激酶抑制剂的组合物及其在治疗癌症和其它与激酶相关的
疾病中的用途
[0002] 根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求于2007年9月6日提交的美国
专利申请US60/970,410、于2007年12月13日提交的美国专利申请US61/013,389和于2008年6月20日提交的美国专利申请US61/074,295的优先权利益，这些文献各自整体引入本文作为参考。
发明领域
[0003] 本发明涉及新的作为癌症干细胞和癌症干细胞途径激酶(Cancer StemCell Pathway Kinase-CSCPK)和其它相关激酶的抑制剂的噻唑取代的二氢吲哚-2-
酮类的组合物和使用方法；含有这类化合物的药物组合物；使用这类化合物来治疗
哺乳动物的蛋白激酶相关性紊乱的方法；和制备这类化合物及其中间体的方法。
[0004] 发明背景
[0005] 尽管在
癌症治疗方面进行了数十年的努
力，但是癌症仍然是一个巨大的公众卫生负担。手术和
放射治疗在治疗原发性
肿瘤方面非常成功。然而，一旦癌症扩散至远距离的部位，则通常需要
化学治疗来治疗疾病。细胞毒性剂在现代癌症疗法中起关键作用。然而，它们通常在正常组织中诱发显著的毒性。治疗癌症的原则已经改变。细胞毒性剂正在失去其在化学治疗世界中的优势，而目的在于更特异性地靶向于癌细胞的靶向治疗正在被开发。靶向癌症疗法是相对新的一类对肿瘤生长中有牵连的靶标具有选择性的活性剂。它们已经显示出令人
印象深刻的效力，而毒性远低于细胞毒性剂。
[0006] 蛋白激酶是调节各种细胞过程、包括细胞生长、
细胞增殖、细胞分化和代谢的一个激酶家族。蛋白激酶通过途径配偶体的连续化学修饰传达细胞生长
信号。因此，任何激酶对
指定信号转导级联的药理学抑制在理论上将阻断整个途径上的信号传达。此外，已知蛋白激酶在疾病状态和紊乱中起作用，例如在癌症中经常表征出激酶突变和/或过表达，从而导致经常与失控的细胞生长相关的过度活化的活性。由于这一原因，蛋白激酶代表了治疗性抑制的潜在靶标。[1]。癌症干细胞(CSC)是各种肿瘤类型内具有致肿瘤可能性的细胞亚群，致肿瘤可能性是这些肿瘤内的其余细胞中所不具备的。越来越多的证据表明这类细胞在几乎所有肿瘤类型中存在。CSC产生分化细胞，分化细胞构成了肿瘤
块的体积并且在表型上表征了该疾病。已经证实癌症干细胞主要负责癌发生、癌转移和癌复发。在许多肿瘤中，CSC及其分化后代显示具有显著不同的
生物学特征。靶向于成熟肿瘤细胞的常规疗法可以导致临床改善，但是不可能治愈，除非也靶向于CSC。如果仅根据反映对癌症体积治疗效果的标准来判断临床活性，则可能漏掉对稀少的癌症干细胞独特的相关靶标。
[0007] 我们近来已经证实：本发明的化合物抑制激酶和杀伤癌症干细胞，这表明激酶是杀伤或抑制癌症干细胞的重要靶标。这些对CSC而言重要的激酶在下文中共同称作CSCPK。我们的结果提供了用CSCPK抑制剂靶向于癌症干细胞的方法。
[0008] PDGFRα是受体酪
氨酸激酶(RTK)，它在结合其配体PDGF后被活化，PDGF引起细胞分化、血管发生和细胞凋亡。它属于III类受体酪氨酸激酶家族，与CFS-1受体/c-fms和干细胞生长因子/c-kit原癌基因家族相关。PDGFRα途径在早期胚胎发育中具有活性，在许多癌症如
肝细胞癌(HCC)、头颈癌、脑肿瘤、胃肠肿瘤、
皮肤癌、
前列腺癌、卵巢癌、乳癌、肉瘤和白血病中被再活化[2-15]。此外，近期已经证实PDGFRα活化在前列腺癌的骨转移中起关键作用[16，17]。而且，已经证实PDGFRα-p70S6K途径是体内血管发生所必不可少的[18]。已经证实使用单克隆
抗体特异性地靶向于PDGFRα可导致肿瘤细胞增殖和存活显著减少，同时是一种相对无毒的治疗[11]。因此，PDGFRα代表了研究对抗广谱癌症的具有较低毒性的靶向化学治疗的靶标。
[0009] 除癌症以外，还已经充分证实：
染色体重排通过与FIP1L1融合来活化PDGFRα，导致特发性嗜酸性细胞增多综合征[5]。此外，通过启动子多态现象活化PDGFRα已经与神经管
缺陷、包括脊柱裂相关，这已经通过小鼠突变
体模型得到验证[19]。PDGFRα活化还已经与
纤维变性相关[20-23]。由于这一原因、PDGFRα代表了抗纤维变性治疗的潜在靶标。
[0010] 概述
[0011] 在一个方面，本发明提供了式I化合物
[0012]
[0013] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或
溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0014] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0015] R2是杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0016] R3是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0017] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0018] R5是烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0019] R6是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0020] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0021] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0022] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0023] 在一个方面，本发明提供了式II化合物，
[0024]
[0025] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0026] Het是含有至少一个选自N、O和S的杂
原子的5-或6-元芳族环；
[0027] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0028] R3和R10各自独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0029] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0030] R5是烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0031] R6和R9各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0032] R14和R15独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述R14和R15与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；
[0033] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0034] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0035] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0036] 在另一方面，本发明提供了式III化合物，
[0037]
[0038] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0039] Het是含有至少一个选自N、O和S的杂原子的5-或6-元芳族环；
[0040] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0041] R3和R10各自独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0042] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0043] R5是烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0044] R6和R9各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0045] R11是氢或C1-4烷基；
[0046] R12和R13独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述R12和R13与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；
[0047] n是选自2、3、4、5和6的整数；
[0048] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0049] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0050] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0051] 在另一方面，本发明提供了式IV化合物，
[0052]
[0053] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0054] Het是含有至少一个选自N、O和S的杂原子的5-或6-元芳族环；
[0055] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0056] R3和R10各自独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0057] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0058] R5是烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0059] R6和R9各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0060] R14和R15独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述R14和R15与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；
