从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法
阅读：1021发布：2020-05-11
专利汇可以提供从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种从 洛伐他汀 结晶母液中回收洛伐他汀的方法。该方法包括：1)将洛伐他汀结晶母液进行浓缩，以去除其中的 有机 溶剂 ；2)将步骤1)得到的浓缩液进行 碱 性 水 解 ，使其中的洛伐他汀发生开环反应，得到含有溶于水的洛伐酸盐的水解液；3)向水解液中加入第一沉淀剂，使其中的胶体杂质沉淀，过滤并收集所得滤液；4)向滤液中加入第二沉淀剂，使所述的溶于水的洛伐酸钠盐转化为不溶于水的洛伐酸盐，过滤并收集所得沉淀；5)将沉淀进行 有机溶剂 萃取，得到萃取液；6)将萃取液进行环化反应；7)将环化后的萃取液浓缩、结晶，从而得到洛伐他汀。本发明可降低洛伐他汀的生产成本，适于工业化连续生产。，下面是从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法专利的具体信息内容。
1.一种从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法，该方法包括：
1)将洛伐他汀结晶母液进行浓缩，以去除其中的有机溶剂，得到浓缩液；
2)将步骤1)得到的浓缩液进行碱性水解，使其中的洛伐他汀发生开环反应，得到含有溶于水的洛伐酸盐的水解液；
3)向步骤2)得到的水解液中加入第一沉淀剂，使其中的胶体杂质发生沉淀，过滤并收集所得滤液，其中，所述第一沉淀剂为选自聚合氯化铝、聚合硫酸铁、聚合硫酸铝铁中的一种或几种；
4)向步骤3)得到的滤液中加入第二沉淀剂，使该滤液中所述的溶于水的洛伐酸盐转化为不溶于水的洛伐酸盐而沉淀，过滤并收集所得沉淀，其中，所述第二沉淀剂为氯化钙和/或氯化铝；
5)将步骤4)得到的沉淀进行有机溶剂萃取，得到萃取液；
6)将步骤5)得到的萃取液进行环化反应；
7)将步骤6)得到的环化后的萃取液浓缩、结晶，从而得到洛伐他汀。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的步骤1)中的所述浓缩包括：在温度为
70-80℃的条件下进行真空浓缩。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述的步骤2)中，所述碱性水解包括：向所述浓缩液中加入碱溶液，并使所得水解液的总体积为所述洛伐他汀结晶母液的体积的
2.0-3.0倍，以及使所述水解液的pH值为8.0-9.5，并且在温度为70-80℃的条件下反应
1.5-2.5小时。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述的步骤3)中，还向所述水解液中加入第一助滤剂和絮凝剂。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述的第一助滤剂为珍珠岩粉或硅藻土。
6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述的絮凝剂为聚丙烯酰胺。
