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乳腺癌检测方法

阅读：563发布：2020-05-11

专利汇可以提供乳腺癌检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供诊断乳腺癌的方法。该方法包括分析多个细胞中的生物标志物的表达模式以区分浸润性和非浸润性癌、普通增生和非典型增生，以及基底样乳腺癌。基于在乳头抽吸液中发现的生物标志物的不同组合来诊断乳腺癌。，下面是乳腺癌检测方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种用于对乳腺癌进行分类的系统，其包括：
(a)用于吸收乳头抽吸液样品的、包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素的吸收性纸，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；
(b)能与所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗原结合的抗体，其中所述抗原选自：
CK5、CK14、CK7、CK18、p63、CK7和CK18；以及
(c)用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的光学显微镜或自动化系统。
2.根据权利要求1所述的系统，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
3.根据权利要求1所述的系统，进一步包括用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的工具。
4.根据权利要求3所述的系统，其中用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的工具为一种或多种染色剂。
5.根据权利要求4所述的系统，其中所述染色剂选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、二氨基联苯胺、固红、苏木精、曙红或其组合。
6.根据权利要求1所述的系统，进一步包括用于从所述吸收性纸洗脱所述乳头抽吸液样品中的细胞的洗涤剂。
7.根据权利要求1所述的系统，进一步包括：配置为执行可执行指令的任选联网的计算机处理设备；以及计算机程序，所述计算机程序包括由所述计算机处理设备执行的、以应用模型或算法来分析所述细胞的软件模块。
8.根据权利要求7所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以为个体指定治疗方案的软件模块。
9.根据权利要求7所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将显微照片存储于显微照片的数据库中的软件模块。
10.根据权利要求7所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果存储于分析结果的数据库中的软件模块。
11.根据权利要求7所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将乳头抽吸液样品中的细胞与标准进行比较的软件模块。
12.根据权利要求7所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。
13.根据权利要求7所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将诊断结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。
14.根据权利要求7所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以产生包括所述分析结果的报告的软件模块。
15.根据权利要求7所述的系统，其中所述吸收性纸为如图1所示的设备。
16.一种编码有计算机程序的非暂时性计算机可读存储介质，所述计算机程序包括可由计算机处理设备执行的指令，以创建应用，所述应用包括：
(a)配置为应用模型或算法来分析吸收在吸收性纸上的乳头抽吸液样品的细胞的软件模块，所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头，且其中所述细胞进一步包含能与CK5、CK14、CK7、CK18、p63、CK7和CK18结合的抗体；以及
(b)配置为为个体指定治疗方案的软件模块。
17.根据权利要求16所述的存储介质，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
18.根据权利要求16所述的存储介质，其中所述模型或算法将细胞与标准进行比较。
19.根据权利要求16所述的存储介质，其中所述应用进一步包括显微照片在计算机存储器中的数据库。
20.根据权利要求16所述的存储介质，其中所述应用进一步包括分析结果在计算机存储器中的数据库。
21.根据权利要求16所述的存储介质，其中所述应用进一步包括配置为产生包括分析结果的报告的软件模块。
22.根据权利要求16所述的存储介质，其中所述吸收性纸为如图1所示的设备。
23.一种用于对乳腺癌进行分类的方法，其包括：
(a)使吸收在吸收性纸上的乳头抽吸液样品的细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的抗体接触，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；
(b)检测所述抗体中的一种或多种与所述细胞的结合；以及
(c)基于第一抗体的结合模式对所述癌进行分类；其中来源于所述乳头抽吸液(NAF)样品的细胞不是组织。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
25.根据权利要求23所述的方法，其中检测所述一种或多种抗体的结合进一步包括采用染色剂对细胞进行染色，所述染色剂选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、二氨基联苯胺、固红、苏木精、曙红及其组合。
26.根据权利要求23所述的方法，进一步包括清洗所述吸收性纸并收集流出物。
27.根据权利要求23所述的方法，其中所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素。
28.根据权利要求23所述的方法，其中所述吸收性纸为如图1所示的设备。
29.根据权利要求23所述的方法，进一步包括：如果抗CK5抗体、抗CK14抗体及任选的抗p63第一抗体与所述细胞结合，则将所述乳腺癌分类为基底样的。
30.根据权利要求23所述的方法，进一步包括：如果(i)抗CK7抗体和抗CK18第一抗体与所述细胞结合，并且(ii)抗CK5抗体和抗CK14抗体和抗p63抗体不与所述细胞结合，则将所述乳腺癌分类为管腔型。
31.根据权利要求23所述的方法，进一步包括：如果抗CK5抗体、抗CK14抗体、抗CK7抗体、抗CK18抗体和抗p63第一抗体与所述细胞结合，则将所述乳腺癌分类为普通型导管增生。
32.根据权利要求23所述的方法，进一步包括：如果(i)抗CK7抗体和抗CK18抗体和任选的抗p63抗体与所述细胞结合，并且(ii)抗CK5抗体和抗CK14抗体不与所述细胞结合，则将所述癌分类为非典型导管增生。
33.根据权利要求23所述的方法，进一步包括：如果(i)所述样品包含多于一个细胞，并且(i)结合抗CK5抗体、抗CK14抗体和抗p63抗体的细胞与结合抗CK7抗体和抗CK18抗体的细胞的比例小于或等于浸润性对照，则将所述癌分类为浸润性的。
34.根据权利要求23所述的方法，进一步包括：如果(i)所述样品包含多于一个细胞，并且(ii)结合抗CK5抗体、抗CK14抗体和抗p63抗体的细胞与结合抗CK7抗体和抗CK18抗体的细胞的比例大于或等于非浸润性对照，则将所述癌分类为非浸润性的。
35.根据权利要求23所述的方法，其中所述NAF样品从乳头抽吸液的典型非分泌者或典型分泌者获得。
36.一种组合物，其包含：(a)来源于吸收到吸收性纸上的乳头抽吸液的至少一个细胞，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素，用于吸收乳头抽吸液样品，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；及(b)能与所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗原结合的抗体，其中所述抗原选自：CK5、CK14、CK7、CK18、p63、CK7和CK18。
37.一种用于对乳腺癌进行分类的系统，其包括：
(a)用于吸收乳头抽吸液样品的、包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素的吸收性纸，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；及
(b)能与所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗原结合的抗体，其中所述抗原选自：
CK5、CK14、CK7、CK18、p63、CK7和CK18。
38.根据权利要求37所述的系统，进一步包括用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的光学显微镜或自动化系统。
39.根据权利要求37所述的系统，其中所述吸收性纸的直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。
40.根据权利要求37所述的系统，进一步包括用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的工具。
41.根据权利要求40所述的系统，其中用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的工具为一种或多种染色剂。
42.根据权利要求41所述的系统，其中所述染色剂选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、二氨基联苯胺、固红、苏木精、曙红或其组合。
43.根据权利要求37所述的系统，进一步包括用于从所述吸收性纸洗脱所述乳头抽吸液样品中的细胞的洗涤剂。
44.根据权利要求37所述的系统，进一步包括：配置为执行可执行指令的任选联网的计算机处理设备；以及计算机程序，所述计算机程序包括由所述计算机处理设备执行的、以应用模型或算法来分析所述细胞的软件模块。
45.根据权利要求44所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以为个体指定治疗方案的软件模块。
46.根据权利要求44所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将显微照片存储于显微照片的数据库中的软件模块。
47.根据权利要求44所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果存储于分析结果的数据库中的软件模块。
48.根据权利要求44所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将乳头抽吸液样品中的细胞与标准进行比较的软件模块。
49.根据权利要求44所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。
50.根据权利要求44所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将诊断结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。
51.根据权利要求44所述的系统，其中所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以产生包括所述分析结果的报告的软件模块。
52.根据权利要求44所述的系统，其中所述吸收性纸为如图1所示的设备。

说明书全文

乳腺癌检测方法

交叉引用

[0001] 本申请要求2011年10月24日提交的美国临时申请号61/550,865的权益，该临时申请通过引用并入本文。

背景技术

[0002] 乳腺癌是源自乳腺组织的癌，最常见的是源自乳导管的内衬或为该导管供应乳的小叶。源自导管的癌称为导管癌；那些源自小叶的癌称为小叶癌。发明内容

[0003] 在某些实施方案中，本文中公开了将乳腺癌分类为基底样乳腺癌的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(nipple aspirate fluid，NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；以及(b)如果CK5、CK14及任选的抗p63第一抗体与所述多个细胞结合，则将所述癌分类为基底样的；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与能结合CK5、CK14和p63的第二抗体的第一群体及能结合CK7和CK18的第二抗体的第二群体接触。在一些实施方案中，所述第二抗体的第一群体包含辣根过氧化物酶(HRP)，且所述第二抗体的第二群体包含碱性磷酸酶(AP)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括采用苏木精对所述多个细胞进行复染色。在一些实施方案中，采用光学显微镜使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，采用自动化系统使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞在与第二抗体接触之前与过氧化物封闭剂(block)接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素。在一些实施方案中，所述方法进一步包括清洗所述吸收性纸并收集流出物。在一些实施方案中，所述多个细胞为至少两个细胞。在一些实施方案中，所述多个细胞为多于两个细胞。在一些实施方案中，NAF样品从乳头抽吸液的典型非分泌者或典型分泌者获得。在一些实施方案中，所述多个细胞为三阴性的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第一抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第二抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)的接触是自动化的。