[0061] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0062] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0063] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0064] 在另一方面，本发明提供了式V化合物，
[0065]
[0066] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0067] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0068] R3和R10各自独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0069] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0070] R5是被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0071] R6和R9各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0072] R11是氢或C1-4烷基；
[0073] R12和R13独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述R12和R13与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；
[0074] n是选自2、3、4、5和6的整数；
[0075] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0076] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0077] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0078] 在另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含如上文所述的化合物或其可药用盐和可药用赋形剂、载体或稀释剂。在一些实施方案中，该药物组合物还包含至少一种其它抗癌疗法。在一些情况中，所述的至少一种其它抗癌疗法包括放射治疗(XRT)、细胞毒性剂、靶向剂或佐剂。非限制性实例包括吉西他滨、厄洛替尼、泰素/泰素帝、铂(卡铂和
顺铂)、5-FU、亚德利亚霉素、索拉非尼、伊
马替尼、阿瓦斯丁、爱必妥或赫赛汀。
[0079] 在一个方面，本发明提供了治疗哺乳动物癌症的方法，该方法包括给有此需要的哺乳动物施用
治疗有效量的如上文所述的药物组合物。
[0080] 在另一方面，本发明提供了治疗哺乳动物癌症的方法，该方法包括给有此需要的哺乳动物施用治疗有效量的如上文所述的药物组合物以抑制CSCPKs。
[0081] 在另一方面，本发明提供了通过抑制或降低哺乳动物中CSCPKs的不希望的活性来抑制/减少/减低哺乳动物的癌症干细胞存活和/或增殖的方法。
[0082] 在另一方面，本发明提供了抑制/减少/减低哺乳动物的癌症干细胞存活和/或增殖的方法，该方法包括给有此需要的哺乳动物施用治疗有效量的如上文所述的药物组合物。
[0083] 在另一方面，本发明提供了治疗哺乳动物的蛋白激酶相关性紊乱的方法，该方法包括给有此需要的哺乳动物施用治疗有效量的如上文所述的药物组合物。
[0084] 在另一方面，本发明提供了调节蛋白激酶的催化活性的方法，该方法包括使所述蛋白激酶与如上文所述的化合物或其可药用盐
接触。
[0085] 在另一方面，本发明提供了如上文所述的化合物或其可药用盐及其中间体的制备方法。
[0087] 图1显示化合物10-2在细胞试验中阻断了EGFR、c-Met和Her2的活化。
[0088] 图2显示化合物10-2抑制了EGRF、cMet和Her2的活化，但是没有导致酪氨酸激酶活性总体下降。
[0089] 图3显示了化合物10-2和对照TKI的激酶组特性。
[0090] 图4A显示了富含癌症干细胞的Hoechst侧群(Side Population)(SP)的鉴定。
[0091] 图4B显示化合物10-2对富含癌症干细胞的Hoechst SP更有效。
[0092] 图4C显示化合物10-2通过细胞凋亡杀死了Hoechst侧群。
[0093] 图5显示化合物10-2体外抑制了CSC球生成(spherogenesis)。
[0094] 图6显示化合物10-2体内抑制了CSC球生成。
[0095] 图7显示化合物10-2在人前列腺癌PC3异种移
植物模型中呈现出抗肿瘤活性。
[0096] 图8显示化合物10-2在人肝癌HepG2异种移植物模型中呈现出抗肿瘤活性。
[0097] 图9显示化合物10-2在人头颈癌FaDu异种移植物模型中呈现出抗肿瘤活性。
[0098] 图10显示化合物10-2在人胃癌MKN45异种移植物模型中呈现出抗肿瘤活性。
[0099] 详细描述
[0100] A.定义
[0101] 下文是本
说明书中使用的术语的定义。为本文的基团或术语所提供的初始的定义单独地或作为其它基团的一部分应用于本说明书全篇中的基团或术语，另有指示除外。
[0102] 术语“烷基”和“烷”指含有1-12个
碳原子、优选1-6个碳原子的直链或支链烷
烃基(烃基)。示例性的“烷基”包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4，4-二甲基戊基、辛基、2，2，4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。术语“C1-C4烷基”指含有1-4个碳原子的直链或支链烷烃基(烃基)，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基和异丁基。“被取代的烷基”指被一个或多个取代基、优选1-4个取代基在任意可利用的连接点上取代的烷基。示例性的取代基包括但不限于一种或多种下列基团：氢、卤素(例如一个卤素取代基或多个卤素取代基，形成——在后一情况中——诸如CF3或带有Cl3的烷基的基团)、氰基、硝基、CF3、OCF3、环烷基、链烯基、环烯基、炔基、杂环、芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re，其中Ra是氢、烷基、环烷基、链烯基、环烯基、炔基、杂环或芳基；Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基、环烷基、杂环、芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且Re是烷基、环烷基、链烯基、环烯基、炔基、杂环或芳基。在上述示例性的取代基中，基团例如烷基、环烷基、链烯基、炔基、环烯基、杂环和芳基自身可以任选被取代。
[0103] 术语“链烯基”指含有2-12个碳原子和至少一条碳-碳双键的直链或支链烃基。示例性的这类基团包括乙烯基或烯丙基。“被取代的链烯基”指被一个或多个取代基、优选
1-4个取代基在任意可利用的连接点上取代的链烯基。示例性的取代基包括但不限于烷基或被取代的烷基以及如上文作为示例性的烷基取代基所述的那些基团。示例性的取代基自身可以任选被取代。
[0104] 术语“炔基”指含有2-12个碳原子和至少一条碳-碳三键的直链或支链烃基。示例性的这类基团包括乙炔基。“被取代的炔基”指被一个或多个取代基、优选1-4个取代基在任意可利用的连接点上取代的炔基。示例性的取代基包括但不限于烷基或被取代的烷基以及如上文作为示例性的烷基取代基所述的那些基团。示例性的取代基自身可以任选被取代。
[0105] 术语“环烷基”指含有1-4个环且每个环含有3-8个碳的完全饱和的环状烃基。示例性的这类基团包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。“被取代的环烷基”指被一个或多个取代基、优选1-4个取代基在任意可利用的连接点上取代的环烷基。示例性的取代基包括但不限于硝基、氰基、烷基或被取代的烷基以及如上文作为示例性的烷基取代基所述的那些基团。示例性的取代基自身可以任选被取代。示例性的取代基还包括螺连接或稠合的环状取代基，尤其是螺连接的环烷基、螺连接的环烯基、螺连接的杂环(不包括杂芳基)、稠合的环烷基、稠合的环烯基、稠合的杂环或稠合的芳基，其中上述环烷基、环烯基、杂环和芳基取代基自身可以任选被取代。
[0106] 术语“环烯基”指含有1-4个环且每个环含有3-8个碳的部分不饱和的环状烃基。示例性的这类基团包括环丁烯基、环戊烯基、环己烯基等。“被取代的环烯基”指被一个或多个取代基、优选1-4个取代基在任意可利用的连接点上取代的环烯基。示例性的取代基包括但不限于硝基、氰基、烷基或被取代的烷基以及如上文作为示例性的烷基取代基所述的那些基团。示例性的取代基自身可以任选被取代。示例性的取代基还包括螺连接或稠合的环状取代基、尤其是螺连接的环烷基、螺连接的环烯基、螺连接的杂环(不包括杂芳基)、稠合的环烷基、稠合的环烯基、稠合的杂环或稠合的芳基，其中上述环烷基、环烯基、杂环和芳基取代基自身可以任选被取代。
[0107] 术语“芳基”指具有1-5个芳族环的环状芳族烃基，尤其是单环或双环基团，例如苯基、联苯基或
萘基。如果含有两个或多个芳族环(双环等)，则芳基的芳族环可以在单一点上连接(例如联苯基)或者是稠合的(例如萘基、菲基等)。“被取代的芳基”指被一个或多个取代基、优选1-3个取代基在任意连接点上被取代的芳基。示例性的取代基包括但不限于硝基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、氰基、烷基或被取代的烷基以及如上文作为示例性的烷基取代基所述的那些基团。示例性的取代基自身可以任选被取代。示例性的取代基还包括稠合的环状基团，尤其是稠合的环烷基、稠合的环烯基、稠合的杂环或稠合的芳基，其中上述环烷基、环烯基、杂环和芳基取代基自身可以任选被取代。
[0108] 术语“杂环”和“杂环状”指在至少一个含碳原子的环中具有至少一个杂原子的完全饱和或者部分不饱和或完全不饱和的、包括芳族(即“杂芳基”)的环状基团(例如4-7元单环、7-11元双环或8-16元三环环系)。含有杂原子的杂环基的每个环可以具有1、2、3或4个选自氮原子、
氧原子和/或硫原子的杂原子，其中氮和硫杂原子可以任选被氧化和氮杂原子可以任选被季铵化。(术语“杂芳基鎓”指带有季氮原子并由此带有正电荷的杂芳基)。杂环基可以在环或环系的任意杂原子或碳原子上与分子的其余部分连接。示例性的单环杂环基包括氮杂环丁基、吡咯烷基、吡咯基、吡唑基、氧杂环丁基、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂 基、氮杂 基、六氢二氮杂 基、4-哌啶酮基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基、三唑基、四唑基、四氢吡喃基、吗啉基、硫吗啉基、硫吗啉基亚砜、硫吗啉基砜、1，3-二氧戊环和四氢-1，1-二氧代噻吩基等。示例性的双环杂环基包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噻吩基、苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯基、2，3-二氢苯并[b][1，4]二噁烯基、奎宁环基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基(例如呋喃并[2，3-c]吡啶基、呋喃并[3，2-b]吡啶基]或呋喃并[2，3-b]吡啶基)、二氢异吲哚基、二氢喹唑啉基(例如3，4-二氢-4-氧代-喹唑啉基)、三嗪基氮杂 基、四氢喹啉基等。
