在美国估计每年约新出现30,000例丙型肝炎病毒(HCV)感染 (Kolykhalov，A.A.；Mihalik，K.；Feinstone，S.M.；Rice，C.M.；2000；J.Virol. 74：2046-2051)。HCV不易由宿主的免疫防御清除；感染HCV的人口中有 85％变成慢性感染。许多这些持续感染导致慢性肝病，包含肝硬化及肝细 胞癌(Hoofnagle，J.H.；1997；Hepatology 26：15S-20S)。估计全球约有17000万 人为HCV携带者，且与HCV相关的末期肝病现为导致肝移植的主要原因。 仅在美国，丙型肝炎每年即有约8,000至10,000个死亡病例。若没有有效 的干预，在未来10至20年内预期该数量将变为现在的三倍。并无疫苗可 预防HCV感染。
以干扰素或干扰素与利巴伟林(ribavirin)的组合治疗慢性感染的患者是 目前唯一认可的疗法。最近，PEG化的干扰素(PEG化干扰素α-2a(PegasysTM， Roche)和PEG化干扰素α-2b(PEG-IntroTM，Schering))在一些国家被认可上市 用于治疗慢性丙型肝炎感染，两者都可以单独和与利巴韦林组合使用。但 据报道这些治疗在少于60％的病例中获得了持续反应。
HCV属于黄病毒属家族、丙型肝炎病毒属(genus hepacivirus)，其包括 三种小的、有包膜的正链RNA病毒属(Rice，C.M.；1996；“Flaviviridae：the viruses and their replication”；pp.931-960in Fields Virology；Fields，B.N.； Knipe，D.M.；Howley，P.M.(eds.)；Lippincott-Raven Publishers，Philadelphia Pa.)。HCV的9.6kb基因组是由侧接5′及3′非翻译区(NTR)的长可读框(ORF) 所构成。该HCV 5′NTR长度为341个核苷酸，且作用为用于不依赖于帽的 翻译启动的内部核糖体进入位点(Lemon，S.h.；Honda，M.；1997； Semin.Virol.8：274-288)。该HCV多聚蛋白以共翻译及翻译后方式被切割成 至少10个单独的多肽(Reed，K.E.；Rice，C.M.；1999；Curr.Top.Microbiol. Immunol.242：55-84)。该结构蛋白质源自该多聚蛋白N-末端部分的信号肽 酶。两个病毒性蛋白酶介导下游断裂而产生非结构(NS)蛋白质，其作用为 HCV RNA复制酶的成分。该NS2-3蛋白酶跨越NS2的C-端一半及NS3的 N-端三分之一，并催化NS2/3位点的顺式切割。NS3的相同部分还编码 NS3-4A丝氨酸蛋白酶的催化区，所述酶在4个下游位点进行切割。NS3的 C-端三分之二在HCV分离株(isolate)中为高度保守的，具有RNA-结合、 RNA-刺激的NTPase及RNA解链活性。虽然NS4B及NS5A磷蛋白也可以 为复制酶的成分，但其具体作用仍未知。该C-端多聚蛋白质断裂产物， NS5B，为具有RNA-依赖性RNA聚合酶(RdRp)活性的HCV复制酶的延长 亚基(Behrens，S.E.；Tomei，L.；DeFrancesco，R.；1996；EMBO J.15：12-22；and Lohmann，V.；Krner，F.；Herian，U.；Bartenschlager，R.；1997；J.Virol.71： 8416-8428)。近来已证明破坏NS5B活性的突变在黑猩猩模型中可消除RNA 感染性(Kolykhalov，A.A.；Mihalik，K.；Feinstone，S.M.；Rice，C.M.；2000；J. Virol.74：2046-2051)。
新的、具体的抗-HCV治疗的发展为高度优先的，且对复制必须的病毒 特异性功能为药物发展最引人注意的目标。哺乳动物中不存在有RNA依赖 性RNA聚合酶，且此酶似乎为病毒复制所必须的事实将提示该NS5B聚合 酶为抗-HCV疗法的理想靶。WO 01/47883，WO 02/04425，WO 03/000254， WO 03/0007945，WO 03/010140，WO 03/026587，WO 03/101993，WO 04/005286，WO 2004/064925，WO 2004/065367和WO 2004/087714提出 NS5B抑制剂可用于HCV的治疗。
HCV的NS5B聚合酶的吲哚抑制剂揭示在WO 03/010141。然而，本发 明的抑制剂不同于该等揭示在WO 03/010141中的抑制剂，其在细胞-基础 HCV RNA复制实验中表现出来意想不到的良好活性。
发明概述
本发明提供一新系列化合物，其对于HCV聚合酶具有好至很好的抑制 活性和/或在细胞-基础的HCV RNA复制实验中具有意想不到的良好活性。
本发明另一目标对于本领域技术人员来说得自下列描述和实例。
在本发明的第一方面，提供式I表示的化合物，或其对映异构体、非 对映异构体或互变异构体，包括其盐或酸类。

其中：
A或B为N且另一个B或A为C，其中两个C-原子之间的-----代表双键以 及在C-原子和N-原子之间的-----代表单键；
R1为H或(C1-6)烷基；
R2选自卤素、氰基、(C1-6)烷基、(C2-6)链烯基、(C2-6)炔基、(C3-7)环烷基、芳 基和Het；该芳基和Het是任选地被R21取代；
其中R21为一、二或三个取代基，其各自选自-OH、-CN、-N(RN2)RN1、 卤素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基、Het和-CO-N(RN2)RN1；
其中该(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基各自任选地被一、二 或三个卤素原子取代；
R3为(C5-6)环烷基，任选地被一至四个卤素原子取代；
R4和R7各自独立地选自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基，(C1-6)烷硫基、-NH2、 -NH(C1-6)烷基、-N((C1-6)烷基)2和卤素；
R5和R6之一选自COOH、-CO-N(RN2)RN1、芳基、Het和(C2-6)链烯基，其 中芳基、Het、(C2-6)链烯基和RN1或任何在RN2和RN1之间形成的杂环基是 各自任选地被R50取代；
其中R50为一、二或三个取代基，其各自独立地选自(C1-6)烷基、-COOH， -OH、氧代、-N(RN2)RN1，-CO-N(RN2)RN1和卤素，其中(C1-6)烷基是任选 地被芳基或-N(RN2)RN1取代；
且R5和R6的另一个选自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基和 N(RN2)RN1；
R8为(C1-6)烷基、(C3-7)环烷基或(C3-7)环烷基-(C1-6)烷基-；
其中该烷基、环烷基和环烷基-烷基各自任选地被一、二或三个各自独 立地选自卤素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；
R9和R10各自独立地选自(C1-6)烷基；或R9和R10连接，并与其相连接的碳 原子共同形成(C3-7)环烷基、(C3-7)环烯基或具有1至3个各自独立地选自O， N和S的杂原子的4-，5-或6-员杂环；
其中该环烷基、环烯基或杂环基是在各自情况下任选地被(C1-4)烷基所 取代；
RN1选自H、(C1-6)烷基、(C3-7)环烷基、(C3-7)环烷基-(C1-6)烷基-、-CO-(C1-6) 烷基、-CO-O-(C1-6)烷基和Het；
其中该(C1-6)烷基、(C3-7)环烷基、(C3-7)环烷基-(C1-6)烷基、-CO-(C1-6)烷 基和-CO-O-(C1-6)烷基中各烷基和环烷基部分任选地被一、二或三个各 自独立地选自卤素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；且
RN2为H或(C1-6)烷基，或
RN2和RN1可以连接，并与其相连接的氮原子共同形成4-、5-、6-或7-员饱 和、不饱和或芳香含N杂环基或8-、9-、10-或11-员含N饱和、不饱和或 芳香杂双环，各自任选地还具有1至3个各自独立地选自O、N和S的杂 原子；
其中由RN2和RN1形成的杂环或杂双环是任选地被一、二或三个各自独
立地选自卤素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基所取代； 其中Het定义为一4-、5-、6-或7-员杂环，具有1至4个杂原子，其各自选 自O，N和S，该杂环可以为饱和、不饱和或芳香的，或8-、9-、10-或11 员杂双环，在可能的位置具有1至5个杂原子，其各自选自O、N和S，该 杂环可以为饱和、不饱和或芳香的。
如前文中所述的式(I)的化合物包括在本发明的范畴内，其至少连接有 “可检测标识”、“亲和标记”和“光活性基团”之一。
根据本发明的化合物普遍显示具有抗HCV聚合酶的抑制活性。根据本 发明的具体化合物可利用HCV的RNA依赖性RNA聚合酶抑制RNA合成， 特别是利用HCV编码的NS5B酶。再者，根据本发明的化合物在细胞基础 的HCV RNA复制实验中显示意想不到的到的良好活性。本发明提供的化合 物的另一好处为它们对其他聚合酶的低至极低或甚至无显著的活性。
在本发明第二方面，提供根据本发明化合物的式I化合物或其药学上 可接受的盐或酯或其组合物的用途，作为HCV聚合酶抑制剂，优选作为由 HCV编码的酶NS5B的RNA依赖性RNA聚合酶活性抑制剂。
在本发明第三方面，提供根据本发明化合物的式I化合物或其药学上 可接受的盐或酯或其组合物的用途，作为HCV复制的抑制剂。
在本发明第四方面，提供根据本发明化合物的式I化合物或其药学上 可接受的盐或酯或其组合物的用途，用作治疗或预防哺乳动物HCV感染。
在本发明第五方面，提供抑制由HCV编码的酶NS5B的RNA-依赖RNA 聚合酶活性的方法，包括在酶NS5B的RNA-依赖RNA聚合酶活性受到抑 制的条件下，使酶NS5B暴露在有效量的式I化合物中。
在本发明第六方面，提供抑制HCV复制的方法，包括在HCV复制受 到抑制的条件下，使受到HCV感染的细胞暴露在有效量的式I化合物中。
在本发明第七方面，提供治疗或预防哺乳动物HCV感染的方法，包括 给药于该哺乳动物有效量的根据本发明的式I化合物，或其药学上可接受的 盐或酯，或其组合物。
在本发明第八方面，提供治疗或预防哺乳动物HCV感染的方法，包括 给药于该哺乳动物有效量的式I化合物，或其药学上可接受的盐或酯，或其 组合物，并组合至少一种抗病毒药物。
在本发明第九方面，提供用于治疗或预防HCV感染的药物组合物，包 含有效量根据本发明的式I化合物，或其药学上可接受的盐或酯，以及药学 上可接受的载体。
根据具体实施例方式，本发明的药物组合物还包含治疗有效量的一种 或多种抗病毒药物。抗病毒药物的实例包括(但不限于)利巴韦林和金刚烷胺 (amantadine)。
根据另一具体具体实例，本发明的药物组合物还包含至少一种作为抗 病毒药物的其他抗-HCV剂。
根据另一具体实施方式，本发明的药物组合物包含另外的免疫调节剂 作为其他抗-HCV剂。其他免疫调节剂的实例包括(但不限于)α-、β-、δ-、 γ-、τ和ω-干扰素及其聚乙二醇化形式(pegylated forms)。
根据另一具体实施方式，本发明的药物组合物还包含至少一种HCV聚 合酶的其他抑制剂作为其他抗-HCV剂。
根据另一具体实施方式，本发明的药物组合物还包含至少一种HCV NS3蛋白酶的抑制剂作为其他抗-HCV剂。
根据另一具体实施方式，本发明的药物组合物还包含至少一种在HCV 生命周期中其他靶标的抑制剂作为其他抗-HCV剂。其他靶标的这样的抑制 剂实例包括(但不限于)抑制如下靶标的药物，所述靶标选自HCV解旋酶、 HCV NS2/3蛋白酶和HCV IRES，以及干扰其他病毒靶标功能的药物，包括 (但不限于)NS5A蛋白质。
在本发明第十方面，提供根据本发明式I化合物的用途，或其药学上 可接受的盐或酯或其组合物的用途，用于制备用于治疗和/或预防黄病毒属 病毒感染优选HCV感染的药物。
在本发明第十一方面是制品主题，该制品包含能够有效治疗或预防 HCV感染或抑制HCV的NS5B聚合酶的组合物，以及包装材料，该包装材 料包含显示该组合物可用于治疗丙型肝炎病毒的标识，标识中写明该组合 物包含根据本发明式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或酯。
发明详述
除非另有说明否则将使用下列定义：
如本文中所使用，术语“(C1-n)烷基”，其中n为整数，单独或与其他基 团组合，是分别指包含1至n个碳原子的非环直链或支链烷基基团。这样 的烷基实例包括(但不限于)甲基、乙基、正-丙基、1-甲基乙基(异-丙基)、正 -丁基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1，1-二甲基乙基(叔丁基)、正戊基等。在 下述中，术语Me代表甲基。
如果烷基被卤素取代，优选为被氟单-、二-或三取代或被氯或溴单取代。
如本文中所使用，术语“(C2-n)链烯基”，其中n为整数，单独或与其他 基团组合，是指包含2至n个碳原子的不饱和、非环直链或支链基团，其 中至少有两个碳原子通过双键互相键合。这样的链烯基的实例包括(但不限 于)乙烯基(乙烯基)、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基等。该术语包括(C2-n) 链烯基的顺式和反式异构体及其混合物。(C2-n)链烯基可在其任何碳原子上 被取代，否则其将带有氢原子。
如本文中所使用，术语“(C2-n)炔基”，其中n为整数，单独或与其他基 团组合，指包含2至n个碳原子的非环、直链或支链基团，其中至少有两 个碳原子通过三键键合。这样的炔基的实例包括(但不限于)乙炔基、1-丙炔 基、2-丙炔基和1-丁炔基。(C2-n)炔基基团可在其任何碳原子上被取代，否 则其将带有氢原子。
如本文中所使用，术语“(C3-n)环烷基”，其中n为整数，单独或与其他 基团组合，指包含3至n个碳原子的环烷基。这样的环烷基的实例为包括(但 不限于)环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
如本文中所使用，术语“(C5-n)环烯基”，其中n为整数，单独或与其他 基团组合，指包含5至n个碳原子的不饱和环状基团。实例包括(但不限于) 环戊烯基和环己烯基。
如本文中所使用，术语“(C3-m)环烷基-(C1-n)烷基-”，其中n和m为整 数，单独或与其他基团组合，指含有三至m个碳原子的环烷基共价结合到 具有1至n个碳原子的支链或直链烷基。(C3-7)环烷基-(C1-6)烷基-的实例包 括(但不限于)环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基、1-环丙 基乙基、2-环丙基乙基、1-环丁基乙基、2-环丁基乙基、1-环戊基乙基、2- 环戊基乙基、1-环己基乙基、2-环己基乙基等。
如本文中所使用，术语“保护性基团”定义为可用在合成转变期间的 保护性基团，这些实例列在Greene，“Protective Groups in Organic Chemistry”， John Wiley & Sons，New York(1981)及“The Peptides：Analysis，Synthesis， Biology”，Vol.3，Academic Press，New York(1981)中。
羧基基团通常被保护成酯，酯可被切断而得到羧酸。可使用的保护性 基团包括(但不限于)：1)烷基酯例如甲基、乙基、三甲基硅烷基乙基和叔丁 基，2)芳烷基酯例如苯甲基和被取代苯甲基，或3)可利用弱碱处理或弱还原 性方法切断的酯，例如三氯乙基和苯甲酰甲基酯。
如本文中所使用，术语“芳基”，单独或与其他基团组合，指6-或10 员芳基，即含有六或十个碳原子的芳基基团。实例包括(但不限于)苯基、1- 萘基或2-萘基。
如本文中所使用，术语“Het”定义为具有1至4个各自独立地选自 O，N和S的杂原子的4-、5-、6-或7-员杂环基，可以为饱和、不饱和或芳 香的，或8-、9-、10-或11员杂双环，在可能的位置具有1至5个各自独立 地选自O、N和S的杂原子，除非另有说明否则该环可以为饱和、不饱和 或芳香的。
如本文中所使用，术语“杂原子”指O、S或N。
如本文中所使用，术语“杂环”，单独或与其他基团组合，指可利用将 氢原子从五-、六-或七-员饱和或不饱和(包括芳香的)的含有一至四个选自 氮、氧和硫的杂原子的杂环中除去而衍生出来的单价游离基。该杂环的实 例包括(但不限于)吖啶(azetidine)、吡咯烷、四氢呋喃、噻唑烷、吡咯、噻吩 (thiophene)、乙内酰脲(hydantoin)、二氮杂(diazepine)、1H-咪唑、异唑、 噻唑、四唑、哌啶、哌嗪、高哌啶(homopiperidine)、高哌嗪(homopiperazine)、 1，4-二烷、4-吗啉、4-硫吗啉、吡啶、吡啶-N-氧化物或嘧啶，或下列杂环：

如本文中所使用，术语“9-或10-员杂双环”或“杂双环”，单独或与 其他基团组合，指如上定义稠合到一个或多个其他环(杂双环基或任何其他 环)上的杂环基。该杂双环的实例包括(但不限于)吲哚、苯并咪唑、噻唑并 [4，5-b]-吡啶、喹啉(quinoline)或香豆素，或如下列所示：

