发明背景

本申请要求2006年10月25日提交的美国临时专利申请第 60/862,907号和2007年6月5日提交的美国专利申请第11/758,660 号的优先权，本文引入其完整公开内容作为参考。

发明领域

本发明一般地涉及杂草控制领域。更具体地说，本发明涉及与 耐受一种或多种除草剂的转基因农作物相组合，在发芽前和发芽后 使用除草剂用于控制杂草的方法。

相关现有技术的说明

在农作物损失方面和控制杂草的费用方面，杂草每年花费农民 数十亿美元。杂草也作为农作物病害和害虫的宿主。在农业生产环 境中杂草导致的损失包括农作物产量降低、农作物品质降低、灌溉 费用增加、收获费用增加、土地价值减少、牲畜伤害和由杂草携带 的昆虫和病害导致的农作物损伤。导致的损失可能是重大的。例如， 据估计，1972年至1976年之间，由于杂草，玉米产量减少约10％ (Chandler，1981)。

过去化学除草剂提供了有效的杂草控制方法。除草剂一般可以 在发芽前和/或发芽后应用。发芽前除草剂在农作物从土壤中发芽之 前应用于田地。这样的施用典型地在种植农作物之前或种植农作物 之后不久向土壤应用。这样的施用可以在农作物发芽之前杀死在田 地中生长的杂草，也可以预防或减少土壤中存在的杂草种子的发芽。 发芽后除草剂典型地用来在田地中的农作物发芽之后杀死杂草。这 样的施用可以杀死田地中的杂草，并预防或减少将来的杂草种子的 产生和发芽。

一种杂草控制策略是在播种前向田地施用如麦草畏的除草剂。 但是，在向田地施用除草剂之后，农民必须等待至少几周，之后才 向田地播种农作物种子，使得除草剂已经杀死了大多数杂草，并已 经降解而不会损伤播种的农作物。例如，植物对麦草畏特别敏感， 已推荐(例如)在种植前30天施用如BanvelTM、ClarityTM或SterlingTM 的麦草畏制剂来控制杂草。

另一种已经成功地用于控制杂草的方法是将除草剂处理和耐受 除草剂的农作物结合起来。以这种方式，可以在农作物生长之前和 过程中施用通常损伤农作物的除草剂，而不会导致损伤。因此，可 以有效地控制杂草，并且种植者可以获得新的杂草控制选项。

近年来，可以获得具有提供对一种或多种具有一种作用模式的 除草剂耐受性的性状的转基因农作物，这简化了种植者的杂草控制。 例如，已经开发了耐受2，4-二氯苯氧基乙酸(Streber和Willmitzer， 1989)、溴苯睛(Stalker等人，1988)、草甘膦(Comai等人，1985) 和膦丝菌素(phosphinothricin)(De Block等人，1987)的农作物。 但是，这种策略增加了在特定的种植系统中选择和扩散抗特定除草 剂的杂草生物型的可能性。因此，本领域需要发明一种种植系统， 该种植系统使用提供对一种或多种除草剂的耐受性的转基因植物， 以控制杂草，即控制抗目前的除草剂的杂草，控制难控制的杂草 (tough weeds)，控制自生植物，和使抗除草剂杂草将来的发育最 小化。

本领域中也已知，使用某些类型的除草剂，发展抗性杂草的风 险较高，而使用某些其它类型则这种风险较低。对于以下讨论，基 于HRAC或WSSA分类，根据其作用方式对除草剂进行分类(表2)。 例如，认为使用属于如乙酰乳酸合酶(ALS)抑制剂(类别2或B) 和乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)抑制剂(类别1或A)的类别的除 草剂，发展抗性杂草的风险较高。认为使用属于如PS II抑制剂(类 别5或C1)、微管组装抑制剂(类别3或K1)和脂质合成抑制剂 (类别或N)的类别的除草剂，发展抗性杂草的风险较低。认为使 用属于如合成的植物生长素(类别4或O)、甘氨酸(类别9或G) 和谷氨酰胺合成酶抑制剂(类别10或H)的类别的除草剂，发展抗 性杂草的风险更低(Légère等人，2006)。因此，需要开发利用耐受 低风险除草剂的农作物及其附随的除草剂处理使抗除草剂杂草群体 最小化的种植系统。

麦草畏是通常称为“植物生长素样”除草剂或“合成的植物生长 素”的除草剂类中的一员。麦草畏已用作双子叶植物的发芽前除草剂 (例如，在种植前14-30天)，和用作玉米、高粱、小粒谷类作物、 牧草、干草、牧场、甘蔗、芦笋、草皮和草籽作物的发芽前和/或发 芽后除草剂，以有效控制一年生和多年生阔叶草和几种禾本科杂草 (Crop Protection Chemicals Reference，1995)。遗憾的是，当麦草畏 与它们接触时，麦草畏能够损伤多种商业作物，包括豆类、大豆、 棉花、豌豆、马铃薯、向日葵、番茄、烟草和果树、观赏植物和树， 及其它阔叶植物。大豆和棉花对麦草畏尤其敏感。因此，麦草畏的 施用一般必须在种植敏感性植物前数周进行，以确保在农作物长出 之前从农作物环境中充分地清除残余的麦草畏。

最近，从嗜麦芽假单胞杆菌(Pseudomonas maltophilia)(美国 专利申请第20030115626、20030135879号，美国专利7,022,896)中 分离出了编码多成分麦草畏脱甲基酶(包括单加氧酶(DMO))的 序列，该酶参与了除草剂麦草畏的除草剂形式(3，6-二氯-邻-茴香酸； 例如以BanvelTM的商品名销售的一种制剂)向无毒性的3，6-二氯水 杨酸的转化(Wang等人，1997)。本发明人报道了该序列向烟草和 拟南芥(Arabidopsis)中的转化。被转化的植物组织经卡那霉素选 择，并再生为植物。但是，在未成熟组织或幼苗或在其它植物中， 没有证明或显示除草剂耐受性。也没有描述发芽前除草剂的施用。

美国专利6,376,754描述了具有对至少两种除草剂的耐受性的植 物，如大豆植物。这些除草剂包括草甘膦、草丁膦和磺酰脲(即， 乙酰乳酸合酶(ALS)抑制剂)除草剂。美国专利6,586,367描述了 控制杂草的方法和具有草甘膦或草丁膦耐受性的植物，该植物可以 用草甘膦或草丁膦处理，并另外用一定量的选自莠去净(atrazine)、 麦草畏或其它选择的除草剂的一种或多种除草剂处理。但是，未描 述包含给予麦草畏耐受性的遗传性状的植物和种植系统。

WO2005/107437公开了将第一除草剂耐受性基因(即，2，4-D 耐受性基因)与第二除草剂耐受性基因(即，草甘膦耐受性基因或 其它除草剂耐受性基因)结合。它没有公开将草甘膦耐受性基因与 麦草畏耐受性基因和2，4-D耐受性基因结合。另外，它没有公开本发 明的用于控制杂草、抗除草剂的杂草、难于控制的杂草、抗除草剂 的自生农作物，和使杂草将来抗除草剂的潜力最小化的种植系统。 它也没有公开通过轮种抗除草剂的农作物使除草剂抗性杂草将来的 发育最小化的方法，和其相应的除草剂的应用。

发明概述

一方面，本发明提供了一种控制农作物生长环境中的杂草生长 的种植系统，包括：a)在农作物生长环境中种植农作物种子，该种 子发育为具有对植物生长素样除草剂的耐受性的农作物植物；和b) 向农作物生长环境中应用至少第一除草剂处理，以控制杂草生长， 其中，该除草剂处理选自表3列出的第一、第二、第三、第四和第 五除草剂处理，并且，其中，该处理包括可有效控制杂草生长而不 明显损伤农作物种子或农作物植物的量的除草剂。在具体的实施方 式中，该方法可以包括施用至少两种、至少三种、至少四种和/或每 种所述除草剂处理。

在一种实施方式中，与本发明的系统一起使用的植物包含给予 对草甘膦或2，4-D的除草剂耐受性的转基因植物。给予对草甘膦的除 草剂耐受性的转基因的一个例子是编码选自抗草甘膦的5-烯醇丙酮 酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)、草甘膦氧化还原酶(GOX)、草 甘膦-N-乙酰基转移酶(GAT)和草甘膦脱羧酶的蛋白质的转基因。 在该系统中，农作物植物可以包含对植物生长素样除草剂的耐受性， 包含编码DMO和/或AAD-1的转基因。在某些实施方式中，GAT蛋 白质是GAT4601(SEQ ID NO：2)，且可以由包含SEQ ID NO：1的核 酸序列的转基因编码。在一种特定的实施方式中，通过使用SCP1启 动子实现GAT蛋白质的表达。

在特定的实施方式中，限定本发明的系统包括在发芽后阶段的 后期应用第三除草剂处理的步骤，该处理包含除草有效量的选自植 物生长素样除草剂、禾本科除草剂(graminicide)、发芽后选择性除 草剂及其组合的除草剂。在更进一步的实施方式中，本发明的系统 包括在收获前阶段应用第四除草剂处理的步骤，该处理包含除草有 效量的选自草甘膦、植物生长素样除草剂、发芽后选择性除草剂、 百草枯及其组合的除草剂。在另外一种实施方式中，系统包括在第 四处理后从农作物植物收获种子的步骤。系统也可以包括在收获后 阶段应用第五除草剂处理的步骤，该处理包含除草有效量的选自草 甘膦、植物生长素样除草剂、百草枯、发芽前选择性残留除草剂及 其组合的除草剂。

植物生长素样除草剂可以选自麦草畏、2，4-D及其组合。在一种 实施方式中，农作物植物是双子叶植物，其例子包括棉花和大豆。 系统尤其可包括施用一定量的(对于各自的除草剂)表4和/或5所 列的除草剂。系统也可以进一步包括在发芽后阶段的后期应用第三 除草剂处理的步骤，该处理包含除草有效量的选自草甘膦、植物生 长素样除草剂、禾本科除草剂、发芽后选择性除草剂及其组合的除 草剂。系统可以进一步包括在收获前阶段应用第四除草剂处理的步 骤，该处理包含除草有效量的选自草甘膦、植物生长素样除草剂、 发芽后选择性除草剂、百草枯及其组合的除草剂。本发明的系统也 可以包括在第四处理后从农作物植物收获种子的步骤。

在本发明的一种实施方式中，除草剂选自草甘膦、2，4-D及其组 合。在一种本发明的种植系统中，除草剂处理可以控制选自以下的 抗除草剂杂草的生长：大穗看麦娘(Alopecurus myosuroides)、野燕 麦(Avena fatua)、不实野燕麦(Avena sterilis)、法国野燕麦(Avena sterilis ludoviciana)、车前状臂形草(Brachiaria plantaginea)、双雄雀麦(Bromus diandrus)、硬雀麦(Bromus rigidus)、Cynosurus echinatus、升马唐 (Digitaria ciliaris)、止血马唐(Digitaria ischaemum)、马唐(Digitaria sanguinalis)、芒稷(Echinochloa colona)、稗(Echinochloa crus-galli)、 稻稗(Echinochloa oryzicola)、水稗(Echinochloa phyllopogon)、蟋 蟀草(Eleusine indica)、Eriochloa punctata、Hordeum glaucum、墙大 麦(Hordeum leporinum)、田间毛鸭嘴(Ischaemum rugosum)、千金 子(Leptochloa chinensis)、多花黑麦草(Lolium multiflorum)、黑麦草 (Lolium perenne)、欧毒麦(Lolium persicum)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、小虉草(Phalaris minor)、奇虉草(Phalaris paradoxa)、 筒轴茅(Rottboellia exaltata)、大狗尾草(Setaria faberi)、狗尾草(Setaria viridis)、Setaria viridis var.robusta-alba schreiber、Setaria viridis var. robusta-purpurea、Snowdenia polystachea、石茅(Sorghum halepense)、 苏丹草(Sorghum sudanese)、泽泻(Alisma plantago-aquatica)、北美 苋(Amaranthus blitoides)、绿穗苋(Amaranthus hybridus)、凹头苋 (Amaranthus lividus)、长芒苋(Amaranthus palmeri)、鲍威尔苋 (Amaranthus powellii)、野生苋(Amaranthus quitensis)、反枝苋 (Amaranthus retroflexus)、野苋(Amaranthus rudis)、高水麻(Amaranthus tuberculatus)、豚草(Ambrosia artemisiifolia)、三裂叶豚草(Ambrosia trifida)、耳基水苋菜(Ammania auriculata)、紫水苋菜(Ammania coccinea)、臭春黄菊(Anthemis cotula)、阿披拉草(Apera spica-venti)、 圆叶虎耳(Bacopa rotundifolia)、三叶鬼针草(Bidens pilosa)、Bidens subalternans、野芥(Brassica tournefortii)、旱雀麦(Bromus tectorum)、 小果亚麻荠(Camelina microcarpa)、藜(Chenopodium album)、茼蒿 (Chrysanthemum coronarium)、香丝草(Conyza bonariensis)、小蓬 草(Conyza canadensis)、野地菟丝子(Cuscuta campestris)、异型莎 草(Cyperus difformis)、Damasonium minus、播娘蒿(Descurainia sophia)、 细叶二行芥(Diplotaxis tenuifolia)、车前叶蓝蓟(Echium plantagineum)、 长柄沟繁缕(Elatine triandra var.pedicellata)、白苞猩猩草(Euphorbia heterophylla)、卷茎蓼(Fallopia convolvulus)、水虱草(Fimbristylis miliacea)、黄鼬瓣花(Galeopsis tetrahit)、猪殃殃(Galium spurium)、 向日葵(Helianthus annuus)、假苍耳(Iva xanthifolia)、Ixophorus unisetus、 地肤(Kochia scoparia)、锯齿莴苣(Lactuca serriola)、黄花蔺 (Limnocharis flava)、直立石龙尾(Limnophila erecta)、石龙尾 (Limnophila sessiliflora)、美洲母草(Lindernia dubia)、Lindernia dubia var.major、狭叶母草(Lindernia micrantha)、陌上菜(Lindernia procumbens)、冰叶日中花(Mesembryanthemum crystallinum)、雨久 花(Monochoria korsakowii)、鸭舌草(Monochoria vaginalis)、球果 芥(Neslia paniculata)、虞美人(Papaver rhoeas)、银胶菊(Parthenium hysterophorus)、Pentzia suffruticosa、小虉草(Phalaris minor)、野萝 卜(Raphanus raphanistrum)、萝卜(Raphanus sativus)、皱果荠(Rapistrum rugosum)、印度水猪母乳(Rotala indica var.uliginosa)、冠果草(Sagittaria guyanensis)、蒙特登慈姑(Sagittaria montevidensis)、矮慈姑(Sagittaria pygmaea)、俄罗斯蓟(Salsola iberica)、Scirpus juncoides var.ohwianus、 北水毛花(Scirpus mucronatus)、金色狗尾草(Setaria lutescens)、刺 黄花稔(Sida spinosa)、野欧白芥(Sinapis arvensis)、戟叶抪娘蒿 (Sisymbrium orientale)、Sisymbrium thellungii、东方龙葵(Solanum ptycanthum)、断续菊(Sonchus asper)、苦苣菜(Sonchus oleraceus)、 高粱(Sorghum bicolor)、繁缕(Stellaria media)、遏蓝菜(Thlaspi arvense)、 欧洲苍耳(Xanthium strumarium)、Arctotheca calendula、苏门白酒草 (Conyza sumatrensis)、野茼蒿(Crassocephalum crepidioides)、Cuphea carthagenenis、粘柳叶菜(Epilobium adenocaulon)、费城飞蓬(Erigeron philadelphicus)、紫萍(Landoltia punctata)、北美独行菜(Lepidium virginicum)、雨久花(Monochoria korsakowii)、早熟禾(Poa annua)、 光果龙葵(Solanum americanum)、龙葵(Solanum nigrum)、Vulpia bromoides、黄鹌菜(Youngia japonica)、黑藻(Hydrilla verticillata)、 长叶车前(Plantago lanceolata)、飞廉(Carduus nutans)、Carduus pycnocephalus、黄矢车菊(Centaurea solstitialis)、丛路蓟(Cirsium arvense)、竹节花(Commelina diffusa)、田旋花(Convolvulus arvensis)、 野胡萝卜(Daucus carota)、止血马唐(Digitaria ischaemum)、孔雀 稗(Echinochloa crus-pavonis)、水虱草(Fimbristylis miliacea)、黄鼬 瓣花(Galeopsis tetrahit)、猪殃殃(Galium spurium)、直立石龙尾 (Limnophila erecta)、Matricaria perforate、虞美人(Papaver rhoeas)、 毛茛(Ranunculus acris)、Soliva sessilis、尖瓣花(Sphenoclea zeylanica)、 繁缕(Stellaria media)、针茅草(Nassella trichotoma)、Stipa neesiana、 匍茎剪股颖(Agrostis stolonifera)、扁蓄(Polygonum aviculare)、日 本看麦娘(Alopecurus japonicus)、菵草(Beckmannia syzigachne)、旱 雀麦(Bromus tectorum)、Chloris inflate、Echinochloa erecta、马齿苋 (Portulaca oleracea)和欧洲千里光(Senecio vulgaris)。种植系统可 进一步包括以下步骤：确认农作物生长区域中的难控制的杂草，并 应用除草剂处理，以有效控制难控制的杂草，其中，难控制的杂草 选自苘麻(Abutilon theophrasti)、苋属(Amaranthus sp.)、长芒苋 (Amaranthus palmeri)、豚草(Ambrosia artimisiifolia)、三裂叶豚草 (Ambrosia trifida)、藜(Chenopodium album)、田旋花(Convolvulus arvensis)、小蓬草(Conyza canadensis)、鸭跖草属(Commelina sp.)、 饭包草(Commelina benghalensis)、甘薯属(Ipomoea sp.)、地麸属(Kochia sp.)、荞麦蔓(Polygonum convolvulus)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、 刺黄花稔(Sida spinosa)和东方龙葵(Solanum ptycanthum)。在一种 实施方式中，农作物种子是大豆或棉花植物的种子。