[0004] 在某些实施方案中，本文中公开了将乳腺癌分类为管腔型的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果(i)抗CK7和抗CK18第一抗体与所述多个细胞结合，并且(ii)抗CK5、抗CK14和抗p63第一抗体不与所述多个细胞结合，则将所述癌分类为管腔型；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与能结合CK5、CK14和p63的第二抗体的第一群体及能结合CK7和CK18的第二抗体的第二群体接触。在一些实施方案中，所述第二抗体的第一群体包含辣根过氧化物酶(HRP)，且所述第二抗体的第二群体包含碱性磷酸酶(AP)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括采用苏木精对所述多个细胞进行复染色。在一些实施方案中，采用光学显微镜使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，采用自动化系统使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞在与第二抗体接触之前与过氧化物封闭剂接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括清洗所述吸收性纸并收集流出物。在一些实施方案中，所述多个细胞为至少两个细胞。在一些实施方案中，所述多个细胞为多于两个细胞。
在一些实施方案中，NAF样品从乳头抽吸液的典型非分泌者或典型分泌者获得。在一些实施方案中，所述多个细胞为三阴性的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第一抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第二抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)的接触是自动化的。

[0005] 在某些实施方案中，本文中公开了将增生分类为普通型导管增生的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果CK5、CK14、CK7、CK18和p63第一抗体与所述多个细胞结合，则将所述增生分类为普通型导管增生；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与能结合CK5、CK14和p63的第二抗体的第一群体及能结合CK7和CK18的第二抗体的第二群体接触。在一些实施方案中，所述第二抗体的第一群体包含辣根过氧化物酶(HRP)，且所述第二抗体的第二群体包含碱性磷酸酶(AP)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括采用苏木精对所述多个细胞进行复染色。在一些实施方案中，采用光学显微镜使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，采用自动化系统使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞在与第二抗体接触之前与过氧化物封闭剂接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素。在一些实施方案中，所述方法进一步包括清洗所述吸收性纸并收集流出物。在一些实施方案中，所述多个细胞为至少两个细胞。在一些实施方案中，所述多个细胞为多于两个细胞。在一些实施方案中，NAF样品从乳头抽吸液的典型非分泌者或典型分泌者获得。在一些实施方案中，所述多个细胞为三阴性的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第一抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第二抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)的接触是自动化的。

[0006] 在某些实施方案中，本文中公开了将增生分类为非典型导管增生的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果(i)CK7和CK18及任选的p63第一抗体与所述多个细胞结合，并且(ii)CK5和CK14第一抗体不与所述多个细胞结合，则将所述增生分类为非典型导管增生；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与能结合CK5、CK14和p63的第二抗体的第一群体及能结合CK7和CK18的第二抗体的第二群体接触。在一些实施方案中，所述第二抗体的第一群体包含辣根过氧化物酶(HRP)，且所述第二抗体的第二群体包含碱性磷酸酶(AP)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括采用苏木精对所述多个细胞进行复染色。在一些实施方案中，采用光学显微镜使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，采用自动化系统使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞在与第二抗体接触之前与过氧化物封闭剂接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素。在一些实施方案中，所述方法进一步包括清洗所述吸收性纸并收集流出物。在一些实施方案中，所述多个细胞为至少两个细胞。在一些实施方案中，所述多个细胞为多于两个细胞。在一些实施方案中，NAF样品从乳头抽吸液的典型非分泌者或典型分泌者获得。
在一些实施方案中，所述多个细胞为三阴性的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第一抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第二抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)的接触是自动化的。

[0007] 在某些实施方案中，本文中公开了将乳腺癌分类为浸润性的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果结合CK5、CK14和p63第一抗体的细胞与结合CK7和CK18第一抗体的细胞的比例小于或等于浸润性对照，则将所述癌分类为浸润性的；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。在一些实施方案中，没有细胞结合CK5、CK14和p63。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与能结合CK5、CK14和p63的第二抗体的第一群体及能结合CK7和CK18的第二抗体的第二群体接触。在一些实施方案中，所述第二抗体的第一群体包含辣根过氧化物酶(HRP)，且所述第二抗体的第二群体包含碱性磷酸酶(AP)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括采用苏木精对所述多个细胞进行复染色。在一些实施方案中，采用光学显微镜使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，采用自动化系统使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞在与第二抗体接触之前与过氧化物封闭剂接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素。在一些实施方案中，所述方法进一步包括清洗所述吸收性纸并收集流出物。在一些实施方案中，所述多个细胞为至少两个细胞。在一些实施方案中，所述多个细胞为多于两个细胞。在一些实施方案中，NAF样品从乳头抽吸液的典型非分泌者或典型分泌者获得。在一些实施方案中，所述多个细胞为三阴性的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第一抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第二抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)的接触是自动化的。

[0008] 在某些实施方案中，本文中公开了将乳腺癌分类为非浸润性乳腺癌的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果结合CK5、CK14和p63第一抗体的细胞与结合CK7和CK18第一抗体的细胞的比例大于或等于非浸润性对照，则将所述癌分类为非浸润性的；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与能结合CK5、CK14和p63的第二抗体的第一群体及能结合CK7和CK18的第二抗体的第二群体接触。在一些实施方案中，所述第二抗体的第一群体包含辣根过氧化物酶(HRP)，且所述第二抗体的第二群体包含碱性磷酸酶(AP)。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括采用苏木精对所述多个细胞进行复染色。在一些实施方案中，采用光学显微镜使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，采用自动化系统使所述多个细胞可视化。在一些实施方案中，所述方法进一步包括使所述多个细胞在与第二抗体接触之前与过氧化物封闭剂接触。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞。在一些实施方案中，所述方法进一步包括收集所述来源于吸收性纸上的NAF的多个细胞，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素。在一些实施方案中，所述方法进一步包括清洗所述吸收性纸并收集流出物。在一些实施方案中，所述多个细胞为至少两个细胞。在一些实施方案中，所述多个细胞为多于两个细胞。
在一些实施方案中，NAF样品从乳头抽吸液的典型非分泌者或典型分泌者获得。在一些实施方案中，所述多个细胞为三阴性的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第一抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与第二抗体的接触是自动化的。在一些实施方案中，其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与二氨基联苯胺(DAB)和固红(FR)的接触是自动化的。

[0009] 本文中提供一种用于对乳腺癌进行分类的系统，该系统包括：用于吸收乳头抽吸液样品的、包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素的吸收性纸，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头，并且其直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸；能与所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗原结合的抗体，其中所述抗原选自：CK5、CK14、CK7、CK18、p63、CK7和CK18；以及光学显微镜或自动化系统，其用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化。该系统可进一步包括用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的一种或多种工具(means)。在一个实施方案中，用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的工具为一种或多种染色剂。染色剂包括但不限于：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、二氨基联苯胺、固红、苏木精、曙红或其组合。该系统还可进一步包括用于从所述吸收性纸洗脱所述乳头抽吸液样品中的细胞的洗涤剂。
该系统还可进一步包括配置为执行可执行指令的任选联网的计算机处理设备；以及计算机程序，所述计算机程序包括由所述计算机处理设备执行以应用模型或算法来分析所述细胞的软件模块。在一个实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以为个体指定治疗方案的软件模块。在另一实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将显微照片存储于显微照片的数据库中的软件模块。在另一实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果(analysis)存储于分析结果的数据库中的软件模块。在另一实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将乳头抽吸液样品中的细胞与标准进行比较的软件模块。在另一实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。在另一实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将诊断结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。在另一实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以产生包括所述分析结果的报告的软件模块。在另一实施方案中，所述吸收性纸为如图
1所示的设备。

[0010] 本文中提供一种编码有计算机程序的非暂时性计算机可读存储介质，所述计算机程序包括可由计算机处理设备执行的指令，以创建应用，所述应用包括：(a)配置为应用模型或算法来分析吸收在吸收性纸上的乳头抽吸液样品的细胞的软件模块，所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头，并且其直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸，且其中所述细胞进一步包含能与CK5、CK14、CK7、CK18、p63、CK7和CK18结合的抗体；以及(b)配置为为个体指定治疗方案的软件模块。在一个实施方案中，所述模型或算法将细胞与标准进行比较。在一个实施方案中，所述应用进一步包括显微照片在计算机存储器中的数据库。在一个实施方案中，所述应用进一步包括分析结果在计算机存储器中的数据库。在一个实施方案中，所述应用进一步包括配置为产生包括分析结果的报告的软件模块。在一个实施方案中，所述吸收性纸为如图1所示的设备。