7.根据权利要求4所述的方法，其中，将加入所述第一沉淀剂以及所述第一助滤剂和所述絮凝剂后的所述水解液在温度为20-45℃的条件下反应1.5-2.5小时。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述的步骤4)中，还向步骤3)得到的所述滤液中加入第二助滤剂。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述的第二助滤剂为珍珠岩粉或硅藻土。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述步骤5)中，采用醋酸丁酯和/或乙酸乙酯进行所述的有机溶剂萃取。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述的步骤6)中，所述环化反应包括：将步骤5)得到的所述萃取液进行酸化，然后在温度为70-90℃的条件下回流2.0-2.5小时。
12.根据权利要求1所述的方法，其中，所述洛伐他汀结晶母液为将洛伐他汀发酵液经一次结晶处理后得到的结晶母液。
从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及洛伐他汀生产工艺领域，具体而言，涉及一种从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法。
背景技术
[0002] 洛伐他汀(Lovastatin)是微生物来源的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂类降胆固醇药物，因其作用机理明确，临床疗效显著，是目前临床上重要的防治心脑血管疾病(如动脉粥样硬化和冠心病)药物。洛伐他汀是真菌的次生代谢产物，工业上主要的产生菌有土曲霉(Aspergillus terreus)、桔青霉(Penicillium citrinum)和红曲霉(Monascus ruber)。
[0003] 洛伐他汀的化学名称为：(S)-2-甲基丁酸-(1S，3R，7S，8S，8aR)-1，2，3，7，8，8a-6H-3，7-二甲基-8-(2-((2R，4R)-4-羟基-6氧代-2H-四氢吡喃基)-乙基)-1-萘酯。
洛伐他汀的分子式为C24H36O5，分子量为404.55，结构式为：
洛伐他汀的分子式为C24H36O5，分子量为404.55，结构式为：
[0004]
[0007] 1.通过对洛伐他汀发酵液进行酸化、絮凝等预处理，使洛伐他汀保留在菌丝体内，通过过滤获得含洛伐他汀的菌渣；利用有机溶媒对菌渣进行萃取，获得萃取液，对萃取液进行浓缩、结晶、分离得洛伐他汀粗品和结晶母液；对粗品进行重结晶得洛伐他汀成品。
[0008] 2.通过对洛伐他汀发酵液进行碱性水解处理，使菌丝壁破坏，洛伐他汀水解为开环的洛伐酸结构，转变为水溶性，进入水相；通过过滤，收集滤液，对滤液进行酸化沉淀处理，过滤收集沉淀物；利用有机溶媒对沉淀进行萃取，获得萃取液，对萃取液进行浓缩、结晶、分离得洛伐他汀粗品和结晶母液；对粗品进行重结晶得洛伐他汀成品。
[0009] 以上两种洛伐他汀的提取工艺对萃取液均未进行有效的纯化处理，而大量的脂溶3
性杂质又进入了有机结晶母液中。每生产一吨洛伐他汀成品会产生4.5-5.5m 的结晶母液，同时结晶母液中含有大量的洛伐他汀，洛伐他汀单位在30000U/ml以上。而通过对结晶母液进行简单的二次浓缩结晶，只能回收极少部分洛伐他汀。因此目前的提取工艺将结晶母液作为生产废弃物处理掉，达不到有效回收的目的，提取收率低下。如果能够对洛伐他汀结晶母液中的洛伐他汀进行有效回收，就能显著提高提取效率，大大降低洛伐他汀的生产成本。
性杂质又进入了有机结晶母液中。每生产一吨洛伐他汀成品会产生4.5-5.5m 的结晶母液，同时结晶母液中含有大量的洛伐他汀，洛伐他汀单位在30000U/ml以上。而通过对结晶母液进行简单的二次浓缩结晶，只能回收极少部分洛伐他汀。因此目前的提取工艺将结晶母液作为生产废弃物处理掉，达不到有效回收的目的，提取收率低下。如果能够对洛伐他汀结晶母液中的洛伐他汀进行有效回收，就能显著提高提取效率，大大降低洛伐他汀的生产成本。
