药物组合
阅读：290发布：2021-09-24
专利汇可以提供药物组合专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文提供药物组合，其包含(a)B-Raf 抑制剂 或其药学上可接受的盐，(b)至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂或其药学上可接受的盐，和(c)表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂或其药学上可接受的盐；以及任选的至少一种药学上可接受的载体；制备该药物组合的方法，以及该药物组合在 治疗 增殖性 疾病 如癌症中的用途。，下面是药物组合专利的具体信息内容。
1.一种治疗增殖性疾病的方法，包括对需要的患者进行组合疗法，所述组合疗法独立地包含治疗有效量的以下组分：
(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)，或其药学上可接受的盐，
(b)至少一种MEK抑制剂(化合物B)，或其药学上可接受的盐，和
(c)抗-EGFR抗体(化合物C)。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述BRAF抑制剂是无定形N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-
3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38和28.39处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
6.如权利要求4所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-
3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39和11.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
7.如权利要求4所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-
3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18和29.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
8.如权利要求4所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-
3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、22.43和22.75处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
9.如权利要求4所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-
3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、22.43、
22.75、25.23、16.05和11.82处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
10.如权利要求4所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和19.00处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
11.如权利要求4所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为具有表A中列出的XRPD衍射峰(2θ度)。
12.如权利要求4所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有基本上如图8所示的XRPD图。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述抗-EGFR抗体是西妥昔单抗。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述增殖性疾病是癌症。
15.如权利要求14所述的方法，其中，所述癌症选自：结肠直肠癌，黑色素瘤，肺癌，乳腺癌，肾癌，肝癌，子宫内膜癌，急性髓性白血病，脊髓发育不良综合征，甲状腺癌，特别是乳头状甲状腺癌，胰腺癌，神经纤维瘤病和肝细胞癌。
16.如权利要求15所述的方法，其中，所述癌症是结肠直肠癌。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
18.如权利要求14-17中任一项所述的方法，其中，所述癌症是BRAF相关癌症。
19.如权利要求18所述的方法，其中，所述癌症是具有BRAF V600突变的癌症。
20.如权利要求19所述的方法，其中，所述癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。
21.如权利要求14-20中任一项所述的方法，其中，所述癌症还表达野生型KRAS(KRASwt)。
22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物A每天一次口服给予。
23.如权利要求22所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物A是300mg，每天一次口服给予。
24.如权利要求1-23中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物B每天两次口服给予作为第一和第二治疗有效剂量，所述第一治疗有效剂量的化合物B与治疗有效量的化合物A一起给予。
25.如权利要求24所述的方法，其中，所述第一和第二治疗有效剂量的化合物B各自包含45mg化合物B。
26.如权利要求24或25所述的方法，其中，所述第一治疗有效剂量的化合物B在给予治疗有效量的化合物A的30分钟内给予。
27.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物C在120分钟内以400mg/m2的量静脉内输注作为初始剂量，之后每周在60分钟内以250mg/m2的量静脉内输注。
28.如权利要求24-27中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物C在给予治疗有效量的化合物A和第一治疗有效剂量的化合物B之后至少30至90分钟给予。
29.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中，所述方法任选地还包括在用化合物C治疗之前给予所述对象一种或多种预先药物。
30.如权利要求29所述的方法，其中，所述预先药物在给予化合物C之前30-60分钟给予。
31.如权利要求30所述的方法，其中，所述一种或多种预先药物选自：一种或多种H1拮抗剂和全身性皮质类固醇。
32.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中，在用所述组合疗法治疗之前所述对象用至少一种全身性抗癌治疗剂治疗一段时间。
33.如权利要求32所述的方法，其中，所述全身性抗癌治疗剂包括用一种或多种细胞毒试剂治疗。
34.如权利要求33所述的方法，其中，所述一种或多种细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括通过确定疾病进展的抑制，肿瘤生长的抑制，原发肿瘤的减少，肿瘤相关症状的缓解，肿瘤分泌因子的抑制，原发性或继发性肿瘤的出现延迟，原发性或继发性肿瘤的发展减缓，原发性或继发性肿瘤的发生率降低，疾病继发效应的严重程度减慢或降低，肿瘤生长停止和肿瘤消退，增加的进展时间(TTP)，增加的无进展生存(PFS)，增加的总体存活(OS)或增加的响应持续时间(DOR)中的一种或多种来评估所述组合疗法的治疗。
36.一种用于增加具有B-Raf突变癌症的患者的总体存活，客观响应率，进展时间，无进展存活，治疗失败时间或响应持续时间(DOR)的方法，所述方法包括给予需要的患者独立地包含治疗有效量的以下组分的组合疗法：
(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)，或其药学上可接受的盐，
(b)至少一种MEK抑制剂(化合物B)，或其药学上可接受的盐，和
(c)抗-EGFR抗体(化合物C)。
37.如权利要求36所述的方法，其中，所述BRAF抑制剂是无定形N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐。
38.如权利要求36或37所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。
39.如权利要求36-38中任一项所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
40.如权利要求39所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38和28.39处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
41.如权利要求39所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39和11.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
42.如权利要求39所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18和29.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
43.如权利要求39所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43和22.75处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
44.如权利要求39所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43、22.75、25.23、16.05和11.82处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
45.如权利要求39所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和19.00处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
46.如权利要求39所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为具有表A中列出的XRPD衍射峰(2θ度)。
47.如权利要求39所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有基本上如图8所示的XRPD图。
48.如权利要求1-47中任一项所述的方法，其中，所述抗-EGFR抗体是西妥昔单抗。
49.如权利要求1-48中任一项所述的方法，其中，所述增殖性疾病是癌症。
50.如权利要求49所述的方法，其中，所述癌症选自：结肠直肠癌，黑色素瘤，肺癌，乳腺癌，肾癌，肝癌，子宫内膜癌，急性髓性白血病，脊髓发育不良综合征，甲状腺癌，特别是乳头状甲状腺癌，胰腺癌，神经纤维瘤病和肝细胞癌。
51.如权利要求50所述的方法，其中，所述癌症是结肠直肠癌。
52.如权利要求51所述的方法，其中，所述结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
53.如权利要求49-52中任一项所述的方法，其中，所述癌症是BRAF相关癌症。
54.如权利要求53所述的方法，其中，所述癌症是具有BRAF V600突变的癌症。
55.如权利要求54所述的方法，其中，所述癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。
56.如权利要求49-55中任一项所述的方法，其中，所述癌症还表达野生型KRAS(KRASwt)。
57.如权利要求36-56中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物A每天一次口服给予。
58.如权利要求57所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物B是300mg，每天一次口服给予。
59.如权利要求1-58中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物B每天两次口服给予作为第一和第二治疗有效剂量，所述第一治疗有效剂量的化合物B与治疗有效量的化合物A一起给予。
60.如权利要求59所述的方法，其中，所述第一和第二治疗有效剂量的化合物B各自包含45mg化合物B。
61.如权利要求59或60所述的方法，其中，所述第一治疗有效剂量的化合物B在给予治疗有效量的化合物A的30分钟内给予。
62.如权利要求1-61中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物C在120分钟内以400mg/m2的量静脉内输注作为初始剂量，之后每周在60分钟内以250mg/m2的量静脉内输注。
63.如权利要求59-62中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物C在给予治疗有效量的化合物A和第一治疗有效剂量的化合物B之后至少30至90分钟给予。
64.如权利要求1-63中任一项所述的方法，其中，所述方法任选地还包括在用化合物C治疗之前给予所述对象一种或多种预先药物。
65.如权利要求64所述的方法，其中，所述预先药物在给予化合物C之前30-60分钟给予。
66.如权利要求65所述的方法，其中，所述一种或多种预先药物选自：一种或多种H1拮抗剂和全身性皮质类固醇。
67.如权利要求1-66中任一项所述的方法，其中，在用所述组合疗法治疗之前所述对象用至少一种全身性抗癌治疗剂治疗一段时间。
68.如权利要求67所述的方法，其中，所述全身性抗癌治疗剂包括用一种或多种细胞毒试剂治疗。
69.如权利要求68所述的方法，其中，所述一种或多种细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。
70.如权利要求1-69中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括通过确定疾病进展的抑制，肿瘤生长的抑制，原发肿瘤的减少，肿瘤相关症状的缓解，肿瘤分泌因子的抑制，原发性或继发性肿瘤的出现延迟，原发性或继发性肿瘤的发展减缓，原发性或继发性肿瘤的发生率降低，疾病继发效应的严重程度减慢或降低，肿瘤生长停止和肿瘤消退，增加的进展时间(TTP)，增加的无进展生存(PFS)，增加的总体存活(OS)或增加的响应持续时间(DOR)中的一种或多种来评估所述组合疗法的治疗。
71.一种治疗需要的患者的癌症的方法，所述方法包括：
(a)检测癌症中的突变BRAF激酶；和
(b)对需要的患者给予组合疗法，所述组合疗法独立地包含治疗有效量的以下组分：
(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)，或其药学上可接受的盐，
(b)至少一种MEK抑制剂(化合物B)，或其药学上可接受的盐，和
(c)抗-EGFR抗体(化合物C)。
72.如权利要求71所述的方法，其中，所述检测癌症中的突变BRAF激酶的步骤包括进行检测来自患者的样品中的突变B-Raf激酶的测定。
73.如权利要求72所述的方法，还包括从患者获得样品。
74.如权利要求73所述的方法，其中，所述样品是活组织检查样品。
75.如权利要求72-74中任一项所述的方法，其中，所述测定选自：测序、免疫组化、酶联免疫吸附试验和荧光原位杂交(FISH)。
76.如权利要求75所述的方法，其中，所述测序是PCR或下一代测序。
77.如权利要求71-76中任一项所述的方法，其中，所述BRAF抑制剂是无定形N-[(2S)-
1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐。
78.如权利要求76或77所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。
79.如权利要求76-78中任一项所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
80.如权利要求79所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38和28.39处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
81.如权利要求79所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39和11.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
82.如权利要求79所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18和29.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
83.如权利要求79所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43和22.75处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
84.如权利要求79所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43、22.75、25.23、16.05和11.82处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
85.如权利要求79所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和19.00处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
86.如权利要求79所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为具有表A中列出的XRPD衍射峰(2θ度)。
87.如权利要求79所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有基本上如图8所示的XRPD图。
88.如权利要求1-87中任一项所述的方法，其中，所述抗-EGFR抗体是西妥昔单抗。
89.如权利要求71-88中任一项所述的方法，其中，所述癌症选自：结肠直肠癌，黑色素瘤，肺癌，乳腺癌，肾癌，肝癌，子宫内膜癌，急性髓性白血病，脊髓发育不良综合征，甲状腺癌，特别是乳头状甲状腺癌，胰腺癌，神经纤维瘤病和肝细胞癌。
90.如权利要求89所述的方法，其中，所述癌症是结肠直肠癌。
91.如权利要求90所述的方法，其中，所述结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
92.如权利要求71-91中任一项所述的方法，其中，所述癌症是具有BRAF V600突变的癌症。
93.如权利要求92所述的方法，其中，所述癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。
94.如权利要求71-93中任一项所述的方法，其中，所述癌症还表达野生型KRAS(KRASwt)。
95.如权利要求71-94中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物A每天一次口服给予。
96.如权利要求95所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物A是300mg，每天一次口服给予。
97.如权利要求1-96中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物B每天两次口服给予作为第一和第二治疗有效剂量，所述第一治疗有效剂量的化合物B与治疗有效量的化合物A一起给予。
98.如权利要求97所述的方法，其中，所述第一和第二治疗有效剂量的化合物B各自包含45mg化合物B。
99.如权利要求97 98所述的方法，其中，所述第一治疗有效剂量的化合物B在给予治疗有效量的化合物A的30分钟内给予。
100.如权利要求1-99中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物C在120分钟内以400mg/m2的量静脉内输注作为初始剂量，之后每周在60分钟内以250mg/m2的量静脉内输注。
101.如权利要求97-100中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物C在给予治疗有效量的化合物A和第一治疗有效剂量的化合物B之后至少30至90分钟给予。
102.如权利要求1-101中任一项所述的方法，其中，所述方法任选地还包括在用化合物C治疗之前给予所述患者一种或多种预先药物。
103.如权利要求102所述的方法，其中，所述预先药物在给予化合物C之前30-60分钟给予。
1
104.如权利要求103所述的方法，其中，所述一种或多种预先药物选自：一种或多种H拮抗剂和全身性皮质类固醇。
105.如权利要求1-104中任一项所述的方法，其中，在用所述组合疗法治疗之前所述患者用至少一种全身性抗癌治疗剂治疗一段时间。
106.如权利要求105所述的方法，其中，所述全身性抗癌治疗剂包括用一种或多种细胞毒试剂治疗。
107.如权利要求106所述的方法，其中，所述一种或多种细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。
108.如权利要求1-107中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括通过确定疾病进展的抑制，肿瘤生长的抑制，原发肿瘤的减少，肿瘤相关症状的缓解，肿瘤分泌因子的抑制，原发性或继发性肿瘤的出现延迟，原发性或继发性肿瘤的发展减缓，原发性或继发性肿瘤的发生率降低，疾病继发效应的严重程度减慢或降低，肿瘤生长停止和肿瘤消退，增加的进展时间(TTP)，增加的无进展生存(PFS)，增加的总体存活(OS)或增加的响应持续时间(DOR)中的一种或多种来评估所述组合疗法的治疗。
109.一种治疗被规定用西妥昔单抗治疗的患有结肠直肠癌的患者的方法，包括给予所述患者：
(a)治疗有效量的BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)或其药学上可接受的盐，和
(b)治疗有效量的MEK抑制剂(化合物B)或其药学上可接受的盐。
110.如权利要求109所述的方法，其中，所述BRAF抑制剂是无定形N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐。
111.如权利要求109或110所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。
112.如权利要求109-111中任一项所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
113.如权利要求112所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38和28.39处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
114.如权利要求112所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39和11.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
115.如权利要求112所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18和29.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
116.如权利要求112所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43和22.75处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
117.如权利要求112所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43、22.75、25.23、16.05和11.82处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
118.如权利要求112所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和19.00处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
119.如权利要求112所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为具有表A中列出的XRPD衍射峰(2θ度)。
120.如权利要求112所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有基本上如图8所示的XRPD图。
121.如权利要求109-120中任一项所述的方法，其中，所述结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
122.如权利要求109-121中任一项所述的方法，其中，所述结肠直肠癌是BRAF相关结肠直肠癌。
123.如权利要求122所述的方法，其中，所述结肠直肠癌具有BRAF V600突变。
124.如权利要求123所述的方法，其中，所述结肠直肠癌具有BRAF V600E突变。
125.如权利要求109-124中任一项所述的方法，其中，所述结肠直肠癌还表达野生型KRAS(KRASwt)。
126.如权利要求109-125中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物A每天一次口服给予。
127.如权利要求126所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物A是300mg，每天一次口服给予。
128.如权利要求109-127中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物B每天两次口服给予作为第一和第二治疗有效剂量，所述第一治疗有效剂量的化合物B与治疗有效量的化合物A一起给予。
129.如权利要求128所述的方法，其中，所述第一和第二治疗有效剂量的化合物B各自包含45mg化合物B。
130.如权利要求128或129所述的方法，其中，所述第一治疗有效剂量的化合物B在给予治疗有效量的化合物A的30分钟内给予。
131.如权利要求109-130中任一项所述的方法，其中，西妥昔单抗被规定在120分钟内以400mg/m2的量静脉内输注作为初始剂量给予，之后每周在60分钟内以250mg/m2的量静脉内输注。
132.如权利要求128-131中任一项所述的方法，其中，所述西妥昔单抗被规定在给予治疗有效量的化合物A和第一治疗有效剂量的化合物B之后至少30-90分钟给予。
133.如权利要求109-132中任一项所述的方法，其中，所述方法任选地还包括在用西妥昔单抗治疗之前给予所述患者一种或多种预先药物。
134.如权利要求133所述的方法，其中，所述预先药物在给予西妥昔单抗之前30-60分钟给予。
135.如权利要求134所述的方法，其中，所述一种或多种预先药物选自：一种或多种H1拮抗剂和全身性皮质类固醇。
136.如权利要求109-135中任一项所述的方法，其中，在用所述组合疗法治疗之前所述患者用至少一种全身性抗癌治疗剂治疗一段时间。
137.如权利要求136所述的方法，其中，所述全身性抗癌治疗剂包括用一种或多种细胞毒试剂治疗。
138.如权利要求137所述的方法，其中，所述一种或多种细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。
139.如权利要求109-138中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括通过确定疾病进展的抑制，肿瘤生长的抑制，原发肿瘤的减少，肿瘤相关症状的缓解，肿瘤分泌因子的抑制，原发性或继发性肿瘤的出现延迟，原发性或继发性肿瘤的发展减缓，原发性或继发性肿瘤的发生率降低，疾病继发效应的严重程度减慢或降低，肿瘤生长停止和肿瘤消退，增加的进展时间(TTP)，增加的无进展生存(PFS)，增加的总体存活(OS)或增加的响应持续时间(DOR)中的一种或多种来评估所述组合疗法的治疗。
140.一种治疗患有结肠直肠癌的患者的方法，所述方法包括：
a)每天给予第一剂的(a)治疗有效量的BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)或其药学上可接受的盐，和(b)治疗有效量的MEK抑制剂(化合物B)或其药学上可接受的盐；
b)在步骤a)之后至少30分钟给予第一治疗有效量的西妥昔单抗的剂量；
c)每天给予第二剂的所述化合物B，其中，所述第二剂在给予所述第一剂的化合物B后
10-14小时给予；和
d)每周给予第二治疗有效量的西妥昔单抗的剂量，其中，所述第二西妥昔单抗的剂量在给予所述第一西妥昔单抗的剂量后一周给予。
141.如权利要求140所述的方法，其中，所述BRAF抑制剂是无定形N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐。
142.如权利要求140或141所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。
143.如权利要求140-142中任一项所述的方法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
144.如权利要求143所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38和28.39处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
145.如权利要求143所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39和11.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
146.如权利要求143所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18和29.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