[0011] 本文中提供一种用于对乳腺癌进行分类的方法，该方法包括：使吸收在吸收性纸上的乳头抽吸液样品的细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的抗体接触，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头，并且其直径为约1.0至约3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸；检测所述抗体中的一种或多种与所述细胞的结合；以及基于第一抗体的结合模式对所述癌进行分类；其中来源于所述乳头抽吸液(NAF)样品的细胞不是组织。在一个实施方案中，检测所述一种或多种抗体的结合进一步包括采用染色剂对细胞进行染色，所述染色剂选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、二氨基联苯胺、固红、苏木精、曙红及其组合。在一个实施方案中，所述方法进一步包括清洗所述吸收性纸并收集流出物。吸收性纸例如可为微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素。在一个实施方案中，所述吸收性纸为如图1所示的设备。所述方法可进一步包括：如果抗CK5抗体、抗CK14抗体及任选的抗p63第一抗体与该细胞结合，则将所述乳腺癌分类为基底样的。所述方法可进一步包括：如果(i)抗CK7抗体和抗CK18第一抗体与该细胞结合，并且(ii)抗CK5抗体和抗CK14抗体和抗p63抗体不与该细胞结合，则将所述乳腺癌分类为管腔型。所述方法可进一步包括：如果抗CK5抗体、抗CK14抗体、抗CK7抗体、抗CK18抗体和抗p63第一抗体与该细胞结合，则将所述乳腺癌分类为普通型导管增生。所述方法可进一步包括：如果(i)抗CK7抗体和抗CK18抗体和任选的抗p63抗体与该细胞结合，并且(ii)抗CK5抗体和抗CK14抗体不与该细胞结合，则将所述癌分类为非典型导管增生。所述方法可进一步包括：如果(i)所述样品包含多于一个细胞，并且(ii)结合抗CK5抗体、抗CK14抗体和抗p63抗体的细胞与结合抗CK7抗体和抗CK18抗体的细胞的比例小于或等于浸润性对照，则将所述癌分类为浸润性的。所述方法可进一步包括：如果所述样品包含多于一个细胞，并且结合抗CK5抗体、抗CK14抗体和抗p63抗体的细胞与结合抗CK7抗体和抗CK18抗体的细胞的比例大于或等于非浸润性对照，则将所述癌分类为非浸润性的。将在此类方法中使用的NAF样品可从乳头抽吸液的典型非分泌者或典型分泌者获得。

[0012] 在某些实施方案中，本文中公开一种组合物，该组合物包含：(a)来源于吸收在吸收性纸上的乳头抽吸液的至少一个细胞，所述吸收性纸包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素，用于吸收乳头抽吸液样品，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；及(b)能与所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗原结合的抗体，其中所述抗原选自：CK5、CK14、CK7、CK18、p63、CK7和CK18。

[0013] 在某些实施方案中，本文中公开一种用于对乳腺癌进行分类的系统，该系统包括：(a)用于吸收乳头抽吸液样品的、包含微纤维素、混合纤维素酯或硝化纤维素的吸收性纸，其中所述吸收性纸的尺寸设置为覆盖乳头；及(b)能与所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗原结合的抗体，其中所述抗原选自：CK5、CK14、CK7、CK18、p63、CK7和CK18。在一些实施方案中，所述系统进一步包括用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的光学显微镜或自动化系统。在一些实施方案中，所述吸收性纸的直径为约1.0至约
3.0英寸且厚度为约0.01至约0.1英寸。在一些实施方案中，所述系统进一步包括用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的工具。在一些实施方案中，用于对结合到所述乳头抽吸液样品中的细胞上的抗体进行可视化的工具为一种或多种染色剂。
在一些实施方案中，所述染色剂选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、二氨基联苯胺、固红、苏木精、曙红或其组合。在一些实施方案中，所述系统进一步包括用于从所述吸收性纸洗脱所述乳头抽吸液样品中的细胞的洗涤剂。在一些实施方案中，所述系统进一步包括：配置为执行可执行指令的任选联网的计算机处理设备；以及计算机程序，所述计算机程序包括由所述计算机处理设备执行的、以应用模型或算法来分析所述细胞的软件模块。在一些实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以为个体指定治疗方案的软件模块。在一些实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将显微照片存储于显微照片的数据库中的软件模块。在一些实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果存储于分析结果的数据库中的软件模块。在一些实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将乳头抽吸液样品中的细胞与标准进行比较的软件模块。在一些实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将分析结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。在一些实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以将诊断结果传送至医疗服务人员或个体的软件模块。在一些实施方案中，所述计算机程序进一步包括由所述计算机处理设备执行的、以产生包括所述分析结果的报告的软件模块。在一些实施方案中，所述吸收性纸为如图1所示的设备。
附图说明

[0014] 在所附权利要求书中详细阐明了本公开内容的特征。通过参考以下阐明了说明性实施方案的详细说明(其中利用了本发明所公开的实施方案的原理)和附图，将获得对本发明的组合物、试剂盒和方法的特征和优点的更好的理解，附图中：

[0015] 图1A-B显示本文中描述的代表性吸收性纸或膜的二维图形。角度尺寸以英寸±1o和度数来提供。图1A显示该纸或膜的俯视图。图1B显示侧角(side angle)产生。

具体实施方式

[0016] 尽管目前存在几种用于对乳腺癌进行分子亚型分型的方法，但仍需要更灵敏及可靠的方法。优选地，这些方法都是非侵入性的，不需要组织样品，并且可对被分类为乳头抽吸液(NAF)分泌者或者非分泌者的个体使用。

[0017] 本文中提供的实施方案的方法可采用合适的吸乳器设备来进行，该吸乳器设备可用于样品收集，例如在美国专利号5,798,266、美国专利号6,689,073和美国专利号6,887,210中描述的设备，上述各专利均通过引用并入本文。在一个实施方案中，该设备为TM
MASCT 设备。

[0018] 在一些实施方案中，本文中公开的方法需要少于10个细胞、少于9个细胞、少于8个细胞、少于7个细胞、少于5个细胞、少于4个细胞、少于3个细胞、少于2个细胞。更优选地，这些方法需要两个细胞。

[0019] 在某些实施方案中，本文中公开了将乳腺癌分类为基底样乳腺癌的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；以及(b)如果CK5、CK14及任选的抗p63第一抗体与所述多个细胞结合，则将所述癌分类为基底样的；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。

[0020] 在某些实施方案中，本文中公开了将乳腺癌分类为管腔型的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果(i)抗CK7和抗CK18第一抗体与所述多个细胞结合，并且(ii)抗CK5、抗CK14和抗p63第一抗体不与所述多个细胞结合，则将所述癌分类为管腔型；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。

[0021] 在某些实施方案中，本文中公开了将增生分类为普通型导管增生的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果CK5、CK14、CK7、CK18和p63第一抗体与所述多个细胞结合，则将所述增生分类为普通型导管增生；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。

[0022] 在某些实施方案中，本文中公开了将增生分类为非典型导管增生的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果(i)CK7和CK18及任选的p63第一抗体与所述多个细胞结合，并且(ii)CK5和CK14第一抗体不与所述多个细胞结合，则将所述增生分类为非典型导管增生；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。

[0023] 在某些实施方案中，本文中公开了将乳腺癌分类为浸润性乳腺癌的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果结合CK5、CK14和p63第一抗体的细胞与结合CK7和CK18第一抗体的细胞的比例小于或等于浸润性对照，则将所述癌分类为浸润性的；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。在一些实施方案中，没有细胞结合CK5、CK14和p63。

[0024] 在某些实施方案中，本文中公开了将乳腺癌分类为非浸润性乳腺癌的方法，该方法包括：(a)使来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞与能结合CK5、CK14、CK7、CK18和p63的第一抗体接触；及(b)如果结合CK5、CK14和p63第一抗体的细胞与结合CK7和CK18第一抗体的细胞的比例大于或等于非浸润性对照，则将所述癌分类为非浸润性的；其中所述来源于乳头抽吸液(NAF)样品的多个细胞不是组织。定义

[0025] 如本文所使用的，在一些实施方案中，术语“治疗(“treatment”,“treat”或“treating”)”包括实现治疗益处。治疗益处意在包括正在治疗的潜在病症或病况的根除或改善。例如，治疗益处包括睡眠相关呼吸障碍的缓解或部分和/或完全终止。治疗益处也可通过一种或多种与潜在病况相关的生理或心理症状的根除或改善来实现，以使得在患者身上观察到改善，尽管事实上该患者仍然受到该病况的影响。例如，对于患有睡眠相关呼吸障碍的个体，治疗益处包括睡眠破碎(sleep fragmentation)的缓解或部分和/或完全终止，或觉醒或唤醒频率的降低，或唤醒发生率的降低。在一些实施方案中，“治疗”提供预防性益处，包括预防病况，延缓病况的进展，或降低病况发生的可能性(例如，预防睡眠相关呼吸障碍)。如本文所使用的，“治疗”包括预防。