如本文中所使用，术语“卤”或“卤素”指卤素原子并包括氟、氯、 溴和碘。
如本文中所使用，术语“OH”是指羟基基团。本领域技术人员熟知羟 基基团可被等价的官能团取代。包括在本发明范畴内的这些价官能团实例 包括(但不限于)醚、巯基、硫醚和伯、仲或叔胺。
如本文中所使用，术语“SH”是指巯基基团。在本发明范畴内，任何 时候出现的“SH”或“SR”基团，其皆可由任何其他适合的氧化态所取代， 例如SOR、SO2R或SO3R。
如本文中所使用，术语“(C1-n)烷氧基”是指还键合到(C1-n)烷基基团 的氧原子。(C1-6)烷氧基的实例包括(但不限于)甲氧基(CH3O-)、乙氧基 (CH3CH2O-)、正丙氧基(CH3CH2CH2O-)、1-甲基乙氧基(异丙氧基； (CH3)2CHO-)、1，1-二甲基乙氧基(叔丁氧基；(CH3)3CO-)等。当(C1-n)烷氧基 基团被取代时，理解为在其(C1-n)烷基部分被取代。
如本文中所使用，术语“(C1-n)烷硫基”是指还键合到(C1-n)烷基基团的 硫原子。(C1-6)烷硫基的实例包括(但不限于)甲硫基(CH3S-)、乙硫基 (CH3CH2S-)、正丙硫基(CH3CH2CH2S-)、1-甲基乙硫基(异丙硫基； (CH3)2CHS-)、1，1-二甲基乙硫基(叔丁硫基(CH3)3CS-)等。当(C1-n)烷硫基基 团被取代时，理解为在其(C1-n)烷基部分取代。
术语“氧代”如本文中所使用，指通过双键作为取代基连接至碳原子 的氧原子(＝O)。
术语“被取代”在连接具有超过一个部分的基团仲被使用，例如(C3-7) 环烷基-(C1-6)烷基-，这样的取代适用于两个部分，即烷基和环烷基部分的其 中一部分或两者都能被已定义的取代基取代。
如本文中所使用，术语“COOH”指羧酸基团。本领域技术人员熟知羧 酸基团可由官能团等价物代替。本发明所包括的该官能团等价物实例包括 (但不限于)酯、酰胺、酰亚胺、硼酸、膦酸(phosphonic acids)、磺酸、四唑 类、三唑类、N-酰基磺酰基二酰胺类(RCONHSO2NR2)和N-酰基磺酰胺类 (RCONHSO2R)。
如本文中所使用，术语“官能团等价物”指元素或基团或其被取代的 衍生物，其可由具有相似电子、杂化或键合性质的元素或基团所代替。
下列符号 和 可在子式中互换地使用以表示该键，或在螺环基 团的情况表示键合到如上定义的该分子其他部分上的原子。
如本文中所使用，术语“可检测标识”指可和聚合酶连接或和本发明 化合物连接的任何基团，这样的连接使得当该化合物与该聚合酶靶标联系 时，该标识使得该化合物可直接或间接得到识别，从而该化合物可检测、 测量和定量。该“标识”的实例包括(但不限于)荧光标识、化学发光标识、 比色标识、酶标记、放射性同位素和亲和标记，例如生物素。利用熟知的 方法将该标识连接在化合物上或聚合酶上。
如本文中所使用，术语“亲和标记”指(可连接到聚合酶或本发明化 合物的)配位体，其对受体的强亲和力可用于从溶液中萃取该配位体所连接 的实体。该配位体的实例包括(但不限于)生物素或其衍生物、组胺多肽、聚 精氨酸、直链淀粉糖部分或可被具体抗体辨识的已定义表位。利用熟知的 方法将该亲和标记连接在化合物上或聚合酶上。
如本文中所使用，术语“光反应基团”指被光活化从惰性基团转变成 反应活性物种的基团，例如自由基。该基团可用作例如光亲和性标识。该 基团的实例包括(但不限于)二苯酮(benzophenones)、叠氮化合物等。
术语“其盐”指根据本发明化合物的任何酸及/或碱加成盐；优选为其 药学上可接受的盐。
术语“药学上可接受的盐”指式(I)的化合物的盐，在可靠的医学判断 范畴内，适用于和人类或比较低等动物的组织接触而不会有不适当毒性、 刺激、过敏反应等问题，符合合理的利益/危险比，一般而言水溶性或油溶 性或可分散且对这些预期用途有效。该术语包括药学上可接受的酸加成盐 和药学上可接受的碱加成盐。适用盐的实例可在例如S.M.Birge等，J.Pharm. Sci.，1977， 66，pp.1-19中发现。
术语“药学上可接受的酸加成盐”指这些盐保留有生物有效性和游离 碱的性质且不是生物上或其他方面所不希望的，其为与无机酸例如盐酸、 氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、磷酸等所形成，以及与有机酸例如醋酸、 三氟醋酸、己二酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、丁酸、樟脑 酸、樟脑磺酸(camphorsulfonic acid)、肉桂酸、柠檬酸、二葡萄糖酸、乙烷 磺酸、谷氨酸、乙醇酸、甘油膦酸、半硫酸(hemisulfic acid)、己酸、甲酸、 富马酸、2-羟基乙磺酸(羟乙基磺酸)、乳酸、羟基马来酸、苹果酸、丙二酸、 扁桃酸、均三甲基苯磺酸(mesitylenesulfonic acid)、甲磺酸、萘磺酸、烟酸、 2-萘磺酸、草酸、双羟萘酸(pamoic acid)、果胶酯酸、苯基醋酸、3-苯丙酸、 特戊酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸(sulfanilic acid)、酒石酸、对-甲苯磺酸、十一烷酸等所形成。
术语“药学上可接受的碱加成盐”指这些盐保留有生物有效性和游离 酸的性质且没有生物上或其他方面所不希望的，其为与无机碱例如氨或金 属阳离子例如钠、钾、锂、钙、镁、铁、锌、铜、镁、铝等或铵的氢氧化 物、碳酸盐或二碳酸盐所形成。尤其优选铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。 衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯、仲和叔胺类的盐、季胺化 合物、被取代的胺类包括天然存在的被取代胺类、环胺类和碱性离子交换 树脂，例如甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、乙基胺、二乙基胺、三乙基胺、 异丙基胺、三丙基胺、三丁基胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、 2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、海巴 明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、亚乙基二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、 可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、四甲基铵化合物、四乙基铵化 合物、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己基胺、 二苯甲基胺、N，N-二苯甲基苯乙基胺、1-二苯羟甲胺(1-ephenamine)、N，N′- 二苯甲基亚乙基二胺、聚胺树脂等。尤其优选的有机无毒碱为异丙基胺、 二乙基胺、乙醇胺、三甲基胺、二环己基胺、胆碱和咖啡因。
术语“其酯”指化合物的任何酯，其中该分子的任何羧基官能团被烷 氧基羧基官能团所代替，包括(但不限于)其药学上可接受酯。
术语“药学上可接受酯”如本文中所使用，可单独或和另一取代基结 合，指式(I)化合物的酯，其分子中任何羧基官能团(但优选为羧基端)被烷氧 基羰基官能团所代替：

其酯的R部分选自烷基(例如甲基、乙基、正丙基、叔丁基、正丁基)；烷氧 基烷基(例如甲氧基甲基)；烷氧基酰基(例如乙酰氧基甲基)；芳烷基(例如苯 甲基)；芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)；芳基(例如苯基)，任选地被卤素、(C1-4) 烷基或(C1-4)烷氧基取代。其他适用的酯可在Design of prodrugs，Bundgaard， H.Ed.Elsevier(1985)中发现。这些药学上可接受酯注射至哺乳动物体内时， 其通常会在体内水解并转变成式(I)化合物的酸形式。关于上述的这些酯， 除非另有说明否则任何存在的烷基部分有利地含有1至16个碳原子，尤其 是1至6个碳原子。存在于该酯的任何芳基部分有利地含有苯基基团。具 体而言，该酯可为(C1-16)烷基酯、未被取代的苯甲酯或被至少一个卤素、(C1-6) 烷基、(C1-6)烷氧基、硝基或三氟甲基取代的苯甲酯。
术语“抗病毒药物”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳动物体内病 毒的形成和/或复制的药物(化合物或生物制品)。该药物包括在哺乳动物体 内干扰宿主或干扰病毒形成和/或复制所需病毒机制的药物。抗病毒药物包 括(但不限于)利巴韦林、金刚烷胺、VX-497(merimepodib，Vertex Pharmaceuticals)、VX-498(Vertex Pharmaceuticals)、利声显(Levovirin)、韦拉 米丁(Viramidine)、赛普林(Ceplene)(二盐酸组胺(maxamine))、XTL-001和 XTL-002(XTL Biopharmaceuticals)。
术语“其他抗-HCV药物”如本文中所使用，指能有效减轻或预防丙型 肝炎相关疾病症状的这些药物。该药物可选自：免疫调节药物、HCV NS3 蛋白酶的抑制剂、HCV聚合酶的其他抑制剂或在HCV生命周期中其他靶标 的抑制剂。
术语“免疫调节剂”如本文中所使用，指能有效强化或加强哺乳动物 体内免疫系统反应的这些药物(化合物或生物制品)。这些免疫调节剂包括 (但不限于)第I类干扰类(例如α-，β-，δ-和ω干扰素、τ-干扰素、共有 干扰素(consensus interferons)和脱唾液酸(asialo)-干扰素)、第II类干扰系(例 如γ-干扰素)及其聚乙二醇化形式(pegylated forms)。
术语“HCV NS3蛋白酶的抑制剂”如本文中所使用，指能有效抑制哺 乳动物体内的HCV NS3蛋白酶功能的药物(化合物或生物制品)。这些HCV NS3蛋白酶抑制剂包括(但不限于)下列所描述的这些化合物：WO 99/07733， WO 99/07734，WO 00/09558，WO 00/09543，WO 00/59929，WO 02/060926， US 2002/0177725，WO 03/053349，WO 03/062265，WO 03/064416，WO 03/064455，WO 03/064456，WO 03/099316，WO 03/099274，WO 2004/032827， WO 2004/037855，WO 2004/043339，WO 2004/072243，WO 2004/093798，WO 2004/094452，WO 2004/101602，WO 2004/101605，WO 2004/103996、经鉴定 为BILN 2061的Boehringer Ingelheim临床候选者以及经鉴定为VX-950的 Vertex临床候选者。
术语“HCV聚合酶的其他抑制剂”如本文中所使用，指能有效抑制哺 乳动物体内HCV聚合酶功能的药物(化合物或生物制品)，其中该药物具有 不同于根据本发明化合物的结构且优选为结合于不同于根据本发明化合物 靶标部位的HCV聚合酶部位。HCV聚合酶其他抑制剂包括非核苷类，例如 下列所描述的这些化合物：WO 2004/087714(IRBM)、WO 04/005286(Gilead)、 WO 04/002977(Pharmacia)、WO 04/002944(Pharmacia)、WO 04/002940(Pharmacia)、WO 03/101993(Neogenesis)、WO 03/099824(Wyeth)、 WO 03/099275(Wyeth)、WO 03/099801(GSK))、WO 03/097646(GSK)、WO 03/095441(Pfizer)、WO 03/090674(Viropharma)、WO 03/084953(B&C Biopharm)、WO 03/082265(Fujisawa)、WO 03/082848(Pfizer)、WO 03/062211(Merck)、WO 03/059356(GSK)、EP 1321463(Shire)、WO 03/040112(Rigel)、WO 03/037893(GSK)、WO 03/037894(GSK)、WO 03/037262(GSK)、WO 03/037895(GSK)、WO 03/026587(BMS)、WO 03/002518(Dong Wha)、WO 03/000254(Japan Tobacco)、WO 02/100846 A1(Shire)、WO 02/100851A2(Shire)、WO 02/098424 A1(GSK)、WO 02/079187(Dong Wha)、WO 03/02/20497(Shionogi)、WO 02/06246(Merck)、 WO 01/47883(Japan Tobacco)、WO 01/85172A1(GSK)、WO 01/85720(GSK)、 WO 01/77091(Tularik)、WO 00/18231(Viropharma)、WO 00/13708(Viropharma)、WO 01/10573(Viropharma)、WO 00/06529(Merck)、 EP 1 256 628 A2(Agouron)、WO 02/04425(Boehringer Ingelheim)、WO 03/007945(Boehringer Ingelheim)、WO 03/010140(Boehringer Ingelheim)、WO 03/010141(Boehringer Ingelheim)、WO 2004/064925(Boehringer Ingelheim)及 WO 2004/065367(Boehringer Ingelheim)。HCV聚合酶的其他抑制剂也包括核 苷类似物，例如下列描述的这些化合物：WO 04/007512(Merck/Isis)、WO 04/003000(Idenix)、WO 04/002999(Idenix)、WO 04/0002422(Idenix)、WO 04/003138(Merck)、WO 03/105770(Merck)、WO 03/105770(Merck)、WO 03/093290(Genelabs)、WO 03/087298(Biocryst)、WO 03/062256(Ribapharm)、 WO 03/062255(Ribapharm)、WO 03/061385(Ribapharm)、WO 03/026675(Idenix)、WO 03/026589(Idenix)、WO 03/020222(Merck)、WO 03/000713(Glaxo)、WO 02/100415(Hoffmann-La Roche)、WO 02/1094289(Hoffmann-La Roche)、WO 02/051425(Mitsubishi)、WO 02/18404(Hoffmann-La Roche)、WO 02/069903(Biocryst Pharmaceuticals Inc.)、 WO 02/057287(Merck/Isis)、WO 02/057425(Merck/Isis)、WO 01/90121(Idenix)、WO 01/60315(Shire)和WO 01/32153(Shire)。
术语“HCV生命周期中另外靶标的抑制剂”如本文中所使用，指能有 效抑制哺乳动物体内HCV的形成和/或复制而不是利用抑制HCV的RNA 依赖性RNA聚合酶的药物(化合物或生物制品)，该药物包括在哺乳动物体 内干扰宿主或干扰病毒形成和/或复制所需病毒机制的药物。HCV生命周期 中另外靶标的抑制剂包括(但不限于)抑制选自HCV解旋酶、HCV NS2/3蛋 白酶和HCV IRES靶标的药物以及干扰其他病毒靶标功能的药物，该靶标 包括(但不限于)NS5A蛋白质。
术语“HIV抑制剂”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳动物体内HCV 形成和/或复制的药物(化合物或生物制品)。该药物包括在哺乳动物体内干 扰宿主或干扰HIV病毒形成和/或复制所需病毒机制的药物。HIV抑制剂包 括(但不限于)核苷抑制剂、非-核苷抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂和 整合酶抑制剂。
术语“HAV抑制剂”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳动物体内HAV 形成和/或复制的药剂(化合物或生物制品)。该药物包括在哺乳动物体内干 扰宿主或干扰HAV形成和/或复制所需病毒机制的药物。该HAV抑制剂包 括(但不限于)甲型肝炎病苗，例如Havrix(GlaxoSmithKline)、 VAQTA(Merck)和Avaxim(Aventis Pasteur)。
术语“HBV抑制剂”如本文中所使用，指能有效抑制哺乳动物体内HBV 形成和/或复制的药物(化合物或生物制品)。该药物包括在哺乳动物体内干 扰宿主或干扰HBV形成和/或复制所需病毒机制的药物。该HBV抑制剂包 括抑制HBV病毒性DNA聚合酶的药物或HBV疫苗。HBV抑制剂的具体 实例包括(但不限于)拉米夫定(Epivir-HBV)、阿德福韦酯(Adefovir Dipivoxil)、恩替卡韦(Entecavir)、FTC(Coviracil)、DAPD(DXG)、 L-FMAU(Clevudine)、AM365(阿墨雷德(Amrad))、Ldt(泰布韦丁 (Telbivudine))、麦洛维-LdC(monoval-LdC)(弗特西他宾(Valtorcitabine))、 ACH-126,443(L-Fd4C)(阿契里恩(Achillion))、MCC478(礼来(Eli Lilly))、瑞西 佛(Racivir)(RCV)、氟(Fluoro)-L和D核苷、罗波斯塔黄酮(Robustaflavone)、 ICN 2001-3(ICN)、宾姆(Bam)205(诺维罗丝(Novelos))、XTL-001(XTL)、亚 胺糖(Imino-Sugars)(Nonyl-DNJ)(Synergy)、HepBzyme；以及免疫调节剂产品 例如：干扰素α2b、HE2000(Hollis-Eden)、表位多肽(Theradigm)(Epimmune)、 EHT899(Enzo Biochem)、胸腺肽(Thymosin)α-1(Zadaxin)、HBV DNA疫苗 (PowderJect)，HBV DNA疫苗(Jefferon Center)、HBV抗原(OraGen)、BayHep B(拜尔(Bayer))、Nabi-HB(纳比(Nabi))和抗-乙型肝炎(肯基因(Cangene))； 以及HBV疫苗产品，例如下列所示：安在时乙肝疫苗(Engerix B)、雷康百 维克斯乙肝疫苗(Recombivax HB)、金海韦乙肝疫苗(GenHevac B)、照顾肝 疫苗(Hepacare)、生-肝乙肝疫苗(Bio-Hep B)、双雷斯疫苗(TwinRix)、康维克 斯(Comvax)、海塞维克(Hexavac)。
术语“第I类干扰素”如本文中所使用，指选自所有和第I型受体结合 的干扰素。这些干扰素包括天然和合成产生的第I类干扰素。第I类干扰素 实例包括(但不限于)α-、β-、δ-、ω-干扰素、τ-干扰素、共有干扰素、 脱唾液酸(asialo)-干扰素及其聚乙二醇化形式(pegylated forms)。
术语“第II类干扰素”如本文中所使用，指自所有和第II型受体结合 干扰素群中选出的干扰素。这些干扰素包括天然和合成产生的第II类干扰 素。第II类干扰素的实例包括(但不限于)γ-干扰素及其聚乙二醇化形式 (pegylated forms)。
如上所讨论，也包括组合治疗，其中式(I)的化合物或其药学上可接受 的盐或酯是和至少一种选自下列的其他药物共同给药：抗病毒药物、免疫 调节剂、HCV NS3蛋白酶的抑制剂、HCV聚合酶的另外抑制剂、HCV生 命周期中其他靶标的抑制剂、HIV抑制剂、HAV抑制剂和HBV抑制剂。这 些药物的实例已在上述定义部分中提供。这些药物尤其优选的实例如下所 列：
■抗病毒药物：利巴韦林或金刚烷胺；
■免疫调节剂：第I类干扰素、第II干扰素或其聚乙二醇化形式(pegylated forms)；
■HCV NS3蛋白酶抑制剂；
■HCV聚合酶的其他抑制剂：核苷或非-核苷抑制剂；
■HCV生命周期中其他靶标的抑制剂，其抑制选自下列的靶标：NS3解旋 酶、HCV NS2/3蛋白酶和内部核醣体进入位点(IRES)，或者是干扰NS5A 蛋白质功能的药物；
■HIV抑制剂：核苷抑制剂、非-核苷抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂 或整合酶抑制剂；或
■HBV抑制剂：抑制HBV病毒DNA聚合酶的药物或是HBV疫苗的药物。
这些其他药物可和本发明化合物组合以创造单一药物剂型。或者这些 其他药剂可以作为多种剂型的一部分，例如使用试剂盒，而分别给药于病 人。这些其他药物可在式(I)化合物或其药学上可接受的盐或酯给药前、给 药同时或给药后给药。
如本文中所使用，术语“治疗”指根据本发明化合物或组合物的给药， 以减轻或消除丙型肝炎疾病的症状和/或减轻病人的病毒负载。
如本文中所使用，术语“预防”指根据本发明化合物或组合物当个人 暴露到该病毒后但在该疾病的症状出现前和/或在达到血液中病毒可检测程 度前的给药。
优选实施方式
除非另有说明否则，包括(但不限于)R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、 R9、R10、R21、R50、RN1、RN2、A、B和Het的所有基团和取代基具有如前 文或本文之后所定义的定义。在下述中，对根据本发明的优选的实施方式、 基团和取代基进行描述。
核心：
本发明包含式Ia的化合物：

或者，本发明包含式Ib的化合物：

R1.
根据本发明优选的实施方式R1选自H、甲基和乙基。
更优选地，R1为甲基。
R2：
优选地，R2选自卤素、氰基、(C1-4)烷基、(C2-4)链烯基、(C2-4)炔基、(C3-6) 环烷基、苯基和选自下式的Het：

其中该苯基和Het为未被取代或被R21取代，其中R21如本文中所定义。
更优选地，R2选自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、 乙烯基、1-甲基乙烯基、乙炔基、环丙基、苯基和选自下式的Het：

其中该苯基和Het为未被取代或被R21取代，其中R21如本文中所定义。
R21：
优选地，R21为1、2或3取代基，其各自独立地选自：
-1至3个取代基，其各自独立地选自卤素；和
-1至2个取代基，其各自独立地选自：
a)羟基、(C1-4)烷基或(C1-4)烷氧基；其中该烷基和烷氧基各自任选地被一、 二或三个卤素原子取代；
b)-NRN2RN1其中
RN1选自H、(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基、-CO-O-(C1-3)烷基和Het； 其中每个该(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基和-CO-O-(C1-3)烷基的烷基部分是 任选地被一、二或三个选自卤素和(C1-6)烷氧基的取代基所取代；且其 中该Het为5-或6-员单环饱和、不饱和或具有1至2个各自独立地选 自N，O和S的杂原子的芳香杂环基；且
RN2为H或(C1-3)烷基；
c)-CONRN2RN1，其中RN2和RN1各自独立地选自H和(C1-3)烷基；以及
d)Het，其中该Het为5-或6-员单环的杂环基，其具有1，2或3个各自独立 地选自N，O和S的杂原子。
更优选地，R21为1，2或3个取代基，其各自独立地选自：
-1至2个取代基，各自独立地选自氟、氯和溴；和
-1至2个取代基，其各自独立地选自：
a)羟基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或1- 甲基乙氧基；其中该甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、 丙氧基和1-甲基乙氧基任选地被一、二或三个卤素原子取代；
b)-N(CH3)2或-NHRN1其中
RN1选自H、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、-CO-CH3、2-吡啶基、 3-吡啶基和4-吡啶基；
其中所述甲基、乙基、丙基和1-甲基乙基各自任选地被一、二或三个 选自卤素和(C1-3)烷氧基的取代基所取代；
c)-CONH2；以及
d)3-吡啶基、4-吡啶基、5-嘧啶基、2-呋喃基、1-吡咯基和1-吗啉代。
因此优选地，R2选自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、 环丙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、乙炔基、