示例性的三环杂环基包括咔唑基、苯并吲哚基(benzidolyl)，菲咯啉基、吖啶基、菲啶基、呫吨基等。
[0109] “被取代的杂环”(例如“被取代的杂芳基”)指被一个或多个取代基、优选1-4个取代基在任意可利用的连接点上取代的杂环或杂环基团。示例性的取代基包括但不限于环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、硝基、氧代(即＝O)、氰基、烷基或被取代的烷基以及如上文作为示例性的烷基取代基所述的那些基团。示例性的取代基自身可以任选被取代。示例性的取代基还包括在任意可利用连接点上的螺连接或稠合的环状取代基，尤其是螺连接的环烷基、螺连接的环烯基、螺连接的杂环(不包括杂芳基)、稠合的环烷基、稠合的环烯基、稠合的杂环或稠合的芳基，其中上述环烷基、环烯基、杂环和芳基取代基自身可以任选被取代。
[0110] 术语“卤素”或“卤代”指氯，溴，氟或碘。
[0111] 术语“碳环”指芳族或非芳族3-7元单环和7-11元双环，其中所有环原子是碳原子。“被取代的碳环”指被一个或多个取代基、优选1-4个取代基在任意可利用的连接点上取代的碳环基。示例性的取代基包括但不限于硝基、氰基、ORa(其中Ra如上文所定义)以及如上述示例性的环烷基取代基所述这样的基团。示例性的取代基自身可以任选被取代。
[0112] 术语“加热”包括但不限于常规加热(例如电加热、蒸气加热、气体加热等)和
微波加热。
[0113] 本文所用的术语″可药用赋形剂、载体或稀释剂″指在将主题药物活性剂从身体的一个器官或部分携带或转运至身体的另一器官或部分的可药用的物质、组合物或媒介物，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊材料。各载体必须是″可接受的″，这意味着与制剂的其它成分相配伍和对患者无害。可用作可药用载体的材料的一些实例包括：糖，例如乳糖、
葡萄糖和
蔗糖；
淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；
纤维素及其衍生物，例如
羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和
醋酸纤维素；西黄蓍胶粉；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油，例如
花生油、
棉子油、红花油、芝麻油、
橄榄油、玉米油和
大豆油；二元醇，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化
铝；海藻酸；无热原的
水；等渗盐水；Ringer’s溶液；
乙醇；
磷酸盐缓冲溶液；和其它用于药物制剂的相配伍的无毒物质。
组合物中还可以存在润湿剂、乳化剂和
润滑剂(例如十二烷基
硫酸钠、
硬脂酸镁和聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)以及
着色剂、释放剂、包衣剂、
甜味剂、矫味剂和
香味剂、
防腐剂和抗
氧化剂。
[0114] 推定任意具有不足化合价的杂原子具有足以满足化合价的氢原子，另有指示除外。
[0115] 本发明的化合物可以形成盐，这些盐也属于本发明的范围。在本文中对本发明化合物的称谓理解为包括其盐，另有指示除外。本文所用的术语“盐”表示与无机和/或
有机酸和
碱形成的酸盐和/或碱盐。此外，当本发明的化合物含有碱性部分(例如但不限于吡啶或咪唑)和酸性部分(例如但不限于
羧酸)两者时，可以形成两性离子(“内盐”)，并且两性离子包括在本文所用的术语“盐”范围内。虽然其它盐也是有用的，例如可用于在制备过程中可以使用的分离或纯化步骤中，但是优选可药用(即无毒的生理学上可接受的)盐。本发明化合物的盐可以例如如下形成：使化合物I、II或III与一定量、例如等量的酸或碱在介质如盐在其中沉淀的介质或在水介质中反应，然后
冷冻干燥。
[0116] 含有碱性部分例如但不限于胺或吡啶或咪唑环的本发明化合物可以与各种有机和
无机酸形成盐。示例性的
酸加成盐包括乙酸盐(例如与乙酸或三卤代乙酸如三氟
乙酸形成的那些盐)、
己二酸盐、海藻酸盐、
抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯
甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、
硼酸盐、丁酸盐、
柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基
硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、
盐酸盐、
氢溴酸盐、
氢碘酸盐、羟基乙磺酸盐(例如2-羟基乙磺酸盐)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐(例如2-萘磺酸盐)、烟酸盐、
硝酸盐、
草酸盐、果胶酸盐、
过硫酸盐、苯丙酸盐(例如3-苯丙酸盐)、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、
琥珀酸盐、硫酸盐(例如与硫酸形成的那些盐)、磺酸盐、
酒石酸盐、硫氰酸盐、
甲苯磺酸盐(例如甲苯磺酸盐)、十一酸盐等。
[0117] 含有酸性部分(例如但不限于羧酸)的本发明化合物可以与各种有机和无机碱形成盐。示例性的碱盐包括铵盐、碱金属盐如钠盐、锂盐和
钾盐、碱土金属盐如
钙盐和镁盐、与有机碱(例如有机胺)如苄星青霉素(benzathines)、二环己基胺、哈胺(hydrabamine)(与N，N-双(脱氢枞酸基)乙二胺形成)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-咪唑双酰胺、叔丁胺的盐和与氨基酸如精氨酸、赖氨酸的盐等。可以使用
试剂使碱性含氮基团被季铵化，所述试剂例如有低级烷基卤(例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲基酯、二乙基酯、二丁基酯和二戊基酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤(例如苄基溴和苯乙基溴)等。
[0118] 本文还关注本发明化合物的溶剂合物。本发明化合物的溶剂合物包括例如水合物。
[0119] 本发明的化合物及其盐可以以其互变异构形式(例如作为酰胺或亚氨基醚)存在。所有这类互变异构形式在本文中作为本发明的一部分被关注。
[0120] 在本发明的范围内还关注本发明化合物的所有立体异构体(例如由于各种取代基上的不对称碳而存在的那些立体异构体)，包括对映异构形式和非对映异构形式。本发明化合物的各立体异构体可以例如基本上不含其它异构体(例如作为纯的或基本上纯的具有指定活性的旋光异构体)或者可以混合为例如外消旋物或与所有其它立体异构体或其它所选择的立体异构体混合。本发明的
手性中心可以具有如IUPAC 1974 Recommendations定义的S或R构型。外消旋形式可以通过物理方法拆分，例如通过分级结晶、非对映异构衍生物的分离或结晶或者通过手性柱色谱法分离。各旋光异构体可以通过任意适宜的方法由外消旋物获得，所述方法包括但不限于常规方法，例如与具有旋光活性的酸成盐、然后结晶。
[0121] 本发明的化合物在其制备后优选被分离和纯化，以获得含有以重量计等于或多于95％的量的组合物(“基本上纯”的化合物I)，然后如本文所述使用或配制。在一些实施方案中，本发明的化合物是99％以上纯的。
[0122] 关注本发明化合物的所有构象异构体，包括混合物或者纯的或基本上纯的形式。本发明化合物的定义包括顺式(Z)和反式(E)烯烃异构体以及环烃或杂环的顺式和反式异构体。
[0123] 在本说明书通篇，可以选择基团及其取代基以提供稳定的部分和化合物。
[0124] B.化合物
[0125] 在一个方面，本发明提供了式I化合物
[0126]
[0127] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0128] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0129] R2是杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0130] R3是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0131] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0132] R5是烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0133] R6是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0134] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0135] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0136] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0137] 在一些实施方案中，R1是氢。在一些其它实施方案中，R3是氢。在其它实施方案中，R1和R3各自独立地是氢。在其它实施方案中，R6是氢或者C1-4烷基或被取代的C1-4烷基。在其它实施方案中，R6是氢。在其它实施方案中，R1、R3和R6各自独立地是氢。在其它实施方案中，R4、R7和R8各自独立地是氢。在其它实施方案中，R1、R3、R4、R6、R7和R8各自独立地是氢。
[0138] 在一些实施方案中，R5是烷基芳基或烷基杂芳基，其中所述烷基、芳基或杂芳基可以任选被取代。在其它一些实施方案中，R5是芳基或被取代的芳基。在其它实施方案中，R5是苯基或被取代的苯基。在其它实施方案中，R5是杂环或被取代的杂环。在其它实施方案中，R5是杂芳基或被取代的杂芳基。在其它实施方案中，R5是吡啶或被取代的吡啶。
[0139] 在一些实施方案中，R2是芳基或被取代的芳基。在其它一些实施方案中，R2是杂芳基或被取代的杂芳基。在其它实施方案中，R2是含有至少一个选自N、O和S的杂原子的5-或6-元芳族环。
[0140] 在一个方面，本发明提供了式II化合物，
