具有抗肿瘤活性的喜树碱衍生物
阅读：4发布：2021-05-26
专利汇可以提供具有抗肿瘤活性的喜树碱衍生物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且具有抗 肿瘤 活性的5－取代的喜树 碱 衍 生物 ，其制备方法，其作为抗肿瘤药物的用途和含有它们的药物组合物。，下面是具有抗肿瘤活性的喜树碱衍生物专利的具体信息内容。
1.通式I的化合物、其可药用盐、异构体、对映体、非对映异构 体和相应的混合物：
其中：
R为F、Cl、Br、I、-N3、NH2、-NR′R″、-COOR′、 -CONR′R″、-NHR″′-NR′R″，其中R′、R″和R″′可为H、烷基、芳 基、芳基烷基、酰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基；
R1为烷基、氨基烷基、羟基烷基、腈、烷氧基亚氨基、芳氧基亚 氨基、甲硅烷基烷基；
R2为氢、羟基、烷氧基、氨基烷基；
R3为氢，任选保护的羟基、烷氧基、氨基烷基；
其中直链或支链的烷基、酰基、烷氧基、氨基烷基或烷氧基亚氨基 基团可包含1至8个，优选1至4个碳原子，且芳基和芳氧基基团可包 含5至10个碳原子。
2.如权利要求1所述的式(I)化合物，其选自
a)5-F-喜树碱；
b)5-N3-喜树碱；
c)5-NH2-喜树碱；
d)5-二-叔丁氧基羰基肼基喜树碱；
e)5-二-苄基氧基羰基肼基喜树碱。
3.制备式(I)化合物的方法，基本上包含下列方案中所示的步骤，其中：
a)前体羟基基团的保护；
b)通过碳负离子生成并与亲电试剂反应在5位衍生化；
c)羟基基团的脱保护；
方案
其中R、R1、R2和R3具有上文所述的含义，且PG为羟基保护基团。
4.药物组合物，其含有式(I)的化合物和可药用的载体和赋形剂。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其为适于口服和胃肠外施用的 形式。
6.如权利要求1-2所述的化合物或如权利要求4-5所述的组合物用 于制备治疗肿瘤的药物的用途。
7.权利要求6所述的用途，其中所述的药物用于治疗实体瘤和白血 病，特别是肺、卵巢、乳腺、胃、肝、前列腺、软组织肉瘤、食管、胰、 头和颈、胶质母细胞瘤、慢性和急性髓细胞白血病的肿瘤。
本发明涉及具有抗肿瘤活性的新的喜树碱衍生物、它们的制备方 法、其作为抗肿瘤药物的用途以及包含它们的药物组合物。
发明背景
喜树碱是从喜树(Camptotheca acuminata)(Nyssaceae)提取的生物 碱，首先由Wall和Wani在1966年描述(J.Am.Chem.Soc.1966，88， 3888-3890)。喜树碱尽管具有广谱抗肿瘤活性，特别是抗结肠肿瘤及其 他实体肿瘤和白血病的活性，但由于其特别地表现为出血性膀胱炎、胃 肠道毒性和骨髓抑制的高毒性而未用于治疗中。
已合成了许多喜树碱类似物以获得具有低毒性和高溶解度的化合 物。目前，有两种药物用于临床实践，即CPT-11和托泊替康。其他衍 生物，诸如贝洛替康、卢比替康、依沙替康、吉马替康、培加替康、勒托 替康、karenitecin、阿非替康、高喜树碱、二氟替康及许多其他的衍生物， 正在进行临床试验。化合物CPT-11是10-羟基-7-乙基喜树碱(常称作SN-38) 的高度易溶的前药，被批准用于多种实体肿瘤和腹水(结直肠、皮肤、胃、 肺、宫颈、卵巢、非霍奇金淋巴瘤)的治疗。
托泊替康是可溶于生理溶液的化合物，对肺、胃、肝、卵巢、乳腺、 前列腺、食管、直肠、软组织肉瘤、头和颈、胶质母细胞瘤、慢性和急 性髓性白血病这些肿瘤是有活性的。但是托泊替康显示重要的副作用诸 如嗜中性白血球减少症和血小板减少症。
勒托替康是更易溶的衍生物，对颈、卵巢、乳腺、结直肠和肺部微细 胞瘤这些肿瘤具有活性。但是，勒托替康亦具有血液毒性。
卢比替康是口服使用的有效对抗胰、卵巢和乳腺肿瘤的前药。
喜树碱及其类似物，作为完全拓扑异构酶I抑制剂，对常规药物、 包括拓扑异构酶II抑制剂有耐药性的肿瘤有效；在整个细胞周期期间保 持高的拓扑异构酶水平；未诱导多药耐药性(Pgo或MRP)或由酶介导的 脱毒代谢。
目前，研究集中于具有比目前使用的药物更低毒性的拓扑异构酶I 的新抑制剂。
开环喜树碱衍生物显示出高的蛋白结合(特别是与白蛋白)和低的肿瘤 组织中的分布。结果，产物在身体中蓄积，对肿瘤的作用不佳。
相反地，内酯形式的高亲脂性促进喜树碱衍生物与细胞膜的吸附，特 别是红细胞，影响了组织/血浆分布比。因此，目前研究集中于两种可选择 的方法：a)设计仍具有好的溶解度的低蛋白结合产品；b)设计在极低剂量 下具有治疗作用的高效产品。
在7、9、10和11位的修饰通常证实可被良好耐受，同时不影响 DNA-拓扑异构酶I-喜树碱三元复合物的稳定性，其形成产生所述化合 物的抗肿瘤活性。
具有20R构象的产物据证实与具有20S构象-与天然构象一致的产 物相比无活性或活性很低。
通常，认为5位的修饰不利于三元复合物的生成，但是，已经报道 吡啶酮环D和E的修饰对产物的活性不利。
已合成了许多喜树碱类似物以获得具有低毒性和高溶解度的化合 物。目前，有两种药物用于临床实践，即CPT-11和托泊替康。其他衍 生物，诸如贝洛替康、卢比替康、依沙替康、吉马替康、培加替康、勒托 替康、karenitecin、阿非替康、高喜树碱、二氟替康及许多其他的衍生物， 正在进行临床试验。化合物CPT-11是10-羟基-7-乙基喜树碱(常称作SN-38) 的高度易溶的前药，被批准用于多种实体肿瘤和腹水(结直肠、皮肤、胃、 肺、宫颈、卵巢、非霍奇金淋巴瘤)的治疗。
托泊替康是可溶于生理溶液的化合物，对肺、胃、肝、卵巢、乳腺、 前列腺、食管、直肠、软组织肉瘤、头和颈、胶质母细胞瘤、慢性和急 性髓性白血病这些肿瘤是有活性的。但是托泊替康显示重要的副作用诸 如嗜中性白血球减少症和血小板减少症。
勒托替康是更易溶的衍生物，对颈、卵巢、乳腺、结直肠和肺部微细 胞瘤这些肿瘤具有活性。但是，勒托替康亦具有血液毒性。
卢比替康是口服使用的有效对抗胰、卵巢和乳腺肿瘤的前药。
喜树碱及其类似物，作为完全拓扑异构酶I抑制剂，对常规药物、 包括拓扑异构酶II抑制剂有耐药性的肿瘤有效；在整个细胞周期期间保 持高的拓扑异构酶水平；未诱导多药耐药性(Pgo或MRP)或由酶介导的 脱毒代谢。
目前，研究集中于具有比目前使用的药物更低毒性的拓扑异构酶I 的新抑制剂。
开环喜树碱衍生物显示出高的蛋白结合(特别是与白蛋白)和低的肿瘤 组织中的分布。结果，产物在身体中蓄积，对肿瘤的作用不佳。
相反地，内酯形式的高亲脂性促进喜树碱衍生物与细胞膜的吸附，特 别是红细胞，影响了组织/血浆分布比。因此，目前研究集中于两种可选择 的方法：a)设计仍具有好的溶解度的低蛋白结合产品；b)设计在极低剂量 下具有治疗作用的高效产品。
在7、9、10和11位的修饰通常证实可被良好耐受，同时不影响 DNA-拓扑异构酶I-喜树碱三元复合物的稳定性，其形成产生所述化合 物的抗肿瘤活性。
具有20R构象的产物据证实与具有20S构象-与天然构象一致的产 物相比无活性或活性很低。
通常，认为5位的修饰不利于三元复合物的生成，但是，已经报道 吡啶酮环D和E的修饰对产物的活性不利。
发明内容
在第一方面，本发明涉及通式I的喜树碱衍生物、其可药用盐、异 构体、对映体、非对映异构体和相应的混合物：
其中：
R为F、Cl、Br、I、-N3、NH2、-NR′R″、-COOR′、 -CONR′R″、-NHR′″-NR′R″，其中R′、R″和R′″可为H、烷基、芳 基、芳基烷基、酰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基；
R1为烷基、氨基烷基、羟基烷基、腈、烷氧基亚氨基(alkoxymino)、 芳氧基亚氨基(aryloxymino)、甲硅烷基烷基；
R2为氢、羟基、烷氧基、氨基烷基；
R3为氢，任选保护的羟基、烷氧基、氨基烷基；
其中直链或支链的烷基、酰基、烷氧基、氨基烷基或烷氧基亚氨基 基团可包含1至8个，优选1至4个碳原子，且芳基和芳氧基基团可包 含5至10个碳原子。
本发明的化合物显示低蛋白结合并具有良好的溶解度和在非常低 的剂量下的高的药效。
用于制备本发明的化合物的优选的合成途径示于方案中并包含以 下步骤：
a)前体羟基基团的保护；
b)通过碳负离子生成并与亲电试剂反应在5位衍生化；
c)羟基基团的脱保护；
方案
在方案中，R、R1、R2和R3具有上文所述的含义，且PG为羟基 保护基团。
前体可以是可商购的或如文献所述地得到。
5位的碳负离子可通过用强有机碱、优选LiHMDS处理前体获得。
碳负离子原位与亲电试剂反应，亲电试剂诸如来源于卤素或氮杂二 甲酸酯、异氰酸酯、氯羰基衍生物、甲苯磺酰基叠氮化物。
甲硅烷基和氨基甲酸酯或其组合优选为羟基保护性基团。
对本发明的化合物进行广谱肿瘤细胞的细胞毒性测定。以实施例的 方式，报道了涉及两个式(I)化合物对NCI-H460细胞系(NSCL癌)的细 胞毒性数据，使用喜树碱及药物托泊替康和SN-38作为参比标准：
(继续)
在DNA裂解测定中测定活性浓度和损伤持续性评价最有活性的化 合物(见“实施例”节)。式(I)的衍生物在阻断DNA复制中与参比标准(特 别地为托泊替康和喜树碱)相比令人惊异地显示较高的持续性，同时保持 有效的细胞毒活性。
另一方面，本发明涉及包含式(I)化合物连同药物可接受的载体与 赋形剂的药物组合物。适合口服或肠胃外施用的式(I)化合物的药物形 式可以是固体，优选为胶囊、片剂和颗粒，或液体，优选为可注射的或 输液溶液。
适合配成制剂的本发明的化合物可用于实体瘤和白血病的治疗，特 别是肺、卵巢、乳腺、胃、肝、前列腺、软组织肉瘤、头和颈、食管、 胰、结肠、直肠、胶质母细胞瘤、慢性和急性髓细胞白血病的肿瘤。
实施例
实施例I-20-OTES-喜树碱
将喜树碱(0.100g，0.287mmol)在惰性气氛下混悬于无水二甲基甲 酰胺(3mL)中，得到的混悬液加以咪唑(0.980g，1.44mmol)。将混合物搅 拌10分钟，接着向其中滴入氯化三乙基甲硅烷(TES-Cl)(0.193mL， 1.15mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.040g，0.287mmol)。 46h后，真空蒸发反应混合物，(TLC控制试剂的完全消失，展开剂为 CH2Cl2/MeOH＝30/1)。随后将固体再溶于CH2Cl2中并用H2O和饱和 NH4Cl洗涤。水相用CH2Cl2(2×10mL)萃取。合并有机相并用Na2SO4 干燥，过滤并真空浓缩，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.133g， 0.287mmol)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.37(s，1H，Ar，H-7)，8.25(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.92(d，1H，J＝8.0Hz，Ar)，7.82(t，1H，J＝8.0Hz，Ar)， 7.65(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.57(s，1H，H-14)，5.67(d，1H，J＝16.4Hz， H-17)，5.29(s，2H，H-5)，5.25(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，2.00-1.84(m， 2H，H-19)，1.03-0.93(m，12H)，0.80-0.71(m，6H)。13C NMR(CDCl3， 100MHz)δ171.7，157.6，152.5，151.5，149.0，145.9，130.9，130.4，130.0， 128.4，128.1，128.0，127.9，118.9，94.4，75.3，66.0，50.0，33.2，7.9，7.2，6.4。
实施例II-20-OTES SN-38
将SN-38(0.100g，0.255mmol)在惰性气氛下混悬于无水二甲基甲酰 胺(5mL)中，得到的混悬液加以咪唑(0.087g，1.28mmol)。将混合物搅拌 10分钟，接着向其中滴入氯化三乙基甲硅烷(TES-Cl)(0.171mL， 1.02mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.031g，0.255mmol)。 52h后，真空蒸发反应混合物，用TLC监控(CH2Cl2/MeOH＝10/1)试剂 的完全消失。随后将固体再溶于CH2Cl2中并用H2O和饱和NH4Cl洗涤。 水相用CH2Cl2(2×10mL)萃取。合并有机相并用Na2SO4干燥，过滤并真 空浓缩，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.121g，0.240mmol，94％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.26(br s，1H，OH)，8.14(d，1H，J＝ 9.2Hz，Ar，H-12)，7.58(s，1H，H-14)，7.49(dd，1H，J1＝9.2Hz J2＝2.2 Hz，H-11)，7.46(d，1H，J＝2.2Hz，H-9)，5.70(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)， 5.28(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，5.23(s，2H，H-5)，3.05(q，2H，J＝7.5 Hz)，1.97-1.81(m，2H，H-19)，1.32(t，3H，J＝7.5Hz，Me)，0.98-0.88(m， 12H)，0.77-0.68(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ172.1，157.9， 156.6，152.1，149.0，146.7，144.6，143.6，131.9，128.7，126.9，122.8，117.9， 105.5，98.5，75.4，65.9，49.5，32.9，23.2，13.5，7.8，7.2，6.4。
实施例III-10-OTBDMS-20-OTES SN-38