更优选地，R2选自环丙基、乙烯基、1-甲基乙烯基、


更优选地，R2选自：

最优选地，R2选自：

R3：
优选地，R3为环戊基或环己基，各自任选地被一或二个氟原子所取代。
更优选地，R3为环戊基或环己基。
R4和R7：
优选地R4为H或卤素且R7为H。
更优选地，R4为H或Cl且R7为H。
最优选地，R4和R7皆为H。
R5和R6：
优选地，R5和R6之一选自：
a)被COOH或CONHRN1取代的(C2-4)链烯基，其中RN1选自H和(C1-3)烷基、 该链烯基任选地还被一或二个各自独立地选自(C1-3)烷基和卤素的取代 基所取代；
b)苯基或Het，各自任选地被一或二个各自独立地选自以下的取代基取代：
i.-OH、氧代、COOH；
ii.任选地被苯基或-N(RN2)RN1所取代的(C1-3)烷基，其中RN1和RN2各 自独立地选自H和(C1-3)烷基，或RN1和RN2与其相连接的氮原子共 同形成5-或6-员单环、饱和、不饱和或芳香含N杂环，该杂环任选 地还具有一或二个各自独立地选自N，O和S的杂原子；以及
iii.-N(RN2)RN1；其中RN1选自H、(C1-3)烷基和-CO(C1-3)烷基且RN2为H或(C1-3)烷基；
其中Het为5-或6-员单环、饱和、不饱和或芳香杂环，具有1至3个 各自独立地选自O，N和S的杂原子；和
c)COOH；
且R5和R6的另一个选自H、NHRN1、(C1-3)烷基和(C1-3)烷氧基，其中RN1 选自H和-CO-O-(C1-6)烷基。
更优选地，R5和R6之一选自：
a)被COOH或-CONH2取代的(C2-4)链烯基，并任选地还被一或二个选自(C1-3) 烷基和卤素的取代基取代；和
b)苯基或Het，各自任选地被一或二个各自独立地选自以下的取代基取代：
i.-OH、氧代、COOH；
ii.(C1-3)烷基，任选地被苯基、-N(CH3)2或 取代；以及
iii.-NH2，-N(CH3)2和-NHCOCH3； 其中Het选自下式：


c)COOH；
且R5和R6的另一个选自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和 -NHCO-O-CH(CH3)2。
更优选地，R5和R6之一选自：
a)-CH＝CH-COOH或-CH＝CH-CONH2，各自任选地被一或二个选自甲基、 乙基和氟的取代基取代；和
b)任选地被NH2取代的苯基，或 Het，任选地被一或二个各自独立地选自以下的取代基所取代：
i.-OH、氧代、COOH；
ii.甲基或乙基，各自任选地被苯基、-N(CH3)2或 取代；和
iii.-NH2、-N(CH3)2和-NHCOCH3； 其中Het选自下式：

c)COOH；
且R5和R6的另一个选自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和 -NHCO-O-CH(CH3)2。
还更优选地，R5和R6之一选自-COOH、


且R5和R6的另一个选自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和 -NHCO-O-CH(CH3)2。
最优选地，R5和R6之一为 且R5和R6的另一个为H。
或者最优选地，R5和R6之一选自：

且R5和R6的另一个为H。
R8：
优选地，R8选自(C1-5)烷基、(C4-6)环烷基和(C3-4)环烷基-(C1-3)烷基，其 中该(C1-5)烷基是任选地被(C1-3)烷氧基或被一至三个氟原子所取代。
更优选地，R8选自甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、3- 甲基丁基、环丁基、环丙基甲基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基和2-甲氧基乙 基。
最优选地R8为甲基。
R9和R10：
优选地，R9和R10各自独立地选自(C1-3)烷基，或R9和R10连接，并与 其相连接的碳原子共同形成(C3-6)环烷基、(C5-6)环烯基或具有1至2个各自 独立地选自O和N的杂原子的5-或6-员单环杂环；其中该环烷基、环烯基 或杂环各自任选地被(C1-4)烷基取代。
更优选地，基团 选自：

更优选地，基团 选自：

最优选地，基团 为
式I的化合物是包括在本发明的范畴内：

其中：
A或B为N且B或A的另一个为C，其中在两个C-原子之间的-----代表双 键且C-原子和N-原子之间的-----代表单键；
R1为H或(C1-6)烷基；
R2为卤素、芳基或Het；该芳基和Het是任选地被R21取代；
其中R21为一、二或三个取代基，其各自独立地选自-OH，-CN， -N(RN2)RN1、卤素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基、Het和 -CO-N(RN2)RN1；
其中该烷基、烷氧基和烷硫基各自任选地被一、二或三个卤素原 子取代；
R3为(C5-6)环烷基，任选地被一至四个卤素原子所取代；
R4和R7各自独立地选自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基，(C1-6)烷硫基、-NH2、 -NH(C1-6)烷基、-N((C1-6)烷基)2和卤素；
R5和R6之一选自COOH、-CO-N(RN2)RN1、Het和(C2-6)链烯基，其中Het、 (C2-6)链烯基及RN1或在RN2和RN1之间形成的任何杂环各自任选地被R50取 代；
其中R50为一、二或三个取代基，其各自独立地选自(C1-6)烷基、-COOH， -N(RN2)RN1，-CO-N(RN2)RN1和卤素；
且R5和R6的另一个选自H、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、(C1-6)烷硫基和 N(RN2)RN1；
R8为(C1-6)烷基、(C3-7)环烷基或(C3-7)环烷基-(C1-6)烷基-；
其中该烷基、环烷基和环烷基-烷基各自任选地被一、二或三个各自独 立地选自卤素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；
R9和R10各自独立地选自(C1-6)烷基；或R9和R10连接，并与其相连接的碳 原子共同形成(C3-7)环烷基、(C3-7)环烯基或具有1至3个杂原子的4-，5- 或6-员杂环，该杂原子各自独立地选自O、N和S；
其中该环烷基、环烯基或杂环基各自任选地被(C1-4)烷基取代；
RN1选自H、(C1-6)烷基、(C3-7)环烷基、(C3-7)环烷基-(C1-6)烷基-、-CO-(C1-6) 烷基、-CO-O-(C1-6)烷基和Het；
其中所有该烷基和环烷基是任选地被一、二或三个各自独立地选自卤 素、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代；且
RN2为H或(C1-6)烷基，或
RN2和RN1可以连接，并与其相连接的氮原子共同形成4-、5-、6-或7-员饱 和或不饱和含N杂环，或8-、9-、10-或11-员含N杂双环，各自还具有1 至3个各自独立地选自O、N和S的杂原子；
其中该由RN2和RN1形成的杂环或杂双环是任选地被一、二或三个各自
独立地选自卤素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基和(C1-6)烷硫基的取代基取代； 其中Het定义为具有1至4个各自独立地选自O、N和S的杂原子的4-、 5-、6-或7-员杂环，可以为饱和、不饱和或芳香的，或在可能位置具有1至 5个各自独立地选自O、N和S还原杂原子还原8-、9-、10-或11员杂双环， 可以为饱和、不饱和或芳香的；
或其盐。
式(I)尤其是式Ia或Ib的化合物也包括在本发明范畴内，其中：
R1选自H、甲基和乙基；
R2选自卤素、氰基、(C1-4)烷基、(C2-4)链烯基、(C2-4)炔基、(C3-6)环烷基、苯 基和选自下式的Het：

其中该苯基和Het未被取代或被R21取代，其中R21为1，2或3个取代基， 其各自独立地选自：
-1，2或3个取代基，其各自独立地选自卤素；和
-1或2个取代基，其各自独立地选自：
a)羟基、(C1-4)烷基或(C1-4)烷氧基；其中该烷基和烷氧基是各自任选地被一、 二或三个卤素原子取代；
b)-NRN2RN1其中
RN1选自H、(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基、-CO-O-(C1-3)烷基和Het；
其中每个该(C1-3)烷基、-CO-(C1-3)烷基和-CO-O-(C1-3)烷基的烷基部分是 任选地被一、二或三个选自卤素和(C1-6)烷氧基的取代基所取代；且其 中该Het为具有1或2个各自独立地选自N，O和S的杂原子的5-或6- 员单环饱和、不饱和或芳香杂环；且
RN2为H或(C1-3)烷基；
c)-CONRN2RN1，其中RN2和RN1各自独立地选自H和(C1-3)烷基；和
d)Het，其中该Het为具有1，2或3个各自独立地选自N，O和S的杂原子的 5-或6-员单环杂环；
R3为环戊基或环己基，各自任选地被一至四个氟原子所取代；
R4为H或卤素且R7为H；
R5和R6之一选自：
a)被COOH或CONHRN1取代的(C2-4)链烯基，其中RN1选自H和(C1-3)烷基， 该链烯基任选地还被一或二个各自独立地选自(C1-3)烷基和卤素取代基 所取代；
b)苯基或Het，各自任选地被一或二个各自独立地选自以下的取代基所取 代：
i.-OH、氧代、COOH；
ii.任选地被苯基或-N(RN2)RN1取代的(C1-3)烷基，其中RN1和RN2各自 独立地选自H和(C1-3)烷基，或RN1和RN2连接，并与其相连接的氮 原子共同形成5-或6-员单环、饱和、不饱和或芳香含N杂环，该杂 环任选地还具有一或二个各自独立地选自N，O和S的杂原子；和
iii.-N(RN2)RN1；其中RN1选自H、(C1-3)烷基和-CO(C1-3)烷基且RN2为H或(C1-3)烷基；
其中Het为具有1至3个各自独立地选自O、N和S的杂原子的5-或 6-员单环饱和、不饱和或芳香杂环；及
c)COOH；
且R5和R6的另一个选自H，NHRN1、(C1-3)烷基和(C1-3)烷氧基， 其中RN1选自H和-CO-O-(C1-6)烷基；
R8选自(C1-5)烷基、(C4-6)环烷基和(C3-4)环烷基-(C1-3)烷基，其中该(C1-5)烷基 是任选地被(C1-3)烷氧基或一至三个氟原子所取代；且
R9和R10各自独立地选自(C1-3)烷基，或R9和R10连接，并与其相连接的碳 原子共同形成(C3-6)环烷基、(C5-6)环烯基或具有1-2个选自O和N的杂 原子的5或6员杂环；其中该环烷基、环烯基或杂环是任选地被(C1-4) 烷基取代。
更优选地，
R1选自H、甲基和乙基；
R2选自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、乙烯基、1-甲基 乙烯基、乙炔基、环丙基、苯基和选自以下的Het：

其中该苯基和Het未被取代或被R21取代，其中R21为1，2或3个取代基， 其各自独立地选自：
-1至2个取代基，其各自独立地选自氟、氯和溴；和
-1至2个取代基，其各自独立地选自：
a)羟基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或1- 甲基乙氧基；其中该甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、 丙氧基和1-甲基乙氧基任选地被一、二或三个卤素原子取代；
b)-N(CH3)2或-NHRN1其中
RN1选自H、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、-CO-CH3、2-吡啶基、3-吡啶 基和4-吡啶基；
其中该甲基、乙基、丙基和1-甲基乙基各自任选地被一、二或三个选 自卤素和(C1-3)烷氧基还原取代基所取代；
c)-CONH2；以及
d)3-吡啶基、4-吡啶基、5-嘧啶基、2-呋喃基、1-吡咯基和1-吗啉代；
R3为环戊基或环己基，各自任选地被一或二个氟原子所取代；
R4为H或卤素且R7为H；
R5和R6之一选自：
a)被COOH或-CONH2取代的(C2-4)链烯基，并任选地还被一或二个选自(C1-3) 烷基和卤素的取代基所取代；和
b)苯基或Het，各自任选地被一或二个各自独立地选自以下的取代基所取 代：
i.-OH、氧代、COOH；
ii.(C1-3)烷基，任选地被苯基、-N(CH3)2或 取代；及
iii.-NH2，-N(CH3)2和-NHCOCH3； 其中Het选自下式：

c)COOH；
且R5和R6的另一个选自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和 -NHCO-OCH(CH3)2；
R8选自甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、3-甲基丁基、环丁基、 环丙基甲基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基和2-甲氧基乙基；且
该基团 选自：

更优选地
R1选自H、甲基和乙基；
R2选自Br、Cl、氰基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、乙烯基、1-甲基 乙烯基、乙炔基、环丙基、苯基和选自下式基团的Het：


其中该苯基和Het为未被取代或被R21取代，其中R21为1，2或3个取代基， 其各自独立地选自：
-1至2个取代基，其各自独立地选自氟、氯和溴；及
-1至2个取代基，其各自独立地选自：
a)羟基、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或1- 甲基乙氧基；其中该甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、甲氧基、乙氧基、 丙氧基和1-甲基乙氧基任选地被一、二或三个卤素原子取代；
b)-N(CH3)2或-NHRN1，其中
RN1选自H、甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、-CO-CH3、2-吡啶基、 3-吡啶基和4-吡啶基；
其中该甲基、乙基、丙基和1-甲基乙基各自任选地被一、二或三个选 自卤素和(C1-3)烷氧基的取代基所取代；
c)-CONH2；及
d)3-吡啶基、4-吡啶基、5-嘧啶基、2-呋喃基、1-吡咯基和1-吗啉代；
R3为环戊基或环己基，其任选地被一或二个氟原子所取代；
R4为H或Cl且R7为H；
R5和R6之一选自：
a)-CH＝CH-COOH或-CH＝CH-CONH2，各自任选地被一或二个选自甲基、 乙基和氟的取代基所取代；及
b)任选地被NH2取代的苯基，或
任选地被一或二个各自独立地选自以下的取代基所取代的Het：
i.-OH、氧代、COOH；
ii.甲基或乙基，各自任选地被苯基、-N(CH3)2或 取代；和
iii.-NH2、-N(CH3)2和-NHCOCH3； 其中Het选自下式；

c)COOH； 且R5和R6的另一个选自H、甲基、甲氧基、乙氧基、-NH2和 -NHCO-OCH(CH3)2；
R8选自甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、3-甲基丁基、环丁基、 环丙基甲基、2-氟乙基、2，2，2-三氟乙基和2-甲氧基乙基；且
基团 选自：

最优选地，
R1为甲基；
R2选自：

R3为环戊基或环己基；
R4和R7皆为H；
R5和R6之一为 或 且R5和R6的另一个为H；
R8为甲基；且
基团 为
或者最优选地，
R1为甲基；
R2选自：

R3为环戊基或环己基；
R4和R7皆为H；
R5和R6之一为
且R5和R6的另一个为H；
R8为甲基；且基团 为
存在于表1至4中式I的每个单一化合物也包括在本发明范畴内。
聚合酶活性
式(I)化合物利用HCV的RNA依赖性RNA聚合酶抑制RNA合成的能 力，可通过任何能够测量HCV RNA依赖性RNA聚合酶活性的方法加以证 实。适用的实验描述在实施例中。
RNA依赖性RNA聚合酶活性的特化
为了证实本发明化合物是通过HCV聚合酶的特定抑制而起作用，该化 合物可在测量RNA-依赖性RNA聚合酶而非HCV聚合酶的活性的实验中， 或是在DNA依赖性RNA聚合酶实验中，试验其抑制活性。
细胞基础的HCV RNA复制活性
本发明化合物抑制细胞中HCV RNA复制的能力，可通过该化合物在 细胞基础的HCV RNA复制实验中的抑制性活性而得到证实。适用的实验描 述在实施例中。
当式(I)的化合物或其治疗上可接受盐之一用作抗病毒剂时，其可以在 介质(vehicle)中经由口服、局部或全身系统性地给药于哺乳动物，包括(但不 限于)人类、牛、猪、狗、猫、兔子或小鼠，介质包括一种或多种药学上可 接受载体，其中的比例由化合物的溶解度和化学性质、所选的给药途径和 标准生物实践来决定。
对于口服给药而言，该化合物或其治疗上可接受的盐可配制成单位剂 型，例如胶囊或片剂，各自在药学上可接受载体中含有预定量的活性成份， 范围从约1至约500mg。
对于局部给药而言，该化合物可配制于药学上可接受介质中，含有约 0.1％至约5％，优选地约0.5％至约5％的活性剂。这样的制剂可以是溶液、 乳膏或洗液的形式。
对于系统性给药而言，式(I)的化合物可组合药学上可接受介质或载体 经由静脉内注射、皮下注射或肌肉注射给药。对于注射给药，优选为化合 物用在无菌水性介质的溶液中，其可以还含有其他溶质例如缓冲剂或防腐 剂，以及足量的药学上可接受的盐或葡萄糖，以便使得溶液等渗。
可用于上述提及的制剂的适用介质或载体描述在医药文献中，例如在 “Remington′s The Science and Practice of Pharmacy”，第19版，Mack Publishing Company，Easton，Penn.，1995中或在“Pharmaceutical Dosage Forms And Drugs Delivery Systems”，第6版，H.C.Ansel等，Eds.，Williams & Wilkins，Baltimore，Maryland，1995。
化合物的剂量将随着给药形式以及所选择的具体活性剂而改变。再者， 它将随着接受治疗的具体宿主而改变。一般而言，治疗随着小量增加而起 始，直到在该情况下达到最适作用为止。一般而言，式I的化合物最希望的 给药的浓度水平是一般而言将提供抗病毒效用的结果，而不会引起任何损 伤或有害的副作用。
对于口服给药而言，该化合物或治疗上可接受盐可以范围约每天每公 斤体重0.01至约200mg进行给药，优选的范围为约每公斤0.05至约100mg。
对于系统性给药，式(I)的化合物可以剂量为每天每公斤体重约0.01mg 至约100mg进行给药，尽管前述变化将会发生。每天每公斤体重约0.05mg 至约50mg的范围的剂量水平是为了达到有效结果的最希望的使用剂量。
当本发明的组合物包含式I化合物与一种或多种其他治疗性或预防性 药物的组合时，该化合物和其他药物以单一治疗方案通常给药都应该以介 于约10％至100％之间的剂量存在，且更优选介于约10％和80％的剂量之 间。
当这些化合物或它们的药学上可接受的盐与药学上可接受载体共同配 制时，得到的组合物可给药于哺乳动物例如人类的活体内，以抑制HCV聚 合酶或以治疗或预防HCV病毒感染。该治疗也可利用本发明化合物组合下 列药物而达到，包括(但不限于)：免疫调节剂，包括(但不限于)α-，β-， δ-，γ-，τ-和ω-干扰素或其聚乙二醇化形式；其他抗病毒药物，例如利 巴韦林、金刚烷胺；HCV NS5B聚合酶的其他抑制剂；在HCV生命周期中 其他靶标的抑制剂，包括(但不限于)抑制靶标的药物，所述靶标包括(但不 限于)HCV解旋酶、HCV NS2/3蛋白酶、HCV NS3蛋白酶和HCV IRES， 以及干扰其他病毒靶标包括(但不限于)NS5A蛋白质的功能的药物；或其组 合。其他药物可与本发明化合物组合以创造单一剂型。或者这些其他药物 可作为多种剂型的一部分分开给药于哺乳动物。
方法和合成
根据本发明化合物的合成是优选地由下列描述在图解1中的一般步骤 来完成。
                            图解1

式I的化合物，其中R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9和R10如前 文定义，是优选地利用本领域技术人员熟知的羧基-活化试剂通过通式II的 羧酸和通式III的胺类偶合而制备，如上图解1所说明。这些试剂包括(但不 限于)TBTU、HATU、BOP、BrOP、EDAC、DCC、异丁基氯甲酸酯等。或 者，通式II的羧酸可使用标准试剂而转变为相相应的酸氯化物，之后和通 式III的胺衍生物偶合。在R5或R6含有酯-保护的羧酸基团的情况中，进行 皂化反应(利用本领域技术人员熟知的方案)，以获得游离羧酸的最终抑制 剂产物。
式II的中间体羧酸可利用描述在WO 03/010141的方法或利用下列实 例中描述的方法制备。式III的中间体胺类可根据下图解2和图解3中概述 的方法制备。
                         图解2

图解1中通式III的胺中间体可由式IV的相应二胺前体通过和适当的 α，α-二取代氨基酸氯化物氢氯化物进行偶合而制备。得自相应α，α-二取 代氨基酸的适当α，α-二取代氨基酸氯化物氢氯化物的制备可按照WO 03/007945或WO 03/010141中所描述的进行，或按照E.S.Uffelman等人(Org. Lett.1999，1，1157)描述的方法或其改变方式进行。在该偶合反应中形成的酰 胺中间体之后利用和醋酸一起加热而环化，以提供通式III的胺类中间体。
                         图解3

