用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物专利检索-治疗方案疗法专利检索查询-专利查询网

用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物

阅读：1021发布：2020-07-04

专利汇可以提供用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及用于在患有或怀疑患有肾损伤的受试者中进行监测、诊断、预后和确定治疗方案的方法和组合物。，下面是用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物专利的具体信息内容。

权利要求

1.肾损伤标记物金属蛋白酶组织抑制剂2或其与选自下述肾损伤标记物的组合在制备评估受治者的肾状态的药物中的用途：细胞质天冬氨酸氨基转移酶、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5、可溶性CD40配体、可溶性C-X-C模体趋化因子16、S100-A12、嗜酸细胞活化趋化因子、可溶性E-选择蛋白、纤连蛋白、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肝素结合生长因子2、可溶性肝细胞生长因子受体、白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β、白细胞介素-10、白细胞介素-15、白细胞介素-3、髓过氧化物酶、巢蛋白-1、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1、Pappalysin-1、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1、抗白细胞蛋白酶、可溶性Kit配体、金属蛋白酶组织抑制剂1、可溶性肿瘤坏死因子、可溶性血管细胞粘附分子1和血管内皮生长因子A，所述评估包括：
对配置为对获自所述受试者的体液样品检测所述肾损伤标记物以提供一种或一种以上分析结果；以及
将所述分析结果与所述受治者的肾状态相关联。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述关联步骤包括将所述分析结果与所述受治者的所述肾状态的风险分级、诊断、分期、预后、分类和监测中的一种或一种以上相关联。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述关联步骤包括基于所述分析结果将所述肾状态的一种或一种以上将来的变化的可能性分配给受试者。
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述肾状态的一种或一种以上将来的变化包括将来肾功能损伤、将来肾功能降低、将来肾功能改善和将来急性肾衰竭(ARF)中的一种或一种以上。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述分析结果包括下列(xxvi)或其与选自(i)至(xxv)和(xxvii)至(xxix)的分析结果的组合：
(i)测量的细胞质天冬氨酸氨基转移酶的浓度；
(ii)测量的可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5的浓度；
(iii)测量的可溶性CD40配体的浓度；
(iv)测量的可溶性C-X-C模体趋化因子16的浓度；
(v)测量的S100-A12的浓度；
(vi)测量的嗜酸细胞活化趋化因子的浓度；
(vii)测量的可溶性E-选择蛋白的浓度；
(viii)测量的纤连蛋白的浓度；
(ix)测量的粒细胞集落刺激因子的浓度；
(x)测量的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的浓度；
(xi)测量的肝素结合生长因子2的浓度；
(xii)测量的可溶性肝细胞生长因子受体的浓度；
(xiii)测量的白细胞介素-1受体拮抗剂的浓度；
(xiv)测量的白细胞介素-1β的浓度；
(xv)测量的白细胞介素-10的浓度；
(xvi)测量的白细胞介素-15的浓度；
(xvii)测量的白细胞介素-3的浓度；
(xviii)测量的髓过氧化物酶的浓度；
(xix)测量的巢蛋白-1的浓度；
(xx)测量的可溶性氧化低密度脂蛋白受体1的浓度；
(xxi)测量的Pappalysin-1的浓度；
(xxii)测量的可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1的浓度；
(xxiii)测量的抗白细胞蛋白酶的浓度；
(xxiv)测量的可溶性Kit配体的浓度；
(xxv)测量的金属蛋白酶组织抑制剂1的浓度；
(xxvi)测量的金属蛋白酶组织抑制剂2的浓度；
(xxvii)测量的可溶性肿瘤坏死因子的浓度；
(xxviii)测量的可溶性血管细胞粘附分子1的浓度；或
(xxix)测量的血管内皮生长因子A的浓度，
并且用于每个分析结果的所述关联步骤包括将所述测量的浓度与阈值浓度比较，以及对于正向标记物而言，相对于当所述测量的浓度低于所述阈值所分配的可能性，当所述测量的浓度高于所述阈值时，将将来患有肾功能损伤、将来肾功能降低、将来ARF或将来肾功能改善的可能性增加分配给所述受试者，或相对于所述测量的浓度高于所述阈值时的可能性，当所述测量的浓度低于所述阈值时，将将来患有肾功能损伤、将来肾功能降低、将来ARF或将来肾功能改善的可能性降低分配给所述受试者，或
对于负向标记物而言，相对于当所述测量的浓度高于所述阈值所分配的可能性，当所述测量的浓度低于所述阈值时，将将来患有肾功能损伤、将来肾功能降低、将来ARF或将来肾功能改善的可能性增加分配给所述受试者，或相对于当所述测量的浓度低于所述阈值所分配的可能性，当所述测量的浓度高于所述阈值时，将将来患有肾功能损伤、将来肾功能降低、将来ARF或将来肾功能改善的可能性降低分配给所述受试者。
6.根据权利要求3所述的用途，其中所述肾状态一种或一种以上将来的变化包括与患有肾损伤的所述受试者相关的临床结果。
7.根据权利要求1所述的用途，其中所述分析结果包括(xxvi)或其与选自(i)至(xxv)和(xxvii)至(xxix)的分析结果的组合：
(i)测量的细胞质天冬氨酸氨基转移酶的浓度；
(ii)测量的可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5的浓度；
(iii)测量的可溶性CD40配体的浓度；
(iv)测量的可溶性C-X-C模体趋化因子16的浓度；
(v)测量的S100-A12的浓度；
(vi)测量的嗜酸细胞活化趋化因子的浓度；
(vii)测量的可溶性E-选择蛋白的浓度；
(viii)测量的纤连蛋白的浓度；
(ix)测量的粒细胞集落刺激因子的浓度；
(x)测量的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的浓度；
(xi)测量的肝素结合生长因子2的浓度；
(xii)测量的可溶性肝细胞生长因子受体的浓度；
(xiii)测量的白细胞介素-1受体拮抗剂的浓度；
(xiv)测量的白细胞介素-1β的浓度；
(xv)测量的白细胞介素-10的浓度；
(xvi)测量的白细胞介素-15的浓度；
(xvii)测量的白细胞介素-3的浓度；
(xviii)测量的髓过氧化物酶的浓度；
(xix)测量的巢蛋白-1的浓度；
(xx)测量的可溶性氧化低密度脂蛋白受体1的浓度；
(xxi)测量的Pappalysin-1的浓度；
(xxii)测量的可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1的浓度；
(xxiii)测量的抗白细胞蛋白酶的浓度；
(xxiv)测量的可溶性Kit配体的浓度；
(xxv)测量的金属蛋白酶组织抑制剂1的浓度；
(xxvi)测量的金属蛋白酶组织抑制剂2的浓度；
(xxvii)测量的可溶性肿瘤坏死因子的浓度；
(xxviii)测量的可溶性血管细胞粘附分子1的浓度；或
(xxix)测量的血管内皮生长因子A的浓度，
并且用于每个分析结果的所述关联步骤包括将所述测量的浓度与阈值浓度比较，以及对于正向标记物而言，相对于当所述测量的浓度低于所述阈值所分配的可能性，当所述测量的浓度高于所述阈值时，将随后的急性肾损伤、AKI期恶化、死亡、需要肾替换治疗、需要除去肾毒素、晚期肾疾病、心脏衰竭、中风、心肌梗塞或慢性肾疾病的可能性增加分配给所述受试者，或相对于当所述测量的浓度高于所述阈值时的分配可能性，当所述测量的浓度低于所述阈值时，将随后的急性肾损伤、AKI期恶化、死亡、需要肾替换治疗、需要除去肾毒素、晚期肾疾病、心脏衰竭、中风、心肌梗塞或慢性肾疾病的可能性降低分配给所述受试者，或
对于负向标记物而言，相对于当所述测量的浓度高于所述阈值时的分配可能性，当所述测量的浓度低于所述阈值时，将随后的急性肾损伤、AKI期恶化、死亡、需要肾替换治疗、需要除去肾毒素、晚期肾疾病、心脏衰竭、中风、心肌梗塞或慢性肾疾病的可能性增加分配给所述受试者，或相对于当所述测量的浓度低于所述阈值时的分配可能性，当所述测量的浓度高于所述阈值时，将随后的急性肾损伤、AKI期恶化、死亡、需要肾替换治疗、需要除去肾毒素、晚期肾疾病、心脏衰竭、中风、心肌梗塞或慢性肾疾病的可能性降低分配给所述受试者。
8.根据权利要求3所述的用途，其中，所述肾状态一种或一种以上将来变化的可能性是目标事件或多或少地可能在从所述受试者获取所述体液样品30天内发生。
9.根据权利要求8所述的用途，其中，所述肾状态的一种或一种以上将来变化的可能性是目标事件或多或少地可能在选自下列的时间段内发生，所述时间段选自：21天、14天、
7天、5天、96小时、72小时、48小时、36小时、24小时和12小时。
10.根据权利要求1所述的用途，其中基于所述受试者预存在的一种或一种以上已知的肾前、肾内或肾后AFR的风险因素来选择用于评估肾状态的所述受试者。
11.根据权利要求1所述的用途，其中基于下列一种或一种以上疾病的现有诊断来选择用于评估肾状态的所述受试者，所述疾病为：充血性心力衰竭、先兆子痫、惊厥、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全、肾小球过滤低于正常范围、肝硬化、血清肌酸酐高于正常范围、败血病、肾功能损伤、肾功能降低或者ARF，或基于正在经历或已经历的重大血管手术、冠状动脉旁路或其他心血管手术来选择用于评估肾状态的所述受试者，或基于暴露于NSAID、环磷酰胺、他克莫司、氨基糖苷、膦甲酸、乙二醇、血红素、肌球素、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、射线不透过的造影剂或链脲霉素来选择用于评估肾状态的所述受试者。
12.根据权利要求1所述的用途，其中所述关联步骤包括基于所述分析结果将是否发生肾功能损伤、肾功能降低或ARF中的一种或一种以上的诊断分配给所述受试者。
13.根据权利要求12所述的用途，其中，所述分析结果包括(xxvi)或其与选自(i)至(xxv)和(xxvii)至(xxix)的分析结果的组合：
(i)测量的细胞质天冬氨酸氨基转移酶的浓度；
(ii)测量的可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5的浓度；
(iii)测量的可溶性CD40配体的浓度；
(iv)测量的可溶性C-X-C模体趋化因子16的浓度；
(v)测量的S100-A12的浓度；
(vi)测量的嗜酸细胞活化趋化因子的浓度；
(vii)测量的可溶性E-选择蛋白的浓度；
(viii)测量的纤连蛋白的浓度；
(ix)测量的粒细胞集落刺激因子的浓度；
(x)测量的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的浓度；
(xi)测量的肝素结合生长因子2的浓度；
(xii)测量的可溶性肝细胞生长因子受体的浓度；
(xiii)测量的白细胞介素-1受体拮抗剂的浓度；
(xiv)测量的白细胞介素-1β的浓度；
(xv)测量的白细胞介素-10的浓度；
(xvi)测量的白细胞介素-15的浓度；
(xvii)测量的白细胞介素-3的浓度；
(xviii)测量的髓过氧化物酶的浓度；
(xix)测量的巢蛋白-1的浓度；
(xx)测量的可溶性氧化低密度脂蛋白受体1的浓度；
(xxi)测量的Pappalysin-1的浓度；
(xxii)测量的可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1的浓度；
(xxiii)测量的抗白细胞蛋白酶的浓度；
(xxiv)测量的可溶性Kit配体的浓度；
(xxv)测量的金属蛋白酶组织抑制剂1的浓度；
(xxvi)测量的金属蛋白酶组织抑制剂2的浓度；
(xxvii)测量的可溶性肿瘤坏死因子的浓度；
(xxviii)测量的可溶性血管细胞粘附分子1的浓度；或
(xxix)测量的血管内皮生长因子A的浓度，
并且用于每个分析结果的所述关联步骤包括将所述测量的浓度与阈值浓度比较，以及对于正向标记物而言，当所述测量的浓度高于所述阈值时，将肾功能损伤、肾功能降低或ARF的发生分配给所述受试者，或当所述测量的浓度低于所述阈值时，将肾功能损伤、肾功能降低或ARF的不发生分配给所述受试者，或
对于负向标记物而言，当所述测量的浓度低于所述阈值时，将肾功能损伤、肾功能降低或ARF的发生分配给所述受试者，或当所述测量的浓度高于所述阈值时，将肾功能损伤、肾功能降低或ARF的不发生分配给所述受试者。
14.根据权利要求1所述的用途，其中所述关联步骤包括基于所述分析结果评价在患有肾功能损伤、肾功能降低或ARF的受试者中是否肾功能改善还是恶化。
15.根据权利要求14所述的用途，其中，所述分析结果包括(xxvi)或其与选自(i)至(xxv)和(xxvii)至(xxix)的分析结果的组合：
(i)测量的细胞质天冬氨酸氨基转移酶的浓度；
(ii)测量的可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5的浓度；
(iii)测量的可溶性CD40配体的浓度；
(iv)测量的可溶性C-X-C模体趋化因子16的浓度；
(v)测量的S100-A12的浓度；
(vi)测量的嗜酸细胞活化趋化因子的浓度；
(vii)测量的可溶性E-选择蛋白的浓度；
(viii)测量的纤连蛋白的浓度；
(ix)测量的粒细胞集落刺激因子的浓度；
(x)测量的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的浓度；
(xi)测量的肝素结合生长因子2的浓度；
(xii)测量的可溶性肝细胞生长因子受体的浓度；
(xiii)测量的白细胞介素-1受体拮抗剂的浓度；
(xiv)测量的白细胞介素-1β的浓度；
(xv)测量的白细胞介素-10的浓度；
(xvi)测量的白细胞介素-15的浓度；
(xvii)测量的白细胞介素-3的浓度；
(xviii)测量的髓过氧化物酶的浓度；
(xix)测量的巢蛋白-1的浓度；
(xx)测量的可溶性氧化低密度脂蛋白受体1的浓度；
(xxi)测量的Pappalysin-1的浓度；
(xxii)测量的可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1的浓度；
(xxiii)测量的抗白细胞蛋白酶的浓度；
(xxiv)测量的可溶性Kit配体的浓度；
(xxv)测量的金属蛋白酶组织抑制剂1的浓度；
(xxvi)测量的金属蛋白酶组织抑制剂2的浓度；
(xxvii)测量的可溶性肿瘤坏死因子的浓度；
(xxviii)测量的可溶性血管细胞粘附分子1的浓度；或
(xxix)测量的血管内皮生长因子A的浓度，
并且用于每个分析结果的所述关联步骤包括将所述测量的浓度与阈值浓度比较，以及对于正向标记物而言，当所述测量的浓度高于所述阈值时，将肾功能恶化分配给所述受试者，或当所述测量的浓度低于所述阈值时，将肾功能改善分配给所述受试者，或对于负向标记物而言，当所述测量的浓度低于所述阈值时，将肾功能恶化分配给所述受试者，或所述测量的浓度高于所述阈值时，将肾功能改善分配给所述受试者。
16.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中诊断是否发生肾功能损伤。
17.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中诊断是否发生肾功能降低。
18.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中诊断是否发生急性肾衰竭。
19.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中诊断是否发生需要肾替换治疗。
20.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中诊断是否发生需要肾移植。
21.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中分配是否发生将来肾功能损伤的风险。
22.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中分配是否发生将来肾功能降低的风险。
23.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中分配是否发生将来急性肾衰竭的风险。
24.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中分配是否发生将来需要肾替换治疗的风险。
25.根据权利要求1所述的用途，其中所述评估是在所述受试者中分配是否发生将来需要肾移植的风险。
26.根据权利要求5所述的用途，其中所述肾状态的一种或一种以上将来的变化包括在获得所述体液样品的72小时的时间内将来肾功能损伤、将来肾功能降低、将来肾功能改善和将来急性肾衰竭(ARF)中的一种或一种以上。
27.根据权利要求5所述的用途，其中所述肾状态的一种或一种以上将来的变化包括在获得所述体液样品的48小时的时间内将来肾功能损伤、将来肾功能降低、将来肾功能改善和将来急性肾衰竭(ARF)中的一种或一种以上。
28.根据权利要求5所述的用途，其中所述肾状态的一种或一种以上将来的变化包括在获得所述体液样品的72小时的时间内将来肾功能损伤、将来肾功能降低、将来肾功能改善和将来急性肾衰竭(ARF)中的一种或一种以上。
29.根据权利要求5所述的用途，其中所述肾状态的一种或一种以上将来的变化包括在获得所述体液样品的48小时的时间内将来肾功能损伤、将来肾功能降低、将来肾功能改善和将来急性肾衰竭(ARF)中的一种或一种以上。
30.根据权利要求5所述的用途，其中所述肾状态的一种或一种以上将来的变化包括在获得所述体液样品的24小时的时间内将来肾功能损伤、将来肾功能降低、将来肾功能改善和将来急性肾衰竭(ARF)中的一种或一种以上。
31.肾损伤标记物金属蛋白酶组织抑制剂2或其与选自下述肾损伤标记物的组合在制备用于评估肾损伤的药物中的用途：细胞质天冬氨酸氨基转移酶、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5、可溶性CD40配体、可溶性C-X-C模体趋化因子16、S100-A12、嗜酸细胞活化趋化因子、可溶性E-选择蛋白、纤连蛋白、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肝素结合生长因子2、可溶性肝细胞生长因子受体、白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β、白细胞介素-10、白细胞介素-15、白细胞介素-3、髓过氧化物酶、巢蛋白-1、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1、Pappalysin-1、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1、抗白细胞蛋白酶、可溶性Kit配体、金属蛋白酶组织抑制剂1、可溶性肿瘤坏死因子、可溶性血管细胞粘附分子1和血管内皮生长因子A。
32.肾损伤标记物金属蛋白酶组织抑制剂2或其与选自下述肾损伤标记物的组合在制备用于评估急性肾损伤的药物中的用途：细胞质天冬氨酸氨基转移酶、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5、可溶性CD40配体、可溶性C-X-C模体趋化因子16、S100-A12、嗜酸细胞活化趋化因子、可溶性E-选择蛋白、纤连蛋白、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肝素结合生长因子2、可溶性肝细胞生长因子受体、白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β、白细胞介素-10、白细胞介素-15、白细胞介素-3、髓过氧化物酶、巢蛋白-1、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1、Pappalysin-1、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1、抗白细胞蛋白酶、可溶性Kit配体、金属蛋白酶组织抑制剂1、可溶性肿瘤坏死因子、可溶性血管细胞粘附分子1和血管内皮生长因子A。
33.根据权利要求7所述的用途，其中分配给所述受试者的随后的急性肾损伤、AKI期恶化、死亡、需要肾替换治疗、需要除去肾毒素、晚期肾疾病、心脏衰竭、中风、心肌梗塞或慢性肾疾病的增加或降低的可能性是目标事件或多或少地可能在从所述受试者获取所述体液样品30天的时间内发生的可能性。
34.根据权利要求7所述的用途，其中分配给所述受试者的随后的急性肾损伤、AKI期恶化、死亡、需要肾替换治疗、需要除去肾毒素、晚期肾疾病、心脏衰竭、中风、心肌梗塞或慢性肾疾病的增加或降低的可能性是目标事件或多或少地可能在从所述受试者获取所述体液样品72小时的时间内发生的可能性。
35.根据权利要求7所述的用途，其中分配给所述受试者的随后的急性肾损伤、AKI期恶化、死亡、需要肾替换治疗、需要除去肾毒素、晚期肾疾病、心脏衰竭、中风、心肌梗塞或慢性肾疾病的增加或降低的可能性是目标事件或多或少地可能在从所述受试者获取所述体液样品24小时的时间内发生的可能性。

