEG-PLA和叶酸质量比为
6~10:1，NH2-PEG-PLA和活化叶酸在二氯甲烷的浓度为0.2~0.3g/mL，混合均匀，在N2的保护下于室温避光搅拌12~24h，然后滤出不溶物，旋转蒸发浓缩溶液，然后滴加到0~4℃的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥，得到叶酸-聚乙二醇-聚乳酸（FA-PEG-PLA）共聚物；
（6）将FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物溶于二甲基甲酰胺中，其中FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物的质量比5~10:1，FA-PEG-PLA共聚物和疏水性抗癌药物在二甲基甲酰胺中的浓度为0.12~2.2g/mL，不断地搅拌至溶解；
（7）将溶液移至透析袋中，用蒸馏水透析24~36 h，每3~4h换一次蒸馏水；
（8）将透析袋中的胶束溶液高速离心，抽滤除杂，除去未包埋的药物，冷冻干燥得包裹阿霉素的叶酸-聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物胶束，干燥器中保存。
具体实施方式
取15g聚乙二醇-4000溶于50mL的二氯甲烷溶液中，加入1.25g三乙胺，于0℃下滴加含7.5g对甲苯磺酰氯25mL的二氯甲烷溶液，在室温反应6h。旋转蒸发溶液，然后滴至无水乙醚中。经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，于真空干燥箱中干燥48h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品。
0℃的冷乙醚中，真空干燥箱中干燥。
4h，然后滴入-20℃的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥。
72h、96h、120h、144h、168h取样，利用紫外分光光度法测定上清液中的药物浓度，每次取透析液10mL，并补充PBS缓冲溶液10mL。释放度=释放介质中药物的量/含药胶束中的药物含量×100%。释放总时间为7天，根据时间和累积释放百分比得到药物释放曲线。结果如图1所示，可以看出24h前释药速度快，释药量约占总药量的37.8%。168h后释药量约占总药量的54.4%。近似于零级释放。突释效应小，表现出良好的缓释性能。
（1）双氨基聚乙二醇（NH2-PEG-NH2）的制备
取20g聚乙二醇-4000溶于50mL的二氯甲烷溶液中，加入1.54g三乙胺，于2℃下滴加含8g对甲苯磺酰氯的23mL二氯甲烷溶液，在室温反应7h。旋转蒸发溶液，然后滴至无水乙醚中。经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，与真空干燥箱中干燥54h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品。
2℃的冷乙醚中，真空干燥箱干燥。
（4）端氨基聚乙二醇-聚乳酸（NH2-PEG-PLA）的制备
取制得的BOC-PEG-PLA 1.0g置于25mL二氯甲烷中，滴入1.5 mL的三氟乙酸，室温下搅拌5h，然后滴入-20℃的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥。
（1）双氨基聚乙二醇（NH2-PEG-NH2）的制备
取25g聚乙二醇-4000溶于50mL的二氯甲烷溶液中，加入1.786g三乙胺，于0℃下滴加含8.33g对甲苯磺酰氯的21mL的二氯甲烷溶液，在室温反应8h。旋转蒸发溶液，然后滴至无水乙醚中。经过抽滤得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯的粗品，再经过反复的溶解沉淀去除多余的对甲苯磺酰氯，放真空干燥箱中干燥60h，得到聚乙二醇-对甲苯磺酸酯纯品。
4℃冷乙醚中，真空干燥箱干燥。
6h，然后滴入-20℃的冷甲醇中，析出产物放到真空干燥箱中干燥。
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