147.如权利要求143所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43和22.75处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
148.如权利要求143所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43、22.75、25.23、16.05和11.82处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
149.如权利要求143所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、29.18、
22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和19.00处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
150.如权利要求143所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为具有表A中列出的XRPD衍射峰(2θ度)。
151.如权利要求143所述的方法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有基本上如图8所示的XRPD图。
152.如权利要求140-151中任一项所述的方法，其中，所述结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
153.如权利要求140-152中任一项所述的方法，其中，所述结肠直肠癌是BRAF相关结肠直肠癌。
154.如权利要求153所述的方法，其中，所述结肠直肠癌具有BRAF V600突变。
155.如权利要求154所述的方法，其中，所述结肠直肠癌具有BRAF V600E突变。
156.如权利要求140-155中任一项所述的方法，其中，所述结肠直肠癌还表达野生型KRAS(KRASwt)。
157.如权利要求140-156中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物A每天一次口服给予。
158.如权利要求157所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物A是300mg，每天一次口服给予。
159.如权利要求140-158中任一项所述的方法，其中，所述治疗有效量的化合物B每天两次口服给予作为第一和第二治疗有效剂量，所述第一治疗有效剂量的化合物B与治疗有效量的化合物A一起给予。
160.如权利要求159所述的方法，其中，所述第一和第二治疗有效剂量的化合物B各自包含45mg化合物B。
161.如权利要求159或160所述的方法，其中，所述第一治疗有效剂量的化合物B在给予治疗有效量的化合物A的30分钟内给予。
162.如权利要求140-161中任一项所述的方法，其中，西妥昔单抗在120分钟内以
400mg/m2的量静脉内输注作为初始剂量给予，之后每周在60分钟内以250mg/m2的量静脉内输注。
163.如权利要求159-162中任一项所述的方法，其中，所述西妥昔单抗在给予治疗有效量的化合物A和第一治疗有效剂量的化合物B之后至少30-90分钟给予。
164.如权利要求140-163中任一项所述的方法，其中，所述方法任选地还包括在用西妥昔单抗治疗之前给予所述患者一种或多种预先药物。
165.如权利要求164所述的方法，其中，所述预先药物在给予西妥昔单抗之前30-60分钟给予。
166.如权利要求165所述的方法，其中，所述一种或多种预先药物选自：一种或多种H1拮抗剂和全身性皮质类固醇。
167.如权利要求140-166中任一项所述的方法，其中，在用所述组合疗法治疗之前所述患者用至少一种全身性抗癌治疗剂治疗一段时间。
168.如权利要求167所述的方法，其中，所述全身性抗癌治疗剂包括用一种或多种细胞毒试剂治疗。
169.如权利要求168所述的方法，其中，所述一种或多种细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。
170.如权利要求140-169中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括通过确定疾病进展的抑制，肿瘤生长的抑制，原发肿瘤的减少，肿瘤相关症状的缓解，肿瘤分泌因子的抑制，原发性或继发性肿瘤的出现延迟，原发性或继发性肿瘤的发展减缓，原发性或继发性肿瘤的发生率降低，疾病继发效应的严重程度减慢或降低，肿瘤生长停止和肿瘤消退，增加的进展时间(TTP)，增加的无进展生存(PFS)，增加的总体存活(OS)或增加的响应持续时间(DOR)中的一种或多种来评估所述组合疗法的治疗。
171.一种组合疗法，独立地包括治疗有效量的以下组分：
(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)，或其药学上可接受的盐，
(b)至少一种MEK抑制剂(化合物B)，或其药学上可接受的盐，和
(c)抗-EGFR抗体(化合物C)。
172.如权利要求171所述的组合疗法，其中，所述BRAF抑制剂是无定形N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐。
173.如权利要求171或172所述的组合疗法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是6-(4-溴-
2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。
174.如权利要求171-173中任一项所述的组合疗法，其中，所述至少一种MEK抑制剂是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
175.如权利要求174所述的组合疗法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38和28.39处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
176.如权利要求174所述的组合疗法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39和11.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
177.如权利要求174所述的组合疗法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18和
29.18处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
178.如权利要求174所述的组合疗法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、
29.18、22.43和22.75处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
179.如权利要求174所述的组合疗法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、
29.18、22.43、22.75、25.23、16.05和11.82处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
180.如权利要求174所述的组合疗法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为在20.38、28.39、11.18、
29.18、22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和19.00处具有XRPD衍射峰(2θ度)。
181.如权利要求174所述的组合疗法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的特征为具有表A中列出的XRPD衍射峰(2θ度)。
182.如权利要求174所述的组合疗法，其中，所述结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有基本上如图8所示的XRPD图。
183.如权利要求171-182中任一项所述的组合疗法，其中，所述抗-EGFR抗体是西妥昔单抗。
184.如权利要求171-183中任一项所述的组合疗法，其中，所述BRAF抑制剂(化合物A)，所述MEK抑制剂(化合物B)和所述抗-EGFR抗体(化合物C)各自配制成单一单位剂型供同时、分开或顺序给予。
185.如权利要求171-184中任一项所述的组合疗法，其中，所述BRAF抑制剂(化合物A)配制用于口服给予。
186.如权利要求185所述的组合疗法，其中，所述BRAF抑制剂(化合物A)配制成胶囊。
187.如权利要求186所述的组合疗法，其中，所述胶囊包含75mg化合物A。
188.如权利要求171-187中任一项所述的组合疗法，其中，所述MEK抑制剂(化合物B)配制成口服给予。
189.如权利要求188所述的组合疗法，其中，所述MEK抑制剂(化合物B)配制成片剂。
190.如权利要求189所述的组合疗法，其中，所述片剂包含15mg化合物B。
191.如权利要求171-190中任一项所述的组合疗法，其中，所述抗-EGFR抗体(化合物C)配制用于静脉内给予。
192.如权利要求171-191中任一项所述的组合疗法，用于治疗增殖性疾病。
193.如权利要求192所述的组合疗法，所述增殖性疾病是癌症。
194.如权利要求193所述的组合疗法，其中，所述癌症选自：结肠直肠癌，黑色素瘤，肺癌，乳腺癌，肾癌，肝癌，子宫内膜癌，急性髓性白血病，脊髓发育不良综合征，甲状腺癌，特别是乳头状甲状腺癌，胰腺癌，神经纤维瘤病和肝细胞癌。
195.如权利要求194所述的组合疗法，所述癌症是结肠直肠癌。
196.如权利要求195所述的组合疗法，所述结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
197.如权利要求193-196中任一项所述的组合疗法，其中，所述癌症是B-Raf-相关癌症。
198.如权利要求197所述的组合疗法，其中，所述癌症是具有BRAF V600突变的癌症。
199.如权利要求198所述的组合疗法，其中，所述癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。
200.如权利要求181-199中任一项所述的组合疗法，其中，所述癌症还表达野生型KRAS(KRASwt)。
201.一种商业包装，包括如权利要求171-191中任一项所述的组合疗法，以及其同时、分开或顺序给予用于治疗增殖性疾病的说明书。
202.一种商业包装，其包含如权利要求171-182中任一项所述的化合物A和化合物B，以及用于与抗EGFR抗体(化合物C)一起同时、分开或顺序给予用于治疗增殖性疾病的说明书。
203.如权利要求202所述的商业包装，其中，所述抗-EGFR抗体(化合物C)是西妥昔单抗。
药物组合
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2016年6月3日提交的美国临时申请第62/345,389号的优先权，通过引用将该申请全文纳入本文。发明领域
[0003] 本发明涉及药物组合，其独立地包含治疗有效量(a)BRAF抑制剂或其药学上可接受的盐，(b)至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂或药学上可接受的盐，和(c)表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂或其药学上可接受的盐；以及任选的至少一种药学上可接受的载体；制备药物组合的方法，以及药物组合在治疗增殖性疾病如癌症中的用途。
[0004] 本发明还涉及药物组合，其独立地包含治疗有效量(a)BRAF抑制剂或其药学上可接受的盐，(b)至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂或其药学上可接受的盐，和(c)抗EGFR抗体，以及任选的至少一种药学上可接受的载体；这种组合在治疗癌症等增殖性疾病中的用途；以及治疗患有增殖性疾病如症的对象的方法，包括给予治疗有效量的这种组合。
背景技术
[0005] 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径介导许多效应分子的活性，所述效应分子协调以控制细胞增殖、存活、分化和迁移。通过例如生长因子、细胞因子或激素刺激细胞导致质膜相关的Ras变为GTP结合并因此被激活以募集RAF。这种相互作用诱导RAF的激酶活性，导致MAPK/ERK(MEK)的直接磷酸化，其反过来又磷酸化细胞外信号相关激酶(ERK)。然后，活化的ERK使多种效应分子磷酸化，例如激酶、磷酸酶、转录因子和细胞骨架蛋白。因此，RAS-RAF-MEK-ERK信号传导途径将信号从细胞表面受体传递到细胞核，并且例如在细胞增殖和存活中是必需的。通过RAS的多种同种型(包括KRAF，NRAS和HRAS)，RAF的多种同种型(ARAF，BRAF，CRAF/RAF-1)，MEK的多种同种型(MEK-1和MEK-2)和ERK的多种同种型(ERK-1和ERK-2)进一步丰富了该信号级联的调节。研究表明，该途径调节了几种关键的细胞活动，包括增殖、分化、存活和血管生成。已显示该途径中蛋白质的不当活化发生在许多癌症中，例如黑色素瘤、非小细胞肺癌、结肠直肠癌和甲状腺癌。由于10-20％的人类癌症具有致癌Ras突变并且许多人类癌症具有活化的生长因子受体，因此该途径是干预的理想靶标。
[0006] RAF在许多信号传导途径中的重要作用和位置已经在哺乳动物细胞中使用去调节和显性抑制性RAF突变体的研究以及使用生物化学和遗传技术模拟生物的研究中得到证实。过去，关注RAF是一种抗肿瘤药物靶点，其核心作用是作为RAS的下游效应物。然而，最近的研究结果表明，RAF可能在某些肿瘤的形成中具有突出的作用，而不需要致癌Ras等位基因。特别是，已经在约70％的黑素瘤，40％的乳头状甲状腺癌，30％的卵巢低度恶性癌和10％的结肠直肠癌中鉴定出BRAF和NRAS的活化等位基因。K-Ras的突变发生在大约90％的胰腺癌中。大多数BRAF突变在激酶结构域内发现，单一取代(V600E)占至少80％。突变的BRAF蛋白通过升高的针对MEK的激酶活性或通过激活CRAF来激活RAF-MEK-ERK途径。数据证明Raf激酶抑制剂可以通过MAPK途径显著抑制信号传导，导致BRAF(V600E)肿瘤的显著缩小。结肠直肠癌是美国男性和女性中第三大常见癌症，2016年预计有超过134,000例新发病例和近50,000例死于此病。在美国，BRAF突变发生在8％至15％的结肠直肠癌患者中并代表这些患者的预后不良。一线治疗后的历史发表的无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)结果分别为1.8至2.5个月和4至6个月，并公布了该人群中基于EGFR的治疗的各种研究的响应率范围从6％到8％。尽管在转移性结肠直肠癌的治疗方面取得了重大进展，但在过去的二十年中，转移性结肠直肠癌(mCRC)患者的预后仍然令人失望。全身化疗仍然是mCRC患者的主要治疗方式(James J.Lee,MD,PhD,和Weijing Sun,MD,Clinical Advances in
Hematology&Oncology,2016年1月,第14卷,第1期)。美国食品和药物管理局(FDA)批准了几种细胞毒性药物和mCRC靶向药物，包括伊立替康、奥沙利铂和卡培他滨(S-1已在日本和其他几个国家获得批准，但在美国尚未批准)。氟嘧啶(5-氟尿嘧啶[5-FU]或口服卡培他滨)与奥沙利铂或伊立替康的组合已被广泛接受作为mCRC的标准细胞毒性化学疗法，作为一线或二线疗法。这些方案由亚叶酸/5-FU/奥沙利铂(FOLFOX)，卡培他滨/奥沙利铂(XELOX)，亚叶酸/5-FU/伊立替康(FOLFIRI)和卡培他滨/伊立替康(XELIRI)组成。最近，在2015年9月，FDA批准了三氟尿嘧啶和替吡嘧啶(Lonsurf，大鹏制药公司(Taiho Oncology))的组合用于难治性mCRC(James J.Lee,MD,PhD,and Weijing Sun,MD,Clinical Advances in
Hematology&Oncology,2016年1月，第14卷，第1期)。
Hematology&Oncology,2016年1月,第14卷,第1期)。美国食品和药物管理局(FDA)批准了几种细胞毒性药物和mCRC靶向药物，包括伊立替康、奥沙利铂和卡培他滨(S-1已在日本和其他几个国家获得批准，但在美国尚未批准)。氟嘧啶(5-氟尿嘧啶[5-FU]或口服卡培他滨)与奥沙利铂或伊立替康的组合已被广泛接受作为mCRC的标准细胞毒性化学疗法，作为一线或二线疗法。这些方案由亚叶酸/5-FU/奥沙利铂(FOLFOX)，卡培他滨/奥沙利铂(XELOX)，亚叶酸/5-FU/伊立替康(FOLFIRI)和卡培他滨/伊立替康(XELIRI)组成。最近，在2015年9月，FDA批准了三氟尿嘧啶和替吡嘧啶(Lonsurf，大鹏制药公司(Taiho Oncology))的组合用于难治性mCRC(James J.Lee,MD,PhD,and Weijing Sun,MD,Clinical Advances in
Hematology&Oncology,2016年1月，第14卷，第1期)。
[0007] EGFR是存在于细胞膜上的跨膜受体。它们具有细胞外结合成分、跨膜成分和细胞内酪氨酸激酶成分。EGFR在控制正常细胞生长，细胞凋亡和其他细胞功能中起重要作用。EGFR活性的失调可导致受体的持续或异常激活，从而引起不受调节的细胞分裂。表皮生长因子受体抑制剂是本领域已知的。两类药物影响EGFR：单克隆抗体和酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。单克隆抗体的实例包括帕尼单抗和西妥昔单抗(西妥昔单抗)，并且它们的作用方法是通过细胞外结合以及随后抑制EGFR信号传导途径。酪氨酸激酶抑制剂的实例包括厄洛替尼、吉非替尼和拉帕替尼，它们的作用方法是通过细胞内结合和随后的EGFR信号传导途径的抑制。
[0008] 尽管癌症患者有许多治疗选择，但仍需要有效和安全的治疗剂，并且需要可以用于有效的长期癌症治疗的新组合疗法。
发明内容
[0009] 本文提供药物组合，其独立地包含治疗有效量(a)BRAF抑制剂或其药学上可接受的盐，(b)至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂或其药学上可接受的盐，(c)表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂或其药学上可接受的盐；和任选的至少一种药学上可接受的载体。
[0010] 本文还提供了药物组合，其独立地包含治疗有效量(a)BRAF抑制剂或其药学上可接受的盐，(b)至少一种MEK抑制剂或其药学上可接受的盐，和(c)抗-EGFR抗体；和任选的至少一种药学上可接受的载体。
[0011] 本文还提供了药物组合，其独立地包含治疗有效量：(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐，(b)至少一种MEK抑制剂或其药学上可接受的盐，和(c)抗EGFR抗体，和任选的至少一种药学上可接受的载体。在一个实施方案中，将BRAF抑制剂、MEK抑制剂和抗EGFR抗体配制成单独的单位剂量，用于同时、分开或顺序给药。
[0012] 本文还提供了药物组合，其独立地包含治疗有效量：(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐，(b)至少一种MEK抑制剂，其中至少一种所述MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐，和(c)抗EGFR抗体，和任选的至少一种药学上可接受的载体。在一个实施方案中，将BRAF抑制剂、MEK抑制剂和抗EGFR抗体配制成单独的单位剂量，用于同时、分开或顺序给药。
[0013] 本文还提供了药物组合，其独立地包含治疗有效量：(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐，(b)MEK抑制剂，其是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐，和(c)抗EGFR抗体，其是西妥昔单抗；和任选的至少一种药学上可接受的载体。在一个实施方案中，将BRAF抑制剂、MEK抑制剂和抗EGFR抗体配制成单独的单位剂量，用于同时、分开或顺序给药。
[0014] 还提供了治疗增殖性疾病的方法，其包括向需要的患者给予治疗有效量的本文所述的药物组合。
[0015] 本文还提供了药物组合，其独立地包含治疗有效量：(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐，(b)至少一种MEK抑制剂，和(c)抗EGFR抑制剂抗体，和任选的至少一种药学上可接受的载体，用于治疗增殖性疾病。在一个实施方案中，MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，抗EGFR抑制剂抗体是西妥昔单抗。
[0016] 还提供了减小肿瘤大小的方法，包括使肿瘤与本发明的药物组合接触。
[0017] 还提供了用于治疗有需要的患者的癌症的方法，所述方法包括：(a)确定患者中的癌症是否是BRAF相关癌症；(b)如果确定癌症是BRAF相关癌症，给予患者治疗有效量的本发明药物组合。
[0018] 还提供了治疗需要的对象的癌症的方法，所述方法包括(a)确定癌症是否具有突变的BRAF激酶，和(b)如果确定癌症具有突变的BRAF-激酶，则给予所述对象治疗有效量的本发明的药物组合。
[0019] 还提供了治疗需要的对象的癌症的方法，所述方法包括(a)检测癌症中的突变BRAF激酶，和(b)给予所述对象治疗有效量的本发明的药物组合。
[0020] 在一个实施方案中，本文提供治疗被规定用西妥昔单抗治疗的患有结肠直肠癌的患者的方法，包括给予所述患者：(a)治疗有效量的BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)或其药学上可接受的盐，和(b)治疗有效量的MEK抑制剂(化合物B)或其药学上可接受的盐。
[0021] 在一个实施方案中，本文提供治疗患有结肠直肠癌的患者的方法，所述方法包括：a)每天给予第一剂量的(a)治疗有效量的BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)或其药学上可接受的盐，和(b)治疗有效量的MEK抑制剂(化合物B)或其药学上可接受的盐；b)在步骤a)后至少30分钟，给予第一治疗有效量的剂量的西妥昔单抗；c)每天给予第二剂量的所述化合物B，其中所述第二剂量在给予所述第一剂量的化合物B后10-
14小时给予；d)每周给予第二治疗有效量的剂量的西妥昔单抗剂量，其中所述第二剂量西妥昔单抗的给予在给予所述第一剂量的西妥昔单抗后一周给予。
14小时给予；d)每周给予第二治疗有效量的剂量的西妥昔单抗剂量，其中所述第二剂量西妥昔单抗的给予在给予所述第一剂量的西妥昔单抗后一周给予。
[0022] 还提供了为被鉴定或诊断为患有BRAF相关癌症的患者选择治疗的方法(例如，体外方法)。
[0023] 本文还提供了为患者选择治疗的方法，其中所述方法包括对从患者获得的样品进行测定以确定患者是否具有BRAF基因、BRAF激酶或其表达或活性或水平的失调，以及鉴定或诊断确定患有BRAF基因、BRAF激酶或其表达或活性或水平的失调的患者，如患有BRAF相关癌症。
[0024] 还提供了选择患者进行治疗的方法，其中所述方法包括选择、鉴定或诊断患有BRAF相关癌症的患者，并选择患者进行治疗，包括给予治疗有效量的本发明的药物组合。
[0025] 本文还提供了确定患有癌症的对象对用本发明的药物组合治疗有积极响应的可能性的方法，所述方法包括：确定从患者获得的样品中的癌细胞是否具有一种或多种BRAF突变；确定具有一种或多种BRAF突变的癌细胞的对象对用本发明的药物组合治疗具有积极响应的可能性增加。
[0026] 还提供了预测患有癌症的对象中用本发明的药物组合治疗的功效的方法，所述方法包括：确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一种或多种BRAF突变；并确定用本发明的药物组合进行的治疗在具有从具有一种或多种BRAF突变的对象获得的样品中的癌细胞的对象中更有可能有效。
[0027] 还提供了包含作为治疗剂的组合的商业包装，其包含(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐，(b)至少一种MEK抑制剂和(c)抗EGFR抗体，和任选的至少一种药学上可接受的载体，以及用于其同时、分开或顺序给予治疗增殖性疾病的说明书。在一个实施方案中，MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，抗EGFR抑制剂抗体是西妥昔单抗。
[0028] 还提供了商业包装，其包含(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐，(b)至少一种MEK抑制剂，以及用于其和化合物C在治疗增殖性疾病中同时、分开或顺序给予的说明书。在一个实施方案中，MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，抗EGFR抑制剂抗体是西妥昔单抗。在一些实施方案中，本文提供了降低对象中比尼美替尼(binimetinib)和西妥昔单抗的组合的毒性(例如，皮肤毒性，胃肠毒性，骨髓抑制，心脏毒性，神经小脑毒性或光毒性)的方法，包括将康奈非尼(encorafenib)与比尼美替尼和西妥昔单抗联合给予。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
在一个实施方案中，抗EGFR抑制剂抗体是西妥昔单抗。在一些实施方案中，本文提供了降低对象中比尼美替尼(binimetinib)和西妥昔单抗的组合的毒性(例如，皮肤毒性，胃肠毒性，骨髓抑制，心脏毒性，神经小脑毒性或光毒性)的方法，包括将康奈非尼(encorafenib)与比尼美替尼和西妥昔单抗联合给予。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0029] 在一些实施方案中，本文提供了降低对象中康奈非尼和西妥昔单抗的组合的毒性(例如，皮肤毒性，胃肠毒性，骨髓抑制，心脏毒性，神经小脑毒性或光毒性)的方法，包括将比尼美替尼与康奈非尼和西妥昔单抗联合给予。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0030] 在一些实施方案中，本文提供减少对象中选自康奈非尼、西妥昔单抗或比尼美替尼的第一治疗剂的不良反应(例如，视敏度降低，腹泻，手足皮肤反应，皮肤刺激(例如皮疹，瘙痒病变，裂隙，脱屑)，心脏骤停，水肿，疲劳，虚弱，高血压，肺炎，血栓形成(例如，肺血栓形成)，急性肾衰竭，面部麻痹，头痛或继发性肿瘤)的方法，包括将未选择作为第一治疗剂的其他两种治疗剂与所述第一治疗剂联合给药。在某些这样的实施方案中，第一治疗剂是康奈非尼，其它两种治疗剂是西妥昔单抗和比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，第一治疗剂是西妥昔单抗，其它两种治疗剂是康奈非尼和比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，第一治疗剂是比尼美替尼，其它两种治疗剂是西妥昔单抗和康奈非尼。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0031] 在一些实施方案中，本文提供在被鉴定为患有BRAF V600E结肠直肠癌的对象中减少与癌症治疗方案相关的一种或多种不良事件(例如，皮肤毒性，手足皮疹(HFSR)，皮疹，疹状痤疮样，皮炎，视网膜病变和视网膜脱离)的方法，包括：在包含康奈非尼和抗EGFR抗体的癌症治疗方案中包括比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，抗EGFR抗体选自：西妥昔单抗，吉非替尼，厄洛替尼，拉帕替尼，达克替尼，奈拉替尼，瓦尼阿尼和帕尼单抗。在某些这样的实施方案中，抗EGFR抑制剂抗体是西妥昔单抗。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0032] 在一些实施方案中，本文提供在被鉴定为患有BRAF V600E结肠直肠癌的对象中减少与癌症治疗方案相关的一种或多种不良事件(例如，皮肤毒性，手足皮疹(HFSR)，皮疹，疹状痤疮样，皮炎，视网膜病变和视网膜脱离)的方法，包括：在包含比尼美替尼和抗EGFR抗体的癌症治疗方案中包括康奈非尼。在某些这样的实施方案中，抗EGFR抗体选自：西妥昔单抗，吉非替尼，厄洛替尼，拉帕替尼，达克替尼，奈拉替尼，瓦尼阿尼和帕尼单抗。在某些这样的实施方案中，抗EGFR抑制剂抗体是西妥昔单抗。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0033] 在一些实施方案中，本文提供增加康奈非尼在对象中的安全剂量的方法，包括将康奈非尼与比尼美替尼和西妥昔单抗联合给予。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0034] 在一些实施方案中，本文提供增加比尼美替尼在对象中的安全剂量的方法，包括将比尼美替尼与康奈非尼和西妥昔单抗联合给予。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0035] 在一些实施方案中，本文提供增加西妥昔单抗在对象中的安全剂量的方法，包括将西妥昔单抗与康奈非尼和比尼美替尼联合给予。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0036] 在一些实施方案中，本文提供了改善对象中比尼美替尼和西妥昔单抗的组合的药理学功效的方法，包括将康奈非尼与比尼美替尼和西妥昔单抗联合给予。在某些这样的实施方案中，通过磁共振成像(MRI)(例如，全身骨MRI)，计算机断层扫描，X射线分析，Tc99m骨扫描，氟脱氧葡萄糖-正电子发射断层扫描(FDG-PET)，或氟化钠-正电子发射断层扫描(NaF PET)扫描确定药理学功效的改善。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0037] 在一些实施方案中，本文提供了改善对象中康奈非尼和西妥昔单抗的组合的药理学功效的方法，包括将比尼美替尼与康奈非尼和西妥昔单抗联合给予。在某些这样的实施方案中，通过磁共振成像(MRI)(例如，全身骨MRI)，计算机断层扫描，X射线分析，Tc99m骨扫描，氟脱氧葡萄糖-正电子发射断层扫描(FDG-PET)，或氟化钠-正电子发射断层扫描(NaF PET)扫描确定药理学功效的改善。