[0010] 在目前的关于洛伐他汀的生产工艺的专利文献中，均未涉及到从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法。其它科技文献中，仅已知一篇对洛伐他汀母液回收工艺的探讨性报道，即华北制药集团王健等人在2008年中国药学会学术年会上发表的学术论文：洛伐他汀的母液回收工艺研究。
[0011] 上述论文阐述了将洛伐他汀的结晶母液直接进行碱性开环，利用大孔树脂进行分离纯化，用大量的乙醇作解析液，对解析进行乙醇回收后酸化，进行有机萃取、过度浓缩、热溶结晶得洛伐他汀粗品。
[0012] 该方法在回收过程中使用了大量的大孔树脂、大量的乙醇等有机溶媒，回收过程中溶媒消耗高，安全环保压力大；且只回收生产到洛伐他汀的粗品，对进一步的精制工艺未进行探讨，不能确定最终的回收成品质量，能否达到合格的洛伐他汀的质量要求，还不能应用于工业化的试生产。
发明内容
[0013] 为解决上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法。
[0014] 具体而言，本发明提供：
[0015] (1)一种从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法，该方法包括：
[0017] 2)将步骤1)得到的浓缩液进行碱性水解，使其中的洛伐他汀发生开环反应，得到含有溶于水的洛伐酸盐的水解液；
[0018] 3)向步骤2)得到的水解液中加入第一沉淀剂，使其中的胶体杂质发生沉淀，过滤并收集所得滤液；
[0019] 4)向步骤3)得到的滤液中加入第二沉淀剂，使该滤液中所述的溶于水的洛伐酸盐转化为不溶于水的洛伐酸盐而沉淀，过滤并收集所得沉淀；
[0020] 5)将步骤4)得到的沉淀进行有机溶剂萃取，得到萃取液；
[0021] 6)将步骤5)得到的萃取液进行环化反应；
[0022] 7)将步骤6)得到的环化后的萃取液浓缩、结晶，从而得到洛伐他汀。
[0024] (3)根据(1)所述的方法，其中，在所述的步骤2)中，所述碱性水解包括：向所述浓缩液中加入碱溶液，并使所得水解液的总体积为所述洛伐他汀结晶母液的体积的2.0-3.0倍，以及使所述水解液的pH值为8.0-9.5，并且在温度为70-80℃的条件下反应
1.5-2.5小时。
1.5-2.5小时。
[0026] (5)根据(1)或(4)所述的方法，其中，在所述的步骤3)中，还向所述水解液中加入第一助滤剂和絮凝剂，其中所述的第一助滤剂优选为珍珠岩粉或硅藻土，所述的絮凝剂优选为聚丙烯酰胺；优选地，将加入所述第一沉淀剂以及所述第一助滤剂和所述絮凝剂后的所述水解液在温度为20-45℃的条件下反应1.5-2.5小时。
[0027] (6)根据(1)所述的方法，其中，所述第二沉淀剂为氯化钙和/或氯化铝。
[0028] (7)根据(1)或(6)所述的方法，其中，在所述的步骤4)中，还向步骤3)得到的所述滤液中加入第二助滤剂，其中所述的助滤剂优选为珍珠岩粉或硅藻土。
[0029] (8)根据(1)所述的方法，其中，在所述步骤5)中，采用醋酸丁酯和/或乙酸乙酯进行所述的有机溶剂萃取。
[0030] (9)根据(1)所述的方法，其中，在所述的步骤6)中，所述环化反应包括：将步骤5)得到的所述萃取液进行酸化，然后在温度为70-90℃的条件下回流2.0-2.5小时。
[0031] (10)根据(1)所述的方法，其中，所述洛伐他汀结晶母液为将洛伐他汀发酵液经一次结晶处理后得到的结晶母液。
[0032] 本发明的方法与现有技术相比具有以下优点和积极效果：