将20-OTES SN-38(0.121g，0.240mmol)在惰性气氛下溶解于 CH2Cl2/THF＝1∶1(8mL)的无水混合物中。接着向其中加入咪唑(0.081g， 1.20mmol)，10分钟后加入叔丁基二甲基氯化甲硅烷 (TBDMS-Cl)(0.144mg，0.957mmol)，然后加入4-二甲基氨基吡啶 (DMAP)(0.029g，0.240mmol)。18h后，真空蒸发反应混合物，TLC监 控(己烷/AcOEt＝1/1)试剂的消失。然后将固体再溶于CH2Cl2中并用H2O 和饱和NH4Cl洗涤。水相用CH2Cl2(2×10mL)萃取，合并有机相，用 Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt ＝1/1)纯化，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.127g，0.205mmol， 85％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.14(d，1H，J＝8.8Hz，Ar，H-12)， 7.49(s，1H，H-14)，7.40(d，1H，J＝2.2Hz，H-9)，7.38(dd，1H，J1＝8.8 Hz J2＝2.5Hz，H-11)，5.67(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，5.25(d，1H，J＝ 16.5Hz，H-17)，5.23(s，2H，H-5)，3.11(q，2H，J＝7.6Hz)，1.99-1.82(m， 2H，H-19)，1.38(t，3H，J＝7.6Hz，Me)，1.04(s，9H)，1.00-0.92(m，12 H)，0.78-0.69(m，6H)，0.30(s，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.9， 157.7，155.1，151.5，150.1，146.8，145.6，143.5，132.2，128.2，126.9，125.9， 118.0，110.5，97.7，75.4，66.0，49.3，33.2，25.6，23.1，18.3，13.7，7.9，7.2，6.4， 4.3。
实施例IV-20-OTES托泊替康
将托泊替康(0.100g，0.238mmol)在惰性气氛下混悬于无水二甲基 甲酰胺(5mL)中，得到的混悬液加以咪唑(0.081g，1.19mmol)。将混合物 搅拌10分钟，接着向其中滴入氯化三乙基甲硅烷(TES-Cl)(0.160mL， 0.952mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.029g，0.238mmol)。 52h后，真空蒸发反应混合物，用TLC监控(CH2Cl2/MeOH＝10/1)试剂 的完全消失。随后将固体再溶于CHCl3、H2O和饱和NH4Cl中，水相 用CHCl3(2×15mL)萃取。合并有机相并用Na2SO4干燥，过滤并真空浓 缩，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.120g，0.224mmol，94％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.65(br s，1H)，8.26(s，1H，Ar，H-7)， 8.14(d，1H，J＝8.8Hz，Ar，H-12)，7.80(d，1H，J＝8.8Hz，Ar，H-11)，7.58 (s，1H，H-14)，5.67(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，5.25(d，1H，J＝16.5Hz， H-17)，5.20(s，2H，H-5)，4.71(s，2H)，2.81(s，6H，2Me)，1.97-1.81(m，2H， H-19)，0.98-0.88(m，12H)，0.77-0.68(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ172.1，157.9，156.6，152.1，150.8，146.8，144.3，134.3，131.2，129.9， 127.9，123.0.118.9，110.1，98.5，75.4，65.9，51.1，50.0.43.1，32.9，7.8，7.2， 6.4。
实施例V-10-OTBDMS 20-OTES托泊替康
将20-OTES托泊替康(0.120g，0.224mmol)在惰性气氛下溶解于 CH2Cl2/THF＝1∶1无水混合物(8mL)中。接着加入咪唑(0.076g， 1,12mmol)，10分钟后，加入叔丁基二甲基氯化甲硅烷 (TBDMS-Cl)(0.135mg，0.896mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶 (DMAP)(0.027g，0.224mmol)。21h后，真空蒸发反应混合物，用TLC(己 烷/AcOEt＝1/1)监控试剂的消失。然后将固体再溶于CHCl3、H2O和饱 和NH4Cl中，水相用CHCl3(2×15mL)萃取。合并有机相并用Na2SO4 干燥，过滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)纯 化，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.116g，0.179mmol，80％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.26(s，1H，Ar，H-7)，8.14(d，1H，J ＝8.8Hz，Ar，H-12)，7.81(d，1H，J＝8.8Hz，Ar，H-11)，7.59(s，1H， H-14)，5.64(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，5.22(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)， 5.19(s，2H，H-5)，4.71(s，2H)，2.81(s，6H，2Me)，1.97-1.81(m，2H， H-19)，1.04(s，9H)，0.98-0.88(m，12H)，0.77-0.68(m，6H)，0.30(s，6 H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.7，157.7，155.1，151.5，150.0. 146.8，144.3，134.3，131.2 129.9，127.9，123.0，118.9，110.1，98.5，75.4， 65.9，51.1，50.0.43.9，32.9，25.6，18.3，7.8，7.2，6.4，-4.3。
实施例VI-20-OTES 10-羟基喜树碱的制备
将10-羟基喜树碱(0.100g，0.275mmol)在惰性气氛下混悬于无水二 甲基甲酰胺(5mL)中，得到的混悬液中加入咪唑(0.225g，3.31mmol)。将 混合物搅拌10分钟，接着向其中滴入三乙基氯化甲硅烷 (TES-Cl)(0.460mL，2.75mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶 (DMAP)(0.068g，0.550mmol)。24h后，真空蒸发反应混合物，用 TLC(CH2Cl2/MeOH＝20/1)监控试剂的完全消失。随后将固体再溶于 CH2Cl2中，并用H2O和饱和NH4Cl洗涤。水相用CH2Cl2(2×10mL)萃 取。合并有机相并用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，由此得到淡黄色 固体状的所需产物(0.124g，0.259mmol，94％)。
1H NMR(CDCl3+5％CD3OD，400MHz)δ8.10(s，1H，Ar，H-7)， 8.05(d，1H，J＝9.2Hz，Ar)，7.50(s，1H，H-14)，7.39(dd，1H，J1＝9.2Hz J2＝2.4Hz，H-11)，7.11(d，1H，J＝2.2Hz，H-9)，5.60(d，1H，J＝16.4Hz， H-17)，5.21(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，5.15(s，2H，H-5)，1.97-1.81(m， 2H，H-19)，0.98-0.88(m，12H)，0.76-0.68(m，6H)。13C NMR(CDCl3+ 5％CD3OD，100MHz)δ172.2，157.8，156.7，151.8，149.2，146.1，144.1， 130.9，129.8，129.0，128.6，123.2，117.8，108.8，98.1，75.4，65.8，50.0，32.9， 7.7，7.1，6.3。
实施例VII-10-OTBDMS-20-OTES喜树碱
将10-羟基-20-OTES-喜树碱(0.105g，0.219mmol)在惰性气氛下溶 解于CH2Cl2/THF＝1∶1无水混合物(4mL)中。接着加入咪唑(0.097g， 1.42mmol)，10分钟后，加入叔丁基二甲基氯化甲硅烷 (TBDMS-Cl)(0.164mg，1.10mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶 (DMAP)(0.040g，0.329mmol)。18b后，真空蒸发反应混合物，用TLC 监控(环己烷/AcOEt＝1/3)试剂的完全消失。随后将固体再溶于CH2Cl2 中，并用H2O和饱和NH4Cl洗涤。水相用CH2Cl2(2×10mL)萃取。合并 有机相并用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱(SiO2， 环己烷/AcOEt＝1/3)纯化，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.117g， 0.197mmol，90％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.22(s，1H，Ar，H-7)，8.13(d，1H，J ＝9.2Hz，Ar，H-12)，7.51(s，1H，H-14)，7.39(dd，1H，J1＝9.2Hz J2＝2.8 Hz，H-11)，7.22(d，1H，J＝2.8Hz，H-9)，5.66(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)， 5.25(s，2H，H-5)，5.24(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，1.99-1.82(m，2H， H-19)，1.03(s，9H)，1.00-0.92(m，12H)，0.78-0.69(m，6H)，0.29(s，6 H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ172.0，157.7，155.1，151.5，150.6， 146.1，145.1，131.4，129.4，129.3，128.7，126.7，118.3，114.5，97.7，75.3， 66.0，49.9，33.1，25.6，18.3，7.9，7.2，6.4，-4.3。
实施例VIII-5-F-20-OTES-喜树碱
将喜树碱20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于 无水THF(6mL)中，然后冷却至-78℃，并向其中滴入1.0M LiHMDS在 THF(0.260mL，0.260mmol)中的溶液。20分钟后，加入无水THF(2mL) 中的NFSI(0.089g，0.281mmol)。-78℃2h后，使温度升高至25℃，并 通过TLC(己烷/AcOEt＝1/2)监控试剂的消失。观察到两种非对映异构体 的生成。室温下3h后，加入饱和NH4Cl终止反应。水相用 CH2Cl2(3×15mL)萃取，并合并有机相，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓 缩。残留物用闪式色谱纯化(SiO2，环己烷/AcOEt＝3/1，然后2/1，最终 1/1)，由此得到淡黄色固体状的两种异构体的混合物(0.101g， 0.210mmol，97％)(异构体比例为1∶1)。通过进一步的色谱处理分离两种 异构体。洗脱顺序如下：
第一种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.52(s，1H， Ar，H-7)，8.25(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.87 (t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.69(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.47(d，1H，1JHF＝ 61.2Hz，H-5)，7.45(s，1H，H-14)，5.62(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.22(d， 1H，J＝16.8Hz，H-17)，2.02-1.84(m，2H，H-19)，1.03-0.93(m，12H)， 0.80-0.71(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.4，157.5，152.3， 151.1，150.2(d，J＝1.5Hz)，150.3(d，J＝1.5Hz)，143.6(d，J＝5.3Hz)， 133.7，131.7，130.2，128.9，128.4，127.9(d，J＝15.0Hz)，126.3(d，J＝15.0 Hz)，121.8，98.9，93.8(d，1JCF＝213.2Hz，C-5)，75.1，65.7，33.1，7.8，7.2， 6.4。
第二种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.51(s，1H， Ar，H-7)，8.25(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.87 (t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.68(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.51(d，1H，1JHF＝ 60.8Hz，H-5)，7.42(s，1H，H-14)，5.62(d，1H，J＝17.2Hz，H-17)，5.20(d， 1H，J＝17.2Hz，H-17)，2.02-1.82(m，2H，H-19)，1.04-0.93(m，12H)， 0.80-0.71(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.2，157.8，152.5， 151.2，150.3，143.7，133.7(d，J＝2.4Hz)，131.7，130.2，128.9，128.3，127.9 (d，J＝2.3Hz)，126.3(d，J＝16.7Hz)，121.8(d，J＝1.5Hz)，99.0，93.8(d， 1JCF＝214.8Hz，C-5)，75.0，65.8，33.3，7.9，7.1，6.4。
实施例IX-5-F-喜树碱第一种非对映异构体的制备