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0038] 在一些实施方案中，本文提供了改善对象中康奈非尼和比尼美替尼的组合的药理学功效的方法，包括将西妥昔单抗与康奈非尼和比尼美替尼联合给予。在某些这样的实施方案中，通过磁共振成像(MRI)(例如，全身骨MRI)，计算机断层扫描，X射线分析，Tc99m骨扫描，氟脱氧葡萄糖-正电子发射断层扫描(FDG-PET)，或氟化钠-正电子发射断层扫描(NaF PET)扫描确定药理学功效的改善。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0039] 在一些实施方案中，本文提供了在用康奈非尼治疗癌症的对象中增加康奈非尼的最大耐受剂量(MTD)的方法，包括将康奈非尼与MEK抑制剂联合给予对象。在某些这样的实施方案中，最大耐受剂量大于约50mg(例如，大于约100mg，大于约200mg，大于约300mg，大于约400mg，大于约500mg，更大大于约600毫克，或大于约700毫克，或大于约800毫克)。在某些这样的实施方案中，最大耐受剂量为约50mg(例如，约100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg或800mg)。在某些这样的实施方案中，癌症与BRAF突变体V600E相关。在某些这样的实施方案中，癌症是结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)。在某些这样的实施方案中，MEK抑制剂选自：比尼美替尼、曲美替尼(trametinib)、可比美替尼(cobimetinib)、司美替尼(selumetinib)和PD-325901(例如比尼美替尼)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0040] 在一些实施方案中，本文提供了在用康奈非尼治疗癌症的对象中增加康奈非尼的最大耐受剂量(MTD)的方法，包括将康奈非尼与EGFR抑制剂联合给予对象。在某些这样的实施方案中，最大耐受剂量大于约50mg(例如，大于约100mg，大于约200mg，大于约300mg，大于约400mg，大于约500mg，大于约600毫克，或大于约700毫克，或大于约800毫克)。在某些这样的实施方案中，最大耐受剂量为约50mg(例如，约100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg或800mg)。在某些这样的实施方案中，癌症与BRAF突变体V600E相关。在某些这样的实施方案中，癌症是结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)。在某些这样的实施方案中，EGFR抑制剂选自：西妥昔单抗，吉非替尼，厄洛替尼，拉帕替尼，达克替尼，奈拉替尼，瓦尼阿尼和帕尼单抗。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0041] 在一些实施方案中，本文提供了在用康奈非尼治疗癌症的对象中增加康奈非尼的最大耐受剂量(MTD)的方法，包括将康奈非尼与MEK抑制剂和EGFR抑制剂联合给予对象。在某些这样的实施方案中，最大耐受剂量大于约50mg(例如，大于约100mg，大于约200mg，大于约300mg，大于约400mg，大于约500mg，大于约600毫克，或大于约700毫克，或大于约800毫克)。在某些这样的实施方案中，最大耐受剂量为约50mg(例如，约100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，700mg或800mg)。在某些这样的实施方案中，癌症与BRAF突变体V600E相关。在某些这样的实施方案中，癌症是结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)。在某些这样的实施方案中，MEK抑制剂选自：比尼美替尼、曲美替尼(trametinib)、可比美替尼(cobimetinib)、司美替尼(selumetinib)和PD-325901(例如比尼美替尼)。在某些这样的实施方案中，EGFR抑制剂选自：西妥昔单抗，吉非替尼，厄洛替尼，拉帕替尼，达克替尼，奈拉替尼，瓦尼阿尼和帕尼单抗(如西妥昔单抗)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0042] 在一些实施方案中，本文提供了改善对象中比尼美替尼和西妥昔单抗的组合的药理学功效的方法，包括将康奈非尼与比尼美替尼和西妥昔单抗联合给予。在某些这样的实施方案中，比尼美替尼和/或西妥昔单抗的安全剂量的增加各自独立地为至少约2％(例如，至少约4％，至少约5％，至少约6％，至少约8％，至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％，至少约100％)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0043] 在一些实施方案中，本文提供了改善对象中康奈非尼和西妥昔单抗的组合的药理学功效的方法，包括将比尼美替尼与康奈非尼和西妥昔单抗联合给予。在某些这样的实施方案中，康奈非尼和/或西妥昔单抗的安全剂量的增加各自独立地为至少约2％(例如，至少约4％，至少约5％，至少约6％，至少约8％，至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约60％，至少约
70％，至少约80％，至少约90％，至少约100％)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
70％，至少约80％，至少约90％，至少约100％)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0044] 在一些实施方案中，本文提供了改善对象中康奈非尼和比尼美替尼的组合的药理学功效的方法，包括将西妥昔单抗与康奈非尼和比尼美替尼联合给予。在某些这样的实施方案中，康奈非尼和/或比尼美替尼的安全剂量的增加各自独立地为至少约2％(例如，至少约4％，至少约5％，至少约6％，至少约8％，至少约10％，至少约15％，至少约20％，至少约25％，至少约30％，至少约35％，至少约40％，至少约45％，至少约50％，至少约60％，至少约
70％，至少约80％，至少约90％，至少约100％)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
70％，至少约80％，至少约90％，至少约100％)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0045] 在一些实施方案中，本文提供了在给予恩索非尼和西妥昔单抗的组合的对象中抑制MAPK信号传导的方法，包括给予对象比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0046] 在一些实施方案中，本文提供了在给予恩索非尼和比尼美替尼的组合的对象中抑制EGFR活化的方法，包括给予抗EGFR抗体(例如，西妥昔单抗，吉非替尼，厄洛替尼，拉帕替尼，达克替尼，奈拉替尼，瓦尼阿尼和帕尼单抗)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0047] 在一些实施方案中，本文提供了在对象中抑制B-Raf激酶(例如，突变体V600E)的方法，包括给予治疗有效量的比尼美替尼或其药学上可接受的盐，西妥昔单抗或其药学上可接受的盐，以及恩索非尼或其药学上可接受的盐。在某些这样的实施方案中，B-Raf蛋白由突变的BRAF编码。在某些这样的实施方案中，BRAF包括激酶结构域中的突变。在某些这样的实施方案中，BRAF包括V600(例如，V600E，V600K或V600G)突变。
[0048] 在一些实施方案中，本文提供了减少对象中Raf-MEK-ERK途径活化的方法，包括给予所述对象治疗有效量的比尼美替尼或其药学上可接受的盐，西妥昔单抗或其药学上可接受的盐，以及恩索非尼或其药学上可接受的盐。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0049] 在一些实施方案中，本文提供了在接受西妥昔单抗和康奈非尼方案的对象中减少Raf-MEK-ERK途径活化的方法，包括给予所述对象比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，活化与对MEK的激酶活性升高有关。在某些这样的实施方案中，活化与C-Raf的活化有关。在某些这样的实施方案中，对象患有B-Raf相关癌症。在某些这样的实施方案中，对象患有结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)。在某些这样的实施方案中，所述给予减轻了所述对象中结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)的一种或多种症状，引发积极响应(例如，部分或完全)，和/或减少肿瘤大小和/或癌细胞的数量。
[0050] 在一些实施方案中，本文提供了增加康奈非尼在对象中的B-Raf抑制功效的方法，包括将比尼美替尼和西妥昔单抗与康奈非尼联合给予。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0051] 在一些实施方案中，本文提供了抑制康奈非尼和西妥昔单抗在对象中的MAPK抑制功效的方法，包括将比尼美替尼与康奈非尼联合给予。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0052] 在一些实施方案中，本文提供了治疗对象中初始癌症治疗后已经进展的结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)的方法，包括给予所述对象康奈非尼、西妥昔单抗和比尼美替尼的组合。在某些这样的实施方案中，初始癌症治疗产生部分积极响应。在某些这样的实施方案中，初始癌症治疗没有产生响应。在某些这样的实施方案中，最初癌症治疗包括化疗。在某些这样的实施方案中，初始癌症治疗包括给予一种或多种治疗剂。在某些这样的实施方案中，一种或多种治疗剂作为组合给予。在某些这样的实施方案中，所述一种或多种治疗剂选自：西妥昔单抗，贝伐单抗，阿柏西普(aflibercept)，帕尼单抗，伊立替康，利奥夫林(lecuovorin)和氟尿嘧啶。在某些这样的实施方案中，初始癌症治疗包括同时给予伊立替康和亚叶酸，然后给予氟尿嘧啶作为静脉推注，然后通过静脉内输注给予氟尿嘧啶。在某些这样的实施方案中，伊立替康在约90分钟内以约180mg/m2施用。在某些这样的实施方案中，亚叶酸在约120分钟内以约400mg/m2(或2x 250mg/m2)施用。在某些这样的实施方案中，氟尿嘧啶静脉推注以约400mg/m2至500mg/m2施用。在某些这样的实施方案中，氟尿嘧啶静脉输注以约2,400mg/m2至3,000mg/m2施用。在某些这样的实施方案中，结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)与BRAF V600E突变相关。
[0053] 在一些实施方案中，本文提供了治疗对象中初始癌症治疗后已经进展的结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)的方法，包括独立地给予所述对象治疗有效量的康奈非尼、西妥昔单抗和比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，初始癌症治疗产生部分积极响应。在某些这样的实施方案中，初始癌症治疗没有产生响应。在某些这样的实施方案中，最初癌症治疗包括化疗。在某些这样的实施方案中，初始癌症治疗包括给予一种或多种治疗剂。在某些这样的实施方案中，一种或多种治疗剂作为组合给予。在某些这样的实施方案中，所述一种或多种治疗剂选自：西妥昔单抗，贝伐单抗，阿柏西普(aflibercept)，帕尼单抗，伊立替康，利奥夫林(lecuovorin)和氟尿嘧啶。在某些这样的实施方案中，初始癌症治疗包括同时给予伊立替康和亚叶酸，然后给予氟尿嘧啶作为静脉推注，然后通过静脉内输注给予氟尿嘧啶。在某些这样的实施方案中，伊立替康在约90分钟内以约180mg/m2施用。在某些这样的实施方案中，亚叶酸在约120分钟内以约400mg/m2(或2x 250mg/m2)施用。在某些这样的实施方案中，氟尿嘧啶静脉推注以约400mg/m2至500mg/m2施用。在某些这样的实施方案中，氟尿嘧啶静脉输注以约2,400mg/m2至3,000mg/m2施用。在某些这样的实施方案中，结肠直肠癌(例如，转移性结肠直肠癌)与BRAF V600E突变相关。
[0054] 在一些实施方案中，本文提供了治疗对象癌症的方法，包括给予康奈非尼、比尼美替尼和西妥昔单抗的组合；其中康奈非尼和比尼美替尼各自在给予西妥昔单抗之前至少30分钟给予。在某些这样的实施方案中，在早晨给予康奈非尼和比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，傍晚给予比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，在给予比尼美替尼之前1小时或多个小时(例如两个小时或更久，三个小时或更久，四个小时或更久，五个小时或更久，或六个小时或更久)对象没有吃喝(例如固体或液体)食物。在某些这样的实施方案中，每天一次给予康奈非尼。在某些这样的实施方案中，康奈非尼在其给予的每一天的相同时间给予。在某些这样的实施方案中，给予康奈非尼的剂量为约100mg至约400mg(例如约120mg，约
150mg，约175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，约325mg，约350mg，约
375mg，或约400mg)。在某些这样的实施方案中，口服给予康奈非尼。在某些这样的实施方案中，每天两次给予康奈非尼。在某些这样的实施方案中，康奈非尼在其给予的每一天的相同的两个时间给予。在某些这样的实施方案中，给予比尼美替尼的剂量为约10mg至约85mg(例如，约15mg，约20mg，约25mg，约30mg，约35mg，约40mg，约45mg，约50mg，约55mg，约60mg，约
65mg，约70mg，约75mg，约80mg，或约85mg)。在某些这样的实施方案中，口服给予比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，每周一次给予西妥昔单抗。在某些这样的实施方案中，如果是第一剂量，给予西妥昔单抗的剂量为约150mg至约500mg(例如，约175mg，约200mg，约
225mg，约250mg，约275mg，约300mg，约325mg，约350mg，约375mg，约400mg，约425mg，约
450mg，或约475mg)，或者如果不是第一剂量，给予西妥昔单抗的剂量为约100mg至约350mg(例如，约125mg，约150mg，约175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，或约
325mg)。在某些这样的实施方案中，西妥昔单抗通过静脉内输注给予持续约30分钟至约180分钟(例如，40分钟，50分钟，60分钟，70分钟，80分钟，90分钟，100分钟，110分钟，120分钟，
130分钟，140分钟，150分钟，160分钟或170分钟)。在某些这样的实施方案中，指示对象避免食用葡萄柚，石榴，杨桃或塞维利亚橙子(Seville oranges)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
150mg，约175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，约325mg，约350mg，约
375mg，或约400mg)。在某些这样的实施方案中，口服给予康奈非尼。在某些这样的实施方案中，每天两次给予康奈非尼。在某些这样的实施方案中，康奈非尼在其给予的每一天的相同的两个时间给予。在某些这样的实施方案中，给予比尼美替尼的剂量为约10mg至约85mg(例如，约15mg，约20mg，约25mg，约30mg，约35mg，约40mg，约45mg，约50mg，约55mg，约60mg，约
65mg，约70mg，约75mg，约80mg，或约85mg)。在某些这样的实施方案中，口服给予比尼美替尼。在某些这样的实施方案中，每周一次给予西妥昔单抗。在某些这样的实施方案中，如果是第一剂量，给予西妥昔单抗的剂量为约150mg至约500mg(例如，约175mg，约200mg，约
225mg，约250mg，约275mg，约300mg，约325mg，约350mg，约375mg，约400mg，约425mg，约
450mg，或约475mg)，或者如果不是第一剂量，给予西妥昔单抗的剂量为约100mg至约350mg(例如，约125mg，约150mg，约175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，或约
325mg)。在某些这样的实施方案中，西妥昔单抗通过静脉内输注给予持续约30分钟至约180分钟(例如，40分钟，50分钟，60分钟，70分钟，80分钟，90分钟，100分钟，110分钟，120分钟，
130分钟，140分钟，150分钟，160分钟或170分钟)。在某些这样的实施方案中，指示对象避免食用葡萄柚，石榴，杨桃或塞维利亚橙子(Seville oranges)。在某些这样的实施方案中，选择具有BRAF V600(例如V600E)突变的对象。
[0056] 图1A是运载体(IgG对照)，西妥昔单抗，LGX818和LGX818+西妥昔单抗治疗21天后HT29异种移植物模型中的肿瘤生长曲线，表示为肿瘤体积(mm3)与植入后天数的关系，其中实心菱形代表运载体(IgG对照)，实心三角形代表西妥昔单抗，实心倒三角形代表LGX818，实心方形代表LGX818+西妥昔单抗。
[0057] 图1B是显示LGX818+西妥昔单抗的个体动物响应(肿瘤消退)的柱形图。柱形图反映了动物在任何时间点的最佳响应。
[0058] 图1C是显示LGX818+西妥昔单抗+比尼美替尼的个体动物响应(肿瘤消退)的柱形图。柱形图反映了动物在任何时间点的最佳响应。
[0059] 图2是运载体(IgG对照)，西妥昔单抗，LGX818和LGX818+西妥昔单抗治疗21天后HT29异种移植物模型中的体重变化曲线，表示为肿瘤体积(mm3)与植入后天数的关系，其中实心菱形代表运载体(IgG对照)，实心三角形代表西妥昔单抗，实心倒三角形代表LGX818，实心方形代表LGX818+西妥昔单抗。
[0060] 图3是运载体(IgG对照)，LGX818，MEK162和LGX818+MEK162治疗21天后HT29异种移3
植物模型中的肿瘤生长曲线，表示为肿瘤体积(mm)与植入后天数的关系，其中实心菱形代表运载体，空心三角形代表LGX818，实心倒三角形代表MEK162，空心菱形代表LGX818+MEK162。
植物模型中的肿瘤生长曲线，表示为肿瘤体积(mm)与植入后天数的关系，其中实心菱形代表运载体，空心三角形代表LGX818，实心倒三角形代表MEK162，空心菱形代表LGX818+MEK162。
[0061] 图4是运载体(IgG对照)，LGX818，MEK162和LGX818+MEK162治疗21天后HT29异种移3
植物模型中的体重变化曲线，表示为肿瘤体积(mm)与植入后天数的关系，其中实心菱形代表运载体(IgG对照)，实心三角形代表LGX818，实心倒三角形代表MEK162，实心方形代表LGX818+MEK162。
植物模型中的体重变化曲线，表示为肿瘤体积(mm)与植入后天数的关系，其中实心菱形代表运载体(IgG对照)，实心三角形代表LGX818，实心倒三角形代表MEK162，实心方形代表LGX818+MEK162。
[0062] 图5是运载体(IgG对照)，西妥昔单抗，MEK162和MEK162+西妥昔单抗治疗21天后3
HT29异种移植物模型中的肿瘤生长曲线，表示为肿瘤体积(mm)与植入后天数的关系，其中实心菱形代表运载体(IgG对照)，实心三角形代表西妥昔单抗，实心倒三角形代表MEK162，实心方形代表MEK162+西妥昔单抗。
HT29异种移植物模型中的肿瘤生长曲线，表示为肿瘤体积(mm)与植入后天数的关系，其中实心菱形代表运载体(IgG对照)，实心三角形代表西妥昔单抗，实心倒三角形代表MEK162，实心方形代表MEK162+西妥昔单抗。
[0063] 图6是运载体(IgG对照)，西妥昔单抗，MEK162和MEK162+西妥昔单抗治疗21天后HT29异种移植物模型中的体重变化曲线，表示为肿瘤体积(mm3)与植入后天数的关系，其中实心菱形代表运载体(IgG对照)，实心三角形代表西妥昔单抗，实心倒三角形代表MEK162，实心方形代表MEK162+西妥昔单抗。
[0064] 图7是终止运载体(IgG对照)，西妥昔单抗，LGX818，MEK162，LGX818+MEK162，LGX818+西妥昔单抗，MEK162+西妥昔单抗和LGX818+MEK162+西妥昔单抗治疗后HT29异种移植物模型中的肿瘤再生长曲线，表示为肿瘤体积(mm3)与植入后天数的关系，其中空心方形代表运载体，阴影三角形代表西妥昔单抗，实心倒三角形代表LGX818，实心圆圈代表MEK162，实心菱形代表LGX818+MEK162，实心方形代表LGX818+西妥昔单抗，空心圆圈代表MEK162+西妥昔单抗，空心三角形代表LGX818+MEK162+西妥昔单抗。
[0065] 图8显示了根据实施例3制备的结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的X-射线粉末衍射图。
[0066] 发明详述
[0067] 本发明提供药物组合，其独立地包含治疗有效量的(a)BRAF抑制剂或其药学上可接受的盐，(b)至少一种丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂或其药学上可接受的盐，(c)表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂或其药学上可接受的盐；和任选的至少一种药学上可接受的载体，所述组合用于治疗增殖性疾病。
[0068] 在一个实施方案中，本文提供了药物组合，其独立地包含治疗有效量的：(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)或其药学上可接受的盐，(b)至少一种MEK抑制剂(化合物B)，和(c)抗EGFR抗体(化合物C)，和任选的至少一种药学上可接受的载体，所述组合用于治疗增殖性疾病。
[0069] 在一个实施方案中，本文提供了药物组合，其独立地包含治疗有效量的：(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)或其药学上可接受的盐，(b)MEK抑制剂(化合物B)，其为6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐，和(c)抗EGFR抗体(化合物C)，和任选的至少一种药学上可接受的载体。
[0070] 在一个实施方案中，本文提供了药物组合，其独立地包含治疗有效量的：(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)或其药学上可接受的盐，(b)MEK抑制剂(化合物B)，其为6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐，和(c)抗EGFR抗体(化合物)，其为西妥昔单抗，和任选的至少一种药学上可接受的载体。
[0071] 本发明的药物组合包括BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(在本文中称为“化合物A”)。化合物A是式I的化合物：
[0072]
[0073] 化合物A也称为[(2S)-1-{[4-(3-{5-氯-2-氟-3-[(甲基磺酰基)氨基]苯基}-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-2-嘧啶基]氨基}-2-丙基]氨基甲酸甲酯，N-{(2S)-1-[(4-{3-[5氯-2-氟-3-(甲磺酰氨基)苯基]-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基}嘧啶-2-基)氨基]丙-2-基}氨基甲酸甲酯，LGX818，NVP-LGX818和康奈非尼。化合物A描述于WO 2011/025927和美国专利8,
501,758中。化合物A的合成描述于WO2011/025927的实施例5和6，其通过引用整体并入本文。在一个实施方案中，化合物A是无定形形式。
501,758中。化合物A的合成描述于WO2011/025927的实施例5和6，其通过引用整体并入本文。在一个实施方案中，化合物A是无定形形式。
[0074] 当提及化合物A时，术语一种或多种“盐”应理解为化合物A的盐，其可以单独存在或与游离的式(I)化合物混合存在，并且优选是药学上可接受的盐。这些盐例如通过使化合物A的游离碱形式与药学上可接受的无机或有机酸反应而形成酸加成盐。化合物A的盐优选是药学上可接受的盐。
[0075] 化合物A具有不对称中心，并且可以如WO2011/025927中所述作为单独的(R)-或(S)-立体异构体或其混合物制备。除非另有说明，说明书和权利要求书中化合物A的描述或命名旨在包括两种单独的对映异构体以及它们的外消旋混合物。因此，本发明还包括所有这些异构体，包括化合物A的非对映异构体混合物和拆分的对映异构体。通过与适当的光学活性化合物(例如醇)反应将对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体，并将各个非对映异构体转化(例如水解)成相应的纯对映异构体，可以分离对映异构体。测定立体化学和分离立体异构体的方法是本领域熟知的(参见《高级有机化学》(Advanced Organic Chemistry)第4版中的第4章的讨论(J.March，约翰韦利森公司(John Wiley&Sons)，纽约，1992)。在一个实施方案中，化合物A是(S)-立体异构体，即[(2S)-1-{[4-(3-{5-氯-2-氟-3-[(甲基磺酰基)氨基]苯基}-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-2-嘧啶基]氨基}-2-丙基]氨基甲酸甲酯。
[0076] 本发明的药物组合包括至少一种MEK抑制剂(本文称为“化合物B”)。在一个实施方案中，MEK抑制剂选自：6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺，曲美替尼，可比美替尼(GDC-0973)和司美替尼(AZD6244)。在一个实施方案中，化合物B是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺，其是式(II)的化合物：
[0077]
[0078] MEK抑制剂6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺描述于PCT公开WO 03/077914，该文献描述了其制备方法，例如，在实施例18中(化合物29lll)。6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺也称为5-[(4-溴-2-氟苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺，ARRY-162，MEK162和比尼美替尼。在一个实施方案中，6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺以及制备结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的方法描述于PCT公开WO 2014/063024，其通过引用并入本文。
[0079] 在一个实施方案中，MEK抑制剂是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺可以根据实施例3制备。结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的X-射线粉末衍射图具有以o2θ表示的特征衍射峰。使用Shimadzu XRD-6000X射线粉末衍射仪，使用CuKα辐射进行X射线粉末衍射(XRPD)分析。该仪器配有长焦点聚焦X射线管。管电压和电流强度分别设定为40kV和40mA。发散和散射狭缝设定为1°，接收狭缝设定为0.15mm。通过NAI闪烁检测器检测衍射辐射。使用1°/分钟(步长0.02°)的θ-2θ连续扫描，从2到42°2θ(计数时间＝1.200秒；波长＝1.540562；点数＝2001；数据文件分辨率＝1600)。衍射仪光学系统：固定狭缝；没有X2配置。管：固定狭缝；没有X2配置。分析硅标准以检查仪器对准。使用XRD-6100/7000v.5.0收集和分析数据。通过将样品置于不锈钢样品架中制备样品用于分析。
[0080] 在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在20.38处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在28.39处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在11.18处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在29.18处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的
6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以
2θ表示的在22.43处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-
3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在22.75处的特征峰。
在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在25.23处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在16.05处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在11.82处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在23.74处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在16.33处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在19.00处的特征峰。
6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以
2θ表示的在22.43处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-
3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在22.75处的特征峰。