[0033] 本发明首次从洛伐他汀结晶母液中提取出符合CP版质量要求的洛伐他汀产品，并且将洛伐他汀生产的提取收率提高了4-6个百分点，大大降低洛伐他汀的生产成本。通过对洛伐他汀结晶母液的二次沉淀除杂质，大大提高了萃取液的质量，采用较低温度进行催化环化，减少了在环化过程中生产的杂质，提高了洛伐他汀粗品的质量。本方法回收的洛伐他汀纯度在98.5％以上，单一杂质的最大含量＜0.3％，一般在0.15％左右，产品质量符合CP版的质量标准，回收的收率高；回收生产条件对设备的要求不高，适于工业化连续生产。
具体实施方式
[0034] 以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
[0035] 本发明所述的“洛伐他汀结晶母液”是将洛伐他汀发酵液经一次结晶处理后得到的结晶母液。这种结晶处理可以是本领域通常采用的方法。
[0036] 例如，可以将洛伐他汀的发酵液酸化，过滤得到含洛伐他汀的菌渣；利用有机溶媒对菌渣进行萃取，获得萃取液，对萃取液进行浓缩、结晶，得到洛伐他汀粗品，分离洛伐他汀粗品后的液体为结晶母液，即洛伐他汀结晶母液。优选地，将洛伐他汀的发酵液用盐酸调pH值至2.5-3.5，过滤收集菌渣；将菌渣用醋酸丁酯萃取，分离收集有机相，将有机相进行浓缩，降温结晶，离心分离得到洛伐他汀粗品，以及洛伐他汀结晶母液。
[0037] 还例如，可以对洛伐他汀发酵液进行碱性水解处理，使菌丝壁破坏，并使洛伐他汀水解开环；过滤收集滤液，对滤液进行酸化沉淀处理，过滤收集沉淀物；利用有机溶媒对沉淀进行萃取，获得萃取液，对萃取液进行浓缩、结晶，得到洛伐他汀粗品，分离洛伐他汀粗品后的液体为洛伐他汀结晶母液。
[0038] 在洛伐他汀结晶母液中含有大量的杂质，同时含有大量的洛伐他汀和有机溶媒(如醋酸丁酯)。由于存在回收困难的缺点，因此在生产中作为废弃物处理掉。
[0039] 本文所述的“洛伐他汀发酵液”是指通过将任何一种能主要产生洛伐他汀的土曲霉(例如，在中国典型培养物保藏中心保藏的土曲霉CCTCC AF93208)、桔青霉和红曲霉等菌株或其变种进行发酵生产而得到的发酵液。
[0040] 本文中所述第一沉淀剂的“桥联聚合作用”是指氢氧根离子的架桥作用和多价阴离子的聚合作用。
[0041] 第一沉淀剂中聚合氯化铝(也称碱式氯化铝)的分子式如下：[Al2(OH)nCl6-n]m(n为1-5，m≤10)，盐基度：B＝n/6×100％，其作用包括：对水中胶体物质的强烈电中和作用；对水中悬浮物的优良架桥吸附作用；对溶解性物质的选择性吸附作用。
[0042] 本发明的目的是提供一种从洛伐他汀结晶母液中回收洛伐他汀的方法。
[0043] 是本发明人首次发现，将洛伐他汀的结晶母液通过水解，并通过具有选择性的两次沉淀，可以除去物料中的大量杂质。这两次沉淀包括：
[0044] 1.一次沉淀除杂质：利用第一沉淀剂(如大分子的聚合氯化铝)的桥联聚合作用，将水解液中的蛋白质、核酸、脂质体及其偶合物等大分子的胶体杂质通过聚合沉淀过滤除去，而将可溶于水的洛伐酸盐(如洛伐酸钠盐)保留在水相。
[0045] 2.二次沉淀除杂质：利用第二沉淀剂(如氯化钙)将可溶于水的洛伐酸盐转化为不溶于水的盐(如钙盐)而沉淀，使其与大量的色素和较小分子的水溶性杂质分离，达到进一步分离纯化，以利于后续步骤的提取回收。
[0046] 因此，本发明的目的可以通过以下步骤来实现：
[0047] (1)将洛伐他汀结晶母液进行浓缩，以去除其中的有机溶剂，得到浓缩液；
[0048] (2)将(1)得到的浓缩液进行碱性水解，使其中的洛伐他汀发生开环反应，得到含有溶于水的洛伐酸盐的水解液；
[0049] (3)向(2)得到的水解液中加入第一沉淀剂，使其中的胶体杂质沉淀，过滤并收集所得滤液；
[0050] (4)向(3)得到的滤液中加入第二沉淀剂，使溶于水的洛伐酸钠盐转化为不溶于水的洛伐酸盐而沉淀，过滤并收集所得沉淀；