[0141]
[0142] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0143] Het是含有至少一个选自N、O和S的杂原子的5-或6-元芳族环；
[0144] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0145] R3和R10各自独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0146] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0147] R5是烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0148] R6和R9各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0149] R14和R15独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述R14和R15与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；
[0150] n是选自2、3、4、5和6的整数；
[0151] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0152] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0153] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0154] 在一些实施方案中，R1是氢。在其它一些实施方案中，R3是氢。在其它实施方案中，R1和R3各自独立地是氢。在其它实施方案中，R6是氢或者C1-4烷基或被取代的C1-4烷基。在其它实施方案中，R6是氢。在其它实施方案中，R1、R3和R6各自独立地是氢。在其它实施方案中，R4、R7和R8各自独立地是氢。在其它实施方案中，R1、R3、R4、R6、R7和R8各自独立地是氢。
[0155] 在一些实施方案中，R5是烷基芳基或烷基杂芳基，其中所述烷基、芳基或杂芳基可以任选被取代。在其它一些实施方案中，R5是芳基或被取代的芳基。在其它实施方案中，R5是苯基或被取代的苯基。在其它实施方案中，R5是杂环或被取代的杂环。在其它实施方案中，R5是杂芳基或被取代的杂芳基。在其它实施方案中，R5是吡啶或被取代的吡啶。
[0156] 在一些实施方案中，R9和R10各自独立地是氢或者C1-4烷基或被取代的C1-4烷基。在其它一些实施方案中，R9和R10各自独立地是甲基。
[0157] 在一些实施方案中，R14和R15独立地是氢、烷基或被取代的烷基，或者所述R14和R15与它们所键合的N一起任选地形成3-元、4-元、5-元、6-元或7-元饱和的取代或未取代的杂环。在其它一些实施方案中，R14和R15独立地是氢、C1-4烷基或被取代的C1-4烷基，或者所述R14和R15与它们所键合的N一起形成取代或未取代的 其中m是选自1、2、3、4和5的整数。在其它实施方案中，R14和R15与它们所键合的N一起形成6-元或7-元饱和的取代或未取代的杂环，其任选含有选自N、O和S的另外的杂原子。在其它实施方案中，R14和R15与它们所键合的N一起形成6-元饱和的取代或未取代的杂环，其任选含有选自N的另外的杂原子。
[0158] 在另一方面，本发明提供了式III化合物，
[0159]
[0160] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0161] Het是含有至少一个选自N、O和S的杂原子的5-或6-元芳族环；
[0162] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0163] R3和R10各自独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0164] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0165] R5是烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0166] R6和R9各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0167] R11是氢或C1-4烷基；
[0168] R12和R13独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述R12和R13与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；
[0169] n是选自2、3、4、5和6的整数；
[0170] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0171] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0172] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0173] 在一些实施方案中，R1是氢。在其它一些实施方案中，R3是氢。在其它实施方案中，R1和R3各自独立地是氢。在其它实施方案中，R6是氢或者C1-4烷基或被取代的C1-4烷基。在其它实施方案中，R6是氢。在其它实施方案中，R1、R3和R6各自独立地是氢。在其它实施方案中，R4、R7和R8各自独立地是氢。在其它实施方案中，R1、R3、R4、R6、R7和R8各自独立地是氢。
[0174] 在一些实施方案中，R5是烷基芳基或烷基杂芳基，其中所述烷基、芳基或杂芳基可以任选被取代。在其它一些实施方案中，R5是芳基或被取代的芳基。在其它实施方案中，R5是苯基或被取代的苯基。在其它实施方案中，R5是杂环或被取代的杂环。在其它实施方案中，R5是杂芳基或被取代的杂芳基。在其它实施方案中，R5是吡啶或被取代的吡啶。
[0175] 在一些实施方案中，R9和R10各自独立地是氢或者C1-4烷基或被取代的C1-4烷基。在其它一些实施方案中，R9和R10各自独立地是甲基。
[0176] 在一些实施方案中，R11是氢。在其它一些实施方案中，n是2或3。
[0177] 在一些实施方案中，R12和R13独立地是氢、烷基或被取代的烷基，或者所述R12和R13与它们所键合的N一起任选地形成3-元、4-元、5-元、6-元或7-元饱和的取代或未取代的杂环。在其它一些实施方案中，R12和R13独立地是氢、C1-4烷基或被取代的C1-4烷基，或者所述R12和R13与它们所键合的N一起形成取代或未取代的 其中m是选自1、2、3、4和5的整数。
[0178] 在其它实施方案中，R12和R13各自独立地是乙基。在其它实施方案中，R12和R13与它们所键合的N一起形成6-元或7-元饱和的取代或未取代的杂环，其任选含有选自N、O和S的另外的杂原子。在其它实施方案中，R12和R13与它们所键合的N一起形成6-元饱和的取代或未取代的杂环，其任选含有选自N的另外的杂原子。
[0179] 在另一方面，本发明提供了式IV化合物，
[0180]
[0181] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0182] Het是含有至少一个选自N、O和S的杂原子的5-或6-元芳族环；
[0183] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0184] R3和R10各自独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0185] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0186] R5是烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0187] R6和R9各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0188] R14和R15独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述R14和R15与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；
[0189] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0190] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0191] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0192] 在一些实施方案中，R1是氢。在其它一些实施方案中，R3是氢。在其它实施方案中，R1和R3各自独立地是氢。在其它实施方案中，R6是氢或者C1-4烷基或被取代的C1-4烷基。在其它实施方案中，R6是氢。在其它实施方案中，R1、R3和R6各自独立地是氢。在其它实施方案中，R4、R7和R8各自独立地是氢。在其它实施方案中，R1、R3、R4、R6、R7和R8各自独立地是氢。
[0193] 在一些实施方案中，R5是烷基芳基或烷基杂芳基，其中所述烷基、芳基或杂芳基可以任选被取代。在其它一些实施方案中，R5是芳基或被取代的芳基。在其它实施方案中，R5是苯基或被取代的苯基。在其它实施方案中，R5是杂环或被取代的杂环。在其它实施方案中，R5是杂芳基或被取代的杂芳基。在其它实施方案中，R5是吡啶或被取代的吡啶。
[0194] 在一些实施方案中，R9和R10各自独立地是氢或者C1-4烷基或被取代的C1-4烷基。在其它一些实施方案中，R9和R10各自独立地是甲基。
[0195] 在一些实施方案中，R14和R15独立地是氢、烷基或被取代的烷基，或者所述R14和R15与它们所键合的N一起任选地形成3-元、4-元、5-元、6-元或7-元饱和的取代或未取代的杂环。在其它一些实施方案中，R14和R15独立地是氢、C1-4烷基或被取代的C1-4烷基，或者所述R14和R15与它们所键合的N一起形成取代或未取代的 其中m是选自1、2、3、4和5的整数。在其它实施方案中，R14和R15与它们所键合的N一起形成6-元或7-元饱和的取代或未取代的杂环，其任选含有选自N、O和S的另外的杂原子。在其它实施方案中，R14和R15与它们所键合的N一起形成6-元饱和的取代或未取代的杂环，其任选含有选自N的另外的杂原子。
[0196] 在另一方面，本发明提供了式V化合物，
[0197]
[0198] 或其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物，其中各符号具有如下含义并且在每次出现时被独立地选择：