在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在25.23处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在16.05处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在11.82处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在23.74处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在16.33处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在19.00处的特征峰。
[0081] 在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的X-射线粉末衍射图包含以2θ表示的2-12个以下特征峰：
20.38、28.39、11.18、29.18、22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和19.00。例如，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺可具有以2θ表示的在20.38或28.39处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在
20.38、28.39和11.18处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.38、28.39、
11.18和29.18处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.38、28.39、11.18、
29.18、22.43和22.75处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.38、28.39、
11.18、29.18、22.43、22.75、25.23、16.05和11.82处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.38、28.39、11.18、29.18、22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和
19.00处的特征峰的X-射线粉末衍射图。
20.38、28.39、11.18、29.18、22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和19.00。例如，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺可具有以2θ表示的在20.38或28.39处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在
20.38、28.39和11.18处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.38、28.39、
11.18和29.18处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.38、28.39、11.18、
29.18、22.43和22.75处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.38、28.39、
11.18、29.18、22.43、22.75、25.23、16.05和11.82处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.38、28.39、11.18、29.18、22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33和
19.00处的特征峰的X-射线粉末衍射图。
[0082] 在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的X-射线粉末衍射图包含以2θ表示的在20.38、28.39、11.18、
29.18、22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33.19.00、30.01、25.98、37.35、6.79、
9.47、34.21、30.43和31.40处的特征峰。
29.18、22.43、22.75、25.23、16.05、11.82、23.74、16.33.19.00、30.01、25.98、37.35、6.79、
9.47、34.21、30.43和31.40处的特征峰。
[0083] 在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在20.4±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在28.4±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在11.2±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在29.2±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在22.4±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在22.7±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-
3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在25.2±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在16.0±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在11.8±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在23.7±
0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在16.3±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在19.0±0.2处的特征峰。
3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在25.2±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在16.0±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在11.8±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在23.7±
0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在16.3±0.2处的特征峰。在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺具有以2θ表示的在19.0±0.2处的特征峰。
[0084] 在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的X-射线粉末衍射图包含以2θ表示的2-12个以下特征峰：
20.4±0.2,28.4±0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2,22.7±0.2,25.2±0.2,16.0±
0.2,11.8±0.2,23.7±0.2,16.3±0.2和19.0±0.2。例如，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺可具有以2θ表示的在20.4±
0.2和28.4±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±0.2,28.4±0.2和11.2±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±0.2,28.4±0.2,
11.2±0.2和29.2±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±0.2,28.4±0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2和22.7±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±0.2,28.4±0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2,22.7±0.2,25.2±0.2,16.0±0.2和11.8±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±
0.2,28.4±0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2,22.7±0.2,25.2±0.2,16.0±0.2,
11.8±0.2,23.7±0.2,16.3±0.2和19.0±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图。
20.4±0.2,28.4±0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2,22.7±0.2,25.2±0.2,16.0±
0.2,11.8±0.2,23.7±0.2,16.3±0.2和19.0±0.2。例如，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺可具有以2θ表示的在20.4±
0.2和28.4±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±0.2,28.4±0.2和11.2±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±0.2,28.4±0.2,
11.2±0.2和29.2±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±0.2,28.4±0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2和22.7±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±0.2,28.4±0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2,22.7±0.2,25.2±0.2,16.0±0.2和11.8±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图；或以2θ表示的在20.4±
0.2,28.4±0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2,22.7±0.2,25.2±0.2,16.0±0.2,
11.8±0.2,23.7±0.2,16.3±0.2和19.0±0.2处的特征峰的X-射线粉末衍射图。
[0085] 在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的X-射线粉末衍射图包含以2θ表示的在20.4±0.2,28.4±
0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2,22.7±0.2,25.2±0.2,16.0±0.2,11.8±0.2,
23.7±0.2,16.3±0.2,19.0±0.2,30.0±0.2,26.0±0.2,37.3±0.2,6.8±0.2,9.5±
0.2,34.2±0.2,30.4±0.2和31.4±0.2处的特征峰。
0.2,11.2±0.2,29.2±0.2,22.4±0.2,22.7±0.2,25.2±0.2,16.0±0.2,11.8±0.2,
23.7±0.2,16.3±0.2,19.0±0.2,30.0±0.2,26.0±0.2,37.3±0.2,6.8±0.2,9.5±
0.2,34.2±0.2,30.4±0.2和31.4±0.2处的特征峰。
[0086] 在一些实施方案中，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的X射线粉末衍射图具有表A中列出的至少20个特征峰(o2θ)。
[0087] 表A：结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的XRPD峰
[0088]峰位置 相对强度
20.3800 100.00
28.3913 79.16
11.1794 37.28
29.1781 20.08
22.4263 19.60
22.7475 19.25
25.2388 18.65
16.0469 17.88
11.8200 17.53
23.7469 15.95
16.3331 14.72
18.9975 14.54
30.0125 11.60
25.9825 11.26
37.3462 10.86
6.7937 9.80
9.4694 9.10
34.2062 8.05
30.4287 7.67
31.4044 6.04
20.3800 100.00
28.3913 79.16
11.1794 37.28
29.1781 20.08
22.4263 19.60
22.7475 19.25
25.2388 18.65
16.0469 17.88
11.8200 17.53
23.7469 15.95
16.3331 14.72
18.9975 14.54
30.0125 11.60
25.9825 11.26
37.3462 10.86
6.7937 9.80
9.4694 9.10
34.2062 8.05
30.4287 7.67
31.4044 6.04
[0089] 相对于化合物B，除非另有说明，术语一种或多种“盐”包括可存在于本发明化合物中的酸性和碱性基团的盐。化合物B能够与各种无机和有机酸形成盐。可用于制备本发明的碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是那些形成无毒酸加成盐的酸，即含有药学上可接受的阴离子的盐，例如乙酸盐，苯甲酸盐，溴化物，氯化物，柠檬酸盐，富马酸盐，氢溴酸盐，盐酸盐，碘化物，乳酸盐，马来酸盐，扁桃酸盐，硝酸盐，草酸盐，水杨酸盐，琥珀酸盐和酒石酸盐。这种类型的盐的实例是本发明的化合物B的盐酸盐或硫酸盐。
[0090] 适用于本发明的化合物B的其它药学上可接受的盐包括PCT申请WO03/077914中公开的盐，其通过引用并入本文。
[0091] 本发明的药物组合包括表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂(在本文中称为化合物C)。在一个实施方案中，EGFR抑制剂是酪氨酸激酶抑制剂(例如，厄洛替尼，吉非替尼或拉帕替尼)。在一个实施方案中，EGFR抑制剂是单克隆抗体，在本文中也称为抗EGFR抗体(例如，帕尼单抗或西妥昔单抗)。术语“抗EGFR抗体”在本文中定义为指能够结合EGFR的抗体或其抗原结合片段(即EGFR拮抗剂)。抗EGFR抗体通过封闭配体结合区来竞争配体受体结合。抗EGFR抗体可以促进受体内化和随后的降解而不发生受体磷酸化。在一个实施方案中，抗EGFR抗体识别与WO 96/40210中描述的C225(也称为西妥昔单抗)相同的表位。在另一个实施方案中，抗EGFR抗体具有与WO 96/40210中描述的C225(西妥昔单抗)相同的6个CDR(互补决定区)。在一个实施方案中，化合物C是抗EGFR抗体西妥昔单抗(也称为C225和Erbitux)。西妥昔单抗是单克隆抗体，其序列及其制备方法以及在治疗增殖性疾病中的应用公开于美国专利6,217,866和WO 96/40210中，其通过引用并入本文。作为单克隆抗体，西妥昔单抗的作用方式不同于标准的非选择性化学疗法，因为它特异性地靶向并结合EGFR。这种结合抑制了受体的激活和随后的信号转导途径，这导致肿瘤细胞对正常组织的侵袭以及肿瘤扩散到新部位降低。还认为它抑制肿瘤细胞修复由化学疗法和放射疗法引起的损伤的能力并抑制肿瘤内新血管的形成，这似乎导致肿瘤生长的整体抑制。
[0092] 在下文中，化合物A、化合物B和化合物C的三重组合将被称为本发明组合，其中化合物A、化合物B和化合物C中的每一种可以被称为组合伴侣、组合组分或治疗剂。
[0093] 本发明涉及本发明组合，其可用于将组合组分分开、同时或顺序给予需要的患者以治疗增殖性疾病。
[0094] 本发明进一步提供了商业包装，其包含用于治疗增殖性疾病的分开、同时或顺序给药的作为治疗剂的本发明组合，以及说明书。
[0095] 本发明还提供一种商品包装，其包含作为治疗剂的化合物A(N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐)和化合物B，以及化合物A和化合物B与化合物C分开、同时或顺序给药的说明书。在一个实施方案中，MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，抗EGFR抑制剂抗体是西妥昔单抗。
[0096] 除非另有明确说明，否则本文使用的一般术语具有以下含义:
[0097] 除非另有说明，术语“包含”和“包括”在本文中以其开放式和非限制性意义使用。
[0098] 描述本发明的内容时使用的术语“一个”、“一种”和“该”等类似表达(尤其在权利要求书的内容中)应解释为涵盖单数和复数，除非另有说明或者清楚指出相反。当复数形式用于化合物、盐等时，这也意指单一化合物、盐等。
[0099] 术语“组合”或“药物组合”在本文中定义为指一种剂量单位形式的固定组合，或用于组合给予规定的三联疗法治疗方案的非固定组合或试剂盒，其中BRAF抑制剂(即化合物A)或其药学上可接受的盐，MEK抑制剂(即化合物B)或其药学上可接受的盐，和EGFR抑制剂(即化合物C)，例如抗EGFR抗体，可以同时或独立地在相同时间给予或在时间间隔内分开给予。在一个实施方案中，组合伴侣(即化合物A，化合物B和化合物C)同时独立地在相同时间，或分开任选地在允许组合伴侣显示合作(例如，协同效应)的特定时间间隔内给予。术语“固定组合”是指组合伴侣化合物A和化合物B均以单一实体或单位剂型的形式同时地给予患者，而化合物C作为单独的实体或单位剂型给予。术语“非固定组合”是指化合物A或其药学上可接受的盐，化合物B或其药学上可接受的盐和化合物C各自作为单独的单位剂型给予患者，可以同时、分开或顺序给予，任选地在特定的时间间隔内，其中所述给予在患者体内提供治疗有效水平的三种化合物。
[0100] 术语“药物组合物”在本文中定义为指含有至少一种治疗剂(即，化合物A，化合物B或化合物C)的混合物或溶液，给予对象(例如例如哺乳动物或人)用于治疗影响哺乳动物的特定疾病或病症。
[0101] 术语“药学上可接受的”在本文中定义为指在合理的医学判断范围内适合与对象(例如哺乳动物或人)的组织接触的那些化合物、材料、组合物和/或剂型，不会产生过度毒性、刺激性、过敏反应或与合理的效益/风险比相称的其它问题并发症。
[0103] 本文使用的术语“治疗”包括缓解、减轻或减轻对象中的至少一种症状或实现疾病进展的延迟的治疗。例如，治疗可以是疾病(例如癌症)的一种或几种症状的减轻或完全根除。在本发明的含义内，术语“治疗”还表示阻止、延迟疾病发生(即疾病临床表现之前的阶段)和/或降低疾病发展或恶化的风险。“治疗”还可以意味着与未接受治疗的预期存活相比延长的存活，例如，与未接受如本文所述的治疗的对象相比总体存活(OS)的增加和/或与未接受如本文所述治疗的对象相比无进展存活的增加(PFS)。术语“治疗”还可以表示患有癌症的对象的状况的改善，例如以下一种或多种：对象中一个或多个肿瘤的尺寸减小，对象中一个或多个肿瘤的生长速率降低或无显著变化，对象中转移的减少，以及对象的缓解期的增加(例如，与没有接受治疗或接受不同治疗的患有类似癌症的对象的一个或多个度量相比，或与治疗前同一对象的一个或多个度量相比)。用于评价患有癌症的对象对治疗的响应的其他度量在下文中公开。
[0104] 本文使用的术语“联合治疗活性”或“联合治疗效果”是指本发明组合的治疗剂可以同时给予或在它们显示相互作用(例如，联合治疗效果，例如协同效应)的时间间隔内分开给予患者(例如，以按时间顺序交错的方式，例如顺序特异性方式)。不论是否是这种情况，都可以通过跟踪血液水平确定(但不限于此)，显示至少在某些时间间隔期间组合组分都存在于待治疗的人的血液中。
[0105] 本发明组合的治疗剂组合的术语“药学有效量”或“临床有效量”或“治疗有效量”是足以提供用该组合治疗的疾病相对于基线临床可观察到的的体征和症状的可观察到的改善的量。
[0106] 术语一种或多种“抗体”在最广泛的意义上可互换使用，包括单克隆抗体，分离的，工程化的，化学合成的或重组的抗体(例如，全长或完整的单克隆抗体)，多克隆抗体，多价抗体或多特异性抗体(例如，双特异性抗体)以及抗体片段，只要它们表现出所需的生物活性即可。在一个实施方案中，抗体是重组抗体。
[0107] 如本文所用，表述“EGFR抗体”应解释为类似于“抗EGFR抗体”，并且是指能够结合EGFR的抗体。
[0108] 抗体的“EGFR结合片段”或“抗原结合片段”旨在表示保留结合抗体的EGFR靶标(通常也称为抗原)的能力的任何肽、多肽或蛋白质。在一个实施方案中，此类“抗原结合片段”选自Fv，scFv(sc为单链)，Fab，F(ab’)2,，Fab'，scFv-Fc片段或双抗体，或通过化学改性增加半衰期的任何片段，例如加入聚(亚烷基)二醇如聚(乙二醇)(“PEG化”)(称为Fv-PEG的聚乙二醇化片段，scFv-PEG，Fab-PEG，F(ab’)2-PEG或Fab'-PEG)(聚(乙烯)二醇的“PEG”)，或通过掺入脂质体，所述片段具有本发明抗体的至少一个特征性CDR。在一个实施方案中，“抗原结合片段”将构成或将包含衍生它们的抗体的重链或轻链可变区的部分序列，所述部分序列足以保持相对于靶标而言，与其传承的抗体相同的结合特异性和足够的亲和力，例如与其传承的抗体的亲和力的至少等于1/100，作为另一个实例，至少等于1/10。
[0109] 本文所用的术语“BRAF抑制剂”是指靶向、降低或抑制BRAF蛋白激酶(包括BRAF蛋白的突变形式，如BRAF V600突变，如V600E，V600D和V600K)的活性的化合物。在一个实施方案中，突变BRAF蛋白包括V600E突变。
[0110] 本文使用的术语“MEK抑制剂”是指靶向、降低或抑制MAP激酶(MEK)(包括MEK的突变形式)的激酶活性的化合物。在一个实施方案中，MEK抑制剂选自：6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺(比尼美替尼；MEK162；ARRY-162)，曲美替尼，可比美替尼(GDC-0973)和司美替尼(AZD6244)。在一个实施方案中，MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，MEK抑制剂是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
[0111] 本文使用的术语“EGFR抑制剂”是指靶向、降低或抑制EGFR(包括EGFR的突变形式，包括(EGFRvIII))的活性的化合物。在一个实施方案中，EGFR抑制剂是抗EGFR抗体。
[0112] 本文使用的术语“抗EGFR抗体”是指能够结合EGFR的抗体或其抗原结合片段(即，EGFR拮抗剂)，其靶向、降低或抑制EGFR活性的激酶活性，包括突变体形式的EGFR。在一个实施方案中，抗EGFR抗体是西妥昔单抗，吉非替尼，厄洛替尼，拉帕替尼，达克替尼，奈拉替尼，瓦尼阿尼和帕尼单抗。在一个实施方案中，抗EGFR抗体是西妥昔单抗。
[0113] 如本文所用，术语“对象”，“个体”或“患者”可互换使用，指任何动物，包括哺乳动物，例如人，灵长类动物，小鼠，大鼠，其他啮齿动物，兔，狗，猫，猪，牛，羊和马。在一些实施方案中，该对象是人。在一些实施方案中，对象已经历和/或表现出待治疗的疾病或病症的至少一种症状。在一些实施方案中，对象已被鉴定或诊断为患有BRAF相关疾病或病症。在一些实施方案中，所述对象已被鉴定或诊断为具有BRAF基因、BRAF蛋白或其表达或活性或水平失调的癌症(例如，BRAF相关癌症)(例如，如使用管理机构批准的(例如FDA批准的)分析或试剂盒所测定)。在一些实施方式中，对象具有对BRAF基因、BRAF蛋白或其表达或活性或水平失调为阳性的肿瘤(如使用管理机构批准的分析或试剂盒所测定)。对象可以是具有对BRAF基因、BRAF蛋白或其表达或活性或水平失调为阳性的对象(例如，使用管理机构批准的(例如FDA批准的)分析或试剂盒鉴定为阳性)。对象可以是其肿瘤具有BRAF基因、BRAF蛋白，或其表达或活性或水平失调的对象(例如，其中肿瘤使用管理机构批准的(例如FDA批准的)分析或试剂盒鉴定)。在一些实施方式中，所述对象疑似患有BRAF相关的癌症。在一些实施方式中，对象具有临床记录，指示对象具有BRAF基因、BRAF蛋白或其表达或活性或水平失调的肿瘤(并且任选地临床记录指示对象应该用本文提供的任何组合治疗)。在一些实施方案中，对象已被鉴定或诊断为患有MEK相关疾病或病症。在一些实施方案中，所述对象已被鉴定或诊断为具有MEK基因、MEK蛋白或其表达或活性或水平失调的癌症(例如，MEK相关癌症)(例如，如使用管理机构批准的(例如FDA批准的)分析或试剂盒所测定)。在一些实施方式中，对象具有对MEK基因、MEK蛋白或其表达或活性或水平失调为阳性的肿瘤(如使用管理机构批准的分析或试剂盒所测定)。对象可以是具有对MEK基因、MEK蛋白或其表达或活性或水平失调为阳性的对象(例如，使用管理机构批准的(例如FDA批准的)分析或试剂盒鉴定为阳性)。对象可以是其肿瘤具有MEK基因、MEK蛋白或其表达或活性或水平失调的对象(例如，其中肿瘤使用管理机构批准的(例如FDA批准的)分析或试剂盒鉴定)。在一些实施方式中，所述对象疑似患有MEK相关的癌症。在一些实施方式中，对象具有临床记录，指示对象具有MEK基因、MEK蛋白或其表达或活性或水平失调的肿瘤(并且任选地临床记录指示对象应该用本文提供的任何组合治疗)。在一些实施方案中，对象已被鉴定或诊断为患有EGFR相关疾病或病症。在一些实施方案中，所述对象已被鉴定或诊断为具有EGFR基因、EGFR蛋白或其表达或活性或水平失调的癌症(例如，EGFR相关癌症)(例如，如使用管理机构批准的(例如FDA批准的)分析或试剂盒所测定)。在一些实施方式中，对象具有对EGFR基因、EGFR蛋白或其表达或活性或水平失调为阳性的肿瘤(如使用管理机构批准的分析或试剂盒所测定)。对象可以是具有对EGFR基因、EGFR蛋白或其表达或活性或水平失调为阳性的对象(例如，使用管理机构批准的(例如FDA批准的)分析或试剂盒鉴定为阳性)。对象可以是其肿瘤具有EGFR基因、EGFR蛋白，或其表达或活性或水平失调的对象(例如，其中肿瘤使用管理机构批准的(例如FDA批准的)分析或试剂盒鉴定)。在一些实施方式中，所述对象疑似患有EGFR相关的癌症。在一些实施方式中，对象具有临床记录，指示对象具有EGFR基因、EGFR蛋白或其表达或活性或水平失调的肿瘤(并且任选地临床记录指示对象应该用本文提供的任何组合治疗)。在一些实施方式中，对象是儿科患者。在一个实施方式中，所述对象患有结肠直肠癌。在一个实施方式中，所述对象患有转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，对象患有具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，对象患有具有BRAF V600E突变的IV期转移性结肠直肠癌。
[0114] “管理机构”是指批准医药试剂在该国家进行医疗用途的国家机构。例如，管理机构的非限制性示例是美国食品和药物管理局(FDA)。
[0115] 这里使用的术语“儿科患者”是指在诊断或治疗时年龄在16岁以下的患者。“儿科”一词可以进一步分为不同的亚群，包括：新生儿(从出生到生命的第一个月)；婴儿(1个月至2岁)；儿童(两岁至十二岁)；和青少年(12岁至21岁(最多但不包括二十二岁生日))。
Berhman RE,Kliegman R,Arvin AM,Nelson WE.Nelson《儿科教科书(Textbook of Pediatrics)》，第15版，费城：W.B.Saunders公司，1996年；Rudolph AM等，《鲁道夫儿科学(Rudolph’s Pediatrics)》，第21版，纽约：McGraw-Hill公司，2002；和Avery MD，First LR，《儿科医学(Pediatric Medicine)》，第二版，巴尔的摩：Williams&Wilkins公司；1994年。
Berhman RE,Kliegman R,Arvin AM,Nelson WE.Nelson《儿科教科书(Textbook of Pediatrics)》，第15版，费城：W.B.Saunders公司，1996年；Rudolph AM等，《鲁道夫儿科学(Rudolph’s Pediatrics)》，第21版，纽约：McGraw-Hill公司，2002；和Avery MD，First LR，《儿科医学(Pediatric Medicine)》，第二版，巴尔的摩：Williams&Wilkins公司；1994年。
[0116] 本文使用的术语“BRAF相关疾病或病症”是指与BRAF基因、BRAF激酶(在本文中也称为BRAF激酶蛋白或BRAF激酶)或其中任何(例如一种或多种)的表达或活性或水平失调(例如，本文所述的BRAF基因、BRAF激酶、BRAF激酶结构域或其中任何的表达或活性或水平失调的任何类型)相关的疾病或病症。BRAF相关疾病或病症的非限制性实例包括例如BRAF相关癌症。
[0117] 本文使用的术语“BRAF相关癌症”是指与BRAF基因、BRAF激酶(在本文中也称为BRAF激酶蛋白或BRAF)或其表达或活性或水平相关或具有失调的癌症。在一个实施方案中，BRAF相关癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，BRAF相关癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一个实施方案中，BRAF相关癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，BRAF相关癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，BRAF相关癌症是具有BRAF V600突变的转移性结肠直肠癌。