[0051] (5)将(4)得到的沉淀进行有机溶剂萃取，得到萃取液；
[0052] (6)将(5)得到的萃取液进行环化反应；
[0053] (7)将(6)得到的环化后的萃取液浓缩、结晶，从而得到洛伐他汀。
[0054] 在本发明的实施方案中，优选的是，还包括(8)，其中将(7)所得到的洛伐他汀结晶粗品进行重结晶，干燥得洛伐他汀成品。
[0055] 优选的是，在(1)中，在温度为70-80℃的条件下进行真空浓缩。为尽量去除有机溶剂，可在进行第一次真空浓缩后，加入洛伐他汀结晶母液体积40-60％的水，再进行第二次真空浓缩。
[0056] 优选的是，在(2)中，向所述浓缩液中加入碱溶液，使所得水解液的总体积为所述洛伐他汀结晶母液的体积的2.0-3.0倍，并使所述水解液的pH值为8.0-9.5，并且在温度为70-80℃的条件下反应1.5-2.5小时。
[0057] 优选的是，第一沉淀剂为选自聚合氯化铝、聚合硫酸铁、聚合硫酸铝铁中的一种或几种。更优选的是，第一沉淀剂为聚合氯化铝。优选的是，第一沉淀剂的添加量为结晶母液体积的30-40％的浓度为5-8重量％的水溶液。
[0058] 优选的是，在(3)中，还向所述水解液中加入助滤剂和/或絮凝剂，其中所述的助滤剂优选为珍珠岩粉或硅藻土，所述的絮凝剂优选为聚丙烯酰胺；优选地，将加入所述第一沉淀剂以及所述助滤剂和/或所述絮凝剂的所述水解液在温度为20-45℃的条件下反应1.5-2.5小时。优选的是，助滤剂的添加量为结晶母液体积10-15％(g/L)的珍珠岩粉。优选的是，絮凝剂的添加量为结晶母液体积的30-40％的0.1重量％水溶液(如PAM水溶液)。
[0059] 优选的是，第二沉淀剂为氯化钙和/或氯化铝，优选为氯化钙。优选的是，第二沉淀剂的添加量为结晶母液体积的30-40％的5-6重量％水溶液(如氯化钙水溶液)。
[0060] 优选的是，在(4)中，还向(3)得到的所述滤液中加入助滤剂，其中所述的助滤剂优选为珍珠岩粉。优选的是，助滤剂的添加量为结晶母液体积10-15％(g/L)。
[0061] 优选的是，在(5)中的所述有机溶剂为醋酸丁酯和/或乙酸乙酯。
[0062] 优选的是，在(6)中，将(5)得到的所述萃取液进行酸化，然后在在温度为70-90℃的条件下回流2.0-2.5小时。还优选的是，将所得反应液进行洗涤，收集有机相。
[0063] 优选的是，在(7)中，在温度为70-90℃的条件下进行真空浓缩。还优选的是，结晶分离温度为小于20℃。
[0064] 优选的是，在(8)中所述的重结晶可为多次重结晶。更优选的是，第一次重结晶的溶剂为醋酸丁酯或乙酸乙酯；结晶分离温度为小于20℃；第二次重结晶及以后的重结晶的溶剂为95％以上的乙醇；结晶分离温度为小于20℃。
[0065] 本发明的一种优选的实施方案可以是：
[0066] (1)将洛伐他汀结晶母液在70-80℃进行真空浓缩，回收有机溶媒，浓缩至原体积的40-50％，加原体积的40-60％的水继续进行真空回收有机溶媒至有机溶媒除尽；
[0067] (2)加入所处理洛伐他汀结晶母液3-3.2％(w/v)的NaOH，加水使总体积为处理洛伐他汀结晶母液体积的2.0-3.0倍，加热，并将温度控制在70-75℃，搅拌水解2.0-2.5小时，水解过程保持物料的pH在8.5以上，终点pH控制在8.0-9.5。
[0068] (3)将水解液温度控制在25-40℃，加入处理洛伐他汀结晶母液10-15％(w/v)的40-80目珍珠岩粉助滤剂，在搅拌下逐渐加入洛伐他汀结晶母液体积的30-40％的5-8重量％的碱式氯化铝溶液，加完后，搅拌反应2-2.5小时；反应结束，逐渐加入洛伐他汀结晶母液体积的30-40％的0.1重量％PAM溶液，搅拌20-60分钟，进行过滤压滤，收集滤液。