[0026] 如本文所使用的，“施用”意指提供治疗，例如，开具治疗、施加治疗或分配治疗。在一些情况下，施用指医疗专业人员开具患者适用的治疗(例如，患者应用CPAP设备、消耗药物或注射药物)。医学治疗的施用并不需要医疗专业人员的即时或持续的监督。乳腺病症

[0027] 正常的乳腺由具有双层结构的导管和小叶组成。腔分泌细胞围绕中空内腔，并反过来被与基底膜直接接触的肌上皮细胞层所围绕。乳腺增生

[0028] 增生(又称上皮增生或增生性乳腺疾病)是指内衬于导管或小叶的细胞的过度生长。当增生在导管中时，称为导管增生或导管上皮增生。当增生影响小叶时，称为小叶增生。

[0029] 增生通常采用芯针活检或手术活检来诊断。基于细胞在显微镜下的外观，增生可分为：

[0030] 轻度增生：这并不会增加乳腺癌的风险；

[0031] 普通类型的增生(没有异型性)，也称为普通型增生：乳腺癌的风险为没有乳腺异常的女性的乳腺癌风险的约11/2至2倍。

[0032] 非典型增生(非典型导管增生[ADH]或非典型小叶增生[ALH])：乳腺癌的风险为没有乳腺异常的女性的乳腺癌风险的约4至5倍。乳腺癌

[0033] 乳腺癌通常开始于小叶或导管的细胞。乳腺癌可能为“混合瘤”，这意味着其包含癌性导管细胞和小叶细胞的混合物。在这类情况下，癌被视为导管癌。如果乳腺中存在多于一个肿瘤，则将乳腺癌描述为多灶性或多中心的。在多灶性乳腺癌中，所有的肿瘤均来自原始肿瘤，并且它们通常位于乳腺的相同部位。如果癌为多中心的，则意味着所有的肿瘤均分别形成，并且它们通常位于乳腺的不同区域。浸润性与非浸润性

[0034] 非浸润性癌停留在乳腺的导管或小叶内。它们没有长入或侵入乳腺之内或之外的正常组织。非浸润性癌有时称为原位癌(“在同一个地方”)或癌前病变(pre-cancer)。浸润性癌长入正常、健康的组织内。大多数乳腺癌是浸润性的。癌是非浸润性的还是浸润性的将会影响对其的治疗选择和响应。

[0035] 乳腺癌可以既为浸润性的又为非浸润性的。这意味着，癌的一部分已经长入正常组织内，且癌的一部分已停留在乳导管或乳小叶内。在这样的情况下，这些癌将被视为浸润性的。

[0036] 在大多数情况下，乳腺癌被分类为以下中的一种：

[0037] DCIS(原位导管癌)：DCIS为停留在乳导管内的非浸润性癌。

[0038] MIC(微浸润性乳腺癌，MICB和DCISM)：MIC为DCIS的一种亚型。它具有小于1.0mm的尺寸，且约10％或更少的MIC细胞已经离开导管组织(原始肿瘤部位)。

[0039] LCIS(原位小叶癌)：LCIS为停留在小叶内的细胞的过度生长。其表明发展为浸润性癌的风险增加。

[0040] IDC(浸润性导管癌)：乳腺癌最常见的类型，浸润性导管癌开始于乳导管，但已经长入乳腺内的周围正常组织。

[0041] ILC(浸润性小叶癌)：ILC在小叶内开始，但已经长入乳腺内的周围正常组织。分子亚型

[0042] 基因表达谱分析将乳腺癌分为四个主要的生物学上不同的本征亚型：管腔A型、管腔B型、人表皮生长因子受体2(HER2)过表达型及基底样/三阴性型。这些分子亚型具有预后和预测价值。不同分子亚群的预后和化疗敏感性不同。管腔癌

[0043] 大多数乳腺癌为管腔肿瘤。管腔肿瘤细胞看起来像在内衬于乳房导管的内部(管腔)细胞中开始的乳腺癌的细胞。

[0044] 管腔A型乳腺癌为ER+和/或PR+、HER2-、低Ki67。约42-59％的乳腺癌为管腔A型。管腔A型肿瘤倾向于具有低或中等的肿瘤分级。在四个亚型中，管腔A型肿瘤倾向于具有最好的预后，并具有相当高的生存率和相当低的复发率。仅有约15％的管腔A型肿瘤具有p53突变，这是与预后不良相关的因素。

[0045] 管腔B型乳腺癌为ER+和/或PR+、HER2+(或具有高Ki67的HER2-)。约6-17％的乳腺癌为管腔B型。具有管腔B型肿瘤的女性往往比那些具有管腔A型肿瘤的女性在更年轻的年龄被诊断出。与管腔A型肿瘤相比，管腔B型肿瘤也倾向于具有导致预后不良的因素，包括：较差的肿瘤分级、较大的肿瘤尺寸和p53基因突变。一般情况下，具有管腔B型肿瘤的女性具有相当高的生存率，虽然并不像那些具有管腔A型肿瘤的女性的生存率那么高。基底样

[0046] 约14-20％的乳腺癌为基底样乳腺癌。基底样乳腺癌与管腔癌的不同之处在于对于免疫表型标志物ER-/PR-/HER2-为三阴性的但表达CK5/6。基底样乳腺癌表现出加重的缺氧和高肿瘤分级，并具有以高细胞增殖和较差的临床结果为特征的侵袭性表型。大多数BRCA1乳腺癌和许多BRCA2乳腺癌为三阴性/基底样的。与雌激素受体阳性亚型(管腔A型和管腔B型肿瘤)相比，三阴性/基底样肿瘤通常为侵袭性的并具有不良的预后。三阴性/基底样肿瘤通常采用手术、放射疗法和化学疗法的某种组合来治疗。这些肿瘤不能用激素疗法或曲妥珠单抗( )来治疗，因为它们为激素受体阴性和HER2/neu-阴性的。
乳头抽吸液(NAF)的分析方法

[0047] 在一些实施方案中，本文中所公开的方法包括确定样品中的多个乳腺癌生物标志物的表达水平。在一些实施方案中，该样品为乳头抽吸液(NAF)。NAF的收集

[0048] 可采用任何合适的方法来获得NAF。在一些实施方案中，通过使用任意的吸收性纸来收集NAF。在一些实施方案中，该吸收性纸吸收流体。在一些实施方案中，该吸收性纸与蛋白质结合。在一些实施方案中，该吸收性纸不与细胞结合。

[0049] 吸收性纸2(其在本文中也可被称为“膜”)，可用于公开的方法中，并且可为适于收集上皮细胞和生物标志物例如蛋白质、碳水化合物、脂类、核酸、RNA、DNA等的任何材料。吸收性纸2包括例如由硝化纤维素、微纤维素、混合纤维素酯或任何其它用于乳头流体样品收集的合适材料制成的那些吸收性纸。虽然图1A示出了圆形的吸收性纸，但本文中也设想了其它形状，例如，椭圆形、正方形、三角形、其它多边形，只要该形状适于样品收集。

[0050] 在一些实施方案中，吸收性纸2不会对乳头和/或乳晕造成纸切口。在一些实施方案中，吸收性纸2成形为避免对乳头和/或乳晕造成纸切口。

[0051] 吸收性纸2通过采用金属模具由大的纸料冲压该纸而形成。吸收性纸2大到足以覆盖或部分地覆盖乳头。在一些实施方案中，吸收性纸2大到足以覆盖乳头。因此，吸收性纸的直径或者横跨吸收性纸的任意尺寸的平均尺寸A的长度可为约1.0英寸至约3.0英寸。吸收性纸2的直径可为例如约1.0、约1.1、约1.15、约1.2、约1.25、约1.3、约1.35、约1.4、约1.45、约1.5、约1.55、约1.6、约1.65、约1.7、约1.75、约1.8、约1.85、约1.9、约1.95、约2.0、约2.1、约2.15、约2.2、约2.25、约2.3、约2.35、约2.4、约2.45、约2.5、约2.55、约2.6、约2.65、约2.7、约2.75、约2.8、约2.85、约2.9、约2.95或约3.0英寸。图
1A提供了吸收性纸2(其直径A为1.85英寸)的非限制性实例。在一些实施方案中，吸收性纸2覆盖或部分覆盖乳房的乳晕。在一些实施方案中，吸收性纸2覆盖乳房的乳晕。在一些实施方案中，吸收性纸2部分地覆盖乳房的乳晕。在一些实施方案中，该吸收性纸覆盖乳头，并且不延伸到乳房的乳晕。

[0052] 吸收性纸2的厚度可以变化，以允许最佳的样品收集，并包括厚度为约0.01英寸至约0.1英寸的材料。例如，该吸收性纸2的厚度可为约0.01、约0.02、约0.03、约0.04、约0.05、约0.06、约0.07、约0.08、约0.09或约0.1英寸。图1B提供了0.05英寸厚的吸收性纸2的非限制性实例。人们将会理解，虽然图1B示出了0.05英寸厚的吸收性纸2的侧视图，但是该厚度也可以变化。