[0199] R1是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、C(＝O)ORd、C(＝O)Ra或C(＝O)NRbRc；
[0200] R3和R10各自独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0201] R4、R7和R8各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基、ORa、SRa、S(＝O)Re、S(＝O)2Re、P(＝O)2Re、S(＝O)2ORe、P(＝O)2ORe、NRbRc、NRbS(＝O)2Re、NRbP(＝O)2Re、S(＝O)2NRbRc、P(＝O)2NRbRc、C(＝O)ORe、C(＝O)Ra、C(＝O)NRbRc、OC(＝O)Ra、OC(＝O)NRbRc、NRbC(＝O)ORe、NRdC(＝O)NRbRc、NRdS(＝O)2NRbRc、NRdP(＝O)2NRbRc、NRbC(＝O)Ra或NRbP(＝O)2Re；
[0202] R5是被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基；
[0203] R6和R9各自独立地是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、OCF3、烷基或被取代的烷基、杂环或被取代的杂环、芳基或被取代的芳基或者ORa；
[0204] R11是氢或C1-4烷基；
[0205] R12和R13独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述R12和R13与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；
[0206] n是选自2、3、4、5和6的整数；
[0207] Ra是氢、烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基；
[0208] Rb、Rc和Rd独立地是氢、烷基或被取代的烷基、环烷基或被取代的环烷基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基，或者所述Rb和Rc与它们所键合的N一起任选地形成杂环或被取代的杂环；且
[0209] Re是烷基或被取代的烷基、链烯基或被取代的链烯基、炔基或被取代的炔基、环烷基或被取代的环烷基、环烯基或被取代的环烯基、杂环或被取代的杂环或者芳基或被取代的芳基。
[0210] 在一些实施方案中，R1是氢。在其它一些实施方案中，R3是氢。在其它实施方案中，R1和R3各自独立地是氢。在其它实施方案中，R6是氢或者C1-4烷基或被取代的C1-4烷基。在其它实施方案中，R6是氢。在其它实施方案中，R1、R3和R6各自独立地是氢。在其它实施方案中，R4、R7和R8各自独立地是氢。在其它实施方案中，R1、R3、R4、R6、R7和R8各自独立地是氢。
[0211] 在一些实施方案中，R5是烷基芳基或烷基杂芳基，其中所述烷基、芳基或杂芳基可以任选被取代。在其它一些实施方案中，R5是芳基或被取代的芳基。在其它实施方案中，R5是苯基或被取代的苯基。在其它实施方案中，R5是杂环或被取代的杂环。在其它实施方案中，R5是杂芳基或被取代的杂芳基。在其它实施方案中，R5是吡啶或被取代的吡啶。
[0212] 在一些实施方案中，R9和R10各自独立地是氢或者C1-4烷基或被取代的C1-4烷基。在其它一些实施方案中，R9和R10各自独立地是甲基。
[0213] 在一些实施方案中，R11是氢。在其它一些实施方案中，n是2或3。
[0214] 在一些实施方案中，R12和R13独立地是氢、烷基或被取代的烷基，或者所述R12和R13与它们所键合的N一起任选地形成3-元、4-元、5-元、6-元或7-元饱和的取代或未取代的杂环。在其它一些实施方案中，R12和R13独立地是氢、C1-4烷基或被取代的C1-4烷基，或者所述R12和R13与它们所键合的N一起形成取代或未取代的 其中m是选自1、2、3、4和5的整数。
[0215] 在其它实施方案中，R12和R13各自独立地是乙基。在其它实施方案中，R12和R13与它们所键合的N一起形成6-元或7-元饱和的取代或未取代的杂环，其任选含有选自N、O和S的另外的杂原子。在其它实施方案中，R12和R13与它们所键合的N一起形成6-元饱和的取代或未取代的杂环，其任选含有选自N的另外的杂原子。
[0216] 在另一方面，本发明提供了选自如下的化合物：
[0217]
[0218] 及其对映异构体、非对映异构体、互变异构体或可药用的盐或溶剂合物。
[0219] C.用途、制剂和施用
[0220] 本发明的一部分还提供了治疗、
预防或改善哺乳动物蛋白激酶相关性紊乱的方法，该方法包括给有此需要的哺乳动物施用治疗有效量的含有如上文所述的本发明化合物的药物组合物。哺乳动物可以有治疗需求或者可以预防性地给予治疗以预防或改善蛋白激酶相关性紊乱。
[0221] “蛋白激酶相关性紊乱”是蛋白激酶在其中扮演
角色的任意疾病或有害状况。其实例包括丝氨酸-苏氨酸相关性疾病、受体酪氨酸激酶相关性疾病、非受体酪氨酸激酶相关性疾病、EGFR相关性疾病、IGFR相关性疾病、PDGFR相关性疾病和flk相关性疾病。本发明的化合物可以用于任意这些蛋白激酶相关性紊乱。
[0222] 在一些实施方案中，蛋白激酶相关性紊乱是癌症，例如
肺癌、膀胱癌、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌、乳癌、小细胞肺癌、神经胶质瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、泌尿生殖系统癌、胰腺癌、甲状腺癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃肠癌、胃癌、肝细胞瘤、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、肾细胞癌、星形细胞瘤、卡波西肉瘤、慢性髓性白血病、急性髓性白血病、骨髓增殖性疾病和成胶质细胞瘤。
[0223] 根据本发明的一项或多项实施方案，“癌症干细胞”(“CSC”或“CSCs”)指具有自我更新能力和致癌性的癌细胞的微小群体。它们也称作“癌症起始细胞”、“肿瘤起始细胞”、“癌症源样细胞(Cancer Stem-Like Cells)”、“源样癌细胞(Stem-Like Cancer Cells)”、“攻击性癌细胞”和“超恶性癌细胞”等。分离这些细胞的方法包括但不限于根据流出Hoechst 33342能力的富集、表面标记物如CD133、CD44等的富集和根据其致癌性质的富集。
[0224] 术语“CSCPK”或“CSCPKs”指对癌症干细胞的存活或自我更新而言必不可少的蛋白激酶。
[0225] 在一些实施方案中，蛋白激酶是CSCPK。本发明的化合物可特别用于通过抑制CSCPKs来治疗、预防或改善癌症，例如肺癌、膀胱癌、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、前列腺癌、乳癌、小细胞肺癌、神经胶质瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、泌尿生殖系统癌、胰腺癌、甲状腺癌、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃肠癌、胃癌、肝细胞瘤、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、肾细胞癌、星形细胞瘤、卡波西肉瘤、慢性髓性白血病、急性髓性白血病、骨髓增殖性疾病和成胶质细胞瘤。
[0226] 在其它实施方案中，蛋白激酶包括丝氨酸-苏氨酸激酶、受体酪氨酸激酶和非受体酪氨酸激酶。
[0227] 在其它实施方案中，蛋白激酶相关性紊乱包括糖尿病、自身免疫疾病、增殖过度疾病、血管发生、炎性疾病、免疫疾病、心
血管疾病、
再狭窄、纤维变性、
银屑病、希-林病(von Heppel-Lindau disease)、骨关节炎、神经变性、感染和类
风湿性关节炎。
[0228] 本发明的一部分提供了通过抑制或降低不希望的CSCPKs活性来抑制/减少/减低哺乳动物癌症干细胞存活和/或增殖、自我更新的方法。
[0229] 本发明的一部分还提供了通过靶向于CSCPKs来抑制癌症干细胞生态位或基质细胞信号传导的方法。
[0230] 本发明的一部分还提供了治疗癌症、抑制/减少/减低癌症干细胞存活和/或增殖的方法。
[0231] 本发明的一部分还提供了调节蛋白激酶催化活性的方法。该方法包括使所述蛋白激酶与本发明的化合物或其可药用盐接触。在一些实施方案中，所述蛋白激酶包括丝氨酸-苏氨酸激酶、受体酪氨酸激酶和非受体酪氨酸激酶。
[0232] 本发明的一部分还提供了包含如上文所述的本发明化合物或对映异构体、非对映异构体、互变异构体或其可药用的盐或溶剂合物以及包含可药用赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。
[0233] 本发明的制剂包括适于口服、经鼻、局部(包括口含和舌下)、直肠、
阴道和/或胃肠外施用的那些制剂。制剂可以方便地以单位剂量形式呈现，并且可以通过药学领域众所周知的任意方法制备。可以与载体物质合并以生产单一剂量形式的活性成分的量将根据所治疗的哺乳动物和具体施用方式的不同而改变。可以与载体物质合并以生产单一剂量形式的活性成分的量通常将是产生治疗效果的化合物量。通常，在100％中，该量将例如为约0.1％至约25％的活性成分。
[0234] 适于口服施用的本发明的治疗性组合物或制剂可以是胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(采用矫味基质、通常是蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)、散剂、颗粒或作为在水性或非水性液体中的溶液或混悬液或者作为水包油型或油包水型液体乳剂或者作为酏剂或糖浆剂或者作为软锭剂(采用惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)和/或作为
口腔洗剂等，它们各自含有预定量的本发明化合物作为活性成分。本发明的化合物还可以作为大丸剂、药糖剂或糊剂进行施用。
[0235] 在用于口服施用的本发明的固体剂量形式(胶囊、片剂、丸剂、锭剂、散剂、颗粒等)中，本发明的醇或抑制剂与一种或多种可药用载体混合，所述载体例如有柠檬酸钠或磷酸二钙和/或任意如下成分：填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或
硅酸；
粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；
保湿剂，例如甘油；崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、一些