将5-F-20-OTES-喜树碱的第一种非对映异构体(0.025g，0.052mmol) 在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(5mL)中。接着向其中滴入 Et3N·3HF(0.060mL，0.368mmol)。将反应混合物室温下反应28h，用 TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝1/2)。真空下挥干溶剂，残留物进行 色谱处理(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)，由此得到淡黄色固体状的所需产物 (0.019g，0.051mmol，98％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.52(s，1H，Ar，H-7)，8.25(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.87(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)， 7.69(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.59(s，1H，H-14)，7.46(d，1H，1JHF＝61.2 Hz，H-5)，5.69(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.26(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)， 3.87(br s，1H，OH)，2.01-1.81(m，2H，H-19)，1.05(t，3H，J＝7.6Hz， Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.5，157.6，151.1，151.0.150.2， 144.1，133.9，131.9，130.0，129.0，128.5，127.8，126.4，121.7，98.8，93.8(d， 1JCF＝214.0Hz，C-5)，72.5，66.0，31.5，7.8。
实施例X-5-F-喜树碱第二种非对映异构体的制备
将5-F-20-OTES-喜树碱的第二种非对映异构体(0.025g，0.052mmol) 在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(5mL)中，接着向其中滴入 Et3N·3HF(0.060mL，0.368mmol)。将反应混合物室温下反应28h，用 TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝1/2)。真空下挥干溶剂，残留物进行 色谱处理(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)，由此得到淡黄色固体状的所需产物 (0.018g，0.050mmol，97％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.52(s，1H，Ar，H-7)，8.24(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.88(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)， 7.69(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.56(s，1H，H-14)，7.51(d，1H，1JHF＝60.4 Hz，H-5)，5.69(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，5.25(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)， 3.87(br s，1H，OH)，1.98-1.78(m，2H，H-19)，1.04(t，3H，J＝7.6Hz， Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.3，157.7，151.2，151.2，150.2， 144.2，133.8，131.9，130.0，129.0，128.5，127.8，126.4，121.6，98.9，93.7(d， 1JCF＝214.0Hz，C-5)，72.5，66.1，31.6，7.8。
实施例XI-5-N3-20-OTES-喜树碱的制备
将喜树碱20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于 无水THF(6mL)中，然后冷却至-78℃，并向其中滴入1.0M LiHMDS在 THF(0.260mL，0.260mmol)中的溶液。20分钟后，加入无水THF(2mL) 中的甲苯磺酰基叠氮化物(TsN3)(0.055g，0.281mmol)。在-78℃下2h后， 使温度升高至25℃，并通过TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝2/1)。 观察到两种非对映异构体的生成。室温下2h 30min后，加入饱和NH4Cl 终止反应。水相用CH2Cl2(3×15mL)萃取，并合并有机相，用Na2SO4 干燥，过滤并真空浓缩。由两种非对映异构体组成的残留物用闪式色谱 (SiO2，环己烷/AcOEt＝3/1，然后2/1，最终1/1)纯化，由此得到淡黄色 固体状的两种异构体的混合物(0.106g，0.210mmol，97％)(异构体比例 为1∶1)。通过进一步的色谱处理分离两种异构体。洗脱顺序如下：
第一种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.45(s，1H， Ar，H-7)，8.25(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.95(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.86 (t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.68(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.49(s，1H，H-14)， 6.97(s，1H，H-5)，5.65(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.26(d，1H，J＝16.8 Hz，H-17)，2.01-1.84(m，2H，H-19)，1.03-0.94(m，12H)，0.80-0.71(m，6 H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.6，158.3，152.2，150.8，150.0， 144.0，132.9，131.4，130.1，128.6，128.3，128.2，128.1，120.8，98.7，75.4， 75.2，65.7，33.1，7.9，7.2，6.4。
第二种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.45(s，1H， Ar，H-7)，8.24(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.95(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.86 (t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.68(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.46(s，1H，H-14)， 6.99(s，1H，H-5)，5.66(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.22(d，1H，J＝16.8 Hz，H-17)，2.02-1.84(m，2H，H-19)，1.03-0.94(m，12H)，0.80-0.71(m，6 H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.4，158.4，152.3，150.9，150.0， 144.0，132.9，131.4，130.1，128.6，128.3，128.2，128.1，120.8，98.7，75.3， 75.1，65.8，33.3，7.9，7.2，6.4。
实施例XII-5-N3-喜树碱第一种非对映异构体的制备
将5-N3-20-OTES-喜树碱的非对映异构体1(0.070g，0.139mmol) 在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(6mL)中，接着向其中滴入 Et3N·3HF(0.170mL，1.016mmol)。将反应混合物室温下反应26h，用 TLC(己烷/AcOEt＝1/1)监控试剂的消失。真空下挥干溶剂，残留物用闪 式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)纯化，由此得到淡黄色固体状的所需产 物(0.053g，0.136mmol，98％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.44(s，1H，Ar，H-7)，8.24(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.93(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.85(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)， 7.67(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.63(s，1H，H-14)，6.97(s，1H，H-5)，5.70(d， 1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.29(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，3.99(br s，1H， OH)，2.00-1.84(m，2H，H-19)，1.04(t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR (CDCl3，100MHz)δ173.6，158.3，150.8，150.7，149.8，144.4，133.1，131.5， 129.9，128.6，128.3，128.3，128.1，120.6，98.6，75.4，72.7，66.0，31.5，7.8。
实施例XIII-5-N3-喜树碱第二种非对映异构体的制备
5-N3-20-OTES-喜树碱的非对映异构体2(0.055g，0.109mmol)在惰 性气氛下搅拌溶解于无水THF(6mL)中，接着向其中滴入 Et3N·3HF(0.135mL，0.820mmol)。反应混合物室温下反应26h，用TLC 监控起始试剂的消失(己烷/AcOEt＝1/1)。真空下挥干溶剂，残留物通过 闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)纯化，由此得到淡黄色固体状的所需 产物(0.042g，0.107mmol，98％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.45(s，1H，Ar，H-7)，8.23(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.95(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.85(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)， 7.68(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.60(s，1H，H-14)，7.00(s，1H，H-5)，5.74(d， 1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.28(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，3.86(br s，1H， OH)，1.98-1.82(m，2H，H-19)，1.04(t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR (CDCl3，100MHz)δ173.4，158.4，150.9，150.7，149.8，144.5，133.0，131.5， 129.9，128.6，128.4，128.3，128.1，120.6，98.6，75.3，72.6，66.1，31.6，7.8。
实施例XIV-5-NH2-喜树碱的制备
将5-N3-20-OH-喜树碱的非对映异构体2(0.050g，0.129mmol)在惰 性气氛下搅拌溶解于无水THF(1.5mL)和无水MeOH(6mL)的混合物 中，接着加入Pd/C(14mg～10％)，进行两个周期的真空/H2(H2气球压力)。 将反应混合物室温下反应3h，用TLC(己烷/AcOEt＝1/3)监控试剂的消 失，然后通过硅藻土过滤并用CH2Cl2(2×15mL)洗涤。真空下挥干溶剂。 反应粗品的1H NMR谱显示所需产物以C5位上两种差向异构体的1∶1 混合物存在。闪式色谱(SiO2，CH2Cl2/MeOH＝35/1然后25/1)可回收两 种非对映异构体的混合物(0.046g，0.126mmol，98％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.48(s，1H，Ar，H-7)，8.22-8.17(m， 1H，Ar)，7.95-7.90(m，1H，Ar)，7.85-7.78(m，1H，Ar)，7.68-7.60(m，1H， Ar)，7.58(s，0.5H，H-14)，7.54(s，0.5H，H-14)6.50(s，0.5H，H-5)，6.47 (s，0.5H，H-5)，5.74-5.64(m，1H，H-17)，5.28-5.22(m，1H，H-17)， 4.00-2.40(br s，3H，OH+NH2)，1.98-1.82(m，2H，H-19)，1.07-1.01(m，3 H，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.8(2C)，158.5(2C)，151.2(2 C)，150.4(2C)，149.7(2C)，144.5(2C)，132.7(2C)，131.0(2C)，129.8(2 C)，128.5(2C)，128.3(2C)，128.0(2C)，127.8(2C)，120.2(2C)，113.8(2 C)，97.7(2C)，72.7(2C)，66.3，66.0，31.5(2C)，7.8，7.8。