另一方面，本发明提供了本文所述的种植系统，其进一步包括： a)确认在农作物生长区域内的耐受至少第一除草剂处理的抗除草剂 杂草；和b)应用有效控制抗除草剂杂草的量的植物生长素样除草剂 和/或草甘膦。

在另外一方面，本发明提供了使农作物生长环境中的抗除草剂 杂草的发育最小化的种植系统，包括：a)在田地中种植耐受草甘膦 和植物生长素样除草剂的农作物植物；b)向农作物生长环境中应用 包含草甘膦和/或植物生长素样除草剂的至少第一除草剂处理，以控 制杂草；d)确认田地中长有抗草甘膦或植物生长素样除草剂的杂草 的位置；和e)应用一定量的草甘膦和/或植物生长素样除草剂，以有 效控制抗草甘膦或植物生长素样除草剂的杂草。植物可以包含给予 对草甘膦的除草剂耐受性的转基因。给予对草甘膦的除草剂耐受性 的转基因可以编码选自抗草甘膦的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶 (EPSPS)、草甘膦氧化还原酶(GOX)、草甘膦-N-乙酰基转移酶 (GAT)和草甘膦脱羧酶的蛋白质。农作物植物可以包含编码DMO 的转基因。在一种具体的实施方式中，GAT蛋白质是GAT4601(SEQ ID NO：2)，或由包含SEQ ID NO：1的转基因编码。

在另外一方面，本发明提供了使抗除草剂杂草的发育最小化的 方法，包括：用随后的生长季的第二种植系统接替第一生长季的第 一种植系统轮种，其中，第一和第二种植系统包含如权利要求1所 述的种植系统。在本方法中，第一种植系统中的农作物植物可以具 有至少一种与第二种植系统中的农作物植物不同的除草剂耐受性。 在一种实施方式中，第一种植系统中的农作物植物和第二种植系统 中的农作物植物包含如表7列出的除草剂耐受性。在另一种实施方 式中，第一和第二种植系统中的农作物植物耐受至少一种选自草甘 膦、草丁膦、麦草畏、2，4-D及其组合的除草剂。在特定的实施方式 中，农作物植物选自玉米、棉花和大豆。第一种植系统中的农作物 植物和第二种植系统中的农作物植物可以是相同或不同的种类。

发明详述

以下是本发明的详细描述，以帮助本领域的技术人员实施本发 明。本领域的技术人员可以在不背离本发明的精神和范围的情况下， 对本文所述的实施方式进行修改和改变。

一方面，本发明涉及种植农作物植物的方法，包括采用一种或 多种除草剂控制一种或多种杂草种类的生长。本发明提供了极好的 杂草控制选项，包括减少和/或预防杂草的除草剂耐受性(表1)。

在一种实施方式中，在农作物种植之前或种植时或发芽之前或 这些时间的组合，向农作物生长环境应用有效量的第一除草处理(例 如，以控制杂草)。表2给出了根据作用方式分类的示例性的除草 剂。根据农作物显示的耐受性和田地中的具体杂草种类的存在，用 于第二农作物的第一处理的一种或多种除草剂可以选自属于由美国 杂草科学协会(Weed Science Society of America)(WSSA)认可的 类别的除草剂。

在某些实施方式中，用于农作物的第一处理的一种或多种除草 剂选自以下除草剂：

a)EPSP合成抑制剂(类别9)，包括草甘膦。草甘膦除草剂的 示例性的施用量、其商品名和供应商如表4(对于大豆)和表5(对 于棉花)所示。

b)谷氨酰胺合成酶(GS)抑制剂(类别10)，包括草丁膦。对 于大豆，草丁膦(LibertyTM，Bayer CropScience)的施用量可以是每 季28-34oz/A或最多0.809lbs ai/A。对于棉花，草丁膦(Libert，Bayer CropScience)的施用量是，例如，28-34oz/A。

c)合成的植物生长素或植物生长素样除草剂(类别4)，包括 麦草畏和2，4-D。这些除草剂的施用量、其商品名和供应商如表4(对 于大豆)和表5(对于棉花)所示。

发芽前农作物选择性残余除草剂可选自：

d)乙酰苯胺(AA；类别15)是目前认为通过抑制极长链脂肪 酸的合成而控制杂草的一类选择性除草剂。用于大豆和棉花的选择 性AA的例子、施用量、商品名和供应商分别如表4和表5所示。 也可以使用包含乙草胺(acetochlor)(例如，Monsanto； EC，Dow)的制剂。

e)乙酰乳酸合酶抑制剂(ALS；类别2)是通过抑制支链氨基 酸合成而控制杂草的一类选择性除草剂。用于大豆和棉花的ALS的 例子、施用量、商品名和供应商分别如表4和表5所示。

f)二硝基苯胺(DiNA；类别3)是通过结合微管蛋白从而导致 细胞中微管损失而控制杂草的一类选择性除草剂。用于大豆和棉花 的选择性DiNA除草剂的例子、施用量、商品名和供应商分别如表4 和表5所示。

g)原卟啉原氧化酶(PPG-氧化酶；类别14)抑制剂(PPO)是 通过抑制叶绿体和线粒体中的PPG-氧化酶从而阻止叶绿素和血红素 的合成并导致产生单线态氧的原卟啉IX(protophorphyrin IX)的过 量生成、最终导致细胞膜破坏而控制杂草的一类选择性除草剂。用 于大豆和棉花的PPO除草剂的例子分别如表4和表5所示，包括施 用量、商品名和供应商。

可以联合麦草畏对棉花使用的除草剂的非限制性的例子包括： 草甘膦、二甲戊乐灵(pendimethalin)(例如，PROWL、PENDIMAX)、 敌草隆(Diuron)、2，4-D、唑酮草酯(carfentrazone-ethyl)、伏草 隆(fluometuron)、MSMA(甲基胂酸单钠和盐)、扑草净(prometryn)、 嘧草硫醚(pyrithiobac-sodium)、异丙甲草胺(metolachlor)、乙草 胺、三氟啶磺隆(trifloxysulfuron)、氟磺胺草醚(fomesafen)、丙 炔氟草胺(flumioxazin)和稀禾定(sethoxydim)(例如，POAST)。 可以适当地在发芽前或发芽后(“从上方”)向农作物植物应用除草 剂。因此，可与麦草畏一起对DMO棉花应用的优选的发芽前除草剂 (即，显示麦草畏耐受性的包含麦草畏单加氧酶转基因的棉花)可 以包括草甘膦、二甲戊乐灵、敌草隆、唑酮草酯、伏草隆、扑草净、 丙炔氟草胺和氟磺胺草醚等。与麦草畏一起对DMO棉花应用的优选 的发芽后除草剂可以包括草甘膦、三氟啶磺隆、异丙甲草胺、乙草 胺、氟磺胺草醚、嘧草硫醚和稀禾定等。

与麦草畏一起对玉米应用的除草剂的非限制性的例子如表6所 示。

可以与麦草畏联合对大豆使用的除草剂的非限制性的例子包 括：草甘膦、2，4-D、氯嘧磺隆(chlorimuron-ethyl)、烯草酮(clethodim)、 精吡氟禾草灵(fluazifop P-butyl)、丙炔氟草胺(例如，VALOR)、 氟磺胺草醚(例如，FLEXSTAR、REFLEX)、咪唑乙烟酸(imazethapyr) (例如，LIGHTNING)、嗪草酮(metribuzin)(例如，SENCOR) 和二甲戊乐灵。可以采用与麦草畏的预混合物和罐混合物，以及单 独施用麦草畏和另一种活性成分。预混合除草剂的非限制性实例包 括麦草畏和莠去净的组合(例如，MARKSMAN)、麦草畏和氟吡草 腙(diflufenzopyr)的组合(例如，DISTINCT)与麦草畏和氟嘧磺 隆(primisulfuron)的组合(例如，NORTHSTAR)。

在某些实施方式中，用于农作物的第一处理的一种或多种除草 剂可以选自如EPSP合成抑制剂、GS抑制剂和植物生长素样除草剂 的至少一种低风险的除草剂。在特定的实施方式中，根据农作物显 示的耐受性和农作物中存在的杂草种类，除草剂可以是草甘膦、草 丁膦、麦草畏或2，4-D。另外，可以使用发芽前除草剂和百草枯。如 果使用一种以上的除草剂，可以相继或作为混合物应用它们。

一旦农作物的种子已经发芽，就可以在发芽后阶段的早期向农 作物的农作物生长环境应用除草有效量的第二处理。根据农作物显 示的耐受性的类型和农作物中存在的杂草种类，用于第二除草剂处 理的一种或多种除草剂可以选自属于由美国杂草科学协会(WSSA) 认可的类别的除草剂(例如，表2)。优选地，用于农作物的第二处 理的一种或多种除草剂可以选自如EPSP合成抑制剂、GS抑制剂和 植物生长素样除草剂和禾本科除草剂或农作物选择性发芽后除草剂 的至少一种低风险的除草剂。这些除草剂的例子、施用量、商品名 和供应商如表4(对于大豆)和表5(对于棉花)所示。在某些实施 方式中，用于第二除草剂处理的一种或多种除草剂可以选自草甘膦、 草丁膦、麦草畏、2，4-D和禾本科除草剂或农作物选择性发芽后除草 剂。在特定的实施方式中，根据农作物显示的耐受性和农作物中存 在的杂草种类，一种或多种除草剂可以选自草甘膦、草丁膦、麦草 畏或2，4-D。如果使用一种以上的除草剂，可以相继或作为混合物应 用它们。

在第二除草处理之后，可以接着在发芽后阶段的后期进行除草 有效量的第三除草剂处理。第三处理类似于第二处理。

在第三处理之后，可以在收获前阶段应用除草有效量的第四处 理。根据农作物显示的耐受性的类型和农作物中存在的杂草种类， 用于第四除草剂处理的一种或多种除草剂可以选自如上文所述的属 于由美国杂草科学协会(WSSA)认可的类别的除草剂。在某些实施 方式中，用于第四处理的一种或多种除草剂可以选自如EPSP合成抑 制剂、GS抑制剂和植物生长素样除草剂和农作物选择性发芽后除草 剂的至少一种低风险的除草剂。这些除草剂的例子、施用量、商品 名和供应商如表4(对于大豆)和表5(对于棉花)所示。在特定的 实施方式中，根据农作物显示的耐受性和农作物中存在的杂草种类， 一种或多种除草剂选自草甘膦、草丁膦、麦草畏或2，4-D。

在第四处理之后，可以在收获后阶段应用除草有效量的第五处 理。可以在秋季或春季、休耕期间或在两季农作物种植(double crop planting)情况下在农作物种植之间应用该处理。根据农作物显示的 耐受性的类型和农作物中存在的杂草种类，用于第五处理的一种或 多种除草剂可以选自如上文所述的属于由美国杂草科学协会 (WSSA)认可的类别的除草剂。在某些实施方式中，用于第五处理 的一种或多种除草剂可以选自如EPSP合成抑制剂、GS抑制剂、植 物生长素样除草剂或百草枯或农作物选择性发芽前除草剂的至少一 种低风险的除草剂。这些除草剂的例子、施用量、商品名和供应商 如表4(对于大豆)和表5(对于棉花)所示。在特定的实施方式中， 根据农作物显示的耐受性和农作物中存在的杂草种类，一种或多种 除草剂选自草甘膦、草丁膦、麦草畏或2，4-D。

禾本科除草剂典型地不用于玉米，除非玉米已经对其耐受，例 如，用于控制草的“fops”除草剂。可以通过编码AAD-1的基因提供 这样的耐受性。fops除草剂的非限制性的例子包括以FUSILADE (Syngenta)的商品名销售的精吡氟禾草灵，例如，FUSILADE 2000、 FUSILADE DX、FUSILADE FIVE、FUSILADE SUPER、FUSION、 HORIZON、ORNAMEC、PP005、TORNADO和FUSIFLEX。

在本发明的某些实施方式中，两种处理的结合选自第一至第五 处理。例如，只应用第一和第二处理，或第一或第三处理，或第二 和第三处理，或第五和第二处理或第三处理，来处理杂草。

在本发明的一种实施方式中，为了控制杂草，向耐受一种或多 种除草剂的农作物应用一种或多种不同作用模式的除草剂的一种或 多种处理。

在本发明的种植系统的另一种实施方式中，不应用第一或第五 处理。代之以如耕种的机械方法。通过本领域内众所周知的方法进 行耕种。优选地，在秋季或春季进行耕种。

在本发明的种植系统的另外一种实施方式中，可以将第一和第 五除草剂处理与耕种结合起来，以获得更好的杂草控制。

在另外一种实施方式中，为了控制农作物的农作物生长环境中 的抗除草剂的杂草，实施本发明的种植系统，包括更进一步的确认 抗除草剂的杂草的步骤。在具体的实施方式中，杂草选自：大穗看麦 娘(Alopecurus myosuroides)、野燕麦(Avena fatua)、不实野燕麦(Avena sterilis)、法国野燕麦(Avena sterilis ludoviciana)、车前状臂形草 (Brachiaria plantaginea)、双雄雀麦(Bromus diandrus)、硬雀麦(Bromus rigidus)、Cynosurus echinatus、升马唐(Digitaria ciliaris)、止血马唐 (Digitaria ischaemum)、马唐(Digitaria sanguinalis)、芒稷(Echinochloa colona)、稗(Echinochloa crus-galli)、稻稗(Echinochloa oryzicola)、 水稗(Echinochloa phyllopogon)、蟋蟀草(Eleusine indica)、Eriochloa punctata、Hordeum glaucum、墙大麦(Hordeum leporinum)、田间毛鸭 嘴(Ischaemum rugosum)、千金子(Leptochloa chinensis)、多花黑麦 草(Lolium multiflorum)、黑麦草(Lolium perenne)、欧毒麦(Lolium persicum)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、小虉草(Phalaris minor)、 奇虉草(Phalaris paradoxa)、筒轴茅(Rottboellia exaltata)、大狗尾 草(Setaria faberi)、狗尾草(Setaria viridis)、Setaria viridis var. robusta-alba schreiber、Setaria viridis var.robusta-purpurea、Snowdenia polystachea、石茅(Sorghum halepense)、苏丹草(Sorghum sudanese)、 泽泻(Alisma plantago-aquatica)、北美苋(Amaranthus blitoides)、绿 穗苋(Amaranthus hybridus)、凹头苋(Amaranthus lividus)、长芒苋 (Amaranthus palmeri)、鲍威尔苋(Amaranthus powellii)、野生苋 (Amaranthus quitensis)、反枝苋(Amaranthus retroflexus)、野苋 (Amaranthus rudis)、高水麻(Amaranthus tuberculatus)、豚草(Ambrosia artemisiifolia)、三裂叶豚草(Ambrosia trifida)、耳基水苋菜(Ammania auriculata)、紫水苋菜(Ammania coccinea)、臭春黄菊(Anthemis cotula)、 阿披拉草(Apera spica-venti)、圆叶虎耳(Bacopa rotundifolia)、三叶 鬼针草(Bidens pilosa)、Bidens subalternans、野芥(Brassica tournefortii)、 旱雀麦(Bromus tectorum)、小果亚麻荠(Camelina microcarpa)、藜 (Chenopodium album)、茼蒿(Chrysanthemum coronarium)、香丝草 (Conyza bonariensis)、小蓬草(Conyza canadensis)、野地菟丝子 (Cuscuta campestris)、异型莎草(Cyperus difformis)、Damasonium minus、播娘蒿(Descurainia sophia)、细叶二行芥(Diplotaxis tenuifolia)、 车前叶蓝蓟(Echium plantagineum)、长柄沟繁缕(Elatine triandra var. pedicellata)、白苞猩猩草(Euphorbia heterophylla)、卷茎蓼(Fallopia convolvulus)、水虱草(Fimbristylis miliacea)、黄鼬瓣花(Galeopsis tetrahit)、猪殃殃(Galium spurium)、向日葵(Helianthus annuus)、 假苍耳(Iva xanthifolia)、Ixophorus unisetus、地肤(Kochia scoparia)、 锯齿莴苣(Lactuca serriola)、黄花蔺(Limnocharis flava)、直立石龙 尾(Limnophila erecta)、石龙尾(Limnophila sessiliflora)、美洲母草 (Lindernia dubia)、Lindernia dubia var.major、狭叶母草(Lindernia micrantha)、陌上菜(Lindernia procumbens)、冰叶日中花 (Mesembryanthemum crystallinum)、雨久花(Monochoria korsakowii)、 鸭舌草(Monochoria vaginalis)、球果芥(Neslia paniculata)、虞美人 (Papaver rhoeas)、银胶菊(Parthenium hysterophorus)、Pentzia suffruticosa、小虉草(Phalaris minor)、野萝卜(Raphanus raphanistrum)、 萝卜(Raphanus sativus)、皱果荠(Rapistrum rugosum)、印度水猪母 乳(Rotala indica var.uliginosa)、冠果草(Sagittaria guyanensis)、蒙 特登慈姑(Sagittaria montevidensis)、矮慈姑(Sagittaria pygmaea)、 俄罗斯蓟(Salsola iberica)、Scirpus juncoides var.ohwianus、北水毛花 (Scirpus mucronatus)、金色狗尾草(Setaria lutescens)、刺黄花稔(Sida spinosa)、野欧白芥(Sinapis arvensis)、戟叶抪娘蒿(Sisymbrium orientale)、Sisymbrium thellungii、东方龙葵(Solanum ptycanthum)、 断续菊(Sonchus asper)、苦苣菜(Sonchus oleraceus)、高粱(Sorghum bicolor)、繁缕(Stellaria media)、遏蓝菜(Thlaspi arvense)、欧洲 苍耳(Xanthium strumarium)、Arctotheca calendula、苏门白酒草(Conyza sumatrensis)、野茼蒿(Crassocephalum crepidioides)、Cuphea carthagenenis、粘柳叶菜(Epilobium adenocaulon)、费城飞蓬(Erigeron philadelphicus)、紫萍(Landoltia punctata)、北美独行菜(Lepidium virginicum)、雨久花(Monochoria korsakowii)、早熟禾(Poa annua)、 光果龙葵(Solanum americanum)、龙葵(Solanum nigrum)、Vulpia bromoides、黄鹌菜(Youngia japonica)、黑藻(Hydrilla verticillata)、 长叶车前(Plantago lanceolata)、飞廉(Carduus nutans)、Carduus pycnocephalus、黄矢车菊(Centaurea solstitialis)、丛路蓟(Cirsium arvense)、竹节花(Commelina diffusa)、田旋花(Convolvulus arvensis)、 野胡萝卜(Daucus carota)、止血马唐(Digitaria ischaemum)、孔雀 稗(Echinochloa crus-pavonis)、水虱草(Fimbristylis miliacea)、黄鼬 瓣花(Galeopsis tetrahit)、猪殃殃(Galium spurium)、直立石龙尾 (Limnophila erecta)、Matricaria perforate、虞美人(Papaver rhoeas)、 毛茛(Ranunculus acris)、Soliva sessilis、尖瓣花(Sphenoclea zeylanica)、 繁缕(Stellaria media)、针茅草(Nassella trichotoma)、Stipa neesiana、 匍茎剪股颖(Agrostis stolonifera)、扁蓄(Polygonum aviculare)、日 本看麦娘(Alopecurus japonicus)、菵草(Beckmannia syzigachne)、旱 雀麦(Bromus tectorum)、Chloris inflate、Echinochloa erecta、马齿苋 (Portulaca oleracea)和欧洲千里光(Senecio vulgaris)。