硅酸盐、碳酸钠和淀粉羟乙酸钠；溶解阻滞剂，例如
石蜡；吸收促进剂，例如季铵化合物；润湿剂，例如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯和聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物；吸收剂，例如
高岭土和膨润粘土；润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物；和着色剂。就胶囊、片剂和丸剂而言，药物组合物还可以包含缓冲剂。相似类型的固体组合物还可以用作采用诸如乳糖或奶糖(milk sugars)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬明胶胶囊中的填充剂。
[0236] 用于口服施用本发明化合物的液体剂量形式包括可药用的乳剂、微乳剂、溶液、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分外，液体剂量形式还可以含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、
苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油(特别是棉子油、花生油、玉米油、胚油、橄榄油、
蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和山梨坦
脂肪酸酯及其混合物。另外，环糊精如羟丙基-β-环糊精可以用于增溶化合物。
[0237] 除了惰性稀释剂，口服组合物还可以包括诸如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂、着色剂、香味剂和防腐剂的佐剂。除了本发明的醇或抑制剂，混悬液还可以含有助悬剂如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨坦酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminum metahydroxide)、
膨润土、琼脂和西黄蓍胶及其混合物。
[0238] 用于直肠或阴道施用的本发明的药物组合物的制剂可以作为栓剂呈现，栓剂可以通过将一种或多种本发明的醇或抑制剂与一种或多种适宜的无刺激性赋形剂或载体(包括例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯)混合来制备，栓剂在室温下是固体，但是在体温下是液体，因此在直肠或阴道腔内将
熔化并释放本发明的药物活性剂。适于阴道施用的本发明的制剂还包括阴道栓、卫生栓、霜剂、凝胶剂、糊剂、
泡沫剂或喷雾制剂，其含有本领域已知适当的载体。
[0239] 用于局部或透皮施用本发明的醇或其它抑制剂的剂量形式包括粉末、喷雾剂、
软膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。可以将活性化合物在无菌条件下与可药用载体和与可能需要的任意防腐剂、缓冲剂或抛射剂混合。
[0240] 除了本发明的醇或其它抑制剂，软膏剂、糊剂、霜剂和凝胶还可以含有赋形剂如动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌或其混合物。
[0241] 除了本发明的化合物，粉末和喷雾剂还可以含有赋形剂如乳糖、滑石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂可以另外含有常用抛射剂如氯氟烃类和挥发性的未取代烃类如
丁烷和丙烷。
[0242] 眼科制剂、眼用软膏、粉末、溶液等也落入本发明的范围内。
[0243] 适于胃肠外施用的本发明的药物组合物包含一种或多种本发明的醇或抑制剂与一种或多种可药用的无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、混悬液或乳剂或无菌粉末(可以在临用前重构成无菌的可注射溶液或分散液)的联合，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂、使制剂与指定接受者的血液等渗的溶质或者助悬剂或
增稠剂。
[0244] 在一些情况中，为了延长本发明的醇或抑制剂的效果，延缓醇或抑制剂从皮下或肌内注射的吸收是所期望的。这可以通过使用具有差的
水溶性的晶体或非晶形物质的液体混悬液来实现。药物的吸收速率随即取决于其溶出速率，由此可依赖于晶体大小和晶型。或者，通过将醇或抑制剂溶于或混悬于油媒介物中来实现胃肠外施用的组合物的延缓吸收。用于贮库注射剂的一种策略包括使用聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物，其中该媒介物在室温下是
流体，而在体温下
固化。
[0245] 本发明的药物化合物可以单独地或与一种或多种如上文所述的活性剂、其它药物物质或与其它抗癌剂或细胞毒性剂同时地、依次地或相继地以及与如上文所述的可药用赋形剂、载体或稀释剂联合地施用。
[0246] 口服单位剂量形式中的药理活性剂的量(作为单剂量或多剂量)是有效治疗神经学紊乱的量。正如本领域技术人员所认识到的那样，所采用的精确剂量将取决于多种因素，所述因素的实例包括病症本身、所治疗病症的严重性、所用的具体组合物以及所治疗个体涉及的各种身体因素。体外或体内实验可以任选地用于帮助鉴定最佳剂量范围。
[0247] 通常，本发明的化合物将以日剂量方案(对于成人患者而言)施用，例如以游离碱计算就口服剂量而言以1mg-2000mg、优选30mg-1000mg、例如10-250mg或就静脉内、皮下或肌内注射剂量而言以0.1mg-100mg、优选0.1mg-50mg、例如1-25mg的本发明化合物或其生理学上可接受的盐的日剂量方案施用，化合物以每日1至4次施用。适宜地，化合物将施用达连续治疗的时间段，例如1周或更长时间。
[0248] D.化学合成
[0249] 可以使用下述方法连同有机合成领域的技术人员已知的合成方法或其变通形式来制备本发明的化合物。反应在适于所用试剂和材料的溶剂中进行，并且是适于所进行的转化的。本文所包括的
实施例中的原料是可以自商业途径获得的，或者可以容易地通过标准方案由已知材料制得。例如，下述反应非限制性地解释了本文所用的一些原料和实施例的制备。流程1和2中所示的通式化合物上的各取代基如上文所定义。
[0250] 如流程1所示，式VII化合物可以与式VIII化合物在有效提供式VI的噻唑取代的化合物的条件(例如加热)下反应。使VI化合物可以进一步与式IX化合物在碱(例如哌啶)存在下反应，得到式VI化合物。
[0251] 流程1
[0252]
[0253] 式II化合物可以按照流程2制得。式VI化合物可以与式X化合物在碱(例如哌啶)存在下反应，得到式XI化合物。式XI化合物可以进一步与式XII的胺在肽
偶联剂和碱的存在下反应，得到式II化合物。
[0254] 流程2
[0255]
[0256] 下述实施例进一步非限制性地解释了本发明化合物的制备。实施例
[0257] 实施例1
[0258] 化合物7-1的制备
[0259] 流程A
[0260]
[0261] 向5-氯乙酰基羟吲哚1(42mg，0.2mmol)在EtOH/THF(2mL/1mL)中的混悬液中加入硫代乙酰胺2-1(15mg，0.2mmol)。将混合物于80℃加热16小时，此后冷却。
真空1
浓缩溶液，得到橙色固体3。H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.50(br.S，1H)，7.72-7.80(m，
2H)，7.33(s，1H)，7.16(s，1H)，6.86(d，1H，J ＝ 8.63Hz)，3.42-4.54(m，2H)；MS m/z
231.10(M+H)。
[0262] 向3(53mg，0.2mmol)在EtOH/THF(2mL/1mL)(或使用在EtOH/THF(2mL/1mL)溶液中的上述反应混合物)中的溶液中加入5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸4(33.4mg，0.2mmol)和哌啶(21.8μL)。将混合物于80℃加热2小时。冷却至室温后，过滤
1
反应混合物，用EtOH(1mL)洗涤，得到淡红色固体5。H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.80(s，
1H)，12.10(br.s，1H)，11.08(s，1H)，8.35(s，1H)，7.85(s，1H)，7.78-7.81(m，2H)，6.94(d，
1H，J＝8.11Hz)，2.74(s，3H)，2.56(s，3H)，2.52(s，3H)；MS m/z 380.21(M+H)。
[0263] 向5(20mg，0.052mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入HATU(24mg，0.063mmol)、二异丙基乙胺(30μL，0.168mmol)和1-甲基哌嗪6-1(10μL，0.090mmol)。将混合物于室温搅拌16小时，然后真空浓缩。将残余物加入CH2Cl2(2mL)中，用H2O(3×1.5mL)萃取。用Na2SO4干燥有机层，真空浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH/Et3N)，得到黄色固1
体7-1。H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.00(s，1H)，8.30(s，1H)，7.83(s，1H)，7.65-7.78(m，
2H)，6.94(d，1H，J ＝ 8.18Hz)，3.02-3.20(m，4H)，2.74(s，3H)，2.5-2.58(m，4H)，2.5(s，
6H)，2.3(s，3H)；MS m/z 462.20(M+H)。
[0264] 实施例2
[0265] 化合物10-1的制备
[0266] 流程B
[0267]
[0268] 向5-氯乙酰基羟吲哚1(820mg，4mmol)在EtOH/THF(20mL/20mL)中的混悬液中加入硫代苯甲酰胺2-2(550mg，4mmol)。将混合物于80℃加热16小时，此后冷却。真空浓缩溶液，得到橙色固体8。MS m/z 293.20(M+H)。
[0269] 向该固体8中加入EtOH/THF(20mL/20mL)(或使用上述反应混合物)、5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸4(668mg，4mmol)和哌啶(400μL)。将混合物于80℃加热5小时。冷却至室温后，过滤反应混合物，用EtOH(1mL)洗涤，得到橙色固体
1
9。H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.80(s，1H)，12.40(s，1H)，11.10(s，1H)，8.47(s，1H)，
