[0001]本文中提供了四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶类稠合杂环化合物以 及包含这种化合物的药物组合物。还提供了使用本文中提供的稠合杂 环化合物和药物组合物来预防和/或治疗哺乳动物的病况以及促进神经 保护的方法，所述病况例如(但不限于)关节炎、帕金森氏病、阿尔茨 海默氏病、哮喘、心肌梗塞、疼痛综合征(急性和慢性或神经病性的疼 痛综合征)、神经变性病症、精神分裂症、认知障碍、焦虑症、抑郁 症、炎症性肠病和自身免疫病症。

[0002]用于有效应对疼痛和中枢神经系统病症或疾病的治疗策略 得到研究。

[0003]国际专利申请WO 02/08221公开了二芳基哌嗪和相关化合 物，据说可用于治疗慢性和急性疼痛病况、发痒和尿失禁。

[0004]WO02/053558描述了某些喹唑啉酮衍生物作为α1A/B肾上 腺素能受体拮抗剂，和WO 03/076427和WO 04/041259二者都描述了同 类的化合物，用于治疗女性性机能障碍。WO 04/56774描述了某些被取 代的联苯-4-羧酸芳酰胺类似物，具有作为受体调节剂的可能应用。另 外，WO 03/104230描述了某些二环的嘧啶衍生物，美国申请公布 20030092908和WO 02/087513描述了稠合杂环的PDE7抑制剂。

[0005]美国专利3,424,760和3,424,761二者都描述了一系列3- 脲基吡咯烷，据说其表现出止痛、中枢神经系统和心理药理学活性。 这些专利具体地分别公开了化合物1-(1-苯基-3-吡咯烷基)-3-苯基脲 和1-(1-苯基-3-吡咯烷基)-3-(4-甲氧基苯基)脲。国际专利申请WO 01/62737和WO 00/69849公开了一系列吡唑衍生物，据称可用于治疗 与NPY受体亚型Y5有关的病症和疾病，例如肥胖症。WO 01/62737具 体地公开了化合物5-氨基-N-异喹啉-5-基-1-[3-(三氟甲基)苯基]- 1H-吡唑-3-甲酰胺。WO 00/69849具体地公开了如下化合物：5-甲基- N-喹啉-8-基-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吡唑-3-甲酰胺、5-甲基-N- 喹啉-7-基-1-[3-三氟甲基)苯基]-1H-吡唑-3-甲酰胺、5-甲基-N-喹 啉-3-基-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吡唑-3-甲酰胺、N-异喹啉-5- 基-5-甲基-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吡唑-3-甲酰胺、5-甲基-N-喹 啉-5-基-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吡唑-3-甲酰胺、1-(3-氯苯基)- N-异喹啉-5-基-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺、N-异喹啉-5-基-1-(3-甲 氧基苯基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺、1-(3-氟苯基)-N-异喹啉-5- 基-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺、1-(2-氯-5-三氟甲基苯基)-N-异喹 啉-5-基-5-甲基-1N-吡唑-3-甲酰胺、5-甲基-N-(3-甲基异喹啉-5- 基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1N-吡唑-3-甲酰胺、5-甲基-N- (1，2，3，4-四氢异喹啉-5-基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吡唑-3-甲 酰胺。

[0006]德国专利申请2502588描述了一系列哌嗪衍生物。这个申 请具体地公开了化合物N-[3-[2-(二乙基氨基)乙基]-1，2-二氢-4-甲 基-2-氧代-7-喹啉基]-4-苯基-1-哌嗪甲酰胺。发明内容

[0007]本文中提供了在预防和治疗与神经性和炎症性病症和功能 异常有关的病况方面具有效力和选择性的稠合杂环化合物及其药物组 合物。

[0008]具体地，本文中提供的化合物、药物组合物和方法可用于 治疗、预防或改善哺乳动物的多种病况，例如但不限于不同起因或病 因的疼痛，例如急性、慢性、炎症性和神经病性的疼痛，牙科疼痛和 头痛(例如，偏头痛、丛集性头痛和紧张性头痛)。在一些实施方案 中，所提供的化合物、药物组合物和方法可用于治疗炎症性疼痛和相 关的痛觉过敏和痛觉异常。在一些实施方案中，所提供的化合物、药 物组合物和方法可用于治疗神经病性疼痛和相关的痛觉过敏和痛觉异 常(例如，三叉神经痛或疱疹神经痛、糖尿病性神经病变、灼性神经 痛、交感神经支持的疼痛(sympathetically maintained pain)和传 入神经阻滞综合征例如臂丛神经撕脱)。在一些实施方案中，所提供的 化合物、药物组合物和方法可用作抗炎药来治疗关节炎，和作为药物 用于治疗帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、哮喘、心肌梗塞、神经变性 病症、炎症性肠病和自身免疫病症、肾病、肥胖症、摄食障碍、癌 症、精神分裂症、癫痫症、睡眠障碍、认知障碍、抑郁症、焦虑症、 血压和脂类代谢紊乱。

[0009]因此，在一个方面中，提供的稠合杂环化合物为式1：
其中
R1为未被取代的或被一个或多个R4基团取代的环烷基、杂环烷 基、芳基或杂芳基；
R2为H、被取代的或未被取代的C1-C6烷基或环烷基；
R3和R4各自独立地选自H、烷基、酰基、酰基氨基、烷基氨基、 烷硫基(alkylthio)、烷氧基、烷氧基羰基、烷基芳基氨基、芳基烷 基氧基、芳基烷基氧基、氨基、芳基、芳基烷基、磺基、被取代的磺 基、被取代的磺酰基、被取代的亚磺酰基、被取代的硫烷基 (sulfanyl)、叠氮基、氨基甲酰基、羧基、氰基、环烷基、杂环烷 基、二烷基氨基、卤素、杂芳基氧基、杂芳基、杂烷基、羟基、硝基 和硫醇；m为1、2、3或4；
或其药学可接受的盐、溶剂合物、前体药物、互变异构体或同位 素变体。

[0010]在另一个方面中，提供的稠合杂环化合物为式2：
其中R1、R2、R3和R4如对于式1所定义，或其药学可接受的盐、 溶剂合物、前体药物、互变异构体或同位素变体。

[0011]在某些实施方案中，对于式2来说，R3为卤素、被取代的或 未被取代的C1-C6烷基或环烷基。在另外的实施方案中，R3为Cl、F、 Me或CF3。

[0012]在某些实施方案中，式1-2的化合物是对映体纯的。在某 些实施方案中，提供了药物组合物，其包括对映体纯的式1-2的化合 物。在某些实施方案中，提供了治疗方法，包括给予对映体纯的式1- 2的化合物或包括对映体纯的式1-2的化合物的药物组合物。

[0013]因此，在一个方面中，提供的稠合杂环化合物为式3a或 3b：
其中R1、R2和R4如对于式1所定义，R3为卤素、被取代的或未被 取代的C1-C6烷基或环烷基；或其药学可接受的盐、溶剂合物、前体药 物、互变异构体或同位素变体。

[0014]在某些实施方案中，式3a或3b的化合物是对映体纯的。 在某些实施方案中，提供的药物组合物包括对映体纯的式3a或3b的 化合物。在某些实施方案中，提供的治疗方法包括给予式3a或3b的 对映体纯的化合物或包括对映体纯的的式3a或3b的化合物的药物组 合物。

[0015]在另一个方面中，提供的药物组合物包括本文中提供的稠 合杂环化合物和药用载体、赋形剂或稀释剂。所述药物组合物可以包 括一种或多种本文中所述的稠合杂环化合物。

[0016]应该理解，可用于本文中所公开的药物组合物和治疗方法 的本文中提供的稠合杂环化合物在制备和使用时为药学可接受的。

[0017]在另一个方面中，提供了用于预防、治疗或改善选自本文 中列举的那些病况的方法，特别地，所述病况可能涉及例如关节炎、 哮喘、心肌梗塞、脂类代谢紊乱、认知障碍、焦虑症、精神分裂症、 抑郁症、记忆功能障碍(例如阿尔茨海默氏病)、炎症性肠病和自身免 疫病症，所述方法包括对有此需要的哺乳动物给予对于预防、治疗或 改善所述病况有效量的一种或多种本文中提供的化合物或其药物组合 物。

[0018]在又一个方面中，提供了用于预防、治疗或改善哺乳动物 的引起疼痛反应或与在维持感觉神经的基础活性方面的失调有关的病 况。本文中提供的稠合杂环化合物可用作镇痛药，用于治疗不同起因 或病因的疼痛，例如急性疼痛、炎症性疼痛(例如，与骨关节炎和类风 湿性关节炎有关的疼痛)；各种神经病性疼痛综合征(例如，疱疹后神 经痛、三叉神经痛、反射交感性营养不良、糖尿病性神经病变、格林- 巴利综合征、纤维肌痛、幻肢痛、乳房切除术后疼痛、周围神经病、 HIV神经病和化疗诱导的和其它医原性的神经病)；内脏疼痛(例如， 与胃食管的反射病、肠易激综合征、炎症性肠病、胰腺炎、各种妇科 和泌尿学病症有关的那些)、牙科疼痛和头痛(例如偏头痛、丛集性头 痛和紧张性头痛)。

[0019]在一个方面中，提供了预防、治疗或改善哺乳动物的神经 变性疾病或病症的方法。神经变性疾病或病症可以是例如帕金森氏 病、阿尔茨海默氏病和多发性硬化；由神经炎症介导的或引起神经炎 症的疾病和病症，诸如例如，脑炎；中枢介导的神经精神病学疾病和 病症，诸如例如，抑郁躁狂症、双相疾病、焦虑症、精神分裂症、摄 食障碍、睡眠障碍和认识障碍；癫痫和癫痫发作病症；前列腺、膀胱 和肠功能异常，诸如例如，尿失禁、排尿犹豫、直肠过敏症、大便失 禁、良性前列腺肥大和炎症性肠病；呼吸性疾病和气道的疾病和病 症，诸如例如，过敏性鼻炎、哮喘和反应性气道疾病和慢性阻塞性肺 病；由炎症介导或引起炎症的疾病和病症，诸如例如类风湿性关节炎 和骨关节炎、心肌梗塞、各种自身免疫疾病和病症；发痒/瘙痒，诸如 例如，银屑病；肥胖症；脂类代谢紊乱；癌症；和肾病。典型地，所 述方法包括对有此需要的哺乳动物给予治疗病况或预防病况有效量的 一种或多种本文中提供的化合物或其药物组合物。

[0020]除了上述的治疗方法之外，本发明提供本发明的任何化合 物用于制备被给药用于这种治疗的药物的用途，以及涉及用于所公开 的和具体说明的治疗的这种化合物。

[0021]在另外的方面中，提供了用于合成本文中所述稠合杂环化 合物的方法，代表性的合成方案和途径如下所述。在某些实施方案 中，提供了通过不对称合成制备对映体纯的式1化合物的方法。在某 些实施方案中，提供了通过手性拆分制备对映体纯的式1化合物的方 法。

[0022]对于本领域技术人员来说，在考虑了随后的发明详述之 后，其它目的和优点显而易见的。发明详述

[0023]以下术语意在具有以下提供的含义并且可用于理解本发明 的说明书和预定的保护范围。

[0024]在描述化合物、包含这种化合物的药物组合物和使用这种 化合物和组合物的方法时，除非另有说明，以下术语具有以下含义。 应该进一步理解，术语“基团”和“残基”在用于本文中时认为是可 互换的。

[0025]冠词“一种(a)”和“一种(an)”用在本文中是指一个 或一个以上(即，至少一个)该冠词的语法上的对象。例如，“一种类 似物”是指一种类似物或一种以上的类似物。

[0026]“酰基”是指残基-C(O)R20，其中R20为氢、烷基、环烷 基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基，如 本文中所定义。代表性的实例包括但不限于甲酰基、乙酰基、环己基 羰基、环己基甲基羰基、苯甲酰基、苄基羰基等。

[0027]“酰基氨基”是指残基-NR21C(O)R22，其中R21为氢、烷基、 环烷基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂烷基、杂芳基、杂芳基烷基 和R22为氢、烷基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂 烷基、杂芳基或杂芳基烷基，如本文中所定义。代表性的实例包括但 不限于甲酰基氨基、乙酰基氨基、环己基羰基氨基、环己基甲基-羰基 氨基、苯甲酰基氨基、苄基羰基氨基等。

[0028]“酰基氧基”是指基团-OC(O)R23，其中R23为氢、烷基、芳 基或环烷基。

[0029]“被取代的烯基”是指在本文中“被取代的”的定义中所 述的那些基团，并且特别是指具有1个或更多个取代基的烯基基团， 例如具有1-5个取代基，特别是1-3个取代基，所述取代基选自酰 基、酰基氨基、酰基氧基，烷氧基、被取代的烷氧基、烷氧基羰基、烷 氧基羰基氨基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨基、氨 基羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、环烷基、被取 代的环烷基、卤素、羟基、酮、硝基、硫代烷氧基、被取代的硫代烷 氧基、硫代芳基氧基、硫酮、硫醇、烷基-S(O)-、芳基-S(O)-、烷 基-S(O)2-和芳基-S(O)2-。

[0030]“烷氧基”是指基团-OR24，其中R24为烷基。示例性的烷氧 基包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和庚氧基。 特别的烷氧基基团为低级烷氧基，即具有1-6个碳原子的烷氧基。

[0031]“被取代的烷氧基”是指在本文中“被取代的”的定义中 所述的那些基团，并且特别是指具有1个或更多个取代基的烷氧基基 团，例如具有1-5个取代基，特别是1-3个取代基，所述取代基选自 酰基、酰基氨基、酰基氧基、烷氧基、被取代的烷氧基、烷氧基羰 基、烷氧基羰基氨基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨 基、氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、环烷 基、被取代的环烷基、卤素、杂芳基、羟基、酮、硝基、硫代烷氧 基、被取代的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫酮、硫醇、烷基-S(O)- 、芳基-S(O)-、烷基-S(O)2-和芳基-S(O)2-。

[0032]“烷氧基羰基氨基”是指基团-NR25C(O)OR26，其中R25为 氢、烷基、芳基或环烷基，R26为烷基或环烷基。

[0033]“烷基”是指单价的饱和烷烃残基基团，特别是具有最多 约11个碳原子，更特别地具有1-8个碳原子，更特别地具有1-6个碳 原子。所述烃链可以是直链的或支链的。这个术语由以下基团举例说 明，例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异-丁基、叔丁 基、正己基、正辛基、叔辛基等。术语“低级烷基”是指具有1-6个 碳原子的烷基基团。

[0034]“被取代的烷基”是指在本文中“被取代的”的定义中所 述的那些基团，并且特别是指具有1个或更多个取代基的烷基基团， 例如具有1-5个取代基，特别是1-3个取代基，所述取代基选自酰 基、酰基氨基、酰基氧基、烷氧基、被取代的烷氧基、烷氧基羰基、 烷氧基羰基氨基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨基、 氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、环烷基、被 取代的环烷基、卤素、羟基、杂芳基、酮、硝基、硫代烷氧基、被取 代的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫酮、硫醇、烷基-S(O)-、芳基- S(O)-，烷基-S(O)2-和芳基-S(O)2-。

[0035]“亚烷基”是指具有1-11个碳原子、更特别地为1-6个碳 原子的二价饱和烷烃残基基团，其可以是直链的或支链的。这个术语 由以下基团举例说明，例如，亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚 丙基异构体(例如，-CH2CH2CH2-和-CH(CH3)CH2-)等。

[0036]“被取代的亚烷基”是指在本文中“被取代的”的定义中 所述的那些基团，并且特别是指具有1个或更多个取代基的亚烷基基 团，例如具有1-5个取代基，特别是1-3个取代基，所述取代基选自 酰基、酰基氨基、酰基氧基、烷氧基、被取代的烷氧基、烷氧基羰 基、烷氧基羰基氨基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基-羰基氨 基、氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、卤素、 羟基、酮、硝基、硫代烷氧基、被取代的硫代烷氧基、硫代芳基氧 基、硫酮、硫醇、烷基-S(O)-、芳基-S(O)-、烷基-S(O)2-和芳基- S(O)2-。

[0037]“烯基”是指单价的烯属不饱和烃基基团，优选具有2-11 个碳原子，更特别地具有2-8个碳原子，更特别地具有2-6个碳原 子，其可以是直链的或支链的且具有至少1个、特别是具有1-2个烯 属不饱和位置。特别的烯基基团包括乙烯基(-CH＝CH2)、正丙烯基(- CH2CH＝CH2)、异丙烯基(-C(CH3)＝CH2)、乙烯基和被取代的乙烯基等。

[0038]“亚烯基”是指二价的烯属不饱和烃基基团，优选具有最 多约11个碳原子，更特别地具有2-6个碳原子，其可以是直链的或支 链的且具有至少1个、特别是具有1-2个烯属不饱和位置。这个术语 由以下基团举例说明，例如，亚乙烯基(-CH＝CH-)、亚丙烯基异构体 (例如，-CH＝CHCH2-和-C(CH3)＝CH-和-CH＝C(CH3)-)等。

[0039]“炔基”是指是指炔属或炔属不饱和烃基基团，特别地具 有2-11个碳原子，更特别地具有2-6个碳原子，其可以是直链的或支 链的且具有至少1个、特别是具有1-2个炔基不饱和位置。炔基基团 的具体的非限制性实例包括炔属的乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(-CH2C≡ CH)等。

[0040]“被取代的炔基”是指在本文中“被取代的”的定义中所 述的那些基团，并且特别是指具有1个或更多个取代基的炔基基团， 例如具有1-5个取代基，特别是1-3个取代基，所述取代基选自酰 基、酰基氨基、酰基氧基、烷氧基、被取代的烷氧基、烷氧基羰基、 烷氧基羰基氨基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨基、 氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、环烷基、被 取代的环烷基、卤素、羟基、酮、硝基、硫代烷氧基、被取代的硫代 烷氧基、硫代芳基氧基、硫酮、硫醇、烷基-S(O)-、芳基-S(O)-，烷 基-S(O)2-和芳基-S(O)2-。

[0041]如本文中使用的“烷酰基”或“酰基”是指基团R27-C(O)- ，其中R27为氢或上述定义的烷基。

[0042]“芳基”是指通过从母体芳族环系统的单个碳原子去除一 个氢原子得到的单价芳香族烃基团。芳基基团可以是单环的或双环的 稠环结构，其中至少一个环为芳族环结构，特别是包含6个碳的那 些。典型的芳基基团包括但不限于衍生自以下结构的那些：醋蒽烯、 苊烯、醋菲烯(acephenanthrylene)、蒽、薁、苯、1，2-苯并菲、六 苯并苯、荧蒽、芴、并六苯、己芬、hexalene、不对称-引达省(as- indacene)、对称-引达省、茚满、茚、萘、并八苯(octacene)、 辛芬(octaphene)、辛搭烯(octalene)、卵苯、戊2，4二烯、戊 省、并环戊二烯、戊芬、二萘嵌苯、非那烯(phenalene)、菲、苉、七 曜烯、嵌二萘、皮蒽、玉红省、三亚苯、三萘并苯(trinaphthalene) 等。特别地，芳基基团包括6-14个碳原子。特别地，芳基基团可以包 含6个碳原子。示例性的芳基基团包括苯基和茚满-1-酮。

[0043]“被取代的芳基”包括在本文中“被取代的”的定义中所 述的那些基团，并且特别是指可以任选地被1个或更多个取代基取代 的芳基基团，例如具有1-5个取代基，特别是1-3个取代基，所述取 代基选自酰基、酰基氨基、酰基氧基、烯基、被取代的烯基、烷氧 基、被取代的烷氧基、烷氧基羰基、烷基、被取代的烷基、炔基、被 取代的炔基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨基、氨基 羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、环烷基、被取代 的环烷基、卤素、羟基、硝基、硫代烷氧基、被取代的硫代烷氧基、 硫代芳基氧基、硫醇、烷基-S(O)-、芳基-S(O)-、烷基-S(O)2-和芳 基-S(O)2-。

[0044]“稠合的芳基”是指具有两个与第二个芳基环或与脂肪族 环共用的环碳的芳基。

[0045]“烷芳基”是指如上定义的芳基，其被一个或多个上述定 义的烷基基团取代。

[0046]“芳烷基”或“芳基烷基”是指被一个或多个上述定义的 芳基基团取代的上述定义的烷基基团。

[0047]“芳基氧基”是指-O-芳基基团，其中“芳基”如上述定义 的。

[0048]“烷基氨基”是指基团烷基-NR28R29，其中R28和R29各自独立 地选自氢和烷基。

[0049]“芳基氨基”是指基团芳基-NR30R31，其中R30和R31各自独立 地选自氢、芳基和杂芳基。

[0050]“烷氧基氨基”是指残基-N(H)OR32，其中R32表示烷基或环 烷基基团，如本文中所定义。

[0051]“烷氧基羰基”是指残基-C(O)-烷氧基，其中烷氧基如本 文中所定义。

[0052]“烷基芳基氨基”是指残基-NR33R34，其中R33表示烷基或环 烷基基团，和R34为芳基，如本文中所定义。

[0053]“烷基磺酰基”是指残基-S(O)2R35，其中R35为烷基或环烷 基基团，如本文中所定义。代表性的实例包括但不限于甲基磺酰基、 乙基磺酰基、丙基磺酰基、丁基磺酰基等。

[0054]“烷基亚磺酰基”是指残基-S(O)R35，其中R35为烷基或环 烷基基团，如本文中所定义。代表性的实例包括但不限于甲基亚磺酰 基、乙基亚磺酰基、丙基亚磺酰基、丁基亚磺酰基等。

[0055]“烷硫基”是指残基-SR35，其中R35为如本文中所定义烷基 或环烷基基团，其可以任选地被取代，如本文中所定义。代表性的实 例包括但不限于甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基等。

[0056]“氨基”是指残基-NH2。

[0057]“被取代的氨基”是指在本文中“被取代的”的定义中所 述的那些基团，特别是指基团-N(R36)2，其中每个R36独立地选自氢，烷 基、被取代的烷基、烯基、被取代的烯基、炔基、被取代的炔基、芳 基、环烷基、被取代的环烷基，以及其中两个R基团连接起来形成亚 烷基基团。在两个R基团都是氢时，-N(R36)2为氨基基团。

[0058]“氨基羰基”是指基团-C(O)NR37R37，其中每个R37独立地为 氢、烷基、芳基和环烷基，或其中R37基团连接起来形成亚烷基基团。

[0059]“氨基羰基氨基”是指基团-NR38C(O)NR38R38，其中每个R38 独立地为氢、烷基、芳基或环烷基，或者其中两个R基团连接起来形 成亚烷基基团。

[0060]“氨基羰基氧基”是指基团-OC(O)NR39R39，其中每个R39独 立地为氢、烷基、芳基或环烷基，或者其中所述R基团连接起来形成 亚烷基基团。

[0061]“芳基烷基氧基”是指-O-芳基烷基残基，其中芳基烷基如 本文中所定义。

[0062]“芳基氨基”是指残基-NHR40，其中R40表示如本文中所定 义芳基基团。

[0063]“芳基氧基羰基”是指残基-C(O)-O-芳基，其中芳基如本 文中所定义。

[0064]“芳基磺酰基”是指残基-S(O)2R41，其中R41为如本文中所 定义芳基或杂芳基基团。

[0065]“叠氮基”是指残基-N3。

[0066]“双环芳基”是指通过从母体双环芳族环系统的单个碳原 子去除一个氢原子得到的单价芳香族烃基团。典型的双环芳基基团包 括但不限于衍生自以下结构的基团：茚满，茚、萘、四氢萘等。特别 地，芳基基团包括8-11个碳原子。