[0069] (4)在室温条件下，向(3)所得的滤液中加入洛伐他汀结晶母液体积10-15％(w/v)珍珠岩粉助滤剂，在搅拌下逐渐加入水解洛伐他汀结晶母液体积的30-40％的5-6重量％的氯化钙溶液，加完后继续搅拌2-2.5小时，将上述物料进行过滤，收集滤渣。
[0070] (5)按(4)所得的滤渣的5-8倍体积加入醋酸丁酯，控制温度25-35℃，搅拌萃取1-1.5小时，分离，收集醋酸丁酯相；再对滤渣进行二次萃取，向一次萃取渣中加入3-4倍体积的醋酸丁酯在25-35℃，搅拌萃取1-1.5小时，分离收集醋酸丁酯相，滤渣进入回收溶媒处理。
[0071] (6)加热(5)所得的萃取液，控制物料温度75-90℃，加入结晶母液体积的0.05-0.1％的草酸或98％磷酸，搅拌环化2-3小时。向环化后的萃取液加入萃取液体积的
25-30％的去离子水，搅拌洗涤30-60分钟，静置30-60分钟，分离水相，收集有机相。
25-30％的去离子水，搅拌洗涤30-60分钟，静置30-60分钟，分离水相，收集有机相。
[0072] (7)将环化、洗涤后的有机相，于65-75℃下进行真空浓缩至(2-3)×105μg/ml，放入结晶罐中进行搅拌降温结晶6-10小时。当结晶温度降到10-18℃之间，进行离心分离，用结晶液体积的5-10％的丁酯洗涤潮晶，得结晶粗品。
[0073] (8)一次重结晶：按结晶粗品重量的4.5-5倍加入丁酯，加热温度控制在75-85℃，进行热溶解，加入0.1-0.15％(v/v)的活性炭，溶解保温20-30分钟，过0.5微米的纸板，压入结晶罐中，进行搅拌降温结晶；当温度为10-18℃之间进行离心分离，用结晶液体积的5-10％的丁酯洗涤潮晶，得一次重结晶潮晶。
[0074] 二次重结晶：将一次重结晶得到的潮晶，投入热溶罐中按重量的2.5-3.0倍加入乙醇，加热温度控制70-75℃，进行热溶解，加入0.1-0.15％(v/v)的活性炭，溶解保温20-30分钟，过0.5微米的纸板，压入结晶罐中，进行搅拌降温结晶；当温度为10-18℃之间进行离心分离，用结晶液体积的5-10％的乙醇洗涤潮晶，得二次重结晶潮晶。
[0075] 三次重结晶：将二次重结晶得到的潮晶，投入热溶罐中按重量的2.5-3.0倍加入乙醇，加热温度控制70-75℃下，进行热溶解，加入0.1-0.15％(v/v)的活性炭，溶解保温20-30分钟，过0.5微米的纸板，压入结晶罐中，进行搅拌降温结晶；当温度为10-18℃之间进行离心分离，用结晶液体积的5-10％的乙醇洗涤潮晶，得三次重结晶潮晶。
[0076] 将最后一次重结晶分离所得潮晶装入烘盘中，潮晶厚度小于5cm，置于真空干燥箱内，开启真空控制箱内温度30-40℃，干燥1.5-2.0小时，升温到60-65℃，真空小于0.085MPa，干燥5-8小时，降温到35℃以下，收集得到成品。
[0077] 以下通过例子的方式进一步解释或说明本发明内容，但这些例不子应被理解为对本发明保护范围的限制。
[0078] 以下实施例中所用的盐酸可购自重庆天原化工厂；珍珠岩粉可购自信阳市崇真助滤剂有限公司(崇真牌，商品号4#)；PAM(聚丙烯酰胺)可购自成都焯尔环保科技有限公司(商品号N601)；CaCl2可购自重庆品誉化工公司(含量≥93％)；NaOH可购自重庆三阳化工有限公司(含量≥95％)；聚合氯化铝可购自巩义市永昌净水材料厂(Al2O3≥28％)；醋酸丁酯可购自重庆川东化工有限公司(含量≥95％)；
[0080] 以下实施例中所用的洛伐他汀结晶母液可通过试验例1的方法制备得到，但是本发明不限于此。
[0081] 试验例1
[0082] 洛伐他汀结晶母液可通过以下方法制备得到的：
[0083] 1.洛伐他汀的发酵过程