或者，图解1中的通式III的胺类中间体可由通式IV的相应二胺前体， 通过和适当的Boc-保护的α，α-二取代氨基酸偶合而制备，如图解3所说明， 利用本领域技术人员熟知的偶合试剂，例如TBTU、HATU、BOP、BrOP、 EDAC、DCC、异丁基氯甲酸酯等。适当的Boc-保护的α，α-二取代氨基酸 可由游离α，α-二取代氨基酸利用本领域技术人员熟知的标准条件而制备， 例如和Boc2O(二-叔丁基二碳酸酯)在叔胺例如三乙基胺等存在下进行反应。 在偶合反应中形成的酰胺中间体之后利用和醋酸一起加热而环化。为了提 供图解1中通式III胺中间体而进行Boc基团的去保护作用，可利用本领域 技术人员熟知的标准试剂来进行。这样的试剂包括(但不限于)三氟醋酸， HCl在二烷中的溶液等。
图解2和3中的通式IV的二胺前体优选地可利用实施例中描述的方法 包括这些方法的任何变通方法来制备，和/或利用本领域技术人员熟知的其 他合成步骤来制备。
图解1中通式III的胺中间体，其中R5和R6之一为-CH＝C(R50a)-COOR， 其中R50a选自H、(C1-6)烷基和卤素且其中R为例如甲基或乙基，可由通式 III的相应胺中间体或其经适合保护的衍生物，其中R5和R6之一为-COOR， 其中R为例如甲基或乙基，通过下图解4的方法而制备。图解4特别地说 明了通式III的胺中间体的制备，其中R5为-CH＝C(R50a)-COOR，本领域技 术人员应当了解当R6为-COOR时，经图解的方法或其变通方法将得到R6 为-CH＝C(R50a)-COOR的产物。同时，本领域技术人员应了解，当将上图解 2和3中的通式IV的二胺前体或其经适当保护的衍生物或在其制备中适用 的中间体，其中R5和R6之一为-COOR，转变成通式IV的二胺前体，或其 经适当保护的衍生物或在其制备中适用的中间体，其中R5和R6之一为 -CH＝C(R50a)-COOR，其中R50a和R如前述所定义时，也可使用图解4的方 法或其变通方法。
                            图解4

上图解4中的通式IIIa经适当保护的胺中间体可通过用适合的还原剂 例如DIBAL-H等处理而转变成通式IIIb的醇中间体。适用的保护性基团(PG) 包括(但不限于)氨基甲酸酯保护性基团，例如Boc(叔丁基氧基羰基)等。由 上图解1中的通式III的胺中间体制备通式IIIa的经保护胺中间体，可通过 本领域技术人员熟知的标准方法来制备。醇中间体IIIb可利用本领域技术 人员熟知的标准氧化剂例如1，1，1-三(乙酰基氧基-1，1-二氢-1，2-苯并间二氧 杂环戊烯(benziodoxol)-3-(1H)-酮(也称为Dess-Martin Periodinane)等而转变 成醛中间体IIIc。
醛中间体IIIc可利用标准Horner-Emmons方法或本领域技术人员熟知 的相关过程例如Wittig方法等，接着利用熟知的标准方法进行PG基团的去 保护而转化成通式IIId的胺中间体。在PG基团为Boc的情况下，这样的方 法包括(但不限于)用酸处理，例如三氟醋酸，溶解在二烷的HCl等。
图解1中的通式III的胺中间体，其中R5和R6之一为 -C(R50)＝CH-COOR，其中R50为(C1-6)烷基且其中R为例如甲基或乙基，可 由上图解4中的中间体IIIc利用下图解5的方法制备。尽管图解5特别地说 明通式III的胺中间体其中R5为-C(R50)＝CH-COOR的制备，本领域技术人 员应了解当R6为-CHO时，该图解说明的方法或其变通方法将得到其中R6 为-C(R50)＝CH-COOR的产物。同时，本领域技术人员应了解图解5的方法 或其变通方法也可用于当将上图解2或3中的通式IV的二胺前体，或其经 适当保护的衍生物或其制备中适用的中间体，其中R5和R6之一为-CHO， 转变成通式IV的二胺前体，或其经适当保护的衍生物，或在其制备中适用 的中间体，其中R5和R6之一为-C(R50)＝CH-COOR的情况，其中R50和R如 前文中所定义。
                           图解5

醛中间体IIIc(得自图解4)可利用本领域技术人员熟知的适合的亲核烷 基化剂例如烷基锂等进行烷基化，然后用本领域技术人员熟知的氧化剂例 如1，1，1-三(乙酰基氧基-1，1-二氢-1，2-苯并间二氧杂环戊烯-3-(1H)-酮(也称为 Dess-Martin periodinane)等将该中间体仲醇氧化成酮，从而实现了转化成通 式IIIf的酮。该酮IIIf之后可利用标准Horner-Emmons方法或本领域技术人 员熟知的相关方法例如Wittig方法等，接着利用熟知的标准方法进行PG基 团的去保护而转化成通式IIId的胺中间体。在PG基团为Boc的情况下，该 方法包括(但不限于)用酸处理，例如三氟醋酸，溶解在二烷中的HCl等。
或者，图解1中的通式III的胺中间体，其中R5和R6之一为 -CH＝C(R50a)-COOR，其中R50a选自H、(C1-6)烷基和卤素且其中R为(C1-6) 烷基，可由通式III的相应胺中间体或其经适当保护的衍生物，其中R5和 R6之一为X，其中X为离去基例如卤素原子、磺酸酯等，利用图解6中描 述和下列实施例中另外描述的Heck反应的典型条件而制备。尽管图解6特 别地说明通式III的胺中间体其中R5为-C(R50)＝CH-COOR的制备，本领域 技术人员应了解当R6为X时，该图解说明的方法或其变通方法将得到其中 R6为-C(R50)＝CH-COOR的产物。同时，本领域技术人员应了解图解6的方 法或其变通方法也可用于当将上图解2或3中的通式IV的二胺前体，或其 经适当保护的衍生物或其制备中适用的中间体，其中R5和R6之一为X，转 变成通式IV的二胺前体，或其经适当保护的衍生物，或在其制备中适用的 中间体，其中R5和R6之一为-C(R50)＝CH-COOR的情况，其中R50和R如前 文中所定义。
                          图解6

实施例
本发明在下列非限制性实施例中将进一步详细说明。如本领域技术人 员熟知，当需要保护反应成分免于接触到空气或湿气时反应在氮气或氩气 中进行。温度以摄氏度表示。快速色谱法在硅胶上进行。溶液百分比或比 值除非另有说明否则代表体积对体积关系。利用电子喷雾质谱仪记录质谱 分析结果。分析性HPLC在标准条件下进行，采用Combiscreen ODS-AQ C18 反相柱，YMC，50×4.6mm i.d.，5μM，120A于220nM进行，用下表中描述 的线性梯度(溶剂A为0.1％TFA于H2O中；溶剂B为0.1％TFA于CH3CN中)进行洗脱：   时间(min)   流速(mL/min)   溶剂A(％)   溶剂B(％)   0   3.0   95   5   0.5   3.0   95   5   6.0   3.0   50   50   10.5   3.5   0   100
下列缩写或符号可用于前文中和后文中：
AcOH：醋酸；
Ac2O：醋酸酐；
BOC或Boc：叔丁基氧基羰基；
BOP：苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸盐；
BroP：溴三(二甲基氨基)六氟磷酸盐；
Bu：丁基；
CPS：每秒计数；
DAST：(二乙基氨基)硫三氟化物；
dba：二亚苯甲基丙酮；
DCC：1，3-二环己基碳二亚胺；
DCM：二氯甲烷；
DCMA：二环己基甲基胺；
DIBAL-H：二-异丁基铝氢化物；
DMEM：改进的Earle培养基；
DMF：N，N-二甲基甲酰胺；
DMSO：二甲基亚砜；
EC50：50％有效浓度；
DEAC：见EDC；
EDC：1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸；
ES-：电子喷雾(负离子化)；
ES+：电子喷雾(正离子化)；
Et：乙基；
Et2O：二乙基醚；
EtOAc：乙酸乙酯；
EtOH：乙醇；
FBS：胎牛血清；
Fmoc：9-芴基甲氧基羰基；
HATU：O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐；
HBTU：O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐；
HOAT：1-羟基-7-氮杂苯并三唑；
HOBt：1-羟基苯并三唑；
HPLC：高效液相色谱法；
iPr或i-Pr：异丙基；
Me：甲基；
MeCN：乙腈；
MeOH：甲醇；
MS(ES)：电子喷雾质谱仪；
NMR：核磁共振光谱仪；
PBS：磷酸盐缓冲液；
Ph：苯基；
PG：保护基；
PVDF：聚偏二氟乙烯；
RT：室温(约25℃)；
TBME：叔丁基甲基醚；
TBTU：2-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐；
tBu：叔丁基；
Tf：三氟甲基磺酰基；
TfO：三氟甲基磺酸酯；
TFA：三氟醋酸；
THF：四氢呋喃；
TLC：薄层色谱法；
TMS：三甲基硅烷基；
Troc：三氯乙氧基羰基。
实施例1
3-(3，3-二氟环戊基)-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯

步骤1：
将吲哚-6-羧酸1-1(5.0g，31.0mmol)溶解在MeOH(100mL)中，加入催化 量的H2SO4(1.0mL)并在回流下搅拌反应混合物16小时。将少量的固体 K2CO3加入，以中和过量的H2SO4并在RT持续搅拌1h。将反应混合物在 真空下浓缩以除去MeOH，用NaHCO3饱和水溶液(～50mL)稀释并用 EtOAc(～200mL)萃取。用盐水(100mL)清洗有机层，在无水MgSO4中干燥 并浓缩至干燥。将得到的残留物利用快速柱色谱法加以纯化，利用在己烷 中的30％EtOAc作为洗脱液，以得到纯的甲酯1-2(4.78g，88％收率)。
步骤2：
将步骤1中得到的甲酯1-2(3.31g，18.9mmol)溶解在MeCN(50mL)中并 加入催化量的Yb(OTf)3(586mg，0.95mmol)。将2-环戊烯-1-酮(7.76mL， 94.5mmol)加入并在回流下搅拌反应混合物16小时。在真空下将MeCN溶 剂除去，将残留物再溶解在EtOAc(～200mL)中，并用饱和NaHCO3水溶液 (～100mL)、H2O(50mL)和盐水(50mL)萃取。将有机层用无水MgSO4干燥并 在真空中浓缩至干。利用快速柱色谱法将残留物纯化之后，利用在己烷中 的40％EtOAc作为溶液梯度，将希望的环戊酮加合物1-3分离，得到米色 粉末(3.4g，70％收率)。
步骤3：
将NaH(60％油中分散体，770mg，19.2mmol)于0℃时缓慢加到步骤2得 到的环戊酮加合物中间体1-3(3.81g，14.8mmol)的无水DMF(150mL)溶液中。 将反应混合物于0℃下搅拌5分钟，然后滴加入MeI(1.2mL，19.2mmol)并0 ℃下持续搅拌3小时。将混合物加温至RT并通过加入NH4Cl饱和水溶液 (200mL)使反应终止。用EtOAc(2×500mL)萃取混合物并利用NH4Cl饱和水 溶液(2×200mL)H2O(200mL)和盐水(200mL)清洗有机层。将合并的有机层利 用无水MgSO4干燥，蒸发至干并利用快速柱色谱法纯化残留物(利用在己烷 中的30％EtOAc作为洗脱液)以分离N-甲基吲哚中间体1-4的米色固体(3.1g， 77％收率)。
步骤4：
在密封管中，将得自步骤3的N-甲基吲哚中间体1-4(1.4g，5.16mmol) 和DAST(2.7mL，20.6mmol)溶解在CH2Cl2(50mL)中并在回流下搅拌3天。 将混合物缓慢倒入NaHCO3饱和水溶液(～50mL)中并当CO2不再产生时， 利用CH2Cl2(2×100mL)萃取该混合物。将合并的有机层用盐水(50mL)清洗， 利用无水MgSO4干燥并浓缩至干。将残留物利用快速柱色谱法(利用溶剂梯 度己烷中的从10％至20％的EtOAc)加以纯化，以分离出3-(3，3-二氟环戊 基)-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯1-5(750mg，50收率)。
利用描述在WO 03/010141的方法将3-(3，3-二氟环戊基)-1-甲基-1H-吲 哚-6-羧酸甲酯1-5转化成式IIa的羧酸中间体，其中R2如前文中所定义。 这些中间体可利用上图解1及描述在WO 03/010141中的方法转化成通式I 的化合物。
实施例2
(E)-3-(3-氨基-4-甲基氨基苯基)丙烯酸甲酯

步骤1：
将4-氯-3-硝基肉桂酸2-1(500mg，2.2mmol)和甲基胺在THF(2M，8mL， 16mmol)中的溶液的混合物在密封管中于80℃下加热20小时。之后将混合 物冷却至室温并浓缩得到橙色固体2-2，其不需进一步纯化在下述步骤中使 用。
对于本领域技术人员很显而易见的是，在上图解2和3中的通式IV的 其他二胺中间体，其中R8不是甲基，可利用适合的R8-NH2代替上述步骤1 中的甲基胺(CH3NH2)而制备。
步骤2：
将从步骤1得到的粗4-甲基氨基-3-硝基肉桂酸中间体2-2(488mg， 2.2mmol)溶解在甲醇(20mL)中并加入重氮甲烷的乙醚溶液直到HPLC分析 显示该酸已完全转化成甲酯为止。将该溶液浓缩至干得到540mg的甲酯2-3 的橙色固体，其不需进一步纯化而使用在步骤3中。
步骤3：
将从步骤2中得到的粗甲酯2-3(540mg，～2.2mmol)和SnCl2二水合物 (2.25g，10mmol)溶解在乙醇(20mL)中并在80℃下搅拌混合物4小时。经过 那段期间之后，将混合物冷却至室温，并缓慢加到NaHCO3饱和水溶液中。 利用乙酸乙酯(100mL)萃取反应混合物，将有机层用无水MgSO4干燥并在减 压下将溶剂除去。利用快速柱色谱法中使用己烷于乙酸乙酯中的梯度(从50 ％至30％)将残留物纯化得到(E)-3-(3-氨基-4-甲基氨基苯基)丙烯酸甲酯2-4 的黄色固体(245mg)。
实施例3
(E)-3-[2-(1-氨基环丁基)-1-甲基-IH-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯

将从实施例2得到的(E)-3-(3-氨基-4-甲基氨基苯基)丙烯酸甲酯 2-4(40mg，0.194mmol)悬浮在CH2Cl2(3mL)中并加入依照E.S.Uffelman等人 (Org.Lett.1999，1，1157)描述的适用方法制备得到的1-氨基环丁烷羧酸氯化 物氢氯化物(31mg，0.18mmol)。在室温下搅拌该反应混合物2小时，然后浓 缩以得到白色固体。之后将该固体溶解在醋酸(5mL)中并加热至60℃20小 时。将反应的粗产物利用NaHCO3饱和水溶液稀释并利用CH2Cl2(2×50mL) 和盐水萃取，将有机层用无水MgSO4干燥并在减压下将溶剂除去以得到 (E)-3-[2-(1-氨基环丁基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯3-1的淡棕色 泡沫体(53mg)。
实施例4
(E)-3-(2-{1-[(3-环戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羰基)氨基]环丁基}-1- 甲基-1H-苯并咪唑-5-基)丙烯酸

将由描述在WO 03/010141的方法制备而得的3-环戊基-1-甲基-2-吡啶 -2-基-1H-吲哚-6-羧酸4-1(31.1mg，0.97mmol)、由化合物2-4的乙酯类似物利 用描述在实施例3中描述的类似的方法制备而得到的(E)-3-[2-(1-氨基环丁 基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯4-2(27.7mg，0.97mmol)、 HATU(47.9mg，0.126mmol)和Et3N(58μL，0.42mmol)的DMSO(2mL)溶液在 RT下搅拌3小时。此期间之后，加入NaOH(280μL，2.5N)并将反应混合 物在RT下搅拌16小时。利用加入几滴醋酸将反应混合物加以中和并在反 相C18、半制备型HPLC柱(使用溶剂梯度从5％至100％MeCN于水中(所有 溶剂皆含0.1％的三氟醋酸))加以纯化，以分离出最终抑制剂(E)-3-(2-{1-[(3- 环戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羰基)氨基]环丁基}-1-甲基-1H-苯并 咪唑-5-基)丙烯酸4-3(化合物4001，表4)的白色无水固体，具有＞95％的同 质性(homogeneity)(45mg，78％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ1.48-1.58(m，2H)，1.75-1.85(m，6H)， 1.85-1.95(m，1H)，2.05-2.15(m，1H)，2.69-2.76(m，2H)，2.98-3.10(m，3H)， 3.63(s，3H)，3.82(s，3H)，6.59(d，J＝16Hz，1H)，7.42(dd，J＝0.8 & 5.7Hz，1H)， 7.51(d，J＝7.7Hz，1H)，7.53(d，J＝8.5Hz，1H)，7.65(d，J＝8.5Hz，1H)，7.71(d， J＝8.4Hz，1H)，7.76(d，J＝16Hz，1H)，7.82(d，J＝8.4Hz，1H)，7.92(ddd，J＝1.6& 7.8Hz，1H)，8.01(s，1H)，8.04(s，1H)，8.73(d，J＝4.1Hz，1H)，9.45(s，1H)。
实施例5
3-环戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羧酸(1-[5-((E)-2-氨基甲酰基乙烯 基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基]环丁基}酰胺

步骤1：
将3-环戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羧酸5-(利用WO 03/010141 中描述的方法制备)和(E)-3-[2-(1-氨基环丁基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基]丙 烯酸乙酯4-2偶合，接着进行乙酯的皂化，利用实施例4中描述的类似方法 得到(E)-3-(2-{1-[(3-环戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羰基)氨基]环丁 基}-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)丙烯酸5-2(化合物4003，表4)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.50-1.58(m，2H)，1.78-1.20(m，7H)， 2.05-2.15(m，1H)，2.65-2.75(m，2H)，2.97-3.10(m，3H)，3.66(s，3H)，3.18(s， 3H)，6.57(d，J＝16.0Hz，1H)，7.55(dd，J＝1.0 & 8.4Hz，1H)，7.68(2d，J＝8.4Hz， 2H)，7.75(d，J＝16.0Hz，1H)，7.78(d，J＝11.0Hz，1H)，8.00(s，1H)，8.07(s，1H)， 8.68(d，J＝2.3Hz，1H)，8.78(d，J＝1.2Hz，1H)，8.82(dd，J＝0.8 & 2.2，1H)， 9.44(brs，1H)。
步骤2：
将(E)-3-(2-{1-[(3-环戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羰基)氨基]环 丁基}-1-甲基-1H-苯并咪唑-5-基)丙烯酸5-2(化合物4003，表4；60mg， 0.087mmol)、TBTU(68mg，0.18mmol)、碳酸氢铵(20mg，0.26mmol)和Et3N(36 μL，0.26mmol)的DMSO(23mL)溶液于RT下搅拌3h。利用加入几滴醋酸将 反应混合物加以中和并在反相C18、半制备型HPLC柱(使用溶剂梯度从5％ 至100％MeCN于水中(所有溶剂皆含0.1％的三氟醋酸))加以纯化，以分离 出抑制剂3-环戊基-1-甲基-2-吡嗪-2-基-1H-吲哚-6-羧酸{1-[5-((E)-2-氨基甲 酰基乙烯基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基]环丁基}酰胺5-3(化合物1005，表1) 的淡黄色无水固体，具有＞95％同质性(17mg，34％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ1.65-1.75(m，2H)，1.92-2.15(m，8H)， 2.73-2.82(m，2H)，3.04-3.10(m，2H)，3.15-3.25(m，1H)，3.79(s，3H)，3.81(s， 3H)，6.65(d，J＝15.8Hz，1H)，7.06(brs，1H)，7.53(brs，3H)，7.61(d，J＝15.7Hz， 1H)，7.68(dd，J＝1.0&8.4Hz，1H)，7.80(d，J＝8.4Hz，1H)，7.90(s，1H)，8.20(s， 1H)，8.80(d，J＝2.5Hz，1H)，8.91(d，J＝1.2Hz，1H)，8.95(dd，J＝2.1&3.7，1H)， 9.23(s，1H)。
实施例6
4-氨基-2-甲基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯

步骤1：
将2-甲基-5-硝基苯甲酸6-1(10.0g，55.2mmol)的MeOH(200mL)和 H2SO4(1.0mL)溶液加热至回流并同时搅拌～3天。在真空下蒸发溶剂并将残 留物再溶解在EtOAc(～200mL)中，用冷H2O(～50mL)、冷的NaHCO3饱和 水溶液(～50mL)和冷盐水(～50mL)清洗。之后用无水MgSO4将有机层干燥 并浓缩至干，得到甲酯6-2的白色固体，不须经纯化而使用于步骤2中。
步骤2：
向在步骤1中得到的粗甲酯6-2(～55.2mmol)的MeOH(200mL)溶液中加 入Pearlman催化剂(在碳上的20％氢氧化钯，1.0g)并在H2的环境下于RT 下搅拌混合物20小时。将混合物经由Celite过滤并浓缩至干。将残留物再 溶解在THF(200mL)中，加入Ac2O(6.2mL，66mmol)并在RT下搅拌溶液3小 时。在真空下将反应混合物浓缩至干并将残留物再溶解在最小体积的t-Bu 甲基醚(～150mL)中。将该醚悬浮液在RT下搅拌1小时，加入己烷(～100mL) 以沉淀出希望的乙酰基化中间体的白色固体。利用己烷清洗固体并干燥以 得到乙酰基化化合物6-3，具有高纯度(10.1g，88％收率)。
步骤3：
将由步骤2中得到的乙酰基化酯6-3(8.42g，40.6mmol)和硝酸钾(5.0g， 50mmol)的AcOH∶H2SO4(1∶1比率，200mL)的溶液于RT下搅拌2小时并于 40℃下再搅拌两小时。之后将粗反应混合物缓慢倒入冰(～1L)上并混合20 分钟。将形成的沉淀物过滤并用水清洗数次以得到主要为两种产物的混合 物，希望的4-硝基异构体6-4与不希望的6-硝基异构体6-5(1∶2比率)，在快 速柱色谱法中利用30％EtOAc在己烷中作为洗脱液而加以分离。将纯4-硝 基异构体6-4分离得到黄色固体(2.05g，20％收率)。
步骤4：
将由步骤3得到的4-硝基中间体6-4(2.05g，8.13mmol)溶解在THF(50mL) 中，并在将溶液冷却至0℃，然后缓慢加入MeI(2.51mL，40.6mmol)和 t-BuONa(4.46g，46.4mmol)。将反应混合物于RT下搅拌15小时，加入H2O(～ 50mL)并用叔丁基甲基醚(～20mL)清洗水性混合物。用1N HCl将水层酸化 至pH 3，然后用EtOAc(～100mL)萃取。用盐水(～50mL)清洗有机层，以无 水MgSO4进行干燥并浓缩至干得到N-甲基化化合物6-6的胶状泡沫体，其 可直接用于步骤5而不须经纯化。
本领域技术人员应了解，上图解2和3中通式IV的其他二胺中间体， 其中R8不是甲基，可在上述步骤4中利用适当的R8-X代替碘化甲基(CH3I) 制备而得，其中X为离去基，例如Cl、Br、I、甲磺酸酯(mesylate)、对甲苯 磺酸酯(tosylate)、三氟甲磺酸酯(triflate)等。
步骤5：
将得自步骤4的甲基化衍生物6-6(～8mmol)的MeOH(10mL)和HCl(8N， 15mL)溶液于70℃下搅拌20小时。在真空下蒸发溶剂并将残留物在NaHCO3饱和水溶液(20mL)和EtOAc(50mL)之前分配。用盐水清洗有机层，利用无 水MgSO4干燥并浓缩得到甲酯6-7的橙色固体(1.54g)，其可用于步骤6中 不须经纯化。
步骤6：
将得自步骤5的粗甲酯6-7(1.54g，6.7mmol)的MeOH(30mL)溶液在催化 氢化条件下利用Pd/C(10％，150mg)于H2气压下在RT下处理2小时。将反 应混合物利用Celite过滤并浓缩得到4-氨基-2-甲基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲 酯6-8的紫色固体(1.33g)，其已经足够纯化(由NMR证实)不需再纯化而使 用。
实施例7
2-(1-叔-丁氧基羰基氨基环丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-羧羧甲酯

将1-((1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基)环丁烷羧酸(1.40g，6.5mmol)溶解在 CH2Cl2(45mL)中并和TBTU于Et3N存在下反应30分钟以预活化该酸。将 得自实施例6的4-氨基-2-甲基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯6-8(1.33g，6.85mmol) 的CH2Cl2(10mL)溶液于30分钟期间缓慢加入并持续搅拌反应混合物20小 时。将反应混合物浓缩至干并将残留物再溶解在AcOH(10.0mL)中并在70 ℃下搅拌2小时以达到苯并咪唑环的环化作用。将反应混合物浓缩至干并 将残留物溶解在EtOAc(～250mL)中，用NaHCO3饱和水溶液(2×100mL)和 盐水(100ml)萃取。将有机层用无水MgSO4干燥并蒸发至干。利用快速柱色 谱法(利用溶剂梯度从40％至50％EtOAc于己烷中)纯化残留物，以得到纯 的2-(1-叔-丁氧基羰基氨基环丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲酯7-1 的米色固体(1.41g，55％收率)并回收未反应的二胺基起始物质。
利用本领域技术人员熟知的标准试剂将2-(1-叔丁氧基羰基氨基环丁 基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸甲酯7-1转化成图解1中得通式III的胺 中间体。该试剂包括(但不限于)三氟醋酸，HCl在二烷中得溶液等。图 解1中通式III的相应胺中间体利用实施例4的方法可再制成图解1中通式 I的抑制剂。
实施例8
(E)-3-[2-(1-氨基-环丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-2-甲基-丙烯酸乙 基酯

步骤1：
将得自实施例7的2-(1-叔-丁氧基羰基氨基环丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并 咪唑-5-羧酸甲酯7-1(1.41g，3.8mmol)溶解在THF(40mL)中并将溶液冷却至0 ℃。将DIBAL-H(18mL，1M溶于THF中，18mmol)溶液缓慢加入并在0℃ 下将反应混合物搅拌1小时，之后于50℃搅拌4小时。将反应混合物冷却 至RT。将酒石酸钾钠(1M，50mL)溶液极为缓慢地加入并在RT下持续缓慢 搅拌1小时。在真空中浓缩该溶液以除去大部分的THF并用EtOAc(～200mL) 萃取。用NaHCO3饱和水溶液(50mL)和盐水(50mL)清洗有机层、用无水 MgSO4干燥并浓缩至干。利用快速柱色谱法纯化残留物，其溶剂梯度从己 烷中50％EtOAc至纯EtOAc然后至EtOAc中3％MeOH，以得到纯醇8-1 的黄色固体(1.09g，84％收率)。
步骤2：
将得自步骤1的醇8-1(1.09g，3.16mmol)和Dess-Martin periodinane(1.70g， 4.0mmol)的CH2Cl2(40mL)溶液于RT下搅拌2小时。在真空下将溶剂蒸发并 利用快速柱色谱法纯化残留物，使用EtOAc∶己烷(1∶1比)，以得到纯的醛 8-2(605mg，56％收率)。
步骤3：
将三乙基-2-膦酰基丙酸酯(0.228mL，1.06mmol)的THF(5.4mL)溶液冷却 至0℃并加入NaH(42.5mg，于油中60％，1.06mmol)。在0℃下搅拌该混合 物30分钟，然后缓慢加入得自步骤2的醛8-2(300mg溶于3mL的THF， 0.874mmol)溶液，并在RT下持续搅拌20小时。用EtOAc(～100ml)稀释该 混合物并用NaHCO3饱和水溶液(2×30mL)和盐水(30mL)清洗。将有机层用 无水MgSO4干燥并浓缩至棕色残留物，接着利用快速柱色谱法加以纯化， 使用的溶剂梯度为从40％至60％EtOAc在己烷中，以得到N-Boc-被保护的 酯8-3的黄色泡沫体(85mg，23％收率)。
步骤4：
BOC保护基的水解可通过加入溶于二烷(2mL)的4N HCl并在RT中 搅拌该溶液1小时，定量地完成。在真空下将溶剂蒸发后，分离出纯的 (E)-3-[2-(1-氨基环丁基)-3，6-二甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-2-甲基丙烯酸乙酯 8-4的黄色固体(79mg)。
本领域技术人员应了解，在该方法步骤3中使用的三乙基-2-膦酰基丙 酸酯可用适当的被取代衍生物代替，以制备上图解中通式IIIe的类似物，其 中R50如前文中所定义。此外，甲酯也可利用适当试剂以类似的方法制备。 上通式IIIe的化合物8-4及其类似物可利用实施例4的方法再制成图解1中 通式I的抑制剂。
实施例9
3-氟-4-硝基苯甲醛

步骤1：
在双颈烧瓶(装有内温度计)中于-10℃下加入冰AcOH(252mL)、醋酸酐 (252.0mL)和2-氟-4-甲基-1-硝基苯9-1(25.0g，161mmol)。将浓硫酸(40mL)于 5分钟期间滴加入该冷溶液中，接着极为缓慢地加入氧化铬(VI)(45g， 450mmol)；加入的速率必须极为缓慢(～1.5小时)以维持温度在10℃以下。 在加入CrO3时，清澈的无色溶液变成琥珀色，并在添加结束后变成深棕色。 在添加完成之后，再搅拌该反应混合物45分钟(HPLC分析显示反应完成～ 70％)。将类似焦油的部分悬浮液倒入冰中(1.6L)且用H2O稀释得到的泥状 物，最多不超过总量3L，在该点时产物将开始沉淀。在过滤之后，用冷 H2O清洗米色固体以得到白色固体。然后将该固体悬浮在冷2％ NaHCO3(250mL)溶液中，过滤并再用冷H2O清洗，以得到二乙酸酯9-2(22g， 含有一些未反应的起始物质)的白色固体，可用于步骤2中。
步骤2：
在螺旋盖样品瓶中，将得自步骤1的二乙酸酯9-2(1.0g，3.7mmol)溶解 在冰醋酸(10.0mL)中，接着加入H2O(1.0mL)和浓HCl(1.0mL)。将得到的部 分可溶性混合物于115℃加热45分钟。在真空下除去大部分溶剂以得到胶 状残留物，将剩余酸和H2O与CH2Cl2-己烷共沸两次，以得到期望的半纯 3-氟-4-硝基苯甲醛9-3的黄色固体(600mg)。该化合物再利用快速柱色谱法 (使用20％EtOAc在己烷中作为洗脱液)纯化，以除去少量未反应的2-氟-4- 甲基-1-硝基苯9-1(～35％总收率)。
实施例10
(E)-3-(4-氨基-3-(甲基氨基)苯基)丙烯酸乙酯

步骤1：
将NaH(在油中60％分散体，314mg，7.84mmol)于0℃下加到三乙基膦 酰基乙酯(1.37mL，6.90mmol)的THF(13mL)溶液中，并将混合物搅拌30分 钟。在该期间之后，加入得自实施例9的3-氟-4-硝基苯甲醛9-3(1.06g， 6.27mmol)并在室温下持续搅拌16小时。通过加入H2O(20mL)使该反应停止 并将产物萃取至EtOAc(2×100mL)中。用盐水清洗合并的有机层，用无水 MgSO4干燥并浓缩以得到肉桂酸酯10-1的浅橙色固体，以可用于步骤2中， 不需经过纯化。
本领域技术人员应了解，在肉桂酸双键上带有各种取代基的类似物的 制备可利用适当的取代基衍生物代替本方法中使用的三乙基膦酰基乙酯或 利用适当酮类代替醛9-3而进行。此外，肉桂酸甲酯也可用类似方法使用适 当试剂来制备。
步骤2：
将得自步骤1的肉桂酸酯10-1(～6.27mmol)和甲基胺(2M在THF中， 6.3mL，12.5mmol)溶解在DMSO(6mL)中并在室温下搅拌反应混合物2小时。 自那段反应期间之后，用EtOAc(100mL)稀释该混合物并用H2O(3×30mL) 和盐水(50mL)清洗有机层，用无水MgSO4干燥并浓缩，得到粗甲基氨基中 间体10-2的橙色固体。该产物可用于步骤3中，不须经过纯化。
本领域技术人员应了解，上图解2和3中通式IV的其他二胺中间体， 其中R8不是甲基，可利用适当的R8-NH2代替步骤2中的甲基胺(CH3NH2) 而进行。
步骤3：
将得自步骤2的3-甲基氨基-4-硝基肉桂酸酯10-2(2-2，～150mg)和 SnCl2二水合物(950mg，4.2mmol)溶解在乙醇(10mL)中并在80℃下搅拌反应 混合物20小时。将混合物冷却至室温并浓缩至干。将残留物溶解在乙酸乙 酯(100mL)中并缓慢加到NaHCO3饱和水溶液中并搅拌30分钟。之后用冰 的冷盐水萃取有机层，用无水MgSO4干燥并在减压下除去溶剂。利用快速 柱色谱法(使用梯度从70％至60％的己烷于乙酸乙酯中)纯化残留物得到 (E)-3-(4-氨基-3-(甲基氨基)苯基)丙烯酸乙酯10-3的黄色固体(100mg)。
(E)-3-(4-氨基-3-(甲基氨基)苯基)丙烯酸乙酯可依照实施例3或7的方法 转化成图解1中通式III的胺衍生物，并使用实施例4的方法再制成图解1 中通式1的抑制剂。
实施例11
5-氨基-2-甲基-4-甲基氨基苯甲酸甲酯

步骤1：
将2-甲基-4-硝基苄腈11-1(2.53g，15.6mmol)于NaOH水溶液(10％m 31.0mL)和H2O2水溶液(10％，16mL)中的溶液于回流下搅拌2.5小时。冷凝 器中的水循环停止5-10分钟(以除去溶解氨)之后并恢复水流并再持续回流 1.5小时。将反应混合物冷却至RT，一滴滴加入HCl(浓)直到pH为～3，此 时羧酸11-2会以橙色固体沉淀出来(3.60g)。该羧酸可用在步骤2中，不须 经纯化。
步骤2：
将得自步骤1的酸11-2(3.60g，15.6mmol)的MeOH(30mL)和HCl(4N HCl于二烷中，2.0mL)的溶液加热至回流48小时。在真空中将溶剂蒸发 至干，并将得到的残留物再溶解在EtOAc(200mL)中。将该溶液利用NaHCO3饱和水溶液(100mL)和盐水(100mL)清洗，用MgSO4干燥并蒸发至干，得到 酯中间体11-3的黄色固体(2.38g)。该物质可用在步骤3中，不需经过纯化。
步骤3：
将KNO3(760mg，7.5mmol)非常缓慢地加到得自步骤2且经过预冷至0 ℃的酯11-3(1.27g，6.5mmol)的H2SO4(浓，13.0mL)溶液中。搅拌几分钟之后， 除去冰浴并在RT下搅拌反应混合物20小时。之后将反应混合物缓慢倒入 冰(～50mL)上并搅拌直到冰溶解为止并将期望的二硝基产物11-4沉淀出 来并过滤(～1.55g的淡黄色且微湿固体)。该化合物可这样用于步骤4中。
步骤4：
向得自步骤3的二硝基中间体11-4(1.55g，6.45mmol)的THF(15.0mL)溶 液中于0℃下加入甲基胺溶液(2M于THF中，15.2mL，32.3mmol)，将冰浴 除去并在RT下搅拌反应混合物1.5小时。将溶液浓缩以除去一些THF，之 后用EtOAc(～100mL)稀释。利用H2O(～50mL)和盐水(～50mL)清洗有机层， 用无水MgSO4干燥并浓缩得到甲基氨基中间体11-5的橙色固体(1.26g)。该 化合物可用于步骤5中不需再纯化。
本领域技术人员应了解，在上图解2和3中的通式IV的其他二胺中间 体，其中R8不是甲基，可利用适合的R8-NH2代替上述步骤4中的甲基胺 (CH3NH2)而制备。
步骤5：
向得自步骤4的甲基氨基衍生物11-5(1.25g，5.58mmol)的 EtOH-H2O(110mL，1∶1比)溶液中加入K2CO3(4.62g，33.5mmol)和Na2S2O4，并 在RT下将混合物搅拌3小时。加入更多H2O(～30mL)并在真空中浓缩混合 物以除去大部分EtOH。之后利用EtOAc(～200mL)稀释反应混合物并用盐 水分离并萃取出有机层。将有机层用无水MgSO4干燥并在真空中浓缩得到 5-氨基-2-甲基-4-(甲基氨基)苯甲酸甲酯11-6(927mg，86％收率)的棕色固体。
化合物11-6可依照实施例3或7的方法转化为图解1中通式III相应的 胺中间体，其中R6为CH3且R5为-COOCH3。这些胺中间体可依照实施例8 中方法再转化成图解1中通式III的胺中间体，其中R6为CH3且R5为 -CH＝C(R50)-COOR。图解1中的通式III所有胺中间体可利用实施例4的方 法再制成图解1中通式I的抑制剂。
实施例12
(E)-3-(5-氨基-2-乙氧基-4-(甲基氨基)苯基)丙烯酸甲酯

步骤1：
将2-乙氧基-4-硝基苯甲酸12-1(1.56g；7.38mmol)溶解在甲醇(15mL)中 并将得到的溶液于0℃下搅拌。将叠氮甲烷的乙醚溶液缓慢地加入直到溶液 持续呈黄色并再搅拌20分钟。将溶剂蒸发得到甲酯12-2的灰黄色固体 (1.66g，定量)，其可用于步骤2，不需再纯化。
步骤2：
将得自步骤1的酯12-2(1.60g；7.10mmol)溶解在无水甲苯中并将溶液在 氮气中冷却至-78℃。将二异丁基铝氢化物的四氢呋喃(1M；8mL；8mmol)溶 液加入并让反应混合物加温至环境温度。1小时后以及再1.5小时后将另外 两份DIBAL-H以该方式(7及10mL)加入。最后一次加入后0.5小时，将反 应冷却至0℃并缓慢加入1N HCl(25mL)并强力搅拌该混合物0.5小时。之 后将有机溶剂蒸发并用乙酸乙酯(2×50mL)萃取水性残留物并用水(50mL) 和盐水(50mL)清洗。之后将合并的萃取物利用MgSO4干燥并蒸发得到醇 12-3的灰黄色纤维固体(1.40g；定量)，其可这样用于步骤3中。
步骤3：
将1，1，1-三(乙酰基氧基-1，1-二氢-1，2-苯并间二氧杂环戊烯-3-(1H)-酮 (Dess-Martin periodinane)(2.32g；5.47mmol)的二氯甲烷(40mL+5mL清洗)混 浊溶液加到得自步骤2的醇12-3(0.98g；4.97mmol)的DCM(40mL)搅拌溶液 中并在环境温度下氮气下搅拌该反应。4小时之后，加入饱和NaHCO3/10％ Na2S2O3(1∶1，160mL)并强力搅拌该混合物直到相层清晰(约0.5小时)。将有 机相分离，并用二氯甲烷(50mL)萃取水相并用饱和NaHCO3(2×150mL)清 洗。之后将合并的有机相用MgSO4干燥并蒸发产生醛12-4的灰黄色固体 (960mg；99％)，其可这样用于步骤4中。
步骤4：
将氢化钠(95％干粉末；158mg；6.25mmol)悬浮在无水THF(10mL)溶液 中并于0℃下氮气中加入三甲基膦酰基乙酸酯(0.945mL；5.84mmol)得到无 法搅拌的白色固体物质。然后滴加入得自步骤3的醛12-4(950mg；4.87mmol) 的THF(7mL+3mL清洗)溶液，得到黄色且白色固体缓慢溶解。加完之后， 将反应加温至环境温度。15小时之后，将混浊的反应混合物蒸发成淡黄色 固体，其可用乙酸乙酯(2×50mL)萃取并用饱和NaHCO3(3×75mL)清洗。将 合并的萃取物用MgSO4干燥并蒸发得到肉桂酸酯12-5的淡黄色固体(1.212g； 99％)其可用于步骤5中，不需再纯化。
本领域技术人员应了解，在该方法中所用的三甲基膦酰基乙酸酯可被 适当的取代的衍生物代替，以制备在肉桂酸酯双键上带有各种取代基的类 似物。
步骤5：
将得自步骤4的4-硝基-2-乙氧基肉桂酸酯12-5(303mg，1.206mmol)溶解 在浓硫酸(3mL)中并将溶液冷却至0℃。将硝酸钾(128mg，1.27mmol)加入并 将混合物于室温下搅拌3.5小时。完成之后将反应混合物倒在冰上并利用过 滤将沉淀固体收集起来。用水清洗粗产物12-6，在真空下干燥并不需纯化 而用于步骤6(390mg)中。
步骤6：
将得自步骤5的二硝基衍生物12-6(390mg)溶解在THF(3mL)中并加入 甲基胺的THF溶液(溶液于THF中2M，3.02mL)。搅拌30分钟之后，在减 压下除去挥发物且橙色固体12-7可这样用于步骤7中。
本领域技术人员应了解，在上图解2和3通式IV的其他二胺中间体， 其中R8不是甲基，可利用适合的R8-NH2代替上述步骤6中的甲基胺 (CH3NH2)而制备。
步骤7：
将得自步骤6的硝基芳烃12-7悬浮在EtOH(12mL)和水(12mL)的混合 物中并加入K2CO3(1.00g，6当量)，接着加入亚硫酸氢钠(1.26g，6当量)。在 室温下搅拌该混合物4小时并在减压下除去EtOH。用EtOAc萃取残留物并 用盐水清洗有机相并干燥(MgSO4)。除去溶剂并用快速色谱法纯化残留物 (50至75％EtOAc于己烷中)得到(E)-3-(5-氨基-2-乙氧基-4-(甲基氨基)苯基) 丙烯酸甲酯12-8(162mg)。
可利用描述在实施例3或7的方法将(E)-3-(5-氨基-2-乙氧基-4-(甲基氨 基)苯基)丙烯酸甲酯12-8转化成实施例1中通式III的胺中间体并利用实施 例4的方法再制成图解1中通式1的抑制剂。
本领域技术人员也应知道，图解1中通式I的该抑制剂，其中R6为-OCH3且R5为-CH＝C(R50)-COOR可利用实施例12的方法制备，用相同于化合物 12-1的前体开始制备，除了其中该乙氧基被甲氧基代替。
实施例13
4-氨基-2-甲氧基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯

步骤1：
将2-甲氧基-5-硝基苯甲酸甲酯13-1(6.21g，29.4mmol)悬浮在 MeOH(100mL)中并加入20％Pd(OH)2/C(500mg)。在氢气下(1atm)搅拌该混 合物18小时。利用过滤将催化剂除去并在减压下将溶剂蒸发，得到化合物 13-2(5.256g)的残留物，其可这样用于步骤2中。
步骤2：
将得自步骤1的苯胺13-2(5.23g)溶解在THF(50mL)中并加入醋酸酐 (2.984g)。在室温下搅拌该混合物过夜。在减压下将白色悬浮液浓缩成白色 泥浆，加入叔丁基甲基醚(TBME，20mL)并在搅拌时缓慢加入己烷(100mL)。 之后将悬浮液再搅拌2小时并利用过滤将固体收集起来。用己烷清洗产物 13-3并在空气中干燥(6.372g)。
步骤3：
将90％硝酸(9mL)用水(9mL)稀释并冷却至0℃。将得自步骤2的该酰 苯胺(anilide)化合物13-3(5.905g)一次性加入并在冰水浴中搅拌该混合物30 分钟。之后将反应混合物滴加到冰水(700mL)中并利用过滤将沉淀的黄色固 体收集起来，用水清洗并在空气中干燥。1H NMR显示出该橙色固体(5.907g) 由2∶1混合物所组成。由上得到的水性滤液利用EtOAc萃取，得到另外的 1g物质，并和第一次得到的合并，接着利用快速色谱法在硅胶上使用 0.1％EtOAc的CHCl3溶液作为洗脱液进行纯化。得到橙色固体 13-4(4.11g)(一种异构体)。
步骤4：
将得自步骤3的硝基酰苯胺13-4(3.580g)溶解在THF(50mL)种并将溶液 在冰中冷却。碘甲烷(4.155mL，66.7mmol，5当量)和叔丁氧化钠(6.414g， 66.7mmol，5当量)分两部分以3.5小时间隔加入。在第二次加入后于室温下 持续再搅拌20小时。在减压下将THF蒸发并加入水(100mL)。用 TBME(100mL)清洗深红色溶液。用浓HCl酸化水相并用EtOAc(2×100mL) 萃取。将合并的有机萃取液干燥并浓缩得到化合物13-5的深红色粉末 (3.78g)，其可直接用于步骤5中。
本领域技术人员应了解，上图解2和3中通式IV的其他二胺中间体， 其中R8不是甲基，可在上述步骤4中利用适当的R8-X代替碘化甲基(CH3I) 而制备，其中X为离去基，例如Cl、Br、I、甲磺酸酯(mesylate)、对甲苯磺 酸酯(tosylate)、三氟甲磺酸酯(triflate)等。
步骤5：
将得自步骤4的游离羧酸13-5(3.75g)悬浮在8M HCl(100mL)中并将混 合物于100℃搅拌8小时。冷却至室温下，在真空中蒸发挥发物并将残留物 与MeOH进行共蒸发三次。
步骤6：
将得自步骤5的残留物再悬浮在MeOH(100mL)中并在冰水中冷却。将 亚硫酰氯(5.10mL，5当量)滴加入并在65℃下搅拌该悬浮液4小时。在减压 下除去挥发物并将残留物13-6和MeOH(100mL)且之后和甲苯(2×100mL) 进行共蒸发两次。
步骤7：
然后将得自步骤6的残留物13-6溶解在MeOH(200mL)中，加入20％ Pd(OH)2/C(500mg)，并将混合物在1atm氢气下搅拌过夜。之后利用过滤将 催化剂除去，并将溶液蒸发至干。将残留物溶解在EtOAc中并用NaHCO3水溶液清洗该溶液并干燥(MgSO4)。将溶剂除去得到固体，悬浮在 TBME(50mL)中并加热至60℃30分钟。然后将等体积的己烷缓慢加入该热 溶液中并将沉淀的4-氨基-2-甲氧基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯13-7利用过滤 收集起来，用TBME-己烷清洗并干燥(2.00g)。
4-氨基-2-甲氧基-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯13-7可依照实施例3或7的 方法转化成图解1中通式III的相应的胺中间体。这些胺中间体可依循实施 例8的方法再转化成图解1中通式III的胺中间体，其中R5为-OCH3且R6 为-CH＝C(R50)-COOR。图解1中通式III的所有这些胺中间体，可利用实施 例4的方法再制成图解1中通式I的抑制剂。
本领域技术人员应了解实施例13的方法可用于得自实施例12的化合 物12-2或其类似物，其中该乙氧基被甲氧基代替，以产生图解2或3中的 通式IV的二胺前体，其中R6为OCH3或OEt。该二胺前体也可依照实施例 3或7的方法转化成图解1中通式III的胺中间体，并利用实施例4的方法 再制成图解1中通式I的抑制剂。
实施例14
N2-甲基-4-(1H-[1，2，3]三唑-4-基)苯-1，2-二胺

步骤1：
将得自实施例9的3-氟-4-硝基苯甲醛9-3(2.0g，11.8mmol)溶解在 THF(30mL)中并将过量的甲基胺(2M溶于THF，～21mL，42mmol)加入。将 反应混合物于RT下搅拌直到由HPLC确认完全转化为止(～2-3小时)。然 后将混浊溶液蒸发至橙色固体，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取并用1N HCl(震 荡直到深红勃根地色(burgundy colour)消散为止；100mL)、水(100mL)和盐 水(60mL)清洗。将合并的萃取物利用无水MgSO4干燥并蒸发得到甲基氨基 中间体14-1的橙色粉末，其用于步骤2中，不需要纯化。
本领域技术人员应了解，在上图解2和3种的通式IV的其他二胺中间 体，其中R8不是甲基，可利用适当的R8-NH2代替上述步骤1中的甲基胺 (CH3NH2)而制备。
步骤2：
将n-BuLi(2.5M于THF中，14.4mL，36.0mmol)于无水THF(60mL)的溶 液于-78℃缓慢加入到TMS-叠氮甲烷(10％于己烷中，18mL，36.0mmol)的溶 液中。将该混合物于-78℃搅拌30分钟，之后缓慢加入得自步骤1的甲基氨 基中间体14-1(2.16g，12.0mmol，溶解在2mL THF中)。将反应混合物于-78 ℃搅拌1小时，之后加温至RT并再搅拌3小时，之后加入H2O使反应停止。 将粗混合物在NaHCO3饱和水溶液(30mL)和EtOAc(60mL)之间分配，再用 EtOAc(2×60mL)萃取水层并用盐水清洗合并的有机层，用无水MgSO4干燥 并浓缩至干。将残留物利用快速柱色谱法(使用20％EtOAc在己烷中作为洗 脱液)纯化得到期望的炔14-2的淡棕色固体(445mg，～21％收率)。
步骤3：
在厚壁压力管中，将得自步骤2的炔14-2(260mg，1.48mmol)溶解在无 水DMSO(6.0mL)中并将TMS-叠氮化物(0.392mL，2.96mmol)加入。将反应加 热至140℃2小时，然后冷却并用EtOAc(50mL)萃取并用盐水(2×50mL)清 洗。将有机层用无水MgSO4干燥并蒸发获得粗三唑14-3的黄棕色固体，其 用于步骤4中不需再纯化。
步骤4：
将得自步骤3的粗三唑中间体14-3(～1.10mmol)溶解在EtOH(10mL)和 H2O(6mL)中得到起始物的一些沉淀，将K2CO3(0.91g，6.58mmol)和亚硫酸氢 钠(1.15g，6.58mmol)加入并将反应混合物于RT下搅拌2小时。之后用 EtOAc(50mL)萃取反应混合物，利用H2O(50mL)和盐水(30mL)清洗有机层， 用无水MgSO4干燥并蒸发得到棕色胶质，其含有N2-甲基-4-(1H-[1，2，3]三唑 -4-基)苯-1，2-二胺14-4(于其他次要产物之中)。
将粗N2-甲基-4-(1H-[1，2，3]三唑-4-基)苯-1，2-二胺不须经纯化而依照实 施例3或7的方法转化成图解1中通式III的相应的胺中间体，再利用实施 例4的方法进一步制成图解1中通式I的抑制剂。
实施例15
N2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1，2-二胺

步骤1：
向4-氯-2-氟-1-硝基苯15-1(1.18g，6.72mmol)的DMSO(7mL)溶液中加入 甲基胺(2M溶于THF中，13.6mL，26.9mmol)的溶液并在RT下搅拌该反应 混合物24小时。用EtOAc(～300mL)稀释该溶液，用H2O(3×50mL)和盐水 (50mL)清洗有机层，用无水MgSO4干燥并在真空中浓缩得到甲基氨基衍生 物15-2的黄色固体(1.19g)。将粗物质用在步骤2中，不需再纯化。
本领域技术人员应了解，在上图解2和3中的通式IV的其他的二胺中 间体，其中R8不是甲基，可利用适当的R8-NH2代替上述步骤1中的甲基胺 (CH3NH2)而制备。
步骤2：
将得自步骤1的甲基氨基衍生物15-2(105mg，0.56mmol)和N-甲基哌嗪 (0.5mL)的混合物加热至90℃并搅拌3小时，之后在RT下再搅拌15小时。 将反应混合物用EtOAc(～50mL)稀释并用H2O(3×10mL)和盐水(20mL)清洗 有机层，用无水MgSO4干燥并在真空中浓缩得到哌嗪衍生物15-3的黄色固 体(140mg)，其用在步骤3中不用再纯化。
本领域技术人员应了解带有其他取代基的哌嗪衍生物可在上述步骤2 中用来代替N-甲基哌嗪，以制备用于形成式(I)的其他化合物的中间体。
步骤3：
在得自步骤2的哌嗪衍生物15-3(140mg)的EtOH(6mL)溶液中加入 Pd/C(10％，25mg)并在H2气下于RT中搅拌该混合物15小时。将混合物过滤 并将溶液蒸发得到相当纯的期望产物N2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1，2-二 胺15-4的紫色油(133mg)。
将N2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1，2-二胺15-4不需再纯化而依照实施 例3或7的方法转化成图解1中通式III的相应的胺中间体，并再利用实施 例4的方法制成图解1中通式I的抑制剂1。
实施例16
4-咪唑-1-基-N2-甲基苯-1，2-二胺

利用实施例15的方法制备4-咪唑-1-基-N2-甲基苯-1，2-二胺16-1，除了 在步骤2中用咪唑代替N-甲基哌嗪。4-咪唑-1-基-N2-甲基苯-1，2-二胺16-1 可依照实施例3或7的方法转化成图解1中通式III的相应的胺中间体，并 再利用实施例4的方法制成图解1中通式I的抑制剂。
实施例17
4-(2-氨基噻唑-4-基)-N1-甲基苯-1，2-二胺

步骤1：
将4-氯-3-硝基苯乙酮17-1(3.00g，15.0mmol)和甲基胺(15.0mL，2M溶于 THF，30.0mmol)的混合物放在密封压力管中并在80℃下搅拌6小时及在RT 下搅拌20小时。将反应混合物浓缩至干，并利用快速柱色谱法纯化残留物 (使用20-30％己烷于EtOAc中)，以分离出期望的纯产物17-2的橙色固体 (980mg，34％收率)。
本领域技术人员应了解，在上图解2和3中的通式IV的其他二胺中间 体，其中R8不是甲基，可利用适当的R8-NH2代替上述步骤1中的甲基胺 (CH3NH2)而制备。
步骤2：
向得自步骤1的4-甲基氨基-3-硝基苯乙酮中间体17-2(700mg，3.6mmol) 的二烷∶乙醚(10mL，1∶1比)溶液中缓慢加入Br2(0.20mL，3.96mmol)并将反 应混合物于RT下搅拌20小时。将该反应混合物浓缩至干并将残留物再溶 解在EtOAc(200mL)中。用NaHCO3饱和水溶液(2×100mL)和盐水(100mL) 清洗该溶液，利用无水MgSO4干燥并浓缩至干，得到粗溴酮中间体 17-3(1.0g)，其用于步骤3，不需纯化。
步骤3：
将得自步骤2的溴酮中间体17-3(1.0g)和硫脲(548mg，7.2mmol)的 i-PrOH(30mL)溶液于70℃搅拌1小时。将该混合物冷却至RT并将形成的沉 淀物过滤，用二乙醚清洗并干燥得到期望的氨基噻唑中间体17-4的橙色固 体(～1.0g)。该化合物用于步骤4中不用纯化。
步骤4：
将得自步骤3的硝基中间体17-4(500mg，～2mmol)和SnCl2二水合物 (2.25g，10mmol)的EtOH(15mL)溶液于80℃搅拌16小时。将混合物缓慢倒 至NaHCO3中并强力搅拌30分钟。利用CH2Cl2(2×200mL)萃取混合物并将 合并的有机层利用无水Na2SO4干燥并浓缩至干。将残留物利用快速柱色谱 法纯化(使用溶剂梯度从30％己烷于EtOAc中至100％EtOAc，然后至3％ MeOH于EtOAc中)，以回收未反应的起始物和纯二胺产物4-(2-氨基噻唑-4- 基)-N1-甲基苯-1，2-二胺17-5(167mg，38％收率)。
将4-(2-氨基噻唑-4-基)-N1-甲基苯-1，2-二胺17-5依照实施例3或7的方 法转化成图解1中通式III的相应的胺中间体，再利用实施例4的方法制成 图解1中通式I的抑制剂。
图解1中通式I的抑制剂或在其制备中的适用中间体，其氨基噻唑取代 基的游离氨基基团，可利用本领域技术人员已知的方法将其烷基化，或利 用本领域技术人员已知的方法将其乙酰基化，例如用醋酸酐、乙酰氯等处 理。或者在上述步骤3中利用适用的N被取代的硫脲代替硫脲将得到其中 游离氨基基团被取代的中间体。
实施例18
4-氨基-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯

步骤1：
向间氯苯甲酸18-1(12.5g，79.8mmol)的硫酸(100mL)溶液中于40℃分批 缓慢加入硝酸钾(约总量的一半；22.0g，218mmol)，同时搅拌(温度维持在低 于70℃)。之后将溶液缓慢加热至105℃，将剩下的KNO3缓慢加入(将温度 维持在低于110℃)，最后将溶液加热至130℃15分钟，冷却至RT并倒到冰 上(～500mL)。将形成的黄色固体过滤，用水(50mL)清洗、风干2小时，得 到期望产物18-2和未知副产物以2∶1混合的混合物13.25g(67％)。该混合物 用于步骤2中。
步骤2：
将得自步骤1的粗二硝基羧酸18-2(～13g)溶解在甲醇(100mL)中并非 常缓慢地加入硫酸(13.0mL)，因为该反应为极放热反应。在回流下搅拌反应 混合物18小时。将溶液倒至冰上(～500mL)并用EtOAc(2×100mL)萃取产 物。将有机层利用5％NaHCO3(3×100mL)水溶液清洗，用无水MgSO4干燥 并蒸发，得到期望的二硝基甲酯中间体18-3(9.54g，69％收率)。
步骤3：
向上述的二硝基芳基氯化物18-3(9.5g，36.5mmol)的DMF(20mL)溶液于 0℃搅拌加入甲基胺(2M溶于THF，39.2mL，74.7mmol)。几分钟之后形成结 晶固体，将悬浮液加温至RT并持续搅拌2小时。将反应混合物于H2O(200mL) 和EtOAc(100mL)之间分配，并用5％NaHCO3水溶液(100mL)和盐水(3× 100mL)清洗有机层，用无水MgSO4干燥并将溶剂蒸发至干得到期望产物 18-4的黄橙色固体(7.09g，76％收率)。
本领域技术人员应了解，在上图解2和3中的通式IV的其他二胺中间 体，其中R8不是甲基，可利用适当的R8-NH2代替上述步骤3中的甲基胺 (CH3NH2)而制备。
步骤4：
向上面得到的二硝基苯胺中间体18-4的EtOH/H2O(100mL，1∶1比)悬浮 液中于强力搅拌下加入K2CO3(10.3g，74.5mmol)，接着分批加入亚硫酸氢钠 (13.0g，74.5mmol)。黄色悬浮液转变成血红色然后黑色，变得更为均质(轻微 放热)，然后变成双相，并形成白色沉淀。于RT下搅拌30分钟后，使EtOH部分蒸发并用H2O(100mL)稀释残留物。将反应混合物以EtOAc(2×75mL) 萃取，将合并的有机层以无水MgSO4干燥并蒸发产生黑色无定形固体 18-5(1.26g，55％)，其这样用于步骤5中。
步骤5：
向由上得到的三苯胺18-5(400mg，2.05mmol)的乙腈(5mL)的搅拌冰冷 溶液在氮气下加入三乙基胺(0.57mL)，接着滴加入TrocCl(0.282mL， 2.05mmol)。将深紫色溶液搅拌并于2小时内加温至RT。将溶剂蒸发，并将 残留物加到EtOAc(30mL)中，用5％NaHCO3水溶液(2×20mL)和盐水(20mL) 清洗，用无水MgSO4干燥并将溶剂蒸发至干。利用快速色谱将残留物纯化 (利用TLC级硅胶和溶剂梯度从30％至60％EtOAc于己烷中进行洗脱)得 到期望产物18-6的米色无定形固体(459mg，60％收率)。
步骤6：
于以上Troc保护的苯胺衍生物18-6(100mg，0.27mmol)于CH2Cl2(1mL) 的搅拌溶液中加入吡啶(0.032mL，0.4mmol)接着加入Fmoc-Cl(80mg， 0.31mmol)。将反应混合物于RT下搅拌2小时。用EtOAc(30mL)稀释混合 物，用5％水溶液NaHCO3(2×10mL)清洗悬浮液，用无水MgSO4干燥并蒸 发至干。利用快速色谱法将残留物纯化(利用TLC级硅胶和溶剂梯度从20％ 至30％EtOAc于己烷中进行洗脱)得到两种Fmoc保护的期望产物18-7样品； 47mg极纯产物及100mg略低纯度的产物。
步骤7：
将双重保护(经Troc-和Fmoc-保护)的三苯胺(trianinile)衍生物 18-7(100mg，～0.17mmol)溶解在THF(1mL)和醋酸(0.25mL)中，接着加入全 新活化锌(20.0mg，0.31mmol)。将反应混合物在氮气下于RT强力搅拌2小时。 以HPLC监测反应的进展并在2小时后只观察到～30％的转化，因此再加入 锌(15mg)并于60℃下持续搅拌4小时。将反应混合物利用EtOAc(30mL)稀 释，用Celite过滤并将滤液在冰浴中冷却并用5％水溶液NaHCO3(20mL)清 洗；必须小心以预防过量压力形成。用盐水清洗有机层，以无水MgSO4干 燥并将溶剂蒸发，得到单保护中间体4-氨基-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨 基)-5-(甲基氨基)苯甲酸甲酯18-8的白色结晶固体(68mg，96％收率)。
将化合物18-8依照实施例3或7的方法转化成图解1中通式III的相应 经Fmoc-保护的胺中间体，再使用实施例4的方法制成以上通式Ic的经 Fmoc-保护的抑制剂。通式Ic的这些经Fmoc-保护的抑制剂，或在这些合成 中适当的经Fmoc-保护的胺中间体，也可利用实施例8中步骤1，2和3的 方法，转化成以上通式Id的经Fmoc-保护的抑制剂。在这两种情况中，可 利用本领域技术人员熟知的利用哌啶来处理而除去Fmoc保护基且酯基团 的皂化可在碱性条件下发生(本领域技术人员熟知的下列方案)得到抑制剂， 例如化合物1032(表1)和3060(表3)。将这些抑制剂的游离氨基团再和本领 域技术人员公知的试剂，例如异丙基氯甲酸酯等，形成抑制剂例如化合物 1033(表1)。
实施例19
2-(5-溴嘧啶-2-基)-3-环戊基-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸

步骤1：
将溴吲哚19-1(如WO 03/010141中实施例12所描述的方法而制 备)(3.0g，8.9mmol，1当量)溶解在无水DME(20mL)中并加入三-(2-呋喃基) 膦(260mg，1.1mmol，0.12当量)、三乙基胺(3.0mL，21.5mmol，2.4当量)和 Pd(OAc)2(65mg，0.28mmol，0.03当量)。将混合物利用通过其中的起泡Ar而清洗10分钟，并将频哪醇硼烷(pinacolborane)(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二硼 烷(dioborolane)；3.0mL，20mmol，2.2当量)利用注射器加入。将得到的深棕色 混合物于68℃下在氩气下搅拌16小时。之后将反应混合物冷却至RT并将 5-溴-2-碘嘧啶(3.0g，10.5mmol，1.18当量)作为固体加入，接着小心缓慢地 加入K3PO4(10.5g，47.1mmol，5.4当量)于水中(7mL)的冷悬浮液。或者，K3PO4的加入可预先在5-溴-2-碘嘧啶的加入之前加入。之后将深棕色混合物在氩 气下加热至80℃24小时。将反应混合物冷却至RT并倒进10％NaCl水溶液 (100mL)中。将棕色悬浮液利用EtOAc(150mL)萃取，用水(2×50mL)和盐水 (100mL)清洗萃取液，并干燥且浓缩至50mL。在冰箱中冷却2小时得到米 色沉淀物，利用过滤收集，用少量的EtOAc清洗并干燥。在真空中将滤液 浓缩并将残留物在丙酮(20mL)中浆化，加热至沸腾并在冰箱中冷却过夜。 过滤固体并将合并的固体再利用色谱法加以纯化，使用CHCl3作为溶剂， 得到期望的吲哚酯19-2的米色固体，具有77％收率。
步骤2：
将酯19-2(300mg，0.72mmol)悬浮在DMSO(10mL)中并将悬浮液温和地 加热以溶解固体。将微浑的黄色溶液冷却并搅拌加入2.5N NaOH(2.0mL， 5.0mmol，8.6当量)，并于RT下持续搅拌4小时。将混合物缓慢倒到0.5N HCl(200mL)中。利用过滤将黄色沉淀收集起来并用水清洗并干燥，得到化 合物19-3(273mg，94％收率，100％同质性)。
实施例20
3-环戊基-1，2-二甲基-6-吲哚羧酸

将2-溴吲哚衍生物19-1(1.009g，3.00mmol，如WO 03/010141中的实施 例12描述的方法制备)于氩气下溶解在无水THF(25mL)并将溶液冷却至-78 ℃。将n-BuLi(2.0M于己烷中，1.60mL，3.20mmol)滴加入并将混合物搅拌15 分钟。将MeI(0.37mL，2.00mmol)加入并再持续搅拌30分钟。之后将反应混 合物加温至RT并在减压下除去挥发物。将残留物溶解在TBME(100mL)中 并将溶液用盐水(2×25mL)清洗。将萃取液干燥(MgSO4)，在减压下浓缩，并 利用快速色谱法使用0-15％EtOAc于己烷中作为洗脱液以纯化残留物。得到 期望的2-甲基吲哚衍生物20-1的蜡状固体(0.658g，80％收率)：MS-ES m/z 272.1(MH+)。将甲酯20-1以一般的方法皂化(NaOH/DMSO)得到相应的羧酸 20-2，具有96％收率：MS-ES m/z 258.1(MH+)。
实施例21
3-环戊基-2-乙烯基-1-二甲基-6-吲哚羧酸

将2-溴吲哚19-1(由WO 03/010141的实施例12描述的方法所制 备)(5.000g，14.87mmol)溶解在无水二烷(50mL)中，并加入乙烯三丁基锡 (4.82mL，16.50mmol)。将溶液利用打入N2的气泡15分钟而加以脱气。将双 (三苯基膦)钯(II)氯化物(0.350g，0.50mmol)加入并将混合物在氮气下加热至 100℃过夜。将其他催化剂(0.350g，0.50mmol)加入并持续再加热48小时，在 该点TLC分析显示反应几乎完成。将反应混合物冷却至RT并利用小硅胶 垫过滤，用THF清洗。将滤液于减压下浓缩并将残留物利用快速色谱法使 用5-15％EtOAc在己烷中作为洗脱液而加以纯化。得到期望的2-乙烯基吲 哚酯21-1的褐色固体(2.92g，69％收率)：MS-ES m/z 284.1(MH+)。将甲酯21-1 以一般方法(NaOH/DMSO)皂化得到相应的羧酸21-2，具有93％收率：MS-ES m/z 270.1(MH+)。
实施例22
3-环戊基-2-乙基-1-甲基-6-吲哚羧酸

将2-乙烯基吲哚酯21-1(实施例21)(0.250g，0.88mmol)溶解在 MeOH(15mL)中并将溶液于10％Pd(OH)2/C(50mg)进行氢化(1atm H2气)18h。 之后利用过滤将催化剂除去并在减压下将滤液蒸发得到粗酯22-1。将残留 物溶解在DMSO并用NaOH以一般方法进行皂化，得到期望的2-乙基吲哚 衍生物22-2的白色固体(0.211g，88％收率)：MS-ES m/z 272.1(MH+)。
实施例23
3-环戊基-2-(2-丙烯基)-1-甲基-6-吲哚羧酸

将2-甲锡烷基吲哚23-1(1.280g，2.34mmol；利用描述在WO 03/010141 中的方法制备)、三苯基膦(0.065g，0.25mmol)、CuI(0.045g，0.24mmol)、 LiCl(0.200g，4.72mmol)和2-溴丙烯(0.444mL，5.00mmol)溶解在DMF(6mL)中 并将悬浮液利用通入氩气气泡20分钟而脱气。加入Pd2(dba)3(0.035g， 0.034mmol)并再脱气10分钟后，将反应混合物加热至100℃过夜。之后将 悬浮液用TBME(100mL)稀释并用盐水清洗(2×25mL)。将萃取物干燥(MgSO4) 并在减压下浓缩得到残留物，利用快速色谱法纯化，使用5-10％EtOAc在己 烷中作为洗脱液。得到期望的2-(2-丙烯基)吲哚23-2的米色固体(0.57g，81％ 收率)：MS-ES m/z 298.1(MH+)。将甲酯23-2以一般方法皂化(NaOH/DMSO) 得到相应的羧酸23-3，具有96％收率：MS-ES m/z 284.1(MH+)。
实施例24
3-环戊基-2-异丙基-1-甲基-6-吲哚羧酸

依照实施例22中对于2-乙基类似物所描述的相似方法，得到2-异丙基 吲哚衍生物24-2的白色固体(88％收率)：MS-ES m/z 286.1(MH+)。
实施例25
3-环戊基-2-环丙基-1-甲基-6-吲哚羧酸

将环丙基溴化物(0.471g，3.90mmol)溶解在无水THF(20mL)中并在氩气 压下将溶液冷却至-78℃。将nBuLi(0.1M在己烷中，3.60mL，3.60mmol)加入 并将混合物搅拌15分钟。之后加入ZnBr2(0.878g，3.90mmol)的THF(15mL) 溶液，使混合物最高加温至RT并将反应搅拌15分钟。将2-溴吲哚19-1(如 WO 03/010141中实施例12所描述的方法制备)(1.009g，3.00mmol)的 THF(15mL)溶液加入，接着加入四(三苯基膦)钯(0)(0.289g，0.25mmol)。将混 合物于回流中搅拌24小时，在该点时起始物质仍然存在，但通过加入 AcOH(2mL)使反应停止。将挥发物在减压下除去并将残留物利用 TBME(100mL)提取。用NaHCO3饱和水溶液清洗萃取液并干燥(MgSO4)。在 减压下蒸发得到残留物，可经快速色谱法利用0-15％EtOAc于己烷中作为洗 脱液而加以纯化，得到期望的2-环丙基吲哚酯25-1的浅绿色固体(0.540g， 60％收率)：MS-ES m/z 298.1(MH+)。甲酯25-1可用一般方法皂化 (NaOH/DMSO)得到相应的羧酸25-2，具有80％收率：MS-ES m/z 284.1(MH+)。
实施例26
3-环戊基-1-甲基-2-(1-吡唑基)-6-吲哚羧酸

将2-溴吲哚19-1(如WO 03/010141中实施例12所描述的方法制 备)(1.00g，2.97mmol)和吡唑(2.00g，20.4mmol，9.9当量)加到密封管中并将混 合物加热至160℃72小时。之后将反应混合物冷却至RT并加载到快速色谱 柱上。利用40-100％EtOAc的己烷溶液当成洗脱液，洗脱该产物。将回收的 物质(1.60g)，其中含有吡唑，溶解在THF/MeOH/水的混合物中并用1N NaOH碱性。之后在减压下使有机层蒸发并将残留物用浓HCl处理，以沉淀出期 望的2-吡唑基吲哚羧酸26-1(0.400g，43％收率)。
在吲哚环的C-2含有其他N-联杂环取代基的类似物可利用类似方法制 备，用氮为基础的杂环开始制备，例如咪唑类和三唑类。
实施例27
(E)-3-[2-(1-氨基环丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯

步骤1：
将2，4-二氯硝基苯(27-1)(61g，0.32mmol)，三乙基胺(68mL，0.48mol)和 2.0M甲基胺的THF(500mL，1.0mol)溶液在氩气下在装有Graham冷凝器的 3-L圆底烧瓶中混合。之后在40℃加热搅拌该溶液并有白色固体(Et3NH+Cl-) 开始形成。加热～6小时后，TLC(在20％乙酸乙酯的己烷中)显示该反应完成 约～60％。加入另外二当量的甲基胺的THF(330mL)溶液，并在40℃再搅拌 加热该混合物16小时。TLC显示所有起始物全都被消耗。让反应混合物冷 却至室温并利用过滤除去白色固体并用THF整个清洗。在减压下使滤液浓 缩并再溶解在800mL的二氯甲烷中，用水和盐水清洗并用Na2SO4干燥。在 真空中将溶剂除去得到化合物27-2的橙色固体(59.5g，定量)，其纯度足够 可用于下一步骤。
步骤2：
在干燥压管中于氩气下加入化合物27-2(2.88g，15mmol)、 Pd2(dba)3(414mg，0.45mmol)、P(t-Bu)3(0.1M溶于二烷的溶液，18mL，1.8mmol) 和N，N-二环己基甲基胺(3.6mL，16.5mmol)。将丙烯酸正丁酯(2.4mL， 16.5mmol)利用氩气脱气35分钟，然后加到该混合物中。然后将管密封并在 110℃下搅拌加热该混合物过周末。将反应冷却至环境温度并用乙酸乙酯 (200mL)稀释。让混合物经过硅胶垫过滤而除去将固体残留物并用乙酸乙酯 (700mL)洗。在真空中浓缩滤液并和己烷共蒸发三次。之后将红色固体用己 烷(40mL)于60℃搅拌。并将混合物冷却至0℃15分钟并利用过滤收集红色 固体并用己烷清洗，接着在高真空下再度进行干燥(3.4g，81％收率)。由NMR 得知产物27-3约90％纯度，其他产物可利用快速柱纯化而从滤液中获得。
步骤3：
使用实施例11步骤5的方法将化合物27-3转化为化合物27-4。
步骤4：
使用实施例3的方法将化合物27-4转化为化合物27-5。
实施例28
(E)-3-[2-(1-氨基环丁基)-7-氯-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]丙烯酸甲酯

步骤1：
将4-氨基-3-硝基苯甲酸28-1(15.00g，82mmol)溶解在AcOH(200mL)中 并加入磺酰氯(6.62mL，82mmol)。在RT搅拌该混合物2小时，之后再加入 另外的硫酰氯(1.5mL)完成反应。在于RT下再搅拌1小时后，将该反应混 合物倒至冰上并利用过滤收集沉淀。用水清洗产物28-2，风干并直接用在 下一步骤。
步骤2：
将粗产物28-2溶解在MeOH(300mL)中并加入浓H2SO4(1mL)。让混合 物回流2天，在该点之后转换率约～75％完成。在减压下将挥发物除去并在 EtOAc和水之间分配。利用Na2CO3饱和水溶液的缓慢加入使得混合物碱性 化并得以将有机相分离。将萃取物用盐水清洗、干燥(Na2SO4)并浓缩得到 28-3的米色固体(12.32g)，其可直接用于下一步骤。
步骤3：
将硝基苯胺28-3(11.32g，49mmol)、亚硫酸氢钠(35.54g，204mmol)和 NaHCO3(17.15g，204mmol)溶解在3∶2EtOH/水(600mL)中。将橙色混合物于 RT下搅拌20小时。然后在减压下将EtOH除去并用EtOAc萃取产物。将 萃取物用水和盐水清洗、干燥(Na2SO4)并蒸发得到化合物28-4的棕色固体 (4.60g，46％收率)，其不需经纯化即可用在下一步骤。
步骤4：
将二胺28-4(1.00g，5.0mmol)、N-Boc-1-氨基环丁烷羧酸(1.07g， 5.0mmol)、HATU(2.20g，5.8mmol)和Et3N(2.10mL，15.0mmol)溶解在 DMF(30mL)中并于RT下搅拌该混合物2天。将反应混合物倒至冰上并利用 过滤收集沉淀的固体。利用水清洗该物质，并溶解在EtOAc中并用盐水萃 取。之后将溶液干燥(Na2SO4)并在减压下浓缩。将残留物溶解在AcOH中并 加热至80℃3小时。HPLC分析显示完全转化成期望的苯并咪唑衍生物。在 减压下除去AcOH，使残留物用EtOAc提取并用NaHCO3水溶液和盐水清 洗该溶液，经过干燥(MgSO4)之后，除去溶剂得到化合物28-5的橙色固体 (563mg)，其可直接用于下一步骤中。
步骤5：
将苯并咪唑28-5(1.63g，4.29mmol)和K2CO3(2.96g，21.45mmol)悬浮在 DMF(10mL)中并加入碘甲烷(0.27mL，4.30mmol)。于RT下搅拌该混合物3 小时。之后将反应混合物倒至冰上并利用过滤收集沉淀固体。将该物质用 水清洗，溶解在EtOAc中并将该溶液用5％柠檬酸水溶液和盐水清洗两次， 经过干燥(MgSO4)之后在减压下除去挥发物，得到化合物28-6的棕色固体 (1.44g)，其可直接用于下一步骤。
步骤6：
将甲酯28-6(1.22g，3.10mmol)溶解在THF(30mL)中并在RT下分几个小 部分加入LiBH4(0.243g，11.14mmol)。然后于40℃下搅拌该混合物16小时。 由于转化尚未完成，加入另外的LiBH4(0.100g，4.6mmol)，并于70℃另外再 搅拌该混合物3小时。将反应混合物冷却至RT并将残留物用EtOAc稀释。 小心地加入水并使得有机相分离。用水和盐水清洗萃取物并干燥(MgSO4)。 将粗醇28-7(961mg)和其他批次的产物合并并利用快速色谱法加以纯化。
步骤7：
将得自以上的纯化醇28-7(0.450g，1.02mmol)溶解在DCM(20mL)中并加 入Dess-Martin periodinane(0.551g，1.30mmol)。于RT下搅拌该混合物2小时。 然后加入(乙酯基亚甲基)三苯基正膦(0.550g，1.58mmol)，并将混合物回流20 小时。之后在减压下将挥发物除去并将残留物溶解在1∶1TFA-DCM中，以 便除去Boc保护基。于RT下搅拌1小时后，在减压下除去挥发物并将残余 物在EtOAc和1N HCl之间分配。分离出含有产物的水相，用2M Na2CO3中和并用EtOAc萃取2X。将萃取物干燥(Na2SO4)并浓缩得到化合物28-8的 白色泡沫(212mg)，通过快速色谱法中使用80-100％EtOAc在己烷中作为洗 脱液而加以纯化。将期望的苯并咪唑片段(fragment)的白色固体(66mg)。
实施例29
5-[2-(1-氨基环丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-3H-[1，3，4]二唑-2-酮

步骤1：
将10N HCl(2mL)加到3-氟-4-硝基-苯甲酸(29-1)(10g，54.0mmol)的 300mL MeOH溶液中并使溶液回流15小时。之后将混合物浓缩，用EtOAc稀释残留物，并将有机相用2X水和NaHO3饱和水溶液清洗、干燥(MgSO4)、 过滤并蒸发得到10.45g(97％收率)化合物29-2的白色固体。该化合物可用在 下一反应中。
步骤2：
将甲基胺(于THF中的2N溶液，80mL)于0℃滴加到化合物29-2(10g， 50.2mmol)于100mL THF的溶液中。将该混合物于0℃再搅拌20分钟，之 后于室温下再搅拌15小时。然后将挥发物蒸发，并用EtOAc稀释残留物并 用2X水、NaHO3饱和水溶液清洗有机相、干燥(MgSO4)、过滤并蒸发得到 10.21g(96％收率)29-3的橙色固体。该化合物可用于下一反应中。
步骤3：
将钯(10％碳上，1g)加到化合物29-3(10g，47.6mmol)于400mL THF-无水 EtOH的1/1混合溶液中。在氢气下搅拌该混合物16小时，然后将该溶液过 滤以除去催化剂并浓缩得到8.5g(99％收率)化合物29-4的灰白色固体。该化 合物可用于下一反应中。
步骤4：
使用实施例7的方法将化合物29-4转化为化合物29-5。
步骤5：
将化合物29-5(730g，2.03mmol)和肼单水合物(500μL，10.3mmol)于 5mL乙醇中的混合物于85℃下在具有螺旋帽的小瓶中加热72小时。之后将 该溶液浓缩、用CH2Cl2稀释并用水清洗有机层。将有机层干燥(Na2SO4)、 过滤并蒸发得到642mg(88％)化合物29-6的灰白色固体。其可用于下一步骤 中。
步骤6：
将三乙基胺(190μL，1.36mmol)加到化合物29-6(350mg，0.97mmol)和 1，1’-羰基二咪唑(190mg，1.17mmol)的THF(5mL)溶液中。在室温下搅拌该混 合物15小时。将挥发物除去并用将残留物用EtOAc稀释，用水、盐水清洗， 并将有机层干燥(Na2SO4)、过滤和蒸发得到318mg(85％收率)化合物29-7的 蜡状白色固体，其可用于下一步骤中。
步骤7：
将TFA(3mL)滴加到化合物29-7(150mg，0.39mmol)的二氯甲烷(10mL) 的悬浮液中并将得到的溶液搅拌1小时。将挥发物蒸发得到150mg(定量收 率)的期望化合物29-8的三氟醋酸盐，其为米色固体。
实施例30
5-[2-(1-氨基环丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-3-甲基-3H-1，3，4-二唑-2- 酮