[0067]“双环杂芳基”是指通过从母体双环杂芳族环系统的单个 碳原子去除一个氢原子得到的单价双环杂芳族基团。典型的双环杂芳 基基团包括但不限于衍生自以下结构的基团：苯并呋喃、苯并咪唑、 苯并吲唑、苯并二氧杂环己烷、色烯、色满、1，2-二氮杂萘、2，3-二 氮杂萘、吲哚、二氢吲哚、吲嗪吲嗪、异苯并呋喃、异色烯、异吲 哚、二氢异吲哚、异喹啉、苯并噻唑、苯并噁唑、1，5-二氮杂萘、苯 并噁噁二唑、蝶啶、嘌呤、苯并吡喃、苯并吡嗪、吡啶并嘧啶、喹唑 啉、喹啉、喹嗪、喹喔啉、苯并吗吩烷(benzomorphan)、四氢异喹 啉、四氢喹啉等。优选地，所述双环杂芳基基团为9-11元双环杂芳 基，特别优选为5-10元杂芳基。特别的双环杂芳基基团为衍生自苯并 噻吩、苯并呋喃、苯并噻唑、吲哚、喹啉、异喹啉、苯并咪唑、苯并 噁唑和苯并二氧杂环己烷的那些。

[0068]“氨基甲酰基”是指残基-C(O)N(R42)2，其中每个R42基团独 立地为氢、烷基、环烷基或芳基，如本文中所定义所定义，其可以任 选地被取代，如本文中所定义。在具体的实施方案中，术语“氨基甲 酰基”是指-C(O)-NH2。在可供选择的实施方案中，“氨基甲酰基低级 烷基”是指残基NH2CO-低级烷基-。特别的氨基甲酰基低级烷基基团包 括氨基甲酰基乙基和氨基甲酰基甲基。

[0069]“羧基”是指残基-C(O)OH。

[0070]“羧基氨基”是指残基-N(H)C(O)OH。

[0071]“本发明的化合物”和等价的表达是指包含上述的化合 物，特别是本文中所述和/或列举的任何式的化合物，在上下文允许 时，该表达包括前体药物、药学可接受的盐和溶剂合物例如水合物。 同样地，涉及中间体，无论它们本身是否被要求保护，在上下文允许 时，中间体包括它们的盐和溶剂合物。

[0072]“环烷基烷基”是指其中环烷基基团代替烷基基团的氢原 子的残基。典型的环烷基烷基基团包括但不限于环丙基甲基、环丁基 甲基、环戊基甲基、环己基甲基、环庚基甲基、环辛基甲基、环丙基 乙基、环丁基乙基、环戊基乙基、环己基乙基、环庚基乙基和环辛基 乙基等。

[0073]“杂环烷基烷基”是指其中杂环烷基基团代替烷基基团的 氢原子的残基。典型的杂环烷基烷基基团包括但不限于吡咯烷基甲 基、哌啶基甲基、哌嗪基甲基、吗啉基甲基、吡咯烷基乙基、哌啶基 乙基、哌嗪基乙基、吗啉基乙基等。

[0074]“卤代”或“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘 (I)。

[0075]“氢”在取代基的情况中是指-H存在于该化合物位置，并 且其还包括其同位素-氘。

[0076]“低级烷酰基氨基”是指具有有机官能团R-CO-的氨基基 团，其中R表示低级烷基基团。

[0077]“低级烷氧基”是指线状烷基链具有1-6个碳原子，可以 是直链或支链的，并且通过氧原子结合。

[0078]“低级烷基磺酰胺”是指式-SO2NR*R*的磺酰胺的低级烷基 酰胺，其中R*为氢或低级烷基，并且至少一个R*为低级烷基。

[0079]“环烷基”是指具有3-约10个碳原子并具有单环或多个集 聚环的烃基基团，包括稠环和桥环系统，其任选地可以被1-3个烷基 基团取代。这种环烷基基团包括例如单环结构，如环丙基、环丁基、 环戊基、环辛基、1-甲基环丙基、2-甲基环戊基、2-甲基环辛基等； 和多环结构，例如金刚烷基等。特别的环烷基基团具有4-7个碳环成 员，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。

[0080]“被取代的环烷基”包括在本文中“被取代的”的定义中 所列举的那些基团，并且特别是指具有1个或更多个取代基的环烷基 基团，例如具有1-5个取代基，特别是1-3个取代基，所述取代基选 自酰基、酰基氨基、酰基氧基、烷氧基、被取代的烷氧基、烷氧基羰 基、烷氧基羰基氨基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨 基、氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、环烷 基、被取代的环烷基、卤素、羟基、酮、硝基、硫代烷氧基、被取代 的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫酮、硫醇、烷基-S(O)-、芳基- S(O)-、烷基-S(O)2-和芳基-S(O)2-。

[0081]“环烷氧基”是指基团-OR43，其中R43为环烷基。这种环烷 氧基基团包括例如，环戊氧基、环己氧基等。

[0082]“环烯基”是指具有3-10个碳原子并具有单环或多个集聚 的环，包括稠环和桥环系统，并且具有至少一个且特别是1-2个烯属 不饱和位置的环状烃基基团。这种环烯基基团包括例如单环结构例如 环己烯基、环戊烯基、环丙烯基等。

[0083]“被取代的环烯基”是指在本文中“被取代的”的定义中 所列举的那些基团，并且特别是指具有1个或更多个取代基的环烯基 基团，例如具有1-5个取代基，特别是1-3个取代基，所述取代基选 自酰基、酰基氨基、酰基氧基、烷氧基、被取代的烷氧基、烷氧基羰 基、烷氧基羰基氨基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基氨 基、氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、环烷 基、被取代的环烷基、卤素、羟基、酮、硝基、硫代烷氧基、被取代 的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫酮、硫醇、烷基-S(O)-、芳基- S(O)-、烷基-(O)2-和芳基-S(O)2-。

[0084]“稠合的环烯基”是指与第二个脂肪族环或芳族环共用两 个环碳原子并且其烯属不饱和的位置使环烯基环具有芳香性的环烯 基。

[0085]“氰酸基(Cyanato)”是指残基-OCN。

[0086]“氰基”是指残基-CN。

[0087]“二烷基氨基”是指残基-NR44R45，其中R44和R45独立地表示 烷基、被取代的烷基、芳基、被取代的芳基、环烷基、被取代的环烷 基、杂环烷基、被取代的杂环烷基、杂芳基或被取代的杂芳基基团， 如本文中所定义。

[0088]“乙烯基”是指被取代的或未被取代的-(C＝C)-。

[0089]“亚乙基”是指被取代的或未被取代的-(C-C)-。

[0090]“乙炔基”是指-(C≡C)-。

[0091]“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。优选的卤代基 团为氟或氯。

[0092]“羟基”是指残基-OH。

[0093]“硝基”是指残基-NO2。

[0094]“被取代的”是指其中一个或多个氢原子各自独立地被相 同或不同的取代基代替的基团。典型的取代基包括但不限于-X、- R46、-O-、＝O、-OR46、-SR46、-S-、＝S、-NR46R47、＝NR46、-CX3、-CF3、- CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、＝N2、-N3、-S(O)2O-、-S(O)2OH、- S(O)2R46、-OS(O2)O-、-OS(O)2R46、-P(O)(O-)2、-P(O)(OR46)(O-)、- OP(O)(OR46)(OR47)、-C(O)R46、-C(S)R46、-C(O)OR46、-C(O)NR46R47、- C(O)O-、-C(S)OR46、-NR48C(O)NR46R47、-NR48C(S)NR46R47、- NR49C(NR48)NR46R47和-C(NR48)NR46R47，其中每个X独立地为卤素；每个 R46、R47、R48和R49独立地为氢、烷基、被取代的烷基、芳基、被取代 的芳基、芳基烷基、被取代的烷基、环烷基、被取代的烷基、杂环烷 基、被取代的杂环烷基、杂烷基、被取代的杂烷基、杂芳基、被取代 的杂芳基、杂芳基烷基、被取代的杂芳基烷基、-NR50R51、-C(O)R50或- S(O)2R50，或任选地，R50和R51与它们共同连接的原子合起来，形成杂 环烷基或被取代的杂环烷基环；且R50和R51独立地为氢、烷基、被取 代的烷基、芳基、被取代的烷基、芳基烷基、被取代的烷基、环烷 基、被取代的烷基、杂环烷基、被取代的杂环烷基、杂烷基、被取代 的杂烷基、杂芳基、被取代的杂芳基、杂芳基烷基或被取代的杂芳基 烷基。

[0095]代表性的被取代的芳基的实例包括以下

[0096]在这些式中，R52和R53之一可以是氢且R52和R53中的至少一 个各自独立地选自烷基、烯基、炔基、杂环烷基，烷酰基，烷氧基、芳 基氧基、杂芳基氧基，烷基氨基、芳基氨基、杂芳基氨基、NR54COR55、 NR54SOR55、NR54SO2R57、COO-烷基、COO-芳基、CONR54R55、CONR54OR55、 NR54R55、SO2NR54R55、S-烷基、S-烷基、SO-烷基、SO2-烷基、S-芳基、 SO-芳基、SO2-芳基；或R52和R53可以合起来，形成5-8个原子的环 (饱和的或不饱和的)，任选地包含一个或多个选自N、O或S的杂原 子。R54、R55和R56独立地为氢、烷基、烯基、炔基、全氟烷基、环烷 基、杂环烷基、芳基、被取代的芳基、杂芳基、被取代的或杂烷基 等。

[0097]“杂”在用于描述化合物或存在于化合物上的基团时是指 该化合物或基团中的一个或多个碳原子被氮、氧或硫杂原子代替。 “杂”可以适用于上述的任何烃基基团，例如，烷基例如杂烷基、环 烷基例如杂环烷基、芳基例如杂芳基、环烯基、杂环烯基等，具有1- 5个，特别是1-3个杂原子。

[0098]“杂芳基”是指通过从母体杂芳族环系统的单个碳原子去 除一个氢原子得到的单价杂芳族基团。该杂芳基基团可以是单环的基 团(在该情况中，其典型地是5-7元、更典型地为5或6元环)，或 者，所述杂芳基基团可以是双环杂芳基基团，特别是包括2个稠合的 5元环、稠合的5和6元环或2个稠合的6元环的稠环系统，其中所 述杂芳基基团包括稠合的环，所述环中的至少一个应该包含杂原子且 至少一个所述环应该是芳香族的(两个要求可以在或不在同一个环中来 满足)。杂芳基基团可以是例如五元的或六元的单环，其可以包含最多 约四个杂原子，杂原子典型地选自氮、硫和氧。典型地，杂芳基环包 含最多4个杂原子，更典型地为最多3个杂原子，更通常是最多2 个，例如包含单个杂原子。在一个实施方案中，杂芳基环包含至少一 个环氮原子。杂芳基环中的氮原子可以是碱性的，如在咪唑或吡啶的 情况中，或者可以是基本上非碱性的，如在吲哚或吡咯的氮的情况 中。一般说来，存在于杂芳基基团中的氮原子的数目(包括环的任何氨 基基团取代基)低于五个。典型的杂芳基基团包括但不限于衍生自以下 结构的基团：吖啶、砷杂茚、咔唑、β-咔啉、色满、色烯、1，2-二氮 杂萘、呋喃、咪唑、吲唑、吲哚、二氢吲哚、吲嗪、异苯并呋喃、异 色烯、异吲哚、二氢异吲哚、异喹啉、异噻唑、异噁唑、1，5-二氮杂 萘、噁二唑、噁唑、萘嵌二氮苯、菲啶、菲咯啉、吩嗪、2，3-二氮杂 萘、蝶啶、嘌呤、吡喃、吡嗪、吡唑、哒嗪、吡啶、嘧啶、吡咯、吡 咯里嗪(pyrrolizine)、喹唑啉、喹啉、喹嗪、喹喔啉、四唑、噻二 唑、噻唑、噻吩、三唑、氧杂蒽等。特别地，所述杂芳基基团为5-15 元杂芳基，特别的基团为5-10元杂芳基。特别的杂芳基基团为衍生自 噻吩、吡咯、苯并噻吩、苯并呋喃、吲哚、吡啶、喹啉、咪唑、噁唑 和吡嗪的那些。特别地，五元杂芳基基团的实例包括但不限于吡咯、 呋喃、噻吩、咪唑、呋咱、噁唑、噁二唑、噁三唑、异噁唑、噻唑、 异噻唑、吡唑、三唑和四唑基团。特别地，六元杂芳基基团的实例包 括但不限于吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶和三嗪。

[0099]代表性的杂芳基的实例包括以下：
其中每个Y选自羰基、N、NR58、O和S；且R58独立地为氢、烷 基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、杂烷基等。
[00100]如本文中使用的，术语“杂环烷基”是指包含一个或多个 独立地选自N、O和S的杂原子的稳定的杂环非芳族环和稠环。稠合杂 环环系可以包括碳环且仅需要包括一个杂环。杂环的实例包括但不限 于哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基和吗啉基，并表示在以下说明性实例 中：

其中每个X选自CR58、CR58 2、NR58、O和S，且每个Y选自NR58、O 和S，R58独立地为氢、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、杂 烷基等。这些杂环烷基环可以任选地被一个或多个选自以下的基团取 代：酰基、酰基氨基、酰基氧基、烷氧基、被取代的烷氧基、烷氧基 羰基、烷氧基羰基氨基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基羰基 氨基、氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、环烷 基、被取代的环烷基、卤素、羟基、酮、硝基、硫代烷氧基、被取代 的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫酮、硫醇、烷基-S(O)-、芳基- S(O)-、烷基-S(O)2-和芳基-S(O)2-。取代基包括羰基或硫羰基，得到 例如内酰胺和脲衍生物。
[00101]代表性的杂环烯基的实例包括以下：

其中每个X选自CR58、CR58 2、NR58、O和S，每个Y选自羰基、N、 NR58、O和S，R58独立地为氢、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳 基、杂烷基等。
[00102]具有含杂原子的取代基的代表性的芳基的实例包括以下：

其中每个X选自CR58、CR58 2、NR58、O和S，每个Y选自羰基、 NR58、O和S，R58独立地为氢、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳 基、杂烷基等。
[00103]“杂取代基”是指包含卤素、O、S或N原子的官能度，其 可以在作为本文中提供的化合物的环原子上的直接取代基存在的R4C 基团中作为R4存在，或者可以作为存在于化合物中的“被取代的”芳 基和脂肪族基团中的取代基存在。
杂取代基的实例包括：
-卤素，
-NO2，-NH2，-NHR59，-N(R59)2，
-NRCOR，-NR59SOR59，-NR59SO2R59、OH、CN，
-CO2H，
-R59-OH，-O-R59，-COOR59，
-CON(R59)2，-CONROR59，
-SO3H，-R59-S，-SO2N(R59)2，
-S(O)R59，-S(O)2R59
其中每个R59独立地为芳基或脂肪族基团，任选地具有取代基。在 包含R59基团的杂取代基中，优选具有如本文中所定义芳基和烷基R59 基团的那些物质。优选的杂取代基为上述列举的那些。
[00104]“氢键供体”基团是指包含O-H或N-H官能度的基团。 “氢键供体”基团的实例包括-OH，-NH2和-NH-R59a，其中R59a为烷基、 酰基、环烷基、芳基或杂芳基。
[00105]“二羟基磷酰基”是指残基-PO(OH)2。
[00106]“被取代的二羟基磷酰基”是指在本文中的“被取代的” 的定义中列举的那些基团，特别是指其中羟基基团中的一个或两个被 取代的二羟基磷酰基残基。适合的取代基如以下详述。
[00107]“氨基羟基磷酰基”是指残基-PO(OH)NH2。
[00108]“被取代的氨基羟基磷酰基”是指在本文中的“被取代 的”的定义中列举的那些基团，特别是指其中氨基基团被一个或两个 取代基取代的氨基羟基磷酰基。适合的取代基如以下详述。在某些实 施方案中，羟基基团也可以被取代。
[00109]“含氮杂环烷基”基团是指包含至少一个氮原子的4-7元 的非芳香环状基团，例如但不限于吗啉、哌啶(例如，2-哌啶基、3-哌 啶基和4-哌啶基)、吡咯烷(例如，2-吡咯烷基和3-吡咯烷基)、氮杂 环丁烷、吡咯烷酮、咪唑啉、咪唑烷酮、2-二氢吡唑、四氢吡唑、哌 嗪和N-烷基哌嗪例如N-甲基哌嗪。特别的实例包括氮杂环丁烷、哌啶 酮和哌嗪(piperazone)。
[00110]“硫代烷氧基”是指基团-SR60，其中R60为烷基。
[00111]“被取代的硫代烷氧基”包括在本文中“被取代的”的定 义中所列举的那些基团，并且特别是指具有1个或更多个取代基的硫 代烷氧基基团，例如具有1-5个取代基，特别是1-3个取代基，所述 取代基选自酰基、酰基氨基、酰基氧基、烷氧基、被取代的烷氧基，烷 氧基羰基、烷氧基羰基氨基、氨基、被取代的氨基、氨基羰基、氨基 羰基氨基、氨基羰基氧基、芳基、芳基氧基、叠氮基、羧基、氰基、 环烷基、被取代的环烷基、卤素、羟基、酮、硝基、硫代烷氧基、被 取代的硫代烷氧基、硫代芳基氧基、硫酮、硫醇、烷基-S(O)-、芳基- S(O)-、烷基-S(O)2-和芳基-S(O)2-。
[00112]“硫烷基”是指残基HS-。“被取代的硫烷基”是指残基例 如，RS-，其中R为本文中定义的任何取代基。特别地，R为被取代的 或未被取代的烷基被取代的或未被取代的芳基或被取代的或未被取代 的杂芳基。
[00113]“亚磺酰基”是指二价残基-S(O)-。“被取代的亚磺酰 基”是指残基例如-SOR61a，其中R61a为本文中定义的任何取代基。特别 地，R61a为被取代的或未被取代的烷基、被取代的或未被取代的芳基或 被取代的或未被取代的杂芳基。
[00114]“氨基磺酰基”或“磺酰胺”是指残基H2N(O2)S-，“被取 代的氨基磺酰基”“被取代的磺酰胺”是指残基例如R62 2N(O2)S-，其 中每个R62独立地为本文中所述的任何取代基。
[00115]“磺酰基”是指二价残基-S(O2)-。“被取代的磺酰基”是 指残基例如，-S(O2)R61，其中R61为本文中定义的任何取代基。特别 地，R61为被取代的或未被取代的烷基或被取代的或未被取代的芳基。
[00116]“氨基磺酰基”或“磺酰胺”是指残基H2N(O2)S-，“被取 代的氨基磺酰基”“被取代的磺酰胺”是指残基例如，R62 2N(O2)S-， 其中每个R62独立地为本文中所述的任何取代基。
[00117]“磺酰胺”是指包含化学基团-SO2NH2的一组化合物。
[00118]“砜”是指基团-SO2R63。在特别的实施方案中，R63选自低 级烷基，烷基、芳基和杂芳基。
[00119]“磺基”或“磺酸”是指残基例如-SO3H。
[00120]“被取代的磺基”或“磺酸酯”是指残基例如-SO3R61b，其 中R61b为被取代的或未被取代的烷基或被取代的或未被取代的芳基。
[00121]“硫代芳基氧基”是指基团-SR64，其中R64为芳基。
[00122]“硫酮”是指基团＝S。
[00123]“硫醇”是指基团-SH。
[00124]有机合成领域普通技术人员应该认识到，在稳定的、化学 上可行的杂环酯的杂原子的最大数目由环的大小、不饱和度和杂原子 的化合价来决定，无论所述杂环为芳香族的或非芳香族的。一般说 来，杂环可具有一到四个杂原子，只要所述杂芳环为化学上可行的和 稳定的。
[00125]“药学可接受的”是指由联邦或州政府的管理机构批准的 或在美国药典或其它通常已知的药典中列举用于动物(优选用于人) 的。
[00126]“药学可接受的媒介物”是指与本发明的化合物一起给药 的稀释剂、辅助剂、赋形剂或载体。
[00127]“药学可接受的盐”是指本发明的化合物的无毒的无机酸 和有机酸的加成盐，和碱加成盐，特别地，它们是药学可接受的且具有 母体化合物的所需药理学活性。这些盐可以在可用于本发明的化合物 的最终分离和纯化过程中原位制备。这种盐包括：(1)酸加成盐，与无 机酸形成的，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；或与有机酸 形成的，例如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、 乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬 酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺 酸、乙磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺 酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2- 烯-1-甲酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、十二 烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸 等；或(2)在母体化合物中存在于酸性质子时被金属离子(例如，碱金 属离子、碱土离子或铝离子)代替而形成的盐；或与有机碱(例如，乙 醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺等)配位形成的盐。盐另外 包括(仅作为举例)钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵等；并且在化合物 包含碱性官能度时，包含无毒的有机酸或无机酸类的盐，例如盐酸 盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐 等。术语“药学可接受的阳离子”是指酸性官能团的无毒的、可接受 的阳离子型平衡离子。这种阳离子例如钠、钾、钙、镁、铵、四烷基 铵阳离子等。
[00128]“前体药物”是指本发明的化合物(包括其衍生物)，其具 有可裂解基团并通过溶剂分解或在生理条件下变为在体内为药学活性 的本发明化合物。这种实例包括但不限于胆碱酯衍生物等、N-烷基吗 啉酯等。“溶剂合物”是指可用于本发明的化合物与一个或多个溶剂 分子的物理结合。这种物理结合包括氢键。在某些情况中，溶剂合物 能够分离，例如在一个或多个溶剂分子并入到结晶固体的晶格中的情 况中。“溶剂合物”包括溶液相溶剂合物和可分离的溶剂合物。本发 明的化合物可以制备为例如结晶形式，并且可以是溶剂合物或水合 物。适合的溶剂合物包括药学可接受的溶剂合物例如水合物，并且还 包括化学计量的溶剂合物和非化学计量的溶剂合物。常规的溶剂包括 水、乙醇、乙酸等，因此，代表性的溶剂合物包括水合物、乙醇合物 和甲醇合物。
[00129]“受试者”是指人和非人类的哺乳动物。在某些实施方案 中，受试者为人。
[00130]“治疗有效量”是指化合物的量，在对受试者给予用于治 疗疾病时，其足以实现用于该疾病的这种治疗。“治疗有效量”可以 取决于化合物、疾病及其严重程度和接受治疗的受试者的年龄、体重 等而变化。
[00131]本发明化合物的其它衍生物在其酸和酸衍生物形式时都有 活性，但是在对酸敏感的形式时经常提供溶解度、组织相容性或在哺 乳动物生物体中延迟释放的优点(参见，Bundgard，H.，Design of Prodrugs，pp.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam 1985)。前体药 物包括本领域从业人员公知的酸衍生物，诸如例如，通过使母体酸与 适合的醇反应制备的酯或通过使母体酸化合物与被取代的或未被取代 的胺反应制备的酰胺或酸酐或混合酸酐。由本发明化合物的酸性基团 侧基衍生的简单的脂肪族或芳香族的酯、酰胺和酸酐是特别的前体药 物。在一些情况中，期望制备双酯型前体药物，例如(酰基氧基)烷基 酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。特别是本发明化合物的C1-C8烷基、 C2-C8烯基、芳基、C7-C12被取代的芳基和C7-C12芳基烷基酯。
[00132]“同位素变体”是指构成这种化合物的一种或多种原子包 含非自然比例同位素的化合物。例如，化合物的“同位素变体”可以 包含一种或多种非放射性同位素，诸如例如，氘(2H或D)、碳 13(13C)、氮-15(15N)等。应该理解，在其中进行这种同位素取代的化 合物中，在存在时，以下原子可以变化，使得例如任何氢可以是 2H/D，任何碳可以是13C，或任何氮可以是15N，并且这种原子的存在和 位置可以通过本领域的技术来确定。同样地，本发明可以包括具有放 射性同位素的同位素变体的制备，在例如得到的化合物可用于药物和/ 或底物组织分布研究的情况中。放射性同位素氚(即3H)和碳-14(即 14C)尤其可用于这个目的，是因为它们容易并入和容易检测。另外，化 合物可以制备为被正电子发射同位素取代例如，11C、18F、15O和13N， 并且可用于正电子发射断层扫描(Positron Emission Topography， PET)研究来研究底物受体占据。本文中提供的所有同位素变体，无论 是否为放射性的，都被包括在本发明范围内。
[00133]还应该理解，具有相同分子式但是在性质或其原子的结合 顺序或其原子的空间排列方面有所不同的化合物称为“异构体”。在 原子的空间排列方面不同的异构体称为“立体异构体”。
[00134]彼此为非镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，彼 此为不能重叠的镜像的那些被称为“对映异构体”。在化合物具有一 个不对称中心时，例如其结合于四个不同的基团时，可能存在一对对 映异构体。对映异构体通过其不对称中心的绝对构型来表征并且通过 Cahn和Prelog的R-和S-顺序规则来描述，或通过其中分子使平面 偏振光旋转的方式来描述并且指定为右旋的或左旋的(即，分别为(+) 或(-)-异构体)。手性化合物可以作为单独的对映异构体存在或作为其 混合物存在。包含相等比例的对映异构体的混合物被称为“外消旋混 合物”。
[00135]如本文中使用的，纯的对映异构体化合物基本上不含该化 合物的其它对映异构体或立体异构体(即，为对映体过量)。换句话 说，化合物的“S”形式基本上不含化合物的“R”形式，因此是“R” 形式的对映体过量。术语“对映体纯”或“纯的对映异构体”表示化 合物包括高于75重量％、高于80重量％、高于85重量％、高于90重量 ％、高于91重量％、高于92重量％、高于93重量％、高于94重量％、 高于95重量％、高于96重量％、高于97重量％、高于98重量％、高于 98.5重量％、高于99重量％、高于99.2重量％、高于99.5重量％、高 于99.6重量％、高于99.7重量％、高于99.8％重量％或高于99.9重量％ 的该对映异构体。在某些实施方案中，所述重量是基于化合物的所有 对映异构体或立体异构体的总重量。
[00136]如本文中使用的且除非另有说明，术语“对映体纯的R-化 合物″是指至少约80重量％R-化合物和最多约20重量％S-化合物、 至少约90重量％R-化合物和最多约10重量％S-化合物、至少约95 重量％R-化合物和最多约5重量％S-化合物、至少约99重量％R-化 合物和最多约1重量％S-化合物、至少约99.9重量％R-化合物或最 多约0.1重量％S-化合物。在某些实施方案中，重量是基于化合物的 总重量。
[00137]如本文中使用的且除非另有说明，术语“对映体纯的S-化 合物”或“S-化合物”是指至少约80重量％S-化合物和最多约20重 量％R-化合物、至少约90重量％S-化合物和最多约10重量％R-化合 物、至少约95重量％S-化合物和最多约5重量％R-化合物、至少约 99重量％S-化合物和最多约1重量％R-化合物或至少约99.9重量％ S-化合物和最多约0.1重量％R-化合物。在某些实施方案中，重量是 基于化合物的总重量。
[00138]在本文中提供的组合物中，对映体纯的化合物或其药学可 接受的盐、溶剂合物、水合物或前体药物可以与其它活性的或无活性 的成分一起提供。例如，包括对映体纯的R-化合物的药物组合物可以 包括例如约90％的赋形剂和约10％对映体纯的R-化合物。在某些实施 方案中，在这种组合物中的所述对映体纯的R-化合物可以占化合物总 重量的至少约95重量％的R-化合物和最多约5重量％的S-化合物。例 如，包括对映体纯的S-化合物的药物组合物可以包括例如约90％的赋 形剂和约10％对映体纯的S-化合物。在某些实施方案中，在这种组合 物中的所述对映体纯的S-化合物可以占化合物总重量的至少约95重 量％的S-化合物和最多约5重量％的R-化合物。在某些实施方案中，活 性成分可以在只有很少或没有赋形剂或载体的情况下配制。
[00139]“互变异构体”是指为特定的化合物结构的可互换形式、 且在氢原子和电子的移位方面不同的化合物。因此，两种结构可以通 过π电子和原子(通常是H)的移动来达到平衡。例如，烯醇和酮是互 变异构体，因为它们通过用酸或碱处理而迅速地互变。互变现象的另 一个实例为苯基硝基甲烷的酸-和硝基-形式，其同样是通过用酸或碱 处理形成的。
[00140]互变异构形式可能与所涉及的化合物的最佳化学反应性和 生物活性的实现有关。
[00141]本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心；因此， 这种化合物可以作为单独的(R)-或(S)-立体异构体或作为其混合物产 生。除非另有说明，在说明书和权利要求中对特定化合物的描述或命 名意在包括单独的对映异构体及其混合物(无论是否为外消旋的)。用 于判断立体化学和分离立体异构体的方法是本领域中公知的。
[00142]“受试者”包括人。术语“人”、“患者”和“受试者” 在本文中可互换使用。
[00143]“预防”是指采取用于预防疾病的措施。
[00144]“预防疾病”或“防病”是指降低获得疾病或病症的危险 (即，在可能暴露于该疾病或易感染该疾病但是仍未经历或显示该疾病 的症状的受试者中引起疾病的至少一种临床症状不发展)。
[00145]在一个实施方案中，任何疾病或病症的“治疗”或“处 理”是指改善该疾病或病症(即，阻滞或减少疾病或其至少一种临床症 状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”或“处理”是指改善至少 一种身体参数，其可能是受试者不可觉察的。在又一个实施方案中， “治疗”和“处理”是指物理上(例如，使可觉察的症状稳定)、生理上 (例如身体参数的稳定)或同时在物理上和生理上调节该疾病或病症。 在又一个实施方案中，“治疗”和“处理”是指延迟疾病或病症的发 病。
[00146]“治疗有效量”是指药物或药物制剂的量，其引起医生或 其它临床医师所寻求的受试者的生物学或医学响应。“治疗有效量” 可以取决于化合物、疾病及其严重程度和接受治疗的受试者的年龄、 体重等而变化。
[00147]本文中提供的化合物的其它衍生物在其酸和酸衍生物形式 时都有活性，但是在对酸敏感的形式时经常提供溶解度、组织相容性 或在哺乳动物生物体中延迟释放的优点(参见，Bundgard，H.， Design of Prodrugs，pp.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam 1985)。前体药物包括本领域从业人员公知的酸衍生物，诸如例如，通 过使母体酸与适合的醇反应制备的酯或通过使母体酸化合物与被取代 的或未被取代的胺反应制备的酰胺或酸酐或混合酸酐。由本发明化合 物的酸性基团侧基衍生的简单的脂肪族或芳香族的酯、酰胺和酸酐是 优选前体药物。在一些情况中，期望制备双酯型前体药物，例如(酰基 氧基)烷基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。优选的是本文中提供的化 合物的C1-C8烷基、C2-C8烯基、芳基、C7-C12被取代的芳基和C7-C12芳 基烷基酯。
[00148]
化合物
[00149]在某些方面中，本文中提供了可用于预防和/或治疗多种病 况的稠合杂环化合物，所述病况尤其是关节炎、帕金森氏病、阿尔茨 海默氏病、中风、葡萄膜炎、哮喘、心肌梗塞，用于治疗和预防哺乳 动物的疼痛综合征(急性的和慢性的或神经病性的)、创伤性脑损伤、 急性脊髓损伤、神经变性病症、脱发(毛发损失)、炎症性肠病和自身 免疫病症或病况。
[00150]在一个方面中，本文中提供的是式1或2的稠合杂环化合 物：