说明书全文

用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物

[0001] 本申请是申请号为200980149555.X，申请日为2009年10月21日，申请人为阿斯图特医药公司，发明名称为“用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物”的中国发明专利申请的分案申请。

[0002] 本发明要求2008年11月15日提交的美国临时专利申请61／115,044、2008年10月21日提交的美国临时专利申请61／107,290、2008年11月10日提交的美国临时专利申请61／113,102、2008年10月21日提交的美国临时专利申请61／107,301、2008年
11月15日提交的美国临时专利申请61／115,047、2008年11月15日提交的美国临时专利申请61／115,051、2008年11月10日提交的美国临时专利申请61／113,045、2008年
11月15日提交的美国临时专利申请61／115,057、2008年11月22日提交的美国临时专利申请61／117,167、2008年11月22日提交的美国临时专利申请61／117,157、2008年
11月22日提交的美国临时专利申请61／117,146、2008年10月21日提交的美国临时专利申请61／107,281、2008年11月14日提交的美国临时专利申请61／115,022、2008年
11月22日提交的美国临时专利申请61／117,154、2008年11月22日提交的美国临时专利申请61／117,152、2008年11月14日提交的美国临时专利申请61／115,019、2008年
11月14日提交的美国临时专利申请61／115,017、2008年11月10日提交的美国临时专利申请61／113,021、2008年11月10日提交的美国临时专利申请61／113,056、2008年
10月21日提交的美国临时专利中请61／107,297、2008年11月15日提交的美国临时专利申请61／115,045、2008年10月21日提交的美国临时专利申请61／107,304、2008年
11月10日提交的美国临时专利申请61／113,050、2008年11月15日提交的美国临时专利申请61／115,048、2008年11月10日提交的美国临时专利申请61／113,096、2008年
11月22日提交的美国临时专利申请61／117,140、2008年11月22日提交的美国临时专利申请61／117,172、2008年11月10日提交的美国临时专利申请61／113,083、和2008年11月22日提交的美国临时专利申请61／117,141的优先权，上述美国专利申请中的每一个的全部内容包括所有表格、附图和权利要求在此通过引用并入本文。

背景技术

[0003] 下文所讨论的本发明的背景技术仅仅为了帮助读者理解本发明，并不认为这是对本发明的现有技术的描述或这构成本发明的现有技术。

[0004] 肾脏负责从人体排出水和溶解物。肾脏的功能包括维持酸碱平衡、调节电解质浓度、控制血液体积以及调节血压。这样，由于损伤和／或疾病而引起的肾功能损失导致大量的发病率和致死率。肾损伤的详细讨论在Harrison’s Principles of Internal Medicine，th17 Ed.，McGraw Hill，New York，第1741-1830页中提供，其全部内容通过引用并入本文。
肾疾病和／或肾损伤可以是急性的或慢性的。急性和慢性肾疾病在下文中描述(Current th
Medical Diagnosis&Treatment2008，47 Ed，McGraw Hill，New York，第785-815页，其通过引用并入本文)：“急性肾衰竭是肾功能恶化持续几个小时至几天，导致血液中的含氮废物(例如尿素氮)和肌酸酐滞留。这些滞留的物质被称为氮血。慢性肾衰竭(慢性肾疾病)由持续几个月至几年的不正常的肾功能损失而引起”。

[0005] 急性肾衰竭(ARF，也称为急性肾损伤，或AKI)是肾小球过滤突然(典型地在约48小时至1周内检测)降低。这种过滤能力的损失导致由肾正常排泄的含氮(尿素和肌酸酐)废物和非含氮废物产品滞留，尿输出减少或它们两者。报道了ARF并发了约5％的入院率，4-15％的心肺旁路手术以及高达30％的重症监护入院率。ARF可被以因果关系来分为肾前、肾内或肾后。肾内疾病可被进一步分为肾小球异常、管状异常、间隙异常和血管异常。th
ARF的主要病因在下表中描述，其从Merck Manual，17 ed.，第222章中得到并通过引用全部并入本文。

[0006]

[0007]

[0008] 在缺血性ARF的情况下，疾病的病因可以分为四个阶段。持续几个小时至几天的起始阶段过程中，肾脏灌注降低演变为损伤。肾小球超滤降低，由于肾小管中的残片过滤流体减少，并且发生了通过损伤的上皮的滤液回渗。肾损伤可在这个阶段通过肾脏的再灌注来介导。起始阶段随后是以连续的缺血性损伤和炎症为特征的延伸阶段，并且起始阶段可涉及内皮损伤和血管充血。在持续1周至2周的维持阶段过程中，发生肾细胞损伤，并且肾小球过滤和尿输出量达到最小。随后可以是恢复阶段，其中肾上皮细胞被修复并且GFR逐渐恢复。虽然这样，但是患有ARF的受试者的存活率只有约60％。

[0009] 由放射性造影剂(也称为对比剂)引起的急性肾损伤和其他诸如环孢霉素、包括氨基糖苷在内的抗生素和诸如顺铂之类的抗癌药物之类的肾毒素引起的急性肾损伤显示出持续几天至约一周的时间。由造影剂引起的肾病(CIN，由放射性造影剂引起的AKI)被认为是由肾内血管收缩引起的并且由于产生直接对肾小管上皮细胞有毒的反应性氧类物质而引起。CIN典型地表现为急性(24-48小时内发作)但是在血液尿素氮和血清肌酸酐中可逆的(峰值为3至5天，一周内分解)上升。

[0010] 通常报道的用于确定和检测AKI的标准是血清肌酸酐的突然(典型地在约2-7天内或在住院治疗过程中)提高。虽然使用血清肌酸酐的提高来确定和检测AKI是已确定的方法，但是血清肌酸酐提高的程度和确定AKI的测量时间在公开出版物中显著不同。传统地，相对于2mg／dL值，血清肌酸酐相对大的增加(例如100％，200％，至少100％)用于确定AKI。然而，最近的趋势已倾向于使用较小的血清肌酸酐提高值来确定AKI。血清肌酸酐、AKI和相关健康风险之间的关系在Praught and Shlipak，Curr Opin Nephrol Hypertens14：265-270，2005和Chertow et al，J AmSoc Nephrol16：3365-3370，2005中综述，其全部内容通过引用并入本文。正如在这些公开出版物中所描述的，已知急性肾功能恶化(AKI)以及增加的死亡和其他不利结果的风险和血清肌酸酐的非常小的增加有关。这些增加可以相对(百分比)值或标称值来确定。已报道血清肌酸酐的相对增加相对于损伤前的值只有20％那么小说明了急性肾功能恶化(AKI)以及增加的健康风险，但是更通常的确定AKI和增加的健康风险的值为相对提高至少25％。已报道标称增加值只有0.3mg／dL，
0.2mg／dL或甚至0.1mg／dL这么小就显示出肾功能恶化和死亡风险增加。血清肌酸酐上升至这些阈值的不同时间段已用于确定AKI，例如，2天、3天、7天或可变的时间段定义为患者入院或在加强护理部的时间。这些研究表明没有肾功能恶化或AKI的具体的血清肌酸酐上升阈值(或上升时间段)，而是风险连续增加伴随血清肌酸酐的上升程度的增加。

[0011] 一项研究(Lassnigg et all，J Am Soc Nephrol15：1597-1605，2004，通过引用并入本文)研究了血清肌酸酐的增加和减少。心脏手术之后血清肌酸酐轻度下降-0.1至-0.3mg／dL的患者具有最低的死亡率。血清肌酸酐较大下降(大于或等于-0.4mg／dL)或血清肌酸酐有任何增加的患者具有较大的死亡率。这些发现使得作者总结出肾功能中甚至非常微小的变化(通过手术48小时内检测小肌酸酐变化)严重影响患者的结果。为了在使用血清肌酸酐来确定临床实验和临床实践中的AKI方面达成统一的分类体系而作出了努力，Bellomo et a1.，Crit Care.8(4)：R204-12，2004，通过引用并入本文，提出了下面的分类来对AKI患者进行分类：

[0012] “危险”：血清肌酸酐相对于基线增加了1.5倍，或尿量小于0.5ml／kg体重／小时持续六个小时；

[0013] “损伤”：血清肌酸酐相对于基线增加了2倍，或尿量小于0.5ml／kg／小时持续12个小时；

[0014] “衰竭”：血清肌酸酐相对于基线增加了3倍，或肌酸酐＞355μmol／l(并且增加大于44)或尿输出量低于0.3ml／kg／hr持续24小时或无尿持续至少12小时；

[0015] 并且包括两个临床结果

[0016] “损失”：持续需要肾替换治疗持续大于四周。

[0017] “ESRD”：肾疾病的晚期-需要透析持续大于3个月。

[0018] 这些标准成为RIFLE标准，其提供了有用的临床工具来对肾脏情况进行分类。如在 Kellum，Crit.Care Med.36：S141-45，2008 和 Ricci et al.，Kidney Int.73,538-546,2008(每一个通过引用并入本文)中所讨论的，RIFLE标准提供了AKI的统一定义，其在各种研究中已经是有效的。

[0019] 最近，Mehta et al.，Crit.Care11：R31(doi：10.1186.cc5713)，2007(通过引用并入本文)提出了下列类似的分类来对AKI患者进行分类，其已对RIFLE进行了改良：

[0020] “I期”：血清肌酸酐增加大于或等于0.3mg／dL(≥26.4μmol／L)或相对于基线增加了大于或等于150％(1.5倍)或尿输出量小于0.5mL／kg／小时持续大于6小时；

[0021] “II期”：血清肌酸酐相对于基线增加大于200％(2倍)或尿输出量小于0.5mL／kg／小时持续大于12小时；

[0022] “III期”：血清肌酸酐相对于基线增加大于300％(3倍)或血清肌酸酐≥354μmol／L伴随急性增加至少44μmol／L或尿输出量小于0.3mL／kg／小时持续24小时或无尿持续12小时。

[0023] CIN共同工作小组(McCollough等人，Rev Cardiovasc Med.2006；7(4)：177-197，通过引用并入本文)使用血清肌酸酐提高了25％来确定造影剂诱导的肾病(AKI的一种)。虽然，不同的小组提出了略微不同的标准用于血清肌酸酐以检测AKI，但是共同的是血清肌酸酐的小的变化(例如0.3mg／dL或25％)足以检测AKI(肾功能恶化)，并且血清肌酸酐的变化程度是AKI严重性和死亡风险的指标，

[0024] 虽然，对血清肌酸酐的持续几天的连续测量是检测和诊断AKI的可接受的方法并且被认为是评估AKI患者的最重要的工具之一，但是，一般认为血清肌酸酐在诊断、评价和监测AKI患者中具有若干限制。血清肌酸酐上升至认为诊断AKI的值(上升了0.3mg／dL或25％)的时间段可以为48小时或更长的时间，取决于所使用的定义。因为AKI中细胞损伤可发生持续几个小时的时间段，在48小时或更长时间检测血清肌酸酐的上升可以是损伤的较晚指标并且因此，对于血清肌酸酐的依赖可延迟对AKI的诊断。而且，血清肌酸酐不是确切的肾脏状态的好的指标，并且当肾功能正在快速变化时治疗需要AKI的最严重阶段过程的指标。患有AKI的一些患者会完全恢复，一些会需要透析(短期或长期)并且一些会具有其他不利的结果，包括死亡、主要不良心脏事件和慢性肾疾病。因为血清肌酸酐是过滤速度的标记物，所以无法区分AKI(前肾、肾内、后肾阻塞、动脉粥样硬化栓塞等)的病因或肾内疾病的种类或位置(例如，肾小管、肾小球或肾间隙)。类似地，限定了尿输出量，已知的这些事对于管理和治疗患有AKI的患者至关重要。

[0025] 这些限制强调了对检测和评估AKI的更好的方法的需要，尤其是在早期和亚临床阶段，以及在可发生肾脏的恢复和修复的后期。而且，需要更好的来识别患有AKI的处于风险中的患者。

[0026] 发明概述

[0027] 本发明的目的是提供用于评估受试者体内的肾功能的方法和组合物。如本文所述，一种或一种以上标记物的测量可用于诊断、预后、风险分级、分期、监测、分类以及确定受试者的进一步诊断和治疗方案，所述标记物选自：细胞质天冬氨酸氨基转移酶、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5、可溶性CD40配体、可溶性C-X-C模体趋化因子16、S100-A12、嗜酸细胞活化趋化因子、可溶性E-选择蛋白、纤连蛋白、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肝素结合生长因子2、可溶性肝细胞生长因子受体、白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β、白细胞介素-10、白细胞介素-15、白细胞介素-3、髓过氧化物酶、巢蛋白-1、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1、Pappalysin-1、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1、抗白细胞蛋白酶、可溶性Kit配体、金属蛋白酶组织抑制剂1、金属蛋白酶组织抑制剂2、可溶性肿瘤坏死因子、可溶性血管细胞粘附分子1和血管内皮生长因子A(本文统称为“肾损伤标记物”并且单独地称为“肾损伤标记物”)，所述受试者患有肾功能损伤、肾功能降低和／或急性肾衰竭(也称为急性肾损伤)。

[0028] 这些肾损伤标记物可单独或联合使用，包括多种肾损伤标记物，用于风险分级(即，识别处于风险中的受试者的肾功能将会有的损伤、肾功能的逐渐降低、将会发展为ARF、肾功能将会有的改善，等)、诊断存在的疾病(即，识别患有肾功能损伤的受试者、识别肾功能逐渐降低的受试者、发展为ARF的受试者，等)、用于监测肾功能的恶化或改善、用于预测将会有的医疗结果，例如肾功能改善或恶化、死亡风险降低或增加、受试者需要肾替代治疗的风险降低或增加(即，血液透析、腹膜透析、血过滤和／或肾移植)、受试者从肾功能损伤中恢复的风险的降低或增加、受试者从ARF中恢复的风险的降低或增加、受试者发展为晚期肾疾病的风险的降低或增加、受试者发展为慢性肾衰竭的风险的降低或增加、受试者患上排异所移植的肾的风险的降低或增加，等等。

[0029] 在第一方面，本发明涉及用于评估受试者体内的肾的状态的方法。这些方法包括进行配置为检测从受试者获得的体液样品中的本发明的一种或一种以上肾损伤标记物的分析方法。然后，将检测结果，例如一种或一种以上标记物的测量的浓度与受试者的肾的状态相关联，其中所述一种或一种以上标记物选自：细胞质天冬氨酸氨基转移酶、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5、可溶性CD40配体、可溶性C-X-C模体趋化因子16、S100-A12、嗜酸细胞活化趋化因子、可溶性E-选择蛋白、纤连蛋白、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肝素结合生长因子2、可溶性肝细胞生长因子受体、白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β、白细胞介素-10、白细胞介素-15、白细胞介素-3、髓过氧化物酶、巢蛋白-1、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1、Pappalysin-1、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1、抗白细胞蛋白酶、可溶性Kit配体、金属蛋白酶组织抑制剂1、金属蛋白酶组织抑制剂2、可溶性肿瘤坏死因子、可溶性血管细胞粘附分子1和血管内皮生长因子A。这种与肾状态的关系可包括使分析结果与本文所述的受试者的一种或一种以上风险分级、诊断、预后、分级、分类和监测相关联。因此，本发明使用本发明的一种或一种以上肾损伤标记物来评估肾损伤。

