用拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法
专利汇可以提供用拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且一种基于拉曼 光谱 在金 纳米棒 端面自组装介导下的检测微囊藻毒素(MC-LR)的方法，属于免疫分析化学技术领域。本 发明 以金纳米棒的端面与微囊藻毒素的包被原及抗微囊藻毒素的 抗体 分别偶联形成金纳米棒的探针，利用合成的金纳米棒探针进行免疫反应从而由于金纳米棒端面的 抗原 抗体反应形成纳米链，组装形成的纳米链长度的不同使拉曼 信号 强度不同，通过拉曼信号的变化达到检测MC-LR含量的目的。本发明是在液体环境中反应，不需要清洗的步骤，只需要一步反应，简化了反应的条件，减轻劳动强度，提高了检测的灵敏度。，下面是用拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法专利的具体信息内容。
1.一种基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于步骤为：
(1)包被原的修饰：
将微囊藻毒素MC-LR的包被原与硫辛酸相偶联得到修饰的藻毒素包被原；
(2)抗体的修饰：
将抗微囊藻毒素MC-LR的抗体与硫辛酸相偶联得到修饰的抗微囊藻毒素MC-LR的抗体；
(3)用步骤(1)得到的修饰的藻毒素包被原与金纳米棒的端面偶联得到金纳米棒-包被原探针GNR-Ag；
(4)用步骤(2)得到的修饰的抗微囊藻毒素MC-LR的抗体与金纳米棒的端面偶联得到金纳米棒-抗体探针GNR-Ab；
(5)信号分子4-氨基苯硫酚和GNR-Ab金纳米捧的侧面偶联；
(6)微囊藻毒素MC-LR含量检测：利用间接竞争免疫检测原理，将微囊藻毒素MC-LR和步骤(3)得到的金纳米棒-包被原探针同时加入到一个离心管中，而后向离心管中加入步骤(4)得到的金纳米棒-抗体探针，混匀，通过微囊藻毒素MC-LR和金纳米棒-包被原探针与金纳米棒-抗体探针进行竞争偶联，通过微囊藻毒素MC-LR浓度的不同使形成的金纳米粒子形成不同的粒径分布，不同程度组装形成的纳米链对于拉曼信号的增强作用不同，通过拉曼仪器测定液体环境中的纳米链对于信号分子所产生的信号强度来间接测定微囊藻毒素的含量。
2.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于包被原的修饰：
①含硫辛酸1.625mg的0.3mL的硫辛酸的乙醇溶液与含2mg的0.2mL的藻毒素包被原溶液混合；
②将75μL的碳二亚胺在磁力搅拌的条件下逐滴滴入上述溶液中后室温反应4h；
③用pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析三天，每天换三次透析液；
④将修饰后的藻毒素包被原放在4℃备用。
3.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于抗体的修饰：
①含硫辛酸1.625mg的0.3mL的硫辛酸的乙醇溶液与含4mg的0.4mL的藻毒素抗体混合；
②将75μL的碳二亚胺在磁力搅拌的条件下逐滴滴入上述溶液中后室温反应4h；
③用pH 7.4的磷酸盐缓冲液透析三天，每天换三次透析液；
④将修饰后的藻毒素抗体放在4℃备用。
4.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于金纳米棒-抗体探针的制备：采用晶种生长法合成金纳米棒，合成的金纳米棒利用pH 3.8、含有0.1％聚乙二醇PEG的0.005M十六烷基三甲基溴化铵CTAB稀释溶液进行重悬，重悬液采用1M HCl调整pH值3.1，0.5mL浓度为2nmol重分散的金纳米棒逐滴滴加到由50μL经修饰后的藻毒素抗体中，最终分散到1mL的稀释溶液中，采用硫辛酸修饰的藻毒素抗体会修饰到金棒的端面而非侧面上，室温搅拌反应4h，反应结束后6000rpm离心10min，用1mL的pH 3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液进行重分散，洗涤两遍；最后用50μL的pH 3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液进行重分散；此金纳米棒-抗体探针，即金纳米棒-藻毒素抗体偶联物GNR-Ab置于4℃保存。
5.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于金纳米棒-包被原探针的制备：藻毒素包被原和金纳米棒的偶联与权利要求4所述藻毒素抗体和金纳米棒的偶联相似，只是在包被原的量上有区别，即加入的藻毒素包被原60μL后用940μL的pH3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液进行稀释；此金纳米棒-包被原探针，即金纳米棒-藻毒素包被原偶联物GNR-Ag置于4℃保存。
6.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于信号分子4-氨基苯硫酚和GNR-Ab金纳米捧的侧面偶联：在495μL偶联上藻毒素抗体的金纳米棒分散液中，加入5μL浓度为100mM的4-氨基苯硫酚的乙醇溶液，至金纳米棒-藻毒素抗体偶联物分散液中4-氨基苯硫酚的最终浓度为1mM，室温震荡避光反应12h，反应结束后6000rpm离心10min，运用1mL的pH 3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液进行重分散，洗涤两遍，最后用50μL的pH 3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液进行重分散，此信号分子4-氨基苯硫酚偶联在GNR-Ab金纳米捧的侧面，4-氨基苯硫酚与GNR-Ab偶联物置于4℃保存。
7.根据权利要求1所述的基于拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素的方法，其特征在于标准曲线的建立：通过测定拉曼信号大小进行MC-LR的检测，步骤为：
①免疫反应：向各个离心管中各加入20μL的GNR-Ag后，再向各离心管加入用pH3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液稀释的0.01，0.05，0.1，1，10，50，100ng/mL的微囊藻毒素后混匀，按照GNR-Ag与GNR-Ab的体积比为1∶1加入GNR-Ab混匀，放入37℃反应30min；
②仪器检测：反应结束，反应液中加入等量的pH3.8、含有0.1％PEG的0.005M CTAB溶液稀释，混匀，静置2min，用拉曼仪测定该反应液中的信号分子的强度-峰面积，重复三次；
运用MC-LR的浓度作为横坐标，拉曼信号强度为纵坐标建立标准曲线，检测限LOD通过公式LOD＝3.3SD/S计算得出，SD为变异系数，S为标准曲线的斜率。
用拉曼光谱在金纳米棒端面自组装介导下检测微囊藻毒素
的方法
技术领域
背景技术
发明内容
具体实施方式
0.005M CTAB(pH3.8)含有0.1％PEG的溶液进行重分散。 此信号分子4-氨基苯硫酚偶联在GNR-Ab金纳米捧的侧面，4-氨基苯硫酚与GNR-Ab偶联物置于4℃保存。
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