[0053] 该L形元件(本文中也可被认定为“狭缝(slit)”)是任选的，并且如果吸收性纸2被放置于压力改变设备中以降低压力并使流体从乳房内部向外流出，则该L形元件是有用的。在一个实施方案中，吸收性纸2的大小设置为适合于改进的吸乳器，并且相应地设置尺寸。本文描述了可以任选地与吸收性纸2一起使用的改进的吸乳器。

[0054] 在图1A中的L形元件4是在冲切已经冲压出该纸之后保留的裁切物(cut out)。在一个非限制性的实例中，当在冲压过程中裁切时，该L形元件为0.063E英寸宽。在其直径或横跨该设备的任意尺寸的平均尺寸的长度为1.85英寸A的吸收性纸2中，从吸收性纸
2的中线到该L形元件4的末端为0.25英寸B。该L形元件4的角度D可为从10度到170度D的任意角度。在一个非限制性的实施方案中，该角度D为75度，如图1A中所示。图1A中所示的内圆6的直径大约为0.75英寸C，并且被设计为使得该L形翼片8当在吸乳器设TM
备(例如，本文中描述的MASCT 设备)中使用时可适当地移动。表示内圆6的虚线符号说明图中的引导线。狭缝4用不完整的三角形示出，并且如所示地成形以形成不完整的圆。
人们将会理解，本文中描述的尺寸可以基于吸收性纸的总尺寸按比例调整。

[0055] 图1A表示吸收性纸2的一个非限制性实例的俯视图。虚线不是切线，而是为了便于制造而呈现的，以对准该L形元件4，使吸收性纸2的中心安放在乳头区域上方，从而使翼片8充分地覆盖该乳头。

[0056] 在另一实施方案中，吸收性纸2由混合纤维素酯制成，并且按照如图1A和1B中所示的形状和尺寸形成。在另一实施方案中，吸收性纸或膜由混合纤维素酯制成，并且按照如图1A和1B中所示的形状和尺寸形成。

[0057] 在一些实施方案中，采用乳房液收集设备来挤压和收集NAF。在一些实施方案中，乳房液收集设备包括与真空泵机构耦接的乳房接合部分或部件，并且可与包含吸收性纸(例如，吸收流体、与蛋白质结合、但不与细胞结合的吸收性纸)的固相样品收集介质流体连接。

[0058] 在一些实施方案中，乳房液收集设备包括吸乳器，可按照设备的使用(参见实施例3)，将该吸乳器施加于乳房(例如，人乳房)以覆盖乳头，并结合以下更详细描述的乳头接触程序来使用。

[0059] 在一个实施方案中，在按摩乳房组织并采用如以下实施例1中描述的MASCTTM设TM备进行抽吸后，在吸收性纸或膜上收集乳头抽吸液。如本文中使用的，“MASCT 设备”指在Quay等的美国专利号6,287,521中描述的设备，该专利以其整体并入本文。在一个非限制性的实例中，用于从患者的乳房器官收集生物样品的样品收集设备可包括乳房接合部件、固相样品收集介质以及真空泵装置；该乳房接合部件由无孔材料构造，且其尺寸和大小设置为至少容纳所述患者的乳房的乳头部分，并与之形成吸力密封；该固相样品收集介质与所述乳房接合部件流体连接，用于接收被挤压出的乳房液的样品；该真空泵装置与所述乳房接合部件气体连接，用于通过所述乳房接合部件产生负压，以促进乳房液的压出；其中所述固相样品收集介质选自：显微镜载玻片、毛细管、收集管、柱、微型柱、孔、板、膜、滤器、树脂、无机基质、珠、微粒层析介质、塑料微粒、胶乳颗粒、涂覆的管、涂覆的模板、涂覆的珠、涂覆的基质或其组合。该样品收集设备可包括用于将所述样品收集罩与所述乳房接合部件可拆卸地耦接的可拆卸耦接构件。在一些情况下，该固相样品收集介质被支撑部件所支撑，该支撑部件被一体地或可拆卸地安装在与所述乳房接合部件流体连接的所述样品收集罩内。
该支撑部件可为圆盘形，并且插入所述乳房接合部件和所述样品收集罩之间。进一步地，该支撑部件可具有上部和下部扣环，并支撑吸收剂或吸附剂材料片。支撑部件支撑体可为固相样品收集模板，包括但不限于：毛细管、涂覆的管、柱、微型柱、板、孔和显微镜载玻片或其组合。支撑部件限定流体保持孔，并包括至少一个气道，以使负压通过该气道到达及离开所述乳房接合部件。该固相样品收集介质可为微粒介质，其包含在可拆卸地安装在所述样品收集罩中的筒内，并在所述筒的第一末端覆盖有多孔阻隔材料的情况下，使所述筒的第一末端与所述乳房接合部件流体连接。

[0060] 在一些实施方案中，乳头接触程序通过将如本文所描述的吸收性纸施加到每个乳头来实施。

[0061] 在施加该设备以产生乳房液期间或之后，用吸收性纸从挤压出的乳房液收集生物样品，该样品可含有以下组分中的一种或多种：全乳房液、全细胞、细胞碎片、细胞膜、选择的液体、乳房液的细胞部分或其它固体部分，以及蛋白质、糖蛋白、肽、核苷酸(包括DNA、RNA等)以及该乳房液的其它类似的生物化学和分子组分。

[0062] 在与NAF接触后，清洗吸收性纸，收集流出物并评估流出物中的细胞数。在一些实施方案中，在样品无细胞的情况下，将患者鉴定为处于乳腺癌的低风险下。在一些实施方案中，在样品包含一个细胞的情况下，将患者鉴定为处于乳腺癌的低风险下，且任选地分析细胞中的生物标志物表达。在一些实施方案中，在样品包含2个或更多个细胞的情况下，将患者鉴定为处于乳腺癌的风险下，且分析细胞中的生物标志物表达。乳腺癌生物标志物

[0063] 乳房导管包含两种类型的上皮细胞，即内管腔细胞和外基底/肌上皮细胞。在一些实施方案中，采用生物标志物表达(例如，通过免疫组织化学染色)来区分管腔型和基底型乳腺癌。在一些实施方案中，采用生物标志物表达(例如，通过免疫组织化学染色)来区分普通类型的增生和非典型增生。

[0064] 肿瘤蛋白p63(或者转化相关蛋白63)是核转录因子的p53家族的成员。肿瘤蛋白p63由TP63基因编码。p63的存在是基底上皮层的特征。在一些实施方案中，乳头抽吸液(NAF)细胞中p63的存在表明乳腺癌为基底样乳腺癌。

[0065] 细胞角蛋白(CK)5和CK14的存在是基底上皮层的特征。在一些实施方案中，乳头抽吸液(NAF)细胞中CK5和CK14的存在表明乳腺癌为基底样乳腺癌。另外，CK5和CK14的存在是祖细胞和肌上皮细胞的特征。在一些实施方案中，乳头抽吸液(NAF)细胞中CK5和CK14的存在表明该细胞为肌上皮细胞或祖细胞。

[0066] CK7和CK18的存在是管腔上皮层的特征。在一些实施方案中，乳头抽吸液(NAF)细胞中CK7和CK18的存在表明乳腺癌为管腔乳腺癌。

[0067] 普通型导管增生表现出具有CK5/14和CK7/18两者的表达的管腔染色模式。在肌上皮的细胞核中观察到残留的p63。在一些实施方案中，CK5、CK14、CK7和CK18的存在表明增生为普通型导管增生。

[0068] 非典型导管增生或原位导管癌表现出分化的腺体免疫表型(CK7/CK18阳性)，但除肌上皮外为CK5/14-阴性。在一些实施方案中，CK7/CK18的存在及CK5/14的缺失表明增生为非典型导管增生。

[0069] 浸润性乳腺病变根据肌上皮细胞(CK5/14和/或p63)的数目的减少或缺失及腺上皮细胞(CK7/18)的存在来鉴定。肌上皮细胞是“收缩性的”——其作用在于强力地挤压出腺体的内容物。在乳房中，肌上皮细胞位于基底层的上方且在导管壁上分泌细胞的顶层的正下方。在疑似乳腺癌的情况下，减少的或应力不足的肌上皮细胞的存在可能是具有意义的，并且可以指示向浸润性的(inﬁltrating)及可能侵袭性的(invasive)状态的过渡。原发性乳腺癌表现出管腔(导管壁)细胞的数目的增加和肌上皮细胞的数目的减少。随着乳腺癌从原位的逐步发展成浸润性的，最后发展成侵袭性的，肌上皮细胞的相对数目减少。
如果发现比管腔细胞的正常数目大，则提示肌上皮细胞的数目在减少，并引起关注。在一些实施方案中，肌上皮细胞的缺失或数目的减少及腺上皮细胞的存在表明病变是侵袭性的。