实施例XV-5-二-叔-丁氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱
将喜树碱20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于 无水THF(6mL)中，然后冷却至-78℃，并向其中滴入1.0M LiHMDS在 THF(0.281mL，0.281mmol)中的溶液。20分钟后，加入在无水THF(2mL) 中的偶氮二甲酸二叔丁酯(DTBAC)(0.075g，0.324mmol)。-78℃下4h后， 用TLC(己烷/AcOEt＝3/1)监控试剂的消失。观察到生成了两种非对映异 构体。加入饱和NH4Cl终止反应。水相用CH2Cl2(3×15mL)萃取，并合 并有机相，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱纯化 (SiO2，环己烷/AcOEt＝3/1)，由此得到两种异构体的混合物(0.145g， 0.210mmol，97％)。通过进一步的色谱处理分离两种异构体。洗脱顺序 如下：
第一种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.80(br s，1H， Ar)，8.23(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，8.01(br d，1H，Ar)，7.90-7.71(m，2H， Ar)，7.70-7.45(m，2H，Ar+H-14)，6.52(br s，1H，H-5)，5.61(d，1H，J＝ 16.8Hz，H-17)，5.23(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，2.03-1.81(m，2H，H-19)， 1.79-1.08(br s，18H)，1.06-0.92(m，12H)，0.80-0.70(m，6H)。13C NMR (CDCl3，100MHz)δ171.7，157.8，155.5，155.5，152.0，152.0，151.2，149.4， 145.0，132.1，130.6，130.0，128.7，128.4，127.9，119.9，98.2，82.7，81.5，79.7， 75.2，65.7，33.2，28.3，27.6，7.7，7.2，6.4。
第二种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(br s，1H， Ar)，8.23(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，8.01(br d，1H，Ar)，7.85-7.76(m，2H， Ar)，7.65(br t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.52(s，1H，H-14)，6.54(br s，1H， H-5)，5.61(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.22(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)， 2.03-1.82(m，2H，H-19)，1.76-1.08(br s，18H)，1.04-0.92(m，12H)， 0.80-0.70(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.5，157.9，155.5， 155.5，152.3，152.0.151.2，149.4，145.1，132.1，130.6，130.0，128.7，128.4， 127.9，119.9，98.2，82.9，81.5，79.6，75.2，65.8，33.3，28.3，27.4，7.8，7.2， 6.4。
实施例XVI-5-二-叔-丁氧基羰基肼基-喜树碱第一种非对映异构体的制 备
将5-二-叔-丁氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱(0.050g，0.072mmol) 第一种非对映异构体在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(4mL)中，接着 向其中滴入Et3N·3HF(0.088mL，0.542mmol)。反应混合物室温下反应 35h，用TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝3/2)。真空下挥干溶剂，残 留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝3/2)纯化，由此得到淡黄色固体状 的所需化合物(0.041g，0.071mmol，98％)。
产物通过CH2Cl2/戊烷＝1/50结晶进一步纯化。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.77(br s，1H，Ar)，8.16(br d，1H，J ＝8.0Hz，Ar)，7.97(br s，1H，Ar)，7.86-7.50(m，4H，Ar)，6.51(br s，1H， H-5)，5.66(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，5.24(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)， 3.86(br s，1H，OH)，2.00-1.80(m，2H，H-19)，1.79-1.13(br s，18H)，1.03 (t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.7，157.9， 155.5，155.5，152.1，151.3，150.7，149.6，145.7，132.3，130.7，129.9，128.7， 127.9，127.6，120.0，97.9，82.8，81.6，79.7，72.7，66.1，31.8，28.3，27.7，7.7。
实施例XVII-5-二-叔-丁氧基羰基肼基-喜树碱第二种非对映异构体的 制备
5-二-叔-丁氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱(0.050g，0.072mmol)第 二种非对映异构体在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(4.5mL)中，接着 向其中滴入Et3N·3HF(0.088mL，0.542mmol)。反应混合物室温下反应 35h，用TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝3/2)。真空下挥干溶剂，残 留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝3/2)纯化，由此得到淡黄色固体状 的所需化合物(0.040g，0.069mmol，96％)。产物通过CH2Cl2/戊烷＝1/50 结晶进一步纯化。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(br s，1H，Ar)，8.22(br d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.99(br s，1H，Ar)，7.88-7.50(m，4H，Ar)，6.53(br s，1H， H-5)，5.65(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，5.26(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)， 3.80(br s，1H，OH)，2.00-1.80(m，2H，H-19)，1.79-1.13(br s，18H)，1.03 (t，3H，J＝7.2Hz，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.6，157.9， 155.4，155.4，152.1，151.3，150.8，149.5，145.6，132.3，130.8，129.8，128.7， 127.9，127.8，119.8，98.0，83.0，81.5，79.7，72.7，66.3，31.8，28.3，27.7，7.8。
实施例XVIII-5-二苄基氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱的制备
将喜树碱20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于 无水THF(6mL)中，然后冷却至-78℃，并向其中滴入1.0M LiHMDS在 THF(0.281mL，0.281mmol)中的溶液。20分钟后，向其中加入在无水 THF(2mL)中的偶氮二甲酸二苄酯(0.097g，0.324mmol)。-78℃下3h后， 使温度升高至25℃并用TLC(己烷/AcOEt＝3/1)监控试剂的消失。观察 到生成了两种非对映异构体。室温90分钟后，加入饱和NH4Cl终止反 应。水相用CH2Cl2(3×15mL)萃取，并合并有机相，用Na2SO4干燥，过 滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱(SiO2，环己烷/AcOEt＝4/1然后7/2) 纯化，由此得到淡黄色固体(0.161g，0.212mmol，98％)。通过进一步的 色谱处理分离两种异构体。洗脱顺序如下：
第一种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.70(br s，1H， Ar)，8.39(br s 1H，Ar)，8.22(br d，1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.95(br d，1H，J ＝7.6Hz，Ar)，7.83(br t，1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.65(br t，1H，J＝7.6Hz， Ar)，7.64-7.00(m，11H，Ar+H-14)，6.49(br s，1H，H-5)，5.57(d，1H，J ＝16.4Hz，H-17)，5.47-4.44(m，5H)，1.98-1.82(m，2H，H-19)，1.02-0.89 (m，12H)，0.80-0.70(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.6， 158.0.156.3，156.3，153.0，152.2，151.0，149.6，144.8，135.3，132.1，130.6， 130.0，128.6-127.8(11C)，119.9，98.4，79.5，75.2，68.4，67.9，65.6，33.0， 7.9，7.2，6.4。
第二种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.85(br s，1H， Ar)，8.58(br s 1H，Ar)，8.20(br s，1H，Ar)，7.93(br s，Ar)，7.81(br t， 1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.63(br t，1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.56-6.90(m，11H， Ar+H-14)，6.52(br s，1H，H-5)，5.55(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)， 5.44-4.71(m，5H)，1.98-1.80(m，2H，H-19)，1.05-0.90(m，12H)， 0.81-0.70(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.5，157.9，156.4， 156.4，152.9，152.4，150.9，149.4，144.8，135.3，132.1，130.6，129.9， 128.6-127.8(11C)，119.9，98.5，79.3，75.2，68.4，67.8，65.6，32.9，7.8，7.2， 6.4。
实施例XIX-5-二苄基氧基羰基肼基-喜树碱第一种非对映异构体的制 备
将5-二苄基氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱第一种非对映异构体 (0.140g，0.184mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(6mL)中，接着 向其中滴入Et3N·3HF(0.225mL，1.380mmol)。反应混合物室温下反应 52h，用TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝1/3)。真空下挥干溶剂，残 留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1，然后2/3)纯化，由此得到淡黄 色固体(0.113g，0.175mmol，95％)。产物通过CH2Cl2/戊烷＝1/50结晶 进一步纯化。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.67(br s，1H，Ar)，8.39(br s 1H， Ar)，8.12(br d，1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.95(br s，1H，Ar)，7.74(br t，1H，J ＝7.6Hz，Ar)，7.65-6.66(m，12H，Ar+H-14)，6.48(br s，1H，H-5)，5.55 (d，1H，J＝16.0Hz，H-17)，5.42-4.44(m，5H)，3.86(br s，1H，OH)， 1.92-1.72(m，2H，H-19)，0.95(t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR(CDCl3， 100MHz)δ173.5，158.0，156.2，156.0，153.0，150.9，150.9，149.5，145.3， 135.4，132.2，130.7，129.8，128.7-127.8(11C)，119.9，98.2，79.6，72.7，68.5， 68.0，65.9，31.6，7.8。
实施例XX-5-二苄基氧基羰基肼基-喜树碱第二种非对映异构体的制备