[0030] 在一些实施方式中，本文所述的评估肾状态的方法是受试者的风险分级方法，即，将可能有的一种或一种以上将来的肾状态变化分配给受试者。在一些实施方式中，所述分析结果与这些将来的变化相关。下面是优选的风险分级实施方式。

[0031] 在优选的风险分级实施方式中，这些方法包括确定受试者将来肾功能损伤的风险，以及将分析结果与可能的该肾功能损伤相关联。例如，每个测量的浓度可与阈值比较。对于“正向”肾损伤标记物而言，相对于对应测量的浓度小于阈值的可能性，将会患上肾功能损伤的可能性的增加对应于测量的浓度大于阈值的受试者。对于“负向”肾损伤标记物而言，相对于对应测量的浓度大于阈值的可能性，将会患上肾功能损伤的可能性的增加对应于测量的浓度小于阈值的患者。

[0032] 在其他优选的风险分级实施方式中，这些方法包括确定受试者将来肾功能降低的风险，以及将分析结构与这些肾功能降低的可能性相关联。例如，每个测量的浓度可与阈值相比较。对于“正向”肾损伤标记物而言，相对于对应测量的浓度低于阈值的可能性，将来患上肾功能降低的可能性的增加对应于测量的浓度高于阈值的受试者。对于“负向”肾损伤标记物而言，相对于对应测量的浓度低于阈值的可能性，将来肾功能降低的可能性的增加对应于测量的浓度低于阈值的受试者。

[0033] 在其他优选的风险分级实施方式中，这些方法包括确定受试者将来肾功能改善的可能性，以及将分析结果与该肾功能改善的可能性相关联。例如，每个测量的浓度可与阈值相比较。对于“正向”肾损伤标记物而言，相对于对应测量的浓度高于阈值的可能性，将来肾功能改善的可能性的增加对应于测量的浓度低于阈值的受试者。对于“负向”肾损伤标记物而言，相对于对应测量的浓度低于阈值的可能性，将来肾功能改善的可能性的增加对应于测量的浓度高于阈值的受试者。

[0034] 在其他优选的风险分级实施方式中，这些方法包括确定受试者发展为ARF的风险，以及将结果与发展为ARF的可能性相关联。例如，每个测试浓度可与阈值相比较。对于“正向”肾损伤标记物而言，相对于对应测量的浓度低于阈值的可能性，发展为ARF的可能性的增加对应于测量的浓度高于阈值的受试者。对于“负向”肾损伤标记物而言，相对于对应测量的浓度高于阈值的可能性，发展为ARF的可能性的增加对应于测量的浓度低于阈值的受试者。

[0035] 在其他优选的风险分级实施方式中，这些方法包括确定受试者的结果风险，以及将分析结果与受试者所患有的肾损伤有关的临床结果的发生可能性相关联。例如，每个测量的浓度可与阈值相比较。对于“正向”肾损伤标记物而言，下列一种或一种以上结果的可能性的增加对应于测量的浓度高于阈值的受试者，相对于分配的测量的浓度低于阈值的可能性，所述结果为：急性肾损伤、发展为AKI期恶化、死亡、需要肾替换治疗、需要除去肾毒素、肾疾病晚期、心脏衰竭、中风、心肌梗塞、发展为慢性肾疾病，等。对于“负向”肾损伤标记物而言，下列一种或一种以上结果的可能性的增加对应于测量的浓度低于阈值的受试者，相对于分配的测量的浓度高于阈值的可能性，所述结果为：急性肾损伤、发展为AKI期恶化、死亡、需要肾替换治疗、需要除去肾毒素、肾疾病晚期、心脏衰竭、中风、心肌梗塞、发展为慢性肾疾病，等。

[0036] 在这些风险分级实施方式中，优选地，所对应的可能性或风险是从受试者获得体液样品180天的时间内发生的或多或少目标事件。在特别优选的实施方式中，所对于的可能性或风险与在较短的时间段内发生的目标事件有关，所述较短的时间段例如，18个月，120天，90天，60天，45天，30天，21天，14天，7天，5天，96小时，72小时，48小时，36小时，
24小时，12小时或更少。在从受试者获得体液样品0小时的风险相当于现状的诊断。

[0037] 在优选的风险分级实施方式中，基于预存在于受试者体内的一种或一种以上已知的肾前、肾内或肾后的风险因素，为风险分级来选择受试者。例如，正经历或已经历重大血管手术、冠状动脉搭桥术或其他心脏手术的受试者，患有先天充血性心力衰竭、先兆子痫、惊厥、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾机能不全、肾小球过滤低于正常范围、肝硬化、血清肌酸酐高于正常范围或败血症的受试者或暴露于NSAID、环孢菌素、他克莫司、氨基糖苷、膦甲酸、乙二醇、血红素、肌球素、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、射线不透过的造影剂或链脲霉素的受试者均是优选的受试者用于根据本文所述的方法监测风险。这个列表不意味着限定本发明。本文中，“预先存在”意思是在从受试者获得体液样品时风险因素就存在。在特别优选的实施方式中，基于对肾功能损伤、肾功能降低或ARF的已有的诊断，为风险分级来选择受试者。

[0038] 在其他实施方式中，本文所述的用于评估肾状态的方法是用于诊断受试者中的肾损伤的方法；即，评价受试者是否患有肾功能损伤，肾功能降低或ARF。在这些实施方式中，将评价结果例如一种或一种以上标记物的测量的浓度与是否发生肾状态变化相关联，所述一种或一种以上标记物选自：细胞质天冬氨酸氨基转移酶、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5、可溶性CD40配体、可溶性C-X-C模体趋化因子16、S100-A12、嗜酸细胞活化趋化因子、可溶性E-选择蛋白、纤连蛋白、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肝素结合生长因子2、可溶性肝细胞生长因子受体、白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β、白细胞介素-10、白细胞介素-15、白细胞介素-3、髓过氧化物酶、巢蛋白-1、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1、Pappalysin-1、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1、抗白细胞蛋白酶、可溶性Kit配体、金属蛋白酶组织抑制剂1、金属蛋白酶组织抑制剂2、可溶性肿瘤坏死因子、可溶性血管细胞粘附分子1和血管内皮生长因子A。下面是优选的诊断实施方式。

[0039] 在优选的诊断实施方式中，这些方法包括诊断是否发生肾功能损伤，以及将分析结果与是否发生这样的损伤相关联。例如，每个测量的浓度与阈值相比较。对于正向标记物而言，发生肾功能损伤的可能性的增加对应于测量的浓度大于阈值的受试者(相对于对应测量的浓度低于阈值的可能性)；可选地，不发生肾功能损伤的可能性的增加可对应于测量的浓度测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度大于阈值时的可能性)。对于负向标记物而言，发生肾功能损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应测量的浓度高于阈值时的可能性)；可选地，不发生肾功能损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度高于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度低于阈值时的可能性)。

[0040] 在其他优选的诊断实施方式中，这些方法包括诊断是否发生肾功能降低，以及将分析结果与是否发生引起肾功能降低的损伤相关联。例如，每个测量的浓度可与阈值相比较。对于正向标记物而言，发生引起肾功能降低的损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度大于阈值时的受试者(相对于对应测量的浓度低于阈值时的可能性)；可选地，不发生引起肾功能降低的损伤的可能性的增加可对应于当测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应测量的浓度高于阈值时的可能性)。对于负向标记物而言，发生引起肾功能降低的损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度高于阈值时的可能性)；可选地，不发生引起肾功能降低的损伤的可能性的增加可对应于当测量的浓度高于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度低于阈值时的可能性)。

[0041] 在其他优选的诊断实施方式中，这些方法包括诊断是否发生ARF以及将分析结果与是否发生引起ARF的损伤相关联。例如，每个测量的浓度可与阈值相比较。对于正向标记物而言，发生引起ARF的损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度大于阈值时的受试者(相对于对应测量的浓度低于阈值时的可能性)；可选地，不发生引起ARF的损伤的可能性的增加可对应于当测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应测量的浓度高于阈值时的可能性)。对于负向标记物而言，发生引起ARF的损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度高于阈值时的可能性)；可选地，不发生引起ARF的损伤的可能性的增加可对应于当测量的浓度高于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度低于阈值时的可能性)。

[0042] 在其他优选的诊断实施方式中，这些方法包括诊断受试者为需要肾替代治疗，以及将分析结果与需要肾替代治疗相关联。例如，每个测量的浓度与阈值相比较。对于正向标记物而言，发生产生需要肾替代治疗的损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度大于阈值时的受试者(相对于对应测量的浓度低于阈值时的可能性)；可选地，不发生产生需要肾替代治疗的损伤的可能性的增加可对应于当测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应测量的浓度高于阈值时的可能性)。对于负向标记物而言，发生产生需要肾替代治疗的损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度高于阈值时的可能性)；可选地，不发生产生需要肾替代治疗的损伤的可能性的增加可对应于当测量的浓度高于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度低于阈值时的可能性)。

[0043] 在其他优选的诊断实施方式中，这些方法包括诊断受试者为需要肾移植，以及将分析结果与需要肾移植相关联。例如，每个测量的浓度与阈值相比较。对于正向标记物而言，发生产生需要肾移植的损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度大于阈值时的受试者(相对于对应测量的浓度低于阈值时的可能性)；可选地，不发生产生需要肾移植的损伤的可能性的增加可对应于当测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应测量的浓度高于阈值时的可能性)。对于负向标记物而言，发生产生需要肾移植的损伤的可能性的增加对应于当测量的浓度低于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度高于阈值时的可能性)；可选地，不发生产生需要肾移植的损伤的可能性的增加可对应于当测量的浓度高于阈值时的受试者(相对于对应当测量的浓度低于阈值时的可能性)。

[0044] 在其他实施方式中，本文所述的用于评估肾状态的方法是用于监测受试者体内的肾损伤的方法，即，评估受试者的肾功能是否改善或恶化，所述受试者患有肾功能损伤、肾功能降低或ARF。在这些实施方式中，分析结果，例如一种或一种以上的标记物的测量的浓度与是否发生肾状态的变化相关联，所述一种或一种以上标记物选自：细胞质天冬氨酸氨基转移酶、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5、可溶性CD40配体、可溶性C-X-C模体趋化因子16、S100-A12、嗜酸细胞活化趋化因子、可溶性E-选择蛋白、纤连蛋白、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肝素结合生长因子2、可溶性肝细胞生长因子受体、白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β、白细胞介素-10、白细胞介素-15、白细胞介素-3、髓过氧化物酶、巢蛋白-1、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1、Pappalysin-1、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1、抗白细胞蛋白酶、可溶性Kit配体、金属蛋白酶组织抑制剂1、金属蛋白酶组织抑制剂2、可溶性肿瘤坏死因子、可溶性血管细胞粘附分子1和血管内皮生长因子A。下面是优选的监测实施方式。

[0045] 在优选的监测实施方式中，这些方法包括监测患有肾功能损伤的受试者的肾状态，以及将分析结果与受试者肾状态是否发生变化相关联。例如，测量的浓度与阈值相比较。对于正向标记物而言，当测量的浓度高于阈值时，肾功能恶化可对应于受试者；可选地，当测量的浓度低于阈值时，肾功能改善可对应于受试者。对于负向标记物而言，当测量的浓度低于阈值时，肾功能恶化可对应于受试者；可选地，当测量的浓度高于阈值时，肾功能改善可对应于受试者。

[0046] 在其他优选的监测实施方式中，这些方法包括监测患有肾功能降低的受试者的肾状态，以及将分析结果与受试者肾状态是否发生变化相关联。例如，测量的浓度与阈值相比较。对于正向标记物而言，当测量的浓度高于阈值时，肾功能恶化可对应于受试者；可选地，当测量的浓度低于阈值时，肾功能改善可对应于受试者。对于负向标记物而言，当测量的浓度低于阈值时，肾功能恶化可对应于受试者；可选地，当测量的浓度高于阈值时，肾功能改善可对应于受试者。

[0047] 在其他优选的监测实施方式中，这些方法包括监测患有急性肾衰竭的受试者的肾状态，以及将分析结果与受试者的肾状态是否发生变化相关联。例如，测量的浓度与阈值相比较。对于正向标记物而言，当测量的浓度高于阈值时，肾功能恶化可对应于受试者；可选地，当测量的浓度低于阈值时，肾功能改善可对应于受试者。对于负向标记物而言，当测量的浓度低于阈值时，肾功能恶化可对应于受试者；可选地，当测量的浓度高于阈值时，肾功能改善可对应于受试者。

[0048] 在其他优选的监测实施方式中，这些方法包括监测处于肾功能损伤的风险中的受试者的肾状态以及将分析结果与受试者的肾状态是否发生变化相关联，所述肾功能损伤由肾前、肾内或肾后ARF预先存在一种或一种以上已知的风险因素而引起。例如，测量的浓度与阈值相比较。对于正向标记物而言，当测量的浓度高于阈值时，肾功能恶化可对应于受试者；可选地，当测量的浓度低于阈值时，肾功能改善可对应于受试者。对于负向标记物而言，当测量的浓度低于阈值时，肾功能恶化可对应于受试者；可选地，当测量的浓度高于阈值时，肾功能改善可对应于受试者。

[0049] 在其他实施方式中，本文所述的评估肾状态的方法是用于将受试者的肾损伤分类的方法；即，确定受试者的肾损伤是否为肾前、肾内或肾后；和／或进一步将这些类别再分为亚类，例如急性肾小管损伤、急性肾小球肾炎、急性肾小管间质性肾炎、急性血管性肾病或渗透性疾病；和／或将可能性对应于将发展为特殊RIFLE阶段的受试者。在这些实施方式中，分析结果，例如一种或一种以上标记物的分析结果与特定类别和／或亚类相关联，所述一种或一种以上标记物选自：细胞质天冬氨酸氨基转移酶、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5、可溶性CD40配体、可溶性C-X-C模体趋化因子16、S100-A12、嗜酸细胞活化趋化因子、可溶性E-选择蛋白、纤连蛋白、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肝素结合生长因子2、可溶性肝细胞生长因子受体、白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β、白细胞介素-10、白细胞介素-15、白细胞介素-3、髓过氧化物酶、巢蛋白-1、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1、Pappalysin-1、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1、抗白细胞蛋白酶、可溶性Kit配体、金属蛋白酶组织抑制剂1、金属蛋白酶组织抑制剂2、可溶性肿瘤坏死因子、可溶性血管细胞粘附分子1和血管内皮生长因子A。下面是优选的分类实施方式。

[0050] 在优选的分类实施方式中，这些方法包括确定受试者的肾损伤是否为肾前、肾内或肾后；和／或进一步将这些分类在分为亚类，例如急性肾小管损伤、急性肾小球肾炎、急性肾小管间质性肾炎、急性血管性肾病或渗透性疾病；和／或将可能性对应于将发展为特殊RIFLE阶段的受试者，以及将分析结果与受试者的损伤分类相关联。例如，测量的浓度与阈值相比较，以及当测量的浓度高于阈值时，对应于特定类别；可选地，当测量的浓度低于阈值时，可将不同的类别对应于受试者。

[0051] 本领域技术人员可使用各种方法以达到期望的阈值用于这些方法。例如，所述阈th th th th值可以通过选择代表在正常受试者中测量的肾损伤标记物的百分数的75 ，85 ，90 ，95th
或99 的浓度从一群正常受试者来确定。可选地，所述阈值可从“患病”群受试者来确定，例如，那些患有损伤或具有易于患有损伤(例如，发展为ARF或一些其他临床结果，如死亡、透析、肾移植，等)的受试者，通过选择代表在患病受试者中测量的肾损伤标记物的百分数th th th th th
的75 ，85 ，90 ，95 或99 的浓度来确定。在另一可选的实施方式中，所述阈值可从相同受试者的先前测量的肾损伤标记物来确定；即，受试者中的肾损伤标记物水平的暂时变化可用于将风险对应于受试者。

[0052] 前面所讨论的不意在暗示，然而，本发明的肾损伤标记物必须与对应的单独的阈值相比较。用于合并分析结果的方法可包括使用多变量log回归、log线性模拟、神经网络分析、n-of-m分析、分层决策分析、计算标记物的比例，等。该列表不意在限制。在这些方法中，由合并单独的标记物所确定的组合物结果可被处理，只要它自身是标记物；即，可确定如本文所述的组合物结果的阈值用于单独的标记物，以及将单独的患者的组合物结果与该阈值相比较。