[0070] 在一些实施方案中，通过免疫组织化学来确定生物标志物表达。在一些实施方案中，免疫组织化学法是直接法。在一些实施方案中，从NAF中分离的细胞与经标记的能与靶抗原结合的抗体接触。任何合适的标记物均可与本文所公开的方法结合使用。在一些实施方案中，该标记物为染料(或染色剂)。在一些实施方案中，针对各种抗体使用不同的染料。在一些实施方案中，对于能与存在于相同细胞类型中的生物标志物结合的抗体使用相同的染料。例如，对于能与存在于管腔乳腺癌细胞中的生物标志物(CK7/18)结合的抗体使用第一染料，而对于能与存在于基底乳腺癌细胞中的生物标志物(CK5/14和p63)结合的抗体使用第二染料。

[0071] 在一些实施方案中，免疫组化方法为间接法。在一些实施方案中，从NAF中分离的细胞与未标记的能与靶抗原结合的第一抗体接触，且被标记的第二抗体与该第一抗体结合。在一些实施方案中，第一抗体与生物标志物(例如，CK5、CK7、CK14、CK18或者p63)结合。在一些实施方案中，辣根过氧化物酶(HRP)第二抗体与结合到CK5/14和p63上的抗体结合。在一些实施方案中，碱性磷酸酶(AP)第二抗体与结合到CK7/18上的抗体结合。在一些实施方案中，基于第一抗体的物种来源，产生可与该第一抗体反应的第二抗体，例如，如果第一抗体为小鼠抗体，则第二抗体将为，例如，兔抗小鼠抗体。在优选的实施方案中，使用偶联的山羊抗小鼠多聚碱性磷酸酶(ALP)和偶联的山羊抗兔多聚辣根过氧化物酶(HRP)作为第二抗体，并与小鼠和兔IgG的重链和轻链反应。

[0072] 在一些实施方案中，色原(例如，3,3'二氨基联苯胺(DAB))与HRP结合并产生显色反应产物。在色原为DAB的情况下，色原反应产物为棕色。当色原为贝久紫(Bajoran Purple)时，色原反应产物为薰衣草紫。

[0073] 在一些实施方案中，色原(例如，固红(FR))与AP结合，并产生显色反应产物。在色原为FR的情况下，色原反应产物为红色或粉红色。在一些实施方案中，从NAF中分离的细胞在与第一抗体接触之前与过氧化物封闭剂接触。在色原为佛瑞吉蓝(Ferangi Blue)的情况下，色原反应产物为明亮的宝蓝色。

[0074] 在一些实施方案中，对细胞进行复染色。在一些实施方案中，采用苏木精、核固红、甲基绿或甲基蓝对细胞进行复染色。

[0075] 将在目前所描述的方法中使用的可与CK5、CK7、CK14、CK18或者p63结合的抗体例如可从以下市售获得：Genetex；Beckman Coulter；Imgenex；Spring Bioscience；BD Biosciences；Raybiotech,Inc.；Biorbyt；Abnova Corp.；Proteintech Group；Fitzgerald Industries,Inc.；Biocare Medical；Santa Cruz Biotechnology,Inc.；和 LifeSpan Biosciences。也可根据常规的抗体技术来制备抗体。数字处理设备

[0076] 在一些实施方案中，本文所述的方法、系统和软件包括数字处理设备，或其应用。在其他实施方案中，该数字处理设备包括执行设备功能的一个或多个硬件中央处理器(CPU)。在其他实施方案中，数字处理设备还包含配置用于执行可执行指令的操作系统。在一些实施方案中，数字处理设备任选地连接计算机网络。在其他实施方案中，数字处理设备任选地连接至因特网，使其接入万维网。在其他实施方案中，数字处理设备任选地连接至云计算基础架构。在其他实施方案中，数字处理设备任选地连接至内联网。在其他实施方案中，数字处理设备任选地连接至数据存储设备。

[0077] 根据本文的描述，合适的数字处理设备举非限制性示例而言包括服务器计算机、台式计算机、膝上型计算机、笔记本计算机、微型笔记本计算机、上网本计算机、上网平板计算机、机顶盒计算机、手持式计算机、因特网设备、移动智能电话、平板计算机、个人数字助理、视频游戏机和车辆等。本领域技术人员将会认识到，许多智能电话适合用于本文所述的系统。本领域技术人员还将认识到，经挑选的具有任选的计算机网络连接性的电视机、视频播放器和数字音乐播放器适合用于本文所述的系统。合适的平板计算机包括本领域技术人员已知的具有册页、平板和可转换配置的那些平板计算机。

[0078] 在一些实施方案中，数字处理设备包括配置用于执行可执行指令的操作系统。该操作系统例如为软件，包括程序和数据，其管理设备的硬件并提供用于执行应用的服务。本领域技术人员将会认识到，举非限制性示例而言，合适的服务器操作系统包括FreeBSD、OpenBSD、 Linux、 Mac OS X和等。本领域技术人员将会认识到，举非限制
性示例而言，合适的个人计算机操作系统包括 Mac
OS 和诸如等UNIX类操作系统。在一些实施方案中，操作
系统由云计算来提供。本领域技术人员还将认识到，举非限制性示例而言，合适的移动智能电话操作系统包括 OS、 Research In
BlackBerry Windows OS、
Windows OS、和

[0079] 在一些实施方案中，该设备包括存储和/或存储器设备。存储和/或存储器设备是用于临时或永久储存数据或程序的一个或多个物理装置。在一些实施方案中，所述设备为易失性存储器，并且需要电力来维持储存的信息。在一些实施方案中，所述设备为非易失性存储器，并且在数字处理设备未被供电时保留储存的信息。在其他实施方案中，非易失性存储器包括闪速存储器。在一些实施方案中，非易失性存储器包括动态随机存取存储器(DRAM)。在一些实施方案中，非易失性存储器包括铁电随机存取存储器(FRAM)。在一些实施方案中，非易失性存储器包括相变随机存取存储器(PRAM)。在其他实施方案中，设备为存储设备，举非限制性示例而言，包括CD-ROM、DVD、闪速存储器设备、磁盘驱动器、磁带驱动器、光盘驱动器和基于云计算的存储等。在其他实施方案中，存储和/或存储器设备为诸如本文所公开的设备的组合。

[0080] 在一些实施方案中，数字处理设备包括显示器，用于向用户发送视觉信息。在一些实施方案中，显示器为阴极射线管(CRT)。在一些实施方案中，显示器为液晶显示器(LCD)。在其他实施方案中，显示器为薄膜晶体管液晶显示器(TFT-LCD)。在一些实施方案中，显示器为有机发光二极管(OLED)显示器。在各其他实施方案中，OLED显示器为无源矩阵OLED(PMOLED)或有源矩阵OLED(AMOLED)显示器。在一些实施方案中，显示器为等离子显示器。在其他实施方案中，显示器为视频投影仪。在其他实施方案中，显示器为诸如本文所公开的设备的组合。

[0081] 在一些实施方案中，数字处理设备包括输入设备，用于从用户接收信息。在一些实施方案中，输入设备为键盘。在一些实施方案中，输入设备为指点设备，举非限制性示例而言，包括鼠标、轨迹球、轨迹板、操纵杆、游戏控制器或触控笔。在一些实施方案中，输入设备为触摸屏或多点触摸屏。在其他实施方案中，输入设备为用于捕捉语音或其他声音输入的麦克风。在其他实施方案中，输入设备为用于捕捉动作或视觉输入的视频摄像机。在其他实施方案中，输入设备为诸如本文所公开的设备的组合。非暂时性计算机可读存储介质

[0082] 在一些实施方案中，本文所公开的方法、系统和软件包括一个或多个计算机可读存储介质，所述计算机可读存储介质编码有程序，该程序包括可以由任选地联网的数字处理设备的操作系统执行的指令。在进一步的实施方案中，计算机可读存储介质为数字处理设备的有形组件。在更进一步的实施方案中，计算机可读存储介质任选地可以从数字处理设备移除。在一些实施方案中，计算机可读存储介质举非限制性示例而言包括CD-ROM、DVD、闪速存储器设备、固态存储器、磁盘驱动器、磁带驱动器、光盘驱动器、云计算系统及服务等。在一些情况下，程序和指令永久地、基本上永久地、半永久地或非暂时性地编码在介质上。计算机程序

[0083] 在一些实施方案中，本文所公开的方法、系统和软件包括至少一个计算机程序，或其应用。计算机程序包括指令序列，可在数字处理设备的CPU中执行，并被编写用于执行指定的任务。根据本文所提供的公开内容，本领域技术人员将会认识到，计算机程序能够以各种版本的各种语言来编写。在一些实施方案中，计算机程序包含一个指令序列。在一些实施方案中，计算机程序包含多个指令序列。在一些实施方案中，从一个位置提供计算机程序。在其它实施方案中，从多个位置提供计算机程序。在各实施方案中，计算机程序包括一个或多个软件模块。在各实施方案中，计算机程序部分地或整体地包括一个或多个网络应用、一个或多个移动应用、一个或多个独立应用、一个或多个网络浏览器插件、扩展、附加组件或扩充组件，或者其组合。网络应用