在另一种实施方式中，为了控制抗除草剂的自生植物，实施本 发明的种植系统，进一步包括确认抗草甘膦或植物生长素样除草剂 的抗除草剂的自生植物的步骤。抗除草剂的自生植物可能属于一种 或多种以下植物种类：玉米、水稻、棉花、高粱、小麦、大麦、草 坪草、燕麦、苜蓿、糖用甜菜、马铃薯、豆类、豌豆、小米、亚麻、 花生、油菜籽和大豆。

在另外一种实施方式中，为了控制农作物的农作物生长环境中 的难控制的杂草，实施本发明的种植系统。该实施方式可以进一步 包括确认难控制的杂草的步骤，尤其包括以下：苘麻(Abutilon theophrasti)、苋属(Amaranthus sp.)、长芒苋(Amaranthus palmeri)、 豚草(Ambrosia artimisiifolia)、三裂叶豚草(Ambrosia trifida)、藜 (Chenopodium album)、田旋花(Convolvulus arvensis)、小蓬草(Conyza canadensis)、鸭跖草属(Commelina sp.)、饭包草(Commelina benghalensis)、甘薯属(Ipomoea sp.)、地麸属(Kochia sp.)、荞麦 蔓(Polygonum convolvulus)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、刺黄花 稔(Sida spinosa)和东方龙葵(Solanum ptycanthum)，并应用除草有 效量的对于难控制的杂草有活性的除草剂，其中，农作物耐受对难 控制的杂草有活性的除草剂。

在另一种实施方式中，为了使作物的农作物生长环境中抗除草 剂杂草的发育最小化，实施本发明的种植系统。在一种实施方式中， 这可以包括定点施用抗除草剂杂草对其敏感的除草剂。可以修改这 种方法，通过在几个生长季施用第一除草剂，然后在随后的生长季 施用第二除草剂，杀死抗第一除草剂的杂草，以选择至少一种抗第 一除草剂的杂草的群体。

在本发明的另外一种实施方式中，通过用包含耐受一种或多种 低风险除草剂的农作物和附随的除草处理的第二种植系统接替包含 耐受一种或多种低风险除草剂的农作物和附随的除草处理的第一种 植系统轮种，设计使抗除草剂杂草的发育最小化的方法。例如，如 果第一种植系统中的农作物耐受草甘膦，那么第二种植系统中的农 作物可以耐受如麦草畏的植物生长素样除草剂，或者耐受草甘膦和 植物生长素样除草剂。在该方法的一种实施方式中，用选自玉米、 水稻、棉花、高粱、小麦、大麦、燕麦、苜蓿、糖用甜菜、马铃薯、 豆类、豌豆、小米、油菜籽和亚麻的耐受一种或多种低风险除草剂 的第二农作物接替耐受一种或多种低风险除草剂的第一大豆农作物 轮种。在一种实施方式中，该方法包括用耐受一种或多种低风险除 草剂的玉米接替耐受一种或多种除草剂的大豆轮种。

在该方法的另一种实施方式中，用选自玉米、花生、大豆、谷 类和高粱的耐受一种或多种低风险除草剂的第二农作物接替耐受一 种或多种低风险除草剂的第一棉花作物轮种。在另外一种实施方式 中，该方法包括用包含耐受一种或多种除草剂的棉花的农作物系统 接替包含耐受一种或多种低风险除草剂的棉花的农作物系统轮种。 例如，如果第一棉花作物耐受草甘膦，那么第二种植系统中的农作 物可以耐受植物生长素样除草剂，或者耐受草甘膦和植物生长素样 除草剂。在后一情况下，可以进行除草剂轮换，使得保持杂草控制， 从而抗草甘膦的杂草在“关”季节(即，在轮换过程中没有草甘膦) 不会茂盛，从而不会变为更恶化的问题。同时使用两种除草剂可能 是优选的，因为这两种除草剂可以同时作用而不会彼此干扰或拮抗。

在一种实施方式中，本发明的种植系统中的农作物可以耐受属 于WSSA作用模式类别4、9或15的至少一种低风险的除草剂。在 另一种实施方式中，农作物耐受EPSP合成抑制剂、GS抑制剂和/ 或植物生长素样除草剂。在另外一种实施方式中，农作物耐受草甘 膦、草丁膦、麦草畏、2，4-D或其组合。

在一种实施方式中，本文公开的种植系统采用具有一种或多种 转基因性状的转基因植物，该转基因性状提供针对如草甘膦、草丁 膦、麦草畏或2，4-D的一种或多种不同作用模式的除草剂的耐受性， 用于控制杂草，包括抗除草剂的杂草、难控制的杂草、抗除草剂的 自生植物。这些系统也可以使抗除草剂杂草将来可能的发育最小化。 更进一步，在一种实施方式中，本发明的种植系统允许使用耐受一 种或多种被认为是低风险除草剂的除草剂的转基因作物，因而进一 步使发展抗这些除草剂的杂草的可能性最小化。在特定的实施方式 中，种植系统使用显示麦草畏、草甘膦和/或草丁膦耐受性的转基因 植物。

发芽前施用如麦草畏的植物生长素样除草剂以前需要在对植物 生长素样除草剂敏感的植物的种植和发芽很早之前施用除草剂，以 使环境中的除草剂分解，并避免明显的农作物损伤或死亡。大部分 农作物植物，尤其是如大豆和棉花的双子叶植物，对麦草畏极其敏 感。因此，紧接着必然是生产者按照推荐的在施用后延迟种植。显 示耐受一种或多种如2，4-D或相关化合物的植物生长素样除草剂和 麦草畏的农作物植物的使用允许在种植时或其前后不久施用这样的 除草剂。

已发现，例如，用编码麦草畏单加氧酶(DMO)的聚核苷酸构 建体转化的大豆植物对甚至早期的发芽前施用的麦草畏耐受，在甚 至9x标记施用量(5,040g/ha，4.5lb/英亩)时具有低于10％的损伤 率。已发现，甚至使用10,080g/ha(9lb/英亩)的18x施用量时，对 耐受麦草畏的转基因植物的损伤低于20％(U.S.s/n 60/811,276，本 文引入作为参考)。在1122g/ha的大约2x施用量时，观察到低于2 ％的损伤。因此，表明可以使用与除草剂的发芽前和发芽后施用相关 的改善的杂草控制，而不会由于除草剂损伤出现明显的产率减少。 因此，例如，根据本发明，发芽前对大豆施用麦草畏可以与发芽后 对耐受麦草畏的植物施用一种或多种除草剂相结合，同时保持农作 物产量并获得改善的杂草控制。例如，一种这样的除草剂施用方案 包括在发芽前的后期对大豆植物施用麦草畏，联合在发育的V2阶段 进行麦草畏的发芽后施用。在某些实施方式中，可以在从发芽到收 获的任何时间点进行发芽后施用。一种具体的实施方式包括在直至 大豆株冠(canopy)闭合的任何V阶段的发芽后施用，例如，在大 约V1、V2、V3、V4、V5、V6和/或以后的阶段。

一方面，本发明提供了控制田地中杂草生长的方法，包括：a)向 农作物生长环境施用除草有效量的植物生长素样除草剂；并在农作 物生长环境的土壤中种植表达编码麦草畏单加氧酶的核酸的农作物 植物的转基因种子，其中，种子在施用除草剂的30天或更短的天数 内发芽。在某些实施方式中，种子在用植物生长素样除草剂处理生 长环境之后的4周、3周、2周或少于1周的时间内发芽。被处理的 生长环境可以是，例如，其中种植农作物的田地。耐受植物生长素 样除草剂的植物的种子的群体可以种植在田地中。可以根据本领域 内已知的技术处理该环境，例如，使用如麦草畏的植物生长素样除 草剂的可商购的制剂。所述环境包括需要控制杂草并且可以种植耐 受植物生长素样除草剂的植物的种子的区域。杂草可以直接接触环 境中的除草剂，且环境中的土壤可以接触除草剂，以预防或减少土 壤中的杂草生长。用除草剂处理环境的步骤可以于在土壤中种植转 基因种子的步骤之前、之后或同时进行。转基因种子可以种植到环 境的土壤中，例如，在处理之前或之后的30天之内，包括在处理之 前或之后的大约3周、2周、1周或0周之内，进一步包括在处理之 前或之后的大约1、2、3、4、5或6天之内，包括与处理同时进行。 在本方法中，例如，种子发芽可以在处理环境之后的30天-0天之间， 包括在处理环境之后的大约21、18、16、14、12、10、8、6、5、4、 3、2、1和大约0天之间。本方法可以进一步包括在种子发芽和/或 植物生长之后应用一种或多种另外的植物生长素样除草剂处理。

在本发明的方法中，植物生长素样除草剂可以选自苯氧基羧酸 化合物、苯甲酸化合物、吡啶羧酸化合物、喹啉羧酸化合物和草除 灵(benazolinethyl)化合物。苯氧基羧酸化合物的例子包括2，4-二氯 苯氧基乙酸(2，4-D)、4-(2，4-二氯苯氧基)丁酸(2，4-DB)和(4-氯 -2-甲基苯氧基)乙酸(MCPA)。在某些实施方式中，使用的2，4-D、 2，4-DB和/或MCPA的除草有效量为大约2g/ha(克/公顷)-大约5000 g/ha，包括大约50g/ha-大约2500g/ha、大约60g/ha-大约2000g/ha、 大约100g/ha-大约2000g/ha、大约75g/ha-大约1000g/ha、大约100 g/ha-大约500g/ha和大约100g/ha-大约280g/ha。在某些实施方式 中，使用麦草畏作为除草剂。在某些实施方式中，使用的麦草畏的 除草有效量可以是大约2.5g/ha-大约10,080g/ha，包括大约2.5g/ha- 大约5,040g/ha、大约5g/ha-大约2,020g/ha、大约10g/a-大约820g/h 和大约50g/ha-大约1,000g/ha、大约100g/ha-大约800g/ha和大约 250g/ha-大约800g/ha。

根据本发明，提供了用于控制杂草的方法和组合物，包括使用 显示对草甘膦和如麦草畏的植物生长素样除草剂的耐受性的植物。 麦草畏和草甘膦的组合允许使用减少的除草剂的量，可达到同样的 控制耐受草甘膦的杂草的水平。这为在商业生产领域控制除草剂耐 受性提供了明显的优势。在一种实施方式中，在发芽前和/或发芽后 向植物施用草甘膦和麦草畏的罐混合物。另外也可以单独应用草甘 膦和麦草畏。为了使用比单独施用每种或两种除草剂减少的量的除 草剂达到同样的控制杂草的水平，优选地在充足的间隔内应用草甘 膦和麦草畏，使这两种除草剂保持活性并能够控制杂草生长。

因而预期联合使用较少量的除草剂，以实现与只施用一种除草 剂相同程度的杂草控制。例如，本发明提供了杂草控制的方法，包 括向种植有具有麦草畏和草甘膦耐受性的转基因植物的田地施用相 对于标准的生产者标记量包含低于1x量的草甘膦和/或麦草畏的除 草剂组合物。草甘膦和麦草畏的相应施用量的例子包括大约 0.5x-0.95x的每种除草剂，特别包括大约0.5x、0.6x、0.7x、0.8x、 0.85x、0.9x和0.95x的每种除草剂及其所有的可推导出的组合，以 及更高的量，如0.97x和0.99x。或者，在更难于控制杂草的情况下， 或需要更高程度的杂草控制的情况下，鉴于本发明发现甚至高施用 量的麦草畏也不会明显地损伤植物，可以使用1x和更高的施用量。 1x施用量由可商购的除草剂制剂的生产者设定，并且是本领域的技 术人员已知的。例如，根据杂草的种类和杂草的高度，Fallow MasterTM (草甘膦∶麦草畏比例为大约2∶1的草甘膦和麦草畏混合物)的标签 推荐大约451g/ha(311ae g/ha草甘膦∶140ae g/ha麦草畏)至621ae g/ha(428ae g/ha草甘膦：193ae g/ha麦草畏)。草甘膦和麦草畏的 组合允许使用减少的除草剂达到如下所示的相同的杂草控制水平。 当组合除草剂时，可以用任何给定的除草剂施用量控制的杂草的范 围因而可能增大。

可以如本领域中所述，产生具有除草剂耐受性的转基因植物。 例如，来自嗜麦芽假单胞杆菌的麦草畏单加氧酶(DMO)的基因可 以给予麦草畏耐受性(例如，美国专利申请第20030135879号)。 在美国专利申请60/811,276中也发现了可以用于这方面的序列的例 子，本文完整引入作为参考。也已知另外的植物生长素样除草剂降 解活性，包括脱卤素酶活性(Wang，1996)