[0053] 区分两个群体的特定测试的能力可使用ROC分析来建立。例如，从“第一”亚群建立的ROC曲线和“第二”亚群可用于评估ROC曲线，所述“第一”亚群被预置于肾状态中的一种或一种以上将来的变化，所述“第二”亚群不被这样预置，并且曲线下的面积提供了测量测试质量。优选地，本文所述的测试提供ROC曲线面积大于0.5，优选地至少0.6，更优选地0.7，还更优选地至少0.8，甚至更优选地至少0.9，以及最优选地至少0.95。

[0054] 在一些方面，一种或一种以上肾损伤标记物的测量的浓度或这些标记物的组合物可被处理为连续变量。例如，任何特定浓度可转化为受试者将来肾功能降低、发生肾损伤、分类的相应的可能性，在另一可选的实施方式中，阈值可提供可接受的特异性和灵敏度水平，将受试者群分为“箱”，例如“第一”亚群(例如，预置于一种或一种以上将来肾功能的变化、发生损伤、分类等等)和未预置的“第二”亚群。选择阈值以将第一和第二群分离，通过一种或一种以上下列测试精确度的测量：

[0055] 奇数比大于1，优选地至少约2或更大或约5或更小，更优选地至少约3或更大或约0.33或更小，还更优选地至少约4或更大或约0.25或更小，甚至更优选地至少约5或更大或约0.2或更小，以及最优选地至少约10或更大或约0.1或更小；

[0056] 特异性大于0.5，优选地至少约0.6，更优选地至少约0.7，还更优选地至少约0.8，甚至更优选地至少约0.9，以及最优选地至少约0.95，伴随相应的灵敏度大于0.2，优选地大于约0.3，更优选地大于约0.4，还更优选地至少约0.5，甚至更优选地约0.6，还更优选地大于约0.7，还更优选地大于约0.8，更优选地大于约0.9以及最优选地大于约0.95；

[0057] 灵敏度大于0.5，优选地至少约0.6，更优选地至少约0.7，还更优选地至少约0.8，甚至更优选地至少约0.9以及最优选地约0.95，伴随相应的特异性大于0.2，优选地大于约0.3，更优选地大于约0.4，还更优选地至少约0.5，甚至更优选地约0.6，还更优选地大于约
0.7，还更优选地大于约0.8，更优选地大于约0.9，以及最优选地大于约0.95；

[0058] 至少约75％灵敏度，结合至少约75％的特异性；

[0059] 正向可能性比例(估算为灵敏度／(1-特异性))大于1，至少约2，更优选地至少约3，还更优选地至少约5，以及最优选地至少约10；或

[0060] 负向可能性比例(估算为(1-灵敏度)／特异性)小于1，小于或等于约0.5，更优选地小于或等于约0.3，以及最优选地小于或等于约0.1。

[0061] 本文上述任何测量的术语“约”是指给定测量的+／-5％。

[0062] 多个阈值可用于评价受试者的肾状态。例如，被预置于一种或一种以上肾状态将来变化、发生损伤、分类等的“第一”亚群和未预置的“第二”亚群可合并为一个单独的组。然后，将该组在分为三个或更多等分(称为三分位数、四分位数、五分位数等，基于再分的次数)。奇数比例对应于基于落入再分类的受试者。如果一个被认为分为三份，最低或最高三分位数可用作参比用于比较其他再分类。该参比再分类对应于奇数比例1.第二三分位数对应于与第一三分位数相关的奇数比例。即，与第一三分位数中的一些比较，第二三分位数中的一些可以是3倍可能患上一种或一种肾状态将来的变化。第三三分位数也对应于与第一三分位数相关的奇数比例。

[0063] 在一些实施方式中，分析方法是免疫分析。用于这些分析的抗体将特异性结合相关的全长肾损伤标记物，并且也可结合与其“相关”的一种或一种以上多肽，下文对术语进行定义。本领域技术人员已知多种免疫分析格式。优选的体液样品选自：尿、血液、血清、唾液、眼泪和血浆。

[0064] 上述方法步骤不应当被干扰从而意味着肾损伤标记物分析结果用于本文所述的方法中的分离。然而，其他的变量或其他临床标记可包括在本文所述的方法中。例如，风险分级、诊断、分类、监测等方法可将分析结果与一种或一种以上测量的受试者的变量相结合，所述受试者的变量选自：人口统计学信息(例如，重量、性别、年龄、种族)、医疗历史(例如，家族史、手术类型、预存在的疾病，例如动脉瘤、充血生心力衰竭、先兆子痫、惊厥、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全或败血病，毒素暴露的种类，例如NSAID、环孢霉素、他克莫司、氨基糖苷、膦甲酸、乙二醇、血红素、肌球素、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、射线不透过的造影剂或链脲霉素)、临床变量(例如，血压、体温、呼吸次数)、风险分数(APACHE分数，PREDICT分数、用于UA／NSTEMI的TIMI风险分数、Framingham风险分数)、肾小球过滤速度、估计的肾小球过滤速度、产尿量、血清或血浆肌酸酐浓度、尿肌酸酐浓度、钠排泄分数、尿钠浓度、尿肌酸酐与血清或血浆肌酸酐的比例、尿比重、尿等渗性、尿素氮与血浆尿素氮的比例、血浆BUN与肌酸酐的比例、估算为尿钠／(尿肌酸酐／血浆肌酸酐)的肾衰竭指数、血清或血浆嗜中性粒细胞白明胶酶(NGAL)浓度、尿NGAL浓度、血清或血浆半胱氨酸蛋白酶抑制剂C浓度、血清或血浆心肌肌钙蛋白浓度、血清或血浆BNP浓度、血清或血浆NTproBNP浓度、血清或血浆proBNP浓度。其他可与一种或一种以上肾损伤标记物分析结果合并的肾功能测量在下文中描述并且在Harrison’s Principles of thInternal Medicine，17 Ed.，McGraw Hill，New York，第1741-1830页和Current Medical th
Diagnosis&Treatment2008，47 Ed，McGraw Hill，New York，第785-815页中描述，其通过引用并入本文。

[0065] 当测量一个以上标记物时，独立的标记物可在同时获得的样品中测量或可由在不同时间(例如，较早或较晚)获得样品来确定。独立的标记物也可在相同或不同的体液样品上来测量。例如，一个肾损伤标记物可在血清或血浆样品中测量，另一肾损伤标记物可在尿样品中测量。此外，所对应的可能性可将单独的肾损伤标记物分析结果与一种或一种以上额外的变量的暂时变化相结合。

[0066] 在各种相关的方面，本发明还涉及用于实施本发明所述的方法的设备和试剂盒。合适的试剂盒包括足以实施对所述肾损伤标记物中的至少一种进行分析的试剂，一同带有用于实施所述阈值比较的说明书。

[0067] 在一些实施方式中，用于实施这些分析的试剂在分析设备中提供，并且这些分析设备可包括试剂盒。优选的试剂可包括一种或一种以上固相抗体，所述固相抗体包括检测所期望的生物标记物靶标结合至固体支持物的抗体。在三明治免疫分析条件下，这些试剂也可包括一种或一种以上可检测的标记的抗体，所述可检测的标记的抗体包括检测期望的生物标记物靶标结合至可检测的标记物的抗体。作为分析设备的一部分来提供的其他任选的元件在下文中描述。

[0068] 可检测的标记物可包括其自身可检测(例如，荧光基团、电化学标记物、ecl(电化学发光)标记物、金属螯合物、胶体金属颗粒，等)的分子和通过可检测的反应产物(例如，酶，例如山葵、过氧化物酶、碱性磷酸酶)的产量来间接检测的分子或通过使用其自身可检测的特异性结合分子(例如0结合至二抗的标记的抗体，生物素、异羟基洋地黄毒疳元、麦芽糖、寡核苷酸组氨酸、2，4-二硝基苯、苯基砷酸盐、ssDNA、dsDNA)来间接检测的分子。

[0069] 由信号发生元件产生的信号可使用本领域已知的各种光学、听觉和电化学方法来表现。检测模型的实施例包括荧光、辐射化学检测、反射、吸收、电流分析、电导、阻抗、干扰测量、椭圆测量，等等。在这些方法中的一些中，固相抗体偶联至传导器(例如，衍射光栅、电化学传感器，等)用于产生信号，然而在其他实施方式中，由传导器产生信号，所述传导器与固相抗体空间分离(例如，使用激发光源和光学检测器的荧光计)。该列表不意味着限制。基于抗体的生物传感器也可用于确定分析物的存在和分析物的量，任选地，所述分析物排除了对标记分子的需要。

[0070] 附图简述

[0071] 图1提供依照实施例6测定的用于比较下列中的标记物水平的数据表格：第一群(患者的发展没有超过RIFLE0期)中收集的尿液样品；和在第二群中在达到R、I或F期之前在0小时、24小时和48小时从受试者中收集的尿液样品。表格提供各种标记物的描述性统计、AUC分析以及在各种阈值(截断)水平处的灵敏度、特异性和奇数比计算值。

[0072] 图2提供依照实施例7测定的用于比较下列中的标记物水平的数据表格：第一群(患者的发展没有超过RIFLE0或R期)中收集的尿液样品；和在第二群中在达到I或F期之前在0小时、24小时和48小时从受试者中收集的尿液样品。表格提供各种标记物的描述性统计、AUC分析以及在各种阈值(截断)水平处的灵敏度、特异性和奇数比计算值。

[0073] 图3提供依照实施例8测定的用于比较下列中的标记物水平的数据表格：第一群(患者达到但是发展没有超过RIFLE R期)中收集的尿液样品；和在第二群中在达到I或F期之前在0小时、24小时和48小时从受试者中收集的尿液样品。表格提供各种标记物的描述性统计、AUC分析以及在各种阈值(截断)水平处的灵敏度、特异性和奇数比计算值。

[0074] 图4提供依照实施例9测定的用于比较下列中的标记物水平的数据表格：第一群(患者的发展没有超过RIFLE0期)中收集的尿液样品；和在第二群中在达到F期之前在0小时、24小时和48小时从受试者中收集的尿液样品。表格提供各种标记物的描述性统计、AUC分析以及在各种阈值(截断)水平处的灵敏度、特异性和奇数比计算值。

[0075] 图5提供依照实施例6测定的用于比较下列中的标记物水平的数据表格：第一群(患者的发展没有超过RIFLE0期)中收集的血浆样品；和在第二群中在达到R、I或F期之前在0小时、24小时和48小时从受试者中收集的血浆样品。表格提供各种标记物的描述性统计、AUC分析以及在各种阈值(截断)水平处的灵敏度、特异性和奇数比计算值。

[0076] 图6提供依照实施例7测定的用于比较下列中的标记物水平的数据表格：第一群(患者的发展没有超过RIFLE0或R期)中收集的血浆样品；和在第二群中在达到I或F期之前在0小时、24小时和48小时从受试者中收集的血浆样品。表格提供各种标记物的描述性统计、AUC分析以及在各种阈值(截断)水平处的灵敏度、特异性和奇数比计算值。

[0077] 图7提供依照实施例8测定的用于比较下列中的标记物水平的数据表格：第一群(患者达到但是发展没有超过RIFLE R期)中收集的血浆样品；和在第二群中在达到I或F期之前在0小时、24小时和48小时从受试者中收集的血浆样品。表格提供各种标记物的描述性统计、AUC分析以及在各种阈值(截断)水平处的灵敏度、特异性和奇数比计算值。

[0078] 图8提供依照实施例9测定的用于比较下列中的标记物水平的数据表格：第一群(患者的发展没有超过RIFLE0期)中收集的血浆样品；和在第二群中在达到F期之前在0小时、24小时和48小时从受试者中收集的血浆样品。表格提供各种标记物的描述性统计、AUC分析以及在各种阈值(截断)水平处的灵敏度、特异性和奇数比计算值。

[0079] 发明详述

[0080] 本发明涉及通过测量一种或一种以上肾损伤标记物用于诊断、区别诊断、风险分级、监测、分类和确定患者的治疗方案的方法和组合物，所述患者患有肾功能损伤、肾功能降低和／或急性肾衰竭或处于患上肾功能损伤、肾功能降低和／或急性肾衰竭的风险中。在各种实施方式中，一种或一种以上标记物的测量的浓度或与其相关的一种或一种以上标记物与受试者的肾状态相关联，所述标记物选自：细胞质天冬氨酸氨基转移酶、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5、可溶性CD40配体、可溶性C-X-C模体趋化因子16、S100-A12、嗜酸细胞活化趋化因子、可溶性E-选择蛋白、纤连蛋白、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、肝素结合生长因子2、可溶性肝细胞生长因子受体、白细胞介素-1受体拮抗剂、白细胞介素-1β、白细胞介素-10、白细胞介素-15、白细胞介素-3、髓过氧化物酶、巢蛋白-1、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1、Pappalysin-1、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体
1、抗白细胞蛋白酶、可溶性Kit配体、金属蛋白酶组织抑制剂1、金属蛋白酶组织抑制剂2、可溶性肿瘤坏死因子、可溶性血管细胞粘附分子1和血管内皮生长因子A。

[0081] 就本文的目的而言，应用下面的定义：

[0082] 本文使用的“肾功能损伤”是在测量肾功能时突然的(14天内，优选地7天内，更优选地72小时内，还更优选地48小时)可测量的降低。这样的损伤可被识别，例如，通过肾小管过滤速度降低或评估GRR，尿输出量降低、血清肌酸酐增加、血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂c增加、需要肾替换治疗，等等。“肾功能改善”是在测量肾功能时突然(14天内，优选地7天内，更优选地72小时内，还更优选地48小时)可测量的增加。优选的用于测量和／或评估GFR的方法在下文中描述。

[0083] 本文使用的“肾功能降低”是肾功能突然(14天内，优选地7天内，更优选地72小时内，还更优选地48小时)降低，所述降低由血清肌酸酐的绝对增加大于或等于O.1mg／dl(≥8.8μmol／L)，血清肌酸酐增加的百分数大于或等于20％(基线的1.2倍)或尿输出量降低(记录的少尿小于0.5ml／kg／h)来识别。

[0084] 本文使用的“急性肾衰竭”或“ARF”是突然的(14天内，优选地7天内，更优选地72小时内，还更优选地48小时)肾功能降低，所述降低由血清肌酸酐的绝对增加大于或等于0.3mg／dl(≥26.4gmol／L)，血清肌酸酐增加的百分数大于或等于50％(基线的1.5倍)或尿输出量降低(记录的少尿小于0.5ml／kg／h持续6小时)来识别。该术语与“急性肾损伤”或“AKI”同义。

[0085] 就这点而言，本领域技术人员会理解的是从免疫分析获得的信号是一个或一个以上抗体和靶生物分子(即，分析物)以及含连接至抗体的必须表位的多肽之间形成的复合物的直接结果。然而，这样的分析可检测全长生物标记物并且分析结果被表达为相关的生物标记物的浓度，来自分析的信号实际上是存在于样品中全部这样“免疫活性”多肽的结果。生物标记物的表达也可通过非免疫分析方法来确定，包括蛋白质测量(，例如，斑点印记、western印迹、色谱法、质谱分析，等等)和核酸测量(mRNA定量)。该列表不意味着限制。

[0086] 本文使用的术语“细胞质天冬氨酸氨基转移酶”是指存在于生物样品中的源自细胞质天冬氨酸氨基转移酶前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P17174(，SEQ ID NO：1))。

[0087]

[0088]

[0089] 下面的结构域已在细胞质天冬氨酸氨基转移酶中识别：

[0090] 残基长度结构域ID

[0091] 1 1 启动子蛋氨酸

[0092] 2-413 412 细胞质天冬氨酸氨基转移酶

[0093] 本文使用的术语“肿瘤坏死因子受体超家族成员5”是指存在于生物样品中的源自肿瘤坏死因子受体超家族成员5前体的一种或一种以上多肽(Swiss—Prot P25942(SEQ ID No：2))。

[0094]

[0095]

[0096] 最优选地，肿瘤坏死因子受体超家族成员5分析检测了一种或一种以上可溶形式的肿瘤坏死因子受体超家族成员5。肿瘤坏死因子受体超家族成员5是单遍I型膜蛋白，具有犬的细胞外结构域，大多数或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的肿瘤坏死因子受体超家族成员5或存在于通过蛋白质水解膜-结合形式而产生的可溶形式的肿瘤坏死因子受体超家族成员5。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在肿瘤坏死因子受体超家族成员5中识别：

[0097]

[0098] 另外，已知肿瘤坏死因子受体超家族成员5的1种可替换的剪接形式。为了本发明的目的，该形式被认为是肿瘤坏死因子受体超家族成员5，并且为了本发明的目的，该可替换的剪接形式中的可溶形式被认为是可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5。

[0099] 本文使用的术语“CD40配体”是指存在于生物样品中的源自CD40配体前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P29965(SEQ ID NO：3))。

[0100]

[0101]

[0102] 最优选地，CD40配体分析检测了一种或一种以上可溶形式的CD40配体。CD40配体是单遍I型膜蛋白，具有大的细胞外结构域，大部分或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的CD40配体或存在于通过蛋白质水解膜-结合形式而产生的可溶形式的CD40配体。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在CD40配体中识别：

[0103]

[0104] 本文使用的术语“C-X-C模体趋化因子16”是指存在于生物样品中的源自C-X-C模体趋化因子16前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot Q9H2A7(SEQ ID NO：4))。

[0105]

[0106]