将5-二苄基氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱的第二种非对映异构 体(0.140g，0.184mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(6mL)中，接 着向其中滴入Et3N·3HF(0.150mL，0.921mmol)。反应混合物室温下反 应55h，用TLC(己烷/AcOEt＝3/2)监控试剂的消失。真空下挥干溶剂， 残留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)纯化，由此得到淡黄色固体 状的所需化合物(0.113g，0.175mmol，95％)。产物通过CH2Cl2/戊烷＝1/50 结晶进一步纯化。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.71(br s，1H，Ar)，8.34(br s 1H， Ar)，8.18(br s，1H，Ar)，7.94(br s，1H，Ar)，7.79(br t，1H，J＝7.6Hz， Ar)，7.70-6.70(m，12H，Ar+H-14)，6.52(br s，1H，H-5)，5.53(d，1H，J＝ 16.4Hz，H-17)，5.44-4.48(m，5H)，3.87(br s，1H，OH)，1.90-1.70(m，2H， H-19)，0.99(t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.4， 158.0，156.3，156.1，153.0，151.0，150.9，149.6，145.3，135.5，132.3，130.8， 129.8，128.7-127.8(11C)，119.8，98.4，79.5，72.7，68.5，67.8，66.0.31.6， 7.7。
实施例XXI-细胞生长抑制作用的测定
源于人体大细胞肺肿瘤的H460细胞在含10％胎牛血清的 RPMI-1640培养基中培养。细胞敏感性通过在1或72hr药物暴露后的 细胞生长抑制测定进行确定。收集处于对数生长的细胞并植入6-孔板 中，试验双份。植板二十四小时后，将细胞暴露于药物，并在暴露于药 物72小时后用库尔特计数器进行计数，用于确定IC50。IC50定义为与 未处理的对照生长比较，细胞生长被抑制50％的浓度。
实施例XXII-拓扑异构酶-I-依赖的DNA破裂测定
DNA破裂使用751-bp BamHI-EcoRI DNA SV40纯化凝胶进行确 定(Beretta GL，Binaschi M，Zagni AND，Capuani L，Capranico G. Tethering a type IB topoisomerase to a DNA site by enzyme fusion to a heterologous site-selective DNA-binding protein domain.Cancer Res 1999；59：3689-97)。DNA碎片仅在3’标记。DNA破裂反应(20,000cpm/ 样本)在20ml的10mM Tris-HCL(pH 7.6)、150mM KCl、5mM MgCl2、 15μg/mL BSA、0.1mM硫代苏糖醇和人重组酶(全长top1)中37℃下进 行30min。反应使用0.5％SDS和0.3mg/mL蛋白酶K在42℃阻断45min。 DNA损伤持续性在不同的时间加入0.6M NaCl与10μM的所述药物孵 育30分钟后检验。沉淀后，DNA重混悬于变性缓冲液(80％甲酰胺， 10mM NaOH，0.01M EDTA和1mg/mL染料)中，之后植入于变性凝胶 (7％聚丙烯酰胺在TBE缓冲液中)。全部DNA的破碎水平用 PhosphoImager 425型(分子动力学)进行测定(Dallavalle S，Ferrari A， Biasotti B，等人.Novel 7-oxyiminomethyl comptothecin derivatives with potent in vitro and in vivo antitumor activity.J Med Chem 2001； 44：3264-74)。
DNA损伤的持续(％)
其中：
R为F、Cl、Br、I、-N3、NH2、-NR′R″、-COOR′、 -CONR′R″、-NHR′″-NR′R″，其中R′、R″和R′″可为H、烷基、芳 基、芳基烷基、酰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基；
R1为烷基、氨基烷基、羟基烷基、腈、烷氧基亚氨基(alkoxymino)、 芳氧基亚氨基(aryloxymino)、甲硅烷基烷基；
R2为氢、羟基、烷氧基、氨基烷基；
R3为氢，任选保护的羟基、烷氧基、氨基烷基；
其中直链或支链的烷基、酰基、烷氧基、氨基烷基或烷氧基亚氨基 基团可包含1至8个，优选1至4个碳原子，且芳基和芳氧基基团可包 含5至10个碳原子。
本发明的化合物显示低蛋白结合并具有良好的溶解度和在非常低 的剂量下的高的药效。
用于制备本发明的化合物的优选的合成途径示于方案中并包含以 下步骤：
a)前体羟基基团的保护；
b)通过碳负离子生成并与亲电试剂反应在5位衍生化；
c)羟基基团的脱保护；
方案
在方案中，R、R1、R2和R3具有上文所述的含义，且PG为羟基 保护基团。
前体可以是可商购的或如文献所述地得到。
5位的碳负离子可通过用强有机碱、优选LiHMDS处理前体获得。
碳负离子原位与亲电试剂反应，亲电试剂诸如来源于卤素或氮杂二 甲酸酯、异氰酸酯、氯羰基衍生物、甲苯磺酰基叠氮化物。
甲硅烷基和氨基甲酸酯或其组合优选为羟基保护性基团。
对本发明的化合物进行广谱肿瘤细胞的细胞毒性测定。以实施例的 方式，报道了涉及两个式(I)化合物对NCI-H460细胞系(NSCL癌)的细 胞毒性数据，使用喜树碱及药物托泊替康和SN-38作为参比标准：
(继续)
在DNA裂解测定中测定活性浓度和损伤持续性评价最有活性的化 合物(见“实施例”节)。式(I)的衍生物在阻断DNA复制中与参比标准(特 别地为托泊替康和喜树碱)相比令人惊异地显示较高的持续性，同时保持 有效的细胞毒活性。
另一方面，本发明涉及包含式(I)化合物连同药物可接受的载体与 赋形剂的药物组合物。适合口服或肠胃外施用的式(I)化合物的药物形 式可以是固体，优选为胶囊、片剂和颗粒，或液体，优选为可注射的或 输液溶液。
适合配成制剂的本发明的化合物可用于实体瘤和白血病的治疗，特 别是肺、卵巢、乳腺、胃、肝、前列腺、软组织肉瘤、头和颈、食管、 胰、结肠、直肠、胶质母细胞瘤、慢性和急性髓细胞白血病的肿瘤。
实施例
实施例I-20-OTES-喜树碱
将喜树碱(0.100g，0.287mmol)在惰性气氛下混悬于无水二甲基甲 酰胺(3mL)中，得到的混悬液加以咪唑(0.980g，1.44mmol)。将混合物搅 拌10分钟，接着向其中滴入氯化三乙基甲硅烷(TES-Cl)(0.193mL， 1.15mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.040g，0.287mmol)。 46h后，真空蒸发反应混合物，(TLC控制试剂的完全消失，展开剂为 CH2Cl2/MeOH＝30/1)。随后将固体再溶于CH2Cl2中并用H2O和饱和 NH4Cl洗涤。水相用CH2Cl2(2×10mL)萃取。合并有机相并用Na2SO4 干燥，过滤并真空浓缩，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.133g， 0.287mmol)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.37(s，1H，Ar，H-7)，8.25(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.92(d，1H，J＝8.0Hz，Ar)，7.82(t，1H，J＝8.0Hz，Ar)， 7.65(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.57(s，1H，H-14)，5.67(d，1H，J＝16.4Hz， H-17)，5.29(s，2H，H-5)，5.25(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，2.00-1.84(m， 2H，H-19)，1.03-0.93(m，12H)，0.80-0.71(m，6H)。13C NMR(CDCl3， 100MHz)δ171.7，157.6，152.5，151.5，149.0，145.9，130.9，130.4，130.0， 128.4，128.1，128.0，127.9，118.9，94.4，75.3，66.0，50.0，33.2，7.9，7.2，6.4。
实施例II-20-OTES SN-38
将SN-38(0.100g，0.255mmol)在惰性气氛下混悬于无水二甲基甲酰 胺(5mL)中，得到的混悬液加以咪唑(0.087g，1.28mmol)。将混合物搅拌 10分钟，接着向其中滴入氯化三乙基甲硅烷(TES-Cl)(0.171mL， 1.02mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.031g，0.255mmol)。 52h后，真空蒸发反应混合物，用TLC监控(CH2Cl2/MeOH＝10/1)试剂 的完全消失。随后将固体再溶于CH2Cl2中并用H2O和饱和NH4Cl洗涤。 水相用CH2Cl2(2×10mL)萃取。合并有机相并用Na2SO4干燥，过滤并真 空浓缩，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.121g，0.240mmol，94％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.26(br s，1H，OH)，8.14(d，1H，J＝ 9.2Hz，Ar，H-12)，7.58(s，1H，H-14)，7.49(dd，1H，J1＝9.2Hz J2＝2.2 Hz，H-11)，7.46(d，1H，J＝2.2Hz，H-9)，5.70(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)， 5.28(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，5.23(s，2H，H-5)，3.05(q，2H，J＝7.5 Hz)，1.97-1.81(m，2H，H-19)，1.32(t，3H，J＝7.5Hz，Me)，0.98-0.88(m， 12H)，0.77-0.68(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ172.1，157.9， 156.6，152.1，149.0，146.7，144.6，143.6，131.9，128.7，126.9，122.8，117.9， 105.5，98.5，75.4，65.9，49.5，32.9，23.2，13.5，7.8，7.2，6.4。
实施例III-10-OTBDMS-20-OTES SN-38
将20-OTES SN-38(0.121g，0.240mmol)在惰性气氛下溶解于 CH2Cl2/THF＝1∶1(8mL)的无水混合物中。接着向其中加入咪唑(0.081g， 1.20mmol)，10分钟后加入叔丁基二甲基氯化甲硅烷 (TBDMS-Cl)(0.144mg，0.957mmol)，然后加入4-二甲基氨基吡啶 (DMAP)(0.029g，0.240mmol)。18h后，真空蒸发反应混合物，TLC监 控(己烷/AcOEt＝1/1)试剂的消失。然后将固体再溶于CH2Cl2中并用H2O 和饱和NH4Cl洗涤。水相用CH2Cl2(2×10mL)萃取，合并有机相，用 Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt ＝1/1)纯化，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.127g，0.205mmol， 85％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.14(d，1H，J＝8.8Hz，Ar，H-12)， 7.49(s，1H，H-14)，7.40(d，1H，J＝2.2Hz，H-9)，7.38(dd，1H，J1＝8.8 Hz J2＝2.5Hz，H-11)，5.67(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，5.25(d，1H，J＝ 16.5Hz，H-17)，5.23(s，2H，H-5)，3.11(q，2H，J＝7.6Hz)，1.99-1.82(m， 2H，H-19)，1.38(t，3H，J＝7.6Hz，Me)，1.04(s，9H)，1.00-0.92(m，12 H)，0.78-0.69(m，6H)，0.30(s，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.9， 157.7，155.1，151.5，150.1，146.8，145.6，143.5，132.2，128.2，126.9，125.9， 118.0，110.5，97.7，75.4，66.0，49.3，33.2，25.6，23.1，18.3，13.7，7.9，7.2，6.4， 4.3。
实施例IV-20-OTES托泊替康
将托泊替康(0.100g，0.238mmol)在惰性气氛下混悬于无水二甲基 甲酰胺(5mL)中，得到的混悬液加以咪唑(0.081g，1.19mmol)。将混合物 搅拌10分钟，接着向其中滴入氯化三乙基甲硅烷(TES-Cl)(0.160mL， 0.952mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(0.029g，0.238mmol)。 52h后，真空蒸发反应混合物，用TLC监控(CH2Cl2/MeOH＝10/1)试剂 的完全消失。随后将固体再溶于CHCl3、H2O和饱和NH4Cl中，水相 用CHCl3(2×15mL)萃取。合并有机相并用Na2SO4干燥，过滤并真空浓 缩，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.120g，0.224mmol，94％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.65(br s，1H)，8.26(s，1H，Ar，H-7)， 8.14(d，1H，J＝8.8Hz，Ar，H-12)，7.80(d，1H，J＝8.8Hz，Ar，H-11)，7.58 (s，1H，H-14)，5.67(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，5.25(d，1H，J＝16.5Hz， H-17)，5.20(s，2H，H-5)，4.71(s，2H)，2.81(s，6H，2Me)，1.97-1.81(m，2H， H-19)，0.98-0.88(m，12H)，0.77-0.68(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100 MHz)δ172.1，157.9，156.6，152.1，150.8，146.8，144.3，134.3，131.2，129.9， 127.9，123.0.118.9，110.1，98.5，75.4，65.9，51.1，50.0.43.1，32.9，7.8，7.2， 6.4。