提供对一种或多种这些除草剂的除草剂耐受性的未修饰和修饰 的蛋白质分子及其相应的核酸分子在本领域内是众所周知的。以下 列举它们，并将它们引入本文作为参考：

a)编码草甘膦耐受性的序列包括5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸 合酶(EPSPS；美国专利5,627,061、美国专利RE39,247、美国专利 6,040,497、美国专利5,094,945、WO04074443和WO04009761)、 草甘膦氧化还原酶(GOX；美国专利5,463,175)、草甘膦脱羧酶 (WO05003362和美国专利申请20040177399)和草甘膦-N-乙酰基 转移酶(GAT；例如美国专利公开20030083480和20070079393)， 给予对草甘膦的耐受性；

b)麦草畏单氧合酶(DMO，由ddmC编码)，给予对如麦草畏 的植物生长素样除草剂的耐受性(美国专利申请20030115626、 20030135879；Wang等人，1996；Herman等人，2005)；

c)膦丝菌素乙酰转移酶(bar)，给予对膦丝菌素或草丁膦的耐 受性(U.S.5,646,024、U.S.5,561,236、EP 275,957、U.S.5,276,268、 U.S.5,637,489、U.S.5,273,894)；

d)2，2-二氯丙酸脱卤素酶，给予对2，2-二氯丙酸(茅草枯 (Dalapon))的耐受性(WO9927116)；

e)乙酰羟酸合酶或乙酸乳酸合酶，给予对如磺酰脲、咪唑啉酮、 三唑嘧啶、嘧啶氧苯甲酸酯和2-苯并[c]呋喃酮的乙酰乳酸合酶抑制 剂的耐受性(U.S.6,225,105、U.S.5,767,366、U.S.4,761,373、U.S. 5,633,437、U.S.6,613,963、U.S.5,013,659、U.S.5,141,870、U.S. 5,378,824、U.S.5,605,011)；

f)卤芳基腈水解酶(Bxn)，给予对溴苯腈的耐受 (WO8704181A1、U.S.4,810,648、WO8900193A)；

g)修饰的乙酰辅酶A羧化酶，给予对环己烯二酮(稀禾定)和 芳氧基苯氧基丙酸酯(吡氟氯禾灵(haloxyfop))的耐受性(U.S. 6,414,222)；

h)二氢蝶酸合酶(sulI)，给予对磺胺除草剂的耐受性(U.S. 5,597,717、U.S.5,633,444、U.S.5,719,046)；

i)32kD光系统II多肽(psbA)，给予对三嗪除草剂的耐受性 (Hirschberg等人，1983)；

j)邻氨基苯甲酸合酶，给予对5-甲基色氨酸的耐受性(U.S. 4,581,847)；

k)二氢吡啶二羧酸合酶(dapA)，给予对氨乙基半胱氨酸的耐 受性(WO8911789)；

l)八氢番茄红素去饱和酶(crtI)，给予对如氟草敏(norflurazon) 的哒嗪酮除草剂的耐受性(JP06343473)；

m)羟基-苯基丙酮酸双加氧酶，给予对如异噁唑草酮 (isoxaflutole)的环丙基异噁唑类(cyclopropylisoxazole)除草剂的 耐受性(WO 9638567；U.S.6,268,549)；

n)修饰的原卟啉原氧化酶I(protox)，给予对原卟啉原氧化酶 抑制剂的耐受性(U.S.5,939,602)；和

o)芳氧基链烷酸双加氧酶(AAD-1、AAD-12)，给予对含有芳 氧基链烷酸部分的除草剂的耐受性(WO05107437；WO07053482)。 这样的除草剂的例子包括苯氧基植物生长素(如2，4-D和2，4-滴丙酸 (dichlorprop))、吡啶氧基植物生长素(如氟草烟(fluroxypyr) 和绿草定(triclopyr))、芳氧基苯氧基丙酸(AOPP)乙酰辅酶A 羧化酶(ACCase)抑制剂(如吡氟氯禾灵、喹禾灵(quizalofop)和 禾草灵(diclofop))和5-取代的苯氧基乙酸原卟啉原氧化酶IX抑 制剂(如吡草醚(pyraflufen)和氟烯草酸(flumiclorac))。

能够根据标准方法容易地制备具有降解植物生长素样除草剂以 及草甘膦的能力的DMOs的变体，或其它除草剂抗性基因，并分析 其活性。也可以通过本领域内已知的方法，例如核酸杂交，例如从 降解如麦草畏的植物生长素样除草剂或其它除草剂的包括细菌在内 的合适的生物体鉴定这样的序列(美国专利5,445,962；Cork和 Krueger，1991；Cork和Khalil，1995)。也可以化学合成变异体，例 如，按照本领域内众所周知的技术使用已知的DMO多核苷酸序列进 行。例如，可以通过氨基磷酸盐(phosphoroamidite)化学法在自动 DNA合成仪中合成DNA序列。因为可以利用将要表达DNA序列的 宿主优选的密码子优化表达，所以化学合成可能是理想的。

在保持酶活性的同时，可以对本文提供的如DMO序列的蛋白质 的多肽序列进行修饰和改变。以下是基于改变蛋白质的氨基酸以产 生等效的、或甚至是改进的、修饰的多肽和相应的编码序列的讨论。 例如，已知某些氨基酸可以替代蛋白质结构中的其它氨基酸，而不 会明显损失与底物分子上的结构如结合位点相互结合的能力。因为 蛋白质的相互作用能力和性质确定了蛋白质的生物功能活性，所以 能够在蛋白质序列中进行某些氨基酸序列取代，当然，也能够对其 DNA编码序列进行取代，而仍然能够获得具有类似性质的蛋白质。 因此，预期可以在本文所述的DMO肽序列或其它除草剂抗性多肽和 相应的DNA编码序列中进行各种改变，而不明显损失其生物效用或 活性。

在进行这些改变时，可以考虑氨基酸的亲水指数。氨基酸亲水 指数在使蛋白质具有相互作用生物功能中的重要性一般可为本领域 的技术人员所理解(Kyte等人，1982)。可以认为，氨基酸的相对亲 水特征对于产生的蛋白质的二级结构有贡献，其二级结构又限定了 蛋白质与其它分子例如酶、底物、受体、DNA、抗体、抗原等的相 互作用。

本领域内的技术人员已知，氨基酸可以被具有类似的亲水指数 或得分的其它氨基酸取代，并仍然产生具有类似生物活性的蛋白质， 即，仍然获得生物功能相当的蛋白质。在进行这样的改变时，优选 其亲水指数在±2之内的氨基酸的取代，尤其优选在±1之内的氨基酸 的取代，甚至更特别优选在±0.5之内的氨基酸的取代。

本领域内的技术人员也可以理解，可以根据亲水性有效地进行 类似氨基酸的取代。美国专利4,554,101记载，受其邻近的氨基酸的 亲水性控制，蛋白质的最大局部平均亲水性与蛋白质的生物学性质 相关。可以理解，一种氨基酸可以取代另一种具有类似的亲水性值 的氨基酸，并仍然获得生物学上相当的蛋白质。在这样的变化中， 优选其亲水性值在±2之内的氨基酸的取代，尤其优选在±1之内的氨 基酸的取代，甚至更特别优选在±0.5之内的氨基酸的取代。将这些 和各种前述性质考虑在内的示例性的取代是本领域的技术人员众所 周知的，包括：精氨酸和赖氨酸、谷氨酸和天冬氨酸、丝氨酸和苏 氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺、以及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。

给予除草剂耐受性的基因以足以给予除草剂耐受性的量，典型 地连接到驱动基因表达的植物启动子上。适于这种和其它用途的启 动子是本领域内众所周知的。描述这样的启动子的例子包括：美国 专利6,437,217(玉米RS81启动子)、美国专利5,641,876(水稻肌 动蛋白启动子)、美国专利6,426,446(玉米RS324启动子)、美国 专利6,429,362(玉米PR-1启动子)、美国专利6,232,526(玉米A3 启动子)、美国专利6,177,611(组成型玉米启动子)、美国专利 5,322,938、5,352,605、5,359,142和5,530,196(35S启动子)、美国 专利6,433,252(玉米L3油质蛋白启动子)、美国专利6,429,357(水 稻肌动蛋白2启动子，以及水稻肌动蛋白2内含子)、美国专利 5,837,848(根特异性启动子)、美国专利6,294,714(光诱导型启动 子)、美国专利6,140,078(盐诱导型启动子)、美国专利6,252,138 (病原体诱导型启动子)、美国专利6,175,060(磷缺乏诱导型启动 子)、美国专利6,388,170(双向启动子)、美国专利6,635,806(γ- 醇溶蛋白(coixin)启动子)和美国专利申请第09/757,089号(玉米叶 绿体醛缩酶启动子)。可以使用的另外的启动子为胭脂氨酸合酶 (NOS)启动子(Ebert等人，1987)、章鱼氨酸合酶(OCS)启动 子(其在根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的诱导肿瘤的 质粒上携带)、花椰菜花叶病毒启动子如花椰菜花叶病毒(CaMV) 19S启动子(Lawton等人，1987)、CaMV 35S启动子(Odell等人， 1985)、玄参花叶病毒35S启动子(Walker等人，1987)、蔗糖合酶 启动子(Yang等人，1990)、R基因复合物启动子(Chandler等人， 1989)和叶绿素a/b结合蛋白基因启动子、CaMV35S(美国专利第 5,322,938、5,352,605、5,359,142和5,530,196号)、FMV35S(美国 专利6,051,753、5,378,619)、PC1SV启动子(例如，美国专利5,850,019， 和SEQ ID NO：15的启动子)、SCP1启动子(例如，美国专利第 6,677,503号)和AGRtu.nos(GenBank登录号V00087；Depicker等 人，1982；Bevan等人，1983)启动子，等等。

通过使用编码转运肽的序列，可以获得除草剂耐受性基因的表 达的益处。例如，已经显示，如拟南芥(Arabidopsis thaliana)EPSPS CTP(Klee等人，1987)和矮牵牛(Petunia hybrida)EPSPS CTP (della-Cioppa等人，1986)的合适的叶绿体转运肽的并入，将异源 EPSPS蛋白质序列靶向至转基因植物中的叶绿体。也可以将DMO 靶向至叶绿体。工程设计叶绿体转运肽(CTPs)，使其融合到蛋白 质的N末端，以将蛋白质导向植物的叶绿体。这样的序列尤其可用 于连接给予麦草畏耐受性的核酸。许多定位于叶绿体的蛋白质由核 基因表达为前体，并通过在输入过程中除去的叶绿体转运肽靶向至 叶绿体。叶绿体蛋白质的例子包括如来自豌豆(Pisum sativum)的 核酮糖1，5-二磷酸羧化酶的小亚单位(RbcS2)、铁氧化还原蛋白、 铁氧化还原蛋白氧化还原酶、光收获复合物蛋白质I和蛋白质II和 硫氧化还原蛋白F。其它示例性的叶绿体靶向序列包括玉米cab-m7 信号序列(Becker等人，1992；PCT WO 97/41228)、豌豆谷胱甘肽还 原酶信号序列(Creissen等人，1995；PCT WO 97/41228)和烟草 (Nicotiana tobaccum)核酮糖1，5-二磷酸羧化酶的小亚单位叶绿体 转运肽(SSU-CTP)的CTP(Mazur，等人，1985)。本发明使用AtRbcS4 (CTP1；美国专利5,728,925)、AtShkG(CTP2；Klee等人，1987)、 AtShkGZm(CTP2synthetic；见WO04009761的SEQ ID NO：14)、 PsRbcS(Coruzzi等人，1984)和在美国临时申请第60/891,675号中公 开的那些序列是尤其有益的，例如，对于DMO多肽的表达(例如， 对于CTPs的肽序列和编码它们的核酸序列参见SEQ ID NOs：3-14)。

作为翻译前导序列发挥功能的5’UTR是位于基因的启动子序列 和编码序列之间的DNA遗传元件。翻译前导序列存在于翻译起始序 列的上游的完全加工的mRNA中。翻译前导序列可以影响初级转录 物向mRNA的加工、mRNA的稳定性或翻译效率。翻译前导序列的 例子包括玉米和牵牛花热休克蛋白前导序列(美国专利第5,362,865 号)、植物病毒外壳蛋白前导序列、植物核酮糖二磷酸羧化酶-加氧 酶(rubisco)前导序列等(Turner和Foster，1995)。尤其有益于使 用的5’UTRs的非限制性的例子为GmHsp(美国专利5,659,122)、 PhDnaK(美国专利5,362,865)、AtAnt1、TEV(Carrington和Freed， 1990)和AGRtunos(GenBank登录号V00087；Bevan等人，1983)。

3’非翻译序列、3’转录终止区或多腺苷酸化区是指连接于结构多 核苷酸分子上并位于其下游的DNA分子，包括提供能够影响转录、 mRNA加工或基因表达的多腺苷酸化信号和其它调节信号的多核苷 酸。多腺苷酸化信号在植物中发挥作用，以引起多腺苷酸核苷酸 (polyadenylate nucleotides)向mRNA前体的3’末端的添加。多聚腺 苷酸化序列可以源自天然基因、各种植物基因或T-DNA基因。3’转 录终止区的一个例子为胭脂氨酸合酶3’区(nos 3’；Fraley等人， 1983)。举例说明了不同的3’非翻译区的使用(Ingelbrecht等人， 1989)。来自豌豆RbcS2基因(Ps.RbcS2-E9；Coruzzi等人，1984) 和AGRtu.nos(Genbank登录号E01312)的多腺苷酸化分子尤其对 于本发明的使用有益。

可以使用本领域内已知的任何将转基因引入植物的技术，来制 备本发明的耐受除草剂的植物(见，例如，Miki等人，1993)。据信， 用于植物转化的合适的方法实际上包括任何能够将DNA引入细胞 中的方法，如美国专利第5,384,253号所示的电穿孔，美国专利第 5,015,580、5,550,318、5,538,880、6,160,208、6,399,861和6,403,865 号所示的微粒轰击，如美国专利第5,635,055、5,824,877、5,591,616、 5,981,840和6,384,301号所示的土壤杆菌(Agrobacterium)介导的转 化，和如美国专利第5,508,184号所示的原生质体转化，等等。通过 这些技术的应用，实际上任何植物种类的细胞都可以被稳定地转化， 并且这些细胞可以发育为转基因植物。在美国专利第5,846,797、 5,159,135、5,004,863和6,624,344中公开了在棉花转化中特别有用的 技术；例如，在美国专利5,750,871中特别公开了转化芸苔属 (Brassica)植物的技术；例如，在Zhang等人，1999和美国专利 6,384,301中公开了转化大豆的技术。例如，在美国专利7,002,058、 美国专利5,591,616和WO9506722中公开了转化玉米的技术。

在实现外源性DNA向受体细胞递送之后，下面的步骤一般涉及 为了进一步的培养和植物再生而鉴别转化的细胞。为了提高鉴别转 化体的能力，技术人员可能需要为根据本发明制备的转化载体采用 可选择的或可筛选的标记基因。在这种情况下，技术人员随后一般 通过将细胞暴露于选择性试剂来分析可能转化的细胞群体，或根据 所需的标记基因性状筛选细胞。

暴露于选择性试剂而存活的细胞，或在筛选分析中评分为阳性 的细胞，可以在支持植物再生的培养基中培养。在一种示例性的实 施方式中，可以通过包含如生长调节剂的另外的物质来改良任何合 适的植物组织培养基，例如，MS和N6培养基。组织可以保持在含 有生长调节剂的基本培养基中，直至可以获得足够的组织来开始植 物再生尝试，或进行反复几轮人工选择，直至组织的形态学适于再 生，典型地为至少2周，然后转移到有助于幼苗形成的培养基中。 定期转移培养物，直至发生足够的幼苗形成。一旦幼苗形成，就将 它们转移到有助于根形成的培养基中。一旦形成足够的根，就将植 物转移到土壤中进行进一步的生长和成熟。

为了证实外源性DNA或“转基因”在再生植物中的存在，可以进 行多种分析。这样的分析包括，例如，“分子生物学”分析，如DNA 印迹法和RNA印迹法与PCRTM；“生物化学”分析，如检测蛋白质产 物的存在，例如，通过免疫学方法(ELISA和蛋白质印迹法)，或 通过酶功能；植物部分分析，如叶或根分析；以及，通过分析整个 再生植物的表型。

一旦转基因已被引入植物中，就能够通过杂交将基因引入任何 与第一种植物性相容的植物中，而无需直接转化第二种植物。因此， 本文所用的术语“后代”是指根据本发明制备的亲本植物的任一代的 后代，其中，后代包含根据本发明制备的选择的DNA构建体。“转 基因植物”因而可以是任一代。如本文所公开的，“杂交”植物以提供 相对于起始植物系具有一个或多个添加的转基因或等位基因的植物 系，被定义为通过将起始系与包含本发明的转基因或等位基因的供 体植物系杂交从而将特定序列引入植物系的技术。为了实现这一点， 例如，技术人员可以进行以下步骤：(a)种植第一(起始系)和第二 (包含所需转基因或等位基因的供体植物系)亲本植物的种子；(b) 使第一和第二亲本植物的种子生长为有花的植物；(c)用第二亲本植 物的花粉对第一亲本植物的花授粉；和(d)收获具有已授粉的花的 亲本植物上产生的种子。

农作物可以是选自苜蓿、豆类、椰菜、卷心菜、胡萝卜、花椰 菜、芹菜、大白菜、棉花、黄瓜、茄子、莴苣、甜瓜、豌豆、胡椒、 花生、马铃薯、南瓜、萝卜、油菜籽、菠菜、大豆、倭瓜、糖用甜 菜、向日葵、番茄和西瓜的双子叶作物。优选地，农作物是大豆或 棉花作物。