8.07-8.12(m，3H)，7.94(d，1H，J＝8.00Hz)，7.86(s，1H)，7.55-7.6(m，3H)，7.01(d，1H，J＝
8.10Hz)，2.59(s，3H)，2.57(s，3H)；MS m/z 442.20(M+H)。
[0270] 向9(34mg，0.077mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入HATU(35mg，0.092mmol)、二异丙基乙胺(30μL，0.168mmol)和1-甲基哌嗪6-1(15μL，0.13mmol)。将混合物于室温搅拌16小时，然后真空浓缩。将残余物加入CH2Cl2(2mL)中，用H2O(3×1.5mL)萃取。用Na2SO4干燥有机层，真空浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH/Et3N)，得到黄色固体1
10-1。H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.68(s，1H)，11.10(s，1H)，8.44(s，1H)，8.07-8.10(m，
3H)，7.91(d，1H，J ＝ 8.00Hz)，7.80(s，1H)，7.68-7.76(m，2H)，7.52-7.58(m，1H)，7.01(d，
1H，J ＝ 8.10Hz)，3.02-3.15(m，4H)，2.52-2.58(m，4H)，2.5(s，3H)，2.35(s，3H)，2.33(s，
3H)；MS m/z 524.20(M+H)。
[0271] 实施例3
[0272] 化合物10-2的制备
[0273] 流程C
[0274]
[0275] 向9(1.55g，3.5mmol)在DMF(130mL)中的溶液中加入HATU(1.6g，4.2mmol)、二异丙基乙胺(1.6mL，9.2mmol)和N，N-二乙基-1，2-乙二胺6-2(0.6mL，4.2mmol)。将混合物于室温搅拌16小时，然后真空浓缩。将残余物加入CH2Cl2(800mL)中，用H2O(200mL)、饱和NaHCO3(200mL)、H2O(2×200mL)和盐水(200mL)萃取。用Na2SO4干燥有机层，真空浓缩。将1
残余物加入少量MeOH中，过滤，得到黄色固体10-2。H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.70(s，
1H)，11.10(s，1H)，8.44(s，1H)，8.07-8.10(m，3H)，7.92(d，1H，J ＝ 8.10Hz)，7.81(s，1H)，
7.3-7.6(m，3H)，7.00(d，1H，J ＝ 8.10Hz)，3.2-3.3(m，2H)，2.5-2.6(m，6H)，2.51(s，3H)，
2.48(s，3H)，1.00(t，6H，J＝6.90Hz)；MS m/z 540.20(M+H)。
[0276] 实施例4
[0277] 化合物13-1的制备
[0278] 流程D
[0279]
[0280] 向5-氯乙酰基羟吲哚1(42mg，0.2mmol)在EtOH/THF(1mL/1mL)中的混悬液中加入硫代烟酰胺2-3(27.8mg，0.2mmol)。将混合物于80℃加热16小时，此后冷却。真空浓缩溶液，得到橙色固体11。MS m/z 294.20(M+H)。
[0281] 向固体11中加入EtOH/THF(1mL/1mL)、5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(33.4mg，0.2mmol)和哌啶(21.8μL)。将混合物于80℃加热2小时。冷却至室温后，浓缩反应混合物，过滤，得到橙色固体12。MS m/z 443.20(M+H)。
[0282] 向 固 体12(44mg，0.10mmol) 在DMF(1.5mL)中 的 溶 液 中 加 入 HATU(35mg，0.12mmol)、二异丙基乙胺(50μL，0.33mmol)和1-甲基哌嗪6-1(30μL，0.26mmol)。将混合物于室温搅拌16小时，然后真空浓缩。将残余物加入CH2Cl2(2mL)中，用H2O(1.5mL)萃取。用Na2SO4干燥有机层，真空浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH/Et3N)，得
1
到黄色固体13-1。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.55(s，1H)，11.00(s，1H)，9.20(d，1H，J＝1.60Hz)，8.64(dd，1H，J＝4.70，1.60Hz)，8.35-8.37(m，2H)，8.10(s，1H)，7.84(dd，1H，J＝8.00，1.60Hz)，7.71(s，1H)，7.52(ddd，J＝8.00，4.70，0.70Hz，1H)，6.92(d，1H，J ＝
8.00Hz)，3.07-3.2(m，4H)，2.26(s，3H)，2.24(s，3H)，2.24-2.3(m，4H)，2.13(s，3H)；MS m/z
525.20(M+H)。
[0283] 实施例5
[0284] 化合物13-2的制备
[0285] 流程E
[0286]
[0287] 向 固 体12(44mg，0.10mmol) 在DMF(1.5mL)中 的 溶 液 中 加 入 HATU(35mg，0.12mmol)、二异丙基乙胺(50μL，0.33mmol)和N，N-二乙基-1，2-乙二胺6-2(23μL，
0.2mmol)。将混合物于室温搅拌16小时，然后真空浓缩。将残余物加入CH2Cl2(2mL)中，用H2O(200mL)萃取。用Na2SO4干燥有机层，真空浓缩。残余物通过柱色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH/
1
Et3N)，得到黄色固体13-2。H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.60(s，1H)，11.00(s，1H)，9.18(d，
1H，J＝1.60Hz)，8.64(dd，1H，J＝4.80，1.60Hz)，8.33-8.37(m，2H)，8.09(s，1H)，7.83(dd，
1H，J ＝ 8.00，1.60Hz)，7.71(s，1H)，7.50(dd，J ＝ 8.00，4.80Hz，1H)，7.36-7.39(m，1H)，
6.91(d，1H，J＝8.00Hz)，3.20(q，J＝7.10Hz，4H)，2.4-2.6(m，4H)，0.90(t，J＝7.10Hz，
6H)；MS m/z 525.20(M+H)。MS m/z 541.20(M+H)。
[0288] 可以使用与制备化合物13-1相同的方法由化合物12和N，N-二乙基-1，2-乙二胺6-2制得化合物13-2。
[0289] 实施例6
[0290] 本发明化合物的制剂
[0291] 本发明的化合物可以在可接受的口服媒介物中配制成溶液混合物或混悬液混合物。例如，如下制得10mg/ml的溶液制剂。将100mg化合物10-2[如实施例3中所示]通过剧烈振摇和超声处理溶于1.25ml DMA(二甲基乙酰胺)中。然后向所得溶液中加入由PEG400和20％维生素E TPGS水溶液(60∶40)组成的8.75ml混合溶剂和75μl 2.4N HCl。将所得混合物加热，在45℃水浴中超声处理直至溶液变得澄清。如下制备10mg/ml混悬液制剂。将100mg化合物10-2混悬于10ml 0.7％柠檬酸中，通过剧烈振摇和超声处理使其变成均匀的混悬液。
[0292] 实施例7
[0293] 生物学试验
[0294] 可以按照所述方案测试本发明的化合物。
[0295] 细胞培养物：将HeLa、Dld1、SW480、MDA-MB-231、A549、HT29、A431、PC3、FaDu、HepG2和H1299细胞(ATCC，马纳萨斯，VA)维持在补充有10％胎
牛血清(FBS)(Gemini Bio-Products，West Sacramento，CA)和5％青霉素/
链霉素/两性霉素B(Invitrogen)的Dulbecco氏改良的Eagle培养基(DMEM)(Invitrogen，Carlsbad，CA)中。
[0296] 细胞存活测定：对于集落形成测定，将细胞在6孔培养板上以2000个细胞/孔铺板。铺板后24小时时，用化合物处理细胞。使集落发育7-10天，此时将它们用改变的吉姆萨染料(Sigma)染色。然后对染色的集落计数以测定IC50。
[0297]
蛋白质印迹分析：收集所培养的细胞，通过在
冰上孵育30分钟溶解在全细胞提取缓冲液(50mM Tris-HCl pH 7.5，150mM NaCl，1.0％NP-40，1mM EDTA，0.1mM正
钒酸钠，1X蛋白酶抑制剂合剂(Roche))中。通过在微量离心机中以13,000×g离心分离可溶性蛋白质，上清液于-70℃储存。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶
电泳分析分离了蛋白质，通过电印迹转移至聚偏二氟乙烯膜(Biorad，Hercules，CA)上。
[0298] Hoechst侧群：从具有胰蛋白酶和
乙二胺四乙酸(“EDTA”)的培养皿中取出SW480细胞，通过离心沉淀，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤，于37℃重新混悬于含有2％FBS和1mM4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)的Dulbecco氏改良的Eagle培养基(DMEM)中。
然后将细胞用5μg/mL浓度的Hoechst 33342(Invitrogen)标记。将标记了的细胞于37℃单独或与50μM维拉帕米(Sigma-Aldrich，St.Louis)一起孵育120分钟。染色后，将细胞混悬于含有2％FBS和1mM HEPES的Hanks’平衡盐水溶液(HBSS；Invitrogen)中，通过
40μm筛网
过滤器过滤，在4℃下维持直至进行流式细胞分析。Hoechst染料在350nm激发，采用450DF10(450/20nm带通
滤波器)和675LP(675nm长通
流线式滤器)滤光器在两个
波长处测定其
荧光。对向前和向侧散射的
门控并不严格，仅排除了碎片(Goodell等人，1996J ExpMed 183，1797-806)。
[0299] 使用表面标记物分离CSC：主要基于表面标记物如CD44或CD133的差异表达的分选肿瘤细胞已经占据了迄今为止述及的高度致癌性CSCs的大部分。按照Ponti等人所述的方法并做小的改变[24]，通过FACS分离了CD44高细胞。简言之，在细胞于37℃在生长培养6
基中进行胰蛋白酶消化和回收30分钟后，将其以400×g沉淀，以1×10 个细胞/mL重新混悬于具有2％FBS和1mM EDTA的PBS中。然后将细胞在冰上与CD44-FITC(BD Biosicences，圣地亚哥，CA)的1∶100稀释物一起孵育15分钟。或者，将CD24-PE(BD Bioscences，圣