[0118] 短语“BRAF基因、BRAF激酶或其表达或活性或水平失调”是指基因突变(例如导致融合蛋白表达的BRAF基因易位，导致与野生型BRAF蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的BRAF蛋白表达的BRAF基因中的缺失，或导致具有一个或多个点突变的BRAF蛋白表达的BRAF基因中的突变，导致与野生型BRAF蛋白相比BRAF蛋白中的至少一个氨基酸缺失的BRAF蛋白的BRAF mRNA的可变剪接形式)，BRAF基因扩增，所述基因扩增导致BRAF蛋白过表达或由细胞BRAF基因过表达导致的自分泌活性，导致细胞中BRAF蛋白的激酶结构域的活性的致病性增加(例如，BRAF蛋白的激酶结构域的组成性激活)。作为另一个示例，BRAF基因、BRAF激酶或其表达或活性或水平失调可以是编码BRAF蛋白的BRAF基因中的突变，所述BRAF蛋白与不包含该突变的BRAF基因编码的蛋白质相比，具有组成型活性或具有增加的活性。例如，BRAF基因、BRAF激酶或其中表达或活性或水平失调可以是基因或染色体易位的结果，其导致融合蛋白的表达，所述融合蛋白包含包括功能性激酶结构域的BRAF的第一部分和伴侣蛋白的第二部分(即不是BRAF)。在一些示例中，BRAF基因、BRAF蛋白或表达或活性的失调可以是一个BRAF基因与另一个BRAF基因的基因翻译的结果。BRAF突变的实例包括V600E，V600K和V600G突变。在一个实施方案中，突变是BRAF V600E突变。
[0119] 本文使用的术语“MEK相关疾病或病症”是指与与Ras/Raf/MEK途径相关的疾病或病症，例如与MEK基因、MEK激酶(在本文中也称为MEK激酶蛋白或MEK激酶)或其中任何(例如一种或多种)的表达或活性或水平失调(例如，本文所述的MEK基因、MEK激酶、MEK激酶结构域或其中任何的表达或活性或水平失调的任何类型)相关的疾病或病症。MEK相关疾病或病症的非限制性实例包括例如癌症。
[0120] 本文使用的术语“MEK相关癌症”是指与MEK基因、MEK激酶(在本文中也称为MEK激酶蛋白或MEK)或其表达或活性或水平相关或具有失调的癌症。本文描述了MEK相关癌症的非限制性示例。在一个实施方案中，MEK相关癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
[0121] 短语“MEK基因、MEK激酶或其表达或活性或水平失调”是指基因突变(例如导致融合蛋白表达的MEK基因易位，导致与野生型MEK蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的MEK蛋白表达的MEK基因中的缺失，或导致具有一个或多个点突变的MEK蛋白表达的MEK基因中的突变，导致与野生型MEK蛋白相比MEK蛋白中的至少一个氨基酸缺失的MEK蛋白的MEK mRNA的可变剪接形式)，MEK基因扩增，所述基因扩增导致MEK蛋白过表达或由细胞MEK基因过表达导致的自分泌活性，导致细胞中MEK蛋白的激酶结构域的活性的致病性增加(例如，MEK蛋白的激酶结构域的组成性激活)。作为另一个示例，MEK基因、MEK蛋白或其表达或活性或水平失调可以是编码MEK蛋白的MEK基因中的突变，所述MEK蛋白与不包含该突变的MEK基因编码的蛋白质相比，具有组成型活性或具有增加的活性。例如，MEK基因、MEK激酶或其表达或活性或水平失调可以是基因或染色体易位的结果，其导致融合蛋白的表达，所述融合蛋白包含包括功能性激酶结构域的MEK的第一部分和伴侣蛋白的第二部分(即不是MEK)。在一些示例中，MEK基因、MEK蛋白或表达或活性的失调可以是一个MEK基因与另一个MEK基因的基因翻译的结果。
[0122] 本文使用的术语“EGFR相关疾病或病症”是指与EGFR基因、EGFR激酶(在本文中也称为EGFR激酶蛋白或EGFR激酶)或其中任何(例如一种或多种)的表达或活性或水平失调(例如，本文所述的EGFR基因、EGFR激酶、EGFR激酶结构域或其中任何的表达或活性或水平失调的任何类型)相关的疾病或病症。EGFR相关疾病或病症的非限制性实例包括例如癌症，例如结肠直肠癌，例如转移性结肠直肠癌。
[0123] 本文使用的术语“EGFR-相关癌症”是指与EGFR基因、EGFR激酶(在本文中也称为EGFR激酶蛋白或EGFR)或其表达或活性或水平相关或具有失调的癌症。在一个实施方案中，EGFR相关癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。
[0124] 短语“EGFR基因、EGFR激酶或其表达或活性或水平失调”是指基因突变(例如导致融合蛋白表达的EGFR基因易位，导致与野生型EGFR蛋白相比包含至少一个氨基酸缺失的EGFR蛋白表达的EGFR基因中的缺失，或导致具有一个或多个点突变的EGFR蛋白表达的EGFR基因中的突变，导致与野生型EGFR蛋白相比EGFR蛋白中的至少一个氨基酸缺失的EGFR蛋白的EGFR mRNA的可变剪接形式)，EGFR基因扩增，所述基因扩增导致EGFR蛋白过表达或由细胞EGFR基因过表达导致的自分泌活性，导致细胞中EGFR蛋白的激酶结构域的活性的致病性增加(例如，EGFR蛋白的激酶结构域的组成性激活)。例如，EGFR基因、EGFR蛋白或其表达或活性或水平失调可以是编码EGFR蛋白的EGFR基因中的突变，所述EGFR蛋白与不包含该突变的EGFR基因编码的蛋白质相比，具有组成型活性或具有增加的活性。作为另一个示例，EGFR基因、EGFR蛋白或其表达或活性或水平失调可以是基因或染色体易位的结果，其导致融合蛋白的表达，所述融合蛋白包含包括功能性激酶结构域的EGFR的第一部分和伴侣蛋白的第二部分(即不是EGFR)。在一些示例中，EGFR基因、EGFR蛋白或表达或活性的失调可以是一个EGFR基因与另一个EGFR基因的基因翻译的结果。
[0125] 当同时、顺序或分开给予时，BRAF抑制剂(化合物A)，MEK抑制剂(化合物B)和抗EGFR抗体(化合物C)可以以协同方式相互作用以强烈抑制细胞增殖。这种意料之外的协同反应可以减少每种化合物所需的剂量，从而导致副作用的减少并增强化合物在治疗中的长期临床效果。
[0126] 本文使用的术语“协同效应”是指产生效应的两种或三种治疗剂的作用，例如BRAF抑制剂(化合物A)和/或MEK抑制剂(化合物B)和/或抗EGFR抗体(化合物C)，例如显示减缓增殖性疾病(特别是癌症)或其症状的症状进展，这大于它们自己给予每种药物(即治疗剂)的作用的简单加合。例如，可以采用合适的方法计算协同效应，例如Sigmoid-Emax方程(Holford,N.H.G.和Scheiner,L.B.,Clin.Pharmacokinet.6:429-453(1981)),Loewe加性方程(Loewe,S.和Muischnek,H.,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114:313-326(1926))和中值效应方程(Chou,T.C.和Talalay,P.,Adv.Enzyme Regul.22:27-55(1984))。上面提到的每个方程可以应用于实验数据以产生相应的图以帮助评估药物组合的效果。与上述方程相关的对应图分别是浓度-效应曲线，等效线图和组合指数曲线。
[0127] 还提供了在需要的对象中治疗增殖性疾病的方法，包括给予对象本发明组合，其中化合物A、化合物B和化合物C以治疗有效剂量给予，当组合时，提供有益效果。组合组分的给予可以是同时的或顺序的。在一个实施方案中，化合物A、化合物B和化合物C各自以单一单位剂型分别配制，用于同时、分开或顺序给药。
[0128] 在一个实施方案中，通过本发明组合治疗的增殖性疾病是癌症。可以用本发明组合治疗的癌症的实例包括：结肠直肠癌(CRC)(包括转移性结肠直肠癌)，黑素瘤(包括转移性黑素瘤)，肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))，乳腺癌，肾癌，例如肾细胞癌(RCC)，肝癌，子宫内膜癌，急性髓性白血病(AML)，骨髓增生异常综合征(MDS)，甲状腺癌，特别是乳头状甲状腺癌，胰腺癌，神经纤维瘤病或肝细胞癌。结肠直肠癌是美国男性和女性中第三大常见癌症，2016年预计有超过134,000例新发病例和近50,000例死于此病。在美国，BRAF突变发生在8％至15％的结肠直肠癌患者中并代表这些患者的预后不良。一线治疗后的历史发表的无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)结果分别为1.8至2.5个月和4至6个月，并公布了该人群中基于EGFR的治疗的各种研究的响应率范围从6％到8％。在一个实施方案中，癌症是BRAF相关癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一个实施方式中，癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是MEK相关癌症。在一个实施方案中，MEK相关癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是EGFR相关癌症。在一个实施方案中，EGFR相关癌症是结肠直肠癌。
[0129] 根据本发明，治疗有效量的本发明组合的每种组合伴侣可以同时、分开或顺序和以任何顺序给予，并且组分可以分开给予或作为固定组合给予。在一个实施方案中，治疗增殖性疾病的方法可包括(i)以游离或药学上可接受的盐形式给予化合物A，(ii)以游离或药学上可接受的盐形式给予化合物B，和(iii)给予化合物C，以联合治疗有效量(例如以协同有效量)同时或以任何顺序依次，例如，以每天或间歇地对应于本文所述的量的剂量。本发明组合的各个组合伴侣可以在治疗过程中的不同时间分开给予，或者以分开的或单一的组合形式同时给予。在一个实施方案中，化合物A可以每天给予，每天一次或每天两次，化合物B可以每天给予，每天一次或每天两次，并且化合物C可以每周给予。因此，本发明应理解为包括所有这些同时或交替治疗的方案，并且术语“给予”应相应地解释。
[0130] 在本发明组合中使用的每种组合伴侣的有效剂量可以根据所用的具体化合物或药物组合物，给药方式，所治疗的病症和所治疗病症的严重程度而变化。因此，根据多种因素选择本发明组合的剂量方案，包括给药途径和患者的肾和肝功能。
[0131] 产生功效而无毒性的本发明组合的组合伴侣(化合物A，化合物B和化合物C)的最佳比例、单独和组合剂量以及浓度是基于治疗剂至靶位点的可及性的动力学，并且可以使用本领域技术人员已知的方法确定。
[0132] 与组合中的其他化合物相比，每一种组合伴侣的有效剂量可能需要更频繁地给予一种或多种化合物。因此，为了允许适当的剂量，在一个实施方案中，包装的药物产品可以含有一种或多种含有化合物组合的剂型，和含有化合物组合中的一种而不含组合中的其他化合物的一种或多种剂型。在另一个实施方案中，包装的药物产品可含有一种、两种和/或三种组合伴侣的一种或多种剂型。
[0133] 当在本发明组合中使用的组合伴侣以作为单一药物销售的形式给予时，如果没有另外提及的话，其剂量和施用方式可以根据相应市售药物的包装说明书上提供的信息。
[0134] BRAF抑制剂(化合物A)可以每天以单剂量或分剂量给予合适的对象，有效剂量为每天每千克体重约0.05至约50mg(例如，约0.10mg/kg/天，0.30mg/kg/天，0.50mg/kg/天，0.80mg/kg/天，1mg/kg/天，5mg/kg/天，10mg/kg/天，15mg/kg/天，20mg/kg/天，25mg/kg/天，
30mg/kg/天，35mg/kg/天，40mg/kg/天，50mg/kg/天，0.1-25mg/kg/天，或0.5-10mg/kg/天)。
例如，剂量可以是约35mg至约700mg(例如，约50mg，约75mg，约100mg，约120mg，约150mg，约
175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，约325mg，约350mg，约375mg，约
400mg，约450mg，约500mg，约550mg，约600mg，或约650mg，以单剂量或分剂量。对于70kg的人，这相当于每天约35-700mg的优选剂量范围，例如每天300mg。在一个实施方案中，化合物A口服给予。在一个实施方案中，化合物A呈胶囊形式。在一个实施方案中，化合物A的胶囊制剂包含50mg化合物A。在一个实施方案中，化合物A的胶囊制剂包含75mg化合物A。在一个实施方案中，化合物A的胶囊制剂包含100mg化合物A。在一个实施方案中，化合物A的胶囊制剂包含无定形化合物A。在一个实施方案中，每天一次口服给予300mg化合物A。在一个实施方案中，每天一次口服给予225mg化合物A。在一个实施方案中，每天一次口服给予150mg化合物A。在一个实施方案中，最初每天一次口服给予300mg化合物A直至观察到不良反应，之后每天给予225mg化合物A。在一个实施方案中，根据副作用的严重性，如果导致剂量降低的副作用改善至基线并且保持稳定持续例如最长达6天，或最长达10天，或最长达14天，或最长达15天，或最长达4周，或最长达6周，则剂量降低至每天一次225mg化合物A的患者可以重新升高至每天一次300mg化合物A，只要没有将阻止药物重新升高剂量的涉及化合物A的其它并行毒性。在一个实施方案中，最初每天一次口服给予300mg化合物A直至观察到不良反应，之后每天给予150mg化合物A。在一个实施方案中，根据副作用的严重性，如果导致剂量降低的副作用改善至基线并且保持稳定持续例如最长达6天，或最长达10天，或最长达14天，或最长达15天，或最长达4周，或最长达6周，则每天一次剂量降低至150mg化合物A的患者可以重新升高至每天一次300mg化合物A，只要没有将阻止药物重新升高剂量的涉及化合物A的其它并行毒性。
30mg/kg/天，35mg/kg/天，40mg/kg/天，50mg/kg/天，0.1-25mg/kg/天，或0.5-10mg/kg/天)。
例如，剂量可以是约35mg至约700mg(例如，约50mg，约75mg，约100mg，约120mg，约150mg，约
175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，约325mg，约350mg，约375mg，约
400mg，约450mg，约500mg，约550mg，约600mg，或约650mg，以单剂量或分剂量。对于70kg的人，这相当于每天约35-700mg的优选剂量范围，例如每天300mg。在一个实施方案中，化合物A口服给予。在一个实施方案中，化合物A呈胶囊形式。在一个实施方案中，化合物A的胶囊制剂包含50mg化合物A。在一个实施方案中，化合物A的胶囊制剂包含75mg化合物A。在一个实施方案中，化合物A的胶囊制剂包含100mg化合物A。在一个实施方案中，化合物A的胶囊制剂包含无定形化合物A。在一个实施方案中，每天一次口服给予300mg化合物A。在一个实施方案中，每天一次口服给予225mg化合物A。在一个实施方案中，每天一次口服给予150mg化合物A。在一个实施方案中，最初每天一次口服给予300mg化合物A直至观察到不良反应，之后每天给予225mg化合物A。在一个实施方案中，根据副作用的严重性，如果导致剂量降低的副作用改善至基线并且保持稳定持续例如最长达6天，或最长达10天，或最长达14天，或最长达15天，或最长达4周，或最长达6周，则剂量降低至每天一次225mg化合物A的患者可以重新升高至每天一次300mg化合物A，只要没有将阻止药物重新升高剂量的涉及化合物A的其它并行毒性。在一个实施方案中，最初每天一次口服给予300mg化合物A直至观察到不良反应，之后每天给予150mg化合物A。在一个实施方案中，根据副作用的严重性，如果导致剂量降低的副作用改善至基线并且保持稳定持续例如最长达6天，或最长达10天，或最长达14天，或最长达15天，或最长达4周，或最长达6周，则每天一次剂量降低至150mg化合物A的患者可以重新升高至每天一次300mg化合物A，只要没有将阻止药物重新升高剂量的涉及化合物A的其它并行毒性。
[0135] MEK抑制剂(化合物B)可以每天以单剂量或分剂量给予合适的对象，有效剂量为每天每千克体重约0.001至约100mg(例如，约0.01mg/kg/天，约0.10mg/kg/天，0.30mg/kg/天，0.50mg/kg/天，0.80mg/kg/天，1mg/kg/天，5mg/kg/天，10mg/kg/天，15mg/kg/天，20mg/kg/天，25mg/kg/天，30mg/kg/天，35mg/kg/天，40mg/kg/天，50mg/kg/天，60mg/kg/天，70mg/kg/天，80mg/kg/天，90mg/kg/天，100mg/kg/天，0.1-25mg/kg/天，0.5-10mg/天kg/天，或1-
35mg/kg/天)。例如，剂量可以是约10mg至约85mg(例如，约15mg，约20mg，约25mg，约30mg，约
35mg，约40mg，约45mg，约50mg，约55mg，约60mg，约65mg，约70mg，约75mg，约80mg，或约
85mg)。对于70kg的人，这将达到约0.05至7g/天，优选约0.05至约2.5g/天，特别是0.9g/天的优选剂量范围。在一个实施方案中，化合物B口服给予。在一个实施方案中，化合物B配制成片剂。在一个实施方案中，化合物B的片剂包含15mg化合物B。在一个实施方案中，化合物B每天两次口服给予。在一个实施方案中，化合物B每天两次口服给予，其中第二剂的化合物B在第一剂的化合物B后约12小时给予。在一个实施方案中，每天两次口服给予45mg化合物B。
在一个实施方案中，化合物B是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，化合物B是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，化合物B的片剂包含15mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，每天两次给予45mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺直至观察到副作用，之后每天两次给予30mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方式中，如果导致剂量降低的副作用改善至基线并且保持稳定持续例如最长达14天，或最长达三周，或最长达4周，则剂量降低至每天两次30mg的患者可以重新升高至每天两次45mg，只要没有将阻止药物重新升高剂量的与6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺有关的其它并行毒性。
35mg/kg/天)。例如，剂量可以是约10mg至约85mg(例如，约15mg，约20mg，约25mg，约30mg，约
35mg，约40mg，约45mg，约50mg，约55mg，约60mg，约65mg，约70mg，约75mg，约80mg，或约
85mg)。对于70kg的人，这将达到约0.05至7g/天，优选约0.05至约2.5g/天，特别是0.9g/天的优选剂量范围。在一个实施方案中，化合物B口服给予。在一个实施方案中，化合物B配制成片剂。在一个实施方案中，化合物B的片剂包含15mg化合物B。在一个实施方案中，化合物B每天两次口服给予。在一个实施方案中，化合物B每天两次口服给予，其中第二剂的化合物B在第一剂的化合物B后约12小时给予。在一个实施方案中，每天两次口服给予45mg化合物B。
在一个实施方案中，化合物B是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，化合物B是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，化合物B的片剂包含15mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，每天两次给予45mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺直至观察到副作用，之后每天两次给予30mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方式中，如果导致剂量降低的副作用改善至基线并且保持稳定持续例如最长达14天，或最长达三周，或最长达4周，则剂量降低至每天两次30mg的患者可以重新升高至每天两次45mg，只要没有将阻止药物重新升高剂量的与6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺有关的其它并行毒性。
[0136] 在一个实施方案中，每天两次给予45mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺直至观察到副作用，之后每天两次给予15mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方式中，如果导致剂量降低的副作用改善至基线并且保持稳定持续例如最长达14天，或最长达三周，或最长达4周，则剂量降低至每天两次15mg的患者可以重新升高至每天两次45mg，只要没有将阻止药物重新升高剂量的与6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺有关的其它并行毒性。
[0137] 抗EGFR抗体(化合物C)可以每天或每周以单剂量或分剂量给予合适的对象，有效剂量为每天每千克体重约0.001至约100mg，(例如，约0.01mg/kg/天，约0.10mg/kg/天，0.30mg/kg/天，0.50mg/kg/天，0.80mg/kg/天，1mg/kg/天，5mg/kg/天，10mg/kg/天，15mg/kg/天，20mg/kg/天，25mg/kg/天，30mg/kg/天，35mg/kg/天，40mg/kg/天，50mg/kg/天，60mg/kg/天，70mg/kg/天，80mg/kg/天，90mg/kg/天，100mg/kg/天，0.1-25mg/kg/天，0.5-10mg/kg/天，或1-35mg/kg/天)。例如，剂量可以是约50mg至约1000mg，例如约150mg至约500mg(例如，约175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，约325mg，约350mg，约375mg，约
400mg，约425mg，约450mg，或约475mg)或约100mg至约350mg(例如，约125mg，约150mg，约
175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，或约325mg)。对于70kg的人，这将达到约0.07至2.45g/天，优选约0.05至约1.0g/天的优选剂量范围。在一个实施方案中，抗EGFR抗体作为静脉内输注给予。在一个实施方案中，抗EGFR抗体是西妥昔单抗
其中西妥昔单抗作为静脉内输注每周给予。在一个实施方案中，抗EGFR抗体
是西妥昔单抗 其中西妥昔单抗在120分钟内以400mg/m2的量静脉内输注给予
作为初始剂量，然后根据处方信息每周在30分钟内以250mg/m2的量静脉内输注。在一个实施方案中，抗EGFR抗体是西妥昔单抗 其中西妥昔单抗在120分钟内以400mg/
2 2
m的量静脉内输注给予作为初始剂量，然后根据处方信息每周在60分钟内以250mg/m的量静脉内输注。然而，剂量减少也是可能的。因此，根据一个实施方案，西妥昔单抗最初在120分钟内以200至400mg/m2的剂量静脉内输注给予，然后以125至250mg/m2的剂量每周静脉内输注。例如，在一个实施方案中，以400mg/m2的量最初静脉内输注后给予的西妥昔单抗的剂
2 2
量降低至每周200mg/m (60分钟输注)。在另一个实施方案中，以400mg/m的量最初静脉内输注后给予的西妥昔单抗的剂量降低至每周150mg/m2(60分钟输注)。
400mg，约425mg，约450mg，或约475mg)或约100mg至约350mg(例如，约125mg，约150mg，约
175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，或约325mg)。对于70kg的人，这将达到约0.07至2.45g/天，优选约0.05至约1.0g/天的优选剂量范围。在一个实施方案中，抗EGFR抗体作为静脉内输注给予。在一个实施方案中，抗EGFR抗体是西妥昔单抗
其中西妥昔单抗作为静脉内输注每周给予。在一个实施方案中，抗EGFR抗体
是西妥昔单抗 其中西妥昔单抗在120分钟内以400mg/m2的量静脉内输注给予
作为初始剂量，然后根据处方信息每周在30分钟内以250mg/m2的量静脉内输注。在一个实施方案中，抗EGFR抗体是西妥昔单抗 其中西妥昔单抗在120分钟内以400mg/
2 2
m的量静脉内输注给予作为初始剂量，然后根据处方信息每周在60分钟内以250mg/m的量静脉内输注。然而，剂量减少也是可能的。因此，根据一个实施方案，西妥昔单抗最初在120分钟内以200至400mg/m2的剂量静脉内输注给予，然后以125至250mg/m2的剂量每周静脉内输注。例如，在一个实施方案中，以400mg/m2的量最初静脉内输注后给予的西妥昔单抗的剂
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量降低至每周200mg/m (60分钟输注)。在另一个实施方案中，以400mg/m的量最初静脉内输注后给予的西妥昔单抗的剂量降低至每周150mg/m2(60分钟输注)。
[0138] 在一个实施方案中，本发明组合的给药方案包括口服给予治疗有效量的化合物A，口服给予治疗有效量的化合物B，和静脉内给予治疗有效量的化合物C。在一个实施方案中，本发明组合的给药方案包括口服给予化合物A(300mg口服给药，每天两次)，口服给予化合物B(45mg口服给药，每天一次)和静脉内给予化合物C。在一个实施方案中，本发明组合的给药方案包括口服给予化合物A(300mg口服给药，每天两次)，口服给予化合物B(45mg口服给药，每天一次)和每周静脉内给予化合物C。在一个实施方案中，化合物A是无定形形式。在一个实施方案中，化合物B是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，化合物B是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，化合物B每天两次口服给予，其中第二剂的化合物B在第一剂的化合物B后约12小时给予。在一个实施方案中，化合物C是西妥昔单抗。在一个实施方案中，西妥昔单抗在120分钟内以400mg/m2的量静脉内输注给予作为初始剂量，然后每周在30分钟内静脉内输注250mg/m2的量。在一个实施方案中，西妥昔单抗在120分钟内以200至400mg/m2的量静脉内输注给予作为初始剂量，然后每周在30分钟内静脉内输注125至250mg/m2的量。在一个实施方案中，西妥昔单抗在120分钟内以400mg/m2的量静脉内输注给予作为初始剂量，然后每周在60分钟内静脉内输注
250mg/m2的量。在一个实施方案中，西妥昔单抗在120分钟内以200至400mg/m2的量静脉内输注给予作为初始剂量，然后每周在60分钟内静脉内输注125至250mg/m2的量。在一个实施方案中，本发明组合的给药方案包括口服给予化合物A(300mg，在胶囊制剂中口服给药，每日一次)，口服给予化合物B(45mg口服给药，每日两次，其中给药包括口服给予三个化合物B的片剂，其中每片含有15mg化合物B)，和静脉内给予化合物C。在一个实施方案中，化合物B每天两次口服给予，其中第二剂的化合物B在第一剂的化合物B后约12小时给予。在一个实施方案中，在给予化合物C的那天，将化合物A和化合物B在给予化合物C之前至少30分钟给予。
250mg/m2的量。在一个实施方案中，西妥昔单抗在120分钟内以200至400mg/m2的量静脉内输注给予作为初始剂量，然后每周在60分钟内静脉内输注125至250mg/m2的量。在一个实施方案中，本发明组合的给药方案包括口服给予化合物A(300mg，在胶囊制剂中口服给药，每日一次)，口服给予化合物B(45mg口服给药，每日两次，其中给药包括口服给予三个化合物B的片剂，其中每片含有15mg化合物B)，和静脉内给予化合物C。在一个实施方案中，化合物B每天两次口服给予，其中第二剂的化合物B在第一剂的化合物B后约12小时给予。在一个实施方案中，在给予化合物C的那天，将化合物A和化合物B在给予化合物C之前至少30分钟给予。
[0139] 本发明组合可以作为组合疗法给予。本文使用的术语“组合疗法”是指包含在单一或多种组合物中的治疗活性剂化合物A，化合物B和化合物C的给药方案，其中治疗活性剂根据医疗护理人员规定的方式或根据本文定义的管理机构规定的方式一起或分开给予(各自或以任意组合)。因此，在一个实施方案中，本文提供了治疗增殖性疾病的方法，其包括给予需要的患者独立地包含治疗有效量以下组分的组合疗法：(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)或其药学上可接受的盐，(b)至少一种MEK抑制剂(化合物B)或其药学上可接受的盐，和(c)抗EGFR抗体(化合物C)。
[0140] 在本文所述的组合疗法的任何给药方案的一个实施方案中，治疗有效量的化合物A与第一治疗有效剂量的化合物B一起使用。如本文所用，短语“与...一起”表示给予化合物A和化合物B之间经过的时间不超过5分钟，或不超过10分钟，或不超过15分钟，或不超过20分钟，或不超过25分钟，或不超过30分钟。
[0141] 在本文所述的组合疗法的任何给药方案的一个实施方案中，给予第一剂的化合物B后约12小时给予第二剂治疗有效量的化合物B。如本文所用，短语“给予第一剂的化合物B后约12小时”表示在给予第一剂的化合物B后10至14小时给予第二剂的化合物B。
[0142] 在本文所述的组合疗法的任何给药方案的一个实施方案中，在给予化合物C的那天，将化合物C在给予治疗有效量的化合物A和第一剂的治疗有效量的化合物B后至少30分钟给予。如本文所用，短语“......后至少30分钟”是指将化合物C在给予化合物A和第一剂的化合物B后至少30分钟，或至少35分钟，或至少40分钟，或至少45分钟，或在至少50分钟，或至少55分钟，或至少60分钟，或至少65分钟，或至少70分钟，或至少75分钟，或至少80分钟，或至少85分钟，或至少90分钟给予。
[0143] 在本文所述的组合疗法的任何给药方案的一个实施方案中，在给予化合物C的那天，将治疗有效量的化合物C在给予治疗有效量的化合物A和第一剂的治疗有效量的化合物B之前至少30分钟给予，以先到者为准。如本文所用，短语“……之前至少30分钟”是指将化合物C在给予化合物A和第一剂的化合物B之前至少30分钟，或至少35分钟，或至少40分钟，或至少45分钟，或至少50分钟，或至少55分钟，或至少60分钟给予，以先到者为准。
[0144] 在一个实施方案中，组合疗法的给药方案包括：
[0145]
[0146] 在一个实施方案中，给药方案包括：
[0147]
[0148] 在一个实施方案中，给药方案包括：
[0149]
[0150] 在一个实施方案中，给药方案包括：
[0151]
[0152] 在一个实施方案中，本文所述的任何组合疗法任选地还包括在给予化合物C之前给予一种或多种预先药物。在一个实施方案中，在给予化合物A和比尼美替尼化合物B之后不超过1小时给予一种或多种预先药物。在一个实施方案中，在给予化合物C之前30-60分钟给予一种或多种预先给药。在一个实施方案中，在给予化合物C之前30分钟给予一种或多种预先给药。在一个实施方案中，所述一种或多种预先药物选自：一种或多种H1拮抗剂(例如，抗组胺药，例如苯海拉明)和全身性皮质类固醇(例如，低剂量全身性皮质类固醇，例如地塞米松或泼尼松龙)。
[0153] 在一个实施方案中，本文所述的任何组合疗法还包括指导患者避免食用葡萄柚，石榴，杨桃或塞维利亚橙或含有任何这些汁液的产品。
[0154] 用于治疗增殖性疾病的每种组合伴侣的最佳剂量可以使用已知方法凭经验确定用于每个个体，并且取决于多种因素，包括但不限于疾病的进展程度；个体的年龄，体重，一般健康状况，性别和饮食；给药时间和途径；个体服用的其他药物。可以使用本领域熟知的常规测试和过程确立最佳剂量。