农作物可以是选自玉米、洋葱、水稻、高粱、小麦、黑麦、小 米、甘蔗、燕麦、黑小麦、柳枝稷和草坪草的单子叶作物。优选地， 农作物是玉米。

上文公开了提供对草甘膦、草丁膦、麦草畏和2，4-D的耐受性的 核酸分子。通过上文公开的转化方法将这些核酸分子引入大豆或棉 花中。

利用本领域内已知的设备和方法应用本文公开的各种除草剂处 理。例如，如上文所述，除草剂的施用量随土壤结构、pH、有机物 含量、耕作系统和杂草的大小而变化，并且通过查看除草剂标签上 合适的除草剂量可以确定。

基于公开的内容，制备用于本发明的除草剂组合物对于本领域 的技术人员来说是显而易见的。这样的可商购的组合物除了活性成 分外，典型地还包含如表面活性剂、固体或液体载体、溶剂和粘合 剂的组分。可用于向植物施用的表面活性剂的例子包括以下酸的碱 金属盐、碱土金属盐或铵盐：芳族磺酸，例如，木素-、苯酚-、萘- 和二丁基萘磺酸，和芳基磺酸盐的脂肪酸、烷基醚的脂肪酸、月桂 基醚的脂肪酸、脂肪醇硫酸盐的脂肪酸和脂肪醇二醇醚硫酸盐的脂 肪酸，磺化萘及其衍生物与甲醛的缩合物、萘或萘磺酸与苯酚和甲 醛的缩合物、苯酚或苯酚磺酸与甲醛的缩合物、苯酚与甲醛和亚硫 酸钠的缩合物、聚氧乙烯辛基苯基醚、乙氧基化的异辛基-、辛基- 或壬基苯酚、三丁基苯基聚乙二醇醚、烷基芳基聚醚醇、异十三烷 醇、乙氧基化的蓖麻油、乙氧基化的三芳基苯酚、磷酸化的三芳基 苯酚乙氧基化物的盐、月桂醇聚乙二醇醚乙酸酯、山梨醇酯、木质 素-亚硫酸盐废液或甲基纤维素，或它们的混合物。表面活性剂应用 的常见实例是大约0.25重量％-1.0重量％，更普遍地为大约0.25重 量％-0.5重量％。

向植物施用的组合物可以是固体或液体。使用固体组合物时， 可能需要包括一种或多种含有活性化合物的载体材料。载体的例子 包括矿物土，如硅石、硅胶、硅酸盐、滑石、高岭土、镁质粘土 (attaclay)、石灰石(limestone)、白垩(chalk)、黄土(loess)、 粘土、白云石(dolomite)、硅藻土(diatomaceous earth)、硫酸钙、 硫酸镁、氧化镁、磨碎的合成材料，肥料，如硫酸铵、磷酸铵、硝 酸铵、硫脲和脲，植物源的产品，如谷物粗粉、树皮粗粉、木粉和 坚果壳粗粉、纤维素粉、硅镁土(attapulgites)、蒙脱石 (montmorillonites)、云母(mica)、蛭石(vermiculites)、合成的 二氧化硅和合成的硅酸钙，或它们的混合物。固体制剂可以配制为 粉末、分散性粉剂、颗粒、微囊剂等。液体制剂可以包括水性或非 水性溶液、乳状液等。

对于液体溶液，可以包括水溶性的化合物或盐，如硫酸钠、硫 酸钾、氯化钠、氯化钾、醋酸钠、硫酸氢铵、氯化铵、醋酸铵、甲 酸铵、草酸铵、碳酸铵、碳酸氢铵、硫代硫酸铵、二磷酸氢铵、磷 酸二氢铵、磷酸氢铵钠、硫氰酸铵、氨基磺酸铵或氨基甲酸铵。

除草剂组合物中的其它示例性的成分包括粘合剂，如聚乙烯吡 咯烷酮、聚乙烯醇、部分水解的聚醋酸乙烯酯、羧甲基纤维素、淀 粉、乙烯吡咯烷酮/醋酸乙烯酯共聚物和聚醋酸乙烯酯或它们的混合 物；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸钠、滑石或聚乙二醇或它们的混 合物；防泡剂，如乳化硅油、长链醇、磷酸酯、乙炔二醇或有机氟 化合物；和络合剂，如：乙二胺四乙酸(EDTA)的盐、三次氮基三 乙酸(trinitrilotriaceticacid)的盐或聚磷酸的盐或它们的混合物。

另外，也公开了通过用第二年的包含耐受一种或多种除草剂的 农作物和附随的除草处理的第二种植系统接替第一年的包含耐受一 种或多种除草剂的农作物和附随的除草处理的第一种植系统轮种， 使抗除草剂杂草将来的发育最小化的方法，其中，第二农作物具有 对一种不同的除草剂或除草剂组合的耐受性。

本文公开的种植系统不仅组合使用对一种或多种除草剂耐受的 农作物，使用如除草剂的施用类型、施用量和时间的化学杂草控制 手段，而且使用例如轮种耐受一种或多种除草剂的其它转基因农作 物的耕种方法，和使用如耕种的机械杂草控制方法，产生新型的综 合杂草处理。

产生属于不同作用模式类别的耐受一种或多种除草剂的农作 物，并用于本发明的种植系统中。这些除草剂由美国杂草科学协会 (Weed Science Society of America)(WSSA)认可，在表2 (Mallory-Smith和Retzinger Jr，2003；Herbicide Handbook，2002，； Schmidt，1997)中可见其非限制性的例子。

应该基于以下这些定义来阅读本发明：

“植物生长素样”除草剂，指4种化学族的除草剂：苯氧基、羧 酸(或吡啶)、苯甲酸和喹啉羧酸(quinaline carboxylic acid)。这 些类型的除草剂模拟被称为植物生长素的天然植物生长调节剂，或 像后者那样发挥作用。植物生长素样除草剂的作用似乎影响细胞壁 的塑性和核酸代谢，这能够导致不受控制的细胞分裂和生长。

苯氧基除草剂最常见，自二十世纪四十年代发现(2，4-二氯苯氧 基)乙酸(2，4-D)以来就用作除草剂。其它例子包括4-(2，4-二氯苯氧 基)丁酸(2，4-DB)、2-(2，4-二氯苯氧基)丙酸(2，4-DP)、(2，4，5-三 氯苯氧基)乙酸(2，4，5-T)、2-(2，4，5-三氯苯氧基)丙酸(2，4，5-TP)、 2-(2，4-二氯-3-甲基苯氧基)-N-苯基丙酰胺(氯甲酰草胺 (clomeprop))、(4-氯-2-甲基苯氧基)乙酸(MCPA)、4-(4-氯-邻- 甲苯氧基)丁酸(MCPB)和2-(4-氯-2-甲基苯氧基)丙酸(MCPP)。

第二大的化学族是羧酸除草剂，也被称为吡啶除草剂。例子包 括3，6-二氯-2-吡啶羧酸(二氯吡啶酸(Clopyralid))、4-氨基-3，5，6- 三氯-2-吡啶羧酸(毒莠定(picloram))、(2，4，5-三氯苯氧基)乙酸(绿 草定)和4-氨基-3，5-二氯-6-氟-2-吡啶氧乙酸(氟草烟)。

苯甲酸的例子包括3，6-二氯-邻-茴香酸(麦草畏)、3，5，6-三氯- 邻-茴香酸(杀草畏(tricamba))、和3-氨基-2，5-二氯苯甲酸(草 灭平(chloramben))。麦草畏是本发明中尤其有用的除草剂。植物 生长素样除草剂的第四化学族是喹啉羧酸族，其一个例子是3，7-二氯 -8-喹啉羧酸(二氯喹啉酸(quinclorac))。这种除草剂是独特的， 因为它也可以控制某些禾草杂草，不像其它植物生长素样除草剂那 样基本上只控制阔叶或双子叶植物。该分类中另一种除草剂是7-氯 -3-甲基-8-喹啉羧酸(氯甲喹啉酸(quinmerac))。

“麦草畏”指3，6-二氯-邻-茴香酸或3，6-二氯-2-甲氧基苯甲酸及其 酸和盐。其盐包括异丙胺盐、二甘醇胺盐、二甲胺盐、钾盐和钠盐。 麦草畏的商业制剂的例子包括，但不限于，(作为DMA盐)、 (作为DGA盐)、VEL-58-CS-11TM和VanquishTM(BASF， 作为DGA盐)。

可在www.greenbook.net/docs/Label/L2281.pdf发现麦草畏可控 制的杂草的总清单。该除草剂特别可用于控制较高的杂草和较难控 制的杂草，如马齿苋(purslane)、镰刀豆(sicklepod)、牵牛花 (morninglory)和野荞麦(wild buckwheat)。麦草畏可以用于控制 对其它除草剂不敏感的杂草。为了控制大豆田地中的杂草，曾经推 荐在施用ClarityTM(麦草畏的一种制剂)之后，最小累积的一英寸 的降雨或喷灌，接着是(对于4-8盎司/英亩的施用量)14天的等待 期或(对于16盎司/英亩的施用量)28天的等待期(见VanGessel and Majek，2005中的表22)。的标签推荐，在高梁种植前至少 15天应用。类似地，对于棉花，推荐在向田地施用或 之后，在种植棉花种子之前，有21天的等待期(Craig等人，2005， www.ipmcenters.org/cropprofiles/docs/tncotton.html)，并且标签未推 荐发芽前和发芽后施用。对于玉米的发芽后杂草控制，麦草畏是第 五广泛用于阔叶杂草的除草剂。但是，尽管用于阔叶杂草控制的最 佳量是280-560g/h(克/公顷)，但是对玉米的平均用量是168g/h， 因为较高的用量和在某些环境条件下，麦草畏能够损伤玉米。在一 种包含显示麦草畏耐受性的农作物植物的种植系统中，对种植者来 说，施用麦草畏的时机和用量可以有更多的灵活性。

“草甘膦”指N-膦酰基甲基甘氨酸及其盐。草甘膦有多种制剂可 商购。草甘膦的这些制剂的例子包括，但不限于，由Monsanto Company销售的 和除草剂，全部都包含异丙胺盐形式的草甘膦； 含有钾盐形式的草甘膦的WEATHERMAX；含有铵盐 形式的草甘膦的和除草剂；含有钠盐形 式的草甘膦的和含有三甲基锍盐形式的 草甘膦的除草剂。

“第一处理”指在种植前、种植时、发芽前或这些阶段的组合， 顺序地或以罐混合的方式施用一种或多种除草剂。

“第二处理”指在发芽后阶段的早期，顺序地或以罐混合的方式 施用一种或多种除草剂。

“第三处理”指在发芽后阶段的后期，顺序地或以罐混合的方式 施用一种或多种除草剂。这些阶段对于每种农作物是不同的。一般 地，它指作物冠层的发育，其影响杂草生长的遮蔽情况和使施用设备 通过作物行的能力。

“第四处理”指在收获前阶段，顺序地或以罐混合的方式施用一 种或多种除草剂。一般地，将收获前定义为以下时期：农作物和杂 草仍然是绿色，且生长至发芽后除草剂仍然有效的程度。

“第五处理”指在除去农作物的收获后阶段，顺序地或以罐混合 的方式施用一种或多种除草剂。这可以是在秋季或春季的处理、休 耕时期的处理或在两季农作物种植情况下在农作物种植之间的处 理。

“抗除草剂的杂草”定义为用以前用来控制该杂草的除草剂量不 再能控制的杂草生物型，且其性状传递给后代(可遗传的)。表1 给出了这些杂草的非限制性的例子。

“难控制的杂草”指难以控制的杂草。

“自生植物”指由在收获后留在前一生长季的土壤中或土壤上的 种子生长而成的耐受除草剂的农作物植物。

“种植系统”指农作物、其显示的任一种除草剂耐受性和在农作 物发育的不同阶段可用的附随的除草处理选项的相互组合，产生高 产农作物。

“转基因”细胞和有机体包括，正常情况下不降解如麦草畏的除 草剂，但是经转化后能够降解这种除草剂并显示农业上有用水平的 对除草剂施用的耐受性的细胞和有机体。

表1.耐受除草剂的杂草。按WSSA或HRAC分类；见表2。

  抗ACCase抑制剂的杂草(类别1或A)   大穗看麦娘(Alopecurus myosuroides)、野燕麦(Avena fatua)、不实野燕   麦(Avena sterilis)、法国野燕麦(Avena sterilis ludoviciana)、车前状臂   形草(Brachiaria plantaginea)、双雄雀麦(Bromus diandrus)、硬雀麦(Bromus   rigidus)、Cynosurus echinatus、升马唐(Digitaria ciliaris)、止血马唐(Digitaria   ischaemum)、马唐(Digitaria sanguinalis)、芒稷(Echinochloa colona)、   稗(Echinochloa crus-galli)、稻稗(Echinochloa oryzicola)、水稗(Echinochloa   phyllopogon)、蟋蟀草(Eleusine indica)、Eriochloa punctata、Hordeum   glaucum、墙大麦(Hordeum leporinum)、田间毛鸭嘴(Ischaemum rugosum)、   千金子(Leptochloa chinensis)、多花黑麦草(Lolium multiflorum)、黑麦   草(Lolium perenne)、欧毒麦(Lolium persicum)、瑞士黑麦草(Lolium   rigidum)、小虉草(Phalaris minor)、奇虉草(Phalarisparadoxa)、筒轴   茅(Rottboellia exaltata)、大狗尾草(Setaria faberi)、狗尾草(Setaria viridis)、   Setaria viridis var.robusta-alba Schreiber、Setaria viridis var.   robusta-purpurea、Snowdenia polystachea、石茅(Sorghum halepense)、苏   丹草(Sorghum sudanese)   抗ALS抑制剂的杂草(类别2或B)   泽泻(Alisma plantago-aquatica)、大穗看麦娘(Alopecurus myosuroides)、   北美苋(Amaranthus blitoides)、绿穗苋(Amaranthus hybridus)、凹头苋   (Amaranthus lividus)、长芒苋(Amaranthuspalmeri)、鲍威尔苋(Amaranthus   powellii)、野生苋(Amaranthus quitensis)、反枝苋(Amaranthus retroflexus)、   野苋(Amaranthus rudis)、高水麻(Amaranthus tuberculatus)、豚草(Ambrosia   artemisiifolia)、三裂叶豚草(Ambrosia trifida)、耳基水苋菜(Ammania   auriculata)、紫水苋菜(Ammania coccinea)、臭春黄菊(Anthemis cotula)、   阿披拉草(Apera spica-venti)、野燕麦(Avena fatua)、法国野燕麦(Avena   sterilis ludoviciana)、圆叶虎耳(Bacopa rotundifolia)、三叶鬼针草(Bidens   pilosa)、Bidens subalternans、野芥(Brassica tournefortii)、旱雀麦(Bromus   tectorum)、小果亚麻荠(Camelina microcarpa)、藜(Chenopodium album)、