其中
R1为环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，是未被取代的或被一个 或多个R4基团取代的；
R2为H、被取代的或未被取代的C1-C6烷基或环烷基；
R3和R4各组独立地选自H、烷基、酰基、酰基氨基、烷基氨基、 烷硫基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基芳基氨基、芳基烷基氧基、芳基 烷基氧基、氨基、芳基、芳基烷基、磺基、被取代的磺基、被取代的 磺酰基、被取代的亚磺酰基、被取代的硫烷基、叠氮基、氨基甲酰 基、羧基、氰基、环烷基、杂环烷基、二烷基氨基、卤素、杂芳基氧 基、杂芳基、杂烷基、羟基、硝基和硫醇；m为1、2、3或4；或
其药学可接受的盐、溶剂合物、前体药物、立体异构体、互变异 构体或同位素变体。
[00151]在某些实施方案中，R3为卤素、被取代的或未被取代的C1- C6烷基或环烷基。
[00152]在另一个方面中，本文中提供的是式3a或3b的稠合杂环 化合物：

其中
R1为环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，是未被取代的或被一个 或多个R4基团取代的；
R2为H，被取代的或未被取代的C1-C6烷基或环烷基；
R3和R4各自独立地选自H、烷基、酰基、酰基氨基、烷基氨基、 烷硫基、烷氧基、烷氧基羰基、烷基芳基氨基、芳基烷基氧基、芳基 烷基氧基、氨基、芳基、芳基烷基、磺基、被取代的磺基、被取代的 磺酰基、被取代的亚磺酰基、被取代的硫烷基、叠氮基、氨基甲酰 基、羧基、氰基、环烷基、杂环烷基、二烷基氨基、卤素、杂芳基氧 基、杂芳基、杂烷基、羟基、硝基和硫醇；m为1、2、3或4；或
其药学可接受的盐、溶剂合物、前体药物、立体异构体、互变异 构体或同位素变体。
[00153]在某些实施方案中，所述化合物为式1、2、3a或3b。
[00154]在一个实施方案中，对于式1-3b，R2为H。
[00155]在另一个实施方案中，对于式1-3b，R2不是H。
[00156]在某些实施方案中，对于式1-3b，R2为被取代的或未被取 代的C1-C6烷基或环烷基；且所述化合物为对映体纯的。在某些实施方 案中，本文中提供的是包括对映体纯的式1、2、3a或3b的化合物的 药物组合物。在某些实施方案中，提供的是治疗方法，包括给予对映 体纯的式1、2、3a或3b化合物或包括对映体纯的式1、2、3a或3b 的化合物的药物组合物。
[00157]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1为芳基或杂芳基基 团。
[00158]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1为环烷基或杂环烷基 基团。
[00159]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1选自被取代的或未被 取代的以下基团：

[00160]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1选自被取代的或未被 取代的以下基团：

[00161]在某些实施方案中，对于式1-3b，R1选自被取代的或未被 取代的以下基团：

[00162]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1选自被取代的或未被 取代的芳基、被取代的或未被取代的杂芳基、被取代的或未被取代的 环烷基、被取代的或未被取代的杂环烷基、被取代的或未被取代的环 烯基、被取代的或未被取代的杂环烯基、被取代的或未被取代的双环 烷基、被取代的或未被取代的杂双环烷基、被取代的或未被取代的双 环烯基、被取代的或未被取代的杂双环烯基、被取代的或未被取代的 双环芳基和被取代的或未被取代的双环杂芳基。
[00163]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1选自被取代的或未被 取代的喹啉基、异喹啉基、喹喔啉、亚甲二氧基苯基、咪唑并吡啶 基、苯并噁唑基和吲哚基。
[00164]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1选自未被取代的喹啉 基、异喹啉基、喹喔啉、亚甲二氧基苯基、咪唑并吡啶基、苯并噁唑 基和吲哚基。
[00165]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1选自未被取代的喹啉 基、异喹啉基和喹喔啉。
[00166]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1选自喹啉基、异喹啉 基、喹喔啉、亚甲二氧基苯基、咪唑并吡啶基、苯并噁唑基和吲哚 基，其被卤素、卤代烷基，烷氧基、氰基、氨基、磺基、被取代的磺 基、被取代的磺酰基、磺酰胺和环烷基取代。
[00167]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1选自喹啉基、异喹啉 基、喹喔啉、亚甲二氧基苯基、咪唑并吡啶基、苯并噁唑基和吲哚 基，其被Me、Et、Pr、异-Pr、Ph、Cl、F、Br、CN、OH、OMe、OEt、 OPh、COPh、CO2Me、CH2-N-吗啉代、CH2-N-(4-Me-哌啶子基)、NH2、 CONH2、CF3、CHF2、OCF3、OCHF2、t-Bu、SMe、CH＝CH-CO2H、SOMe、 SO2Me、SO2CF3、SO2NH2、SO3H、SO3Me、环丙基取代。
[00168]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1为苯基。在某些实施 方案中，R1为被取代的苯基。
[00169]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1为单取代的苯基。
[00170]在其它实施方案中，对于式1-3b，R1为二取代的苯基。
[00171]在某些实施方案中，对于式1-3b，R1为被取代的苯基，其 中苯基上的取代基选自卤素、酰胺基、烷基、烷氧基、磺酰基、磺酰 胺基(sulfonamidyl)、卤代烷基和三卤代烷基。在优选的实施方案 中，R1苯基上的取代基选自Cl、F、CF3、Me、OMe、SO2R2′、NR2′R2′和 SO2NR2′R2′。在其它优选实施方案中，R1苯基上的取代基选自H、Cl、 Me和SO2Me。
[00172]在某些实施方案中，对于式1-3b，R1为二取代的苯基，且 所述两个取代基选自被取代的磺酰基、卤素和烷基。
[00173]在某些实施方案中，对于式1-3b，R1为二取代的苯基，且 一个取代基为SO2Me，另一个取代基为Cl、Me或CF3。
[00174]在式1-3b的实施方案中，R1为被取代的苯基，一个或多个 取代基处于苯基上的、相对于与式1、1a或1b中的稠合杂环骨架中的 氮原子相连的碳为2位(邻位)、3位(间位)和/或4位(对位)。
[00175]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1为杂芳基。
[00176]在某些实施方案中，对于式1-3b，R1为被取代的吡啶基或 嘧啶基团。
[00177]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1为被取代的吡啶基。
[00178]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1为被取代的吡啶-3- 基。在某些实施方案中，所述R1吡啶-2-基为二取代的。在优选的实 施方案中，所述R1吡啶-3-基为单取代的。
[00179]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1为被取代的吡啶-3-基 且R1吡啶-3-基上的取代基选自卤素、酰胺基、烷基、烷氧基、磺酰 基、磺酰胺基(sulfonamidyl)、卤代烷基和三卤代烷基。
[00180]在优选的实施方案中，对于式1-3b，R1吡啶-3-基上的取代 基选自Cl、F、CF3、Me、OMe、SO2R2′、NR2′R2′和SO2NR2′R2′。在更优 选的实施方案中，R1吡啶-3-基上的取代基选自Cl、Me和SO2Me。
[00181]在一些实施方案中，R1选自

其中下标n′选自1-5，且每个R5独立地选自氢、被取代的或未 被取代的烷基、被取代的或未被取代的酰基、被取代的或未被取代的 酰基氨基、被取代的或未被取代的烷基氨基、被取代的或未被取代的 烷基硫、被取代的或未被取代的烷氧基、芳基氧基、烷氧基羰基、被 取代的烷氧基羰基、被取代的或未被取代的烷基芳基氨基、芳基烷基 氧基、被取代的芳基烷基氧基、氨基、芳基、被取代的芳基、芳基烷 基、磺基、被取代的磺基、被取代的磺酰基、被取代的亚磺酰基、被 取代的硫烷基、叠氮基、被取代的或未被取代的氨基甲酰基、羧基、 氰基、被取代的或未被取代的环烷基、被取代的或未被取代的杂环烷 基、被取代的或未被取代的二烷基氨基、卤素、杂芳基氧基、被取代 的或未被取代的杂芳基、被取代的或未被取代的杂烷基、羟基、硝基 和硫醇。
[00182]在某些实施方案中，下标n′为1、2或3。
[00183]在另外的实施方案中，下标n′为1或2。
[00184]在某些实施方案中，每个R5为H。
[00185]在某些实施方案中，每个R5独立地为烷基或被取代的烷 基。
[00186]在某些实施方案中，每个R5独立地为Cl或F。
[00187]在某些实施方案中，每个R5独立地为烷氧基或被取代的烷 氧基。
[00188]在某些实施方案中，每个R5独立地为氨基或被取代的氨 基。
[00189]在某些实施方案中，每个R5独立地为氨基甲酰基。
[00190]在某些实施方案中，每个R5独立地为磺基或被取代的磺 基。
[00191]在某些实施方案中，每个R5独立地为磺酰基或被取代的磺 酰基。
[00192]在某些实施方案中，每个R5独立地为氨基磺酰基或被取代 的氨基磺酰基。
[00193]在某些实施方案中，每个R5独立地为SO2NH2。
[00194]在某些实施方案中，每个R5独立地选自Me、Et、Pr、异- Pr、Ph、Cl、F、Br、CN、OH、OMe、OEt、OPh、COPh、CO2Me、CH2-N- 吗啉代、CH2-N-(4-Me-哌啶子基)、NH2、CONH2、CF3、CHF2、OCF3、 OCHF2、t-Bu、SMe、CH＝CH-CO2H、SOMe、SO2Me、SO2CF3、SO2NH2、 SO3H、SO3Me、环丙基、三唑基、吗啉基和吡啶基。
[00195]在某些实施方案中，下标n′为1和R5选自Me、Cl、F、 OMe和CF3。
[00196]在一些实施方案中，对于式1-3b，R1为

且R5为卤素或烷基。在一个实施方案中，R5为Cl或Me。
[00197]对于式1，在某些实施方案中，化合物为式4a、4b或4c：

其中R2如对于式3a-3b中所述的，且R5如上所述。在某些实施方 案中，在R2不是H时，式4a、4b或4c的化合物为对映体纯的。在某 些实施方案中，提供的药物组合物包括对映体纯的式4a、4b或4c的 化合物。在某些实施方案中，提供的是治疗方法，包括给予对映体纯 的式4a、4b或4c的化合物或包括对映体纯的式4a、4b或4c的化合 物的药物组合物。
[00198]在某些实施方案中，对于式4a-4c，R5为H。
[00199]在某些实施方案中，对于式4a-4c，R5为Me、Et、Pr、异- Pr、Ph、Cl、F、CN、OH、OMe、OEt、OPh、CF3、CHF2、OCF3、OCHF2、 t-Bu、SO2Me、SO2CF3和SO3Me。
[00200]在某些实施方案中，对于式4a-4c，R5为Cl、F、Me、CF3或 OMe。
[00201]在某些实施方案中，对于式1-4c，R2选自H、Me、Et、n- Pr、t-Bu、CF3、CH2OH、CH2CH2OH、CH2CH2OAc、CH2(CH2)2OH、 CH2CH2NHMe、CH2NMe2、CH2CH2NMe2、CH2CONH2、CH2CONMe2、CH2COOH、 CH2CH2COOH、CH2(CH2)2COOH、CH2OMe和CH2CH2OMe。
[00202]在另外的实施方案中，对于式1-4c，R2选自CH 2NR2′R2″、 CH2CH2NR2′R2″、CH2CH2CH2NR2′R2″，且其中R2′和R2″可以合起来形成杂 环。
[00203]在某些实施方案中，对于式1-4c，R2选自环丙基、环丁基 或环己基。
[00204]在特别的实施方案中，对于式1-4c，R2为Me或Et。
[00205]在更特别的实施方案中，对于式1-4c，R2为CH2OH或 CH2CH2OH。
[00206]在某些实施方案中，对于式1-4c，R3为H。
[00207]在某些实施方案中，对于式1-4c，R3选自环丙基、环丁基 或环己基。
[00208]在特别的实施方案中，对于式1-4c，R3为Me、Cl、F或 CF3。
[00209]在更特别的实施方案中，对于式1-4c，R3为Cl。
[00210]在更特别的实施方案中，对于式1，化合物为式5a、5b或 5c：