[0155] 可与载体材料组合后得到单一剂量形式的每种组合伴侣的量可以根据治疗的个体以及具体的给药模式而变化。在一些实施方案中，含有本文所述药剂组合的单位剂型将含有单独给药时通常给予的组合中每种药剂的量。
[0156] 剂量的频率可以根据使用的化合物和待治疗的具体病症而变化。通常，优选使用足以提供有效治疗的最小剂量。通常可以使用适合于所治疗病症的测定来监测患者的治疗效果，这对于本领域普通技术人员来说是熟悉的。
[0157] 本文还提供了治疗患有增殖性疾病的对象的方法，包括以对增殖性疾病联合治疗有效的量给予所述对象本发明组合。在一个实施方案中，用本发明组合治疗的增殖性疾病是癌症。在一个实施方案中，癌症选自：结肠直肠癌(CRC)(包括转移性结肠直肠癌)，黑素瘤(包括转移性和不可切除的黑素瘤)，肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))，乳腺癌，肾癌，例如肾细胞癌(RCC)，肝癌，子宫内膜癌，急性髓性白血病(AML)，骨髓增生异常综合征(MDS)，甲状腺癌，特别是乳头状甲状腺癌，胰腺癌，神经纤维瘤病和肝细胞癌。在一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌(CRC)。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是BRAF相关癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一个实施方式中，癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是MEK相关癌症。在一个实施方案中，癌症是EGFR相关癌症。
[0158] 在一个实施方案中，本文提供了治疗需要的患者的癌症的方法，该方法包括：(a)确定患者中的癌症是否是BRAF相关癌症；(b)如果确定癌症是BRAF相关癌症，给予患者治疗有效量的本发明组合。在一些实施方案中，通过使用经管理机构批准的例如FDA批准的测试或测定以鉴定患者中或来自患者的活组织检查样品中BRAF基因、BRAF激酶或其中任何的表达或活性或水平的失调，或通过进行本文所述测定的任何非限制性实例，从而确定患者患有BRAF相关癌症。在一些实施方式中，测试或测定作为试剂盒提供。在一些实施方案中，癌症是BRAF突变体结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF突变的转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。
[0159] 在一个实施方案中，本文提供了治疗需要的对象的癌症的方法，所述方法包括(a)确定癌症是否具有突变的BRAF激酶，和(b)如果确定癌症具有突变的BRAF激酶，则给予所述对象治疗有效量的本发明组合。
[0160] 在一个实施方案中，本文提供了为被鉴定或诊断为患有BRAF相关癌症的患者选择治疗的方法(例如，体外方法)。一些实施方式进一步包括将所选择的治疗给予被鉴定或诊断为患有BRAF相关癌症的患者。例如，选择的治疗可包括给予治疗有效量的本发明组合。一些实施方案进一步包括对从患者获得的样品进行测定以确定患者是否具有BRAF基因、BRAF激酶或其表达或活性或水平的失调，以及鉴定或诊断确定患有BRAF基因、BRAF激酶或其表达或活性或水平的失调的患者，如患有BRAF相关癌症。在一些实施方案中，通过使用经管理机构批准的例如FDA批准的用于鉴定患者或来自患者的活组织检查样品中BRAF基因、BRAF激酶或其中任何的表达或活性或水平失调的试剂盒，从而鉴定或诊断患者患有BRAF相关癌症。在一些实施方案中，BRAF相关癌症是本文描述的或本领域已知的癌症。在一些实施方案中，BRAF相关癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，BRAF相关癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一些实施方案中，BRAF相关癌症是转移性结肠直肠癌。在一些实施方案中，BRAF相关癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一些实施方案中，该测定是体外测定，例如，利用下一代测序、免疫组织化学或分裂FISH分析的测定。在一些实施方案中，该测定是经管理机构批准的例如FDA批准的试剂盒。
[0161] 在一个实施方案中，本文提供了选择患者进行治疗的方法，其中所述方法包括选择、鉴定或诊断患有BRAF相关癌症的患者，并选择患者进行治疗，包括给予治疗有效量的本发明组合。在一些实施方案中，鉴定或诊断患者患有BRAF相关癌症可以包括以下步骤：对从患者获得的样品(例如，活组织检查样品)进行测定以确定患者是否具有BRAF基因、BRAF激酶或其中任何的表达或活性或水平失调，并鉴定或诊断确定具有BRAF基因、BRAF激酶或其中任何的表达或活性或水平失调的患者患有BRAF相关癌症。在一些实施方案中，BRAF相关癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一些实施方案中，BRAF相关癌症是转移性结肠直肠癌。在一些实施方案中，BRAF相关癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一些实施方案中，该测定是体外测定，例如，利用下一代测序、免疫组织化学或分裂FISH分析的测定。在一些实施方案中，该测定是经管理机构批准的例如FDA批准的试剂盒。
[0162] 本文还提供了确定患有癌症的对象对用本发明组合治疗有积极响应的可能性的方法，所述方法包括：确定从患者获得的样品中的癌细胞是否具有一种或多种BRAF突变；确定具有一种或多种BRAF突变的癌细胞的对象对用本发明组合治疗具有积极响应的可能性增加。
[0163] 还提供了预测患有癌症的对象中用本发明的药物组合治疗的功效的方法，所述方法包括：确定从对象获得的样品中的癌细胞是否具有一种或多种BRAF突变；并确定用本发明组合进行的治疗在具有从具有一种或多种BRAF突变的对象获得的样品中的癌细胞的对象中更有可能有效。在一个实施方案中，BRAF突变是BRAF V600E突变。
[0164] 在一个实施方案中，本文提供了治疗需要的对象的BRAF相关癌症(例如，具有BRAF激酶突变的癌症)的方法，所述方法包括(a)确定癌症是否具有突变的BRAF激酶，和(b)如果确定癌症具有突变的BRAF激酶，则给予所述对象治疗有效量的本发明组合。在一个实施方案中，本发明组合包括无定形N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)，6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺(化合物B)和西妥昔单抗(化合物C)。在一个实施方案中，化合物B是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一个实施方式中，癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一个实施方式中，所述对象患有IV期结肠直肠癌。在一个实施方案中，对象患有具有BRAF V600E突变的IV期结肠直肠癌。在一些实施方案中，对象先前用另一种抗癌治疗进行治疗，例如一线或二线全身性抗癌治疗(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)，切除肿瘤或放射治疗。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，并且先前用一种或两种具有一线或二线全身抗癌疗法的治疗方案治疗(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，所述转移性结肠直肠癌在一种或两种具有一线或二线全身性抗癌疗法的治疗方案后(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)发生进展。在一个实施方案中，细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和
5-氟尿嘧啶。在一个实施方案中，对象患有也表达野生型KRAS(KRASwt)的癌症。
5-氟尿嘧啶。在一个实施方案中，对象患有也表达野生型KRAS(KRASwt)的癌症。
[0165] 在一个实施方案中，本文提供了治疗需要的对象的BRAF相关癌症(例如，具有BRAF激酶突变的癌症)的方法，所述方法包括(a)检测癌症中的突变的BRAF激酶，和(b)给予所述对象治疗有效量的本发明组合。在一个实施方案中，本发明组合包括无定形N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯(化合物A)，6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺(化合物B)和西妥昔单抗(化合物C)。在一个实施方案中，化合物B是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一个实施方式中，癌症是结肠直肠癌。在一个实施方式中，癌症是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一些实施方案中，对象先前用另一种抗癌治疗进行治疗，例如一线或二线全身性抗癌治疗(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)，切除肿瘤或放射治疗。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，并且先前用一种或两种具有一线或二线全身抗癌疗法的治疗方案治疗(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，所述转移性结肠直肠癌在一种或两种具有一线或二线全身性抗癌疗法的治疗方案后(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)发生进展。在一个实施方案中，细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。在一个实施方案中，对象患有也表达野生型KRAS(KRASwt)的癌症。
[0166] 在一个实施方案中，本文提供了治疗患有结肠直肠癌的对象的方法，包括以对所述结肠直肠癌联合治疗有效的量给予所述对象本发明组合。在一个实施方案中，对象患有具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，使用管理机构批准的例如FDA批准的测定法或试剂盒测定，对象确定患有具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。在一个实施方式中，所述对象患有IV期结肠直肠癌。在一个实施方案中，对象患有具有BRAF V600E突变的IV期结肠直肠癌。在一些实施方案中，对象先前用另一种抗癌治疗进行治疗，例如一线或二线全身性抗癌治疗(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)，切除肿瘤或放射治疗。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，并且先前用一种或两种具有一线或二线全身抗癌疗法的治疗方案治疗(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，所述转移性结肠直肠癌在一种或两种具有一线或二线全身性抗癌疗法的治疗方案后(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)发生进展。在一个实施方案中，细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。在一个实施方案中，对象患有也表达野生型KRAS(KRASwt)的癌症。
[0167] 还提供了治疗患者的方法，其包括对从患者获得的样品进行测定以确定患者是否患有BRAF相关癌症(例如，具有BRAF激酶突变的癌症)，以及给予确定患有BRAF相关癌症(例如，具有BRAF激酶突变的癌症)的患者治疗有效量的本发明组合。在一些实施方案中，对象先前用另一种抗癌治疗进行治疗，例如一线或二线全身性抗癌治疗(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)，切除肿瘤或放射治疗。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，并且先前用一种或两种具有一线或二线全身抗癌疗法的治疗方案治疗(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，所述转移性结肠直肠癌在一种或两种具有一线或二线全身性抗癌疗法的治疗方案后(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)发生进展。在一个实施方案中，细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。在一些实施方案中，患者是疑似患有BRAF相关癌症(例如，具有BRAF激酶突变的癌症)的患者，表现出BRAF相关癌症(例如，具有BRAF激酶突变)的一种或多种症状的患者，或具有升高的BRAF相关癌症(例如，具有BRAF激酶突变的癌症)风险的患者。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一些实施方式中，所述癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方式中，所述对象患有IV期结肠直肠癌。在一个实施方案中，该方法还包括进行测定以确定患者是否患有也表达野生型KRAS(KRASwt)的癌症。
[0168] 在一个实施方案中，本文提供治疗患有BRAF相关癌症(例如，具有BRAF激酶突变的癌症)的对象的方法，所述方法包括给予所述对象治疗有效量的本发明组合，其中，所述对象在用本发明组合治疗之前，用一线或二线全身性抗癌疗法进行治疗。在一个实施方案中，对象在用本发明组合治疗之前已经接受了一种或两种全身性抗癌疗法的治疗方案。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，并且先前用一种或两种具有一线或二线全身抗癌疗法的治疗方案治疗(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)。在一个实施方案中，对象患有转移性结肠直肠癌，所述转移性结肠直肠癌在一种或两种具有一线或二线全身性抗癌疗法的治疗方案后(例如，用一种或多种细胞毒试剂治疗)发生进展。在一个实施方案中，所述一线和二线全身性治疗包括用一种或多种细胞毒试剂治疗。在一个实施方案中，一种或多种细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。在一个实施方案中，全身性抗癌疗法不包括BRAF抑制剂，MEK抑制剂或EGFR抑制剂。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一个实施方式中，癌症是结肠直肠癌。在一个实施方式中，癌症是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，对象患有也表达野生型KRAS(KRASwt)的癌症。
[0169] 在一个实施方案中，本文提供治疗患有结肠直肠癌的对象的方法，其中所述结肠直肠癌具有BRAF V600E突变，所述方法包括(i)给予所述对象至少一种细胞毒试剂一段时间；(ii)停止给予所述至少一种细胞毒试剂并用本发明组合开始治疗，其中所述用本发明组合的治疗包括本文所述的任何治疗方案。在一个实施方案中，对象患有具有BRAF V600E突变的IV期结肠直肠癌。在一个实施方案中，细胞毒试剂选自：伊立替康，奥沙利铂，卡培他滨，亚叶酸和5-氟尿嘧啶。在一个实施方案中，对象患有也表达野生型KRAS(KRASwt)的癌症。
[0170] 在一个实施方案中，本文提供了治疗患有具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌的对象的方法，该方法包括以对所述结肠癌联合治疗有效的量给予所述对象本发明组合，其中所述对象在用本发明组合治疗之前，没有接受过BRAF抑制剂的预先治疗。在一个实施方案中，所述癌症也表达野生型KRAS(KRASwt)。
[0171] 在一个实施方案中，本文提供了治疗患有具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌的对象的方法，该方法包括以对所述结肠癌联合治疗有效的量给予所述对象本发明组合，其中所述对象在用本发明组合治疗之前，没有接受过MEK抑制剂的预先治疗。在一个实施方案中，所述癌症也表达野生型KRAS(KRASwt)。
[0172] 在一个实施方案中，本文提供了治疗患有具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌的对象的方法，该方法包括以对所述结肠癌联合治疗有效的量给予所述对象本发明组合，其中所述对象在用本发明组合治疗之前，没有接受过EGFR抑制剂的预先治疗。在一个实施方案中，在用本发明组合治疗之前，对象未接受选自西妥昔单抗和帕尼单抗的EGFR抑制剂治疗。在一个实施方案中，所述癌症也表达野生型KRAS(KRASwt)。
[0173] 在一个实施方案中，本文提供了治疗患有具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌的对象的方法，该方法包括以对所述结肠癌联合治疗有效的量给予所述对象本发明组合，其中所述对象在用本发明组合治疗之前，没有接受过BRAF抑制剂、MEK抑制剂和/或EGFR抑制剂的预先治疗。在一个实施方案中，所述癌症也表达野生型KRAS(KRASwt)。
[0174] 在一个实施方案中，本文提供了减小恶性肿瘤大小的方法，包括使肿瘤与本发明组合接触。在一个实施方案中，接触是体外的。在一个实施方案中，接触是体内的。在一个实施方案中，肿瘤选自：结肠直肠癌(CRC)(包括转移性结肠直肠癌)，黑素瘤(包括转移性黑素瘤)，肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))，乳腺癌，肾癌，例如肾细胞癌(RCC)，肝癌，子宫内膜癌，急性髓性白血病(AML)，骨髓增生异常综合征(MDS)，甲状腺癌，特别是乳头状甲状腺癌，胰腺癌，神经纤维瘤病和肝细胞癌。在一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌(CRC)。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是BRAF相关癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，所述癌症也表达野生型KRAS(KRASwt)。
[0175] 癌症或癌症相关疾病的改善可以表征为完全或部分响应。“完全响应”或“CR”是指归一化任何先前异常的射线照片研究、骨髓和脑脊液(CSF)或异常单克隆蛋白质测量时，不存在临床可检测的疾病。“部分响应”是指在没有新病灶的情况下，所有可测量的肿瘤负荷(即存在于对象中的恶性细胞的数量，或测量的肿瘤块体积或异常单克隆蛋白质的量)减少至少约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％或90％。
[0176] 可以通过以下方式评估治疗：疾病进展的抑制，肿瘤生长的抑制，原发肿瘤的减少，肿瘤相关症状的缓解，肿瘤分泌因子的抑制(包括本文鉴定的检查点蛋白的表达水平)，原发性或继发性肿瘤的出现延迟，原发性或继发性肿瘤的发展减缓，原发性或继发性肿瘤的发生率降低，疾病继发效应的严重程度减慢或降低，肿瘤生长停止和肿瘤消退，增加的进展时间(TTP)，增加的无进展生存(PFS)，增加的总体存活(OS)等。本文所用的OS是指从治疗开始到任何原因导致死亡的时间来评估治疗。本文所用的TTP是指从治疗开始到肿瘤进展的时间；TTP不包括死亡。如本文所用，PFS表示从治疗开始到肿瘤进展或死亡的时间。极端地，完全抑制在本文中称为预防或化学预防。
[0177] 在本文所述方法的一些实施方案中，可以通过选自以下的一个或多个临床终点评估治疗：肿瘤积极响应，完全响应，部分响应或稳定疾病，无肿瘤进展的存活增加，疾病进展的抑制，肿瘤生长的抑制，原发肿瘤的减少，肿瘤相关症状的缓解，肿瘤分泌因子的抑制，原发性或继发性肿瘤的出现延迟，原发性或继发性肿瘤的发展减缓，原发性或继发性肿瘤的发生率降低，疾病继发效应的严重程度减慢或降低，肿瘤生长停止和肿瘤消退，增加的进展时间(TTP)，增加的无进展生存(PFS)，增加的总体存活(OS)或增加的响应持续时间(DOR)。
[0178] 因此，本文提供了用于实现与治疗本文所述的血液癌症(或实体瘤)相关的一个或多个临床终点的方法。在一个实施方案中，本文描述的患者可以显示积极肿瘤响应，例如在用本文所述的组合治疗后抑制肿瘤生长或肿瘤尺寸减小。在某些实施方案中，本文所述的患者可以在给予有效量的本发明组合后实现完全响应，部分响应或稳定疾病的实体瘤中的反应评价标准(例如，RECIST 1.1)。在某些实施方案中，本文描述的患者可显示存活增加而无肿瘤进展。在一些实施方案中，本文描述的患者可显示疾病进展的抑制，肿瘤生长的抑制，原发肿瘤的减少，肿瘤相关症状的缓解，肿瘤分泌因子的抑制(包括肿瘤分泌的激素，例如导致类癌的那些)，原发性或继发性肿瘤的出现延迟，原发性或继发性肿瘤的发展减缓，原发性或继发性肿瘤的发生率降低，疾病继发效应的严重程度减慢或降低，肿瘤生长停止和肿瘤消退，增加的进展时间(TTP)，增加的无进展生存(PFS)，和/或增加的总体存活(OS)等。
[0179] 在另一个实施方案中，提供了用于增加患有本文所述癌症的患者的总体存活，客观响应率，进展时间，无进展存活和/或治疗时间失败的方法，包括施用有效量的如本文所述的本发明组合。在一个实施方案中，提供了一种用于增加患有本文所述癌症的患者的总体存活的方法，包括给予有效量的如本文所述的本发明组合。在一个实施方案中，是一种用于增加患有本文所述癌症的患者的客观响应率的方法，包括给予有效量的如本文所述的本发明组合。在一个实施方案中，是一种用于增加患有本文所述癌症的患者的进展时间的方法，包括给予有效量的如本文所述的本发明组合。在一个实施方案中，是一种用于增加患有本文所述癌症的患者的无进展存活的方法，包括给予有效量的如本文所述的本发明组合。在一个实施方案中，是一种用于增加患有本文所述癌症的患者的治疗时间失败的方法，包括给予有效量的如本文所述的本发明组合。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一些实施方式中，所述癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。
[0180] 在本文所述的任何方法或用途的一些实施方案中，用于使用来自患者的样品确定患者是否患有BRAF相关癌症的测定可包括例如下一代测序，免疫组织化学，荧光显微术，分裂FISH分析，Southern印迹，Western印迹，FACS分析，Northern印迹和基于PCR的扩增(例如，RT-PCR和定量实时RT-PCR)。如本领域众所周知的，通常使用例如至少一种标记的核酸探针或至少一种标记的抗体或其抗原结合片段进行测定。测定可利用本领域已知的其它检测方法来检测BRAF基因、BRAF激酶或其中任何的表达或活性或水平的失调(参见例如本文引用的参考文献)。在一些实施方案中，样品是来自患者的生物样品或活组织检查样品(例如，石蜡包埋的活组织检查样品)。在一些实施方案中，患者是疑似患有BRAF相关癌症的患者，具有BRAF相关癌症的一种或多种症状的患者，和/或具有增加发生BRAF相关癌症的风险的患者。
[0181] 在一个实施方案中，根据本发明的治疗癌症的方法还包括手术或放射疗法。手术的非限制性示例包括例如开放手术或微创手术。手术可以包括例如移除整个肿瘤，肿瘤切除或移除导致对象疼痛或压力的肿瘤。对患有癌症的对象进行开放手术或微创手术的方法是本领域已知的。放射疗法的非限制性实例包括外部放射束疗法(例如，使用千伏X射线或兆伏X射线的外部束疗法)或内部放射疗法。内部放射疗法(也称为近距离放射疗法)可包括使用例如低剂量内部放射疗法或高剂量内部放射疗法。低剂量内部放射疗法包括例如将小放射性小丸(也称为种子)插入对象的癌组织中或其附近。高剂量内部放射疗法包括例如将细管(例如，导管)或植入物插入对象中的癌组织或其附近，并使用放射机将高剂量的放射递送至细管或植入物。对患有癌症的对象进行放射疗法的方法是本领域已知的。
[0182] 本发明进一步涉及用于治疗增殖性疾病的本发明组合。在一个实施方案中，增殖性疾病是癌症。在一个实施方案中，癌症选自：结肠直肠癌(CRC)(包括转移性结肠直肠癌)，黑素瘤(包括转移性和不可切除的黑素瘤)，肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))，乳腺癌，肾癌，例如肾细胞癌(RCC)，肝癌，子宫内膜癌，急性髓性白血病(AML)，骨髓增生异常综合征(MDS)，甲状腺癌，特别是乳头状甲状腺癌，胰腺癌，神经纤维瘤病和肝细胞癌。在一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌(CRC)。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是BRAF-相关癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一个实施方式中，癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是MEK-相关癌症。在一个实施方案中，癌症是EGFR-相关癌症。
[0183] 还提供了可用于治疗需要的对象的增殖性疾病的本发明组合。在一个实施方案中，增殖性疾病是癌症。在一个实施方案中，癌症选自：结肠直肠癌(CRC)(包括转移性结肠直肠癌)，黑素瘤(包括转移性和不可切除的黑素瘤)，肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))，乳腺癌，肾癌，例如肾细胞癌(RCC)，肝癌，子宫内膜癌，急性髓性白血病(AML)，骨髓增生异常综合征(MDS)，甲状腺癌，特别是乳头状甲状腺癌，胰腺癌，神经纤维瘤病和肝细胞癌。在一个实施方案中，癌症是结肠直肠癌(CRC)。在一个实施方案中，结肠直肠癌是转移性结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是BRAF-相关癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600突变的癌症。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的癌症。在一个实施方式中，癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是具有BRAF V600E突变的结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是MEK-相关癌症。在一个实施方案中，MEK-相关癌症是结肠直肠癌。在一个实施方案中，癌症是EGF-R相关癌症。在一个实施方案中，EGFR-相关癌症是结肠直肠癌。
[0184] 与单一疗法相比，包含本发明组合的组合疗法可导致增殖性疾病治疗的意外改善。在一个实施方案中，当同时、依次或分开给予时，BRAF抑制剂(化合物A)，MEK抑制剂(化合物B)和(c)抗EGFR抗体(化合物C)协同相互作用以抑制细胞增殖。
[0185] 增殖性疾病的性质是多因素的。在某些情况下，可以组合具有不同作用机制的药物。然而，仅考虑具有不同作用模式的治疗剂的任何组合不一定导致具有有利效果的组合。
[0186] 给予本发明组合不仅可以产生有益效果，例如协同治疗效果，例如涉及缓解、延迟(例如，增加无进展存活(PFS)，增加总体存活(OS))或抑制症状的进展，而且还产生令人惊讶的有益效果，例如与仅应用本发明组合中使用的一种药学治疗剂的单一疗法相比，副作用更少、生活质量改善或发病率降低。
[0187] 另一个益处是可以使用较低剂量的本发明组合的治疗剂，例如，剂量不仅常常更小，而且还可以更低频率地使用，或者可以用于降低与单独使用一种组合伴侣观察到的副作用的发生率。这符合需要治疗的患者的愿望和要求。
[0188] 可以通过已建立的测试模型显示本发明组合产生的之前描述的有益效果。本领域技术人员完全能够选择相关的测试模型来证明这种有益效果。本发明组合的药理活性可以例如在临床研究或测试过程中证明，例如如下所述。
[0189] 合适的临床研究是例如对患有增殖性疾病的患者的开放标记、剂量递增研究。这些研究可特别证明本发明组合的治疗剂的协同作用。可以通过这些研究的结果直接确定对增殖性疾病的有益作用。特别地，这些研究可以适用于比较使用化合物A、化合物B或化合物C中的任一种的单一疗法与本发明组合的效果相比的效果，或者用于比较使用化合物A、化合物B或化合物C中的任何两种的双重疗法的效果与本发明组合的效果相比的效果。
[0190] 在一个实施方案中，升高BRAF抑制剂(化合物A)的剂量直至达到最大耐受剂量，并且MEK抑制剂(化合物B)和抗EGFR抗体(化合物C)各自以固定剂量给予。或者，化合物A和化合物B可以固定剂量给予，而化合物C的剂量可以升高直至达到最大耐受剂量。或者，化合物A和化合物C可各自以固定剂量给予，而化合物B的剂量可以升高直至达到最大耐受剂量。
[0191] 每个患者可以每天或间歇地接受BRAF抑制剂(化合物A)和/或MEK抑制剂(化合物B)和/或EGFR抑制剂(化合物C)的剂量。通过评估症状评分，例如每6周，例如在6、12、18或24周后，可以确定在这些研究中的治疗效果。
[0192] 通过将不同w/w比例范围和剂量的成分给予需要治疗的对象，可以确切地进行测量，确定本发明组合中一种或多种成分之间的协同相互作用，起作用的最佳范围以及各成分起作用的绝对剂量范围。
[0193] 在一个实施方案中，本发明提供用于治疗增殖性疾病例如癌症的人给予的协同组合，其包含(a)BRAF抑制剂(化合物A)或其药学上可接受的盐，(b)MEK抑制剂(化合物B)或其药学上可接受的盐，和(c)EGFR抑制剂(化合物C)，以重量:重量:重量的组合范围表示，例如组合成分的w/w/w范围，其对应于在用于鉴定协同相互作用的肿瘤模型中观察到的范围。
[0194] 在本发明的组合中，组合伴侣(化合物A)、(化合物B)和(化合物C)可以以单一制剂或单位剂型给予，或者可以作为单一剂型同时但分开给予，或者可以通过任何合适的途径，以任何顺序并以特定或非特定的时间间隔作为单一单位剂型依次给予。单位剂型也可以是固定的组合，例如化合物A和化合物B。