  茼蒿(Chrysanthemum coronarium)、香丝草(Conyza bonariensis)、小蓬   草(Conyza canadensis)、野地菟丝子(Cuscuta campestris)、异型莎草   (Cyperus difformis)、Damasonium minus，播娘蒿(Descurainia sophia)、   马唐(Digitaria sanguinalis)、细叶二行芥(Diplotaxis tenuifolia)、芒稷   (Echinochloa colona)、稗(Echinochloa crus-galli)、车前叶蓝蓟(Echium   plantagineum)、长柄沟繁缕(Elatine triandra var.pedicellata)、蟋蟀草   (Eleusine indica)、白苞猩猩草(Euphorbia heterophylla)、卷茎蓼(Fallopia   convolvulus)、水虱草(Fimbristylis miliacea)、黄鼬瓣花(Galeopsis tetrahit)、   猪殃殃(Galium spurium)、向日葵(Helianthus annuus)、Hordeum glaucum、   假苍耳(Iva xanthifolia)、Ixophorus unisetus、地肤(Kochia scoparia)、   锯齿莴苣(Lactuca serriola)、黄花蔺(Limnocharis flava)、直立石龙尾   (Limnophila erecta)、石龙尾(Limnophila sessiliflora)、美洲母草(Lindernia   dubia)、Lindernia dubia var.major、狭叶母草(Lindernia micrantha)、陌   上菜(Lindernia procumbens)、多花黑麦草(Lolium multiflorum)、黑麦   草(Lolium perenne)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、冰叶日中花   (Mesembryanthemum crystallinum)、雨久花(Monochoria korsakowii)、   鸭舌草(Monochoria vaginalis)、球果芥(Neslia paniculata)、虞美人(Papaver   rhoeas)、银胶菊(Parthenium hysterophorus)、Pentzia suffruticosa、小虉   草(Phalaris minor)、野萝卜(Raphanus raphanistrum)、萝卜(Raphanus   sativus)、皱果荠(Rapistrum rugosum)、印度水猪母乳(Rotala indica var.   uliginosa)、冠果草(Sagittaria guyanensis)、蒙特登慈姑(Sagittaria   montevidensis)、矮慈姑(Sagittaria pygmaea)、俄罗斯蓟(Salsola iberica)、   Scirpusjuncoides var.ohwianus、北水毛花(Scirpus mucronatus)、大狗尾   草(Setaria faberi)、金色狗尾草(Setaria lutescens)、狗尾草(Setaria viridis)、   Setaria viridis var.robusta-alba Schreiber、刺黄花稔(Sida spinosa)、野欧   白芥(Sinapis arvensis)、戟叶抪娘蒿(Sisymbrium orientale)、Sisymbrium   thellungii、东方龙葵(Solanum ptycanthum)、断续菊(Sonchus asper)、   苦苣菜(Sonchus oleraceus)、高粱(Sorghum bicolor)、石茅(Sorghum   halepense)、繁缕(Stellaria media)、遏蓝菜(Thlaspi arvense)、欧洲苍   耳(Xanthium strumarium)   抗芳基氨基丙酸的杂草(类别25或Z(未分类))   野燕麦(Avena fatua)、法国野燕麦(Avena sterilis ludoviciana)   抗双吡啶鎓类(Bipyridiliums)的杂草(类别22或D)   凹头苋(Amaranthus lividus)、Arctotheca calendula、三叶鬼针草(Bidens   pilosa)、香丝草(Conyza bonariensis)、小蓬草(Conyza canadensis)、   苏门白酒草(Conyza sumatrensis)、Crassocephalum crepidiodes、Cuphea   carthagenenis、蟋蟀草(Eleusine indica)、粘柳叶菜(Epilobium adenocaulon)、   费城飞蓬(Erigeron philadelphicus)、Hordeum glaucum、墙大麦(Hordeum

  leporinum)、田间毛鸭嘴(Ischaemum rugosum)、紫萍(Landoltia punctata)、   北美独行菜(Lepidium virginicum)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、雨久   花(Monochoria korsakowii)、早熟禾(Poa annua)、光果龙葵(Solanum   americanum)、龙葵(Solanum nigrum)、Vulpia bromoides、黄鹌菜(Youngia   japonica)   抗类胡萝卜素生物合成抑制剂的杂草(类别12或F1)   黑藻(Hydrilla verticillata)、野萝卜(Raphanus raphanistrum)   抗纤维素抑制剂的杂草(类别20和21或L)   Echinochloa erecta   抗氯乙酰胺和其它化合物的杂草(类别15或K3)   稗(Echinochloa crus-galli)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)   抗二硝基苯胺和其它化合物的杂草(类别3或K1)   大穗看麦娘(Alopecurus myosuroides)、长芒苋(Amaranthus palmeri)、   野燕麦(Avena fatua)、稗(Echinochloa crus-galli)、蟋蟀草(Eleusine indica)、   Fumaria densiflora、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、早熟禾(Poa annua)、   狗尾草(Setaria viridis)、石茅(Sorghum halepense)   抗甘氨酸的杂草(类别9或G)   长芒苋(Amaranthus palmeri)、豚草(Ambrosia artemisiifolia)、香丝草(Conyza   bonariensis)、小蓬草(Conyza canadensis)、蟋蟀草(Eleusine indica)、   多花黑麦草(Lolium multiflorum)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、长叶   车前(Plantago lanceolata)   抗有丝分裂抑制剂的杂草(类别23或K2)   瑞士黑麦草(Lolium rigidum)   抗腈和其它化合物的杂草(类别6或C3)   欧洲千里光(Senecio vulgaris)   抗有机胂化合物(Organoarsenical)的杂草(类别17或Z(未分类))   欧洲苍耳(Xanthium strumarium)   抗光合系统II抑制剂的杂草(类别5或C1(莠去津类型))   苘麻(Abutilon theophrasti)、大穗看麦娘(Alopecurus myosuroides)、白   苋(Amaranthus albus)、北美苋(Amaranthus blitoides)、籽粒苋(Amaranthus   cruentus)、绿穗苋(Amaranthus hybridus)、凹头苋(Amaranthus lividus)、   长芒苋(Amaranthus palmeri)、鲍威尔苋(Amaranthus powellii)、反枝苋   (Amaranthus retroflexus)、野苋(Amaranthus rudis)、豚草(Ambrosia   artemisiifolia)、蚤缀(Arenaria serpyllifolia)、展枝滨藜(Atriplex patula)，   狼把草(Bidens tripartite)、短柄草(Brachypodium distachyon)、芸薹(Brassica   campestris)、旱雀麦(Bromus tectorum)、荠(Capsella bursa-pastoris)、   Chamomilla suaveolens、藜(Chenopodium album)、小藜(Chenopodium   ficifolium)、杂配藜(Chenopodium hybridum)、多子藜(Chenopodium

  polyspermum)、Chenopodium strictum var.Glaucophyllum、Chloris inflate、   香丝草(Conyza bonariensis)、小蓬草(Conyza canadensis)、蔺状隐花草   (Crypsis schoenoides)、曼陀罗(Datura stramonium)、马唐(Digitaria   sanguinalis)、稗(Echinochloa crus-galli)、粘柳叶菜(Epilobium   adenocaulon)、Epilobium tetragonum、卷茎蓼(Fallopia convolvulus)、   Galinsoga ciliate、地肤(Kochia scoparia)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、   Lophochloa smyrnacea、同花母菊(Matricaria matricarioides)、毛线稷   (Panicum capillare)、洋野黍(Panicum dichotomiflorum)、奇虉草(Phalaris   paradoxa)、Plantago lagopus、早熟禾(Poa annua)、扁蓄(Polygonum   aviculare)、水蓼(Polygonum hydropiper)、酸膜叶蓼(Polygonum   lapathifolium)、Polygonum pensylvanicum、春蓼(Polygonum persicaria)、   长芒棒头草(Polypogon monspeliensis)、马齿苋(Portulaca oleracea)、   野萝卜(Raphanus raphanistrum)、欧洲千里光(Senecio vulgaris)、大狗   尾草(Setaria faberi)、金色狗尾草(Setaria glauca)、倒刺狗尾草(Setaria   verticillata)、狗尾草(Setaria viridis)、Setaria viridis var.Major、野欧白   芥(Sinapis arvensis)、龙葵(Solanum nigrum)、断续菊(Sonchus asper)、   繁缕(Stellaria media)、类黍尾稃草(Urochloa panicoides)、欧荨麻(Urtica   urens)   抗PPO抑制剂的杂草(类别14或E)   野苋(Amaranthus rudis)、豚草(Ambrosia artemisiifolia)、白苞猩猩草   (Euphorbia heterophylla)   抗吡唑鎓类(Pyrazoliums)的杂草(类别Z(未分类))   野燕麦(Avena fatua)   抗合成植物生长素/植物生长素样除草剂的杂草(类别4或O)   飞廉(Carduus nutans)、Carduus pycnocephalus、黄矢车菊(Centaurea   solstitialis)、丛路蓟(Cirsium arvense)、竹节花(Commelina diffusa)、   田旋花(Convolvulus arvensis)、野胡萝卜(Daucus carota)、止血马唐   (Digitaria ischaemum)、芒稷(Echinochloa colona)、稗(Echinochloa   crus-galli)、孔雀稗(Echinochloa crus-pavonis)、水虱草(Fimbristylis   miliacea)、黄鼬瓣花(Galeopsis tetrahit)、猪殃殃(Galium spurium)、   地肤(Kochia scoparia)、黄花蔺(Limnocharis flava)、直立石龙尾(Limnophila   erecta)、Matricaria perforate、虞美人(Papaver rhoeas)、毛茛(Ranunculus   acris)、野欧白芥(Sinapis arvensis)、Soliva sessilis、尖瓣花(Sphenoclea   zeylanica)、繁缕(Stellaria media)   抗硫代氨基甲酸盐(或酯)和其它化合物的杂草(类别8或N)   野燕麦(Avena fatua)、稗(Echinochloa crus-galli)、稻稗(Echinochloa   oryzicola)、水稗(Echinochloa phyllopogon)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、   针茅草(Nassella trichotoma)、早熟禾(Poa annua)、Stipa neesiana

  抗三唑、脲、异噁唑啉酮类(isoxazolidiones)的杂草(类别11或F3)   匍茎剪股颖(Agrostis stolonifera)、瑞士黑麦草(Lolium rigidum)、早熟   禾(Poa annua)、扁蓄(Polygonum aviculare)   抗脲和酰胺的杂草(类别7或C2)   日本看麦娘(Alopecurus japonicus)、大穗看麦娘(Alopecurus myosuroides)、   鲍威尔苋(Amaranthus powellii)、反枝苋(Amaranthus retroflexus)、豚   草(Ambrosia artemisiifolia)、阿披拉草(Apera spica-venti)、菵草(Beckmannia   syzigachne)、旱雀麦(Bromus tectorum)、藜(Chenopodium album)、   Chloris inflate、小蓬草(Conyza canadensis)、芒稷(Echinochloa colona)、   稗(Echinochloa crus-galli)、Echinochloa erecta、白苞猩猩草(Euphorbia   heterophylla)、多花黑麦草(Lolium multiflorum)、瑞士黑麦草(Lolium   rigidum)、小虉草(Phalaris minor)、早熟禾(Poa annua)、马齿苋(Portulaca   oleracea)、欧洲千里光(Senecio vulgaris)

表2.通过主要作用位点分类的除草剂

  HRAC   类别   作用模式   化学族   活性成分   WSSA   类别   A   乙酰辅酶A羧化酶   (ACCase)的抑制   芳氧基苯氧基丙   酸酯类‘FOPs’   炔草酯(clodinafop-propargyl)   氰氟草酯(cyhalofop-butyl)   禾草灵(diclofop-methyl)   精噁唑禾草灵(fenoxaprop-P-ethyl)   精吡氟禾草灵(fluazifop-P-butyl)   吡氟氯禾灵(haloxyfop-R-methyl)   恶草酸(propaquizafop)   精喹禾灵(quizalofop-P-ethyl)   1   环己烯二酮类   ‘DIMs’   禾草灭(alloxydim)   丁苯草酮(butroxydim)   (建议的环苯草酮(clefoxydim))   烯草酮   噻草酮(cycloxydim)   稀禾定   得杀草(tepraloxydin)   三甲苯草酮(tralkoxydim)   B   乙酰乳酸合酶ALS(乙酰   羟酸合酶AHAS)的抑制   磺酰脲类   酰嘧磺隆(amidosulfuron)   四唑嘧磺隆(azimsulfuron)   苄嘧磺隆(bensulfuron-methyl)   氯嘧磺隆   2

  HRAC   类别   作用模式   化学族   活性成分   WSSA   类别   氯磺隆(chlorsulfuron)   醚磺隆(cinosulfuron)   环磺隆(cyclosulfamuron)   胺苯磺隆(ethametsulfuron-methyl)   乙氧嘧磺隆(ethoxysulfuron)   啶嘧磺隆(flazasulfuron)   氟啶嘧磺隆   (flupyrsulfuron-methyl-Na)   甲酰胺磺隆(foramsulfuron)   氯吡嘧磺隆(halosulfuron-methyl)   唑吡嘧磺隆(imazosulfuron)   碘甲磺隆钠盐(iodosulfuron)   甲磺隆(metsulfuron-methyl)   烟嘧磺隆(nicosulfuron)   环氧嘧磺隆(oxasulfuron)   甲基氟嘧磺隆(primisulfuron-methyl)   氟磺隆(prosulfuron)   吡嘧磺隆(pyrazosulfuron-ethyl)   玉嘧磺隆(rimsulfuron)   甲嘧磺隆(sulfometuron-methyl)   磺酰磺隆(sulfosulfuron)   噻磺隆(thifensulfuron-methyl)   醚苯磺隆(triasulfuron)   苯磺隆(tribenuron-methyl)   三氟啶磺隆   氟胺磺隆(triflusulfuron-methyl)   三氟甲磺隆(tritosulfuron)   咪唑啉酮类   甲咪唑烟酸(imazapic)   咪草酸(imazamethabenz-methyl)   甲氧咪草烟(imazamox)   灭草烟(imazapyr)   灭草喹(imazaquin)   咪唑乙烟酸   三唑嘧啶类   氯酯磺草胺(cloransulam-methyl)   双氯磺草胺(diclosulam)   双氟磺草胺(florasulam)   唑嘧磺草胺(flumetsulam)

  HRAC   类别   作用模式   化学族  活性成分   WSSA   类别  磺草唑胺(metosulam)   嘧啶(硫代)苯甲   酸酯类  水杨酸双嘧啶(bispyribac-Na)  嘧啶肟草醚(pyribenzoxim)  环酯草醚(pyriftalid)  嘧草硫醚  嘧草酸(pyriminobac-methyl)   磺酰氨基羰基三   唑啉酮类  氟酮磺隆(flucarbazone-Na)  丙苯磺隆(procarbazone-Na)   C1   光系统II的光合作用的   抑制   三嗪类  莠灭净(ametryne)  莠去净  氰草津(cyanazine)  敌草净(desmetryne)  二甲丙乙净(dimethametryne)  扑灭通(prometon)  扑草净  扑灭津(propazine)  西玛律(simazine)  西草净(simetryne)  特丁通(terbumeton)  草净津(terbuthylazine)  特丁净(terbutryne)  草达津(trietazme)   5   三嗪酮类  环嗪酮(hexazinone)  苯嗪草酮(metamitron)  嗪草酮   三唑啉酮类  氨唑草酮(amicarbazone)   尿嘧啶类  除草定(bromacil)  环草定(lenacil)  特草定(terbacil)   哒嗪酮类  吡唑啉(pyrazon)＝杀草敏  (chloridazon)   氨基甲酸苯酯类  甜菜安(desmedipham)  甜安宁(phenmedipham)   C2   光系统II的光合作用的   抑制   脲类  绿秀隆(chlorobromuron)  绿麦隆(chlorotoluror)  枯草隆(chloroxuron)  恶唑隆(dimefuron)   7

  HRAC   类别   作用模式   化学族   活性成分   WSSA   类别   敌草隆   赛唑隆(ethidimuron)   非草隆(fenuron)   伏草隆(见F3)   异丙隆(isoproturon)   异噁隆(isouron)   利谷隆(linuron)   甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)   莠谷隆(metobromuron)   甲氧隆(metoxuron)   绿谷隆(monolinuron)   草不隆(neburon)   环草隆(siduron)   特丁噻黄隆(tebuthiuron)   酰胺类   敌稗(propanil)   戊酰苯草胺(pentanochlor)   C3   光系统II的光合作用的   抑制   腈类   溴酚肟(bromofenoxim)(也是   M)   溴苯腈(也是类别M)   碘苯腈(ioxynil)(也是类别M)   6   苯并噻二嗪酮类   苯达松(Bentazon)   苯-哒嗪类   哒草特(pyridate)   pyridafol   D   光系统I-电子转移   联吡啶鎓类   敌草快(diquat)   百草枯   22   E   原卟啉原氧化酶(PPO)   的抑制   二苯乙烯类   三氟羧草醚(acifluorfen-Na)   甲羧除草醚(bifenox)   甲氧除草醚(chlomethoxyfen)   乙羧氟草醚(fluoroglycofen-ethyl)   氟磺胺草醚   嘉磷噻(halosafen)   乳氟禾草灵(lactofen)   乙氧氟草醚(oxyfluorfen)   14   苯基吡唑类   异丙吡草酯(fluazolate)   吡草醚(pyraflufen-ethyl)   N-苯基邻苯二酰   胺类   吲哚酮草酯(cinidon-ethyl)   丙炔氟草胺

  HRAC   类别   作用模式   化学族  活性成分   WSSA   类别  氟烯草酸(flumiclorac-pentyl)   噻二唑类  嗪草酸甲酯(fluthiacet-methyl)  噻二唑草胺(thidiazimin)   噁二唑类  恶草酮(oxadiazon)  炔恶草酮(oxadiargyl)   三唑啉酮类  草芬定(azafenidin)  唑酮草酯  甲磺草胺(sulfentrazone)   噁唑烷二酮类  环戊噁草酮(pentoxazone)   嘧啶二酮类  双苯嘧草酮(benzfendizone)  氟丙嘧草酯(butafenacil)   其它  pyrazogyl  氟唑草胺(profluazol)   F1   漂白：八氢番茄红素去饱   和酶步骤(PDS)的类胡   萝卜素生物合成的抑制   哒嗪酮类  氟草敏   12   吡啶羧酰胺类  吡氟草胺(diflufenican)  氟吡草胺(picolinafen)   其它  氟丁酰草胺(beflubutamid)  氟啶酮(fluridone)  氟咯草酮(flurochloridone)  呋草酮(flurtamone)   F2   漂白：4-羟基苯基-丙酮酸   -双加氧酶(4-HPPD)的抑   制   三酮类  硝草酮(mesotrione)  磺草酮(sulcotrione)   28   异噁唑类  异恶氯草酮(isoxachlortole)  异噁唑草酮   吡唑类  吡草酮(benzofenap)  苄草唑(pyrazolynate)  苄草唑(pyrazoxyfen)   其它  苯并双环酮(benzobicyclon)   F3   漂白(Bleaching)：类胡   萝卜素生物合成(未知的   靶标)的抑制   三唑类  杀草强(amitrole)  (体内番茄红素环化酶的抑制)   11   异噁唑烷酮类  异噁草酮(clomazone)   13   脲类  伏草隆(见C2)