其中R2如对于式1中所述的，R5如上所述。
[00211]在某些实施方案中，对于式5a、5b或5c，R2为H。
[00212]在某些实施方案中，对于式5a、5b或5c，R2为Me、E t或 CH2OH。在特别的实施方案中，R2为Me、CH2OH或CH2CH2OH。
[00213]在某些实施方案中，对于式5a、5b或5c，R5为H、Cl、 F、Me、CF3或OMe。在特别的实施方案中，R5为Cl、F或CF3或OMe。
[00214]在某些实施方案中，对于式4a或5a，
基团被代替，且其中R5为氢、Cl、Me或CF3。
[00215]在某些实施方案中，对于式4a或5a，
基团被代替。
[00216]在某些实施方案中，对于式4a或5a，
基团被代替，且其中R5为H、Cl、Me、OMe 或CF3。
[00217]在某些实施方案中，对于式4a或5a，
[00218]基团被代替。
[00219]在某些实施方案中，对于式4a或5a，
[00220]基团被代替。
[00221]在某些实施方案中，对于式4a或5a，
[00222]基团被代替。
[00223]在某些实施方案中，对于式4a或5a，
[00224]基团被代替，且其中R5为氢、Cl、Me、 OMe或CF3。
[00225]在某些实施方案中，对于式1-5c，R2为Me。
[00226]在某些实施方案中，对于式1-5c，R2为Et。
[00227]在某些实施方案中，对于式1-5c，R2为CH2OH。
[00228]在某些实施方案中，对于式1-5c，R2为CH2CH2OH。
[00229]在某些实施方案中，对于式1-5c，R5为H。
[00230]在某些实施方案中，对于式1-5c，R5为Cl。
[00231]在某些实施方案中，对于式1-5c，R5为CF3。
[00232]在某些实施方案中，对于式1-5c，R5为Me。
[00233]在某些实施方案中，对于式1-5c，R5为OMe。
[00234]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为烷基时，所述烷基基 团为C1-C8烷基。在另一个实施方案中，该烷基基团为C1-C6烷基。在 另外的实施方案中，该烷基基团为C1-C4烷基。
[00235]在一个实施方案中，该烷基基团为任选地被一个或多个基 团(例如，1-3个取代基，特别是一个取代基)取代，所述取代基可独 立地选自卤素、氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、叠氮基、- NR10SO2R9、-SO2NR9R10、-C(O)R9、-C(O)OR9、-OC(O)R9、-NR10C(O)R9、- C(O)NR9R10、-NR9R10、-(CR10R11)mOR10，且其中m为1-5的整数。
[00236]在一个实施方案中，每个R9独立地选自H、C1-C8烷基，- (CH2)t(C6-C10芳基)，-(CH2)t(C5-C10杂芳基)，-(CH2)t(C3-C10环烷基)和- (CH2)t(C5-C10杂环烷基)，其中t为0-4的整数。
[00237]在一个实施方案中，每个R9如上所述，且如果所存在的任 何芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基，其本身可被C1-C4烷基、卤素、 C1-C4烷氧基、C1-4卤代烷基、C1-C4羟基烷基或C1-C4卤代烷氧基或羟基 取代。
[00238]在一个实施方案中，每个R9如上所述，且每个R10和R11独 立地表示H或C1-C6烷基。
[00239]在一个实施方案中，每个R9为如上所述，且每个R12和R13 独立地表示H或C1-C4烷基。
[00240]在一个实施方案中，每个R10和R11独立地表示H或C1-C6烷 基。
[00241]在一个实施方案中，每个R9不是H。
[00242]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为烷氧基时，该烷氧基 基团为-OR9，且R9如上述实施方案中所述，条件是R9不是H。
[00243]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为酰基时，酰基基团为- C(O)R9，且R9为如上述实施方案中所述。
[00244]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为烷氧基羰基时，该烷 氧基羰基基团为-C(O)OR9，且R9如上述实施方案中所述，条件是R9不 是H。
[00245]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为酰基氨基时，该酰基 氨基基团为-NR10C(O)R9，且R9和R10如上述实施方案中所述，条件是R9 不是H
[00246]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为酰基氧基时，该酰基 氧基基团为-OC(O)R9，R9如上述实施方案中所述，条件是R9不是H。
[00247]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为磺基时，该磺基基团 为-SO3R9，且R9如上述实施方案中所述。
[00248]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为磺酰基时，该磺酰基 基团为-SO2R9，R9如上述实施方案中所述，条件是R9不是H。
[00249]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为亚磺酰基，该亚磺酰 基基团为-SOR9，R9如上述实施方案中所述，条件是R9不是H。
[00250]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为氨基磺酰基，该氨基 磺酰基基团为-SO2NR9R10，R9和R10如上述实施方案中所述。
[00251]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为氨基，该氨基基团为- NR9R10，且R9和R10如上述实施方案中所述。
[00252]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为氨基甲酰基，该氨基 甲酰基基团为-CO2NR9R10，且R9和R10如上述实施方案中所述。
[00253]在某些实施方案中，在R3、R4或R5为烷硫基，该烷硫基基 团为-SR9，且R9如上述实施方案中所述，条件是R9不是H。
[00254]对于式1，在某些实施方案中，化合物选自：
5-甲基-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-溴-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-环丙基-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-三氟甲基-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-溴-2-{4-[(R)-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-甲基-2-{4-[(R)-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-乙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-{4-[(R)-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氟-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶 并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-{4-[(2-甲基-6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-{4-[(6-二甲基氨基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-{4-[(6-甲氧基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-溴-2-{4-[(6-甲氧基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(6-甲氧基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-{4-[(3-氯-5-三氟甲基-吡啶-2-基甲基)-氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-{4-[(5-三氟甲基-吡啶-2-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
(R)-3-[6-(4-氯-2-氰基-苯基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并[4，3-d]嘧 啶-4-基氨基]-3-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-丙酸叔丁基酯；
(R)-3-[6-(4-氯-2-氰基-苯基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并[4，3-d]嘧 啶-4-基氨基]-3-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-丙酸；
5-氯-2-{4-[(R)-3-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-丙基氨 基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(R)-3-羟基-1-(6-甲基-吡啶-3-基)-丙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(R)-1-(6-二氟甲基-吡啶-3-基)-3-羟基-丙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(S)-2-羟基-1-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(R)-3-羟基-1-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-丙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[3-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-丙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(S)-2-甲氧基-1-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-乙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(6-氯-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3- d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(5-氯-吡啶-2-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3- d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-甲基-2-{4-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(5-环丙基-吡啶-2-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(4-氨基-2-甲基-嘧啶-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(3，5-二氯-吡啶-2-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(6-乙基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-{4-[(R)-3-羟基-1-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-丙基氨基]- 7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-{4-[(S)-2-羟基-1-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-乙基氨基]- 7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-[4-(3-氰基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6- 基]-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(苯并噁唑-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d] 嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-甲基-2-{4-[(2-甲基-嘧啶-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-甲基-2-[4-(4-甲基-3-[1，2，4]三唑-1-基-苄基氨基)-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
(R)-3-[6-(2-氰基-4-甲基-苯基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并[4，3-d] 嘧啶-4-基氨基]-3-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-丙酸；
(R)-3-[6-(2-氰基-4-甲基-苯基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并[4，3-d] 嘧啶-4-基氨基]-3-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-丙酰胺；
(R)-3-[6-(2-氰基-4-甲基-苯基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并[4，3-d] 嘧啶-4-基氨基]-3-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-N，N-二甲基-丙酰胺；
5-氯-2-{4-[(咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基甲基)-氨基]-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-{4-[(2-甲基-嘧啶-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶 并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(S)-2-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-乙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-{4-[(S)-2-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-乙基氨 基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-[4-(3-氟-4-甲基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧 啶-6-基]-5-甲基-苄腈；
5-甲基-2-[4-(4-甲基-3-甲硫基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶 并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
2-[4-(4-氯-3-[1，2，4]三唑-4-基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶 并[4，3-d]嘧啶-6-基]-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-[4-(3-[1，2，4]三唑-4-基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶 并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
5-氯-2-[4-(4-氯-3-[1，2，4]三唑-4-基-苄基氨基)-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
5-甲基-2-[4-(3-[1，2，4]三唑-4-基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
2-{4-[(4-氨基-2-甲氧基-嘧啶-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-[4-(3-碘-4-甲基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧 啶-6-基]-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-{4-[(R)-1-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(R)-1-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-[4-(3-甲磺酰基-4-甲基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基]-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(2-异丙基-嘧啶-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-{4-[(R)-1-(6-二氟甲基-吡啶-3-基)-3-羟基-丙基氨 基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-甲基-2-[4-(4-甲基-3-吗啉-4-基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
2-{4-[(R)-3-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-丙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(S)-3-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-丙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-甲基-2-{4-[(R)-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-甲基-2-{4-[(S)-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(2-甲氧基-嘧啶-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-{4-[(2-甲氧基-嘧啶-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(S)-1-(6-二氟甲基-吡啶-3-基)-2-羟基-乙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-[4-(4-氯-3-甲磺酰基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d] 嘧啶-6-基]-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-{4-[(S)-1-(6-二氟甲基-吡啶-3-基)-2-羟基-乙基氨 基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]- 7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-{4-[(R)-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-氯-2-[4-(3-甲磺酰基-4-甲基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶 并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
乙酸(R)-3-[6-(2-氰基-4-甲基-苯基)-5，6，7，8-四氢-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-4-基氨基]-3-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-丙基酯；
5-氯-2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]- 7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-甲基-2-{4-[(喹喔啉-6-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-甲基-2-{4-[(喹啉-2-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(1H-吲哚-6-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d] 嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(苯并[1，3]二氧杂环戊二烯-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-[4-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊二烯-5-基-乙基氨基)-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基]-5-甲基-苄腈；
5-氯-2-{4-[(喹喔啉-6-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
5-甲基-2-[4-(1-吡嗪-2-基-乙基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
5-甲基-2-[4-(1-喹喔啉-6-基-乙基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
2-{4-[(S)-1-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[1-(4-氯-3-甲磺酰基-苯基)-乙基氨基]-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-[4-((R)-1-苯并[1，3]二氧杂环戊二烯-5-基-乙基氨基)-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基]-5-甲基-苄腈；
2-[4-((S)-1-苯并[1，3]二氧杂环戊二烯-5-基-乙基氨基)-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基]-5-甲基-苄腈；
2-{4-[1-(3-甲磺酰基-4-甲基-苯基)-乙基氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-甲基-2-{4-[(喹啉-7-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈；
2-{4-[(R)-1-(4-氯-3-甲磺酰基-苯基)-乙基氨基]-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
2-{4-[(S)-1-(4-氯-3-甲磺酰基-苯基)-乙基氨基]-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈；
5-甲基-2-[4-((R)-1-喹喔啉-6-基-乙基氨基)-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；和
5-甲基-2-[4-((S)-1-喹喔啉-6-基-乙基氨基)-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈；
[00255]在本文提供的范围内的另外的实施方案在本文的其它地方 和实施例中以非限制性方式阐明。应该理解，这些实施例只是用于说 明性的目的，不应以任何方式看作是限制性的。
[00256]在某些方面中，本文中提供了上述式中的化合物的前体药 物和衍生物。前体药物是本文中提供的化合物的衍生物，其具有可代 谢裂解的基团并且在体内通过溶剂分解或在生理条件下变成药学活性 的本文中提供的化合物。这种实例包括但不限于胆碱酯衍生物等、N- 烷基吗啉酯等。
[00257]本文中提供的某些化合物在其酸和酸衍生物形式时都有活 性，但是在对酸敏感的形式时经常提供溶解度、组织相容性或在哺乳 动物生物体中延迟释放的优点(参见，Bundgard，H.，Design of Prodrugs，pp.7-9，21-24，Elsevier，Amsterdam 1985)。前体药 物包括本领域从业人员公知的酸衍生物，诸如例如，通过使母体酸与 适合的醇反应制备的酯或通过使母体酸化合物与被取代的或未被取代 的胺反应制备的酰胺，或酸酐，或混合酸酐。由本发明化合物的酸性 基团侧基衍生的简单的脂肪族或芳香族的酯、酰胺和酸酐是优选前体 药物。在一些情况中，期望制备双酯型前体药物，例如(酰基氧基)烷 基酯或((烷氧基羰基)氧基)烷基酯。优选的是本文中提供的化合物的 C1-C8烷基、C2-C8烯基、芳基、C7-C12被取代的芳基和C7-C12芳基烷基 酯。
药物组合物
[00258]在作为药物使用时，本文中提供的稠合杂环化合物典型地 以药物组合物形式给药。这种组合物可以以制药领域公知的方式制 备，并且包括至少一种活性化合物。
[00259]通常，本文中提供的化合物以治疗有效量给药。实际给药 的化合物的量典型地由医生根据相关的环境来决定，包括待治疗的病 况、所选择的给药途径、给药的实际的化合物、个体患者的年龄、体 重和响应、患者症状的严重程度等。
[00260]本文中提供的药物组合物可以通过多种途径给药，包括口 服、直肠、透皮、皮下、静脉内、肌肉内和鼻内。取决于预定的递送 途径，本文中提供的化合物优选配制为可注射的组合物或口服组合 物，或配制为用于透皮给药的油膏剂、洗剂或贴剂。
[00261]口服给药的组合物可以为散装液体溶液或悬浮液或散装粉 末的形式。然而，更通常的是，组合物作为单位剂型存在，从而促进 精确剂量给药。术语“单位剂型”是指作为用于人类受试者和其它哺 乳动物的单一剂量的物理上离散的单元，每个单元包含与适合的药用 赋形剂结合的适于产生所需治疗作用的预定量的活性物质。典型的单 位剂型包括液体组合物的预填充的、预定量的安瓿或注射器，或在固 体组合物的情况中的丸剂、片剂、胶囊等。在这种组合物中，呋喃磺 酸化合物通常为少量组分(约0.1-约50重量％或优选约1-约40重量 ％)，余量为各种媒介物或载体和有助于形成所需剂量形式的加工助 剂。
[00262]适合于口服给药的液体形式可以包括适合的含水或非水媒 介物，包含助悬剂和分散剂、着色剂、调味剂等。固体形式可以包括 例如任何以下成分或具有相似性质的化合物：粘结剂，例如微晶纤维 素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；崩解剂，例如海藻 酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁；助流剂，例如胶 体二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；或调味剂，例如薄荷，水杨 酸甲酯或橙味调味剂。
[00263]可注射的组合物典型地是基于本领域中已知的可注射的无 菌盐水或磷酸缓冲盐水或其它可注射载体。如前所述，这种组合物中 的活性化合物典型地为少量组分，经常为约0.05-10重量％，余量为可 注射的载体等。
[00264]透皮组合物典型地配制为局部用膏剂或霜剂，包含通常约 0.01-约20重量％、优选约0.1-约20重量％、优选0.1-约10重量％、 更优选约0.5-约15重量％的量的活性成分。在配制为膏剂时，活性成 分典型地与石蜡膏剂基质或可与水互溶的膏剂基质合并。做为选择， 活性成分可以用例如水包油霜剂基质配制为霜剂。这种透皮制剂时本 领域中公知的，且通常包括另外的成分来增强活性成分或制剂的皮肤 渗透性或稳定性。所有这种已知的透皮制剂和成分都被包括在本文的 范围内。
[00265]本文中提供的化合物还可以通过透皮装置给药。因此，透 皮给药可以使用储库或多孔膜类型的或固体基质种类的贴剂来实现。
[00266]用于可口服、注射或局部给药组合物的上述组分只是代表 性的。其它材料以及工艺技术等阐述在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，1985，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania的Part 8中，所述文献被并入本 文作为参考。
[00267]用于可口服、注射或局部给药组合物的上述组分只是代表 性的。其它材料以及工艺技术等阐述在Remington′s The Science and Practice of Pharmacy，第21版，2005，Publisher： Lippincott Williams & Wilkins的Part 8中，所述文献被并入本 文作为参考。
[00268]本发明的化合物还可以以持续释放形式给药或者从持续释 放药物递送系统给药。代表性的持续释放材料的描述可以在 Remington′s Pharmaceutical Sciences中找到。
[00269]以下制剂实施例举例说明了本发明的代表性药物组合物。 然而，本发明不限于以下的药物组合物。
制剂1-片剂
[00270]将本发明的化合物作为干燥粉末与干燥明胶粘结剂以大约 1∶2重量比混合。加入少量的硬脂酸镁作为润滑剂。将混合物在压片 机中形成为240-270mg片剂(每个片剂含80-90mg活性酰胺化合 物)。
制剂2-胶囊
[00271]将本发明的化合物作为干燥粉末与淀粉稀释剂以大约1∶1 重量比混合。将混合物填充到250mg胶囊中(每个胶囊包含125mg 的活性酰胺化合物)。
制剂3-液体
[00272]将本发明的化合物(125mg)、蔗糖(1.75g)和黄原胶(4mg) 混合，使其通过No.10目U.S.筛子，然后与事先制备的微晶纤维素 和羧甲基纤维素钠(11∶89，50mg)在水中的溶液混合。将苯甲酸钠 (10mg)、调味剂和着色剂用水稀释并在搅拌下加入。然后加入足量的 水以产生5mL的总体积。
制剂4-片剂
[00273]将本发明的化合物作为干燥粉末与干燥明胶粘结剂以大约 1∶2重量比混合。加入少量的硬脂酸镁作为润滑剂。将混合物在压片 机中形成为450-900mg片剂(每个片剂含150-300mg活性酰胺化合 物)。
制剂5-注射剂
[00274]将本发明的化合物溶解或悬浮在缓冲的无菌盐水可注射含 水介质中，得到大约5mg/ml的浓度。
制剂6-局部用制剂
[00275]将硬脂醇(250g)和白矿脂(250g)在约75℃熔融，然后加 入溶解于水(约370g)中的本发明化合物(50g)、对羟基苯甲酸甲酯 (0.25g)、对羟基苯甲酸丙酯(0.15g)、十二烷基硫酸钠(10g)和丙 二醇(120g)并搅拌得到的混合物，直到凝固。
治疗方法
[00276]本发明的稠合杂环化合物用作治疗剂用于治疗哺乳动物的 疾病。因此，本发明的化合物和药物组合物可用作治疗剂用于预防和/ 或治疗包括人在内的哺乳动物的神经变性疾病、自身免疫疾病和炎症 性疾病。因此，且如前所述，本发明在其范围内包括并且延伸到所列 举的治疗方法以及用于这种方法的化合物和用于这种方法的药物的制 备。
[00277]在治疗方面的方法中，本文中提供了治疗对与关节炎、哮 喘、心肌梗塞、炎症性肠病和自身免疫病症有关的疾病敏感或患有所 述疾病的哺乳动物的方法，所述方法包括给予有效量的刚描述过的一 种或多种药物组合物。
[00278]在治疗方面的又一个方法中，本文中提供了用于治疗对引 起疼痛反应或与感觉神经基础活性的维持失调有关的疾病敏感或患有 所述疾病的哺乳动物的方法。本发明的化合物可用作镇痛药，用于治 疗不同起因或病因的疼痛，例如急性疼痛、炎症性疼痛(例如，与骨关 节炎和类风湿性关节炎有关的疼痛)；各种神经病性疼痛综合征(例 如，疱疹后神经痛、三叉神经痛、反射交感性营养不良、糖尿病性神 经病变、格林-巴利综合征、纤维肌痛、幻肢痛、乳房切除术后疼痛、 周围神经病、HIV神经病和化疗诱导的和其它医原性的神经病)；内脏 疼痛(例如，与胃食管的反射病、肠易激综合征、炎症性肠病、胰腺 炎、各种妇科和泌尿学病症有关的那些)、牙科疼痛和头痛(例如偏头 痛、丛集性头痛和紧张性头痛)。
[00279]在治疗方面的另外的方法中，本文中提供了治疗对神经变 性疾病或病症敏感或患有所述疾病的哺乳动物的方法，所述神经变性 疾病或病症诸如例如，帕金森氏病、阿尔茨海默氏病和多发性硬化； 由神经炎症介导的或引起神经炎症的疾病和病症，诸如例如，脑炎； 中枢介导的神经精神病学疾病和病症，诸如例如，抑郁躁狂症、双相 疾病、焦虑症、精神分裂症、摄食障碍、睡眠障碍和认识障碍；癫痫 和癫痫发作病症；前列腺、膀胱和肠功能异常，诸如例如，尿失禁、 排尿犹豫、直肠过敏症、大便失禁、良性前列腺肥大和炎症性肠病； 呼吸性疾病和气道的疾病和病症，诸如例如，过敏性鼻炎、哮喘和反 应性气道疾病和慢性阻塞性肺病；由炎症介导或引起炎症的疾病和病 症，诸如例如类风湿性关节炎和骨关节炎、心肌梗塞、各种自身免疫 疾病和病症；发痒/瘙痒，诸如例如，银屑病；肥胖症；脂类代谢紊 乱；癌；和肾病，所述方法包括给予治疗疾病或预防疾病有效量的一 种或多种刚刚描述的药物组合物。
[00280]本文提供的另一个方面为本发明的稠合杂环化合物用作药 物，特别是用于治疗或预防上述的病况和疾病。我们还提供本发明化 合物用于生产药物的用途，所述药物用于治疗或预防上述的病况和疾 病之一。
[00281]注射剂量水平为约0.1mg/kg/小时-至少10mg/kg/小时， 都是用于约1-约120小时，特别是24-96小时。还可以给予约0.1 mg/kg-约10mg/kg或更大量的预加载的推注，来实现适当的稳态水 平。对于40-80kg的人类患者，最大量预期不超过约2g/天。
[00282]对于长期病况(例如神经变性疾病和自身免疫疾病)的预防 和/或治疗，治疗方案通常延长到数月或数年，因此，为了患者的便利 和耐受度，优选口服剂量给药。对于口服剂量给药，代表性的方案为 每天1-5个，特别是2-4个，且典型地为3个口服剂量。使用这些剂 量给药模式，每个剂量提供约0.01-约20mg/kg的本文中提供的化合 物，每个优选的剂量提供约0.1-约10mg/kg，特别是约1-约5 mg/kg。
[00283]通常选择透皮剂量来提供比使用注射剂量所实现的相似的 或更低的血液水平。
[00284]在用于预防神经变性疾病、自身免疫疾病或炎症性疾病的 发病时，对处于发展为所述疾病的危险之中的患者给予上述剂量水平 的本文中提供的化合物，典型地是基于医生的建议并在其监督之下。 处于发展为特定疾病的危险之中的患者通常包括具有该疾病的家族史 的那些或者已经通过基因试验或筛选鉴定为对于发展为该疾病特别敏 感的那些。
[00285]本文中提供的化合物可以作为唯一的活性剂给药，或者， 可以将它们与其它药物组合给药，包括其它活性胺和衍生物。组合给 药可以通过本领域技术人员显而易见的任何技术进行，包括例如分别 给药、顺序给药、同时给药和交替给药。
一般合成方法
[00286]本文中提供的稠合杂环化合物可以使用以下一般方法和操 作从容易得到的起始原料制备。参见例如图1和以下的合成图解1和 2。应该理解，给出了典型的或优选的工艺操作条件(即，反应温度、 时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力等)，但是除非另有说明，也可以 使用其它工艺操作条件。最佳的反应条件可能随所用的具体反应物或 溶剂而变化，但是这种条件可以由本领域技术人员通过常规的优化方 法来决定。
[00287]另外，如本领域技术人员显而易见的，常规的保护基对于 保护某些官能团免于经历不希望的反应来说可能是必需的。用于特定 官能团的适合的保护基的选择以及用于保护和脱保护的适合条件时本 领域中公知的。例如，许多的保护基和它们的引入和去除方法描述在 T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protecting Groups in Organic Synthesis，第二版，Wiley，New York，1991及其中的参考文献中。
[00288]例如，本文中提供的化合物可以通过使氯衍生物与适当被 取代的胺反应来制备并且通过已知的标准方法分离和纯化产物。这种 操作包括但不限于重结晶、柱色谱法或HPLC。以下图解提供用于制备 在上文已经列举的代表性的稠合杂环的细节。本文中提供的化合物可 以由有机合成领域的技术人员从已知的或市售的起始原料和试剂来制 备。
[00289]本文中提供的对映体纯的化合物可以通过本领域技术人员 已知的任何技术来制备。例如，它们可以通过手性合成或不对称合成 从适合的旋光纯的前体来制备，或者通过任何常规方法从外消旋物得 到，例如通过使用手性柱进行的色谱拆分、TLC或者制备非对映异构 体并将其分离并再生所需的对映异构体。参见，例如，″Enantiomers， Racemates and Resolutions″，J.Jacques、A.Collet和S.H. Wilen，(Wiley-Interscience，New York，1981)；S.H.Wilen、A. Collet和J.Jacques，Tetrahedron，2725(1977)；E.L.Eliel Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill，NY， 1962)；和S.H.Wilen Tables of Resolving Agents和Optical Resolutions 268(E.L.Elieled.，Univ.of Notre Dame Press， Notre Dame，IN，1972，Stereochemistry of Organic Compounds， Ernest L.Eliel，Samuel H.Wilen和Lewis N.Manda(1994John Wiley & Sons，Inc.)；和Stereoselective Synthesis A Practical Approach，Mihály Nógrádi(1995 VCH Publishers， Inc.，NY，NY)。
[00290]在某些实施方案中，对映体纯的式1的化合物可以通过使 外消旋物与适合的光学活性的酸或碱反应得到。适合的酸或碱包括在 Bighley等人，1995，Salt Forms of Drugs和Adsorption， Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，vol.13， Swarbrick & Boylan，eds.，Marcel Dekker，New York；ten Hoeve & H.Wynberg，1985，Journal of Organic Chemistry 50：4508-4514；Dale & Mosher，1973，J.Am.Chem.Soc. 95：512；和CRC Handbook of Optical Resolution via Diastereomeric salt Formation中描述的那些，其内容被全文并入 本文作为参考。
[00291]对映体纯的化合物还可以从结晶的非对映体或从母液回收 得到，取决于所用的特定酸拆分试剂的溶解度性能和所用的具体的酸 对映异构体。如此回收的特定化合物的特性和光学纯度可以通过旋光 测定法或本领域中已知的其它分析方法来测定。然后可以分离非对映 异构体，例如通过色谱分离法或分级结晶，并且通过用合适的碱或酸 处理来再生所需的对映异构体。可以按类似方式从外消旋物得到另一 对映异构体，或者从第一次分离的母液中进行后处理得到。
[00292]在某些实施方案中，可以通过手性色谱分离法从外消旋化 合物分离对映体纯的化合物。有多种手性柱和洗提剂用于分离对映异 构体，用于分离的适宜条件可以通过本领域技术人员已知的方法凭经 验确定。可用于分离本文中提供的对映异构体的示例性的手性柱包括 但不限于OB、OB-H、OD、 OD-H、OF、OG、OJ 和OK。
合成图解1：N-被取代的2-(4-(氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶- 6(5H)-基)苄腈的一般合成方法