实施例V-10-OTBDMS 20-OTES托泊替康
将20-OTES托泊替康(0.120g，0.224mmol)在惰性气氛下溶解于 CH2Cl2/THF＝1∶1无水混合物(8mL)中。接着加入咪唑(0.076g， 1,12mmol)，10分钟后，加入叔丁基二甲基氯化甲硅烷 (TBDMS-Cl)(0.135mg，0.896mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶 (DMAP)(0.027g，0.224mmol)。21h后，真空蒸发反应混合物，用TLC(己 烷/AcOEt＝1/1)监控试剂的消失。然后将固体再溶于CHCl3、H2O和饱 和NH4Cl中，水相用CHCl3(2×15mL)萃取。合并有机相并用Na2SO4 干燥，过滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)纯 化，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.116g，0.179mmol，80％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.26(s，1H，Ar，H-7)，8.14(d，1H，J ＝8.8Hz，Ar，H-12)，7.81(d，1H，J＝8.8Hz，Ar，H-11)，7.59(s，1H， H-14)，5.64(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，5.22(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)， 5.19(s，2H，H-5)，4.71(s，2H)，2.81(s，6H，2Me)，1.97-1.81(m，2H， H-19)，1.04(s，9H)，0.98-0.88(m，12H)，0.77-0.68(m，6H)，0.30(s，6 H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.7，157.7，155.1，151.5，150.0. 146.8，144.3，134.3，131.2 129.9，127.9，123.0，118.9，110.1，98.5，75.4， 65.9，51.1，50.0.43.9，32.9，25.6，18.3，7.8，7.2，6.4，-4.3。
实施例VI-20-OTES 10-羟基喜树碱的制备
将10-羟基喜树碱(0.100g，0.275mmol)在惰性气氛下混悬于无水二 甲基甲酰胺(5mL)中，得到的混悬液中加入咪唑(0.225g，3.31mmol)。将 混合物搅拌10分钟，接着向其中滴入三乙基氯化甲硅烷 (TES-Cl)(0.460mL，2.75mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶 (DMAP)(0.068g，0.550mmol)。24h后，真空蒸发反应混合物，用 TLC(CH2Cl2/MeOH＝20/1)监控试剂的完全消失。随后将固体再溶于 CH2Cl2中，并用H2O和饱和NH4Cl洗涤。水相用CH2Cl2(2×10mL)萃 取。合并有机相并用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，由此得到淡黄色 固体状的所需产物(0.124g，0.259mmol，94％)。
1H NMR(CDCl3+5％CD3OD，400MHz)δ8.10(s，1H，Ar，H-7)， 8.05(d，1H，J＝9.2Hz，Ar)，7.50(s，1H，H-14)，7.39(dd，1H，J1＝9.2Hz J2＝2.4Hz，H-11)，7.11(d，1H，J＝2.2Hz，H-9)，5.60(d，1H，J＝16.4Hz， H-17)，5.21(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，5.15(s，2H，H-5)，1.97-1.81(m， 2H，H-19)，0.98-0.88(m，12H)，0.76-0.68(m，6H)。13C NMR(CDCl3+ 5％CD3OD，100MHz)δ172.2，157.8，156.7，151.8，149.2，146.1，144.1， 130.9，129.8，129.0，128.6，123.2，117.8，108.8，98.1，75.4，65.8，50.0，32.9， 7.7，7.1，6.3。
实施例VII-10-OTBDMS-20-OTES喜树碱
将10-羟基-20-OTES-喜树碱(0.105g，0.219mmol)在惰性气氛下溶 解于CH2Cl2/THF＝1∶1无水混合物(4mL)中。接着加入咪唑(0.097g， 1.42mmol)，10分钟后，加入叔丁基二甲基氯化甲硅烷 (TBDMS-Cl)(0.164mg，1.10mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶 (DMAP)(0.040g，0.329mmol)。18b后，真空蒸发反应混合物，用TLC 监控(环己烷/AcOEt＝1/3)试剂的完全消失。随后将固体再溶于CH2Cl2 中，并用H2O和饱和NH4Cl洗涤。水相用CH2Cl2(2×10mL)萃取。合并 有机相并用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱(SiO2， 环己烷/AcOEt＝1/3)纯化，由此得到淡黄色固体状的所需产物(0.117g， 0.197mmol，90％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.22(s，1H，Ar，H-7)，8.13(d，1H，J ＝9.2Hz，Ar，H-12)，7.51(s，1H，H-14)，7.39(dd，1H，J1＝9.2Hz J2＝2.8 Hz，H-11)，7.22(d，1H，J＝2.8Hz，H-9)，5.66(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)， 5.25(s，2H，H-5)，5.24(d，1H，J＝16.5Hz，H-17)，1.99-1.82(m，2H， H-19)，1.03(s，9H)，1.00-0.92(m，12H)，0.78-0.69(m，6H)，0.29(s，6 H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ172.0，157.7，155.1，151.5，150.6， 146.1，145.1，131.4，129.4，129.3，128.7，126.7，118.3，114.5，97.7，75.3， 66.0，49.9，33.1，25.6，18.3，7.9，7.2，6.4，-4.3。
实施例VIII-5-F-20-OTES-喜树碱
将喜树碱20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于 无水THF(6mL)中，然后冷却至-78℃，并向其中滴入1.0M LiHMDS在 THF(0.260mL，0.260mmol)中的溶液。20分钟后，加入无水THF(2mL) 中的NFSI(0.089g，0.281mmol)。-78℃2h后，使温度升高至25℃，并 通过TLC(己烷/AcOEt＝1/2)监控试剂的消失。观察到两种非对映异构体 的生成。室温下3h后，加入饱和NH4Cl终止反应。水相用 CH2Cl2(3×15mL)萃取，并合并有机相，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓 缩。残留物用闪式色谱纯化(SiO2，环己烷/AcOEt＝3/1，然后2/1，最终 1/1)，由此得到淡黄色固体状的两种异构体的混合物(0.101g， 0.210mmol，97％)(异构体比例为1∶1)。通过进一步的色谱处理分离两种 异构体。洗脱顺序如下：
第一种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.52(s，1H， Ar，H-7)，8.25(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.87 (t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.69(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.47(d，1H，1JHF＝ 61.2Hz，H-5)，7.45(s，1H，H-14)，5.62(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.22(d， 1H，J＝16.8Hz，H-17)，2.02-1.84(m，2H，H-19)，1.03-0.93(m，12H)， 0.80-0.71(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.4，157.5，152.3， 151.1，150.2(d，J＝1.5Hz)，150.3(d，J＝1.5Hz)，143.6(d，J＝5.3Hz)， 133.7，131.7，130.2，128.9，128.4，127.9(d，J＝15.0Hz)，126.3(d，J＝15.0 Hz)，121.8，98.9，93.8(d，1JCF＝213.2Hz，C-5)，75.1，65.7，33.1，7.8，7.2， 6.4。
第二种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.51(s，1H， Ar，H-7)，8.25(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.87 (t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.68(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.51(d，1H，1JHF＝ 60.8Hz，H-5)，7.42(s，1H，H-14)，5.62(d，1H，J＝17.2Hz，H-17)，5.20(d， 1H，J＝17.2Hz，H-17)，2.02-1.82(m，2H，H-19)，1.04-0.93(m，12H)， 0.80-0.71(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.2，157.8，152.5， 151.2，150.3，143.7，133.7(d，J＝2.4Hz)，131.7，130.2，128.9，128.3，127.9 (d，J＝2.3Hz)，126.3(d，J＝16.7Hz)，121.8(d，J＝1.5Hz)，99.0，93.8(d， 1JCF＝214.8Hz，C-5)，75.0，65.8，33.3，7.9，7.1，6.4。
实施例IX-5-F-喜树碱第一种非对映异构体的制备
将5-F-20-OTES-喜树碱的第一种非对映异构体(0.025g，0.052mmol) 在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(5mL)中。接着向其中滴入 Et3N·3HF(0.060mL，0.368mmol)。将反应混合物室温下反应28h，用 TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝1/2)。真空下挥干溶剂，残留物进行 色谱处理(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)，由此得到淡黄色固体状的所需产物 (0.019g，0.051mmol，98％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.52(s，1H，Ar，H-7)，8.25(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.87(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)， 7.69(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.59(s，1H，H-14)，7.46(d，1H，1JHF＝61.2 Hz，H-5)，5.69(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.26(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)， 3.87(br s，1H，OH)，2.01-1.81(m，2H，H-19)，1.05(t，3H，J＝7.6Hz， Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.5，157.6，151.1，151.0.150.2， 144.1，133.9，131.9，130.0，129.0，128.5，127.8，126.4，121.7，98.8，93.8(d， 1JCF＝214.0Hz，C-5)，72.5，66.0，31.5，7.8。
实施例X-5-F-喜树碱第二种非对映异构体的制备
将5-F-20-OTES-喜树碱的第二种非对映异构体(0.025g，0.052mmol) 在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(5mL)中，接着向其中滴入 Et3N·3HF(0.060mL，0.368mmol)。将反应混合物室温下反应28h，用 TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝1/2)。真空下挥干溶剂，残留物进行 色谱处理(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)，由此得到淡黄色固体状的所需产物 (0.018g，0.050mmol，97％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.52(s，1H，Ar，H-7)，8.24(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.96(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.88(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)， 7.69(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.56(s，1H，H-14)，7.51(d，1H，1JHF＝60.4 Hz，H-5)，5.69(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，5.25(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)， 3.87(br s，1H，OH)，1.98-1.78(m，2H，H-19)，1.04(t，3H，J＝7.6Hz， Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.3，157.7，151.2，151.2，150.2， 144.2，133.8，131.9，130.0，129.0，128.5，127.8，126.4，121.6，98.9，93.7(d， 1JCF＝214.0Hz，C-5)，72.5，66.1，31.6，7.8。