[0107] 最优选地，C-X-C模体趋化因子16分析检测了一种或一种以上可溶形式的C-X-C模体趋化因子16。C-X-C模体趋化因子16是单遍I型膜蛋白，具有大的细胞外结构域，大部分或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的C-X-C模体趋化因子16或存在于通过蛋白质水解膜-结合形式而产生的可溶形式的C-X-C模体趋化因子16。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在C-X-C模体趋化因子16中识别：

[0108]

[0109] 本文使用的术语“蛋白S100-A12”是指存在于生物样品中的源自蛋白S100-A12前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P80511(SEQ ID NO：5))。

[0110]

[0111] 下面的结构域已在蛋白S100-A12中识别：

[0112] 残基长厦结构域ID

[0113] 1 1 启动子蛋氨酸

[0114] 2-92 91 蛋白S100-A12

[0115] 本文使用的术语“嗜酸细胞活化趋化因子”是指存在于生物样品中的源自嗜酸细胞活化趋化因子前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P51671(SEQ ID NO：6))。

[0116]

[0117] 下面的结构域已在嗜酸细胞活化趋化因子中识别：

[0118] 残基长度结构域ID

[0119] 1-23 23 信号肽

[0120] 24-97 74 嗜酸细胞活化趋化因子

[0121] 本文使用的术语“E-选择蛋白”是指存在于生物样品中的源自E-选择蛋白前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P16581(SEQ ID NO：7))。

[0122]

[0123]

[0124] 最优选地，E-选择蛋白分析检测了一种或一种以上可溶形式的E-选择蛋白。E-选择蛋白是单遍I型膜蛋白，具有大的细胞外结构域，大部分或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的E-选择蛋白或存在于通过蛋白质水解膜-结合形式而产生的可溶形式的E-选择蛋白。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在E-选择蛋白中识别：

[0125]

[0126] 本文使用的术语“纤连蛋白”是指存在于生物样品中的源自纤连蛋白前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P02751(SEQ ID NO：8))。

[0127]

[0128]

[0129]

[0130]

[0131] 下面的结构域已在纤连蛋白中识别：

[0132] 残基长度结构域ID

[0133] 1-31 31 信号肽

[0134] 32-2386 2355 纤连蛋白

[0135] 为了本发明的目的，已知至少14种其他同种型纤连蛋白并被认为是“纤连蛋白”。

[0136] 本文使用的术语“粒细胞集落刺激因子”是指存在于生物样品中的源自粒细胞集落刺激因子前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P09919(SEQ ID NO：9))。

[0137]

[0138] 下面的结构域已在粒细胞集落刺激因子中识别：

[0139] 残基长度结构域ID

[0140] 1-29 29 信号肽

[0141] 30-207 178 粒细胞集落刺激因子

[0142] 本文使用的术语“粒细胞巨噬细胞集落刺激因子”是指存在于生物样品中的源自粒细胞巨噬细胞集落刺激因子前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P04141(SEQ ID NO：10))。

[0143]

[0144]

[0145] 下面的结构域已在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子中识别：

[0146] 残基长度结构域ID

[0147] 1-17 17 信号肽

[0148] 18-144 127 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子

[0149] 本文使用的术语“肝素结合生长因子2”是指存在于生物样品中的源自肝素结合生长因子2前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P09038(SEQ ID NO：11))。

[0150]

[0151] 下面的结构域已在肝素结合生长因子2中识别：

[0152] 残基长度结构域ID

[0153] 1-9 9 前肽

[0154] 10-155 146 肝素结合生长因子2

[0155] 本文使用的术语“肝细胞生长因子受体”是指存在于生物样品中的源自肝细胞生长因子受体前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P08581(SEQ ID NO：12))。

[0156]

[0157]

[0158]

[0159] 最优选地，肝细胞生长因子受体分析检测了一种或一种以上可溶形式的肝细胞生长因子受体。肝细胞生长因子受体是单遍I型膜蛋白，具有大的细胞外结构域，大部分或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的肝细胞生长因子受体或存在于通过蛋白质水解膜-结合形式而产生的可溶形式的肝细胞生长因子受体。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在肝细胞生长因子受体中识别：

[0160]

[0161] 本文使用的术语“白细胞介素-1受体拮抗剂蛋白”是指存在于生物样品中的源自白细胞介素-1受体拮抗剂蛋白前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P18510(SEQ ID NO：13))。

[0162]

[0163] 下面的结构域已在白细胞介素-1受体拮抗剂蛋白中识别：

[0164] 残基长度结构域ID

[0165] 1-25 25 信号肽

[0166] 26-177 152 白细胞介素-1受体拮抗剂蛋白

[0167] 另外，已知三种变异同种型白细胞介素-1受体拮抗剂蛋白。同种型2使用MAL取代残基1-21；同种型3使用MALADLYEEGGGGGGEGEDNADSK(SEQ ID NO：2)取代残基1-21；并且同种型4缺少残基1-34。

[0168] 本文使用的术语“白细胞介素-1β”是指存在于生物样品中的源自白细胞介素-1β前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P01584(SEQ ID NO：14))。

[0169]

[0170] 下面的结构域已在白细胞介素-1β中识别：

[0171] 残基长度结构域ID

[0172] 1-116 116 前肽

[0173] 117-269 153 白细胞介素-1β

[0174] 本文使用的术语“白细胞介素-10”是指存在于生物样品中的源自白细胞介素-10前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P22301(SEQ ID NO：15))。

[0175]

[0176] 下面的结构域已在白细胞介素-10中识别：

[0177] 残基长度结构域ID

[0178] 1-18 18 信号肽

[0179] 19-178 160 白细胞介素-10

[0180] 本文使用的术语“白细胞介素-15”是指存在于生物样品中的源自白细胞介素-15前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P40933(SEQ ID NO：16))。

[0181]

[0182] 下面的结构域已在白细胞介素-15中识别：

[0183]

[0184] 另外，已知两种变异白细胞介素-15同种型。同种型2使用MVLGTIDLCs(SEQ ID NO：17)取代残基1-37；并且同种型3使用MDFQVQIFSFLLISASVIMSR(SEQ ID NO：18)取代残基1-47。

[0185] 本文使用的术语“白细胞介素-3”是指存在于生物样品中的源自白细胞介素-3前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P08700(SEQ ID NO：19))。

[0186]

[0187] 下面的结构域已在白细胞介素-3中识别：

[0188] 残基长度结构域ID

[0189] 1-19 19 信号肽

[0190] 20-152 133 白细胞介素-3

[0191] 本文使用的术语“髓过氧化物酶”是指存在于生物样品中的源自髓过氧化物酶前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P05164(SEQ ID NO：20))。

[0192]

[0193]

[0194] 下面的结构域已在髓过氧化物酶中识别：

[0195]

[0196] 本文使用的术语“巢蛋白-1”是指存在于生物样品中的源自巢蛋白-1前体的一种或一种以上多肽(SWiss-Prot P14543(SEQ ID NO：21))。

[0197]

[0198]

[0199]

[0200] 下面的结构域已在巢蛋白-1中识别：

[0201] 残基长度结构域ID

[0202] 1-28 28 信号序列

[0203] 29-1247 1219 巢蛋白-1

[0204] 本文使用的术语“氧化低密度脂蛋白受体1”是指存在于生物样品中的源自氧化低密度脂蛋白受体1前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P78380(SEQ ID NO：22))。

[0205]

[0206] 最优选地，氧化低密度脂蛋白受体1分析检测了一种或一种以上可溶形式的氧化低密度脂蛋白受体1。氧化低密度脂蛋白受体1是单遍I型膜蛋白，具有大的细胞外结构域，大部分或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的氧化低密度脂蛋白受体1或存在于通过蛋白质水解膜-结合形式而产生的可溶形式的氧化低密度脂蛋白受体1。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在氧化低密度脂蛋白受体1中识别：

[0207]

[0208] 本文使用的术语“Pappalysin-1”是指存在于生物样品中的源自Pappalysin-1前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot Q13219(SEQ ID NO：23))。

[0209]

[0210]

[0211]

[0212] 下面的结构域已在Pappalysin-1中识别：

[0213]

[0214] 本文使用的术语“P-选择蛋白糖蛋白配体1”是指存在于生物样品中的源自P-选择蛋白糖蛋白配体1前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot Q14242(SEQ ID NO：24))。

[0215]

[0216]

[0217] 最优选地，P-选择蛋白糖蛋白配体1分析检测了一种或一种以上可溶形式的P-选择蛋白糖蛋白配体1。P-选择蛋白糖蛋白配体1是单遍I型膜蛋白，具有大的细胞外结构域，大部分或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的P-选择蛋白糖蛋白配体1或存在于通过蛋白质水解膜-结合形式而产生的可溶形式的P-选择蛋白糖蛋白配体1。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在P-选择蛋白糖蛋白配体1中识别：

[0218]

[0219]

[0220] 本文使用的术语“抗白细胞蛋白酶”是指存在于生物样品中的源自抗白细胞蛋白酶前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P03973(SEQ ID NO：25))。

[0221]

[0222] 下面的结构域已在抗白细胞蛋白酶中识别：

[0223] 残基长度结构域ID

[0224] 1-25 25 信号序列

[0225] 26-132 107 抗白细胞蛋白酶

[0226] 本文使用的术语“Kit配体”是指存在于生物样品中的源自Kit配体前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P21583(SEQ ID NO：26))。

[0227]

[0228] 另外，已经描述了可溶性剪切变异形式的Kit配体(SEQ ID NO：27)：

[0229]

[0230]

[0231] 最优选地，KIT配体分析检测了一种或一种以上可溶形式的KIT配体。KIT配体是单遍I型膜蛋白，具有大的细胞外结构域，大部分或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的KIT配体或存在于通过蛋白质水解膜一结合形式而产生的可溶形式的KIT配体。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在KIT配体中识别：

[0232]

[0233] 本文使用的术语“金属蛋白酶抑制剂1”是指存在于生物样品中的源自金属蛋白酶抑制剂1前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P01033(SEQ ID NO：28))。

[0234]

[0235]

[0236] 下面的结构域已在金属蛋白酶抑制剂1中识别：

[0237] 残基长度结构域ID

[0238] 1-18 23 信号序列

[0239] 24-207 184 金属蛋白酶抑制剂1

[0240] 本文使用的术语“金属蛋白酶抑制剂2”是指存在于生物样品中的源自金属蛋白酶抑制剂2前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P16035(SEQ ID NO：29))。

[0241]

[0242] 下面的结构域已在金属蛋白酶抑制剂2中识别：

[0243] 残基长度结构域ID

[0244] 1-26 26 信号肽

[0245] 27-220 194 金属蛋白酶抑制剂2

[0246] 本文使用的术语“肿瘤坏死因子”是指存在于生物样品中的源自肿瘤坏死因子前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P01375(SEQ ID NO：30))。

[0247]

[0248]

[0249] 最优选地，肿瘤坏死因子分析检测了一种或一种以上可溶形式的肿瘤坏死因子。肿瘤坏死因子是单遍I型膜蛋白，具有大的细胞外结构域，大部分或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的肿瘤坏死因子或存在于通过蛋白质水解膜一结合形式而产生的可溶形式的肿瘤坏死因子。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在肿瘤坏死因子中识别：

[0250]

[0251] 本文使用的术语“血管细胞粘附分子1”是指存在于生物样品中的源自血管细胞粘附分子1前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P19320(SEQ ID NO：31))。

[0252]

[0253]

[0254] 最优选地，血管细胞粘附分子1分析检测了一种或一种以上可溶形式的血管细胞粘附分子1。血管细胞粘附分子1是单遍I型膜蛋白，具有大的细胞外结构域，大部分或所有存在于由删除了所有或部分跨膜结构域的选择性剪接事件而产生的可溶形式的血管细胞粘附分子1或存在于通过蛋白质水解膜-结合形式而产生的可溶形式的血管细胞粘附分子1。在免疫分析的情况下，在细胞外结构域中结合至表位的一种或一种以上抗体可用于检测这些可溶形式。下列结构域已在血管细胞粘附分子1中识别：

[0255]

[0256]

[0257] 本文使用的术语“血管内皮生长因子A”是指存在于生物样品中的源自血管内皮生长因子A前体的一种或一种以上多肽(Swiss-Prot P15692(SEQ ID NO：32))。

[0258]

[0259] 下面的结构域已在血管内皮生长因子A中识别：

[0260] 残基长度结构域ID

[0261] 1-26 26 信号肽

[0262] 27-232 483 血管内皮生长因子A

[0263] 另外，为了本发明的目的，已知9种其他变异形式的血管内皮生长因子A，并且被认为是血管肉皮生长因子A。它们是VEGF189、VEGF183、VEGF165、VEGF148、VEGF145、VEGF121、VEGF165B、VEGF121B和VEGF111。

[0264] 本文使用的术语分析物的“与存在或数量有关的信号”反应了这种理解。分析信号通常与分析物的存在和分析物的量有关，通过使用相关分析物的已知浓度来估算的标准曲线。本文使用的术语分析物是“被配置为以检测”分析物如果分析物可产生可检测的信号，所述信号表明分析物的生理学上相关浓度的量或存在。因为抗体表位在8氨基酸的位置上，配置成检测相关标记物的免疫分析也会检测与标记物序列相关的多肽，这样那些多肽含有必须结合至抗体的表位或结合至用于分析的抗体的表位。本文使用的术语“相关标记物”与本文所述的诸如肾损伤标记物中的一种之类的生物标记物相关，是指特定标记物或其生物合成的母体的一种或一种以上碎片，变体等，所述生物合成的母体可被检测为标记物自身的代替品或独立的生物标记物。所述术语也指生物样品中的一种或一种以上多肽，所述生物样品源自与额外的物质例如结合蛋白质，受体，肝磷脂，脂质，糖类等复合的生物标记物前体。

[0265] 本文使用的术语“正向”标记物是指被确定为在患有疾病或病症的受试者(相对于未患有疾病或病症的受试者)体内上升的标记物。本文使用的术语“负向”标记物是指被确定为在患有疾病或病症的受试者(相对于未患有疾病或病症的受试者)体内降低的标记物。

[0266] 本文使用的术语“受试者”是指人或非人生物体。因此，本文所述的方法和组合物可用于人和兽医疾病。进一步，当受试者优选地为活生物体时，本发明也可用于死后分析。优选的受试者是人类，并且最优选的是“患者”，本文使用的患者是指接受用于疾病或病症的医疗护理的活的人类。这包括没有确定的疾病的人，其正在检查病理学现象。

[0267] 优选地，在样品中测量分析物。这样的样品可以从受试者获得或可从想要提供给受试者的生物物质中获得。例如，样品可以从正在评估可能移植给受试者的肾脏和用于评估肾脏预存在的伤害的分析物测量获得。优选的样品是体液样品。

[0268] 本文使用的术语“体液样品”是指为了诊断、预后、分类或评估例如患者或移植供体的相关受试者的目的而获得的体液样品。在一些实施方式中，这种样品可为了确定正在进行的病症的结果或关于病症的治疗方案的效果来获得。优选的体液样品包括血液，血清，血浆，脑脊液，尿液，唾液，痰，胸腔积液。此外，本领域技术人员会意识到一些体液样品可更易于在分馏和纯化步骤之后来分析，例如，全血分离为血清或血浆组分。

[0269] 本文使用的术语“诊断”是指本领域技术人员通过其可估计和／或确定患者是否患有给定的疾病或病症的可能性的方法。在本发明的情况下，“诊断”包括使用用于本发明的肾损伤标记物的分析结果，最优选地免疫分析，任选地，与其他临床特征一起使用，以从患者得到的样品和分析来实现诊断(即，发生或未发生)急性肾损伤或ARF。这样的诊断是“确定”，其不意味着暗示诊断是100％准确。许多生物标记物是表示多种病症，本领域临床医师不使用生物标记物导致信息真空，而非将测试结果与其他临床指标一同使用以实现诊断。因此，在预确定诊断阈值的一侧的测量的生物标记物的水平表示受试者发生疾病的可能性较大，相对于测量水平在预确定诊断阈值的另一侧。

[0270] 类似地，预后风险表示给定过程或结果将发生的可能性。水平或预后指标的水平的变化是指患者的不利结果的“表示可能性增加”，所述预后指标水平的变化反过来与致病的可能性的增加有关(例如，肾功能恶化，将会发生ARF，或死亡)。

[0271] 标记物分析

[0272] 总体上，免疫分析包括使含有或怀疑含有相关生物标记物的样品与至少一种特异性结合至生物标记物的抗体接触。然后，产生表示复合物的存在或量的信号，所述复合物由样品中的多肽结合至抗体形成。然后，所述信号与样品中的生物标记物的存在或量相关。用于检测和分析生物标记物的许多方法和设备是本领域技术人员所熟知的。参见，例如，美国专利6,143,576；6,113,855；6,019,944；5,985,579；5,947,124；5,939,272；5,922,615；5,885,527；5,851,776；5,824,799；5,679,526；5,525,524；与5,480,792 和The Immunoassay Handbook，David Wild，ed.Stockton Press，New York，1994，它们中的每一个通过引用并入本文，包括表格，附图和权利要求。