  HRAC   类别  作用模式   化学族 活性成分   WSSA   类别   二苯醚类 苯草醚(Aclonifen)   G  EPSP合成的抑制   甘氨酸类 草甘膦 草硫膦(sulfosate)   9   H  谷氨酰胺合成的抑制   次膦酸类 草丁膦-铵 双丙氨磷(bialaphos＝bilanaphos)   10   I  DHP(二氢蝶酸)合酶的  抑制   氨基甲酸酯类 磺草灵(Asulam)   18   K1  微管组装的抑制   二硝基苯胺类 氟草胺(benefin＝benfluralin) 丁乐灵(butralin) 氨氟灵(dinitramine) 烯氟灵(ethalfluralin) 氨磺灵(oryzalin) 二甲戊乐灵 氟乐灵(trifluralin)   3   氨基磷酸盐类 甲基胺草磷(amiprophos-methyl) 抑草磷(butamiphos)   吡啶类 氟硫草定(dithiopyr) 噻草定(thiazopyr)   苯酰胺类 戊炔草胺(propyzamide＝ pronamide) 牧草胺(tebutam)   苯二羧酸类 DCPA＝敌草索 (chlorthal-dimethyl)   3   K2  有丝分裂/微管组织的抑  制   氨基甲酸酯类 氯苯胺灵(chlorpropham) 苯胺灵(propham) 卡草胺(carbetamide)   23   K3  细胞分裂的抑制(VLCFA  的抑制；见注释)   氯乙酰胺类 乙草胺 甲草胺 丁草胺(butachlor)   15 二甲草胺(dimethachlor) 汰草灭(dimethanamid) 吡草胺(metazachlor) 异丙甲草胺 烯草胺(pethoxamid) 丙草胺(pretilachlor) 毒草胺(propachlor) 异丙草胺(propisochlor)

  HRAC   类别   作用模式   化学族 活性成分   WSSA   类别 甲氧噻草胺(thenylchlor)   乙酰胺类 草乃敌(diphenamid) 草萘胺(napropamide) 萘丙胺(naproanilide)   氧乙酰胺类 氟噻草胺((flufenacet) 苯噻酰草胺(mefenacet)   四唑啉酮类 四唑酰草胺(fentrazamide)   其它 莎稗磷(anilofos) 苯酮唑(cafenstrole) 茚草酮(indanofan) 派草磷(piperophos)   L   细胞壁(纤维素)合成的   抑制   腈类 敌草腈(dichlobenil) 赛草青(chlorthiamid)   20   苯酰胺类 异噁草胺(Isoxaben)   21   三唑羧酰胺类 氟胺草唑(Flupoxam)   M   解偶联(膜破坏)   二硝基苯酚 二硝酚(DNOC) 地乐酚(dinoseb) 特乐酯(dinoterb)   24   N   脂质合成的抑制-不是   ACCase的抑制   硫代氨甲酸酯类 丁草特(butylate) 草灭特(cycloate) 哌草丹(dimepiperate) EPTC 禾草畏(esprocarb) 禾草特(molinate) 坪草丹(orbencarb) 克草猛(pebulate) 苄草丹(prosulfocarb) 禾草丹(thiobencarb＝benthiocarb) 仲草丹(tiocarbazil) 野麦畏(triallate) 灭草猛(vernolate)   8   二硫代磷酸酯类 地散磷(Bensulide)   苯并呋喃类 呋草黄(benfuresate) 乙呋草黄(ethofumesate)   氯代羧酸类 TCA 茅草枯(dalapon) 氟丙酸(flupropanate)   26

  HRAC   类别  作用模式   化学族   活性成分   WSSA   类别   O  合成的植物生长素(植物  生长素样)   苯氧基羧酸类   氯甲酰草胺   2，4-D   2，4-DB   2，4-滴丙酸＝2，4-DP   MCPA   MCPB   2-甲-4-氯丙酸(mecoprop)＝MCPP   ＝CMPP   4   苯甲酸类   草灭平   麦草畏   杀草畏   2，3，6-TBA   吡啶羧酸类   三氯吡啶酸   氟草烟   毒莠定   绿草定   喹啉羧酸类   二氯喹啉酸(也是类别L)   氯甲喹啉酸   其它   草除灵(Benazolin-ethyl)   P  植物生长素转运的抑制   邻氨甲酰苯甲酸   酯类   缩氨基脲类   萘草胺(naptalam)   氟吡草腙-Na   19   R  ...   ...   ...   S  ...   ...   ...   .  ...   ...   ...   Z  未知   芳基氨基丙酸类   麦草氟甲酯/异丙酯   (Flamprop-M-methyl/-isopropyl)   25   吡唑鎓   燕麦枯(difenzoquat)   8   有机胂类   DSMA   甲基胂酸钠(MSMA)   17   其它   溴丁酰草胺(bromobutide)   (氯)-抑草丁(chloro)-flurenol)   27   环庚草醚(cinmethylin)   苄草隆(cumyluron)   棉隆(Dazomet)   汰草龙(dymron＝daimuron)   甲基杀草隆(methyl-dimuron＝

  HRAC   类别   作用模式   化学族  活性成分   WSSA   类别  methyl-dymron)  乙氧苯草胺(etobenzanid)  蔓草磷(fosamine)  威百亩(metam)  去稗安(oxaziclomefone)  油酸(oleic acid)  壬酸(pelargonic acid)  稗草畏(pyributicarb)

实施例

包括下面的实施例，以说明本发明的实施方式。本领域的技术 人员应该理解，以下实施例中公开的技术代表发明人发现的在本发 明的实施中作用良好的技术。但是，根据本公开内容，本领域的技 术人员应该理解，在不背离本发明的概念、精神和范围的情况下， 对公开的具体实施例可以进行许多改变，并仍然能够获得类似的结 果。更具体地说，在化学和生理学上都相关的某些试剂显然可以取 代本文描述的试剂，而能够获得相同或类似的结果。所有这些对于 本领域技术人员来说显而易见的类似的取代和修饰，都被视为在由 附加的权利要求书限定的本发明的精神、范围和概念之内。

实施例1

控制杂草的种植系统

通过表3-5举例说明本发明的一种实施方式，其中，为了控制杂 草，在植物生长和发育的不同阶段，使用耐受草甘膦、麦草畏、草 丁膦、2，4-D或其组合(I-X)的农作物，伴随除草处理(第一到第 五)。对于大豆，可以定义植物生长阶段如下：发芽被称为“VE”生 长阶段，而大豆发芽后阶段的早期经常被称为“VC”到“V3”，大豆发 芽后阶段的后期被称为“V4”到“R2”(例如，McWilliams等人，1999)。 “收获前”典型地发生于大豆生理成熟之后但收获之前，而“收获后” 发生于收获之后。因此，除草剂的“发芽前”施用指在农作物和杂草 发芽前、种植前或种植后的施用。

对于棉花，生长阶段和相关除草剂施用的时机可以定义如下：

发芽前：为了控制冬季和春季的杂草，在农作物发芽前的任何 时间。

发芽后阶段的早期：从农作物发芽时到营养生长阶段进行的施 用，即，直至小头棉蕾的阶段(pin-head square stage)。

发芽后阶段的后期：在棉花生长的生殖期进行的施用，即，从 小头棉蕾的阶段直至棉桃开口(boll opening)开始时。

收获前：从棉桃开口开始时直至恰好收获前进行的施用。大部 分产品标签包括禁止在收获前的一定天数之内施用。例如，不可以 在收获的7天之内应用Roundup。对于其它产品，这种收获前的限 制可以是40-70天。

收获后：为了控制可能在收获时存在或冬季之前发芽的晚季杂 草，在收获后进行的施用。

本领域的技术人员可以理解，对于对农作物发芽或农作物收获 进行多么密集的施用没有限制。但是，某些产品可能在标签上具有 限制，这是基于农作物损伤的可能性(例如，不在种植的21天之内 施用)或由于种子中的化学残留水平(例如，不在收获的40天之内 施用)。

用于每种处理的各种除草剂选项用字母A、B、C等标出。使用 这些耐受除草剂的农作物以及在其生长的各个阶段伴随的处理，导 致控制杂草、抗目前的除草剂的杂草、难控制的杂草、自生植物， 并使抗除草剂杂草将来的发育最小化。表4和5分别给出了对于大 豆和棉花的除草剂的量。用于玉米的示例性的除草剂如表6所示。 利用本领域内已知的装置和方法进行除草剂处理。

表4.用于大豆种植系统的除草剂和施用量的例子。

表5.用于棉花种植系统的除草剂和施用量的例子。颗粒(G)、 可湿性粉末(W或WP)、干燥可流动(DF)、水分散性颗粒(WDG)、 可溶性粉末(S)、水可溶物(SL)、液体(L)、水溶液(AS)、可 乳化的浓缩物(E或EC)、微包封的乳剂(ME)、可流动(F)、液 体盎司(fl oz)和品脱(pt)。

表6.在本发明的种植系统中与麦草畏用于玉米的示例性发芽前和 发芽后除草剂和组合。发芽前包括第一和/或第五处理。发芽后包括第 二、第三、第四和/或第五处理。

  化学族  通用名   商品名   发芽前或后的处理   氯乙酰胺-乙酰胺类  乙草胺  异丙甲草胺/  s-异丙甲草胺  甲草胺       Dual Magnum   Pre(也可使用Post)   三嗪类  莠去净  西玛律   Pre和Post   4HPPD  异噁唑+硝草酮  硝草酮   CONVERGE   Callisto   Pre   ALS/生长调节剂  唑嘧磺草胺  三氯吡啶酸  三氯吡啶酸+唑嘧  磺草胺   Python   Stinger   Hornet   Pre   二硝基苯胺类  二甲戊乐灵   Prowl   Pre   EPSPS抑制剂  草甘膦   Roundup   Post   ALS  磺酰脲类(玉嘧磺  隆、烟嘧磺隆)  和咪唑啉酮类  (咪唑乙烟酸)     Accent     Lightning(也可以   在前应用)   Post   磷酸  草丁膦   Liberty   Post   缩氨基脲类  氟吡草腙   Distinct   (+dicamba)   Post   4-HPPD  硝草酮+  异噁唑   Callisto   Balance   Post   三嗪  莠去净   Post   植物生长素：   苯氧基乙酸   吡啶羧酸    2，4-D  三氯吡啶酸   Lontrel，Stinger   Post   PS2抑制剂   腈类   苯并噻二嗪类    溴苯腈  苯达松     Buctril，Pardner   Basagran   Post   PPO’s   N-苯基邻苯二酰胺类   三唑啉酮类    氟烯草酸  唑酮草酯     Resource   Aim EW   Post

实施例2

一种用于使抗除草剂杂草的发育最小化的方法

如表7所示，举例说明了通过用第二年的包含耐受一种或多种 低风险除草剂的农作物和附随的除草处理的第二种植系统(I-XII； 表3)接替第一年的包含耐受一种或多种低风险除草剂的农作物和附 随的除草处理的第一种植系统(I-XII；表3)轮种，使抗除草剂杂草 群体的发育最小化的方法。例如，如果第一种植系统中的农作物耐 受草甘膦，那么第二种植系统中的农作物可以耐受植物生长素样除 草剂，或者耐受草甘膦和植物生长素样除草剂。除草剂的施用量分 别如表4(对于大豆)和表5(对于棉花)所示。利用本领域内已知 的装置和方法应用各种除草剂处理。

实施例3

用于处理杂草的种植系统的具有麦草畏和草甘膦耐受性的转基因大 豆的产生

产生具有草甘膦耐受性的转基因种子的方法是本领域中已知 的，这样的种子可以由本领域的技术人员通过使用如美国专利 5,627,061、美国专利RE39,247、美国专利6,040,497、美国专利 5,094,945、WO04074443和WO04009761所述的编码抗草甘膦的5- 烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)的聚核苷酸来产生，本文 引入所有这些文献作为参考。已经产生了含有性状 事件40-3-2(Padgette等人，1995)的大豆育种系。命名为MON19788 的大豆植物的种子已经以ATCC登录号PTA-6708保存。

也可以通过引入编码如草甘膦氧化还原酶(GOX，美国专利 5,463,175，本文引入作为参考)、草甘膦-N-乙酰基转移酶(GAT， 美国专利申请公开20030083480，本文引入作为参考)和草甘膦脱羧 酶(WO05003362和美国专利申请20040177399，本文引入作为参考) 的草甘膦降解酶的聚核苷酸产生耐受草甘膦的植物。

在2006年6月6日提交的美国临时申请60/811,276中已经描述 了耐受麦草畏的大豆植物。杂交每种的合适的株系，通过施用麦草 畏和草甘膦除草剂筛选后代的种子，以获得表达两种基因并显示麦 草畏和草甘膦耐受性的后代。或者，可以直接将提供对一种或两种 除草剂的耐受性的编码序列引入给定的株系中。

对具有麦草畏和草甘膦耐受性的转基因种子，测试其对麦草畏、 草甘膦或两种除草剂的耐受性。表8显示携带草甘膦和麦草畏耐受 性转基因的转基因大豆在植物生长的不同阶段对草甘膦、麦草畏和 草甘膦与麦草畏的耐受性。当在发芽前阶段应用一种或两种除草剂 时，没有在植物上看见损伤。在V3、R1和R3-4阶段用一种或两种 除草剂进行发芽后处理显示仅有极少的损伤。

表8携带草甘膦和麦草畏耐受性转基因的转基因大豆对草甘 膦、麦草畏和草甘膦与麦草畏的耐受性。

实施例4

用于处理杂草的种植系统的具有麦草畏和草甘膦耐受性的转基因大 豆的产生

通过用携带编码DMO的基因和膦丝菌素乙酰转移酶基因的植 物转化载体转化根据Zhang等人(1999)所述的大豆，产生携带麦草畏 耐受性和草丁膦耐受性转基因的大豆转基因植物469-13-19。培育该 转基因植物，以561g/ha(0.5lb/a)的施用量单独喷施CLARITY(麦 草畏)和LIBERTY(草丁膦)除草剂或以罐混合物的形式喷施这两 种除草剂，作为V3阶段的发芽后处理，并评估其耐受性。表9所示 的结果表明，携带草丁膦和麦草畏耐受性转基因的转基因植物耐受 该一种或两种除草剂。

表9.携带草丁膦和麦草畏耐受性转基因的转基因大豆显示对一 种或两种除草剂的耐受性。

  处理   施用量   gm ae/ha   ％损伤(15DAT)   (6次重复的均值)   未处理的对照   NE3001   0   0.0   LIBERTY   561   98.3   CLARITY   561   88.3   LIBERTY   CLARITY   561   561   98.3   未处理的对照   469-13-19     0     0.0   LIBERTY   561   19.2   CLARITY   561   2.7   LIBERTY   561   25.0   CLARITY   561

实施例5

用于处理杂草的种植系统的具有麦草畏、草丁膦和草甘膦耐受性的 转基因大豆的产生

通过用携带编码DMO的基因和膦丝菌素乙酰转移酶基因的植 物转化载体转化根据Zhang等人(1999)所述的大豆，产生包含麦草畏 耐受性和草丁膦耐受性的转基因的大豆转化事件(event)。将包含 这种事件的大豆植物与包含如上所述产生的携带提供草甘膦耐受性 的基因的转基因事件的大豆植物杂交。对包含转基因事件(A19788) 并携带所有三种除草剂的耐受性基因的植物，测试其对于单独或组 合施用的这些除草剂的耐受性。使用Clarity和RWMax(Roundup WeatherMAX)，野生型的大豆对照(A3525，Asgrow)在14DAT显示 80-83％的损伤，而Liberty和三种除草剂的各种罐混合物组合导致 超过95％的损伤。对于Clarity、RWMax或Clarity+RWMax处理， 转基因植物显示低于5％的损伤。对于Liberty、Liberty+Clarity或 Liberty+Clarity+RWMax处理，损伤为15％-18％。

实施例6

在种植系统中使用具有麦草畏和草甘膦耐受性的转基因大豆

在该实施例中，证明了耐受草甘膦和麦草畏的大豆在处理耐受 草甘膦或抗草甘膦的杂草中的用途。使用四行播种机，在自然长有 下面公开的杂草的田地中以30”的行种植转基因种子。区域长25英 尺，并复制3个，喷施中间两行，外行留作实验对照(running checks) (未喷施，用来评估杂草控制)。对于发芽前杂草控制，与只用 ROUNDUP的区域比较进行区域评估。对于发芽后杂草控制，与每 次发芽后施用之后21天的实验对照比较进行区域评估。在每次发芽 后处理之后7天，评估转基因大豆的损伤。区域进行表10中列出的 处理。处理11-14随目标杂草的种类而变化。处理11和12中的POST 是指向3”杂草施用，而处理13、14中的POST是指向6”杂草施用。

除非在表10中另外指出，除草剂的用量如下：Roundup(Rup； Roundup WeatherMAX)：12lbs ae/A；Clarity：16 oz/A；INTRRO：2 qts/A；Authority First：3oz/A；FirstRate：0.3oz/A；Scepter：2.8oz/A； Classic：1.25oz/A；Boundary：2.1品脱/A；Valor：2oz/A；Gangster： 1.8oz/A；Synchrony XP：0.375oz/A；Pursuit：4oz/A；Flexstar：12oz/A； Prowl H2O：2pts/A；Cobra 12.5：oz/A；Raptor：4oz/A。向含有Roundup 的所有处理增加2％w/w的AMS。3WAT是指处理后3周。