[0195] 化合物A、化合物B和化合物C可以作为药物组合物通过任何常规途径给予，特别是肠内给予，例如口服，例如以片剂或胶囊的形式，或肠胃外给予，例如以注射溶液或悬浮液的形式，局部给予，例如以乳液、凝胶、软膏或乳膏的形式，或以鼻或栓剂的形式。含游离形式或药学上可接受的盐形式的化合物A、化合物B或化合物C的药物组合物与至少一种药学上可接受的载体或稀释剂一起通过混合、制粒或包衣方法以常规方法制备。例如，口服组合物可以是包括活性成分以及如下的片剂或明胶胶囊：a)稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素和/或甘氨酸；b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还有c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，则还有d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；和/或e)吸收剂、着色剂、调味剂和甜味剂。可注射组合物可以是等渗水溶液或悬浮液，并且栓剂可以由脂肪乳剂或悬浮液制备。该组合物可以是灭菌的和/或含有辅助试剂，如防腐剂，稳定剂，润湿剂或乳化剂，溶液促进剂，调节渗透压的盐和/或缓冲液。另外，其还可以含有其它有治疗价值的物质。例如，可以将本发明化合物配制成微乳预浓缩物(MEPC)。
[0196] 化合物A、化合物B和化合物C的单位剂型可任选地进一步包含用于药物的其他常规载体或赋形剂。此类载体的实例包括但不限于崩解剂，粘合剂，润滑剂，助流剂，稳定剂和填充剂，稀释剂，着色剂，矫味剂和防腐剂。本领域普通技术人员可以通过常规实验根据剂型具体需要的性质选择一种或多种上述载体，而没有任何过多的负担。使用的每种载体的量可以在本领域常规的范围内变化。以下通过引用并入本文的参考文献公开了用于配制口服剂型的技术和赋形剂。参见《药学赋形剂手册》(“Handbook of Pharmaceutical Excipients)”，第4版，编者Rowe等，美国药学协会(American Pharmaceuticals Association)(2003)；和“《雷明顿：药物科学与实践》(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)”，第20版，编者Gennaro，LWW公司(Lippincott Williams&Wilkins)(2003)。
[0197] 这些任选的另外的常规载体可以通过以下方式掺入口服剂型中：在制粒之前或期间将一种或多种常规载体掺入初始混合物中，或者将一种或多种常规载体与包含药剂组合或药剂组合的单独药剂的颗粒混合。在后一实施方案中，组合的混合物可以进一步掺混，例如通过V-掺混器，然后压缩或模塑成片剂，例如整块片剂，用胶囊包封，或填充到小袋中。
[0198] 药学上可接受的崩解剂的实例包括但不限于：淀粉；粘土；纤维素；藻酸盐；树胶；交联聚合物，例如交联聚乙烯吡咯烷酮或交聚维酮，例如新泽西州韦恩的国际专业产品公司(International Specialty Products(Wayne，NJ))的POLYPLASDONE XL；交联的羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钠，例如来自FMC的AC-DI-SOL；和交联的羧甲基纤维素钙；大豆多糖；和瓜尔胶。崩解剂可以以组合物重量的约0％至约10％的量存在。在一个实施方案中，崩解剂的存在量为组合物重量的约0.1％至约5％。
[0199] 药学上可接受的粘合剂的实例包括但不限于：淀粉；纤维素及其衍生物，例如微晶纤维素，例如来自宾夕法尼亚州费城FMC公司的AVICEL PH，来自美国密歇根州米德兰市的陶氏化学品公司(Dow Chemical Corp.)的羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙甲基纤维素METHOCEL；蔗糖；葡萄糖；玉米糖浆；多糖；和明胶。粘合剂可以以组合物重量的约0％至约50％，例如2-20％的量存在。
[0200] 药学上可接受的润滑剂和药学上可接受的助流剂的实例包括但不限于：胶体二氧化硅，三硅酸镁，淀粉，滑石，磷酸三钙，硬脂酸镁，硬脂酸铝，硬脂酸钙，碳酸镁，氧化镁，聚乙二醇，粉末纤维素和微晶纤维素。润滑剂可以以组合物重量的约0％至约10％的量存在。在一个实施方案中，润滑剂可以以组合物重量的约0.1％至约1.5％的量存在。助流剂可以以约0.1％至约10重量％的量存在。
[0201] 药学上可接受的填充剂和药学上可接受的稀释剂的实例包括但不限于糖果糖，可压缩糖，葡聚糖，糊精，右旋糖，乳糖，甘露糖醇，微晶纤维素，粉末纤维素，山梨糖醇，蔗糖和滑石。填充剂和/或稀释剂，例如，可以以组合物重量的约0％至约80％的量存在。
[0202] 在一个实施方案中，BRAF抑制剂(化合物A)配制用于口服给予。
[0203] 在一个实施方案中，BRAF抑制剂(化合物A)配制成片剂或胶囊。制备化合物A的口服制剂的方法描述于PCT公开WO2013/078264中，其通过引用并入本文。
[0204] 在一个实施方案中，将化合物A配制成固体口服药物制剂，其包含(i)内相，所述内相是包含无定形(S)-(1-(4-(3-(5-氯-2-氟-3-(甲基磺酰氨基)苯基)-1-异丙基-1H-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)丙-2-基)氨基甲酸甲酯(化合物A)，亲水性粘合剂，表面活性剂的固体分散体，和(ii)外相，其包含酸化剂、填充剂和润滑剂。
[0205] 在化合物A的固体口服制剂的一个实施方案中，化合物A的量可以以1-1500mg，2.5-800mg或5-400mg的范围存在。在一个实施方案中，固体口服制剂包含10mg，20mg，25mg，
50mg，75mg，100mg，200mg，300mg，400mg或500mg的化合物A。在一个实施方案中，固体口服制剂包含50mg无定形化合物A。在一个实施方案中，固体口服制剂包含75mg无定形化合物A。在一个实施方案中，将无定形化合物A的固体口服制剂配制成胶囊。
50mg，75mg，100mg，200mg，300mg，400mg或500mg的化合物A。在一个实施方案中，固体口服制剂包含50mg无定形化合物A。在一个实施方案中，固体口服制剂包含75mg无定形化合物A。在一个实施方案中，将无定形化合物A的固体口服制剂配制成胶囊。
[0206] 在一个实施方案中，将化合物A配制成固体口服药物制剂，其包含(i)内相，所述内相是包含无定形化合物A；共聚维酮；和泊洛沙姆188或山梨糖醇的固体分散体；和(ii)外相，其包含琥珀酸，微晶纤维素，交聚维酮，胶体二氧化硅和硬脂酸镁。在一个实施方案中，内相包含5至40重量％的无定形化合物A，50至80重量％的共聚维酮，和5至20重量％的泊洛沙姆188或山梨糖醇。在一个实施方案中，外相包含2至60重量％的琥珀酸，30至70重量％的微晶纤维素，5至20重量％的交聚维酮，0.5至5重量％的胶体二氧化硅的重量，和0.5至5重量％的硬脂酸镁。在一个实施方案中，固体口服药物制剂包含比例为80:20至40:60的内相和外相的混合物。在一个实施方案中，固体口服药物制剂包含比例为75:25至50:50的内相和外相的混合物。在一个实施方案中，固体口服药物制剂包含0mg，25mg，50mg，75mg或100mg无定形化合物A。在一个实施方案中，固体口服药物制剂包含10mg，25mg，50mg，75mg或100mg无定形化合物A。在一个实施方案中，固体口服制剂包含50mg无定形化合物A。在一个实施方案中，固体口服制剂包含75mg无定形化合物A。在一个实施方案中，固体口服药物制剂包含15重量％的无定形化合物A。化合物A的药物制剂描述于PCT公开WO2013/078264中。
[0207] 在一个实施方案中，无定形化合物A的固体口服药物制剂选自：
[0208] A)
[0209]
[0210] 和
[0211] B)
[0212]
[0213] 在一个实施方案中，无定形化合物A的固体口服药物制剂选自：
[0214]，
[0215]，
[0216] ，
[0217] 和
[0218]
[0219] 在一个实施方案中，化合物A的固体口服制剂通过包括以下步骤的方法制备：(i)掺混包含无定形化合物A；共聚维酮；和泊洛沙姆188或山梨糖醇的混合物以提供第一掺混物；(ii)挤出第一掺混物以提供挤出物；(iii)研磨挤出物以提供研磨的挤出物；(iv)将研磨的挤出物与琥珀酸、微晶纤维素、交聚维酮、胶体二氧化硅和硬脂酸镁中的至少一种掺混，得到第二掺混物；(v)根据需要任选地重复步骤(iv)以提供包含琥珀酸、微晶纤维素、交聚维酮、胶体二氧化硅、硬脂酸镁和研磨的挤出物的第三掺混物；(vi)任选地压片或包封第三掺混物。
[0220] 在一个实施方案中，MEK抑制剂(化合物B)配制用于口服给予。在一个实施方案中，MEK抑制剂(化合物B)配制成片剂或胶囊。在一个实施方案中，MEK抑制剂(化合物B)配制成片剂。在一个实施方案中，片剂是包衣片。在一个实施方案中，MEK抑制剂(化合物B)是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，MEK抑制剂(化合物B)是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。制备6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的口服制剂的方法参见PCT公开WO 2014/063024。
[0221] 在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含结晶的化合物B，至少一种糖和至少一种纤维素衍生物赋形剂。在本文提供的药物组合物的一个实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约5-35％的结晶的化合物B。在进一步的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约5-11％的结晶的化合物B。在另一个优选的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约6.25％的结晶的化合物B。在另一个优选的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约10％的结晶的化合物B。在另一个实施方案中，药物组合物包含约15mg或45mg结晶的化合物B。在另一个实施方案中，药物组合物包含约15mg结晶的化合物B。用于药物组合物的合适的糖包括但不限于：乳糖(例如，喷雾干燥的乳糖，乳糖一水合物)，麦芽糖，果糖，半乳糖，糖果糖，可压缩的糖，葡萄糖酸盐，糊精，葡萄糖，甘露醇，Nu-Tab，Di-Pac，Emdex和蔗糖。在优选的实施方案中，药物组合物中使用的糖是乳糖，特别是乳糖一水合物。
在本文提供的药物组合物的一个实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约30-70％的至少一种糖。在进一步的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约50-60％的乳糖。在进一步的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约50-60％的乳糖一水合物。
在优选的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约55-56％的乳糖一水合物。合适的纤维素衍生物赋形剂包括但不限于：微晶纤维素，微细纤维素，粉末纤维素，甲基纤维素，羟乙基纤维素，羟甲基纤维素，羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。在优选的实施方案中，基于纤维素的赋形剂是微晶纤维素。在本文提供的药物组合物的一个实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约20-40％的纤维素衍生物赋形剂。在进一步的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约20-40％的微晶纤维素。在进一步的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约30-40％的微晶纤维素。在一个实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约30-36％的微晶纤维素。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含6-(4-溴-
2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含15mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
在本文提供的药物组合物的一个实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约30-70％的至少一种糖。在进一步的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约50-60％的乳糖。在进一步的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约50-60％的乳糖一水合物。
在优选的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约55-56％的乳糖一水合物。合适的纤维素衍生物赋形剂包括但不限于：微晶纤维素，微细纤维素，粉末纤维素，甲基纤维素，羟乙基纤维素，羟甲基纤维素，羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。在优选的实施方案中，基于纤维素的赋形剂是微晶纤维素。在本文提供的药物组合物的一个实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约20-40％的纤维素衍生物赋形剂。在进一步的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约20-40％的微晶纤维素。在进一步的实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约30-40％的微晶纤维素。在一个实施方案中，药物组合物包含按组合物重量计约30-36％的微晶纤维素。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含6-(4-溴-
2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含15mg结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
[0222] 化合物B的药物组合物可包含另外的赋形剂或载体，包括但不限于：崩解剂，润滑剂，助流剂，粘合剂，稳定剂和填充剂，稀释剂，着色剂，矫味剂和防腐剂。本领域普通技术人员可以通过常规实验根据剂型具体需要的性质选择一种或多种上述载体，而没有任何过多的负担。使用的每种载体的量可以在本领域常规的范围内变化。以下通过引用并入本文的参考文献公开了用于配制口服剂型的技术和赋形剂。参见《药学赋形剂手册》(“Handbook of Pharmaceutical Excipients)”，第4版，编者Rowe等，美国药学协会(American Pharmaceuticals Association)(2003)；和“《雷明顿：药物科学与实践》(Remington:The Science and Practice of Pharmacy)”，第20版，编者Gennaro，LWW公司(Lippincott Williams&Wilkins)(2003)。这些任选的另外的常规载体可以通过将一种或多种常规载体掺入初始混合物中或在混合阶段加入而掺入口服剂型中。
[0223] 用于化合物B的组合物的药学上可接受的崩解剂的实例包括但不限于：淀粉；粘土；纤维素；藻酸盐；树胶；交联聚合物，例如交联聚乙烯吡咯烷酮或交聚维酮，例如新泽西州韦恩的国际专业产品公司(International Specialty Products(Wayne，NJ))的POLYPLASDONE XL；交联的羧甲基纤维素钠或交联羧甲基纤维素钠(例如来自FMC的AC-DI-SOL)；和交联的羧甲基纤维素钙；大豆多糖；和瓜尔胶。崩解剂可以以组合物重量的约0％至约10％的量存在。在一个实施方案中，崩解剂的存在量为组合物重量的约0.1-5％，或约1-3％，或约1.5-2.5％。
[0224] 在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含崩解剂交联羧甲基纤维素钠。在进一步的实施方案中，本发明的药物组合物包含按组合物重量计约2％的交联羧甲基纤维素钠。
[0225] 用于化合物B的组合物的药学上可接受的润滑剂和药学上可接受的助流剂的实例包括但不限于：胶体二氧化硅/胶体无水二氧化硅(例如，Aerosil )，三硅酸镁，淀粉，滑石，磷酸三钙，硬脂酸镁，硬脂酸铝，硬脂酸钙，碳酸镁，氧化镁，聚乙二醇，粉末纤维素和微晶纤维素。润滑剂可以以组合物重量的约0％至约10％的量存在。在一个实施方案中，润滑剂的存在量为组合物重量的约0.1-1.5％，约0.1-1％，或约0.5-0.9％。助流剂的存在量为组合物重量的约0.1-10％，约0.1-5％，或约0.1-1％。
[0226] 在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包括助流剂胶体二氧化硅/胶体无水二氧化硅。在进一步的实施方案中，化合物B的药物组合物包含约0.25％(按组合物的重量计)胶体二氧化硅/胶体无水二氧化硅。
[0227] 在另一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含润滑剂硬脂酸镁。在另一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含按组合物重量计约0.75％的硬脂酸镁。
[0228] 在另一个实施方案中，化合物B的药物组合物包括胶体二氧化硅/胶体无水二氧化硅和硬脂酸镁。在另一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含按组合物重量计约0.25％的胶体二氧化硅/胶体无水二氧化硅和按组合物重量计约0.75％的硬脂酸镁。
[0229] 用于化合物B的组合物的药学上可接受的粘合剂的实例包括但不限于：淀粉；纤维素及其衍生物，例如微晶纤维素，例如来自宾夕法尼亚州费城FMC公司的AVICEL PH，来自美国密歇根州米德兰市的陶氏化学品公司(Dow Chemical Corp.)的羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙甲基纤维素METHOCEL；蔗糖；葡萄糖；玉米糖浆；多糖；和明胶。粘合剂可以以组合物重量的约0-50％，或约2-20％的量存在。
[0230] 用于化合物B的组合物的药学上可接受的稀释剂的实例包括但不限于：糖果糖，可压缩糖，葡聚糖，糊精，右旋糖，乳糖，甘露糖醇，微晶纤维素，粉末纤维素，山梨糖醇，蔗糖和滑石。稀释剂例如可以以组合物重量的约0-80％，或约0-50％，或约1-40％，或约1-10％的量存在。
[0231] 在一个实施方案中，化合物B的药物组合物还包含交联羧甲基纤维素钠，硬脂酸镁和二氧化硅中的一种或多种。
[0232] 当口服给予含水悬浮液或酏剂时，其中的活性化合物可与各种甜味剂或调味剂、着色剂或染料组合，如果需要，还可与乳化剂或悬浮剂，以及稀释剂如水、乙醇、丙二醇、甘油或其组合一起。
[0233] 在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含按组合物重量计约5-11％的结晶的化合物B，按组合物重量计约55-56％乳糖一水合物和按组合物重量计约30-36％的微晶纤维素。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
[0234] 在一个实施方案中，以组合物的重量计，化合物B的药物组合物包含约5-11％的结晶的化合物B，约55-56％的乳糖一水合物，约30-36％的微晶纤维素，按组合物的重量计，约1.5-2.5％的交联羧甲基纤维素钠，约0.5-0.9％的硬脂酸镁，和约0.1-1％的胶体二氧化硅/胶体无水二氧化硅。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
[0235] 在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含按组合物重量计约5-11％的结晶的化合物B，按组合物重量计约55-56％乳糖一水合物，按组合物重量计约30-36％的微晶纤维素，按组合物重量计约2％的交联羧甲基纤维素钠，按组合物重量计约约0.75％的硬脂酸镁，和按组合物重量计约0.25％的胶体二氧化硅/胶体无水二氧化硅。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
[0236] 在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含15mg结晶的化合物B。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含结晶的化合物B，乳糖一水合物，微晶纤维素，胶体二氧化硅，交联羧甲基纤维素钠和硬脂酸镁。在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
[0237] 在一个实施方案中，化合物B的药物组合物包含：
[0238]
[0239] 在上述制剂的一个实施方案中，结晶的化合物B是结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺。
[0240] 在EGFR抑制剂(化合物C)是酪氨酸激酶抑制剂的实施方案中，可以配制化合物用于口服给予。
[0241] 在EGFR抑制剂(化合物C)是单克隆抗体(即抗EGFR抗体)的实施方案中，配制抗体用于静脉内施用。在一个实施方案中，将抗EGFR抗体配制在不含防腐剂的溶液中，其含有8.48mg/mL氯化钠，1.88mg/mL磷酸氢二钠七水合物，0.41mg/mL磷酸二氢钠一水合物和注射用水。
[0242] 还提供了商业包装，其包含本发明组合作为治疗剂，以及其用于延迟进展或治疗需要的对象的增殖性疾病的同时、分开或顺序给予的说明书。
[0243] 还提供了商业包装，其包含(a)BRAF抑制剂，其为N-[(2S)-1-({4-[3-(5-氯-2-氟-3-甲磺酰氨基苯基)-1-(丙-2-基)-1H-吡唑-4-基]嘧啶-2-基}氨基)丙-2-基]氨基甲酸甲酯或其药学上可接受的盐，(b)至少一种MEK抑制剂，以及用于其和化合物C在治疗增殖性疾病中同时、分开或顺序给予的说明书。在一个实施方案中，MEK抑制剂是6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，抗EGFR抑制剂抗体是西妥昔单抗。
在一个实施方案中，抗EGFR抑制剂抗体是西妥昔单抗。
[0244] 以下实施例说明了上述发明；然而，它们不旨在以任何方式限制本发明的范围。本发明的药物组合的有益效果还可以通过相关领域技术人员已知的其他测试模型来确定。
[0245] 实施例1
[0246] LGX818(康奈非尼；BRAF抑制剂)，MEK162(比尼美替尼；MEK抑制剂)和西妥昔单抗(EGFR抑制剂)三联组合在HT-29CRC模型中的抗肿瘤作用
[0247] 在HT-29BRAF突变体结肠直肠癌(CRC)异种移植肿瘤模型中组合测试LGX818(化合物A)，MEK162(化合物B)和西妥昔单抗(化合物C)。作为单一药剂的LGX818，MEK162和西妥昔单抗的T/C分别为42％，28％和95％。LGX818或MEK162与西妥昔单抗的组合导致T/C为22％。LGX818，MEK162和西妥昔单抗的三重组合导致肿瘤消退，T/T0为-14％。这些结果证明了LGX818与MEK162和西妥昔单抗在BRAF V600E突变体CRC中的组合益处。
[0248] 1.缩写
[0249]
[0250]
[0251] 2.方法
[0252] 2.1材料
[0253] 表1：动物表征
[0254]
[0255] 2.1.1动物和维持条件
[0256] 对于所有实验，将裸鼠圈养在12小时光照/黑暗循环设施中并随意获得食物和水。
[0258] 在实验之前使动物在Novartis NIBRI动物设施中适应至少3天。根据诺华IACUC规则和指南处理动物。
[0259] 2.1.3细胞和细胞培养条件
[0260] HT-29细胞购自ATCC，通过CLE产生主储备物。我们的工作储备物来自CLE，并在McCoy的5A培养基中培养，该培养基含有10％热灭活的胎牛血清，不含抗生素直至植入。在IMPACT VIII PCR测定组(IDEXX RADIL，IDEXX实验室有限公司，Westbrook，ME)中测试的细胞不含支原体和病毒污染。HT-29细胞在第10代用于研究TRP-377-HT-29-XEF。
[0261] 2.1.4试验化合物制剂
[0262] LGX818溶解在0.5％CMC/0.5％Tween 80中。在室温下稳定至少一周；剂量为20mg/kg,口服(po),qd×21。
[0263] MEK162溶解在1％CMC/0.5％Tween 80中。室温下稳定至少一周；剂量为3.5mg/kg po,bid×21。
[0264] 西妥昔单抗(Erbitux)是ImClone LLC,Eli Lilly子公司的产品。以浓度2mg/mL供应。剂量为20mg/kg腹腔注射(ip),每周两次(2qw)×10。
[0265] 2.2方法
[0266] 2.2.1雌性裸鼠中HT-29结肠癌异种移植模型
[0267] 收获以指数生长的HT-29细胞。将200μL PBS中的500万个细胞皮下植入112只雌性裸鼠的右上腹部。在细胞植入后第22天，肿瘤达到约200mm3。在第22天，将携带肿瘤的小鼠随机分入处理组，在第22天开始处理并在第43天结束。在处理终止后监测肿瘤的生长。
[0268] 2.2.2动物监测
[0269] 每天两次监测动物健康和行为，包括梳理和走动。监测小鼠的一般健康状况并每天记录死亡率。处死任何垂死的动物。
[0270] 2.2.3排除标准
[0271] 基于以下标准将动物排除在所有最终分析之外：(1)与运载体对照相比包括20％或更高的体重减轻的基于发病率标准实施安乐死，(2)与运载体对照相比连续3天15％或更高的体重减轻，或(3)肿瘤体积大于或等于体重的10％或肿瘤溃疡。
[0272] 临床前药理学在相对较大的规模上进行，并且观察孤立的死亡事件并不罕见。这可能是由于动物群体中的个体差异或未知原因造成的。罕见和孤立的事件并不一定表明对所涉及的化合物有任何增加的安全风险。所有研究都遵循预先确定的指南，以确定最大耐受剂量(MTD)的可接受毒性。
[0273] 2.2.4功效研究设计
[0274] 包括所有处理组的剂量方案的TRP-377-HT29-XEF的设计总结在表2中。动物在给药日称重并基于体重调节剂量，给予体积是10mL/kg。在随机时间收集肿瘤尺寸和体重，之后在研究持续期间每周两次收集。在数据收集的每一天之后提供以下数据：死亡率，个体和组平均体重以及个体和组平均肿瘤体积。
[0275] 表2：研究TRP-377-HT29-XEF的剂量和时间表
[0276]
[0277] 对于研究TRP-377-HT29-XEF，500万HT29细胞的肿瘤细胞植入后第22天开始处理，此时平均肿瘤体积为220mm3。处理持续21天。
[0278] 2.2.5数据分析
[0279] 2.2.5.1体重
[0280] 体重变化％计算为(BW当前–BW初始)/(BW初始)×100。数据表示为相对于处理开始当天的体重变化百分比。
[0281] 2.2.5.2肿瘤体积
[0282] 使用以下公式计算治疗/对照百分比(T/C)值：
[0283] ％T/C＝100×ΔT/ΔC如果ΔT>0
[0284] ％回归＝100×ΔT/ΔT0如果ΔT<0
[0285] 其中：
[0286] T＝研究的最后一天或治疗的最后一天药物治疗组的平均肿瘤体积；
[0287] ΔT＝研究的最后一天或治疗的最后一天药物治疗组的平均肿瘤体积–给药第一天药物治疗组的平均肿瘤体积；
[0288] T0＝组群当天药物治疗组的平均肿瘤体积；
[0289] C＝研究的最后一天或治疗的最后一天对照组的平均肿瘤体积；和
[0290] ΔC＝研究的最后一天或治疗的最后一天对照组的平均肿瘤体积–给药第一天对照组的平均肿瘤体积。
[0291] 2.2.5.3统计分析
[0292] 所有数据以平均值±平均值的标准误差(SEM)表示。Δ肿瘤体积和体重变化百分比用于统计分析。使用Kruskal-Wallis ANOVA然后是事后Dunn检验进行组间比较。对于所有统计学评估，显著性水平设定为p<0.05。除非另有说明，否则报告与运载体对照组相比的显著性。
[0293] 药理学研究中使用的标准方案没有预先证明组合相对于单独药剂治疗的统计学显著优势。统计功效常常受到有效的单一药剂响应和/或模型可变性的限制。然而，提供了组合与单一药剂治疗的p值。
[0294] 3.结果
[0295] 3.1耐受性
[0296] 初始平均体重(BW)和第43天的最大体重变化总结在表3中。平均体重变化显示在图2，4和6中。所有治疗均耐受，最大体重减轻为-7.7％。在该研究中没有观察到其他不良事件的迹象。
[0297] 表3：处理期间的平均初始体重和最大体重变化(TRP-377-HT-29-XEF)
[0298]
[0299] 3.2体内功效
[0300] 图1-6中示出了第43天的抗肿瘤效果和体重变化百分比。
[0301] 20mg/kg的LGX818，3.5mg/kg的MEK162和20mg/kg的西妥昔单抗产生非统计学显著的抗肿瘤效果，T/C分别为42％，28％和95％。LGX818与MEK162组合导致T/C为22％(与运载体处理组相比p>0.05)；LGX818与西妥昔单抗组合导致T/C为6％(与运载体或西妥昔单抗处理组相比，p<0.05)；MEK162与西妥昔单抗组合导致T/C为5％(与运载体或西妥昔单抗处理组相比，p<0.05)。LGX818+MEK162+西妥昔单抗的三联组合导致肿瘤消退，T/T0-14％。与运载体、LGX818或西妥昔单抗单一疗法相比，三联组合治疗具有统计学显著性(p<0.05)。
[0302] 最后一剂在第43天给予，另外监测肿瘤3周。在处理终止后，肿瘤在所有处理组中恢复生长(图7)，这表明连续治疗对于实现持续的抗肿瘤功效是必需的。
[0303] 参考文献
[0304] Flaherty KT,Puzanov I,Kim KB,Ribas A,McArthur GA,Sosman JA,O'Dwyer PJ,Lee RJ,Grippo JF,Nolop K,Chapman PB.Inhibition of mutated,activated BRAF in metastatic melanoma(在转移性黑色素瘤中抑制突变的活化BRAF).N Engl J Med.2010年8月26日；363(9),809-19.
[0305] Kefford R,Arkenau H,Brown JP等，Phase I/II study of GSK118436,a selective inhibitor of oncogenic mutant BRAF kinase,in patients with metastatic melanoma and other solid tumours(在转移性黑色素瘤和其他实体瘤患者中，GSK118436(一种致癌突变BRAF激酶的选择性抑制剂)的I/II期研究).J Clin
Oncol.2010；28(15s)；abstr 8503.