[0273] 本领域已知的分析设备和分析方法可使用各种三明治，竞争或非竞争分析形式中的标记的分子以产生与相关生物标记物的存在和量有关的信号。合适的分析模式也包括色谱法，质谱法和蛋白质“印记”法。此外，一些方法和设备，例如生物传感器和光学免疫分析可用于确定分析物的存在和量而不需要标记分子。参见美国专利5,631,171；和5,955,377，其每一个通过引用并入本文，包括所有的表格，附图和权利要求。本领域技术人员也意识到机器人设备包括但不限于Beckman Abbott
Roche Dade Behring 体系也在能够执行免疫分析的免疫分析
分析仪中。但是可使用任何合适的免疫分析，例如，酶联免疫分析(ELISA)，辐射免疫分析(RIA)，竞争结合分析，等。

[0274] 抗体或其他多肽可被固定在各种用于分析的固体支架上。可用于固定特异性结合成员的固相包括在固相结合分析中研制和／或用作固相的那些。合适的固相的实例包括膜过滤器，基于纤维素的纸，小珠(包括聚合的，乳胶和顺磁颗粒)，玻璃，硅片，微粒，纳米颗粒，Tenta凝胶，Agro凝胶，PEGA凝胶，SPOCC凝胶和多孔板。分析条带可通过将分析中的抗体或多个抗体涂覆在固体支架上来制备。该条带然后可被浸入测试样品中，然后快速进行洗涤和检测步骤以产生可测量的信号，例如彩色斑点。抗体或其他多肽可通过与分析设备表面直接共轭或通过间接结合被结合至分析设备的特定区域。后者情况的实例中，抗体或其他多肽可被固定在颗粒或其他固体支架上，并且将固体支架固定在设备表面。

[0275] 生物分析需要用于检测的方法，并且用于定量结果的最常用的方法之一是将可检测的标记与蛋白质或核酸共轭，所述蛋白质或核酸对正在研究的生物体系中的成分中的一个具有亲和性。可检测的标记可包括其自身可检测的分子(例如，荧光基团，电化学标记，金属螯合物，等等)和通过可检测反应产物(例如，酶，例如山葵过氧化物酶，碱性磷酸酶，等)的产量来间接检测的分子或通过其自身可检测的特异性结合分子(例如，生物素，异羟基洋地黄毒甙元，麦芽糖，寡聚组氨酸，2，4-二硝基苯，苯基砷酸盐，ssDNA，dsDNA，等)来间接检测的分子。

[0276] 固相和可检测标记共轭物的制备通常包括使用化学交联剂。交联剂包括至少两个反应性基团，并且可被分为同功能交联剂(包含相同的反应基团)和异功能交联剂(包含不相同的反应基团)。通过胺类，巯基或反应非特异性偶联的同生物功能交联剂可从许多商业来源获得。马来酰亚胺，烷基和芳基卤化物以及α-卤代酰基与巯基反应以形成硫醚键，而吡啶基二硫化物与巯基反应以生成混合的二硫化物。吡啶基二硫化物产物是可裂解的。亚胺酸酯也非常有用于蛋白质-蛋白质交联。各种异生物功能交联剂(每一个结合不同的特征用于成功的共轭)是可从商业上获得的。

[0277] 一些方面，本发明提供用于分析所述的肾损伤标记物的试剂盒。所述试剂盒包括用于分析至少一种测试样品的试剂，所述测试样品包含至少一种肾损伤标记物抗体。所述试剂盒还可包括用于执行本文所述的一种或一种以上诊断和／或预后关系的设备和说明书。优选的试剂盒包括用于执行三明治分析的抗体对或用于执行竞争分析，用于分析的标记类物质。优选地，抗体对包括与固相共轭的第一抗体和与可检测的标记物共轭的第二抗体，其中第一抗体和第二抗体中的每一个与肾损伤标记物结合。最优选地，抗体中的每一个是单克隆抗体。用于使用试剂盒和执行关联的说明书可以标签的形式，其是指可任何书写或记录材料，其可粘附于试剂盒或与试剂盒放在一起在生产过程中、运输，销售或使用的任何时间。例如，术语标签包括广告传单和小册子，包装材料，说明书，音响或影像磁带，光盘和直接印在试剂盒上的印刷品。

[0278] 抗体

[0279] 本文使用的术语“抗体”是指肽或多肽，其源自基本上免疫球蛋白基于编码或免疫球蛋白基因后模拟或免疫球蛋白基因或其片段，能够特异性结合抗原或表位。参见，例如，Fundamental Immunology，3rd Edition，W.E.Paul，ed.，Raven Press，N.Y(1993)；Wilson(1994；J.Immunol.Methods175：267-273；Yarmush(1992)J.Biochem.Biophys.Methods25：85-97。术语抗体包括抗原结合蛋白，即“抗原结合位点”(例如，片段，亚序列，互补决定区域(CDR))，其保持了与抗原结合的能力，包括i)Fab片段，由VL，VH，CL和CH1结构域构成的单价片段，ii)F(ab’)2片段，包括在铰链区通过二硫化物桥键连接的两个Fab片段的二价片段；iii)Fd片段，由VH和CH1结构域构成；iv)Fv片段，由抗体的单臂VL和VH结构域构成；v)dAb片段(Ward et al.，(1989)Nature341：544-546)，其由VH结构域构成；和vi)分离的互补决定区(CDR)。单链抗体通过引用可被包括在术语“抗体”中。

[0280] 用于本文所述的免疫分析中的抗体优选地特异性结合至本发明的肾损伤标记物。术语“特异性结合”并不意味着说明抗体排他地结合至其期望的靶标，因为，如上所述，抗体结合至任何表现出抗体结合至表位的多肽。然而，抗体“特异性结合”如果其对期望的靶标具有亲和性那么其相对于其对非靶标分子的亲和性大5倍，所述非靶标分子不显示出合适的表位。优选地，抗体对靶标分子的亲和性是对非靶标分子的亲和性的至少约5倍，优选10倍，更优选25倍，甚至更优选50倍，以及最优选100倍或更多。在优选的实施方式中，优选
7 -1 8 -1 9 -1 9 -1 10 -1
的抗体结合亲和性为至少约10M ，以及优选地为约10M 至约10M ，约10M 至约10 M ，
10 -1 12 -1
或约10 M 至约10 M 。

[0281] 亲和性被估算为Kd＝koff/kon(koff是解离速率常数，kon是结合速率常数，Kd是平衡常数)。亲和性可通过测量不同浓度(c)条件下的标记的配体的分数范围(r)在平衡时来确定。数据使用Scatchard方程：r／c＝K(n-r)来绘制，其中，r＝平衡时受体的摩尔数／配体范围的摩尔数；c＝平衡时自由配体浓度；K＝平衡结合常数；n＝每受体分子的配体结合位点数。通过绘图分析，r／c绘制在Y轴，r绘制在X轴，因此产生Scatchard图。通过Scatchard分析来测量抗体亲和性是本领域熟知的。参见，例如van Erp etal.，J.Immunoassay12：425-43，1991；Nelson and Griswold，Comput.Methods Programs Biomed.27：65-8，1988

[0282] 术语“表位”是指能够特异性结合抗体的抗原决定因素。表位通常由分子的化学活性表面基团来构成，所述分子例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特异性三维结构特征，以及特异性电荷特征。构造和非构造表位的区别在于结合至前者但不结合至后者在存在变性剂的条件下损失。

[0283] 各种公开出版物讨论了噬菌体显像技术的使用以产生并筛选用于结合选定的分析物的多肽文库。参见，例如，Cwirla等人.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA87，6378-82，1990；Devlin等人Science249，404-6，1990，Scott和Smith，Science249，386-88，1990；和Ladner等人.，美国专利No.5,571,698。噬菌体显像方法的基本概念是在待筛选的编码多肽的DNA和多肽之间建立物理结合。该物理结合由噬菌体颗粒来提供，所述噬菌体颗粒显示出多肽作为包裹了编码多肽的噬菌体基因组的衣壳的一部分。在多肽及其基因物质之间建立的物理结合允许同时质量筛选非常大数量的带有不同多肽的噬菌体。显示了对靶标具有亲和性的多肽的噬菌体与靶标结合，这些噬菌体通过靶标的亲和性筛选而被丰富。这些噬菌体所显示的多肽的识别可通过它们各自的基因组来确定。使用这些方法，识别为具有对期望的靶标的结合亲和性的多肽可通过常规方法大量合成。参见，例如，美国专利第
6,057,098号，其通过引用并入本文，包括所有的表格、附图和权利要求。

[0284] 通过这些方法生成的抗体可通过第一筛选来选择亲和性和特异性以及相关的纯化的多肽，如果需要的话，将结果与具有期望从结合中排除的多肽的抗体的亲和性和特异性相比较。筛选步骤可包括在微量滴定板的独立的孔中将纯化的多肽固定。然后，将含有潜在的抗体或抗体组的溶液置于各自的微滴定孔中并且孵育约30分钟至2小时。然后，洗涤微量滴定孔并将标记的第二抗体(例如，抗大鼠抗体，其共轭至碱性磷酸酶，如果上升的抗体是大鼠抗体)加至孔中孵育约30分钟，然后洗涤。将基质加至孔中，将会出现彩色反应，其中存在抗体至固定的多肽。

[0285] 然后，这样识别的抗体可进一步在所选的分析设计中分析亲和性和特异性。用于靶蛋白的免疫分析的发展中，纯化的靶蛋白作为标准来起作用，通过其判断使用已选择的抗体的免疫分析的灵敏度和特异性。因为各种抗体的结合亲和性不同，一些抗体对(例如，在三明治分析中)可空间上彼此干扰，等，抗体的分析执行可以是比抗体的绝对亲和性和特异性更重要的测量。

[0286] 分析关联性

[0287] 在使用生物标记物时，本文使用的术语“关联”是指将患者体内的生物标记物的存在或量与已知患有或处于患有给定病症的人体内或已知没有患有给定病症的人体内的生物标记物的存在或量进行比较。通常，采用将生物标记物浓度形式的结果与所选择的预定阈值相比较的形式，所述所选择的阈值揭示疾病是否发生或一些将来的结果的可能性。

[0288] 选择诊断阈值包括其他因素中的疾病的可能性的考虑因素，在不同测试阈值正确和错误诊断的因素，基于诊断的治疗结果(无法治疗)的评估。例如，当考虑使施用高效率且低风险水平的特定治疗时，几乎不需要测试，因为，临床医师可接受大量的诊断不确定性。另一方面，在选择的治疗是低效且较大风险的情况下，临床医师通常需要较多的诊断确定性。因此，成本／效益分析包括选择诊断阈值。

[0289] 合适的阈值可以各种方法来确定。例如，一种推荐的用于诊断急性心肌梗塞的使th用心肌肌钙蛋白的诊断阈值是正常人群中所看到的浓度的97.5 百分数。另一方法可以是观察相同患者的连续样品，其中先前的“基线”用于监测生物标记物水平的暂时变化。

[0290] 人群研究也可用于选择决定阈值。接受者操作特征(“ROC”)由在二战期间发展的用于分析雷达图像的信号检测理论领域引起，ROC分析通常用于选择能够最佳从“非患病的”亚群中区分“患病的”亚群的阈值。在这种情况下的假阳性发生在当个体检测阳性但实际上没有疾病时。另一方面，假阳性发生在当个体测试为阴性，显示其健康，但其实际上确实患病时。为了绘制ROC曲线，真阳性速率(TPR)和假阳性速率(FPR)被确定为连续变化的决定阈值。因为TPR相当于灵敏度，FPR等于1-特异性，ROC图有时被称为灵敏度对(1-特异性)图。完全测试会具有1.0的ROC曲线下面积；随机测试会具有0.5的面积。选择阈值来提供特异性和灵敏度的可接受的水平。

[0291] 在本文中，“患病的”是指具有一种特征(存在于疾病或病症中或发生一些结果)的人群，“未患病的”是指缺乏特征的人群。而单一决定阈值是这种方法最简单的应用，可使用多个决定阈值。例如，低于第一阈值，不存在疾病可对应于相对较高的可信度，高于第二阈值，存在疾病可对应于相对较高的可信度。两个阈值之间可认为不确定。这意味着是进本质的示范性的。

[0292] 除了阈值比较之外，用于患者分类(是否发生疾病，结果的可能性，等等)的关联分析结果的其他方法包括分层决定图表，规则集，贝叶斯方法和神经网络方法。这些方法可产生代表程度的可能性值，受体的程度属于多个分类中的一个分类。

[0293] 可获得测量测试精确度，如Fischer etal.，Intensive Care Med.29：1043-51，2003中所描述的，并且用于确定给定的生物标记物的效力。这些测量包括灵敏度和特异性，预测值，可能性比例，诊断奇数比例和ROC曲线面积。该ROC图的曲线下面积(AUC)相当于可能性，所述可能性是将随机选择的正向实例排列高于随机选择的负向实例的分级器。ROC曲线下面积可以认为相当于Mann-Whitney U测试，其测试分数之间的介质差异，所述分数在如果是连续数据组的所考虑的两组中获得，或ROC曲线下面积可以认为相当于Wilcoxon测试分级。

[0294] 如上所述，合适的测试可表现关于各种测量的下列结果的一种或一种以上：特异性大于0.5，优选地至少0.6，更优选地至少0.7，还更优选地至少0.8，甚至更优选地至少0.9，以及最优选的至少0.95，伴随相应的灵敏度大于0.2，优选地大于0.3，更优选地大于
0.4，还更优选的至少0.5，甚至更优选地0.6，还更优选地大于0.7，还更优选地大于0.8，更优选地大于0.9，以及最优选地大于0.95；灵敏度大于0.5，优选地至少0.6，更优选地至少
0.7，还更优选地至少0.8，甚至更优选地至少0.9，以及最优选地至少0.95，伴随相应的特异性大于0.2，优选地大于0.3，更优选地大于0.4，还更优选地至少0.5，甚至更优选地0.6，还更优选地大于0.7，还更优选地大于0.8，更优选地大于0.9以及最优选地大于0.95；至少75％的灵敏度合并至少75％的特异性，ROC曲线面积大于0.5，优选地至少0.6，更优选地0.7，还更优选地至少0.8，甚至更优选地至少0.9以及最优选地至少0.95；奇数比例不为1，优选至少约2或更大或约0.5或更小，更优选地至少约3或更大或约0.33或更小，还更优选地至少约4或更大或约0.25或更小，甚至更优选地至少约5或更大或约0.2或更小，以及最优选地至少约10或更大或约0.1或更小；正向可能性比例(估算为灵敏度／(1-特异性))大于1，至少2，更优选地至少3，还更优选地至少5，以及最优选地至少10，负向可能性比例(估算为(1-灵敏度)／特异性)小于1，小于或等于0.5，更优选地小于或等于
0.3，以及最优选地小于或等于0.1。

[0295] 额外的临床指标可与本发明的肾损伤标记物分析结果合并。这些包括与肾状态相关的生物标记物。实例包括下列，其记载了常用生物标记物名称，后面是生物标记物或其母体Swiss-Prot条目号：肌动蛋白(P68133)；腺苷脱氨酶结合蛋白(DPP4，P27487)；α-1-酸糖蛋白1(P02763)；α-1-微球蛋白(P02760)；白蛋白(P02768)；血管紧张素原酶(肾激素，P00797)；膜联蛋白A2(P07355)；β-葡糖苷酸酶(P08236)；B-2-微球蛋白(P61679)；β-半乳糖苷酶(P16278)；BMP-7(P18075)；脑利钠肽(proBNP，BNP-32，NTproBNP；P16860)；
钙结合蛋白β(S100-beta，P04271)；碳酸酐酶(Q16790)；酪蛋白激酶2(P68400)；组织蛋白酶B(P07858)；血浆铜蓝蛋白(P00450)；丛生蛋白(P10909)；补体C3(P01024)；富含半胱氨酸蛋白(CYR61，O00622)；细胞色素C(P99999)；表皮生长因子(EGF，P01133)；内皮素-1(P05305)；Exosomal胎球蛋白-A(P02765)；脂肪酸结合蛋白，心脏(FABP3，P05413)；
脂肪酸结合蛋白，肝脏(P07148)；铁蛋白(轻链，P02793；重链P02794)；果糖-1，6-双磷酸酶(P09467)；GRO-α(CXCL1，(P09341)；生长激素(P01241)；肝细胞生长因子(P14210)；
胰岛素样生长因子I(P01343)；免疫球蛋白G；免疫球蛋白轻链(Kappa和Lambda)；干扰素γ(P01308)；溶菌酶(P61626)；白细胞介素-1α(P01583)；白细胞介素-2(P60568)；
白细胞介素-4(P60568)；白细胞介素-9(P15248)；白细胞介素-12p40(P29460)；白细胞介素-13(P35225)；白细胞介素-16(Q14005)；L1细胞粘附分子(P32004)；乳酸脱氢酶(P00338)；亮氨酸氨基肽酶(P28838)；甲基多巴A-α亚单位(Q16819)；甲基多巴A-β亚单位(Q16820)；肝素结合细胞因子(P21741)；MIP2-α(CXCL2，P19875)；MMP-2(P08253)；
MMP-9(P14780)；神经生长因子-1(O95631)；中性内肽酶(P08473)；骨桥蛋白(P10451)；
肾乳头状抗原1(RPA1)；肾乳头状抗原2(RPA2)；视黄醇结合蛋白(P09455)；核糖核酸酶；
S100钙结合蛋白A6(P06703)；血清淀粉样蛋白P成分(P02743)；钠／氢交换亚型(NHE3，P48764)；亚精胺／精胺N1-乙酰转移酶(P21673)；TGF-β1(P01137)；转铁蛋白(P02787)；
三叶因子3(TFF3，Q07654)；Toll-样蛋白4(O00206)；总蛋白质；肾小管间质性肾炎抗原(Q9UJW2)；尿调节素(Tamm-Horsfall蛋白，P07911)。