[0084] 将土曲霉种子液3-5L接入一级种子罐，其中载有无菌一级种子培养液1000L，包含蛋白胨、大豆粉、麦芽糖、葡萄糖、棉籽饼粉，pH值6.6-7.0；在25-28℃下培养80-150小时，移入二级种子罐中培养。
[0085] 二级种子罐中载有无菌二级种子培养液4000-5000L，包含蛋白胨、大豆粉、麦芽糖、葡萄糖、棉籽饼粉，pH值6.6-7.0；在25-28℃下培养40-120小时，移入发酵罐中培养。
[0086] 发酵罐中载有无菌发酵培养液38000-42000L，包含蛋白胨、大豆粉、麦芽糖、葡萄糖、棉籽饼粉，pH值6.6-7.0；在25-28℃下发酵培养160-180小时，菌丝处于代谢末期时放罐。
[0087] 2.洛伐他汀的提取过程
[0088] 压滤：
[0089] 接发酵液后，启动酸化桶搅拌，用5-6mol×L-1的HCl调pH至2.5-3.5，通入空气搅拌0.5小时以上，压滤后，滤饼进行萃取。
[0090] 萃取：
[0092] 浓缩：
[0093] 在真空度≤-0.07Mpa下边进料边浓缩，浓缩加热蒸汽压力≤0.2Mpa，温度≤70℃。物料在浓缩罐中浓缩至结晶刚析出，立即放入结晶罐中结晶。
[0094] 结晶分离：
[0095] 浓缩后的物料进入结晶罐，用低温水降温至30℃以下，搅拌结晶，时间8-24小时。将物料放入三足式离心机分离，分别得到洛伐他汀粗品和洛伐他汀结晶母液。
[0096] 3.洛伐他汀的单位和含量测定方法：
[0097] 工作对照品溶液的配制
[0098] 取洛伐他汀工作对照品10mg于25ml容量瓶中，精密称定，用适量甲醇溶解后，并定容至刻度，摇匀即得。
[0099] 供试品溶液的配制
[0100] 取均匀的洛伐他汀供试液或成品(种子液、发酵液、压滤废液、结晶母液)10ml或称取适量成品用适量的甲醇溶解，混匀，过滤即得。
[0101] 测定
[0102] 开启液相色谱仪，以40％的甲醇水溶液为流动相，流速1ml/min，待系统稳定后，准确吸取对照品溶液10μl注入色谱仪中，记录色谱图。平行进样三次，取三次峰面积的平均值作为对照品溶液的峰面积。另取供试品溶液注入色谱仪中，记录色谱图，按下式计算各供试液中洛伐他汀有效成分的含量。
[0103] 计算
[0104] 洛伐他汀有效成分含量(μg/ml)＝(A1+A2)/A×C×样品稀释倍数
[0105] 式中：A1——供试品溶液中洛伐他汀酸的峰面积；
[0106] A2——供试品溶液中洛伐他汀的峰面积；
[0107] A——工作对照品溶液的峰面积。
[0108] C——工作对照品溶液浓度(μg/ml)
[0109] 实施例1
[0110] 取洛伐他汀结晶母液1.3L，其中的洛伐他汀单位31535U/ml，于70-75℃真空浓缩至550ml，加600ml水继续浓缩至无有机溶媒蒸出，得物料体积600ml；向其中加780ml 5％的NaOH水溶液，加水使体积为2.6L，于70-75℃的水浴搅拌水解2.5小时，pH为8.0；当物料温度降到30℃，加130g珍珠岩粉助滤剂，开启机械搅拌，滴加390ml 5％的聚合氯化铝的水溶液，加完继续搅拌2小时，加390ml 0.1％PAM的水溶液，搅拌30分钟，过滤得滤液3300ml；向滤液中加130g珍珠岩粉助滤剂，开启机械搅拌，滴加400ml 6％的氯化钙水溶液，加完继续搅拌1小时，过滤收集滤渣，得到600g滤渣。
[0111] 用3.0L醋酸丁酯分两次对滤渣进行萃取，一次用2.0L，二次用1.0L，萃取温度30℃，搅拌萃取时间1小时，分离并合并萃取液，得到2800ml萃取液；向萃取液中加入1.0L
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