将碳酸钾(32mg，0.32mmol)加到化合物29.7(80mg，0.21mmol)的 DMF(1mL)溶液中。将该悬浮液在室温下搅拌15分钟。然后将碘甲烷(12.5μL， 0.2mmol)加入并在室温下搅拌该混合物3小时。将混合物用EtOAc稀释， 用水(3X)、盐水清洗，然后将有机相干燥(MgSO4)、过滤并蒸发得到 67mg(81％收率)的米色固体。使用实施例29步骤7中描述的TFA处理得到 57mg(定量收率)的期望化合物30-1的三氟醋酸盐，其为米色固体。
化合物30-1可利用实施例4和34步骤1的方法偶合至通式II的吲哚 中间体得到式I的化合物。
实施例31
5-[2-(1-氨基环丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-2-甲基-2H-吡唑-3-醇

步骤1：
将NaOH(10N，11mL，110mmol)加到化合物29-5(5.0g，13.9mmol)在 3∶2∶1THF、MeOH和水混合(180mL)的溶液中并将该溶液在室温下搅拌过夜。 然后将混合物浓缩，利用1N HCl将pH值调整至4并用EtOAc萃取混合物。 将有机层用盐水清洗、干燥(MgSO4)、过滤并蒸发得到化合物31-1(3.94g， 82％收率)的白色固体。该化合物可用于下一反应中。
步骤2：
将1，1’-羰基二咪唑(702mg，4.33mmol)加到化合物31-1(1g，2.90mmol)的 THF(24mL)溶液中。将该溶液搅拌15小时，然后于0℃滴加到丙二酸阴离 子(将Et3N(0.81mL，5.80mmol)和MgCl2(690mg，7.25mmol)加到丙二酸单乙酯 钾盐(1g，5.96mmol)的乙腈(10mL)溶液中，接着在室温下搅拌2.5小时而制 得)的溶液中。然后将得到的混合物缓慢加温至室温并总共搅拌约48小时。 将该混合物浓缩并加入甲苯。将该混合物冷却至10-15℃并通过添加1M HCl直到pH达到3-4而缓慢水解。然后分离相层并用EtOAc稀释有机层，用水 清洗、干燥并蒸发得到黄色油。利用快速色谱法将产物纯化(洗脱液∶己 烷∶AcOEt 4∶6)得到885mg(74％收率)化合物31-2的白色固体。
步骤3：
将甲基肼(29μL，0.55mmol)加到化合物31-2(100mg，0.24mmol)的 EtOH(2.5mL)溶液中。于80℃搅拌该混合物15小时。然后将该混合物浓缩 并加入水，接着利用1N HCl的加入将pH值调整至6-7。用EtOAc将水层 萃取3次并将有机层干燥(MgSO4)和浓缩得到94mg(98％收率)的淡黄色固 体。利用实施例29步骤7描述的方法用TFA的二氯甲烷溶液处理，得到 93mg(定量收率)的化合物31-3的三氟醋酸盐。
化合物31-3可利用实施例4和34步骤1的方法偶合至通式II的吲哚 中间体得到式I的化合物。
实施例32
5-[2-(1-氨基环丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-3H-1，3，4-噻二唑-2-酮

步骤1：
将TBTU(380mg，1.18mmol)和三乙基胺(380μL，2.73mmol)加到化合物 31-1(350mg，1.01mmol)和肼基甲酸乙酯(ethyl carbazate)(120mg，1.15mmol)在 DMF(5mL)的溶液中。将该混合物于室温下搅拌15小时，然后用EtOAc稀 释。将得到的有机悬浮液用2X水和1X NaHCO3饱和水溶液清洗。然后将 THF加到有机层中得到溶液，干燥(MgSO4)、过滤和浓缩。将残留物用EtOAc研磨得到290mg(66％)化合物32-1的米色固体。该化合物可用于下一反应 中。
步骤2：
将Lawesson试剂(70mg，0.17mmol)于100℃加到化合物32-1(150mg， 0.35mmol)于二烷(10mL)的溶液中。将得到的混合物于100℃下搅拌8小 时然后在140℃下搅拌4小时。然后将该混合物冷却至100℃并加入另外部 分的Lawesson试剂(70mg，0.17mmol)。然后于100℃将溶液加热15小时。 将混合物浓缩至干并利用EtOAc研磨固体残余物并过滤。将得到的米色固 体(100mg)利用实施例29步骤7中描述的TFA处理得到93mg化合物32-2 的三氟醋酸盐。
化合物32-2可利用实施例4和34步骤1的方法偶合至通式II的吲哚 中间体得到式I的化合物。
实施例33
[1-(1-甲基-6-嘧啶-2-基-1H-苯并咪唑-2-基)环丁基]氨基甲酸叔丁基酯

步骤1：
将市售购得的1，3-二溴苯33-1(4.1mL，33.9mmol)溶解在浓硫酸(35mL) 中，在冰浴中冷却。将硝酸钾(3.4g，33.9mmol)缓慢加入(以小量分批)因此可 将内反应温度维持在10℃以下。将反应混合物再搅拌30分钟，之后并倒入 1L冰中。将形成的黄色沉淀物(33-2)过滤并用水清洗。在减压下干燥并可直 接用在下述步骤中。
步骤2：
将化合物33-2(6.3g，22.4mmol)和甲基胺氢氯化物(3.0g，44.8mmol)于 DMF(50mL)中的混合物冷却至0℃。将三乙基胺(9.4mL，67mmol)加入，并 将混合物于RT下搅拌3.5小时，然后加热至70℃过夜。将混合物倒入水中 并将得到的沉淀物过滤。用EtOAc(3X)萃取滤液并将萃取液用水(3X)和饱和 NaCl清洗、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩得到化合物33-3和33-4的混合物， 其为橙色固体(4.8g)并可用于下一步骤中。
步骤3：
利用描述在实施例11步骤5描述的方法使得进行硝基化合物33-3与 Na2S2O4/K2CO3的还原反应。利用柱色谱法使用溶剂梯度EtOAc于己烷中从 17％至25％，将化合物33-5(1.5g，～20％，3个步骤的收率)从反应混合物中 分离出来。
步骤4：
使用描述在实施例7中的方法将二苯胺33-5转化为化合物33-6。
步骤5：
将氩气以气泡方式打入化合物33-6(300mg，0.79mmol)、氯化锂(67mg， 1.6mmol)，PPh3(31mg，0.12mmol)和2-三丁基甲锡烷基嘧啶(365mg，0.99mmol) 于DMF(6.0mL)的混合物中15分钟。将Pd(PPh3)4(91mg，0.079mmol)和 CuI(15mg，0.079mmol)加入并将混合物于100℃加热24小时。将混合物用 EtOAc稀释并将有机相用水和盐水清洗，然后干燥(MgSO4)并浓缩得到黄色 油，其利用快速色谱法纯化(己烷∶EtOAc3∶7至2∶8)得到化合物33-7的黄色 固体(100mg，24％)。
利用实施例29步骤7中描述的标准条件可将化合物33-7去保护并将得 到的胺利用实施例4和34步骤1的方法偶合至通式II的吲哚中间体得到式 I的化合物。
本领域技术人员应了解，带有相似杂环或芳香基团的类似中间体的制 备，可利用该方法或其变化方法进行。或者，步骤5的偶合反应可利用熟 知的Suzuki反应中的条件进行(A.Suzuki，Pure Appl.Chem.(1994)66，213；N. Miyaura and A.Suzuki，Chem.Rev.(1995) 95，2457)。
实施例34
(E)-3-[2-(1-{[2-(5-溴嘧啶-2-基)-3-环戊基-1-甲基-1H-吲哚-6-羰基]-氨基}-环 丁基)-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-基]-丙烯酸

使用实施例4的方法将化合物19-3(实施例19)和化合物34-1(使用实施 例3的方法由化合物10-2制备而得)偶合得到化合物34-2(化合物3085，表 3)的深黄色固体(9.3％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ1.63(bs，2H)，1.80-1.95(m，6H)， 1.95-2.10(m，2H)，2.70(ddd，J＝9.3&10.6Hz，2H)，2.99(m，2H)，3.65-3.75(m，1H)， 3.76(s，3H)，3.85(s，3H)，6.54(d，J＝15.6Hz，1H)，7.52(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(d， J＝8.4Hz，1H)，7.64(d，J＝8.2Hz，1H)，7.70(d，J＝15.9Hz，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz， 1H)，7.86(s，1H)，8.12(s，1H)，9.18(s，2H)，9.20(s，1H)，12.25(s，1H)。
实施例35
3-环戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羧酸{1-[1-甲基-6-(5-氧代-4，5-二氢 -1，3，4-二唑-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-环丁基}-酰胺

步骤1：
将TBTU(350mg，1.09mmol)和三乙基胺(380mL，2.73mmol)加到化合物 35-1(化合物1025，表1)(487mg，0.89mmol)和肼基甲酸叔丁基酯(130mg， 0.98mmol)的DMF(8mL)溶液中。并将混合物在室温下搅拌2小时，然后并 用EtOAc稀释。将得到的有机悬浮液用2X水和1X NaHCO3饱和水溶液清 洗。然后将THF加到有机层中并将得到的溶液干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。 将残留物用EtOAc研磨得到421mg(72％)化合物35-2的米色固体。该化合 物可用于下一反应中。
步骤2：
将TFA(3mL)滴加到化合物35-2(200mg，0.3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶 液中并将得到的溶液搅拌2小时。将挥发物蒸发得到170mg(定量收率)化 合物35-3的三氟醋酸盐，其可直接使用不须再纯化。
步骤3：
将1，1’-羰基二咪唑(25mg，0.15mmol)一次性加到化合物35-3(100mg， 0.13mmol)和三乙基胺(80μL，0.57mmol)在2mL THF的溶液中并将得到的溶 液于室温下搅拌4小时。然后将该混合物在减压下浓缩，用4mL DMSO稀 释并直接在反相C18半制备HPLC柱(使用溶剂梯度从5％H2O于MeCN中至 100％MeCN)进行纯化，以分离化合物35-4(化合物1128，表1)的黄色无定 形固体，其具有＞95％同质性(29mg，39％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ1.54-1.68(m，2H)，1.79-1.93(m，6H)， 1.94-2.05(m，1H)，2.09-2.21(m，1H)，2.75-2.85(m，2H)，3.05-3.25(m，3H)，3.69(s， 3H)，3.90(s，3H)，7.49(m，1H)，7.57-7.72(m，3H)，7.82-7.92(m，2H)，7.94-8.02(m， 1H)，8.06-8.15(m，2H)，8.78(d，J＝3.9Hz，1H)，9.45(s，1H)，12.62(s，1H)。
实施例36
3-环戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羧酸{1-[6-(5-氨基-1，3，4-二唑-2- 基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基]环丁基}酰胺

将C-(二-咪唑-1-基)-亚甲基胺(25mg，0.16mmol)一次性加到化合物 35-3(实施例35)(80mg，0.14mmol)的THF(4mL)溶液中。将得到的溶液加热至 70℃16小时，之后观察到白色沉淀。然后在减压下将反应物浓缩，并溶解 在4mL DMSO中并直接在反相C18半制备HPLC柱(使用溶剂梯度从5％H2O于MeCN中至100％MeCN)进行纯化，以分离化合物36-1(化合物1129，表 1)的黄色无定形固体，其具有＞95％同质性(19mg，23％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ1.54-1.67(m，2H)，1.79-1.94(m，6H)， 1.95-2.06(m，1H)，2.11-2.23(m，1H)，2.74-2.84(m，2H)，3.19-3.05(m，3H)，3.69(s， 3H)，3.91(s，3H)，7.49(dd，J＝1.8&5.7Hz，1H)，7.59-7.71(m，3H)，7.86-7.92(m， 2H)，7.96-8.01(m，1H)，8.06-8.10(m，1H)，8.10(s，1H)，8.78(d，J＝4.3Hz，1H)， 9.51(s，1H)。
实施例37
3-环戊基-1-甲基-2-吡啶-2-基-1H-吲哚-6-羧酸[1-(1-甲基-6-1，3，4-二唑-2- 基-1H-苯并咪唑-2-基)环丁基]酰胺

将化合物35-3(实施例27)(50mg，0.09mmol)和原甲酸三乙酯(1mL， 6mmol)的二烷(3mL)悬浮液于回流下加热18小时。将得到的几乎清澈的 溶液蒸发至干并将残留物溶解在DMSO(1mL)中，并在反相C18半制备HPLC 柱(使用溶剂梯度从5％H2O于MeCN中至100％MeCN)进行纯化，以分离化 合物37-1(化合物1130，表1)的黄色无定形固体，其具有＞95％同质性(27mg， 53％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ1.55-1.68(m，2H)，1.79-1.93(m，6H)， 1.95-2.04(m，1H)，2.12-2.20(m，1H)，2.82-2.74(m，2H)，3.15-3.05(m，3H)，3.69(s， 3H)，3.92(s，3H)，7.49(dd，J＝2.2&5.3Hz，1H)，7.56-7.73(m，3H)，7.93-8.05(m， 3H)，8.11(s，1H)，8.33(s，1H)，8.79(d，J＝4.3Hz，1H)，9.37(s，1H)，9.44(s，1H)。
实施例38
3-环戊基-2-(5-氟-吡啶-2-基)-1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸{1-[1-甲基-6-(5-氧代 -4，5-二氢-1，3，4-二唑-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基]-环丁基}-酰胺

将TBTU(45mg，0.14mmol)和三乙基胺(49mL，0.35mmol)加到化合物 38-1(利用在WO 03/010141中描述的方法制备)(45mg，0.13mmol)和化合物 29-8(实施例29)(45mg，0.11mmol)的DMF溶液中。将溶液搅拌15小时，并 直接在反相C18半制备HPLC柱(使用溶剂梯度从5％H2O于MeCN中至 100％MeCN)进行纯化，以分离化合物38-2(化合物1143，表1)的黄色无定 形固体，其具有＞95％同质性(23mg，34％收率)。
1H NMR(400MHz，DMSO)：δ1.54-1.68(m，2H)，1.79-1.93(m，6H)， 1.93-2.04(m，1H)，2.07-2.20(m，1H)，2.72-2.82(m，2H)，3.00-3.15(m，3H)，3.67(s， 3H)，3.89(s，3H)，7.57-7.72(m，3H)，7.79-7.95(m，3H)，8.10(s，2H)，8.80(d， J＝2.9Hz，1H)，9.45(s，1H)，12.63(s，1H)。
实施例39
NS5B RNA依赖性RNA聚合酶活性的抑制
如WO 03/010141中描述的方法，进行本发明的化合物对丙型肝炎病毒 RNA依赖性聚合酶(NS5B)抑制剂活性的试验。
实施例40
NS5B RNA依赖性RNA聚合酶抑制的特异性
如WO 03/010141中描述的方法，，除了以脊髓灰质病毒聚合酶代替 HCV NS5B聚合酶外，按照HCV聚合酶描述的形式进行本发明化合物对脊 髓灰质病毒RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂活性的试验。该化合物也可以 先前描述的实验形式进行对抑制小牛胸腺DNA依赖性RNA聚合酶 II(McKercher等，2004Nucleic Acids Res.32：422-431)的描绘。
实施例41
细胞基础的萤光素酶报道基因HCV RNA复制实验
细胞培养：
除了复制子细胞是利用0.25mg/mL G418所选择的以外，如先前所述 (Lohman等，1999.Science 285：110-113；Vroljik等，2003J.Virol Methods 110：201-209)建立具有编码经修饰的萤光素酶报道基因(作为萤光素酶 -FMDV2A-新霉素磷酸转化酶融合基因表达)的稳定次基因组HCV复制子 的Huh-7细胞。被所选细胞表达的萤光素酶的量直接与HCV复制的水平直 接相关。这些细胞，记作MP-1细胞，是维持在补充有10％FBS和0.25mg/mL 新霉素的Dulbecco’s Modified Earle Medium(DMEM)(标准培养基)中。这些 细胞通过胰蛋白酶消化传代，并在90％FBS/10％DMSO中冷冻。实验期间， 使用补充有10％FBS并含有0.5％DMSO并缺乏新霉素的DMEM培养基(实 验培养基)。实验当天，将MP-1细胞胰蛋白酶消化并在实验培养基中稀释 成100000细胞/mL。将100μL分布到黑色96-孔ViewPlateTM(Packard)的每 个孔中。之后将板放在37℃用5％CO2培养两小时。
试剂与材料：   产品   公司   目录号   储存   DMEM   Wisent Inc.   10013CV   4℃   DMSO   Sigma   D-2650   RT   Dulbecco’s PBS   Gibco-BRL   14190-136   RT   胎牛血清   Bio-Whittaker   14-901F   -20℃/4℃   遗传霉素(Geneticin)(G418)   Gibco-BRL   10131-027   -20℃/4℃   胰蛋白酶(Trypsin)-EDTA   Gibco-BRL   25300-054   -20℃/4℃   ViewPlateTM-96，黑色   Packard   6005182   RT   背底胶带，黑色   Packard   6005189   RT   PVDF 0.22μm滤器单元(Filter   Unit)   Millipore   SLGV025LS   RT   聚丙烯深孔滴定板(Deep-Well   Titer Plate Polypropylene)   Beckman   267007   RT
受试化合物的制备：
将在100％DMSO中的受试化合物在实验培养基中进行第一次稀释至 最后DMSO浓度为0.5％。将溶液超声波震荡15分钟并以0.22μM Millipore 滤器组过滤到聚丙烯深孔滴定板(Polyprolylene Deep-Well Titer Plate)的柱3， 将适当体积转移至实验培养基中以得到供试验的起始浓度(2x)。在柱2和4 至12中，加入200μL实验培养基(含有0.5％DMSO)。利用将200μL从柱3 转移至柱4，然后由柱4移至柱5，系列直到柱11而制备出一系列的稀释 液(1/2)。柱2和12为无抑制对照。
试验化合物加入细胞中：
将来自化合物稀释板中每个孔100μL体积转移至细胞板(Cell Plate)(使 用两个柱作为“无抑制对照”，十个[10]柱用于剂量反应)的相应孔中。将细 胞培养板于37℃下和5％CO2培养72小时。
萤光素酶实验：
接下来72小时培养期间，将培养基从96-孔实验板中取出并将体积 100μL且预先加温至室温的1X Glo裂解缓冲液(Promega)加到每个孔中。将 板放置在室温下培养10分钟，并偶尔加以震荡。将黑色胶带贴在板底。将 预先加温至室温的100μL Bright-Glo萤光素酶底物(Promega)加到每个板中， 接着温和混合。在Packard Topcount仪器中利用Data Mode Luminescence(CPS)测定萤光度，该仪器中是1分钟的计数延迟和2秒钟的 计数时间   产品  公司   目录号   储存   Glo裂解缓冲液(Glo Lysis Buffer)  Promega   E266A   4℃   明亮Glo萤光素酶实验系统(Bright-Glo   Luciferase Assay System)  Promega   E2620   -20℃
培养板的每个孔中的荧光度测定(CPS)是测量在各种浓度的抑制剂存 在时HCV RNA复制量。抑制性％利用下列方程式计算：
抑制性％＝100-[CPS(抑制剂)/CPS(对照)×100]
符合Hill模式的非线性曲线用在抑制-浓度数据，且50％有效浓度(EC50) 可利用SAS软体来计算(Statistical Software；SAS Institute，Inc.Cary，N.C.)。
化合物表
列在下表1至4中的所有化合物被发现在实施例41中描述的细胞基础 的HCV RNA复制实验中具有意想不到的良好活性。
每个化合物的保留时间(tR)可利用描述在实施例中的标准分析性HPLC 条件来测量。如本领域技术人员所熟知，保留时间值对于具体测量条件很 敏感。因此，即使使用溶剂、流速、线性梯度等的相同条件，滞留时间值 可以在测量时，因为例如使用不同HPLC仪器而改变。即使使用相同仪器 来测量，该值也可以在测量时，因为例如使用不同的各自HPLC柱而改变， 或是使用相同仪器和相同各自柱测量时，该值可以因为例如各自测量之间 发生不同偶发事件而改变。
                        表1

其中R2、R3、R5、R6、R9和R10如表中所示。














                    表2

其中R2、R3、R5、R6、R9和R10如表中所示。








                            表3

其中R2、R4、R5、R8、R9和R10如表中所示。











                    表4

其中R1、R2、R3、R5、R6、R9和R10如表中所示。