[0084] 在一些实施方案中，计算机程序包括网络应用。根据本文所提供的公开内容，本领域技术人员将会认识到，在各实施方案中网络应用利用一个或多个软件框架以及一个或多个数据库系统。在一些实施方案中，网络应用创建于诸如 .NET或Rubyon Rails(RoR)等软件框架之上。在一些实施方案中，网络应用利用一个或多个数据库系统，举非限制性示例而言，包括关系型、非关系型、面向对象型、关联型及XML数据库系统。在其他实施方案中，合适的关系型数据库系统举非限制性示例而言包括
TM
SQL Server、mySQL 和等。本领域技术人员还将认识到，在各实施方案中网络应用是以一个或多个版本的一种或多种语言所编写。网络应用能够以一种或多种标记语言、演示定义语言、客户端脚本语言、服务器端编码语言、数据库查询语言或其组合来编写。在一些实施方案中，网络应用是在一定程度上以诸如超文本标记语言(HTML)、扩展超文本标记语言(XHTML)或者可扩展标记语言(XML)等标记语言来编写。在一些实施方案中，网络应用是在一定程度上以诸如级联样式表(CSS)等演示定义语言来编写。在一些实施方案中，网络应用是在一定程度上以诸如异步Javascript和XML(AJAX)、Actionscript、Javascript或者等客户端脚本语言来编写。在一些实施
方案中，网络应用是在一定程度上以诸如动态服务器页面(ASP)、 Perl、
TM TM
Java 、Java服务器页面(JSP)、超文本预处理器(PHP)、Python 、Ruby、Tcl、Smalltalk、或Groovy等服务器端编码语言来编写。在一些实施方案中，网路应用是
在一定程度上以诸如结构化查询语言(SQL)等数据库查询语言来编写。在一些实施方案中，网络应用集成诸如等企业服务器产品。在一些实施方案
中，用于为艺术家提供允许艺术家上传信息和媒体文件的职业发展网络的网络应用包括媒体播放器元素。在各其他实施方案中，媒体播放器元素利用许多合适的多媒体技术中的一种或多种技术，所述多媒体技术举非限制性示例而言包括 HTML5、
TM
Java 和
移动应用

[0085] 在一些实施方案中，计算机程序包括提供给移动数字处理设备的移动应用。在一些实施方案中，在制造移动数字处理设备时向其提供移动应用。在其它实施方案中，经由本文所述的计算机网络将移动应用提供给移动数字处理设备。

[0086] 鉴于本文所提供的公开内容，通过本领域技术人员已知的使用本领域已知硬件、语言和开发环境的技术来创建移动应用。本领域技术人员将会认识到，移动应用是以多种TM语言来编写的。举非限制性示例而言，合适的编程语言包括C、C++、C#、Objective-C、Java 、TM
Javascript、Pascal、Object Pascal、Python 、Ruby、VB.NET、WML以及具有或不具有CSS的XHTML/HTML，或者其组合。

[0087] 合适的移动应用开发环境可从多个来源获得。市售的开发环境举非限制性示例而言包括AirplaySDK、alcheMo、 Celsius、Bedrock、Flash Lite、.NETCompact Framework、Rhomobile和WorkLight Mobile Platform等。其它可免费获得的开发环境举非限制性示例而言包括Lazarus、MobiFlex、MoSync和Phonegap等。此外，移动设备制造商发布软件开发者套件，举非限制性示例而言包括iPhone和iPad (iOS) SDK、TM
Android SDK、 SDK、BREW SDK、 OS SDK、Symbian SDK、webOS SDK和
Mobile SDK。
本领域技术人员将会认识到，多个商业论坛可供发布移动应用，举非限制性示例而言包括 App Store、AndroidTM Market、 App World、针对Palm设备
的App Store、针对webOS的App Catalog、 Marketplace for Mobile、针对
设备的Ovi Store、 Apps和 DSi Shop。
独立应用

[0088] 在一些实施方案中，计算机程序包括独立应用，该独立应用是作为独立的计算机过程运行的程序，而非是对现有过程的附加，例如，不是插件。本领域技术人员将会认识到，独立应用经常是编译的。编译器是将以编程语言编写的源代码变换成诸如汇编语言或机器代码等二进制目标代码的一个或多个计算机程序。举非限制性示例而言，合适的编译编程语言包括C、C++、Objective-C、COBOL、Delphi、Eiffel、JavaTM、Lisp、PythonTM、Visual Basic和VB .NET或者其组合。经常至少部分地执行编译以创建可执行程序。在一些实施方案中，计算机程序包括一个或多个可执行的经编译应用。软件模块

[0089] 在各实施方案中，本文所公开的方法、系统和软件包括软件、服务器和/或数据库模块，或其应用。鉴于本文所提供的公开内容，通过本领域技术人员已知的使用本领域已知机器、软件和语言的技术来创建软件模块。本文所公开的软件模块以多种方式实现。在各实施方案中，软件模块包括一个文件、一段代码、一个编程对象、一个编程结构或者其组合。在其他各实施方案中，软件模块包括多个文件、多段代码、多个编程对象、多个编程结构或者其组合。在各实施方案中，所述一个或多个软件模块举非限制性示例而言包括网络应用、移动应用和独立应用。在一些实施方案中，软件模块处于一个计算机程序或应用之中。在其他实施方案中，软件模块处于不止一个计算机程序或应用之中。在一些实施方案中，软件模块被承载于一个机器上。在其他实施方案中，软件模块被承载于不止一个机器上。在其他实施方案中，软件模块被承载于云计算平台上。在一些实施方案中，软件模块被承载于位于一个位置的一个或多个机器上。在其他实施方案中，软件模块被承载于位于不止一个位置的一个或多个机器上。
数据库

[0090] 在一些实施方案中，本文所公开的方法、系统和软件包括一个或多个数据库，或其应用。鉴于本文所提供的公开内容，本领域技术人员将会认识到，许多数据库适合于宏基因组信息(包括宏基因组谱)、宏转录组信息(包括宏转录组谱)和多重谱的存储和检索。在各实施方案中，合适的数据库举非限制性示例而言包括关系型数据库、非关系型数据库、面向对象型数据库、对象数据库、实体关系模型数据库、关联型数据库以及XML数据库。在一些实施方案中，数据库是基于因特网的。在进一步的实施方案中，数据库是基于网络的。在更进一步的实施方案中，数据库是基于云计算的。在其他实施方案中，数据库基于一个或多个本地存储设备。实施例
实施例1：生物标志物的免疫组织化学分析

[0091] 在吸收性纸上收集NAF样品后，采用任何合适的缓冲的洗液(例如，磷酸盐缓冲盐水)清洗该吸收性纸。将流出物收集在改进的细胞学小瓶中，并进行离心分离。将细胞从流出物中分离，并转移到干净的显微镜载玻片的中心区域，并施加盖玻片。使该载玻片风干，然后例如在无水酒精中进行固定。

[0092] 单克隆抗体CK5、CK14、p63和兔单克隆抗体CK7和CK18采用单一抗体稀释剂进行复用(multiplexed)，并施加到显微镜载玻片上。然后再施加由山羊抗小鼠-HRP和山羊抗兔-AP的混合物组成的无生物素多染(multistain)检测试剂。依次施加DAB和固红色原。采用苏木精对细胞进行复染色。
实施例2：使用ADH5试验对乳头抽吸液的评估

[0093] 在吸收性纸上收集NAF样品后，采用任何合适的缓冲的洗液(例如，磷酸盐缓冲盐水)清洗该吸收性纸。将流出物收集在改进的细胞学小瓶中，并进行离心分离。将细胞从流出物中分离，并转移到干净的显微镜载玻片的中心区域，并施加盖玻片。使该载玻片风干，然后例如在无水酒精中进行固定。预处理

[0094] 使细胞与过氧化物封闭剂(Biocare的Peroxidazed1)接触。

[0095] 接下来，进行热恢复(heat retrieval)预处理。将Diva溶液在Biocare的封闭室(Decloaking Chamber)中预热至95℃保持30分钟。然后，将载玻片放入预热的溶液中并在95℃减压下恢复40分钟。或者，将组织切片蒸45-60分钟，或使用水浴在95℃下加热40分钟。使溶液冷却20分钟，然后在蒸馏水中清洗。