L＝R2被取代的亚甲基和R1＝被取代的或未被取代的环烷基、 杂环烷基，芳基或杂芳基基团。
[00293]被取代的2-(4-(烷基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶- 6(5H)-基)苄腈衍生物如下制备：首先使6-苄基-5，6，7，8-四氢-3H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-4-酮与POCl3反应并使产物与被适当取代的胺反 应，得到N-被取代的6-苄基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4- 胺，其经过除去苄基基团，随后使用SNAr或Buchwald偶联反应与适 当的2-卤代-苄腈缩合，得到适当的N-被取代的2-(4-氨基-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基)-苄腈。一般合成方法描述在图解1 中。
合成图解2：N-被取代的2-(4-氨基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶- 6(5H)-基)苄腈的可选合成方法

L＝R2被取代的亚甲基和R1＝被取代的或未被取代的环烷基、 杂环烷基，芳基或杂芳基基团
[00294]使用上述的一般方法(图解2)制备各种N-被取代的2-(4-氨 基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈。将6-苄基- 5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4(3H)-酮用POCl3处理，得到6-苄 基-4-氯-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶，将其用甲醇钠处理，得 到6-苄基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶。脱苄基化并 在SNAr或Buchwald偶联反应条件下使产物与适当的2-卤代-苄腈反 应，得到2-(4-甲氧基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄 腈，使其与POCl3或POBr3反应。通过SNAr置换用被适当取代的胺置 换得到的4-氯或4-溴基团得到各种N-被取代的2-(4-氨基-7，8-二氢 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈。
[00295]提供以下合成实施例和生物学实施例用于举例说明本文中 提供的化合物、药物组合物和方法，但不应将其看作以任何方式限制 本文的范围。在以下实施例中，所有的温度都是摄氏度(除非另有说 明)。这些代表性化合物的合成根据上述方法并且使用本领域技术人员 公知的适当的试剂、起始原料和纯化方法进行。
示例性的本文提供的化合物
[00296]以下化合物可以根据本文中提供的方法来制备。除非另有 说明，微波中的反应在由Biotage AB，Inc.生产的Biotage Initiator微波合成仪或由Personal Chemistry，Inc生产的Emrys Optimizer微波装置中进行。
中间体的合成
中间体1
6-苄基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4(3H)-酮

[00297]将1-苄基-4-氧代哌啶-3-甲酸乙酯盐酸盐(50.0g，0.168 mol)，甲脒乙酸盐(16.2g，0.201mol)，含4.37M的甲醇钠的甲醇 (190mL)和甲醇(200mL)的混合物在350mL密封反应容器中在85℃ 加热16小时。使混合物冷却并且真空浓缩。残余物溶解于1N NaOH(150mL)并且倾倒在冰上。向混合物加入冰醋酸直到混合物的pH 为7并有棕褐色固体沉淀析出。将固体过滤，用水和冷的乙醚洗涤， 并且高真空干燥，得到标题化合物，为棕褐色固体(26.2g，61.4 ％)。
LC-MS：242.2[M+1]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ2.29(t， 2H，J＝5.8Hz)，2.61(t，2H，J＝5.8Hz)，3.26(s，2H)， 3.64(s，2H)，7.21-7.36(m，6H)，7.96(s，1H)。
中间体2
6-苄基-4-氯-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶

[00298]将6-苄基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4(3H)-酮 (5.0g，0.02mol)，磷酰氯(3.30mL，0.035mol)和乙腈(80mL)和 DMF(催化量)的混合物在70℃加热1小时。将混合物真空浓缩并将残 余的黑色残余物聚集在二氯甲烷(250mL)中并且倾倒在冰上。混合物 小心地通过添加固体碳酸氢钠中和。分离有机层并用硫酸钠干燥并且 真空浓缩。混合物通过硅胶柱纯化，使用EtOAc/己烷(0-100％)，得到 标题化合物，为黄色油状物(3g，57.8％)。
LC-MS：260[M+1]+；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.80(s， 1H)，7.40-7.24(m，5H)，3.76(s，2H)，3.57(s，2H)，2.92(t， 2H)，2.80(t，2H)。
中间体3
4-甲氧基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶

A)6-苄基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶
[00299]为1L烧瓶添加6-苄基-4-氯-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d] 嘧啶(39.6g，0.152mol)和甲醇(300mL)，并将混合物加热以溶解 氯嘧啶。向温热的混合物缓慢加入含4.37M甲醇钠的甲醇(105mL) 搅拌的混合物迅速地变混浊。将得到的悬浮液在回流下加热2小时。 在冷却之后，混合物真空浓缩到约100mL。将残余物倾倒在水中(600 mL)，并用CH2Cl2提取(200mLx2)。合并的有机层用盐水(400mL) 洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并且真空浓缩，得到浅棕色油状物(38.9g， 100％)。
LC-MS：256.1M+H]+
B)4-甲氧基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶
[00300]为250mL烧瓶添加6-苄基-4-甲氧基-5，6，7，8-四氢吡啶 并[4，3-d]嘧啶(4.08g，16.0mmol)，10％炭载钯(400mg)和甲醇 (100mL)。将反应排空并用氢气吹扫三次，并氢化过夜(1atm)。将 混合物过滤通过“Dry disk”膜式过滤器，且真空浓缩，得到橙色油 状物(2.56g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.57(s，1H)，3.99(s，3H)， 3.87(s，2H)，3.18(t，2H，J＝6.9Hz)，2.82(t，2H，J＝6.9 Hz)。
中间体4
2-(4-溴-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-氯苄腈

A)5-氯-2-(4-甲氧基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄 腈和5-氯-2-(4-羟基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00301]为20mL微波反应瓶添加4-甲氧基-5，6，7，8-四氢吡啶并 [4，3-d]嘧啶(1.88g，11.4mmol)，5-氯-2-氟苄腈(2.8g，18 mmo l)，N，N-二异丙基乙胺(3.0mL)和乙腈(5mL)。混合物经过在200 ℃的微波辐射3.5小时。混合物用氯仿稀释(50mL)，用0.3M NaH2PO4 水溶液(75mL)洗涤，然后用2M KOH提取(20mL x 2)。将包含甲氧 基-嘧啶的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并且浓缩得到棕红色固体，将其 通过硅胶柱纯化(0-4％MeOH/CH2Cl2)，得到棕色油状物(0.43g)。合 并的KOH含水提取液用1M H2SO4水溶液酸化，并用氯仿提取(30mL x 2)，干燥(Na2SO4)，过滤并且浓缩，得到粗的羟基-嘧啶，为棕色固体 (0.84g)。
LC-MS：287.3[M+H]+
B)2-(4-溴-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-氯苄腈
[00302]在2分钟内向5-氯-2-(4-羟基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧 啶-6(5H)-基)苄腈(0.82g，2.8mmol)，N，N-二甲基苯胺(0.7mL)， 和N，N-二甲基甲酰胺(0.02mL)在乙腈(10mL)和苯甲醚(10mL)中的 混合物滴加POBr3(1.61g，5.6mmol)。将混合物在回流下加热2.5 小时，LC-MS显示反应完成。在冷却之后，混合物用氯仿(20mL)稀释 并且倾倒在搅拌的冰(50g)，50％KOH(8mL)和氯仿(100mL)的混合 物中。分离有机层并将水层用氯仿提取(25mLx2)。合并的有机层用 盐水(100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并且浓缩。残余物通过硅胶 柱纯化，得到棕色固体(0.35g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.85(s，1H)，7.61(d，1H，J＝ 2.4Hz)，7.52(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，7.11(d，1H，J＝8.8 Hz)，4.34(s，2H)，3.68(t，2H，J＝5.6Hz)，3.27(t，2H，J＝ 5.6Hz)。
中间体5
2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈

A)2-(4-甲氧基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈
[00303]为100mL烧瓶添加4-甲氧基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d] 嘧啶(2.78g，16mmol)，2-溴-5-甲基苄腈(4.18g，19.2mmol)， 双(二苄叉基丙酮)钯(0)(372mg，0.64mmol)，xantphos(529mg， 0.896mmol)，和叔丁醇钠(2.33g，24mmol)，用隔膜盖上并用氮气 吹扫。加入用干燥的氩气鼓泡的甲苯(50mL)。将非均质混合物置于 100℃的油浴中，并在氩气下加热过夜。在14小时之后，TLC显示反 应完成。使混合物离开加热，用乙酸乙酯稀释(50mL)，过滤并且真空 浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(0-100％EtOAc/己烷)，得到浅橙色固 体。
B)2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈
[00304]将2-(4-甲氧基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)- 5-甲基苄腈(4.15g，14.1mmol)，N，N-二甲基苯胺(0.18mL，1.4 mmol)，N，N-二甲基甲酰胺(0.21mL，2.7mmol)和乙腈(35mL)的混 合物在105℃加热到溶解。在3分钟内滴加磷酰氯(5.3mL，56 mmol)，并将反应在110℃加热回流。在40分钟之后，在3分钟内滴 加另外的磷酰氯(5.3mL，0.056mol)。在另一个20小时之后，1H NMR显示反应完全大约70％，使反应混合物冷却并倾倒在冰(200g) 上，加入45％NaOH水溶液(75mL)。混合物用CH2Cl2提取(3x200 mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化 (0-100％EtOAc/己烷)，得到棕色油状物，其在冷冻器中变为固体。
LC-MS：285.5[M+H]+
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.81(s，1H)，7.42(d，1H，J＝ 2.1Hz)，7.34(dd，1H，J＝8.4，2.1Hz)，7.04(d，1H，J＝8.4 Hz)，4.29(s，2H)，3.60(t，2H，J＝5.7Hz)，3.23(t，2H，J＝ 5.7Hz)，2.32(s，3H)。
中间体6
5-氯-2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈

A)5-氯-2-(4-甲氧基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄 腈
[00305]将4-甲氧基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶(12.88g， 0.078mol)，5-氯-2-氟苄腈(40g，0.2mol)，和1，8-二氮杂双环 [5.4.0]十一碳-7-烯(60mL，0.4mol)的混合物在80℃加热3小时。 在冷却之后，混合物用CH2Cl2稀释(300mL)，用水洗涤，干燥并浓 缩，得到棕色固体，将其通过硅胶色谱法纯化(0-50％EtOAc/己烷)， 得到固体(19.33g，78.3％)。
B)5-氯-2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00306]将5-氯-2-(4-甲氧基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶- 6(5H)-基)苄腈(4.15g，13.1mmol)，N，N-二甲基苯胺(0.18mL， 1.4mmol)，N，N-二甲基甲酰胺(0.21mL，2.7mmol)和乙腈(35mL) 的混合物在105℃加热以便溶解。在3分钟内滴加磷酰氯(5.3mL，56 mmol)并将混合物在110℃加热回流。在回流另一个20小时之后，使 反应混合物冷却并倾倒在冰上(200g)，然后加入45％NaOH(75mL)。 混合物用CH2Cl2提取(3x 200mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥并且 浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(0-100％EtOAc/己烷)，得到黄 色油状物，其在冷冻器中变为固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.83(s，1H)，7.59(d，1H，J＝ 2.4Hz)，7.50(dd，1H，J＝8.7，2.4Hz)，7.09(d，1H，J＝8.7 Hz)，4.32(s，2H)，3.66(t，2H，J＝5.7Hz)，3.25(t，2H，J＝ 5.7Hz)。
中间体7和8
(R)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙胺和(S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶- 3-基)乙胺

A)N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲基)烟酰胺
[00307]在3-5分钟内向搅拌的N，O-二甲基羟胺盐酸盐(9.47g， 97.1mmol)和吡啶(18.6mL，230mmol)在CH2Cl2(100mL)中的混合 物加入6-(三氟甲基)烟酰氯(18.50g，88.28mmol)的CH2Cl2(250mL) 溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后小心地用150mL的NaHCO3 饱和水溶液猝灭并搅拌约1小时。混合物用CH2Cl2(50mL)稀释并将 有机相分离，用NaHCO3水溶液(100mL)和盐水(50mL)洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并蒸发。残余物再溶解于甲苯(约50mL)中并再次蒸 发，以便共沸除去吡啶。用甲苯(约50mL)重复一次。分离产物，为 无色油状物(含少量的结晶材料)(19.1g，92％)。
LC-MS：235.4[M+1]+；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ9.05(d，1H，J＝1.6Hz)， 8.22(dd，1H，J＝8.0，1.6Hz)，7.76(d，1H，J＝8.0Hz)， 3.57(s，3H)，3.42(s，3H)。
B)1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙酮
[00308]将N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲基)烟酰胺(19.1g，81.6 mmol)溶解于四氢呋喃(410mL)。系统用N2吹扫然后冷却到0℃。使用 加料漏斗滴加含1.4M甲基溴化镁的甲苯/THF(75∶25)(87.4mL， 122.4mmol)。在滴加结束时，混合物为混浊的灰白色。将混合物在0 ℃搅拌1小时，并且通过小心地滴加1M HCl水溶液(150mL)猝灭， 用乙醚(300mL)和EtOAc(100mL)稀释。分离有机层并用0.1M NaOH 水溶液(200mL)和盐水(2x 50mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓缩，得 到浅黄色固体(15.04g，98％)。
LC-MS：190.2[M+1]+；1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ9.25(d， 1H，J＝1.6Hz)，8.42(dd，1H，J＝8.0，1.6Hz)，7.82(d，1H， J＝8.0Hz)，2.70(s，3H)。
C)(R)-2-甲基-N-((R)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)丙烷- 2-亚硫酰胺(sulfinamide)和(R)-2-甲基-N-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡 啶-3-基)乙基)丙烷-2-亚硫酰胺
[00309]在N2下向1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙酮(15.0g，79.3 mmol)的四氢呋喃(450mL)溶液加入四乙氧基钛(28.8mL，132 mmol)。然后加入固体(R)-(+)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(8.01g， 66.1mmol)并将反应加热回流过夜。将得到的亚胺溶液冷却到-45℃ 到-50℃并且通过导管引入到包含被冷却到-45℃到-50℃的硼氢化钠 (12.5g，330mmol)和四氢呋喃(100mL)的烧瓶中。将得到混浊的橙 色溶液在-40℃搅拌4小时，然后缓慢回温到室温并且在室温搅拌2 天。在冷却到0℃之后，通过滴加MeOH(100mL)、随后滴加水(40mL) 将反应混合物小心地猝灭。将混合物搅拌约20分钟，然后旋转蒸发到 干燥。加入EtOAc(500mL)并将混合物搅拌约1小时，然后分批加入 盐水(50mL)。混合物过滤通过Celite，滤饼用EtOAc洗涤(3x 100 mL)。滤液用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，浓 缩，得到浅黄色蜡状固体(22.40g，96％)。粗产物的1H NMR显示约 93∶7的两种非对映异构体比例。产物从EtOAc(150mL)重结晶并用用 冷的EtOAc洗涤(3x 20mL)，得到白色结晶固体(12.22g， 52.5％)，为(R，R)-异构体。将母液浓缩并通过硅胶柱色谱法纯化，得 到另外的(R，R)-异构体(5g，21％)和(R，S)-异构体(1.1g)，使其从 甲基环己烷重结晶，得到灰白色固体。在所有情况中，每个重结晶级 分(R，R和R，S)的1H NMR(CDCl3和DMSO-d6)显示存在有低于1％的另一 种异构体并具有良好的纯度。
(R，R)-异构体：LC-MS：295.4[M+1]+；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.73(d，1H，J＝1.6Hz)， 7.90(dd，1H，J＝8.0，2.4Hz)，7.69(d，1H，J＝8.0Hz)， 4.68(m，1H)，3.53(d，1H，J＝3.6Hz)，1.59(d，3H，J＝6.8 Hz)，1.25(s，9H)。1H NMR(d6-DMSO)：8.80(d，1H，J＝1.6Hz)， 8.11(dd，1H，J＝8.0，2.0Hz)，7.90(d，1H，J＝8.0Hz)， 5.94(d，1H，J＝7.6Hz)，4.57(p，1H，J＝7.2Hz)，1.46(d， 3H，J＝7.2Hz)，1.13(s，9H)。
(R，S)-异构体：1H NMR(400MHz，CDCl3)：8.73(d，1H，J＝1.6 Hz)，7.84(dd，1H，J＝8.0，1.6Hz)，7.67(d，1H，J＝8.0Hz)， 4.72(m，1H)，3.42(d，1H，J＝2.4Hz)，1.60(d，3H，J＝6.8 Hz)，1.23(s，9H)。1H NMR(d6-DMSO)：8.77(d，1H，J＝1.6Hz)， 8.06(dd，1H，J＝8.0，2.0Hz)，7.90(d，1H，J＝8.0Hz)， 5.67(d，1H，J＝6.0Hz)，4.62(p，1H，J＝6.4Hz)，1.52(d， 3H，J＝6.8Hz)，1.12(s，9H)。
D)(R)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙胺。
[00310]向200mL烧瓶加入(R)-2-甲基-N-((R)-1-(6-(三氟甲基) 吡啶-3-基)乙基)丙烷-2-亚硫酰胺(12.75g，43.32mmol)，随后加 入1，4-二氧杂环己烷(58mL)。加入6.0M的HCl水溶液(28.9mL)并 将反应室温搅拌1.5小时，以确保所有的亚硫酰氯被破坏。将溶剂蒸 发并且残余物用CH2Cl2(200mL)和1M NaOH水溶液(200mL)处理。分 离有机层并将水层用CH2Cl2提取(2x50mL)。将有机层合并并用 Na2SO4干燥，并且浓缩，得到澄清的无色液体(8.30g)。手性HPLC分 析(ChiralPac AD-H柱250x 4.6mm，己烷/iPrOH/Et2NH： 95/5/0.05)：97.8％R-异构体(10.69分钟)，0.63％S-异构体(9.63 分钟)。
LC-MS：191.2[M+1]+；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.72(d，1H，J＝1.6Hz)， 7.92(dd，1H，J＝8.0，2.0Hz)，7.66(d，1H，J＝8.0Hz)， 4.30(q，1H，J＝6.8Hz)，1.62(s，2H)，1.43(d，3H，J＝6.8 Hz)。
E)(S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙胺。
[00311]向含(R)-2-甲基-N-((S)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基) 丙烷-2-亚硫酰胺(355mg，1.21mmol)的20mL闪烁小瓶加入1，4-二 氧杂环己烷(1.6mL)和6.0M的HCl水溶液(0.80mL)。将反应室温 搅拌约2小时，然后将二氧杂环己烷蒸发。加入水(3mL)并加入1M NaOH水溶液，直到得到pH＞12。碱性水溶液用CH2Cl2提取(5mLx 2)。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并且蒸发，得到澄清的浅黄色 液体(123mg，54％)。手性HPLC分析(ChiralPac AD-H柱250x 4.6 mm，己烷/iPrOH/Et2NH：95/5/0.05)：97％S-异构体(9.61分钟)，在 10.7分钟没有R-异构体的明显迹象。
LC-MS：191.2[M+1]+；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.72(d，1H，J＝1.6Hz)， 7.92(dd，1H，J＝8.0，2.0Hz)，7.66(d，1H，J＝8.0Hz)， 4.30(q，1H，J＝6.8Hz)，1.55(s，2H)，1.43(d，3H，J＝6.8 Hz)。
中间体9
(5-环丙基吡啶-2-基)甲胺

A)2-氰基-5-环丙基吡啶
[00312]在氩气下向5-氯-2-氰基吡啶(1.25g，9.02mmol)，环丙 基硼酸(1.00g，11.7mmol)，磷酸钾(6.70g，31.6mmol)，三环己 基膦(380mg，1.4mmol)，甲苯(200mL)，和水(2mL)的混合物加入 乙酸钯(150mg，0.68mmol)。将混合物在100℃加热过夜，然后冷却 到室温。混合物过滤通过Celite并将滤饼用EtOAc洗涤。滤液用水洗 涤，干燥(Na2SO4)，并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(EtOAc/己烷： 0-50％)，得到浅黄色油状物，其在室温静置时变为固体。
LC-MS：145.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.49(d，1H，J＝2.4Hz)， 7.57(d，1H，J＝8.0Hz)，7.37(dd，1H，J＝8.0，2.4Hz)， 1.97(m，1H)，1.18(m，2H)，0.83(m，2H)。
B)(5-环丙基吡啶-2-基)甲胺
[00313]向2-氰基-5-环丙基吡啶(210mg，1.4mmol)在含7.0M 氨的20mL MeOH中的溶液加入一小勺拉尼镍浆料。将混合物在50 psi氢化过夜。将催化剂滤掉并将滤液浓缩，得到深色的油状物，其 不经进一步纯化用于下一步。
LC-MS：149.2[M+H]+
中间体10
(S)-2-氨基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙醇

A)2-甲氧基-5-乙烯基吡啶。
[00314]在氮气气氛下在-78℃向三苯基甲基溴化鏻(31.2g， 0.0875mol)在THF(150mL)中的悬浮液在30分钟的时间内加入含 2.5Mn-BuLi(38.0mL，0.0948mol)的己烷。使反应回温到室温， 得到深红色内鎓盐溶液。向在冰中冷却的内鎓盐溶液引入含6-甲氧基 吡啶甲醛(methoxynicotinaldehyde)(10.0g，0.0729mol)的 THF(30mL)。使反应回到室温并且在室温搅拌3小时。然后在30分 钟内将得到的悬浮液加热到60℃并在60℃加热1小时。在冷却之后， 反应用水(500mL)稀释。产物提取到乙醚中，用盐水洗涤，干燥 (MgSO4)并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(0-40％EtOAc/己烷)，得到 浅黄色油状物。LC-MS：136.0[M+1]+；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.12(d，1H，J＝2.4Hz)， 7.70(dd，1H，J＝8.4，2.4Hz)，6.72(d，1H，J＝8.4Hz)， 6.65(dd，1H，J＝17.6，11.2Hz)，5.64(d，1H，J＝17.6Hz)， 5.22(d，1H，J＝11.2Hz)，3.94(s，3H)。
B)(R)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙烷-1，2-二醇。
[00315]为500mL烧瓶添加叔丁醇(130mL)，水(130mL)，和AD- mix-β(36.5g)。在室温搅拌产生透明的两相；下层水相呈亮黄色。 将混合物冷却到0℃，这时有一些溶解的盐沉淀出来。一次性加入2- 甲氧基-5-乙烯基吡啶(3.5g，26mmol)，并将非均质的浆料在0℃剧 烈搅拌6小时。LC-MS显示反应完成。在将混合物在0℃搅拌时，加入 固体亚硫酸钠(39g)并使混合物回温到室温并搅拌1小时。向反应混 合物加入EtOAc(250mL)，并在分液之后将水相进一步用EtOAc提取 (3x 100mL)。合并的有机层用无水MgSO4干燥并且真空浓缩。残余 物通过硅胶柱纯化(0-100％EtOAc/己烷)，得到二醇，为白色固体 (2.76g，63％)。LC-MS：170.2[M+1]+。
C)(R)-2-羟基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基4-甲基苯磺酸酯。
[00316]在0℃向搅拌的(R)-1-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙烷-1，2-二 醇(2.7g，0.016mol)和吡啶(10mL)在CH2Cl2(100mL)中的溶液分 多个小部分加入对甲苯磺酰氯(3.6g，0.019mol)。混合物缓慢回温 到室温并且搅拌24小时，然后用CH2Cl2(100mL)稀释。有机相用 NaHCO3水溶液、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓缩，得到固体(6.0g)。 LC-MS：324.0[M+H]+。
D)(R)-2-甲氧基-5-(氧杂环丙烷-2-基)吡啶。
[00317]在0℃向搅拌的(R)-2-羟基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙基 4-甲基苯磺酸酯在MeOH(150mL)中的溶液加入碳酸钾(4.4g，0.032 mol)，混合物在室温搅拌过夜。混合物过滤通过Celite并将滤饼用 MeOH洗涤。将滤液浓缩并将残余物用EtOAc(150mL)和Na2CO3水溶液 处理。分离有机层并用洗涤盐水，干燥(Na2SO4)并且浓缩。残余物通过 硅胶柱纯化，得到期望的环氧化物，为无色油状物(1.02g，42％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.14(d，1H，J＝2.4Hz)， 7.40(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，6.73(d，1H，J＝8.4Hz)， 3.93(s，3H)，3.84(m，1H)，3.16(m，1H)，2.83(m，1H)。
E)(S)-2-叠氮基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙醇。
[00318]向搅拌的(R)-2-甲氧基-5-(氧杂环丙烷-2-基)吡啶(1.02g， 6.75mmol)在乙腈(100mL)中的溶液加入叠氮化钠(1.8g，27mmol) 和高氯酸锂(11g，0.10mol)并将混合物在60℃搅拌4小时。TLC显 示反应完成。在冷却之后，混合物过滤通过Celite并将滤液浓缩。残 余物用水处理并用EtOAc提取(3x 50mL)。合并的有机层用NaHCO3 水溶液和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化 (0-50％EtOAc/己烷)，得到浅黄色油状物(0.9g，69％)。
LC-MS：195.2[M+H+；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.14(d，1H，J＝2.4Hz)， 7.58(dd，1H，J＝8.4，2.4Hz)，6.79(d，1H，J＝8.4Hz)， 4.64(t，1H，J＝6.4Hz)，3.95(s，3H)，3.75(d，2H，J＝6.4 Hz)，1.90(bs，1H)。
F)(S)-2-氨基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙醇。
[00319]将(S)-2-叠氮基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙醇(0.90g， 4.6mmol)，EtOAc(50mL)，和10％Pd-C(100mg)的混合物在H2(1 atm)气氛下搅拌1小时。将催化剂过滤掉并将滤液真空浓缩，得到浓 稠的油状物(0.78g，100％)。
LC-MS：169.2[M+1]+；
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：8.08(d，1H，J＝2.4Hz)， 7.68(dd，1H，J＝8.4，2.4Hz)，6.75(d，1H，J＝8.4Hz)， 4.78(t，1H，J＝5.6Hz)，3.85-3.80(m，4H)，3.38(m，1H)， 3.31(m，1H)，1.83(bs，2H)。
中间体11和12
(R)-3-氨基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇和(S)-3-氨基-3- (6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇

A)2-(1，3-二氧杂环戊烷-2-基)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙 醇
[00320]在0℃在氮气气氛下向6-(三氟甲基)吡啶甲醛(23.5g， 0.134mol)在四氢呋喃(500mL)中的悬浮液加入0.5M的(1，3-二氧 杂环戊烷-2-基甲基)-溴化镁的四氢呋喃溶液(400mL，0.20mol)，并 使反应回温到室温，然后回流过夜。将反应混合物冷却到室温并且用 水猝灭。水层用EtOAc提取并将有机层合并，用MgSO4干燥，过滤， 并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(0-50％EtOAc/己烷)，得到黄色油 状物。
B)5-(1-叠氮基-2-(1，3-二氧杂环戊烷-2-基)乙基)-2-(三氟甲基) 吡啶
[00321]将2-(1，3-二氧杂环戊烷-2-基)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3- 基)乙醇(18.54g，0.070mol)和二苯基膦酸叠氮化物(36mL，0.17 mol)在甲苯(40mL)中的混合物冷却到0℃并加入纯净的1，8-二氮杂 双环[5.4.0]十一碳-7-烯(25mL，0.17mol)。将反应混合物在0℃搅 拌2小时，然后在20℃搅拌过夜。混合物用水和5％HCl洗涤。水相 用CH2Cl2提取。将合并的有机层真空浓缩并将残余物通过硅胶柱纯化 (0-100％EtOAc/己烷)，得到无色油状物。
C)3-叠氮基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙醛
[00322]在0℃将5-(1-叠氮基-2-(1，3-二氧杂环戊烷-2-基)乙基)- 2-(三氟甲基)吡啶(7.44g，25.8mmol)的四氢呋喃(60mL)溶液用 20％HCl水溶液(60mL)处理。将混合物在室温搅拌1.5小时。在反应 完成之后，加入乙醚并且分离有机层，用MgSO4干燥，并浓缩，得到 粗的油状物，未进行进一步纯化。
D)3-叠氮基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇
[00323]在0℃向搅拌的粗的3-叠氮基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基) 丙醛(5.0g，20.5mmol)的四氢呋喃(100mL)溶液加入硼氢化钠 (1.52g，40.1mmol)。将混合物在室温搅拌10分钟。在反应完成之 后，加入盐水并将混合物用乙醚提取。将有机层干燥并浓缩，得到粗 的油状物，将其通过硅胶色谱法纯化，得到浅黄色油状物。
E)3-氨基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇
[00324]将3-叠氮基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇(7.29 g，29.6mmol)，乙酸乙酯(320mL)，和10％Pd-C(3.2g)的混合物在 H2(1atm)下搅拌过夜。将催化剂过滤掉并将滤液真空浓缩，得到标题 产物。
F)(S)-3-氨基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇和(R)-3- 氨基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇
[00325]外消旋的3-氨基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇 (1.10g，5.00mmol)通过手性HPLC拆分(条件：CHIRALPAK AD-H柱， 20x 250mm，己烷/EtOH[88∶12]，流速20mL/min，UV 230nm)， 得到(S)-3-氨基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇和(R)-3-氨 基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙烷-1-醇。分析用手性HPLC： CHIRALPAK AD-H柱，250x 4.6mm，己烷/EtOH[90∶10]，流速1.0 mL/min，UV 230nm)；(S)-异构体的保留时间：18.68分钟(＞99％ ee)；(R)-异构体的保留时间：23.56分钟(＞99％ee)。
中间体13
(2-甲基嘧啶-5-基)甲胺

A)2-甲基嘧啶-5-甲醛
[00326]在30分钟的时间内向搅拌的盐酸乙脒(19.4g，0.20mol) 和vinamidinium盐(48.91g，0.183mol)在乙腈(240mL)中的浆液 中加入40重量％的NaOH水溶液(27.4g，0.274mol)。在添加完成之 后，将得到的反应混合物室温搅拌过夜。将混合物真空浓缩并用水 (250mL)稀释，用EtOAc提取(3x 250mL)。合并的有机层用硫酸钠 干燥并且真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(0-100％EtOAc/己 烷)，得到白色固体。
B)(2-甲基嘧啶-5-基)甲醇
[00327]将2-甲基嘧啶-5-甲醛(6.48g，53.1mmol)的甲醇(320 mL)溶液冷却到0℃并用硼氢化钠(2.9g，77mmol)处理。在30分钟 之后，反应用H2O(50mL)处理并用Et OAc提取(250mL x 15)。将有 机层合并并用MgSO4干燥，浓缩，得到白色固体。
C)5-(叠氮基甲基)-2-甲基嘧啶
[00328]将(2-甲基嘧啶-5-基)甲醇(0.82g，6.6mmol)在甲苯(30 mL)和二氯甲烷(40mL)中的溶液在0℃用二苯基膦酸叠氮化物(2.8mL， 13mmol)处理，随后用1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(2.0mL， 13mmol)处理并在0℃搅拌2小时。在室温搅拌另外的16小时之后， 反应混合物用水(50mL)和二氯甲烷(50mL)稀释。分离有机层并用盐 水洗涤，干燥(Mg2SO4)，过滤，并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化，得 到无色油状物。
D)(2-甲基嘧啶-5-基)甲胺
[00329]将含5-(叠氮基甲基)-2-甲基嘧啶(2.0，13.4mmol)的乙 酸乙酯(100mL)和10％Pd-C(4.0g)的混合物在H2(1atm)下搅拌1.5 小时。将催化剂过滤掉并将滤液真空浓缩，得到白色固体。
1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ8.67(s，2H)，3.81(s，2H)， 2.66(s，3H)。
中间体14
(S)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)乙胺

A)2-甲氧基嘧啶-5-甲醛
[00330]在10分钟时间内向搅拌的0-甲基异脲半硫酸盐(1.08g， 4.13mmol)，vinamidinium盐(3.00g，8.26mmol)，1-甲基乙酸乙 酯(16.0mL，137mmol)浆液中加入碳酸氢钾(1.17g，11.6mmol)的 水溶液(5.0mL)。在加入完成之后，将得到的反应混合物在室温搅拌 40小时。混合物用水(20mL)稀释并用EtOAc提取(2x 25mL)。合并 的有机层用硫酸钠干燥并浓缩，得到白色固体。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：4.11(s，3H)，8.97(s，2H)， 10.00(s，1H)。
B)2-甲氧基-5-乙烯基嘧啶
[00331]在氮气气氛下在-78℃向甲基三苯基溴化鏻(24.8g，69.4 mmol)在THF(150mL)中的悬浮液在12分钟时间内加入含2.5M正丁 基锂的己烷(28mL，70mmol)。使反应回温到室温，得到深红色内鎓 盐溶液。向在冰中冷却的内鎓盐溶液引入含2-甲氧基嘧啶-5-甲醛(8 g，65.6mmol)的THF(50mL)。使反应回到室温并且搅拌3小时。将 得到的悬浮液在30分钟内加热到60℃，然后在60℃加热1小时。在 冷却之后，反应混合物用水(400mL)稀释并用EtOAc提取(2x 150 mL)。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并且浓缩。残余物通过 硅胶柱色谱法纯化(EtOAc/己烷0-30％)，得到标题化合物。
C)(R)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)乙烷-1，2-二醇
[00332]为100mL烧瓶添加叔丁醇(39mL)，水(39mL)，和AD- mix-β(11.0g)。在室温下搅拌产生透明的两相；下层水相呈亮黄 色。将混合物冷却到0℃，这时有一些溶解的盐沉淀出来。一次性加 入2-甲氧基-5-乙烯基嘧啶(1.07g，7.86mmol)，并非均质的浆料 在-20℃剧烈搅拌过夜。TLC显示反应完成。在将混合物在0℃搅拌的 同时，加入固体亚硫酸钠(12g，94mmol)并使混合物回温到室温并 搅拌1小时。向反应混合物加入EtOAc(100mL)，并在分液之后，将 水相进一步用EtOAc提取(2x 100mL)。合并的有机层用无水MgSO4 干燥并且真空浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(EtOAc/己烷：50- 100％)，得到二醇，为白色固体。
D)(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基) 乙醇
[00333]将(R)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)乙烷-1，2-二醇(3.46g， 20.3mmol)和咪唑(3.08g，44.7mmol)的混合物溶解于二氯甲烷(40 mL)。将混合物冷却到0℃并且加入溶解于二氯甲烷(40mL)的叔丁基 二甲基甲硅烷基氯(3.48g，22.4mmol)。将反应在0℃搅拌30分 钟，然后在室温反应过夜。混合物用水(200mL)处理并用二氯甲烷提 取(2x 200mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥并且浓缩。残余物通过 硅胶柱色谱法纯化(0-50％EtOAc/己烷)，得到无色油状物。
E)(S)-5-(1-叠氮基-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-甲 氧基嘧啶
[00334]将(R)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(2-甲氧基嘧啶- 5-基)乙醇(4.4g，15mmol)和二苯基膦酸叠氮化物(16.7mL，77.3 mmol)的混合物溶解于甲苯(53mL)。将混合物冷却到0℃并且加入纯 净的1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(11.8mL，77.3mmol)。将 反应在0℃搅拌30分钟，然后在60℃反应过夜。混合物用水(50mL) 和5％HCl(50mL)洗涤。将有机层真空浓缩并且通过硅胶色谱法纯化 (0-25％EtOAc/己烷)，得到无色油状物。
F)(S)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基) 乙胺
[00335]将含(S)-5-(1-叠氮基-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙 基)-2-甲氧基嘧啶(11.7g，37.7mmol)的乙酸乙酯(300mL)和10％ Pd-C(70mg)的混合物在H2(1atm)下搅拌过夜。将催化剂过滤掉并将 滤液浓缩，得到浅色油状物。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(0-50％ MeOH/EtOAc)，得到无色油状物。
中间体15和16
(S)-1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙胺和(R)-1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙胺

A)2-甲基嘧啶-5-甲醛
[00336]向搅拌的盐酸乙脒(19.4g，0.20mol)和vinamidinium盐 (48.91g，0.183mol)在乙腈(240mL)中的浆液中在30分钟时间内 加入40重量％NaOH的水溶液(27.4g，0.274mol)。在添加完成之 后，将得到的反应混合物室温搅拌过夜。将混合物真空浓缩并用水 (250mL)稀释，用EtOAc提取(3x 250mL)。合并的有机层用硫酸钠 干燥并且真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(0-100％EtOAc/己 烷)，得到白色固体。
B)1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙醇
[00337]在0℃向搅拌的2-甲基嘧啶-5-甲醛(5.00g，38.9mmol) 的四氢呋喃(85mL)溶液缓慢加入33mL的含1.4M甲基溴化镁的四 氢呋喃溶液。将混合物室温搅拌1小时，然后用水(50mL)猝灭并用 EtOAc提取(3x 200mL)。合并的有机层用硫酸钠干燥并且真空浓 缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化(0-100％EtOAc/己烷)，得到无色 油状物。
C)5-(1-叠氮基乙基)-2-甲基嘧啶
[00338]在0℃向搅拌的1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙醇(2.48g，17 mmol)和二苯基膦酸叠氮化物(9.3mL，41mmol)在甲苯(54.5mL)中 的混合物加入纯净的1，8-二氮杂双环[5.4.0]十-碳-7-烯(6.2mL， 41mmol)。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后在室温搅拌过夜。 混合物用EtOAc(100mL)稀释并用水洗涤(100mL x 2)。将有机层真 空浓缩并且通过硅胶色谱法纯化(0-100％EtOAc/己烷)，得到无色油 状物。
D)1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙胺
[00339]将5-(1-叠氮基乙基)-2-甲基嘧啶(2.20g，12.8mmol)， 乙酸乙酯(170mL)，和10％炭载钯(1.32g)的混合物在氢气(1atm)下 搅拌过夜。将混合物过滤并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(0-50％ MeOH/含10％Et3N的EtOAc)，得到无色油状物。
1H NMR(300MHz，CD3OD)：δ8.71(s，2H)，4.12(q，1H，J＝ 6.6Hz)，2.67(s，3H)，1.44(d，J＝6.6Hz，3H)。
E)(S)-1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙胺和(R)-1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙 胺
[00340]外消旋的1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙胺(2.78g，20.3mmol) 通过拆分手性HPLC(样品制备：将样品溶解于4mL EtOH(加热)并加 入8mL己烷)。HPLC条件：CHIRALPAK AD-H柱，0℃[冰浴]，20x 250mm，己烷/EtOH/Et2NH[85∶15∶0.03]，流速为20mL/min，UV检 测230nm)，得到(S)-1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙胺(1.19g，＞99％ee) 和(R)-1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙胺(1.16g，＞99％ee)。
中间体17
(R)-3-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)丙烷-1-醇

A)(E)-叔丁基3-(6-甲基吡啶-3-基)丙烯酸酯
[00341]向5-溴-2-甲基吡啶(5g，29.06mmol)的NMP(60mL)溶液 加入Pd(OAc)2(0.325g，1.45mmol)和P(o-tol)3(0.883g，2.9 mmol)。随后，在N2下将叔丁基丙烯酸酯(13.02g，101.7mmol)的 Et3N(16.1mL，116.2mmol)溶液加入到上述混合物中并在90℃搅 拌。在16小时之后，向反应混合物加入水并用Et2O提取(3x)。合并 的有机相用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱 色谱法纯化(SiO2，100-200目，Et2O/石油醚1∶9)，得到标题化合 物。MS：220[M+H]+；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.6(s，1H)，7.7(d，J＝5.8Hz， 1H)，7.5(d，J＝16.0Hz，1H)，7.1(d，J＝8.5Hz，1H)， 6.4(d，J＝16.0Hz，1H)，2.6(s，3H)和1.5(s，9H)。
B)(R)-叔丁基3-(苄基((S)-1-苯基乙基)氨基)-3-(6-甲基吡啶- 3-基)丙酸酯
[00342]在-70℃向(S)-N-苄基-1-苯基乙胺(3.64g，17.26mmol) 的THF(40mL)溶液在30分钟时间内滴加n-BuLi(1.6M，14.7mmol) 并且进一步搅拌。在1小时之后，向上述混合物缓慢加入(E)-叔丁基 3-(6-甲基吡啶-3-基)丙烯酸酯(2.7g，12.3mmol)的THF溶液并且 进一步搅拌。在2小时之后，向反应混合物加入NH4Cl饱和溶液并用 EtOAc提取(3x)。合并的有机相用无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到 残余物。残余物通过柱色谱法纯化(中性Al2O3，Et2O/石油醚5∶95)， 得到标题化合物。
MS：431.6[M+H]+；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ8.5(dd，J＝2Hz，1H)7.2-8.7(m， 13H)，6.4(d，J＝16.0Hz，1H)，3.96(t，J＝6.8Hz，1H)， 3.9(q，J＝6.8Hz，1H)，3.6(s，2H)，2.4-2.6(m，5H)， 1.6(s，2H)和1.2(s，9H)。
C)(R)-3-(苄基((S)-1-苯基乙基)氨基)-3-(6-甲基吡啶-3-基)丙 烷-1-醇
[00343]在0℃向LiAlH4(1.24g，32.79mmol)的THF(80mL)溶液 滴加(R)-叔丁基3-(苄基((S)-1-苯基乙基)氨基)-3-(6-甲基吡啶-3- 基)丙酸酯(4.7g，10.93mmol)的THF溶液并加热到75℃。在4小时 之后，反应混合物用EtOAc猝灭并过滤。滤液用过量的EtOAc洗涤并 且高真空干燥，得到残余物。残余物通过柱色谱法纯化(中性Al2O3， Et2O/石油醚15∶85)，得到标题化合物。
MS：361.5([M-H]+)；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.2-8.5(m，13H)，4.0-4.1(m，2 H)，3.4-3.6(m，3H)，3.3-3.4(m，1H)，2.6-2.7(m，3H)，2.0- 2.2(m，3H)和1.1(d，J＝5.6Hz，3H)。
D)(R)-3-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)丙烷-1-醇
[00344]向(R)-3-(苄基((S)-1-苯基乙基)氨基)-3-(6-甲基吡啶-3- 基)丙烷-1-醇(2.1g，5.83mmol)在HPLC MeOH(40mL)中的溶液加 入AcOH(0.34mL，5.8mmol)，Pd(OH)2(0.42g)和HCOONH4(1.8g， 29.16mmol)并且加热到回流。在1小时之后，将反应混合物过滤通过 Celite垫并将滤液真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱法纯化 (中性Al2O3，NH3水溶液/MeOH/CH2Cl2，1∶20∶80)，得到标题化合物。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ7.2-8.4(m，3H)，4.2(t，J＝3.6 Hz，1H)，3.8(t，J＝5.1Hz，2H)，2.6(s，3H)，2.2(br，3H) 和1.7-1.8(m，2H)。
中间体18
(S)-2-氨基-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙醇

[00345]将氢化铝锂(0.62g，0.016mol)分为多个小的部分缓慢加 入到冰冷却的含4-(三氟甲基)-L-苯基甘氨酸(1.8g，8.2mmol)的四 氢呋喃(60mL)混合物中。将混合物在1小时的时间内缓慢温热到室 温，然后加热回流过夜。将溶液冷却到0℃并用2.0M NaOH水溶液猝 灭。将沉淀物过滤掉并将滤饼用THF洗涤。将滤液浓缩并用CH2Cl2提 取(50mL x 3)。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)且真空浓 缩，得到浅黄色固体(0.9g，59％)。LC-MS：206.2[M+1]+。
中间体19和20
(R)-环丙基(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺和(S)-环丙基(6-(三氟甲 基)吡啶-3-基)甲胺

A)环丙基(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲酮。
[00346]在0℃向搅拌的N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲基)烟酰胺 (1.00g，4.27mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液在15分钟内滴加含0.5 M环丙基溴化镁的四氢呋喃溶液(20mL，0.01mol)。将混合物在0℃ 搅拌30分钟，然后室温搅拌过夜。反应用1N HCl猝灭。除去溶剂并 将水层用乙酸乙酯提取。将有机层合并并用MgSO4干燥，过滤并且浓 缩。粗产物通过硅胶柱纯化(0-60％乙酸乙酯/己烷)，得到浅黄色固 体。
B)(R)-N-((R)-环丙基(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-2-甲基丙 烷-2-亚硫酰胺和(R)-N-((S)-环丙基(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲 基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺。
[00347]在N2下向搅拌的Ti(OEt)4(1.1mL，5.5mmol)和环丙基 (6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲酮(0.84g，3.9mmol)的四氢呋喃(20 mL)溶液加入(R)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(0.57g，4.7mmol)。将混 合物加热到70℃并加热过夜。将混合物冷却到室温，然后冷却到-78 ℃，并且用套管缓慢转移到-78℃的含硼氢化钠(0.49g，13mmol)的 20mL THF溶液中。使反应缓慢温热到室温并且搅拌过夜，然后用甲 醇猝灭。溶液过滤通过Celite并将滤饼用乙酸乙酯洗涤。滤液用盐水 洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，并且浓缩。NMR显示粗的物质中含约10％ S-异构体(0.77g，62％)。通过硅胶柱分离非对映异构体(0-80％乙酸 乙酯/己烷)。R，R-异构体(主要)极性较小，而R，S-异构体极性较大。
C)(R)-环丙基(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺。
[00348](R)-N-((R)-环丙基(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-2-甲 基丙烷-2-亚硫酰胺(0.245g，0.000765mol)，乙醇(2.7g，0.059 mol)，和含4.0M氯化氢的二氧杂环己烷(2.7mL，0.011mol)合并并 搅拌过夜。将反应浓缩到油状物，然后再溶解并用洗涤乙醇洗涤三 次，并且浓缩。残余物高真空干燥过夜，得到标题化合物。
D)(S)-环丙基(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺。
[00349](S)-N-((R)-环丙基(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-2-甲 基丙烷-2-亚硫酰胺(0.245g，0.000765mol)，乙醇(2.7g，0.059 mol)，和含4.0M氯化氢的二氧杂环己烷(2.7mL，0.011mol)合并并 搅拌30分钟。将混合物搅拌过夜。除去溶剂并将残余物溶解于乙醇 中。在用乙醇洗涤三次之后，将混合物浓缩并将残余物高真空干燥过 夜，得到标题化合物。
中间体21
喹啉-7-基甲胺