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[0306] Prahallad A.Sun C.Huang S,Di Nicolantonio F,Salazar R,Zecchin D,Beijersbergen RL,Bardelli A,Bernards R.Unresponsiveness of colon cancer to BRAF(V600E)inhibition through feedback activation of EGFR(通过反馈激活EGFR，结肠癌对BRAF(V600E)的抑制作用无反应).Nature.2012年1月26日；483(7387):100-3.[0307] Corcoran RB,Ebi H,Turke AB,Coffee EM,Nishino M,Cogdill AP,Brown RD,Della Pelle P,Dias-Santagata D,Hung KE,Flaherty KT,Piris A,Wargo JA,Settleman J,Mino-Kenudson M,Engelman JA.EGFR-mediated re-activation of MAPK signaling contributes to insensitivity of BRAF mutant colorectal cancers to RAF inhibition with vemurafenib(EGFR介导的MAPK信号传导的再激活有助于BRAF突变体结肠直肠癌对维罗菲尼对RAF抑制的不敏感性).Cancer Discov.2012年3月；2(3):227-35.[0308] 实施例2
[0309] 在BRAF突变转移性结肠直肠癌(CRC)患者中使用康奈非尼(BRAF抑制剂)、比尼美替尼(MEK抑制剂)和西妥昔单抗(EGFR抑制剂)的临床试验。
[0310] 小结：该试验是一项随机、开放标签的3期全球研究，旨在证明康奈非尼(化合物A)，比尼美替尼(化合物B)和西妥昔单抗(化合物C)在之前接受过一线全身性抗癌治疗的BRAF突变CRC(BRAFV600E)患者中的疗效和安全性。试验中的患者年龄至少为18岁，患有确诊BRAF突变的IV期CRC，在局部晚期或转移性环境中接受过一种或两种全身性抗癌治疗方案，并且未接受MEK、BRAF或EGFR抑制剂的既往治疗。
[0311] 患者按1:1:1随机接受三联疗法(比尼美替尼，康奈非尼和西妥昔单抗)，双联疗法(康奈非尼和西妥昔单抗)或对照组(基于伊立替康的疗法和西妥昔单抗)。
[0312] 该试验的主要终点是三联疗法与对照组相比的总生存期(OS)。次要终点解决双联疗法与对照组相比，以及三联疗法与双联疗法相比的的效力。其他关键的次要终点包括无进展生存期(PFS)，客观反应率(ORR)，反应持续时间，安全性和耐受性。还将评估与健康相关的生活质量数据。
[0313] 缩写清单和术语定义
[0314]
[0315]
[0316]
[0317] 安全导入阶段
[0318] 安全导入阶段的主要目标是评估康奈非尼+比尼美替尼+西妥昔单抗联合用药的安全性/耐受性。主要终点是：
[0319] ·剂量限制性毒性的发生率(DLT)
[0320] ·根据美国国家癌症研究所(NCI)不良事件常用术语标准(CTCAE)，版本4.03，以及临床实验室参数、生命体征、心电图、超声心动图/多门控获取扫描和眼科检查的变化，评估不良事件(AE)的发生率和严重程度
[0321] ·由于不良事件(AE)引起的剂量中断、剂量调整和中断的发生率
[0322] 安全导入将在有限的几个地点进行。评估剂量限制性毒性，康奈非尼、比尼美替尼和西妥昔单抗联用的耐受性将由赞助商和研究者在(大约)每周通信中进行评估。如有必要，数据监测委员会(DMC)将在预先指定的时间间隔和安全导入期间的其他时间点评估安全数据。前9名可评估的患者将在一个队列中以滚动方式登记，以评估每天一次(QD)300mg康奈非尼+每天两次(BID)比尼美替尼45mg+西妥昔单抗400mg/m2随后每周静脉注射(IV)250mg/m2的组合。根据安全导入期间DMC对安全性数据的评估，招募其他患者。在随机3期研究部分中三联用的剂量将在总共25-30名接受所提出的剂量治疗的患者并且由DMC评估其数据后后确定。
[0323] 随机3期研究
[0324] 随机3期研究的主要目的是通过总体存活(OS)测量区分康奈非尼+比尼美替尼+西妥昔单抗(三联用)相对于伊立替康/西妥昔单抗或5-氟尿嘧啶(5-FU)/亚叶酸(FA)/伊立替康(FOLFIRI)/西妥昔单抗(对照组)的活性。主要终点是总体存活(OS)，定义为相对于对照组三联用中任何原因导致的随机化至死亡的时间。一个关键的次要终点是相对于对照组康奈非尼+比尼美替尼(双联用)的总体存活(OS)。其他次要终点是：
[0325] ·根据RECIST(实体瘤的响应评估标准)，v1.1三联用vs对照组，确认的客观响应率(ORR)，定义为达到完全响应(CR)或部分响应的总体最佳响应的患者数(PR)除以患者总数
[0326] ·根据RECIST(实体瘤的响应评估标准)，v1.1双联用vs对照组，确认的客观响应率(ORR)，定义为达到完全响应(CR)或部分响应的总体最佳响应的患者数(PR)除以患者总数
[0327] ·研究者确定的无进展生存期(PFS)，定义为由于任何原因导致的随机化至最早记录的疾病进展或死亡的时间，三联用vs对照组
[0328] ·研究者确定的无进展生存期(PFS)，双联用vs对照组
[0329] ·总体存活(OS)，三联用vs双联用
[0330] ·根据RECIST,v1.1三联用vs.双联用，确定的ORR
[0331] ·PFS，三联用vs双联用
[0332] ·响应持续使用(DOR)，三联用相对于(vs)对照组，双联用vs对照组，三联用vs双联用
[0333] ·响应时间，定义为随机化至第一个响应的射线照相证据，三联用vs对照组，双联用vs对照组，三联用vs双联用
[0334] ·AE的发生率和严重程度，根据NCICTCAE，v.4.03评分，以及临床实验室参数、生命体征、ECG、ECHO/MUGA扫描和眼科检查的变化
[0335] ·欧洲癌症研究和治疗组织(EORTC)癌症患者生活质量问卷(QLQ-C30)，癌症治疗功能评估-结肠癌(FACT-C)，EuroQol-5D-5L(EQ-5D-5L)以及患者变化总体印象(PGIC)的基线变化，三联用vs对照组，双联用vs对照组，三联用vs双联用。
[0336] ·康奈非尼，西妥昔单抗，比尼美替尼以及比尼美替尼的活性代谢物的基于模型的PK参数
[0337] 康奈非尼，西妥昔单抗，比尼美替尼以及比尼美替尼的活性代谢物之间药物-药物相互作用的基于模型的PK评估(AR00426032)
[0339] BRAF测试
[0340] 通过中心实验室确定分子预筛查作为试验的一部分或通过在筛查前任何时间获得的当地测定结果，患者将有资格进行基于肿瘤中BRAFV600E突变鉴定的研究。
[0341] 分子预筛查
[0342] 在进行研究招募/随机化的资格评估之前，患者可以在筛查之前的任何时间用中心实验室BRAF突变测定进行分子肿瘤预筛查，只要它们满足所有分子预筛查包含/排除标准。
[0343] 人群
[0344] a)患者人群
[0345] 该研究将在患有BRAFV600E转移性结肠直肠癌(mCRC)的患者中进行，该患者在转移性环境中的1或2种先前治疗方案后疾病已经进展。
[0346] b)纳入标准
[0347] 必须满足以下所有入选标准才能将患者纳入研究：
[0348] 1.提供已签名并注明日期的筛查知情同意书
[0349] 2.知情同意时年龄≥18岁
[0350] 3.组织学或细胞学证实的转移性CRC
[0351] 4.在筛查之前的任何时间通过局部测定或通过中心实验室预先确定BRAFV600E在肿瘤组织中的存在
[0352] 注意：
[0353] a.只有基于PCR和NGS当地检测结果才是可接受的。
[0354] b.一旦中心实验室提供明确的结果(阳性或阴性)，就不能重复进行中心测试以分辨与当地结果的不一致。
[0355] c.如果中心实验室的结果不确定或者认为样品不足以进行测试，则可以提交第二个样品。
[0356] d.如果在任何时候当地检测和中心实验室之间的结果不一致(潜在的假阳性局部结果)，或18名患者中缺乏BRAFV600E确认，所有后续患者将被要求在招募之前由中心实验室V600E确定BRAF 。
[0357] e.当地实验室的结果超过1个导致患者纳入不一致结果将不被接受进一步的患者登记。
[0358] 5.能够提供足够数量的代表性肿瘤标本(原发性或转移性，存档或新获得)用于BRAF和KRAS突变状态的确认中心实验室检测(最少6个载玻片；最多可达15个载玻片)[0359] 注意：在签署分子预筛查知情同意书后，必须尽快将肿瘤样本提交给中心实验室进行BRAF测试。必须在首次服用研究药物后30天内确认BRAF状态。
[0360] 6.相对于肿瘤RAS状态每个当地批准的标签接受西妥昔单抗的资格
[0361] 7.在转移性环境中1或2种先前治疗方案后疾病进展
[0362] 注意：
[0363] a.治疗期间或辅助治疗后6个月内的疾病复发将被视为转移性疾病。
[0364] b.已经接受过2种先前治疗方案的患者(即那些在第3线环境中进入研究的患者)必须已经接受或已经接受过奥沙利铂，除非由于潜在的条件而禁忌。
[0365] c.在转移性环境中给予的维持治疗不会被视为单独的治疗方案。
[0366] d.在研究的第3阶段部分，接受2种先前治疗方案的患者数量将限制在215个(占随机总数的35％)。具有2种先前治疗方案的患者在达到限制时进入筛查将被允许继续进入研究，如果他们被确定为合格的话。
[0367] 8.根据RECIST,v1.1的可测量或可评估的不可测量疾病的证据
[0368] 9.ECOGPS为0或1
[0369] 10.充分的骨髓功能，筛查时具有以下特点：
[0370] a.绝对中性粒细胞计数(ANC)≥1.5×109/L；
[0371] b.血小板≥100×109/L；
[0372] c.血红蛋白≥9.0g/dL
[0373] 注意：输血将被允许实现这一目标。如果患者在前4周内未接受超过2个单位的红细胞以达到此标准，则允许输血。
[0374] 11.充足的肾功能，其特征为血清肌酐≤1.5×正常上限(ULN)，或通过Cockroft-Gault公式计算或直接测量筛查时肌酐清除率≥50mL/分钟
[0375] 12.充足的肝功能，筛查时具有以下特点：
[0376] a.血清总胆红素≤1.5×ULN且<2mg/dL
[0377] 注意：如果间接胆红素水平≤1.5×ULN，则允许总总胆红素水平>1.5×ULN的患者[0378] b.肝转移灶中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和/或天冬氨酸氨基转移酶(AST)≤2.5×ULN，或≤5×ULN
[0379] 13.充足的心脏功能，筛查时具有以下特点：
[0380] a.通过MUGA扫描或ECHO测定左心室射血分数(LVEF)≥50％
[0381] b.使用Fridericia公式(QTcF)值≤480毫秒校正心率的平均三次重复QT区间[0382] 14.能够服用口服药物
[0383] 15.愿意并能够遵守预定的就诊，治疗计划，实验室检查和其他研究程序
[0384] 16.如果有生育能力的话，女性患者自筛查到随访或者绝经后至少1年，手术无菌至少6周，或者必须同意采取适当的预防措施以避免怀孕。
[0385] 对于所有女性，妊娠试验结果必须在筛查时为阴性。注意：应向患者传达允许的避孕方法，并确认其理解。
[0386] 17.自筛查到随访男性必须同意采取适当的预防措施以避免生育。
[0387] 注意：应向患者传达允许的避孕方法，并确认其理解。
[0388] c)排除标准
[0389] 符合以下任何标准的患者将不包括在研究中：
[0390] 1.事先用任何RAF抑制剂，MEK抑制剂，西妥昔单抗，帕尼单抗或其他EGFR抑制剂治疗
[0391] 2.先前伊立替康超敏反应或毒性，表明每2周无法耐受伊立替康180mg/m2
[0392] 3.症状性脑转移
[0393] 注意：允许之前接受过治疗或未接受过治疗的患者在没有皮质类固醇和抗癫痫治疗的情况下无症状。脑转移必须稳定≥4周，成像(例如，磁共振成像[MRI]或计算机断层扫描[CT])证明在筛查时没有进展性脑转移的当前证据。
[0394] 4.柔脑膜疾病
[0395] 5.RVO的历史或当前证据或RVO的当前危险因素(例如，未控制的青光眼或高眼压，高粘滞或高凝状态综合征的病史)
[0396] 6.在研究开始治疗前≤1周使用任何草药或补充剂或任何强效抑制剂或细胞色素P450(CYP)3A4/5诱导剂的药物或食物
[0397] 7.急性或慢性胰腺炎的已知病史
[0398] 8.在随机化前≤12个月需要医学干预的慢性炎症性肠病或克罗恩病的历史(免疫调节或免疫抑制药物或手术)
[0399] 9.心血管功能受损或临床上显著的心血管疾病，包括以下任何一种：
[0402] 10.尽管目前有治疗，但不受控制的高血压定义为持续性收缩压≥150mmHg或舒张压≥100mmHg
[0403] 11.肝功能受损，定义为Child Pugh B级或C级
[0404] 12.胃肠道(GI)功能受损或可能显著改变康奈非尼或比尼美替尼的吸收的疾病(例如，溃疡性疾病，不受控制的呕吐，吸收不良综合征，肠道吸收减少的小肠切除)[0405] 13.研究开始后5年内并发或之前的其他恶性肿瘤，除了治愈的基底或鳞状细胞皮肤癌，浅表性膀胱癌，前列腺上皮内肿瘤，子宫颈原位癌，或其他无保荐人批准的非侵入性或惰性恶性肿瘤
[0406] 14.开始研究治疗前≤6个月的血栓栓塞或脑血管事件的历史，包括短暂性脑缺血发作，脑血管意外，深静脉血栓形成或肺栓塞
[0407] 15.与CK升高可能相关的并发神经肌肉疾病(例如，炎性肌病，肌营养不良，肌萎缩侧索硬化，脊髓性肌萎缩)
[0408] 16.使用以下任何一种方法治疗：
[0409] a.在开始研究治疗之前的一段时间内的循环化疗比用于该治疗的周期长度短(例如，亚硝基脲，丝裂霉素-C为6周)
[0410] b.在开始研究治疗之前的≤5个半衰期(t1/2)或≤4周(以较短者为准)的一段时间内，生物疗法(如抗体)，贝伐单抗或阿柏西普除外，连续或间歇性小分子治疗药物，或任何其他研究药物
[0411] c.在开始研究治疗前贝伐单抗或阿柏西普治疗≤3周
[0412] d.包括>30％的骨髓的放射治疗
[0413] 17.残留CTCAE≥先前抗癌治疗的2级毒性，2级秃发或2级神经病变除外
[0415] 19.活性乙型肝炎或丙型肝炎感染
[0416] 20.已知的吉尔伯特氏综合征病史或已知具有以下任何基因型：UGT1A1*6/*6,UGT1A1*28/*28,或UGT1A1*6/*28
[0417] 21.以计划剂量接受西妥昔单抗或伊立替康的已知禁忌症
[0418] 22.目前用非局部用药治疗已知是CYP3A4的强抑制剂。然而，在开始研究治疗之前至少7天停止这种治疗或转用另一种药物的患者是合格的。
[0419] 23.伴随使用圣约翰草(贯叶连翘)。
[0420] 24.其他严重，急性或慢性的医学或精神疾病或实验室异常可能会增加与研究参与或研究药物管理相关的风险或可能干扰研究结果的解释，并且在研究者的判断中，将使患者不适合该研究的候选人。
[0421] 25.怀孕，通过阳性人绒毛膜促性腺激素(hCG)实验室检测结果或哺乳(哺乳期)证实。
[0422] 26.除非根据当地法律或法规要求在当地管辖区提供参与，否则将被排除在监护人或临时监护人之外。
[0423] 27.此前参加本临床研究。
[0424] 治疗方案
[0425] 该研究中的研究产品是康奈非尼(化合物A)和比尼美替尼(化合物B)，其将与西妥昔单抗(化合物C)一起口服(PO)(即，康奈非尼+比尼美替尼+西妥昔单抗[安全导入和三联用]以及康奈非尼+西妥昔单抗[双联用])。比较组合治疗是研究者选择的伊立替康/西妥昔单抗或FOLFIRI/西妥昔单抗(对照组)。
[0426] 患者将在每28天的周期内接受以下治疗。起始剂量和治疗时间表见表5。
[0427] 表5
[0428]
[0429]
[0430]
[0431] a在先前方案中(例如作为FOLFOX或FOLFOXIRI方案的一部分)需要5-FU和FA剂量减少的经历不可接受的毒性的患者可以以先前耐受的最高剂量开始。
[0432] 对于个体患者，可以基于方案定义的治疗调整适当地减少或中断研究药物的剂量。
[0433] 给予康奈非尼或康奈非尼+比尼美替尼
[0434] 康奈非尼将以QD方案施用，比尼美替尼将以BID方案施用，均为平坦固定剂量的PO，而不基于体重或体表面积(BSA)(表5)。比尼美替尼和康奈非尼应不考虑食物。指导患者整个吞服胶囊/片剂而不是咀嚼或压碎它们。
[0435] ·QD给药：指导患者每天大约在同一时间每天用大杯水(～250mL)服用康奈非尼胶囊。对于AE或任何其他原因省略的康奈非尼剂量可以在下一剂量之前12小时服用。
[0436] ·BID给药：指导患者在早晨和晚上每天大约相同的时间用大杯水(～250mL)间隔12±2小时服用比尼美替尼片剂。由于AE或任何其他原因而省略的比尼美替尼剂量不应在当天晚些时候或在给药期结束时补充。
[0437] 在安全导入和三联用中，两种口服研究药物(康奈非尼+比尼美替尼)应在早晨一起服用，并且仅在晚上服用BID给药药物(比尼美替尼)而不考虑食物。
[0438] 在研究现场安排采血的日子，患者在采集后，在研究人员或指定人员的监督下，在现场采取早晨剂量的康奈非尼和比尼美替尼(如适用)。在访问当天晚上，患者将在家中服用比尼美替尼(如适用)(按其导入和三联用)。在所有其他日子，患者将在家中服用康奈非尼和比尼美替尼(如适用)。在摄入康奈非尼和比尼美替尼(如适用)之前，应收集用于康奈非尼和比尼美替尼分析的预测PK样品。
[0439] 如果患者在给药后的任何时间呕吐，则不应重新给予研究药物的剂量。
[0440] 由于CYP3A4与研究药物的潜在相互作用，患者必须在整个研究期间，优选在第一剂研究药物前7天，避免食用葡萄柚，石榴，杨桃，塞维利亚橙或含有这些物质的汁液的产品。允许使用橙汁。
[0441] 康奈非尼和比尼美替尼(如适用)将在西妥昔单抗治疗前至少30分钟给予。
[0442] 给予西妥昔单抗
[0443] 根据机构标准，西妥昔单抗将在研究地点的每28天周期的第1,8,15和22天(±3天)每周IV施用(表5)。初始西妥昔单抗剂量(第1周期第1天)为400mg/m2，以120分钟IV输注给予，然后60mg/m2剂量以60分钟IV输注给予。输注速度应与当地标签一致，但不应超过10mg/分钟。在输注期间和输注结束后至少1小时需要密切监测。如果在给予西妥昔单抗时发生输注反应，应立即停止输注，并应根据机构标准密切监测和治疗患者。常规西妥昔单抗输注的预先药物可根据标签和国家和/或机构标准使用。预先药物应在给予康奈非尼和比尼美替尼(如果适用)后1小时且西妥昔单抗输注前30分钟给予。
[0444] 给予伊立替康
[0445] 根据机构标准，伊立替康将在研究地点的每28天周期的第1天和第15天(±3天)每两周一次施用。初始伊立替康剂量(第1周期第1天)为180mg/m2，以90分钟IV输注或根据机构标准给予。
[0446] 给予FOLFIRI
[0447] 表55中提供了5-FU，FA和伊立替康的初始剂量。在先前方案中需要5-FU和FA剂量减少的患者(例如，作为FOLFOX或FOLFOXIRI方案的一部分)应当按照表5中列出的剂量开始，最接近但不超过先前耐受的剂量。在这些情况下，不应减少起始伊立替康的剂量。
[0448] 根据机构标准，在研究地点表5中，在每28天周期的第1天和第15天(±3天)每两周一次施用亚叶酸。初始FA剂量为400mg/m2，以120分钟IV输注或根据机构标准给予。或者，可以与伊立替康同时施用FA(通过单独的输注线)。由于AE或任何其他原因而省略的FA剂量不应该补足。
[0449] 根据机构标准，在FA输注完成后立即在研究地点表5中，在每28天周期的第1天和第15天(±3天)每两周静脉内施用5-氟尿嘧啶。最初的5-FU剂量是在第1天和第15天静脉注射400mg/m2(不超过15分钟)，然后是1200mg/m2/天×2天(总共2400mg/m2，持续46-48小时)连续IV输注或根据机构标准。由于AE或任何其他原因而省略的5-FU剂量不应该补足。
[0450] 剂量调整
[0451] 将持续监测患者的AE。使用NCICTCAE，v.4.03评估AE的严重程度。如果患者出现毒性，可按表6中所述调整剂量。所有剂量调整均应基于最严重的在先毒性。
[0452] 在安全导入和三联用中，如果患者由于AE或具有临床实验室价值而永久停止比尼美替尼，他们可能会继续接受康奈非尼与西妥昔单抗联用。由于比诺美替尼，康奈非尼或西妥昔单抗在BRAF突变mCRC患者中作为单一药物缺乏疗效，不能耐受这些药物与至少一种其他药物联合使用的患者应完全停止研究治疗，完成治疗随访结束并继续随访生存(和疾病进展，如果适用)。
[0453] 对于AE或实验室异常，西妥昔单抗可降低至2个剂量水平至最小150150mg/m2(表6)。当由于AE而需要减少剂量时，在研究治疗期间不允许该患者随后的西妥昔单抗剂量再次升级。如果在AE解决后，以相同的剂量恢复治疗，并且相同的毒性再次发生且具有相同的严重性，则任何重新开始的治疗必须处于下一个较低的剂量水平而与持续时间无关，一些皮肤毒性除外。此外，如果在较低剂量的西妥昔单抗后恢复治疗后，相同的毒性再次发生，严重程度相同或更严重，则患者必须停止研究治疗。
[0454] 如果因为AE或临床显著实验室异常的结果，患者错过>28次连续剂量的康奈非尼，或比尼美替尼，>4次连续西妥昔单抗剂量，或2次连续伊立替康，5-FU或FA剂量，则应停止相应的药剂。如前所述，由于BRAF突变mCRC患者缺乏疗效，患者将不允许继续使用单一药物比尼美替尼，康奈非尼或西妥昔单抗，并将完全停止研究治疗，在治疗结束访问结束后，将继续随访生存(和疾病进展，如果适用)。
[0455] 表6：剂量调整的剂量水平
[0456]
[0457] 缩写：BID＝每天两次；5-FU＝5-氟尿嘧啶；QD＝每天一次。
[0458] a 400mg/m2初始剂量(120-分钟输注),然后250mg/m2(60-分钟输注)
[0459] 康奈非尼和/或比尼美替尼的剂量调整
[0460] 康奈非尼和/或比尼美替尼的剂量应在整个研究期间针对AE进行调整(表12)。一般而言，除非AE是表12中提到的特定眼部AE，否则不应减少或中断1级AE的剂量，但如果适用，应酌情提供控制症状的治疗。
[0461] 个别患者可将其剂量康奈非尼和/或比尼美替尼减少至表6中规定的剂量水平。康奈非尼的最低推荐剂量水平为150mg QD，比尼美替尼的最低推荐剂量水平是15毫克BID。当导致剂量减少的AE改善并且在患者的基线上保持稳定至少14天时，如果没有可能阻碍药物再次升级的其他伴随毒性，则可以由研究者自行决定将剂量再次升级至下一剂量水平。患者的剂量减少或再次升级的次数没有限制(表6中规定的增量)；然而：
[0462] -由于QTcF延长≥501毫秒的剂量减少后不允许康奈非尼剂量再次升级；
[0463] -由于LVEF功能障碍或QTcF延长≥501毫秒的剂量减少后不允许比尼美替尼剂量再次升级；
[0464] -由于视网膜毒性≥2级的剂量减少后不允许比尼美替尼或康奈非尼剂量再次升级。
[0465] 有关康奈非尼和/或比尼美替尼的推荐剂量调整参阅表12，如果适用，基于康奈非尼和/或比尼美替尼治疗相关的AE的发生。
[0466] 根据NCICTCAE，v.4.03不能具体分级的眼部疾病应根据表7进行分级。视网膜的浆液性脱离应根据表8进行分级。葡萄膜炎应根据NCI CTCAE，v.4.03进行分级，如上所述。在表9中，手足皮肤反应应根据表10中所述的NCICTCAE，v.4.03进行分级。腹泻应根据表11中所述的调整的NCICTCAE，v.4.03进行分级。
[0467] 表7：调整的NCICTCAE，版本4.03眼病疾病的分级
[0468]
[0469] 表8：NCICTCAE,版本4.03，视网膜的浆液性脱离的分级
[0470]
[0471] 注意：对于孔源性视网膜脱离，根据NCICTCAE v.4.03视网膜脱离评分。
[0472] 表9：NCICTCAE，版本4.03，葡萄膜炎分级
[0474] 表10：NCICTCAE,版本4.03，手足皮肤反反应(HFSR)a分级
[0475]
[0476] 缩写：ADL＝日常生活活动
[0477] aHFSR或掌跖感觉丧失性红斑综合症，一种以手掌或脚底发红，明显不适，肿胀和b刺痛为特征的疾病；增加了1级和3级的具体实例，以便于适当分级[来自索拉菲尼包装插入件(West Haven,CT:拜尔制药公司(Bayer Pharmaceuticals Corporation)；2007)[0478] 表11：调整的NCICTCAE,版本4.03，腹泻分级
[0479]
[0480]
[0481] 表12：康奈非尼-相关和/或比尼美替尼-相关不良事件的推荐剂量调整
[0482]
[0483]
[0484]
[0485]
[0486]
[0487]
[0488]
[0489]
[0490]
[0491]
[0492]
[0493]
[0494] a不基于NCICTCAE
[0495] b不允许康奈非尼剂量降低低于75mg QD，比尼美替尼剂量降低低于15mg BID[0496] c眼科监测涉及视网膜事件，后葡萄膜炎，RVO：用专门的视网膜成像(例如眼睛相干断层扫描，荧光血管造影)进一步评估。任何视网膜事件的诊断必须通过是否存在症状，视力评估和OCT中的发现来支持。
[0497] d对于招募的患有肝转移和基线LFT升高的患者
[0498] e表征为手掌或脚掌发红，明显不适，肿胀和刺痛的病症
[0499] f如果AE在停药后28天内恢复到≤1级，则4级AE患者可以在较低剂量水平恢复治疗，如果研究者和保荐人医疗监测员认为该事件不会威胁生命且患者可以被管理和监测AE的复发。任何需要中断持续时间>28天的患者必须永久停止研究药物。
[0500] g指总胆红素
[0501] 西妥昔单抗的剂量调整
[0502] 基于西妥昔单抗治疗相关AE的出现，西妥昔单抗的推荐剂量调整总结在表1中。
[0503] 表13：西妥昔单抗相关不良事件的推荐剂量调整
[0504]
[0505]
[0506] 实施例3
[0507] 制备结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺
[0508] 结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的制备参见PCT公开WO 2014/063024。
[0509] 在室温下的干燥容器中，将6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺加入到甲醇/THF/水(35/35/30w/w/w)的预混合的溶剂溶液中。将悬浮液加热至内部温度53-55℃，并在53-56℃的内部温度下通过深度和膜过滤(通过纸过滤器和PTFE膜)热过滤所得溶液。将澄清溶液搅拌并冷却至47-48℃，并加入晶种悬浮液(即，结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的晶种的水溶液，10％m/m)(0.2-0.5％结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺预期产生的量)。约20分钟后，在25小时内缓慢加入水(15小时内33.3％，10小时内66.6％，加水后至少搅拌10分钟)，得到甲醇/THF/水的最终比例(20/20/60w/w)。加水后，将悬浮液在10小时内冷却至内部温度3-5℃并搅拌
0.5小时。将白色悬浮液通过烧结玻璃Nutche(75mL，直径＝6cm，孔3)吸滤器过滤，并用冰冷的甲醇/THF/水(15/15/70w/w，2-4℃)洗涤一次，用冰冷的水(2-4℃)洗涤两次。干燥在真空烘箱中在20℃下进行10小时，然后在40℃下进行10小时，然后在60℃下进行至少12小时，压力<10毫巴，提供结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺，其可通过图8中的XRPD图案区分。
0.5小时。将白色悬浮液通过烧结玻璃Nutche(75mL，直径＝6cm，孔3)吸滤器过滤，并用冰冷的甲醇/THF/水(15/15/70w/w，2-4℃)洗涤一次，用冰冷的水(2-4℃)洗涤两次。干燥在真空烘箱中在20℃下进行10小时，然后在40℃下进行10小时，然后在60℃下进行至少12小时，压力<10毫巴，提供结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺，其可通过图8中的XRPD图案区分。
[0510] 实施例4
[0511] 结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的药物组合物
[0512] 结晶的6-(4-溴-2-氟苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基乙氧基)-酰胺的制剂如表14所示。
[0513] 表14
[0514]
[0515] *基于测定的值，参考干燥物质(100％)获取药物物质的重量。通过乳糖一水合物的量来调节重量差异。
[0517] ***在处理过程中去除
[0518] 在混合片芯各组分后，通过直接压制将药物组合物转化成片剂形式。形成的片剂可以进一步用上面提供的片剂包衣包衣。
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