[0096] 施加蛋白质封闭剂—采用Biocare的Background Sniper在室温(RT)下孵育10-15分钟。

[0097] 将载玻片与第一抗体(即，针对CK5、CK14、CK7、CK18和p63的抗体)在室温下孵育30-60分钟。

[0098] 采用Biocare的MACH2Double Stain2将载玻片在室温下孵育30分钟。

[0099] 当使用Biocare的Betazoid DAB时，在室温下孵育5分钟。

[0100] 采用Biocare的Vulcan固红在室温下孵育10-20分钟。在去离子水中冲洗。

[0101] 用去离子水冲洗。与苏木精孵育30-60秒。用去离子水冲洗。施加Tacha的Bluing溶液1分钟。

[0102] 采用光学显微镜对细胞进行可视化。实施例3：乳头抽吸液的评估

[0103] 本试验是涉及三(3)名健康的、未怀孕的、非哺乳的女性受试者的单中心研究。受试者以在诊所出现的顺序而加入。

[0104] 主要试验目的是确定产生导管液(ductal fluid)的30到65岁女性的百分比，如TM在使用MASCT 设备装置时根据蛋白质在硝化纤维素滤器上的存在所确定的。

[0105] 次要目的是在细胞学上评价乳头抽吸液中细胞的存在和类型(如果有的话)。缩写

[0106] 本文中使用的缩写包括，例如，MAF：乳房抽吸液；MASCTTM：乳房抽吸样品细胞学检验；NA：不可获得；ND：未完成；NR：未记录；和NAF：乳头抽吸液。方法：

[0107] 简言之，通过恰好将已称皮重的(tared)硝化纤维素滤器与每个乳头(每个乳房一个)接触，来使用该硝化纤维素滤器收集导管液。然后，采用具有已称皮重的样品收集单TM元的MASCT 设备来抽吸出乳房液样品。用以下所述的染色技术来检测两组硝化纤维素滤器的蛋白质。将通过清洗含有乳头抽吸液样品的滤器而收集的细胞进行细胞学检查。
评估：

[0108] 该试验的主要终点是当使用MASCTTM设备时，如根据蛋白质在硝化纤维素滤器上的存在所确定的，完成产生导管液的试验的女性的百分比。

[0109] 次要终点是如通过细胞学评价所确定的，细胞在乳头抽吸液中的存在。结果：

[0110] 对于使用从这三名受试者获得的滤器完成的蛋白质检测，在乳头清洗滤器样品上TM都没有显示出蛋白质的存在。来自MASCT 设备的所有滤器显示：在设备滤器上检测到蛋白质。
整体研究设计和计划

[0111] MASCTTM设备之前已经通过510(k)监管途径(regulatory pathway)在市场上被TM禁止。设计该临床研究，以测试对MASCT 设备的改良，进行该改良以提高效力和可用性以及检测来自女性(包括那些之前被认为是非分泌者的女性)的乳头抽吸液中的蛋白质的能力。乳头抽吸液在帮助乳房健康管理方面的临床使用在过去50年间受到收集和测量流体存在的现有方法的限制。实际上，采用当前技术，所有女性中高达50％是非分泌者，也就是说，她们被判定为不产生NAF。

[0112] 这是涉及高达50名健康的、未怀孕的、非哺乳的女性受试者入选的单中心研究。受试者以在诊所出现的顺序而加入。

[0113] 在进入该研究之前，研究者或指定的助手向每名受试者解释该研究的性质、其目的、程序、预期持续时间、可用的备选方案和参与研究涉及的利益和风险。每名受试者被给予同意书文件，并且有机会提问；并且被告知她有权在任何时间不受妨碍地退出该研究。在这个说明之后，并且在进行任何研究特有的程序之前，受试者自愿地签署知情同意声明并写上日期。在参与该研究之前，每名受试者收到已签名并写上日期的书面知情同意表格和其它任何书面资料的副本。入选/排除标准检查和妊娠评估

[0114] 必要时，在进一步参与该研究之前，对每名患者进行尿妊娠试验。阳性妊娠试验会将该受试者从参与研究中排除。检查所有的入选和排除标准，以确保受试者的合格性。在合格性确立之后，分配唯一的受试者识别号码。人口统计数据和病史

[0115] 从每名受试者获得下列人口统计数据和病史：年龄和种族来源；家族病史，特别是母亲和姐妹；个人的病史，包括乳腺癌、良性乳房病状和生殖系统疾病(例如，卵巢或子宫内膜肿瘤)；伴随的药物治疗；初潮年龄；首次妊娠年龄；首次活产年龄；绝经年龄；以及身高和体重。乳房准备

[0116] 受试者取斜卧位。用酒精清洁两个乳房的乳头和乳晕周围区域，以除去多余的皮肤油脂、化妆品或上皮碎屑。在酒精蒸发后，将温暖潮湿的敷布放在两个乳房上10到15分钟。将敷布除去，受试者取坐立位。用酒精擦拭乳头区域，以除去任何存在的导管塞(ductal plug)。乳头接触程序

[0117] 所有操作滤器材料的人都要带手套和防护面罩，以使滤器污染的风险最小化。设备清洁程序

[0118] 在各受试者使用之前，用抗微生物溶液如彻底清洁MASCTTM设备。该设备不暴露于极端温度下或高压处理。定期检查设备的设备材料劣化或是否不能产生负压。如果观察到任一情况，则替换该单元。
TM
MASCT 和乳头接触程序
a.将一个滤片组件标记为“左”，并将第二滤片组件标记为“右”。
b.称重并记录每个组件的重量，注意不要用裸手接触该滤器，根据需要使用镊子。
c.将一个组件插入吸乳器设备中。
d.指示受试者进行手动乳房自我按摩，从胸壁开始并逐渐移动到乳头-乳晕联合部，持续大约1分钟。
e.随后，受试者用双手挤压她的乳房，同时由医师或护士开动吸乳器设备持续60至90秒。
TM
f.除去滤片组件，并对用于流体收集的MASCT 滤片进行称重。
g.利用抗微生物溶液如擦拭样品收集漏斗的表面，并清洗收集小瓶。
h.对第二个乳房重复步骤c、d、e、f和g。
i.将该滤片储存在冰箱中，以用于后续的蛋白质评价和/或细胞学评价。应采用受试者ID号码和收集日期来适当地标记每个滤片组件的包装。

[0119] 可以对这个收集程序进行改变，但不能超过在MASCTTM设备批准的说明书中所允许的按摩/收集程序的次数。受试者观察

[0120] 受试者留在诊所，并在抽吸之后观察设备不良反应30分钟。如果当时没有正在进展或未消除的不良反应，可让受试者离开。根据研究者的判断，在此观察期结束时具有任何不良反应的受试者将留在研究场所，直至该反应消除或者已经作出随访安排。研究的进行

[0121] 根据本文中描述的方案对该研究中的所有受试者进行研究。

[0122] 有三(3)名受试者入选，下表中提供了患者的处置情况。

[0123] 下表包括关于人口统计数据的各患者的数据列表。没有死亡或严重的不良事件。讨论和整体结论

[0124] 在对该研究中使用的各个滤器进行测试后获得以下结果。乳头清洗结果

[0125] 对照乳头清洗滤器样品都没有显示存在蛋白质。吸乳器结果
受试者乳房蛋白质浓度
受试者#1 左乳房 30ng蛋白质
受试者#1 右乳房 868pg蛋白质
受试者#2 左乳房 580pg蛋白质
受试者#2 右乳房 71pg蛋白质
受试者#3 左乳房 7.1ng蛋白质
受试者#3 右乳房 17.6ng蛋白质

[0126] 基于这些结果，确定MASCTTM设备获得了乳头抽吸液，如由蛋白质的存在所证明的。死亡或严重的不良事件

[0127] 没有死亡或严重的不良事件。后续数据

[0128] 在31位年龄为18至65岁的女性的研究中，利用本发明所公开的方法分析了蛋白质，并在所有31位女性中检测到蛋白质(一位女性只在一个乳房中检测到蛋白质)，临床效用为97％。当可以进行癌症预防措施时，本发明的方法相对于现有技术的改善使得该试验对鉴定具有早期、癌前变化的女性是有用的。功效评价总结

[0129] 如在使用MASCTTM设备时获得的所有硝化纤维素滤器上蛋白质的存在所确定的，达到了该研究的主要目标。完成了在细胞学上评价乳头抽吸液的细胞的存在和类型的次要目标。成功地分析了所有样品的细胞物质。

[0130] 尽管本文中已经示出并描述了优选的实施方案，但对本领域技术人员而言显而易见的是，这些实施方案仅仅是以示例的方式提供的。本领域技术人员在不偏离实施方案的情况下，现将想到多种变化、改变和替代。应当理解的是，可采用本文中描述的实施方案的各种替代方案。目的在于用以下权利要求限定实施方案的范围，从而涵盖在这些权利要求的范围内的方法和结构及其等同物。

标题	发布/更新时间	阅读量
一种乳腺癌的检测方法	2020-05-13	855
一种治疗乳腺癌的中药	2020-05-13	408
一种乳腺癌防治药物	2020-05-13	558
用于检测乳腺癌的系统	2020-05-13	588
预测乳腺癌复发	2020-05-12	131
一种抗乳腺癌药物	2020-05-12	603
乳腺癌标志物	2020-05-11	90
乳腺癌标志物	2020-05-11	262
乳腺癌预后	2020-05-11	554
乳腺癌标志物	2020-05-11	552

乳腺癌检测方法

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