实施例XI-5-N3-20-OTES-喜树碱的制备
将喜树碱20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于 无水THF(6mL)中，然后冷却至-78℃，并向其中滴入1.0M LiHMDS在 THF(0.260mL，0.260mmol)中的溶液。20分钟后，加入无水THF(2mL) 中的甲苯磺酰基叠氮化物(TsN3)(0.055g，0.281mmol)。在-78℃下2h后， 使温度升高至25℃，并通过TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝2/1)。 观察到两种非对映异构体的生成。室温下2h 30min后，加入饱和NH4Cl 终止反应。水相用CH2Cl2(3×15mL)萃取，并合并有机相，用Na2SO4 干燥，过滤并真空浓缩。由两种非对映异构体组成的残留物用闪式色谱 (SiO2，环己烷/AcOEt＝3/1，然后2/1，最终1/1)纯化，由此得到淡黄色 固体状的两种异构体的混合物(0.106g，0.210mmol，97％)(异构体比例 为1∶1)。通过进一步的色谱处理分离两种异构体。洗脱顺序如下：
第一种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.45(s，1H， Ar，H-7)，8.25(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.95(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.86 (t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.68(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.49(s，1H，H-14)， 6.97(s，1H，H-5)，5.65(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.26(d，1H，J＝16.8 Hz，H-17)，2.01-1.84(m，2H，H-19)，1.03-0.94(m，12H)，0.80-0.71(m，6 H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.6，158.3，152.2，150.8，150.0， 144.0，132.9，131.4，130.1，128.6，128.3，128.2，128.1，120.8，98.7，75.4， 75.2，65.7，33.1，7.9，7.2，6.4。
第二种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.45(s，1H， Ar，H-7)，8.24(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.95(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.86 (t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.68(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.46(s，1H，H-14)， 6.99(s，1H，H-5)，5.66(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.22(d，1H，J＝16.8 Hz，H-17)，2.02-1.84(m，2H，H-19)，1.03-0.94(m，12H)，0.80-0.71(m，6 H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.4，158.4，152.3，150.9，150.0， 144.0，132.9，131.4，130.1，128.6，128.3，128.2，128.1，120.8，98.7，75.3， 75.1，65.8，33.3，7.9，7.2，6.4。
实施例XII-5-N3-喜树碱第一种非对映异构体的制备
将5-N3-20-OTES-喜树碱的非对映异构体1(0.070g，0.139mmol) 在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(6mL)中，接着向其中滴入 Et3N·3HF(0.170mL，1.016mmol)。将反应混合物室温下反应26h，用 TLC(己烷/AcOEt＝1/1)监控试剂的消失。真空下挥干溶剂，残留物用闪 式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)纯化，由此得到淡黄色固体状的所需产 物(0.053g，0.136mmol，98％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.44(s，1H，Ar，H-7)，8.24(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.93(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.85(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)， 7.67(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.63(s，1H，H-14)，6.97(s，1H，H-5)，5.70(d， 1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.29(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，3.99(br s，1H， OH)，2.00-1.84(m，2H，H-19)，1.04(t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR (CDCl3，100MHz)δ173.6，158.3，150.8，150.7，149.8，144.4，133.1，131.5， 129.9，128.6，128.3，128.3，128.1，120.6，98.6，75.4，72.7，66.0，31.5，7.8。
实施例XIII-5-N3-喜树碱第二种非对映异构体的制备
5-N3-20-OTES-喜树碱的非对映异构体2(0.055g，0.109mmol)在惰 性气氛下搅拌溶解于无水THF(6mL)中，接着向其中滴入 Et3N·3HF(0.135mL，0.820mmol)。反应混合物室温下反应26h，用TLC 监控起始试剂的消失(己烷/AcOEt＝1/1)。真空下挥干溶剂，残留物通过 闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)纯化，由此得到淡黄色固体状的所需 产物(0.042g，0.107mmol，98％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.45(s，1H，Ar，H-7)，8.23(d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.95(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.85(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)， 7.68(t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.60(s，1H，H-14)，7.00(s，1H，H-5)，5.74(d， 1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.28(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，3.86(br s，1H， OH)，1.98-1.82(m，2H，H-19)，1.04(t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR (CDCl3，100MHz)δ173.4，158.4，150.9，150.7，149.8，144.5，133.0，131.5， 129.9，128.6，128.4，128.3，128.1，120.6，98.6，75.3，72.6，66.1，31.6，7.8。
实施例XIV-5-NH2-喜树碱的制备
将5-N3-20-OH-喜树碱的非对映异构体2(0.050g，0.129mmol)在惰 性气氛下搅拌溶解于无水THF(1.5mL)和无水MeOH(6mL)的混合物 中，接着加入Pd/C(14mg～10％)，进行两个周期的真空/H2(H2气球压力)。 将反应混合物室温下反应3h，用TLC(己烷/AcOEt＝1/3)监控试剂的消 失，然后通过硅藻土过滤并用CH2Cl2(2×15mL)洗涤。真空下挥干溶剂。 反应粗品的1H NMR谱显示所需产物以C5位上两种差向异构体的1∶1 混合物存在。闪式色谱(SiO2，CH2Cl2/MeOH＝35/1然后25/1)可回收两 种非对映异构体的混合物(0.046g，0.126mmol，98％)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.48(s，1H，Ar，H-7)，8.22-8.17(m， 1H，Ar)，7.95-7.90(m，1H，Ar)，7.85-7.78(m，1H，Ar)，7.68-7.60(m，1H， Ar)，7.58(s，0.5H，H-14)，7.54(s，0.5H，H-14)6.50(s，0.5H，H-5)，6.47 (s，0.5H，H-5)，5.74-5.64(m，1H，H-17)，5.28-5.22(m，1H，H-17)， 4.00-2.40(br s，3H，OH+NH2)，1.98-1.82(m，2H，H-19)，1.07-1.01(m，3 H，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.8(2C)，158.5(2C)，151.2(2 C)，150.4(2C)，149.7(2C)，144.5(2C)，132.7(2C)，131.0(2C)，129.8(2 C)，128.5(2C)，128.3(2C)，128.0(2C)，127.8(2C)，120.2(2C)，113.8(2 C)，97.7(2C)，72.7(2C)，66.3，66.0，31.5(2C)，7.8，7.8。
实施例XV-5-二-叔-丁氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱
将喜树碱20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于 无水THF(6mL)中，然后冷却至-78℃，并向其中滴入1.0M LiHMDS在 THF(0.281mL，0.281mmol)中的溶液。20分钟后，加入在无水THF(2mL) 中的偶氮二甲酸二叔丁酯(DTBAC)(0.075g，0.324mmol)。-78℃下4h后， 用TLC(己烷/AcOEt＝3/1)监控试剂的消失。观察到生成了两种非对映异 构体。加入饱和NH4Cl终止反应。水相用CH2Cl2(3×15mL)萃取，并合 并有机相，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱纯化 (SiO2，环己烷/AcOEt＝3/1)，由此得到两种异构体的混合物(0.145g， 0.210mmol，97％)。通过进一步的色谱处理分离两种异构体。洗脱顺序 如下：
第一种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.80(br s，1H， Ar)，8.23(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，8.01(br d，1H，Ar)，7.90-7.71(m，2H， Ar)，7.70-7.45(m，2H，Ar+H-14)，6.52(br s，1H，H-5)，5.61(d，1H，J＝ 16.8Hz，H-17)，5.23(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，2.03-1.81(m，2H，H-19)， 1.79-1.08(br s，18H)，1.06-0.92(m，12H)，0.80-0.70(m，6H)。13C NMR (CDCl3，100MHz)δ171.7，157.8，155.5，155.5，152.0，152.0，151.2，149.4， 145.0，132.1，130.6，130.0，128.7，128.4，127.9，119.9，98.2，82.7，81.5，79.7， 75.2，65.7，33.2，28.3，27.6，7.7，7.2，6.4。
第二种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(br s，1H， Ar)，8.23(d，1H，J＝8.4Hz，Ar)，8.01(br d，1H，Ar)，7.85-7.76(m，2H， Ar)，7.65(br t，1H，J＝8.4Hz，Ar)，7.52(s，1H，H-14)，6.54(br s，1H， H-5)，5.61(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)，5.22(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)， 2.03-1.82(m，2H，H-19)，1.76-1.08(br s，18H)，1.04-0.92(m，12H)， 0.80-0.70(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.5，157.9，155.5， 155.5，152.3，152.0.151.2，149.4，145.1，132.1，130.6，130.0，128.7，128.4， 127.9，119.9，98.2，82.9，81.5，79.6，75.2，65.8，33.3，28.3，27.4，7.8，7.2， 6.4。