表10.除草剂施用方案。

如果杂草是Palmer藜(pigweed)或水麻(waterhemp)，那么 处理11-14如下：11)Roundup+Classic PRE fb Pursuit POST；12) Roundup+Valor+2，4-D PRE fb Roundup+Cobra POST；13) Roundup+INTRRO PRE fb Roundup+Clarity POST；14)Roundup+ Prowl H2O PRE fb Roundup+Clarity POST。

如果杂草是普通的或巨大的豚草(ragweed)，那么处理11-14 如下：11)Roundup+Scepter PRE fb FirstRate POST；12)Roundup+ FirstRate PRE fb Roundup+Flexstar POST；13)Roundup+FirstRate PRE fb Roundup+Clarity POST；14)Roundup+Boundary PRE fb Roundup+Clarity POST。

如果杂草是灰条菜(lambsquarters)或牵牛花(morningglory)， 那么处理11-14如下：11)Roundup+Scepter PRE fb Synchrony XP POST；2)Roundup+FirstRate PRE fb Roundup+Raptor POST；13) Roundup+Valor PRE fb Roundup+Clarity POST；14)Roundup+ Gangster PRE fb Roundup+Clarity POST。

如果杂草是蓬草(marestail)，那么处理11-14如下：11)Roundup +Classic PRE fb FirstRate POST；12)Roundup+Valor+2，4-D PRE fb Roundup+FirstRate POST；13)Roundup+Boundary+2，4-D PRE fb Roundup+Clarity POST；14)Roundup+Gangster+2，4-D PRE fb Roundup+Clarity POST。

可以预期，已知抗草甘膦的目标杂草不会被单独的草甘膦很好 地控制。预期草甘膦和麦草畏的混合物提供对草甘膦抗性阔叶杂草 的良好控制。预期包括种植时的发芽前除草剂和发芽后草甘膦和麦 草畏混合物的处理提供对草甘膦抗性阔叶杂草的良好控制。

实施例7

麦草畏在处理草甘膦抗性和难于控制的杂草群体中的应用

在该实施例中，证明了麦草畏耐受性在控制杂草中的用途。向 具有如草甘膦抗性阔叶杂草和其它难于控制的阔叶杂草(如藜属 (pigweed sp.)、牵牛花属(morningglory sp.)、田菁(sesbania)、 镰刀豆、prickly sida)的均一杂草群体的均匀的排水通畅的田地，优 选没有耕作的田地，在若干位置使用随机化完全区组设计(RCBD) 格式，应用除草剂处理，具有3个重复。在杂草发芽前，以所示的 量应用以下处理。在应用后7天和21天，按每个种类进行杂草控制 评估(即，控制的％)，以确定杂草控制。

表11.用于控制杂草群体的处理。

  处理   量(lb/Ac)   1   Clarity   0.25   2   Clarity   0.5   3   Clarity   0.75   4   Clarity   1.0   5   Acetochlor   1.5   6   Clarity+Acetochlor   0.25+   1.5   7   Clarity+Acetochlor   0.5+   1.5   8   二甲戊乐灵   0.825   9   Clarity+   二甲戊乐灵   0.25+   0.825   10   Clarity+   二甲戊乐灵   0.5+   0.825   11   Reflex   0.25   12   Clarity+   Reflex   0.25+   0.25   13   Clarity+   Reflex   0.5+   0.25   14   未处理的

可以在具有如草甘膦抗性阔叶杂草和其它难于控制的阔叶杂草 (如藜属、牵牛花属、田菁、镰刀豆、prickly sida)的目标杂草群体 的田地中，在杂草发芽后，在若干位置以RCBD格式应用如下面的 表12所示的处理，具有3-4个重复。当杂草为4-8英寸高时，以所 示的量应用以下处理。记下在10和21DAT按每个种类评估的杂草 控制(即，控制的％)，以评估现有杂草在发芽后的减少，并确定剩 下的控制的长度。

表12.用于难于控制的杂草的其它示例性除草剂处理方案

  处理   用量(lb/A)   1   Clarity   0.125   2   Clarity   0.25   3   Clarity   0.5   4   Clarity+   Roundup WeatherMax   0.25   0.56   5   Clarity+   Roundup WeatherMax   0.25   0.75   6   Clarity+   Roundup WeatherMax   0.25   1.12   7   Clarity+   Roundup WeatherMax   0.5   0.75   8   Clarity+   Ignite   0.25   0.31   9   Clarity+   Ignite   0.25   0.42   10   Clarity+   Ignite   0.25   0.53   11   Roundup WeatherMax+   Ignite   0.75   0.21   12   Roundup WeatherMax+   Ignite   0.375   0.42   13   Roundup WeatherMax+   Ignite   0.75   0.42   14   Roundup WeatherMax+   Ignite+   Clarity   0.75   0.42   0.25   15   Nontreated

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根据本公开内容，不需要过多的实验就可以制备和实施本文公 开的和要求保护的所有组合物和/或方法。尽管已结合优选的实施方 式描述了本发明的组合物和方法，但在不背离本发明的概念、精神 和范围的情况下，可以对本文所述的组合物和/或方法和方法的步骤 或步骤顺序进行变化，这对于本领域的技术人员是显而易见的。更 具体地说，化学和生理学上都相关的某些试剂显然可以取代本文描 述的试剂，而可以实现相同或类似的结果。所有这些对于本领域技 术人员是显而易见的类似的取代和改变都被视为在由附加的权利要 求所限定的本发明的精神、范围和概念之内。

参考文献

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<140>未知

<141>2007-06-06

<150>11/758,660

<151>2007-06-05

<150>60/862,907

<151>2006-10-25

<160>15

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>441

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工引物

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(441)

<400>1

atg ata gag gtg aaa ccg att aac gca gag gat acc tat gaa cta agg     48

Met Ile Glu Val Lys Pro Ile Asn Ala Glu Asp Thr Tyr Glu Leu Arg

1               5                   10                  15

cat aga ata ctc aga cca aac cag ccg ata gaa gcg tgt atg ttt gaa     96

His Arg Ile Leu Arg Pro Asn Gln Pro Ile Glu Ala Cys Met Phe Glu

            20                  25                  30

agc gat tta ctt cgt ggt gca ttt cac tta ggc ggc ttt tac agg ggc    144

Ser Asp Leu Leu Arg Gly Ala Phe His Leu Gly Gly Phe Tyr Arg Gly

        35                  40                  45

aaa ctg att tcc ata gct tca ttc cac cag gcc gag cac tcg gaa ctc    192

Lys Leu Ile Ser Ile Ala Ser Phe His Gln Ala Glu His Ser Glu Leu

    50                  55                  60

caa ggc cag aaa cag tac cag ctc cga ggt atg gct acc ttg gaa ggt    240

Gln Gly Gln Lys Gln Tyr Gln Leu Arg Gly Met Ala Thr Leu Glu Gly

65                  70                  75                  80

tat cgt gag cag aaa gcg gga tca act cta gtt aaa cac gct gaa gaa    288

Tyr Arg Glu Gln Lys Ala Gly Ser Thr Leu Val Lys His Ala Glu Glu

                85                  90                  95

atc ctt cgt aag agg ggg gcg gac atg ctt tgg tgt aat gcg agg aca    336

Ile Leu Arg Lys Arg Gly Ala Asp Met Leu Trp Cys Asn Ala Arg Thr

            100                 105                 110

tcc gcc tca ggc tac tac aaa aag tta ggc ttc agc gag cag gga gag    384

Ser Ala Ser Gly Tyr Tyr Lys Lys Leu Gly Phe Ser Glu Gln Gly Glu

        115                 120                 125

ata ttt gac acg ccg cca gta gga cct cac atc ctg atg tat aaa agg    432

Ile Phe Asp Thr Pro Pro Val Gly Pro His Ile Leu Met Tyr Lys Arg

    130                 135                 140

atc aca taa 441

Ile Thr

145

<210>2

<211>146

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的构建体

<400>2

Met Ile Glu Val Lys Pro Ile Asn Ala Glu Asp Thr Tyr Glu Leu Arg

1               5                   10                  15

His Arg Ile Leu Arg Pro Asn Gln Pro Ile Glu Ala Cys Met Phe Glu

            20                  25                  30

Ser Asp Leu Leu Arg Gly Ala Phe His Leu Gly Gly Phe Tyr Arg Gly

        35                  40                  45

Lys Leu Ile Ser Ile Ala Ser Phe His Gln Ala Glu His Ser Glu Leu

    50                  55                  60

Gln Gly Gln Lys Gln Tyr Gln Leu Arg Gly Met Ala Thr Leu Glu Gly

65                  70                  75                  80

Tyr Arg Glu Gln Lys Ala Gly Ser Thr Leu Val Lys His Ala Glu Glu

                85                  90                  95

Ile Leu Arg Lys Arg Gly Ala Asp Met Leu Trp Cys Asn Ala Arg Thr

            100                 105                 110

Ser Ala Ser Gly Tyr Tyr Lys Lys Leu Gly Phe Ser Glu Gln Gly Glu

        115                 120                 125

Ile Phe Asp Thr Pro Pro Val Gly Pro His Ile Leu Met Tyr Lys Arg

    130                 135                 140

Ile Thr

145

<210>3

<211>57

<212>PRT

<213>豌豆

<400>3

Met Ala Ser Met Ile Ser Ser Ser Ala Val Thr Thr Val Ser Arg Ala

1               5                   10                  15

Ser Arg Gly Gln Ser Ala Ala Met Ala Pro Phe Gly Gly Leu Lys Ser

            20                  25                  30

Met Thr Gly Phe Pro Val Arg Lys Val Asn Thr Asp Ile Thr Ser Ile

        35                  40                  45

Thr Ser Asn Gly Gly Arg Val Lys Cys

    50                  55

<210>4

<211>85

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>4

Met Ala Ser Ser Met Leu Ser Ser Ala Thr Met Val Ala Ser Pro Ala

1               5                   10                  15

Gln Ala Thr Met Val Ala Pro Phe Asn Gly Leu Lys Ser Ser Ala Ala

            20                  25                  30

Phe Pro Ala Thr Arg Lys Ala Asn Asn Asp Ile Thr Ser Ile Thr Ser

        35                  40                  45

Asn Gly Gly Arg Val Asn Cys Met Gln Val Trp Pro Pro Ile Glu Lys

    50                  55                  60

Lys Lys Phe Glu Thr Leu Ser Tyr Leu Pro Asp Leu Thr Asp Ser Gly

65                  70                  75                  80

Gly Arg Val Asn Cys

                85

<210>5

<211>76

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>5

Met Ala Gln Val Ser Arg Ile Cys Asn Gly Val Gln Asn Pro Ser Leu

1               5                   10                  15

Ile Ser Asn Leu Ser Lys Ser Ser Gln Arg Lys Ser Pro Leu Ser Val

            20                  25                  30

Ser Leu Lys Thr Gln Gln His Pro Arg Ala Tyr Pro Ile Ser Ser Ser

        35                  40                  45

Trp Gly Leu Lys Lys Ser Gly Met Thr Leu Ile Gly Ser Glu Leu Arg

    50                  55                  60

Pro Leu Lys Val Met Ser Ser Val Ser Thr Ala Cys

65                  70                  75

<210>6

<211>76

<212>PRT

<213>拟南芥

<400>6

Met Ala Gln Val Ser Arg Ile Cys Asn Gly Val Gln Asn Pro Ser Leu

1               5                   10                  15

Ile Ser Asn Leu Ser Lys Ser Ser Gln Arg Lys Ser Pro Leu Ser Val

            20                  25                  30

Ser Leu Lys Thr Gln Gln His Pro Arg Ala Tyr Pro Ile Ser Ser Ser

        35                  40                  45

Trp Gly Leu Lys Lys Ser Gly Met Thr Leu Ile Gly Ser Glu Leu Arg

    50                  55                  60

Pro Leu Lys Val Met Ser Ser Val Ser Thr Ala Cys

65                  70                  75

<210>7

<211>72

<212>PRT

<213>矮牵牛

<400>7

Met Ala Gln Ile Asn Asn Met Ala Gln Gly Ile Gln Thr Leu Asn Pro

1               5                   10                  15

Asn Ser Asn Phe His Lys Pro Gln Val Pro Lys Ser Ser Ser Phe Leu

            20                  25                  30

Val Phe Gly Ser Lys Lys Leu Lys Asn Ser Ala Asn Ser Met Leu Val

        35                  40                  45

Leu Lys Lys Asp Ser Ile Phe Met Gln Lys Phe Cys Ser Phe Arg Ile

    50                  55                  60

Ser Ala Ser Val Ala Thr Ala Cys

65                  70

<210>8

<211>69

<212>PRT

<213>小麦

<400>8

Met Ala Ala Leu Val Thr Ser Gln Leu Ala Thr Ser Gly Thr Val Leu

1               5                   10                  15

Ser Val Thr Asp Arg Phe Arg Arg Pro Gly Phe Gln Gly Leu Arg Pro

            20                  25                  30

Arg Asn Pro Ala Asp Ala Ala Leu Gly Met Arg Thr Val Gly Ala Ser

        35                  40                  45

Ala Ala Pro Lys Gln Ser Arg Lys Pro His Arg Phe Asp Arg Arg Cys

    50                  55                  60

Leu Ser Met Val Val

65

<210>9

<211>171

<212>DNA

<213>豌豆

<400>9

atggcttcta tgatatcctc ttccgctgtg acaacagtca gccgtgcctc tagggggcaa   60

tccgccgcaa tggctccatt cggcggcctc aaatccatga ctggattccc agtgaggaag  120

gtcaacactg acattacttc cattacaagc aatggtggaa gagtaaagtg c           171

<210>10

<211>255

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>10

atggcttcct ctatgctctc ttccgctact atggttgcct ctccggctca ggccactatg   60

gtcgctcctt tcaacggact taagtcctcc gctgccttcc cagccacccg caaggctaac  120

aacgacatta cttccatcac aagcaacggc ggaagagtta actgtatgca ggtgtggcct  180

ccgattgaaa agaagaagtt tgagactctc tcttaccttc ctgaccttac cgattccggt  240

ggtcgcgtca actgc                                                   255

<210>11

<211>228

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>11

atggcgcaag ttagcagaat ctgcaatggt gtgcagaacc catctcttat ctccaatctc     60

tcgaaatcca gtcaacgcaa atctccctta tcggtttctc tgaagacgca gcagcatcca    120

cgagcttatc cgatttcgtc gtcgtgggga ttgaagaaga gtgggatgac gttaattggc    180

tctgagcttc gtcctcttaa ggtcatgtct tctgtttcca cggcgtgc                 228

<210>12

<211>228

<212>DNA

<213>人工序列

<400>12

atggcgcaag ttagcagaat ctgcaatggt gtgcagaacc catctcttat ctccaatctc     60

tcgaaatcca gtcaacgcaa atctccctta tcggtttctc tgaagacgca gcagcatcca    120

cgagcttatc cgatttcgtc gtcgtgggga ttgaagaaga gtgggatgac gttaattggc    180

tctgagcttc gtcctcttaa ggtcatgtct tctgtttcca cggcgtgc                 228

<210>13

<211>216

<212>DNA

<213>人工序列

<400>13

atggcccaga tcaacaacat ggcccagggc atccagaccc tgaaccctaa ctctaacttc     60

cacaagccgc aagtgcccaa gtctagctcc ttcctcgtgt tcggctccaa gaagctcaag    120

aatagcgcca attccatgct ggtcctgaag aaagactcga tcttcatgca gaagttctgc    180

tcctttcgca tcagtgcttc ggttgcgact gcctgc                              216

<210>14

<211>207

<212>DNA

<213>人工序列

<400>14

atggcggcac tggtgacctc ccagctcgcg acaagcggca ccgtcctgtc ggtgacggac     60

cgcttccggc gtcccggctt ccagggactg aggccacgga acccagccga tgccgctctc    120

gggatgagga cggtgggcgc gtccgcggct cccaagcaga gcaggaagcc acaccgtttc    180

gaccgccggt gcttgagcat ggtcgtc                                        207

<210>15

<211>433

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>人工引物

<400>15

agatcttgag ccaatcaaag aggagtgatg tagacctaaa gcaataatgg agccatgacg     60

taagggctta cgcccatacg aaataattaa aggctgatgt gacctgtcgg tctctcagaa    120

cctttacttt ttatgtttgg cgtgtatttt taaatttcca cggcaatgac gatgtgaccc    180

aacgagatct tgagccaatc aaagaggagt gatgtagacc taaagcaata atggagccat    240

gacgtaaggg cttacgccca tacgaaataa ttaaaggctg atgtgacctg tcggtctctc    300

agaaccttta ctttttatat ttggcgtgta tttttaaatt tccacggcaa tgacgatgtg    360

acctgtgcat ccgctttgcc tataaataag ttttagtttg tattgatcga cacggtcgag    420

aagacacggc cat                                                       433