6
地亚哥，CA)(1∶100)用于阴性选择。洗涤3次后，将细胞以2×10/mL重新混悬并通过
40μM网目，此后分选。
[0300] 免疫荧光：将用指定化合物处理指定时间的细胞在4％甲
醛或冷甲醇中固定以便检测膜联蛋白V。风干盖玻片，于室温在PBS中再水化10分钟。然后将样品于室温在湿润室内在封闭缓冲液(PBS，5％FBS)中孵育约10分钟。将细胞与初级抗体一起于4℃孵育过夜。洗涤后，将细胞与FITC缀合抗兔抗体的1∶500稀释物一起于室温孵育1小时。用装配有表面荧光的Nikon TE200
显微镜捕获成像，SPOT镶嵌式CCD
照相机多克隆膜联蛋白-V-FITC获自Roche，Penzberg，德国。
[0301] 球测定：一种测定细胞群体的自我更新能力的可靠方法是在没有血清或附着存在下被培养为球的能力。在超低附着培养板中在癌症干细胞培养基(DMEM/F 12，B27Neurobasal补充物，20ng/ml EGF，10ng/ml FGF，4μg/ml胰岛素和0.4％BSA)中培养CD44高FaDu或Hoechst侧群癌症干细胞以允许球形成。通常，10-14天后通过显微镜评价培养物中的球形成，对具有＞50个细胞的球评分。
[0302] 鼠异种移植物模型：使人前列腺癌异种移植物PC3细胞内部传代，以8.0×106个3
细胞/小鼠的水平皮下接种到雄性无胸腺裸鼠中。在分期时，肿瘤约350mm。采用数字测
2
径器测定肿瘤尺寸，肿瘤体积按照[长×(宽)/2]计算。类似地，将人肝癌异种移植物
6 3
HepG2细胞以8.0×10 个细胞/小鼠的水平接种到雌性裸鼠中，当肿瘤约700mm 时开始治
6
疗。将人头颈癌异种移植物FaDu细胞以6.0×10 个细胞/小鼠的水平接种到雌性裸鼠中，
3
当肿瘤约150mm 时开始治疗。
[0303] 测试物品：将化合物10-2[如实施例3中所示]的盐酸盐在DMA/PEG400/H2O(10％∶50％∶40％)中配制成10mg/ml用于腹膜内施用，在DMA/PEG400/20％维生素E(12.5％/52.5％/35％)中配制成10mg/ml用于口服施用。
[0304] 测试物品施用：
给药如所示的那样进行。
[0305] 表1：研究组和处置方案概述
[0306]
[0307] 在生活评价中：还对每只动物的
健康状态进行了每日检查。每三天检查体重。按照
畜牧业设施规程每日供应食物和水。产生＞20％致死率和或＞20％净体重减轻的处置3
被认为是有毒性的。结果表示为平均肿瘤体积(mm)±SE。P值＜0.05被认为是统计学上相关的。
[0308] 畜牧业：使4-5周的雄性或雌性无胸腺裸鼠(Charles River实验室，威尔明顿，MA)适应动物
居所设施至少1周，此后开始研究。所用的所有实验操作均符合美国生理学协会的指南和实验室动物护理和使用指南(Guidefor the Care and Use of Laboratory Animals)，并且还得到了波士顿生物医学有限公司的研究所动物护理和使用委员会(Institutional Animal Careand Use Committee of Boston Biomedical Inc.)的批准。在具有受控
温度(68°F-72°F)、光照(12小时光照-黑暗循环)和湿度(45-55％)的房间内将动物以4只一组圈养在垫有木屑的笼中。在实验期间动物自由饮水和取食。
[0309] 实施例8
[0310] 抑制激酶的化合物的鉴定
[0311] 评价了化合物10-2[如实施例3中所示]的抑制一些致癌激酶的能力。用化合物10-2处理细胞6小时，此后向生长培养基中添加EGF达15分钟。进行蛋白质印迹分析以测定EGFR、c-Met和Her2受体酪氨酸激酶的磷
酸化形式的水平。发现将细胞与本发明的化合物一起孵育阻断了EGFR、c-Met和Her2的活化(参见图1)。
[0312] 对化合物10-2[如实施例3中所示]进行测试以确定它是否导致酪氨酸激酶活性的总体抑制。在细胞中处理化合物10-2达6小时以检查其对酪氨酸磷酸化蛋白质水平的作用。在用1μM以上的10-2处理的细胞中观察到总酪氨酸磷酸化有微小的降低。然而，在用小于1μM 10-2处理的细胞中未观察到磷酸酪氨酸水平下降(参见图2)。这些数据提示：化合物10-2特异性地抑制EGFR、cMet、Her2和可能的其它激酶的活化，但是不会导致酪氨酸激酶活性总体下降。
[0313] 进行了激酶特性实验以测定化合物10-2对约200种激酶的激酶组的IC50。发现化合物10-2[如实施例3中所示]以4至30nM的IC50选择性地抑制PDGFRα，其选择性相对于PDGFRβ而言大约是1000倍。将化合物10-2的激酶组特性与此处用作对照酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的参比化合物的激酶组特性相比较。如从图3观察到的那样，化合物10-2具有清楚得多的激酶组特性，这提示化合物10-2与参比化合物相比具有改进的毒性特性。
[0314] 实施例9
[0315] 体外细胞死亡诱导
[0316] 采用集落形成测定(CFA)测试了化合物5[如实施例1中所示]、化合物3[如实施例1中所示]、化合物7-1[如实施例1中所示]、化合物10-2[如实施例3中所示]、化合物10-1[如实施例2中所示]和化合物13-1[如实施例4中所示]抑制细胞生长和促进细胞死亡的能力。使用指定化合物处理细胞达6或24小时，然后使其生长另外7-10天。然后将细胞染色，对集落进行计数以测定IC-50值。仅为了示例目的，表2显示了化合物5、化合物3、化合物7-1、化合物10-2、化合物10-1和化合物13-1的生物学结果。
[0317] 表2
[0318]
[0319] 类似地，针对宽范围的癌细胞系测试了化合物10-2[如实施例3中所示]。结果显示，化合物10-2具有对抗这些细胞的有效活性(表3)。
[0320] 表3
[0321]
[0322] 实施例10
[0323] 靶向于癌症干细胞的化合物10-2的鉴定
[0324] 将SW480细胞用Hoechst染色。分选出侧群(图4A所示，上部左侧组门控区域)以富集癌症干细胞。首先用ABC转运蛋白抑制剂维拉帕米处理SW480细胞的对照组，然后用Hoechst染色。如图4A的下部左侧的组中所示，维拉帕米处理导致侧群损失。SP代表了亲群的1.3％，通过培养7天，分选的SP细胞从98.5％减少至10.1％(图4A，上部右侧组)。这些数据证明了CSCs的确定特征，即不对称分裂和自我更新的能力。
[0325] 在集落形成测定中评价了化合物10-2对抗Hoechst侧群的IC50，并将其与对抗非侧群的IC50进行了比较。如图4B所示，侧群对化合物10-2的敏感性是非侧群的2倍。此外，侧群对多柔比星的耐药性比非侧群高。这些数据提示化合物10-2杀死了癌症干细胞。
[0326] 用化合物10-2处理Hoechst侧群细胞，通过膜联蛋白V(细胞凋亡的早期标志)染色获得了细胞死亡模式。如图4C所示，正在死亡的细胞是膜联蛋白V阳性的，证明化合物10-2对于癌症干细胞而言是细胞凋亡性的。
[0327] 癌症干细胞的标志之一是它们的自我更新能力。一种测定细胞群体的自我更新能力的可靠方法是在没有血清或附着存在下被培养为球的能力。为了测定化合物10-2对CSC自我更新的作用，采用CSC表面标记物CD44通过FACS从FaDu人头颈癌细胞中分离出了CSCs。在没有附着和血清的存在下将细胞培养5天以形成初步球。然后将初步球在Accumax中分离成单个细胞并且如上所述培养72小时，然后添加化合物10-2或对照酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。处理5天后，在添加台盼蓝之前和之后捕获代表性的球影像以鉴定死亡细胞(图5A)。通过对具有＞50个细胞的球的数目进行计数对球生长进行评分。将用DMSO处置的细胞的球生长设定为100％来计算％球生长(图5B)。结果显示：化合物10-2抑制CSC的自我更新，但对照品TKI不抑制CSC的自我更新。
[0328] 此外，我们还测试了化合物10-2是否能体内靶向于癌症干细胞。从Charles River实验室(威尔明顿，MA)获得6周龄雌性无胸腺nu/nu小鼠。给小鼠皮下腹侧注射在6 3
0.2mL不含血清的DMEM中的6×10 个FaDu癌细胞。在异种移植物的尺寸达到～200mm后，给载有FaDu异种移植物肿瘤的动物每日口服施用媒介物、卡铂(30mg/kg)或化合物
10-2(100mg/kg)达4天，然后处死。然后采集FaDu细胞的肿瘤。在处死动物和无菌取出肿
3
瘤后获得单细胞混悬液。简言之，用无菌解剖刀将肿瘤切碎成0.1mm 块，然后在恒定搅拌下在1mg/mL胶原酶/HBSS中消化15-30分钟。在通过40μm网目滤器后，通过使细胞混悬液在1mL Histopaque上分层和在以1440×g离心30分钟后采集界
面层取出RBCs、死亡细胞和细胞碎片。然后对活细胞计数并用于测定它们形成球的能力。将细胞以100个细胞/孔的
密度部分在超附着96孔培养板的癌症干细胞培养基(DMEM/F12、B27Neurobasal补充物，20ng/mL EGF，10ng/mL FGF，4μg/mL胰岛素和0.4％BSA)中。每3天加入新鲜培养基，
10-14天后测定培养基中的球形成。对具有＞50个细胞的球评分。在实验结束时，加入台盼蓝以鉴定死亡细胞。如图6所示，标准的化学治疗卡铂不靶向于癌症干细胞，这通过球生成未改变得以证实。相反，甚至是仅处理4天，化合物10-2就显著地减少了癌症干细胞，这通过球生成的减少得以证实。
[0329] 由于化合物10-2是激酶抑制剂，所以化合物10-2诱导细胞凋亡和抑制癌症干细胞自我更新的能力提示化合物10-2所抑制的激酶对于CSC而言是重要的(CSCPKs)。
[0330] 实施例11
[0331] 体内抗肿瘤效力
[0332] 在异种移植物小鼠模型中测试了化合物10-2[如实施例3中所示]的抗肿瘤活性。给具有已建立的皮下PC3人前列腺癌肿瘤的免疫抑制性雄性小鼠经腹膜内(ip.)给予化合物10-2(80mg/kg)或媒介物对照。小鼠接受总计三次处置(如图7中箭头所示)，分析平均肿瘤体积(MTV)。媒介物对照肿瘤生长得与先前用PC3模型进行的研究相当。如图7所示，用化合物10-2处置导致肿瘤生长被显著抑制，其肿瘤生长抑制(TGI)为62.5％(p＝0.02＜0.05)。
[0333] 类似地，在人肝癌HepG2异种移植物模型(图8)、人头颈癌FaDu异种移植物模型(图9)和人胃癌MKN45异种移植物模型(图10)中测试了化合物10-2[如实施例3中所示]的抗肿瘤活性。在这三种模型中每日口服施用100mg/kg的化合物10-2达如图所示的时间。我们的数据显示：化合物10-2在这两种异种移植物模型中也有效地抑制肿瘤生长。
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