[0296] 为了风险分级的目的，下列物质可与本发明的肾损伤标记物分析结果结合，所述物质为：脂联素(Q15848)；碱性磷酸酶(P05186)；氨基肽酶N(P15144)；钙结合蛋白D28k(P05937)；半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(P01034)；F1FO ATPase的8亚单位(P03928)；γ-谷氨酰转移酶(P19440)；GSTa(α-谷胱甘肽-S-转移酶，P08263)；GSTpi(谷胱甘肽 -S- 转移酶 P；GST class-pi；P09211)；IGFBP-1(P08833)；IGFBP-2(P18065)；
IGFBP-6(P24592)；积分膜蛋白1(Itm1，P46977)；白细胞介素-6(P05231)；白细胞介素-8(P10145)；白细胞介素-18(Q14116)；IP-10(10kDa干扰素γ-诱导的蛋白，P02778)；
IRPR(IFRD1，O00458)；异戊酰-CoA脱氢酶(IVD，P26440)；I-TAC／CXCL11(O14625)；
角质素19(P08727)；Kim-1(肝炎A病毒细胞受体1，O43656)；L-精氨酸：甘氨酸脒基转移酶(P50440)；瘦素(P41159)；脂笼蛋白2(NGAL，P80188)；MCP-1(P13500)；MIG(γ干扰素诱导的单核因子Q07325)；MIP-1a(P10147)；MIP-3a(P78556)；MIP-1beta(P13236)；
MIP-1d(Q16663)；NAG(N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷酶，P54802)；有机离子转运(OCT2，O15244)；骨保护素(O14788)；P8蛋白(O60356)；纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1，P05121)；ProANP(1-98)(P01160)；蛋白质磷酸酶 1-β(PPI-beta，P62140)；Rab GDI-β(P50395)；肾激肽释放酶(Q86U61)；整体膜蛋白的RT1.B-1(α)链(Q5Y7A8)；可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员1A(sTNFR-I，P19438)；可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员(sTNFR-II，P20333)；金属蛋白酶3的组织抑制剂(TIMP-3，P35625)；uPAR(Q03405)。

[0297] 可与本发明的肾损伤标记物分析结果合并的其他临床指标包括人口统计学信息(例如，重量、性别、年龄、种族)、医疗历史(例如，家族史，手术类型，预存在的疾病，例如动脉瘤，充血性心力衰竭，先兆子痫，惊厥，糖尿病，高血压，冠状动脉疾病，蛋白尿，肾功能不全或败血症，暴露于毒素，所述毒素例如NSAID，环孢菌素，他克莫司，氨基糖苷，膦甲酸，乙二醇，血红素，肌球素，异环磷酰胺，重金属，甲氨蝶呤，射线不透过的造影剂或链脲霉素)、临床变量(例如，血压，体温，呼吸速率)，风险分数(APACHE分数，PREDICT分数，用于UA／USTEMI的TIMI风险分数，Framingham风险分数)，尿总蛋白测量，肾小球过滤速度，估算的肾小球过滤速度，尿量，血清或血浆肌酸酐浓度，肾乳头状抗原1(RPA1)测量，肾乳头状抗原2(RPA2)测量，尿肌酸酐浓度，钠排泄分数，尿素钠浓度，尿肌酸酐与血清或血浆肌酸酐的比例，尿比重，尿渗透浓度，尿素氮与血浆尿素氮的比例，血浆BUN与肌酸酐的比例，和／或肾衰竭指数估算为尿素钠／(尿肌酸酐／血浆肌酸酐)。可与肾损伤标记物分析结果合并的其他测量在下面描述并且在Harrison’s Principles of Internal thMedicine，17 Ed.，McGraw Hill，NewYork，第1741-1830页中描述以及在Current Medical th
Diagnosis&Treatment2008，47 Ed，McGraw Hill，New York，第785-815页中描述，其每一个的全部内容在此通过引用并入本文。

[0298] 以这种方式合并分析结果/临床指标可包括使用多元log回归，log线性模拟，神经网络分析，n-of-m分析，分层决定图，等等。这种列表不意味着限定。

[0299] 急性肾衰竭的诊断

[0300] 如上所述，本文使用的术语“急性肾损伤”和“急性肾衰竭”部分根据相对于基线值的血清肌酸酐的变化来定义。ARF的大多数定义具有常见元素，包括血清肌酸酐的使用和尿输出量。患者可能患有肾功能不全而没有可获得的用于比较的肾功能基线测量。在这种事件中，一个方法可通过假设患者起始具有正常GFR来估算基线血清肌酸酐。肾小球过滤速度(GFR)是每单位时间由肾小球毛细血管过滤进入Bowman氏胶囊的液体的体积。肾小球过滤速度(GFR)可通过测量任何化学物质来估算，所述化学物质在血液中具有稳定的水平并且被自由地过滤不被再吸收也不被肾排泄。GFR通过以ml／分钟的单位来表达：

[0301]

[0302] 通过将GFR标准化为体表面积，可假设GFR大约为75-100ml／分钟每1.73m2。因此，测量速度是源于可估算的血液的体积的尿中的物质的量。

[0303] 有许多不同的技术用于估算或评估肾小球过滤速度(GFR或eGFR)。然而，在临床实践中，肌酸酐清除被用于测量GFR。肌酸酐本质上由身体产生(肌酸酐是肌酸的代谢产物，其在肌肉中发现)。其通过肾小球自由过滤，但少量被肾小管排泄，这样肌酸酐清除过高评价了GFR10％至20％。这种误差幅度是可接受的，认为测量了肌酸酐清除所带有的滤液。

[0304] 肌酸酐清除(CCr)可被估算，如果肌酸酐的尿浓度值(Ucr)、尿流速(V)和肌酸酐血浆浓度(Pcr)是已知的。因为产生的尿浓度和尿流速产生了肌酸酐的排泄速度，肌酸酐清除也可被称为其排泄速度(UcrXV)除以血浆浓度。这通常用下面的数学式来表示：

[0305]

[0306] 通常进行24小时尿采集，从空膀胱一个早晨至下一个早晨的膀胱内含物，然后与血液测试比较：

[0307]

[0308] 为了允许比较不同体型的人的结果，CCr通过被校正为体表面积(BSA)并且表达2
为与平均体型的男人比较的ml／分钟／1.73m。然而，大多数成人具有接近1.7(1.6-1.9)的BAS，基本上肥胖或苗头的患者应具有由他们的实际BSA校正的CCr：

[0309]

[0310] 肌酸酐清除测量(甚至当采集完全时)的精确度受到限制，因为肾小球过滤速度下降，肌酸酐排泄增加，并且因此，血清肌酸酐的上升较少。因此，肌酸酐排泄远大于过滤载荷，导致GFR潜在地大的过度估计(两倍大的差异)。然而，为了临床目的，重要的是确定肾功能是否稳定或恶化或好转。这通常通过单独检测血清肌酸酐来确定。如同血清肌酸酐清除一样，血清肌酸酐不会准确反映ARF的非稳定状态症状的GFR。尽管如此，相对于基线的血清肌酸酐的变化程度会反映GFR的变化。血清肌酸酐易于并且容易地测量，其对肾功能是特异性的。

[0311] 为了基于mL／kg／小时来确定尿输出量的目的，以小时地来采集和测量尿是足够的。在这种情况下，例如，仅仅可获得积累的24小时的输出量，没有提供患者体重，已描述较小改变的RIFLE尿输出量指标。例如，Bagshaw etal.，Nephrol.Dial.Transplant.23：1203-1210，2008，假设患者平均体重70kg，患者对应于RIFLE分级基于下列：＜35mL／h(危险)，＜21mL／h(损伤)或＜4mL／h(衰竭)。

[0312] 选择治疗方案

[0313] 一旦获得诊断，临床医师可易于选择治疗方案，其与诊断兼容，例如起始肾替代治疗，消除已知的对肾脏损害的化合物的递送，肾移植，延迟或避免已知的对肾脏损害的程序，修改利尿剂给药，起始目标导向治疗，等等。本领域技术人员意识到所讨论的用于多种疾病的合适的治疗与本文所述的诊断方法相关。参见例如，Merck Manual of Diagnosis and Therapy，17th Ed.Merck Research Laboratories，Whitehouse Station，NJ，1999。此外，因为本文所述的方法和组合物提供了预后信息，本发明的标记物可用于检测治疗过程。例如，改善或恶化的预后状态可说明特定的治疗是否有效。

[0314] 本领域技术人员易于理解的是本发明完全适于对客体实施并且获得所述的结果和优点，并且那些是其固有的。本文提供实施例来代表优选的实施方式，本文提供实施例是举例说明并不意在限定本发明的范围。

[0315] 实施例1：对比剂诱导的肾病样品采集

[0316] 该样品采集研究的目的是从患者接受血管内造影介质之前和之后采集血浆样品和尿样品以及临床数据。约250个接受放射性成像／血管造影术步骤的的成人参与，所述放射性成像／血管造影术步骤包括血管内施用碘化的对比介质。为了参与此研究，每个患者必须符合下列选择标准并且不符合下列排除标准：

[0317] 选择标准

[0318] 18岁或年龄更大的男性和女性；

[0319] 经历了放射性成像／血管造影步骤(例如，CT扫描或冠状动脉介入)，包括血管内施用对比介质；

[0320] 期望在对比剂施用后入院至少48小时。

[0321] 能够并且会提供书写的知情同意书用于参与研究并且遵守所有研究步骤。

[0322] 排除标准

[0323] 肾移植接受者；

[0324] 在对比剂步骤之前肾功能急性恶化；

[0325] 已接受透析(急性或慢性)或在参与时即将需要透析；

[0326] 预期会经过重大手术过程(例如心肺体外循环)或额外的使用对比介质的成像步骤具有在施用对比剂后48小时内进一步肾损伤的显著风险；

[0327] 前30天内参与具有实验治疗的介入临床研究；

[0328] 已知感染了人免疫缺陷病毒(HIV)或肝炎病毒。

[0329] 在第一次施用对比剂之前(和任何预先步骤水合作用之后)立即从每个患者采集EDTA抗共轭血液样品(10mL)和尿样品(10mL)。然后在标记对比剂的步骤过程中，将血液和尿样品在最后施用对比介质之后4(±0.5)小时，8(±1)小时，24(±2)小时，48(±2)小时和72(±2)小时采集。通过直接静脉穿刺或通过其他可获得的静脉通路，例如存在的股鞘，中心静脉线，外周血管内线或hep-lock来采集血液。这样研究的血液样品在临床位置被处理成血浆，冷冻并运输到Astute Medical，Inc.，San Diego，CA。研究尿液样品被冷冻并运输到Astute Medical，Inc。

[0330] 在第一次施用对比剂之前(任何预步骤水合作用之后)立即在现场使用血清肌酸酐，并且在最后施用对比剂之后4(±0.5)小时，8(±1)小时，24(±2)小时，48(±2)小时和72(±2)小时(理想地在获得研究样品的相同时间)立即使用血清肌酸酐。此外，每个患者的状态通过第30天的相关的额外血清肌酸酐测量和尿肌酸酐测量来评估，需要透析，入院状态和不利的临床结果(包括死亡)。

[0331] 施用对比剂之前，每个患者对应于基于下列评估的风险：收缩压＜80mm Hg＝5分；主动脉内囊反球泵＝5分；充血性心力衰竭(分级III-IV或肺水肿历史)＝5分；年龄＞75岁＝4分；血球容量计水平男性＜39％女性＜35％＝3分；糖尿病＝3分；100mL对比介质体积＝1分；血清肌酸酐水平＞1.5g／dL＝4分或估计的GFR40-60mL／min／2 2 2
1.73m ＝2分，20-40mL／min／1.73m ＝4分，＜20mL／min／1.73m ＝6分.该风险被对应为如下：CIN和透析的风险：5或较少的总分＝CIN风险-7.5％，透析风险-0.04％；
6-10总分＝CIN风险-14％，透析风险-0.12％；11-16总分＝CIN风险-26.1％，透析风险-1.09％；总分＞16＝CIN风险-57.3％，透析风险-12.8％。

[0332] 实施例2：心脏手术样品采集

[0333] 该样品采集研究的目的是采集血浆和尿样品以及经过心血管手术(已知潜在地损伤肾功能的步骤)之前和之后的患者的临床数据。大约900位经历了这种手术的成人参与。为了参与该研究，每个患者必须符合所有的下列选择标准并且不符合排除标准：

[0334] 选择标准

[0335] 18岁或年龄更大的男性和女性；

[0336] 经历了心血管手术；

[0337] Toronto／Ottawa预测风险指数的肾替换风险分数至少为2(wijeysundera et a1.，JAMA297：1801-9，2007)；以及

[0338] 能够并且会提供书写的知情同意书用于参与研究并且遵守所有研究步骤。

[0339] 排除标准

[0340] 已怀孕；

[0341] 先前肾移植；

[0342] 参与之前急性肾功能恶化(例如，任何种类的RIFLE指标)；

[0343] 已经接受透析(急性或慢性)或在参与时马上需要透析；

[0344] 目前参与另一临床研究或预期会在七天内参与心脏手术的另一临床研究，包括药物灌注或AKI治疗介入；

[0345] 已知感染了人免疫缺陷病毒(HIV)或肝炎病毒。

[0346] 在第一切口(以及任何预步骤水合作用之后)之前3小时内，从每个患者采集EDTA抗-共轭血液样品(10mL)，全血(3mL)以及尿样品(35mL)。任何在手术之后4(±0.5)小时，8(±1)小时，24(±2)小时，48(±2)小时采集血液和尿样品，如果受试者在医院内然后在第三天每天采集经过七天。通过直接静脉穿刺或通过其他可获得的静脉通路(例如，存在的股鞘，中心静脉线，外周血管内线或hep-lock)来采集血液。这样研究的血液样品被冷冻并运输到Astute Medical，Inc.，San Diego，CA。研究尿液样品被冷冻并运输到Astute Medical，Inc。

[0347] 实施例3：急性疾病受试者样品采集

[0348] 本研究的目的是从急性疾病患者中采集样品。预期会在ICU持续至少48小时的约900位成人参与。为了参与研究，每个患者必须符合所有下列选择标准并且不符合排除标准：

[0349] 选择标准

[0350] 18岁或年龄更大的男性和女性；

[0351] 研究群体1：具有下列症状中的至少一种的300位患者：

[0352] 休克(SBP＜90mmHg和／或需要升压药支持以维持MAP＞60mmHg和／或记录的SBP下降至少为40mmHg)；以及

[0353] 败血症；

[0354] 研究群体2：具有下列症状中的至少一种的300位患者：

[0355] 参与者在计算机遗嘱输入(CPOE)中记录了规定的24小时内IV抗生素；

[0356] 参与者在24小时内暴露于对比介质；

[0357] 腹内压增加伴有急性失代偿性心里衰竭；以及

[0358] 由于先前严重外伤的原因进入ICU并且可能需要在ICU入院48小时；

[0359] 研究群体3：约300位患者

[0360] 预期通过加强护理(ICU或ED)入院伴有已知的风险因素和急性肾损伤(例如，败血症、低血压／休克(休克＝收缩BP＜90mmHg和／或需要升压药支持以维持MAP＞60mmHg和／或记录的SBP降低＞40mmHg)，严重创伤、出血或重大手术)；和／或预期会入院ICU至少24小时。

[0361] 排除标准

[0362] 已怀孕；

[0363] 公共机构照顾的个体；

[0364] 参与之前急性肾功能恶化(例如，任何种类的RIFLE指标)；

[0365] 参与前5天内接受透析(急性或慢性)或在参与时马上需要透析；

[0366] 已知感染了人免疫缺陷病毒(HIV)或肝炎病毒；

[0367] 仅仅符合SBP＜90mmHg所包含的上述标准，主治医师或研究者的意见中没有休克。

[0368] 在提供知情同意书之后，从每个患者采集EDTA-抗共轭血液样品(10mL)和尿样品(25-30mL)。然后在施用对比剂(如果用了的话)之后4(±0.5)和8(±1)小时采集血液和尿样品，在参与后12(±1)，24(±2)，和48(±2)小时采集血液和尿样品，并且由此每天至第7天至第14天，当受试者住院时。通过直接静脉穿刺或通过其他可获得的静脉通路(例如，存在的股鞘，中心静脉线，外周血管内线或hep-lock)来采集血液。这样研究的血液样品被临床处理为血浆，冷冻并运输到Astute Medical，Inc.，San Diego，CA。研究尿液样品被冷冻并运输到Astute Medical，Inc。