实施例XVI-5-二-叔-丁氧基羰基肼基-喜树碱第一种非对映异构体的制 备
将5-二-叔-丁氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱(0.050g，0.072mmol) 第一种非对映异构体在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(4mL)中，接着 向其中滴入Et3N·3HF(0.088mL，0.542mmol)。反应混合物室温下反应 35h，用TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝3/2)。真空下挥干溶剂，残 留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝3/2)纯化，由此得到淡黄色固体状 的所需化合物(0.041g，0.071mmol，98％)。
产物通过CH2Cl2/戊烷＝1/50结晶进一步纯化。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.77(br s，1H，Ar)，8.16(br d，1H，J ＝8.0Hz，Ar)，7.97(br s，1H，Ar)，7.86-7.50(m，4H，Ar)，6.51(br s，1H， H-5)，5.66(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，5.24(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)， 3.86(br s，1H，OH)，2.00-1.80(m，2H，H-19)，1.79-1.13(br s，18H)，1.03 (t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.7，157.9， 155.5，155.5，152.1，151.3，150.7，149.6，145.7，132.3，130.7，129.9，128.7， 127.9，127.6，120.0，97.9，82.8，81.6，79.7，72.7，66.1，31.8，28.3，27.7，7.7。
实施例XVII-5-二-叔-丁氧基羰基肼基-喜树碱第二种非对映异构体的 制备
5-二-叔-丁氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱(0.050g，0.072mmol)第 二种非对映异构体在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(4.5mL)中，接着 向其中滴入Et3N·3HF(0.088mL，0.542mmol)。反应混合物室温下反应 35h，用TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝3/2)。真空下挥干溶剂，残 留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝3/2)纯化，由此得到淡黄色固体状 的所需化合物(0.040g，0.069mmol，96％)。产物通过CH2Cl2/戊烷＝1/50 结晶进一步纯化。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(br s，1H，Ar)，8.22(br d，1H，J ＝8.4Hz，Ar)，7.99(br s，1H，Ar)，7.88-7.50(m，4H，Ar)，6.53(br s，1H， H-5)，5.65(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)，5.26(d，1H，J＝16.4Hz，H-17)， 3.80(br s，1H，OH)，2.00-1.80(m，2H，H-19)，1.79-1.13(br s，18H)，1.03 (t，3H，J＝7.2Hz，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.6，157.9， 155.4，155.4，152.1，151.3，150.8，149.5，145.6，132.3，130.8，129.8，128.7， 127.9，127.8，119.8，98.0，83.0，81.5，79.7，72.7，66.3，31.8，28.3，27.7，7.8。
实施例XVIII-5-二苄基氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱的制备
将喜树碱20-OTES(0.100g，0.216mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于 无水THF(6mL)中，然后冷却至-78℃，并向其中滴入1.0M LiHMDS在 THF(0.281mL，0.281mmol)中的溶液。20分钟后，向其中加入在无水 THF(2mL)中的偶氮二甲酸二苄酯(0.097g，0.324mmol)。-78℃下3h后， 使温度升高至25℃并用TLC(己烷/AcOEt＝3/1)监控试剂的消失。观察 到生成了两种非对映异构体。室温90分钟后，加入饱和NH4Cl终止反 应。水相用CH2Cl2(3×15mL)萃取，并合并有机相，用Na2SO4干燥，过 滤并真空浓缩。残留物用闪式色谱(SiO2，环己烷/AcOEt＝4/1然后7/2) 纯化，由此得到淡黄色固体(0.161g，0.212mmol，98％)。通过进一步的 色谱处理分离两种异构体。洗脱顺序如下：
第一种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.70(br s，1H， Ar)，8.39(br s 1H，Ar)，8.22(br d，1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.95(br d，1H，J ＝7.6Hz，Ar)，7.83(br t，1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.65(br t，1H，J＝7.6Hz， Ar)，7.64-7.00(m，11H，Ar+H-14)，6.49(br s，1H，H-5)，5.57(d，1H，J ＝16.4Hz，H-17)，5.47-4.44(m，5H)，1.98-1.82(m，2H，H-19)，1.02-0.89 (m，12H)，0.80-0.70(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.6， 158.0.156.3，156.3，153.0，152.2，151.0，149.6，144.8，135.3，132.1，130.6， 130.0，128.6-127.8(11C)，119.9，98.4，79.5，75.2，68.4，67.9，65.6，33.0， 7.9，7.2，6.4。
第二种非对映异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.85(br s，1H， Ar)，8.58(br s 1H，Ar)，8.20(br s，1H，Ar)，7.93(br s，Ar)，7.81(br t， 1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.63(br t，1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.56-6.90(m，11H， Ar+H-14)，6.52(br s，1H，H-5)，5.55(d，1H，J＝16.8Hz，H-17)， 5.44-4.71(m，5H)，1.98-1.80(m，2H，H-19)，1.05-0.90(m，12H)， 0.81-0.70(m，6H)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ171.5，157.9，156.4， 156.4，152.9，152.4，150.9，149.4，144.8，135.3，132.1，130.6，129.9， 128.6-127.8(11C)，119.9，98.5，79.3，75.2，68.4，67.8，65.6，32.9，7.8，7.2， 6.4。
实施例XIX-5-二苄基氧基羰基肼基-喜树碱第一种非对映异构体的制 备
将5-二苄基氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱第一种非对映异构体 (0.140g，0.184mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(6mL)中，接着 向其中滴入Et3N·3HF(0.225mL，1.380mmol)。反应混合物室温下反应 52h，用TLC监控试剂的消失(己烷/AcOEt＝1/3)。真空下挥干溶剂，残 留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1，然后2/3)纯化，由此得到淡黄 色固体(0.113g，0.175mmol，95％)。产物通过CH2Cl2/戊烷＝1/50结晶 进一步纯化。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.67(br s，1H，Ar)，8.39(br s 1H， Ar)，8.12(br d，1H，J＝7.6Hz，Ar)，7.95(br s，1H，Ar)，7.74(br t，1H，J ＝7.6Hz，Ar)，7.65-6.66(m，12H，Ar+H-14)，6.48(br s，1H，H-5)，5.55 (d，1H，J＝16.0Hz，H-17)，5.42-4.44(m，5H)，3.86(br s，1H，OH)， 1.92-1.72(m，2H，H-19)，0.95(t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR(CDCl3， 100MHz)δ173.5，158.0，156.2，156.0，153.0，150.9，150.9，149.5，145.3， 135.4，132.2，130.7，129.8，128.7-127.8(11C)，119.9，98.2，79.6，72.7，68.5， 68.0，65.9，31.6，7.8。
实施例XX-5-二苄基氧基羰基肼基-喜树碱第二种非对映异构体的制备
将5-二苄基氧基羰基肼基-20-OTES-喜树碱的第二种非对映异构 体(0.140g，0.184mmol)在惰性气氛下搅拌溶解于无水THF(6mL)中，接 着向其中滴入Et3N·3HF(0.150mL，0.921mmol)。反应混合物室温下反 应55h，用TLC(己烷/AcOEt＝3/2)监控试剂的消失。真空下挥干溶剂， 残留物用闪式色谱(SiO2，己烷/AcOEt＝1/1)纯化，由此得到淡黄色固体 状的所需化合物(0.113g，0.175mmol，95％)。产物通过CH2Cl2/戊烷＝1/50 结晶进一步纯化。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.71(br s，1H，Ar)，8.34(br s 1H， Ar)，8.18(br s，1H，Ar)，7.94(br s，1H，Ar)，7.79(br t，1H，J＝7.6Hz， Ar)，7.70-6.70(m，12H，Ar+H-14)，6.52(br s，1H，H-5)，5.53(d，1H，J＝ 16.4Hz，H-17)，5.44-4.48(m，5H)，3.87(br s，1H，OH)，1.90-1.70(m，2H， H-19)，0.99(t，3H，J＝7.6Hz，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)δ173.4， 158.0，156.3，156.1，153.0，151.0，150.9，149.6，145.3，135.5，132.3，130.8， 129.8，128.7-127.8(11C)，119.8，98.4，79.5，72.7，68.5，67.8，66.0.31.6， 7.7。
实施例XXI-细胞生长抑制作用的测定
源于人体大细胞肺肿瘤的H460细胞在含10％胎牛血清的 RPMI-1640培养基中培养。细胞敏感性通过在1或72hr药物暴露后的 细胞生长抑制测定进行确定。收集处于对数生长的细胞并植入6-孔板 中，试验双份。植板二十四小时后，将细胞暴露于药物，并在暴露于药 物72小时后用库尔特计数器进行计数，用于确定IC50。IC50定义为与 未处理的对照生长比较，细胞生长被抑制50％的浓度。
实施例XXII-拓扑异构酶-I-依赖的DNA破裂测定
DNA破裂使用751-bp BamHI-EcoRI DNA SV40纯化凝胶进行确 定(Beretta GL，Binaschi M，Zagni AND，Capuani L，Capranico G. Tethering a type IB topoisomerase to a DNA site by enzyme fusion to a heterologous site-selective DNA-binding protein domain.Cancer Res 1999；59：3689-97)。DNA碎片仅在3’标记。DNA破裂反应(20,000cpm/ 样本)在20ml的10mM Tris-HCL(pH 7.6)、150mM KCl、5mM MgCl2、 15μg/mL BSA、0.1mM硫代苏糖醇和人重组酶(全长top1)中37℃下进 行30min。反应使用0.5％SDS和0.3mg/mL蛋白酶K在42℃阻断45min。 DNA损伤持续性在不同的时间加入0.6M NaCl与10μM的所述药物孵 育30分钟后检验。沉淀后，DNA重混悬于变性缓冲液(80％甲酰胺， 10mM NaOH，0.01M EDTA和1mg/mL染料)中，之后植入于变性凝胶 (7％聚丙烯酰胺在TBE缓冲液中)。全部DNA的破碎水平用 PhosphoImager 425型(分子动力学)进行测定(Dallavalle S，Ferrari A， Biasotti B，等人.Novel 7-oxyiminomethyl comptothecin derivatives with potent in vitro and in vivo antitumor activity.J Med Chem 2001； 44：3264-74)。
DNA损伤的持续(％)
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