[0369] 实施例4.免疫分析格式

[0370] 使用标准三明治酶免疫分析技术来测量分析物。与分析物结合的第一抗体被固定在96孔聚苯乙烯微孔板的孔内。分析物标准和测试样品被滴入合适的孔内并且任何分析物被固定的抗体包围。冲洗除去未包围的物质之后，向孔内加入山葵过氧化物酶-共轭第二抗体，其余分析物结合，由此与分析物形成三明治复合物(如果存在的话)和第一抗体。冲洗除去任何未包围的抗体-酶试剂之后，将含有四甲基联苯胺和过氧化氢的基质溶液加至孔中。色带展开与样品中存在的分析物的量成比例。色带展开停止，并且在540nm或570nm测量色带。分析物浓度对应于测试样品，与通过分析物标准测量的标准曲线来比较。

[0371] 下列样品中的浓度表达如下：细胞质天冬氨酸氨基转移酶-μg／mL、可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员5(“CD40”)-ng／mL、可溶性CD40配体-ng／mL、可溶性C-X-C模体趋化因子16-ng／mL、S100-A12(“EN-RAGE”)-ng／mL、嗜酸细胞活化趋化因子-pg／mL、可溶性E-选择蛋白-ng／mL、纤连蛋白-ng／mL、粒细胞集落刺激因子-pg／mL、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子-pg／mL、肝素结合生长因子2-pg／mL、可溶性肝细胞生长因子受体-pg／mL、白细胞介素-1受体拮抗剂-pg／mL、白细胞介素-1β-pg／mL、白细胞介素-10-pg／mL、白细胞介素-15-ng／mL、白细胞介素-3-ng／mL、髓过氧化物酶-ng／mL、巢蛋白-1-pg／mL、可溶性氧化低密度脂蛋白受体1-ng／mL、Pappalysin-1-mIU／mL、可溶性P-选择蛋白糖蛋白配体1-U／mL、抗白细胞蛋白酶(“分泌性白细胞肽酶抑制剂”)-pg／mL、可溶性Kit配体(“干细胞因子”)-pg／mL、金属蛋白酶组织抑制剂1-ng／mL、金属蛋白酶组织抑制剂2-pg／mL、可溶性肿瘤坏死因子-pg／mL、可溶性血管细胞粘附分子1-ng／mL和血管内皮生长因子A-pg／mL。

[0372] 实施例5.明显的健康供体和慢性疾病患者样品

[0373] 来自没有已知的慢性或急性疾病的供体的人类尿样品从两个供应商购买(Golden West Biologicals，Inc.，27625Commerce Center Dr.，Temecula，CA92590 和 Virginia Medical Research，Inc.，915First Colonial Rd.，Virginia Beach，VA23454)。尿样品运输并冷冻储存在低于-20℃。供应商提供的每个供体的人口统计学信息包括性别，种族(黑人／白人)，吸烟状态和年龄。

[0374] 来自患有各种慢性疾病的供体的人类尿样品购自Virginia Medical Research，Inc.，915First Colonial Rd.，Virginia Beach，VA23454，所述慢性疾病包括充血性心力衰竭，冠状动脉疾病，慢性肾疾病，慢性阻塞性肺疾病，糖尿病和高血压。该尿样品被运输并冷冻储存在低于20℃条件下。销售商提供带有单独供体的年龄、性别、种族(黑人／白人)，吸烟状态，酒精使用，身高，体重，慢性病诊断，目前的药物和先前的手术情况的病例报告表。

[0375] 实施例6.用于评估RIFLE0期的患者的肾状态的肾损伤标记物

[0376] 基于通过RIFLE标准确定参与的在7天内达到的最大期，加强护理部(ICU)的患者根据肾状态被分为没有损伤(0)，损伤风险(R)，损伤(I)以及衰竭(F)。

[0377] 限定了两群患者，(第一群)患者的发展没有超过0期，(第二群)患者在十天内达到了R，I或F期。为了表达在ICU中的患者中所发生的正常标记物波动以及由此评估标记物对于监测AKI状态的实用性，采集第一群患者尿样品中的标记物水平。测量来自达到第二群患者的R，I，或F期之前0小时，24小时，48小时患者的尿样品中的标记物浓度。在下列表格中，“最大期之前”时间表示在这时采集样品，相对于特定患者达到最低疾病期之前的时间，将其分成+／-12小时的三组。例如，该实例(0对R，I，F)之前24小时是指达到R期(或I，如果没有样品在R期，或F，如果没有样品在R或I期)之前24小时(+／-12小时)。

[0378] 使用商用的分析试剂通过标准免疫分析法来测量每个标记物。产生接受者操作特这(ROC)曲线并且确定每个ROC曲线下面积(AUC)。第二群中的患者根据基于血清肌酸酐测量(sCr)，基于尿输出量(UO)或基于血清肌酸酐测量或尿输出量的判断为R，I或F期的原因来分开。即，对于那些基于单独的血清肌酸酐测量而被判断为R，I或F期的患者而言，0期群体可具有所包括的基于尿输出量被判断为R，I或F期的患者，对于那些基于单独的尿输出量被判断为R，I或F的患者而言，0期全体可具有所包括的基于血清肌酸酐测量被判断为R，I或F期的患者，以及对于那些基于血清肌酸酐测量或尿输出量被判断为R，I或F期的患者而言，0期群体仅仅包括基于血清肌酸酐和尿输出量处于0期的患者。而且，对于那些基于血清肌酸酐测量或尿输出量被判断为R，I或F期的患者而言，使用了产生最严重RIFLE期的判断方法。

[0379] 区分第一群(保持为RIFLE0的受试者)和第二群(发展至RIFLE R、I或F的受试者)的能力使用ROC分析来确定。SE是AUC的标准偏差，n是单个患者的样品数(“pts，”如所示)。标准偏差如Hanley，J.A.，and McNeil，B.J.，The meaning and use of the area under a receiver operating characteristic(ROC)curve.Radiology(1982)143：29-36中所述那样计算；p值使用双尾Z-检验计算。AUC＜0.5表示用于比较的负向标记物，并且AUC＞0.5表示用于比较的正向标记物。

[0380] 选择各种阈值(或“截断”)浓度，并且确定用于区分第一群和第二群的相关灵敏度和特异性。OR是计算用于特定截断浓度的奇数比，并且95％CI是用于奇数比的置信区间。

[0381] 本发明的各种标记物的这些情况的三个分析的结果展现在图1中。

[0382] 实施例7.用于评估RIFLE0和R期的患者的肾状态的肾损伤标记物

[0383] 如实施例6中所述的那样将患者分类并进行分析。然而，达到R期但是没有发展至I或F期的患者和来自第一群中的没有损伤0期的患者分组在一起。在该实施例中的第二群仅包括发展至I或F期的患者。对于第一群，包括尿液样品中的标记物浓度。对于第二群，包括在达到I或F期之前在0小时、24小时和48小时内收集的尿液样品中的标记物浓度。

[0384] 区分第一群(保持为RIFLE0或R的受试者)和第二群(发展至RIFLE I或F的受试者)的能力使用ROC分析来确定。

[0385] 选择各种阈值(或“截断”)浓度，并且确定用于区分第一群和第二群的相关灵敏度和特异性。OR是计算用于特定截断浓度的奇数比，并且95％CI是用于奇数比的置信区间。

[0386] 本发明的各种标记物的这些情况的三个分析的结果展现在图2中。

[0387] 实施例8.用于评估从R期发展至I和F期的患者的肾状态的肾损伤标记物[0388] 如实施例6中所述的那样将患者分类并进行分析，但是该实施例中仅包括达到R期的那些患者。第一群包括达到R期但是在10天内没有发展至I或F期的患者，并且第二群仅包括发展至I或F期的患者。对于第一群和第二群的分析，都包括达到R期12小时内收集的尿液样品中的标记物浓度。

[0389] 区分第一群(保持为RIFLE R的受试者)和第二群(发展至RIFLE I或F的受试者)的能力使用ROC分析来确定。

[0390] 选择各种阈值(或“截断”)浓度，并且确定用于区分第一群和第二群的相关灵敏度和特异性。OR是计算用于特定截断浓度的奇数比，并且95％CI是用于奇数比的置信区间。

[0391] 本发明的各种标记物的这些情况的三个分析的结果展现在图3中。

[0392] 实施例9.用于评估RIFLE0期的患者的肾状态的肾损伤标记物

[0393] 如实施例6中所述的那样将患者分类并进行分析。然而，从分析中删除达到R或I期但是没有发展至F的患者。来自没有损伤0期的患者包括在第一群。在该实施例中的第二群仅包括发展至F期的患者。对于第一群中的各患者，包括尿液样品中的最大标记物浓度。对于第二群中的各患者，包括在达到F期之前在0小时、24小时和48小时内收集的尿液样品中的最大标记物浓度。

[0394] 区分第一群(保持为RIFLE0或R的受试者)和第二群(发展至RIFLE I或F的受试者)的能力使用ROC分析来确定。

[0395] 选择各种阈值(或“截断”)浓度，并且确定用于区分第一群和第二群的相关灵敏度和特异性。OR是计算用于特定截断浓度的奇数比，并且95％CI是用于奇数比的置信区间。

[0396] 本发明的各种标记物的这些情况的三个分析的结果展现在图4中。

[0397] 实施例10.用于评估RIFLE0期的患者的肾状态的肾损伤标记物

[0398] 基于通过RIFLE标准确定参与的在7天内达到的最大期，加强护理部(ICU)的患者根据肾状态被分为没有损伤(0)，损伤风险(R)，损伤(I)以及衰竭(F)。

[0399] 限定了两群患者，(第一群)患者的发展没有超过0期，(第二群)患者在十天内达到了R、I或F期。为了表达在ICU中的患者中所发生的正常标记物波动以及由此评估标记物对于监测AKI状态的实用性，在采集第一群的血液样品的血浆组分中测量标记物水平。测量来自达到第二群患者的R、I、或F期之前0小时、24小时和48小时从患者中收集的血液样品的血浆组分中的标记物浓度。在下列表格中，“最大期之前”时间表示在这时采集样品，相对于特定患者达到最低疾病期之前的时间，将其分成+／-12小时的三组。例如，该实例(0对R，I，F)之前24小时是指达到R期(或I，如果没有样品在R期，或F，如果没有样品在R或I期)之前24小时(+／-12小时)。

[0400] 使用商用的分析试剂通过标准免疫分析法来测量每个标记物。产生接受者操作特这(ROC)曲线并且确定每个ROC曲线下面积(AUC)。第二群中的患者根据基于血清肌酸酐测量(sCr)，基于尿输出量(UO)或基于血清肌酸酐测量或尿输出量的判断为R，I或F期的原因来分开。即，对于那些基于单独的血清肌酸酐测量而被判断为R，I或F期的患者而言，0期群体可具有所包括的基于尿输出量被判断为R，I或F期的患者，对于那些基于单独的尿输出量被判断为R，I或F的患者而言，0期全体可具有所包括的基于血清肌酸酐测量被判断为R，I或F期的患者，以及对于那些基于血清肌酸酐测量或尿输出量被判断为R，I或F期的患者而言，0期群体仅仅包括基于血清肌酸酐和尿输出量处于0期的患者。而且，对于那些基于血清肌酸酐测量或尿输出量被判断为R，I或F期的患者而言，使用了产生最严重RIFLE期的判断方法。

[0401] 区分第一群(保持为RIFLE0的受试者)和第二群(发展至RIFLE R、I或F的受试者)的能力使用ROC分析来确定。SE是AUC的标准偏差，n是单个患者的样品数(“pts，”如所示)。标准偏差如Hanley，J.A.，and McNeil，B.J.，The meaning and use of the area under a receiver operating characteristic(ROC)curve.Radiology(1982)143：29-36中所述那样计算；p值使用双尾Z-检验计算。AUC＜0.5表示用于比较的负向标记物，并且AUC＞0.5表示用于比较的正向标记物。

[0402] 选择各种阈值(或“截断”)浓度，并且确定用于区分第一群和第二群的相关灵敏度和特异性。OR是计算用于特定截断浓度的奇数比，并且95％CI是用于奇数比的置信区间。

[0403] 本发明的各种标记物的这些情况的三个分析的结果展现在图5中。

[0404] 实施例11.用于评估RIFLE0和R期的患者的肾状态的肾损伤标记物

[0405] 如实施例10中所述的那样将患者分类并进行分析。然而，达到R期但是没有发展至I或F期的患者和来自第一群中的没有损伤0期的患者分组在一起。在该实施例中的第二群仅包括发展至I或F期的患者。对于第一群，包括血液样品的血浆组分中的标记物浓度。对于第二群，包括在达到I或F期之前在0小时、24小时和48小时内收集的血液样品的血浆组分中的标记物浓度。

[0406] 区分第一群(保持为RIFLE0或R的受试者)和第二群(发展至RIFLE I或F的受试者)的能力使用ROC分析来确定。

[0407] 选择各种阈值(或“截断”)浓度，并且确定用于区分第一群和第二群的相关灵敏度和特异性。OR是计算用于特定截断浓度的奇数比，并且95％CI是用于奇数比的置信区间。

[0408] 本发明的各种标记物的这些情况的三个分析的结果展现在图6中。

[0409] 实施例12.用于评估从R期发展至I和F期的患者的肾状态的肾损伤标记物[0410] 如实施例10中所述的那样将患者分类并进行分析，但是该实施例中仅包括达到R期的那些患者。第一群包括达到R期但是在10天内没有发展至I或F期的患者，并且第二群仅包括发展至I或F期的患者。对于第一群和第二群的分析，都包括达到R期12小时内收集的血液样品的血浆组分中的标记物浓度。

[0411] 区分第一群(保持为RIFLE R的受试者)和第二群(发展至RIFLE I或F的受试者)的能力使用ROC分析来确定。

[0412] 选择各种阈值(或“截断”)浓度，并且确定用于区分第一群和第二群的相关灵敏度和特异性。OR是计算用于特定截断浓度的奇数比，并且95％CI是用于奇数比的置信区间。

[0413] 本发明的各种标记物的这些情况的三个分析的结果展现在图7中。

[0414] 实施例13.用于评估RIFLE0期的患者的肾状态的肾损伤标记物

[0415] 如实施例10中所述的那样将患者分类并进行分析。然而，从分析中删除达到R或I期但是没有发展至F的患者。来自没有损伤0期的患者包括在第一群。在该实施例中的第二群仅包括发展至F期的患者。对于第一群中的各患者，包括血液样品的血浆组分中的最大标记物浓度。对于第二群中的各患者，包括在达到F期之前在0小时、24小时和48小时内收集的血液样品的血浆组分中的最大标记物浓度。

[0416] 区分第一群(保持为RIFLE0或R的受试者)和第二群(发展至RIFLE I或F的受试者)的能力使用ROC分析来确定。

[0417] 选择各种阈值(或“截断”)浓度，并且确定用于区分第一群和第二群的相关灵敏度和特异性。OR是计算用于特定截断浓度的奇数比，并且95％CI是用于奇数比的置信区间。

[0418] 本发明的各种标记物的这些情况的三个分析的结果展现在图8中。

[0419] 当本发明已被以足以让本领域技术人员制备和使用的细节来描述或举例说明时，在不背离本发明的实质和范围的条件下，各种变更，改变和改进应当是显而易见的。本文提供的实施例代表了优选的实施方式，其是举例说明并无意限定本发明的范围。其中的变化和其他用途会对本领域技术人员发生。这些变化被包括在本发明的实质内并且由权利要求来限定。

[0420] 在不背离本发明的实质和范围的情况下，所作出的不同的替代和改变对于本领域技术人员而言是显而易见的。

[0421] 本发明中提到的所有专利和公开出版物表明了本领域普通技术人员的水平。所有专利和公开出版物在此通过引用并入本文，其引用程度与单独地和独立地引用每个公开出版物相同。

[0422] 在此示范性地描述的本发明可合适地在不存在任何元素，限制条件下实践。因此，例如本文每个实例中的术语“包括”“基本包括”“构成”可用其他两个术语来代替。所使用的术语和表达仅仅是用作描述而不是限定，无意以使用这些术语和表达(除了任何所显示的和描述的特征的等同或部分)的方式来限定，应当意识到在本发明要求保护的范围内各种变化是可能的。因此，应当理解的是虽然本发明已通过优选的实施方式和任选的特征来具体公开，但是本领域技术人员可对本文公开的概念进行变更和改变，并且这些变更和改变被认为是在所附的权利要求限定的本发明的范围内。

[0423] 其他实施方式列举在下列权利要求范围内。

标题	发布/更新时间	阅读量
生物学指导的适应性治疗方案制定	2020-05-12	902
使用抗NKG2A抗体的治疗方案	2020-05-12	182
治疗中风后尿失禁的一种治疗方案	2020-05-11	99
治疗法布里病的给药方案	2020-05-12	590
治疗方案推荐方法和系统	2020-05-12	309
患者定制的治疗方案	2020-05-11	477
使用多种药剂的治疗方案	2020-05-13	459
诊断、预后、治疗和筛选方案	2020-05-13	922
2型糖尿病的治疗方案	2020-05-11	116
治疗方案	2020-05-11	464

用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物

用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物

背景技术

该功能需要专业版企业版VIP权限，您可以：