A)7-(三氟甲基)喹啉
[00350]在三乙胺(6mL)存在下将4-氯-7-(三氟甲基)喹啉(9.35g， 0.0404mol)在含5％炭载钯(4g)的甲醇(180mL)中氢化。将溶液搅拌 3.5小时，然后过滤通过Celite。将滤液减压浓缩并将残余物用乙酸 乙酯和水处理。分离有机层，用水洗涤(2x 75mL)，用MgSO4干燥， 过滤，并减压浓缩为黄色固体。
B)喹啉-7-甲酸甲酯
[00351]将7-(三氟甲基)喹啉(1g，5mmol)溶解于80％发烟硫酸 (80∶20，硫酸∶水，50mL)中，将混合物加热到150℃过夜。将溶液冷 却到0℃并且缓慢加入甲醇(50mL)，将混合物回流过夜。在冷却之 后，将混合物减压浓缩为油状物并用Na2CO3饱和水溶液中和，用 EtOAc提取(30mL x 3)。合并的有机层用MgSO4干燥并且浓缩。残余 物通过硅胶柱纯化，得到标题化合物。
C)喹啉-7-基甲醇
[00352]在氮气气氛下在-20℃将喹啉-7-甲酸甲酯(5g，0.01mol) 溶解于四氢呋喃(40mL)。加入60％REDAL(60∶40，Red-Al(R)：甲苯， 6.53mL，0.0201mol)并将其在-20℃搅拌4小时。在回温到室温之 后，反应缓慢地用水猝灭，减压浓缩，在EtOAc和水之间分配并过滤 通过Celite。水相用EtOAc提取。合并的有机层用MgSO4干燥并减压 浓缩。残余物通过硅胶柱纯化，得到标题化合物。
D)7-(叠氮基甲基)喹啉
[00353]将喹啉-7-基甲醇(1.2g，7.2mmol)和二苯基膦酸叠氮化 物(3.8mL，17mmol)的混合物溶解于甲苯(20mL)和二氯甲烷(6 mL)。将混合物冷却到0℃并且加入纯净的1，8-二氮杂双环[5.4.0]十 一碳-7-烯(2.6mL，17mmol)。将反应在0℃搅拌30分钟，然后室温 反应2小时。混合物用CH2Cl2(100mL)稀释并用水洗涤(100mL x 2)。将有机层真空浓缩并且通过硅胶色谱法纯化(0-100％EtOAc/己 烷)，得到无色油状物。
E)喹啉-7-基甲胺
[00354]在拉尼镍(1.5g，26mmol)的存在下将7-(叠氮基甲基)喹 啉(1.1g，5.7mmol)在甲醇(30mL)中氢化(1atm)直到反应完成。 将催化剂过滤掉并将滤液减压浓缩为黄色油状物，将其溶解于 EtOAc(32mL)并用1N盐酸提取(3x 32mL)。合并的酸性水相用1N 氢氧化钠溶液调节到pH～10，并用EtOAc提取(3x 35mL)。合并的 有机层用MgSO4干燥，过滤，并减压浓缩，得到白色固体(0.89g， 94％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)8.83(d，J＝4.2Hz，1H)，8.36(d，J＝ 7.8Hz，1H)，7.97(s，1H)，7.94(d，J＝8.4Hz，1H)，7.64(d，J＝ 8.4Hz，1H)，7.52(dd，J＝7.8，4.2Hz，1H)，4.05(s，2H)。
代表性的方法
方法A(化合物1)
5-甲基-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

A)6-苄基-N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡 啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺
[00355]为两个20mL微波反应瓶各自加入6-苄基-4-氯-5，6，7，8- 四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶(5.62g，21.6mmol)，(6-(三氟甲基)吡啶- 3-基)甲胺(5.0g，28mmol)，N，N-二异丙基乙胺(7.6mL，44mmol) 和乙腈(10mL)的一半部分，并使混合物经历在200℃的微波辐射，持 续3.5小时。LC-MS分析显示两个样品均反应完成。将样品合并并在 CH2Cl2(150mL)和0.5M NaH2PO4(pH 4；120mL)之间分配。有机层用 2MHCl(60mL，30mL)提取。合并的酸性提取物用50％KOH(25mL)碱 化，用CH2Cl2提取(2x 100mL)，干燥(Na2SO4)，过滤并且浓缩，得 到浅棕色油状物，将其吸附在二氧化硅(40g)上并过柱纯化(120g 硅胶，0-7.5％MeOH/CH2Cl2)，得到浅黄色泡沫状物(7.42g，86％)。
LC-MS：400.4[M+H]+
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.67(d，1H，J＝1.8Hz)， 8.45(s，1H)，7.83(dd，1H，J＝8.0，1.8Hz)，7.62(d，1H，J＝ 7.9Hz)，7.39-7.27(m，5H)，4.79(s，2H)，3.77(s，2H)，3.31(s， 2H)，2.90-2.80(m，4H)。
B)N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并 [4，3-d]嘧啶-4-胺
[00356]将6-苄基-N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8- 四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺(7.41g，18.6mmol)，甲醇(300mL)， 和10％炭载钯(1.0g)的混合物排空并用氢气吹扫3次，然后在室温下 氢化(1atm)2天。混合物过滤通过Celite垫并将滤饼用MeOH洗涤。 将滤液真空浓缩，得到浅黄色泡沫状物(4.8g)。LC-MS：310.4 [M+H]+
C)5-溴-2-(4-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)-7，8-二氢吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00357]使N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶 并[4，3-d]嘧啶-4-胺(1.0g，3.2mmol)，5-溴-2-氟苄腈(0.97g， 4.8mmol)，N，N-二异丙基乙胺(1.7mL，9.7mmol)，和乙腈(10mL) 的混合物经历180℃的微波辐射2小时。加入更多的5-溴-2-氟苄腈 (1.0g)并将混合物经历180℃的微波辐射另外的2小时。然后加入另 外的5-溴-2-氟苄腈(1.0g)并使反应混合物经历180℃的微波辐射另 外的2小时。在冷却之后，混合物用EtOAc(100mL)稀释并用Na2CO3 水溶液和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化 (100％EtOAc)，得到浅黄色固体(0.90g，57％)。
LC-MS：491.1[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.76(s，1H)，8.30(s，1H)， 8.03(d，1H，J＝2.4Hz)，7.99(d，1H，J＝8.8Hz)，7.88(dd， 1H，J＝8.8，2.4Hz)，7.84(d，1H，J＝8.0Hz)，7.64(t，1H， J＝5.6Hz)，7.25(d，1H，J＝8.8Hz)，4.76(d，2H，J＝5.6 Hz)，4.08(s，2H)，3.59(t，2H，J＝5.6Hz)，2.87(t，2H，J＝ 5.6Hz)。
D)5-甲基-2-(4-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)-7，8-二氢 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00358]在氩气下向5-溴-2-(4-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨 基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈(120mg，0.24 mmol)，甲基硼酸(19mg，0.32mmol)，磷酸钾(182mg，0.86mmol)， 三环己基膦(6.9mg，0.024mmol)，甲苯(5mL)，和水(0.5mL)的混 合物加入乙酸钯(2.8mg，0.012mmol)。将混合物在100℃加热20小 时，然后冷却到室温。将混合物过滤并且浓缩。残余物通过制备性 HPLC纯化，得到灰白色固体(75mg，71％)。
LC-MS：425.1[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.75(s，1H)，8.29(s，1H)， 7.98(d，1H，J＝8.0Hz)，7.84(d，1H，J＝8.0Hz)，7.61(t， 1H，J＝5.6Hz)，7.59(d，1H，J＝1.6Hz)，7.50(dd，1H，J＝ 8.4，1.6Hz)，7.24(d，1H，J＝8.4Hz)，4.75(d，2H，J＝5.6 Hz)，4.04(s，2H)，3.50(t，2H，J＝5.6Hz)，2.85(t，2H，J＝ 5.6Hz)，2.29(s，3H)。
方法B(化合物3)
5-环丙基-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00359]在氩气下向5-溴-2-(4-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨 基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈(13mg，0.026 mmol)，环丙基硼酸(3.0mg，0.034mmol)，磷酸钾(20mg，0.093 mmol)，三环己基膦(2.5mg，0.0090mmol)，甲苯(2.0mL)，和水 (0.04mL)的混合物加入乙酸钯(1.0mg，0.0044mmol)。将混合物在 100℃加热3小时，然后冷却到室温。加入水(10mL)和EtOAc(100 mL)。分离有机层并用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并且浓缩。残余物通 过半制备性HPLC纯化，得到白色固体(7mg，58％)。
LC-MS：451.0[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.75(s，1H)，8.29(s，1H)， 7.98(d，1H，J＝8.0Hz)，7.84(d，1H，J＝8.0Hz)，7.61(t， 1H，J＝5.6Hz)，7.48(d，1H，J＝2.4Hz)，7.40(dd，1H，J＝ 8.4，2.4Hz)，7.22(d，1H，J＝8.4Hz)，4.75(d，2H，J＝5.6 Hz)，4.03(s，2H)，3.49(t，2H，J＝5.6Hz)，2.85(t，2H，J＝ 5.6Hz)，1.94(m，1H)，0.94(m，2H)，0.70(m，2H)。
方法C(化合物4)
5-氯-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00360]为2mL微波反应瓶添加N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲 基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.16mmol)，5- 氯-2-氟苄腈(150mg，0.97mmol)，乙腈(0.4mL)，和N，N-二异丙基 乙胺(84μL，0.48mmol)。混合物经历200℃的微波辐射2小时。混 合物用氯仿(7mL)稀释，并用0.1M NaH2PO4(10mL)洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化，得到浅黄色固体 (32mg)。
LC-MS：445.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.76(s，1H)，8.30(s，1H)， 7.99(dd，1H，J＝8.0，1.6Hz)，7.94(d，1H，J＝2.8Hz)， 7.84(d，1H，J＝8.0Hz)，7.77(dd，1H，J＝8.8，2.8Hz)， 7.63(t，1H，J＝5.6Hz)，7.31(d，1H，J＝8.8Hz)，4.76(d， 2H，J＝5.6Hz)，4.09(s，2H)，3.59(t，2H，J＝5.6Hz)， 2.87(t，2H，J＝5.6Hz)。
方法D(化合物5)
5-三氟甲基-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00361]为2mL微波反应瓶添加N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲 基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.13mmol)，2- 氟-5-(三氟甲基)苄腈(150mg，0.78mmol)，乙腈(0.4mL)和N，N- 二异丙基乙胺(68μL，0.39mmol)。混合物经历200℃的微波辐射2 小时。混合物用氯仿(7mL)稀释，并用0.1M NaH2PO4(10mL)洗涤，干 燥(Na2SO4)，过滤并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化，得到浅棕色固 体。
LC-MS：479.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ8.72(s，1H)，8.33(s，1H)， 8.02(d，1H，J＝8.0Hz)，7.98(d，1H，J＝2.0Hz)，7.86(dd， 1H，J＝8.8，2.0Hz)，7.76(d，1H，J＝8.0Hz)，7.40(d，1H， J＝8.8Hz)，4.86(s，2H)，4.23(s，2H)，3.80(t，2H，J＝5.6 Hz)，3.02(t，2H，J＝5.6Hz)。
方法E(化合物7)
5-甲基-2-{4-[(R)-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-乙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

A)(R)-5-溴-2-(4-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基氨基)-7，8- 二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00362]使(R)-N-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-5，6，7，8-四 氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺(300mg，0.93mmol)，5-溴-2-氟苄腈 (560mg，2.8mmol)，N，N-二异丙基乙胺(480μL，2.8mmol)，和乙 腈(4mL)的混合物经历在180℃的微波辐射2小时。加入更多的5- 溴-2-氟苄腈(500mg)并使混合物经历在180℃的微波辐射另外的2小 时。加入另外的5-溴-2-氟苄腈(500mg)并使混合物经历在180℃的 微波辐射另外的2小时。LC-MS显示胺接近完全消耗。在冷却之后将 混合物真空浓缩，并将残余物通过硅胶柱纯化(100％EtOAc)，得到浅 黄色固体(255mg，54％)。
LC-MS：505.0[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.82(s，1H)，8.25(s，1H)， 8.07-8.04(m，2H)，7.89(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，7.84(d，1H， J＝8.0Hz)，7.33(d，1H，J＝8.8Hz)，7.24(d，1H，J＝7.2 Hz)，5.50(m，1H)，4.17和4.07(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.56(m， 2H)，2.86(t，2H，J＝5.6Hz)，1.58(d，3H，J＝7.2Hz)。
B)(R)-5-甲基-2-(4-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基氨基)- 7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00363]在氩气下向(R)-5-溴-2-(4-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基) 乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈(240mg， 0.48mmol)，甲基硼酸(37.0mg，0.619mmol)，磷酸钾(354mg， 1.67mmol)，三环己基膦(25mg，0.089mmol)，甲苯(10mL)，和水 (0.6mL)的混合物加入乙酸钯(10mg，0.04mmol)。将混合物在100 ℃加热3小时，然后冷却到室温。将混合物过滤并且浓缩。残余物通 过半制备性HPLC纯化，得到浅黄色固体(145mg，69％)。
LC-MS：439.2[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.8l(d，1H，J＝2.0Hz)， 8.24(s，1H)，8.05(dd，1H，J＝8.0，2.0Hz)，7.84(d，1H，J＝ 8.0Hz)，7.60(d，1H，J＝1.6Hz)，7.52(dd，1H，J＝8.4，1.6 Hz)，7.31(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(d，1H，J＝7.2Hz)， 5.50(m，1H)，4.13和4.03(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.48(m，2H)， 2.84(t，2H，J＝5.6Hz)，2.30(s，3H)，1.58(a，3H，J＝7.2 Hz)。
方法F(化合物8)
(R)-5-氯-2-(4-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基氨基)-7，8-二 氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈

A)(R)-6-苄基-N-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-5，6，7，8- 四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺
[00364]将6-苄基-4-氯-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶(5.00g， 19.2mmol)，(R)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙胺(4.76g，25.0 mmol)，N，N-二异丙基乙胺(6.71mL，38.5mmol)，和乙腈(15mL)在 两个20mL微波反应瓶之间均匀地分配。反应经历在200℃的微波辐 射3.5小时。将两个反应混合在一起并且将乙腈蒸发掉。将残余物再 溶解于CH2Cl2(150mL)并用1M NaH2PO4洗涤(2x 50mL)。产物用1M HCl提取(2x 50mL)。含水提取液碱化到pH 14并用CH2Cl2提取(2x 50mL)。合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤并且蒸发以产生黄色到橙 色的固体(7.21g)。通过将固体搅拌约30分钟用乙醚(25mL)洗涤粗 产物。将固体从乙醚过滤出来并用乙醚洗涤(2x5mL)，得到浅黄色 粉末(3.55g，45％收率)。将乙醚滤液吸附在二氧化硅上并过柱纯 化，使用MeOH/CH2Cl2(0-10％)，得到更多的产物(2.38g，30％收率； 75％合并收率)。
LC-MS：414.5[M+H]+
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.72(d，1H，J＝1.6Hz)， 8.37(s，1H)，7.80(dd，1H，J＝8.4，1.6Hz)，7.62(d，1H，J＝ 8.0Hz)，7.42-7.28(m，5H)，5.47(m，1H)，4.43(d，1H，J＝6.4 Hz)，3.79和3.75(AB，2H，J＝13.2Hz)，3.37(t，2H，J＝14.8 Hz)，2.88-2.76(m，4H)，1.62(d，3H，J＝6.8Hz)。
B)(R)-N-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶 并[4，3-d]嘧啶-4-胺
[00365]将(R)-6-苄基-N-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)- 5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺(3.55g，8.59mmol)，10％炭 载钯(740mg)，和甲醇(60mL)的混合物在氢气(1atm)下搅拌15小 时。通过Celite滤出催化剂并将滤饼用MeOH洗涤(3x 30mL)。将 滤液浓缩，得到灰白色泡沫状物(2.74g，98％收率)。
LC-MS：324.5[M+H]+；
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.74(d，1H，J＝1.6Hz)， 8.37(s，1H)，7.83(dd，1H，J＝8.0，1.6Hz)，7.63(d，1H，J＝ 8.0Hz)，5.48(m，1H)，4.55(d，1H，J＝6.8Hz)，3.74(s，2H)， 3.17(t，2H，J＝6.0Hz)，2.75(t，2H，J＝6.0Hz)，1.64(d， 3H，J＝6.8Hz)。
C)(R)-5-氯-2-(4-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基氨基)-7，8- 二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00366]使(R)-N-(1-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)乙基)-5，6，7，8-四 氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺(500mg，1.55mmol)，5-氯-2-氟苄腈 (360mg，2.3mmol)，N，N-二异丙基乙胺(540μL，3.1mmol)，和乙 腈(3.0mL)的混合物经历在180℃的微波辐射2小时。然后加入更多 的5-氯-2-氟苄腈(360mg)并使混合物经历在180℃的微波辐射另外 的2小时。之后，加入另外的5-氯-2-氟苄腈(360mg)并使混合物经 历在180℃的微波辐射另外的2小时。在冷却之后将混合物真空浓缩 并将残余物通过硅胶柱纯化(0-100％EtOAc/己烷)，得到固体用乙醚 洗涤，得到灰白色固体(370mg，51％)。
LC-MS：459.1[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.82(d，1H，J＝2.0Hz)， 8.25(s，1H)，8.05(dd，1H，J＝8.0，2.0Hz)，7.95(d，1H，J＝ 2.4Hz)，7.84(d，1H，J＝8.0Hz)，7.79(dd，1H，J＝8.8，2.4 Hz)，7.40(d，1H，J＝8.8Hz)，7.24(d，1H，J＝7.2Hz)， 5.50(m，1H)，4.18和4.08(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.57(m，2H)， 2.86(t，2H，J＝5.6Hz)，1.58(d，3H，J＝7.2Hz)。
方法G(化合物9)
5-氟-2-{4-[(6-三氟甲基-吡啶-3-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00367]为2mL微波反应瓶添加N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲 基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.16mmol)， 2，5-二氟苄腈(130mg，0.97mmol)，乙腈(0.4mL)和N，N-二异丙基 乙胺(84μL，0.48mmol)。混合物经历200℃的微波辐射4小时。在 冷却之后混合物用氯仿(7mL)稀释并用0.1M NaH2PO4(10mL)洗涤， 干燥(Na2SO4)，过滤并且浓缩。残余物通过半制备性HPLC纯化(100x 20.2mm，C18柱；20-90％MeCN/H2O[10mM二乙胺])，得到灰白色 固体(8mg)。
LC-MS：429.6[M+H]+
1H NMR(400MHz，CD 3OD)：δ8.70(s，1H)，8.32(s，1H)， 8.00(d，1H，J＝8.0Hz)，7.75(d，1H，J＝8.0Hz)，7.51(dd， 1H，J＝8.0，2.8Hz)，7.45-7.39(m，1H)，7.34(dd，1H，J＝ 9.2，4.8Hz)，4.84(s，2H)，4.08(s，2H)，3.56(t，2H，J＝5.6 Hz)，2.98(t，2H，J＝5.6Hz)。
方法H(化合物11)
5-氯-2-(4-((2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)-7，8- 二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈

A)3-(叠氮基甲基)-2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶
[00368]为25mL烧瓶添加(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲醇 (287mg，1.50mmol)，四氢呋喃(5mL)和二苯基膦酸叠氮化物(356 μL，1.65mmol)，用氮气吹扫，并在冰上冷却。向得到的混合物滴加 1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(236μL，1.57mmol)的THF(1 mL)溶液，并在1.5小时之后，使混合物回温到室温并搅拌过夜。加入 另外的二苯基膦酸叠氮化物(100μL，0.3当量)，随后加入另外的 1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(90μL，0.4当量)，再次将混合 物搅拌过夜。反应用1M NaOH(20mL)猝灭，并且倾倒在氯仿(20mL) 中。有机层用1M Na2HPO4洗涤(pH 8，2x 15mL)，干燥(Na2SO4)，过 滤并且浓缩，得到黄色油状物，将其通过硅胶柱纯化(0-25％乙酸乙酯 /己烷)，得到无色油状物(301mg，93％)。
B)(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺
[00369]向搅拌的3-(叠氮基甲基)-2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶(292 mg，1.35mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液加入三苯膦(710mg，2.7 mmol)，将混合物搅拌溶解。在5分钟之后，将混合物置于50℃的油 浴中并搅拌过夜。混合物用2M HCl(3mL)水解0.5小时，然后在乙酸 乙酯(30mL)和0.5M NaH2PO4(30mL)之间分配。有机相用0.5M NaH2PO4(10mL)提取并将合并的酸性含水提取液用50％KOH碱化，并 用CH2Cl2提取(2x 30mL)。将合并的CH2Cl2层干燥(Na2SO4)，过滤并 且浓缩为略带黄色的半固体(0.53g)。NMR和LC-MS表明物质只是部 分地裂解为游离胺(40％)，其余60％是膦亚胺(phospinimine)。将混合 物溶解于MeOH(10mL)并加热回流2小时。将混合物真空浓缩并将残 余物用水(10mL)和6N HCl和乙醚(20mL)处理到pH＜1。分离水相并 用乙醚(20mL)提取。水层用2N KOH水溶液调节到pH＞13并用CH2Cl2 提取(3x 50mL)。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓 缩，得到油状物，其不经进一步纯化用于下一步。
LC-MS：191.0[M+H]+；1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.01(d， 1H，J＝8.0Hz)，7.70(d，1H，J＝8.0Hz)，3.80(s，2H)， 2.5(s，3H)，1.95(bs，2H)。
C)5-氯-2-(4-((2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基氨基)- 7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00370]使2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲胺(39.2mg，0.206 mmol)，2-(4-溴-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-氯苄腈 (60mg，0.17mmol)，N，N-二异丙基乙胺(60μL，0.34mmol)在乙腈 (2.2mL)中的混合物经历180℃的微波辐射6小时。将反应混合物浓 缩为油状物并通过半制备性HPLC纯化(100x 20.2mm，C18柱；20- 80％CH3CN-水[10mM Et2NH)，得到白色固体(35mg)。
LC-MS：459.0[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.29(s，1H)，7.94(d，1H，J ＝2.8Hz)，7.80(d，1H，J＝8.4Hz)，7.77(dd，1H，J＝8.8， 2.8Hz)，7.64(d，1H，J＝8.0Hz)，7.54(t，1H，J＝5.6Hz)， 7.33(d，1H，J＝8.8Hz)，4.70(d，2H，J＝5.6Hz)，4.11(s， 2H)，3.60(t，2H，J＝5.6Hz)，2.88(t，2H，J＝5.6Hz)， 2.61(s，3H)。
方法I(化合物12)
5-氯-2-(4-((6-(二甲基氨基)吡啶-3-基)甲基氨基)-7，8-二氢吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈

[00371]使5-(氨基甲基)-N，N-二甲基吡啶-2-胺(24mg，0.16 mmol)，2-(4-溴-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-氯苄腈 (50mg，0.14mmol)，和N，N-二异丙基乙胺(62μL，0.36mmol)在乙 腈(1.9mL)中的混合物经历180℃的微波辐射6小时。将反应混合物 浓缩为油状物，将其通过硅胶柱纯化(0-15％MeOH/CH2Cl2)，得到浅黄 色固体。
LC-MS：420.5[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.33(s，1H)，8.07(d，1H，J ＝2.0Hz)，7.93(d，1H，J＝2.4Hz)，7.75(dd，1H，J＝8.8， 2.8Hz)，7.49(dd，1H，J＝8.4，2.4Hz)，7.35(br，1H)， 7.31(d，1H，J＝8.8Hz)，6.58(d，1H，J＝8.8Hz)，4.49(d， 2H，J＝5.6Hz)，3.99(s，2H)，3.56(t，2H，J＝5.6Hz)， 2.97(s，6H)，2.84(t，2H，J＝5.6Hz)。
方法J(化合物13)
5-氯-2-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基氨基)-7，8-二氢吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈

A)6-苄基-N-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3- d]嘧啶-4-胺
[00372]使6-苄基-4-氯-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶(2.5g， 9.6mmol)，2-氯-5-氨基甲基吡啶(2.7g，19mmol)，乙腈(10mL)， 和N，N-二异丙基乙胺(3.4mL，19mmol)的混合物经历在180℃的微 波辐射2小时。在室温搅拌过夜之后，通过过滤收集沉淀的固体并用 冷的乙腈洗涤(5mL x 2)，并且干燥，得到黄色粉末(2.8g，77％)。
LC-MS：366.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.34(d，1H，J＝2.8Hz)， 8.23(s，1H)，7.74(dd，1H，J＝8.4，2.8Hz)，7.45-7.25(m， 7H)，4.56(d，2H，J＝6.0Hz)，3.72(s，2H)，3.36(s，2H)， 2.72-2.62(m，4H)。
B)6-苄基-N-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并 [4，3-d]嘧啶-4-胺
[00373]6-苄基-N-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并 [4，3-d]嘧啶-4-胺(2.5g，6.8mmol)，MeOH(5mL)，和含15重量％ 甲醇钠(10g，48mmol)的MeOH溶液的混合物经历150℃的微波辐射 60分钟。将混合物真空浓缩并将残余物用水(50mL)处理并用CH2Cl2 提取(3x 50mL)。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并且浓 缩。残余物通过硅胶柱纯化(MeOH/CH2Cl2：0-15％)，得到黄色固体 (2.0g，79％)。
LC-MS：362.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ.24(s，1H)，8.09(d，1H，J＝ 2.0Hz)，7.62(dd，1H，J＝8.4，2.4Hz)，7.40-7.19(m，6H)， 6.74(d，1H，J＝8.4Hz)，4.48(d，2H，J＝5.6Hz)，3.80(s， 3H)，3.70(s，2H)，3.32(s，2H)，2.70-2.60(m，4H)。
C)N-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d] 嘧啶-4-胺
[00374]将6-苄基-N-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢 吡啶并[4，3-d]嘧啶-4-胺(1.90g，5.26mmol)，MeOH(100mL)，和 10％Pd-C(600mg)的混合物在1atm氢化3天。LC-MS显示完全转 化。滤掉催化剂并将滤液真空浓缩，得到浅黄色泡沫状物。
LC-MS：272.1[M+H]+
D)5-氯-2-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基氨基)-7，8-二氢吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00375]N-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3- d]嘧啶-4-胺(440mg，1.6mmol)，5-氯-2-氟苄腈(630mg，4.0 mmol)，N，N-二异丙基乙胺(560uL，3.2mmol)，和乙腈(4.0mL)的混 合物经历在180℃的微波辐射4小时。之后，加入另外的5-氯-2-氟苄 腈(400mg)并使混合物经历在180℃的微波辐射另外的2小时。在冷 却之后，混合物用NaHCO3水溶液和EtOAc(100mL)处理。分离有机 层，用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，并且真空浓缩。残余物通过硅胶柱纯 化(EtOAc：100％)并将得到的固体用乙醚洗涤，得到灰白色固体(290 mg，44％)。
LC-MS：407.1M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.32(s，1H)，8.15(d，1H，J ＝2.0Hz)，7.93(d，1H，J＝2.8Hz)，7.75(dd，1H，J＝9.2， 2.8Hz)，7.67(dd，1H，J＝8.4，2.4Hz)，7.44(t，1H，J＝5.6 Hz)，7.31(d，1H，J＝9.2Hz)，6.76(d，1H，J＝8.4Hz)， 4.57(d，2H，J＝5.6Hz)，4.02(s，2H)，3.81(s，3H)，3.57(t， 2H，J＝5.6Hz)，2.85(t，2H，J＝5.6Hz)。
方法K(化合物14)
5-溴-2-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基氨基)-7，8-二氢吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈

[00376]N-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3- d]嘧啶-4-胺(350mg，1.3mmol)，5-溴-2-氟苄腈(640mg，3.2 mmol)，N，N-二异丙基乙胺(0.67mL，3.9mmol)，和乙腈(4mL)的混 合物经历在180℃的微波辐射3小时。之后，加入另外的5-溴-2-氟苄 腈(450mg)并使混合物经历在180℃的微波辐射另外的2小时。在冷 却之后，混合物用EtOAc(100mL)稀释并用Na2CO3水溶液和盐水洗 涤，干燥(Na2SO4)并且浓缩。残余物通过硅胶柱纯化(EtOAc：100％)， 得到浅黄色固体。
LC-MS：453.1[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.32(s，1H)，8.14(d，1H，J ＝2.0Hz)，8.02(d，1H，J＝2.4Hz)，7.86(dd，1H，J＝9.2， 2.4Hz)，7.67(dd，1H，J＝8.4，2.4Hz)，7.44(t，1H，J＝5.6 Hz)，7.24(d，1H，J＝8.8Hz)，6.76(d，1H，J＝8.4Hz)， 4.57(d，2H，J＝5.6Hz)，4.01(s，2H)，3.81(s，3H)，3.57(t， 2H，J＝5.6Hz)，2.85(t，2H，J＝5.6Hz)。
方法L(化合物15)
2-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d] 嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈

[00377]在氩气下向5-溴-2-(4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基氨基)- 7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈(55mg，0.12mmol)， 甲基硼酸(18mg，0.30mmol)，磷酸钾(90.6mg，0.427mmol)，三 环己基膦(6.8mg，0.024mmol)，甲苯(3mL)，和水(0.2mL)的混合 物加入乙酸钯(2.7mg，0.012mmol)。混合物在100℃加热3小时， 然后冷却到室温。混合物过滤通过Celite并将滤饼用EtOAc洗涤。将 滤液浓缩并通过制备性HPLC纯化残余物，得到灰白色固体。
LC-MS：387.1[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.31(s，1H)，8.14(d，1H，J ＝2.0Hz)，7.67(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，7.58(d，1H，J＝ 1.2Hz)，7.49(dd，1H，J＝8.4，1.6Hz)，7.42(t，1H，J＝5.6 Hz)，7.23(d，1H，J＝8.8Hz)，6.76(d，1H，J＝8.8Hz)， 4.57(d，2H，J＝5.6Hz)，3.97(s，2H)，3.81(s，3H)，3.48(t， 2H，J＝5.6Hz)，2.83(t，2H，J＝5.6Hz)，2.28(s，3H)。
方法M(化合物20)
5-氯-2-{4-[(R)-3-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-丙基氨 基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00378]2-(4-溴-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-氯苄 腈(35mg，0.10mmol)和(R)-3-氨基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)丙 烷-1-醇(22mg，0.10mmol)的乙腈(1mL)溶液和N，N-二异丙基乙胺 (0.035mL，0.20mmol)的反应混合物经历200℃的微波辐射2小时。 将反应混合物浓缩并通过制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm， C18柱；30-70％CH3CN-水[10mM Et2NH])，得到灰白色固体。
LC-MS：489.2[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.80(s，1H)，8.24(s，1H)， 8.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.96(d，1H，J＝2.8Hz)，7.85(d， 1H，J＝8.4Hz)，7.79(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，7.39(d，1H， J＝8.8Hz)，7.23(d，1H，J＝7.6Hz)，5.52(m，1H)，4.68(t， 1H，J＝4.8Hz)，4.18和4.07(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.60- 3.40(m，4H)，2.85(m，2H)，2.12(m，1H)，1.97(m，1H)。
方法N(化合物21)
2-{4-[(R)-3-羟基-1-(6-甲基-吡啶-3-基)-丙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

[00379]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(60mg，0.21mmol)和(R)-3-氨基-3-(6-甲基吡啶-3-基)丙烷- 1-醇(35mg，0.21mmol)的乙腈(2mL)溶液和N，N-二异丙基乙胺(73 μL，0.42mmol)的反应混合物经历在180℃的微波辐射3小时。将反 应混合物浓缩并通过硅胶柱纯化残余物(0-30％MeOH/CH 2Cl2)，随后通 过制备性HPLC进行纯化(100x 20.2mm，C18柱；20-50％CH 3CN-水 [10mM Et2NH])，得到灰白色固体(29mg)。
LC-MS：415.5[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.45(d，1H，J＝1.6Hz)， 8.23(s，1H)，7.65(dd，1H，J＝8.0，2.4Hz)，7.60(d，1H，J＝ 1.6Hz)，7.52(dd，1H，J＝8.4，1.6Hz)，7.31(d，1H，J＝8.4 Hz)，7.16(d，1H，J＝8.0Hz)，7.07(d，1H，J＝8.0Hz)， 5.40(m，1H)，4.61(t，1H，J＝4.8Hz)，4.07和3.99(AB，2H，J ＝15.6Hz)，3.53-3.38(m，4H)，2.82(m，2H)，2.40(s，3H)， 2.30(s，3H)，2.08(m，1H)，1.91(m，1H)。
方法O(化合物30)
2-{4-[(5-环丙基-吡啶-2-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

[00380]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(150mg，0.53mmol)和(5-环丙基吡啶-2-基)甲胺(115mg， 0.78mmol)的乙腈(2mL)溶液和N，N-二异丙基乙胺(0.14mL，0.78 mmol)的反应混合物经历在180℃的微波辐射2小时。将混合物浓缩并 通过制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm，C18柱；50-70％ CH3CN-水[10mM Et2NH])，得到灰白色泡沫状物。
LC-MS：397.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.32(d，1H，J＝2.0Hz)， 8.25(s，1H)，7.59(d，1H，J＝1.2Hz)，7.55-7.47(m，2H)， 7.32(dd，1H，J＝8.4，2.0Hz)，7.25(d，1H，J＝8.4Hz)， 7.16(d，1H，J＝8.0Hz)，4.67(d，2H，J＝5.6Hz)，4.03(s， 2H)，3.51(t，2H，J＝5.6Hz)，2.85(t，2H，J＝5.6Hz)， 2.29(s，3H)，191(m，1H)，0.99-0.93(m，2H)，0.70-0.65(m， 2H)。
方法P(化合物35)
5-氯-2-{4-[(S)-2-羟基-1-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-乙基氨基]- 7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00381]5-氯-2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄 腈(250mg，0.82mmol)和(S)-2-氨基-2-(6-甲氧基吡啶-3-基)乙醇 (110mg，0.68mmol)的乙腈(3mL)溶液和N，N-二异丙基乙胺(240 μL，1.4mmol)的反应混合物经历在180℃的微波辐射4小时。将反应 混合物浓缩并通过硅胶柱纯化残余物(0-15％MeOH/CH2Cl2)，得到粗产 物，其从MeOH重结晶，得到无色晶体。
LC-MS：437.4[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.27(s，1H)，8.18(d，1H，J ＝2.4Hz)，7.95(d，1H，J＝2.4Hz)，7.78(dd，1H，J＝8.8， 2.4Hz)，7.72(dd，1H，J＝8.4，2.4Hz)，7.41(d，1H，J＝8.8 Hz)，6.97(d，1H，J＝8.0Hz)，6.76(d，1H，J＝8.4Hz)， 5.32(m，1H)，4.99(t，1H，J＝6.0Hz)，4.13和4.06(AB，2H，J ＝15.6Hz)，3.81(s，3H)，3.80-3.63(m，2H)，3.56(t，2H，J＝ 5.6Hz)，2.84(m，2H)。
方法Q(化合物37)
2-{4-[(咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

[00382]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(300mg，1.05mmol)和咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基甲胺(400mg， 2.31mmol)的乙腈(10mL)溶液和N，N-二异丙基乙胺(1.0mL，5.7 mmol)的反应混合物经历185℃的微波辐射2.5小时。将反应混合物浓 缩并通过半制备性HPLC纯化(100x 20.2mm，C18柱；30-60％ CH3CN-水[10mM Et2NH])，得到浅黄色固体。
LC-MS：396.4[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.46(d，1H，J＝6.9Hz)， 8.30(s，1H)，7.87(s，1H)，7.59(d，1H，J＝1.4Hz)，7.54(t， 1H，J＝5.8Hz)，7.50(s，1H)，7.48(d，1H，J＝1.7Hz)， 7.38(s，1H)，7.25(d，1H，J＝8.5Hz)，6.86(dd，1H，J＝ 7.0，1.5Hz)，4.67(d，2H，J＝5.7Hz)，4.05(s，2H)，3.52(t， 2H，J＝5.5Hz)，2.86(t，2H，J＝5.3Hz)，2.29(s，3H)。
方法R(化合物38)
2-{4-[(苯并噁唑-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d] 嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

[00383]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(100mg，0.35mmol)和苯并[d]噁唑-5-基甲胺(150mg，0.41 mmol)在乙腈(3mL)和N，N-二异丙基乙胺(0.37mL，2.1mmol)中的反 应混合物经历185℃的微波辐射2.5小时。将反应混合物浓缩并通过 制备性HPLC纯化(100x 20.2mm，C18柱；30-60％CH3CN-水[10mM Et2NH])，得到浅黄色固体。
LC-MS：397.4[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.71(s，1H)，8.30(s，1H)， 7.75(d，1H，J＝0.9Hz)，7.70(d，1H，J＝8.4Hz)，7.58(d， 1H，J＝1.5Hz)，7.55(t，1H，J＝5.9Hz)，7.49(dd，1H，J＝ 8.5，1.7Hz)，7.42(dd，1H，J＝8.4，1.5Hz)，7.25(d，1H，J＝ 8.5Hz)，4.77(d，2H，J＝5.8Hz)，4.02(s，2H)，3.51(t，2H， J＝5.6Hz)，2.85(t，2H，J＝5.4Hz)，2.29(s，3H)。
方法S(化合物39)
5-甲基-2-{4-[(2-甲基-嘧啶-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00384]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(400mg，1.41mmol)和(2-甲基嘧啶-5-基)甲胺(400mg，3.25 mmol)在乙腈(3mL)和N，N-二异丙基乙胺(1.5mL，8.6mmol)中的反 应混合物经历185℃的微波辐射2.5小时。将反应混合物浓缩并通过 制备性HPLC纯化(100x 20.2mm，C18柱；40-60％CH3CN-水[10mM Et2NH])，得到浅棕色固体。
LC-MS：372.2[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.66(s，2H)，8.32(s，1H)， 7.59(d，1H，J＝1.5Hz)，7.50(d，1H，J＝2.4Hz)，7.48(d， 1H，J＝1.3Hz)，7.23(d，1H，J＝8.5Hz)，4.60(d，2H，J＝ 5.6Hz)，4.00(s，2H)，3.49(t，2H，J＝5.6Hz)，2.85(t，2H， J＝5.4Hz)，2.57(s，3H)，2.29(s，3H)。
方法T(化合物44)
5-氯-2-{4-[(咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基甲基)-氨基]-7，8-二氢- 5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00385]5-氯-2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄 腈(250mg，0.82mmol)和咪唑并[1，2-a]吡啶-7-基甲胺(270mg， 1.83mmol)在乙腈(10mL)和N，N-二异丙基乙胺(1.0mL，5.7mmol) 中的反应混合物经历185℃的微波辐射4小时。将反应混合物浓缩并 通过半制备性HPLC纯化(100x 20.2mm，C18柱；40-60％CH3CN-水 [10mM Et2NH])，得到浅黄色固体。
LC-MS：416.4[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.47(d，1H，J＝7.0Hz)， 8.30(s，1H)，7.94(d，1H，J＝2.6Hz)，7.87(s，1H)，7.76(dd， 1H J＝8.9，2.6Hz)，7.56(t，1H，J＝6.0Hz)，7.50(s，1H)， 7.36(s，1H)，7.33(d，1H，J＝9.0Hz)，6.87(dd，1H，J＝7.0， 1.4Hz)，4.68(d，2H，J＝5.7Hz)，4.10(s，2H)，3.60(t，2H， J＝5.5Hz)，2.88(t，2H，J＝5.4Hz)。
方法U(化合物46)
2-{4-[(S)-2-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-乙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

[00386]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(160mg，0.56mmol)和(S)-2-氨基-2-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基) 乙醇(118mg，0.57mmol)(根据与用于中间体10相似的方法制备)在 乙腈(2mL)和N，N-二异丙基乙胺(0.4mL)中的反应混合物经历185℃ 的微波辐射3.5小时。将反应混合物浓缩并通过半制备性HPLC纯化残 余物(100x 20.2mm，C18柱；40-60％乙腈-水[10mM二乙胺])， 得到浅棕色固体。
LC-MS：455.2[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.81(d，1H，J＝1.5Hz)， 8.25(s，1H)，8.07(dd，1H J＝8.1，1.7Hz)，7.85(d，1H，J＝ 8.1Hz)，7.61(d，1H，J＝1.5Hz)，7.53(dd，1H，J＝8.6，1.8 Hz)，7.33(d，1H，J＝8.5Hz)，7.11(d，1H，J＝7.5Hz)， 5.43(q，1H，J＝6.8Hz)，5.14(t，1H，J＝5.9Hz)，4.15和 4.06(AB，2H，J＝15.5Hz)，3.88-3.70(m，2H)，3.49(t，2H，J ＝5.7Hz)，2.85(m，2H)，2.30(s，3H)。
方法V(化合物47)
5-氯-2-{4-[(S)-2-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-乙基氨 基]-7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00387]5-氯-2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄 腈(150mg，0.49mmol)和(S)-2-氨基-2-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基) 乙醇(150mg，0.74mmol)(根据与用于中间体10相似的方法制备)在 乙腈(3mL)和N，N-二异丙基乙胺(170μL，0.98mmol)中的反应混合 物经历在180℃的微波辐射4小时。将反应混合物浓缩并通过硅胶柱 纯化残余物(100％EtOAc然后0-20％MeOH/CH2Cl2)，随后通过半制备 性HPLC进行纯化(100x 20.2mm，C18柱；30-70％乙腈-水[10mM Et2NH])，得到浅黄色泡沫状物(44mg)。
LC-MS：475.4[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.81(d，1H，J＝1.6Hz)， 8.26(s，1H)，8.08(dd，1H，J＝8.0，1.6Hz)，7.96(d，1H，J＝ 2.8Hz)，7.85(d，1H，J＝7.6Hz)，7.79(dd，1H，J＝9.2，2.8 Hz)，7.41(d，1H，J＝9.2Hz)，7.13(d，1H，J＝7.6Hz)， 5.44(q，1H，J＝6.8Hz)，5.15(t，1H，J＝5.6Hz)，4.20和 4.10(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.87-3.74(m，2H)，3.57(t，2H，J ＝5.6Hz)，2.86(t，2H，J＝5.6Hz)。
方法W(化合物51)
5-氯-2-[4-(3-[1，2，4]三唑-4-基-苄基氨基)-7，8-二氢-5H-吡啶 并[4，3-d]嘧啶-6-基]-苄腈

[00388]5-氯-2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄 腈(80mg，0.26mmol)和(3-(4H-1，2，4-三唑-4-基)苯基)甲胺(120 mg，0.40mmol)在乙腈(1mL)和N，N-二异丙基乙胺(0.6mL，4mmol) 中的反应混合物经历185℃的微波辐射2.5小时。将反应混合物浓缩 并通过半制备性HPLC纯化(100x 20.2mm，C 18柱；30-50％CH3CN- 水[10mM Et2NH])，得到浅黄色固体。
LC-MS：443.5[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ9.10(s，2H)，8.30(s，1H)， 7.94(d，1H，J＝2.6Hz)，7.76(dd，1H，J＝8.9，2.6Hz)， 7.66(s，1H)，7.60-7.52(m，2H)，7.50(t，1H，J＝7.8Hz)， 7.38(d，1H，J＝7.6Hz)，7.33(d，1H，J＝90Hz)，4.73(d， 2H，J＝5.7Hz)，4.09(s，2H)，3.59(t，2H，J＝5.5Hz)， 2.87(t，2H，J＝5.4Hz)。
方法X(化合物57)
5-氯-2-{4-[(R)-1-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00389]5-氯-2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄 腈(130mg，0.41mmol)和(R)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)乙胺(85mg， 0.55mmol)(根据与用于中间体16相似的方法制备)在乙腈(3mL)和 N，N-二异丙基乙胺(140μL，0.83mmol)中的反应混合物经历在180℃ 的微波辐射3小时。将反应混合物浓缩并通过半制备性HPLC纯化残余 物(100x 20.2mm，C18柱；30-60％乙腈-水[10mM Et2NH])，得到 白色固体。
LC-MS：422.4[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.62(s，2H)，8.29(s，1H)， 7.94(d，1H，J＝2.8Hz)，7.77(dd，1H，J＝8.8，2.8Hz)， 7.37(d，1H，J＝8.8Hz)，7.10(d，1H，J＝7.2Hz)，5.39(p， 1H，J＝7.2Hz)，4.12和4.02(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.88(s， 3H)，3.56(m，2H)，2.85(t，2H，J＝5.6Hz)，1.55(d，3H，J＝ 7.2Hz)。
方法Y(化合物58)
2-{4-[(R)-1-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二氢-5H- 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

[00390]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(430mg，1.51mmol)和(R)-1-(2-甲氧基嘧啶-5-基)乙胺(238 mg，1.56mmol)(根据与用于中间体16相似的方法制备)在乙腈(6mL) 和N，N-二异丙基乙胺(2mL，9mmol)中的反应混合物经历185℃的微 波辐射3.5小时。将反应混合物浓缩并通过半制备性HPLC纯化残余物 (100x 20.2mm，C18柱；30-60％乙腈-水[10mM Et2NH])，得到浅 黄色固体。
LC-MS：402.0[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.62(s，2H)，8.29(s，1H)， 7.59(d，1H，J＝1.5Hz)，7.51(dd，1H，J＝8.5，1.6Hz)， 7.29(d，1H，J＝8.5Hz)，7.09(d，1H，J＝7.5Hz)，5.39(p， 1H，J＝7.2Hz)，4.07和3.98(AB，2H，J＝15.5Hz)，3.88(s， 3H)，3.55-3.40(m，2H)，2.84(t，2H，J＝5.4Hz)，2.29(s，3H)， 1.55(d，3H，J＝7.1Hz)。
方法Z(化合物60)
2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

A)(S)-2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(2-甲氧基嘧 啶-5-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈
[00391]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(500mg，1.76mmol)和(S)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1- (2-甲氧基嘧啶-5-基)乙胺(800mg，2.82mmol)在乙腈(10mL)和 N，N-二异丙基乙胺(1mL)中的反应混合物经历185℃的微波辐射3小 时。将反应混合物浓缩并通过硅胶柱纯化残余物，得到浅黄色固体。
LC-MS：532.5[M+H]+
B)2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈
[00392]向(S)-2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(甲氧基 嘧啶-5-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲 基苄腈(740mg，1.39mmol)的THF(10mL)溶液加入含1M TBAF的 THF(5mL)。将反应混合物在室温搅拌10分钟，然后用水和E tOAc处 理。有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，并且浓缩。残 余物通过半制备性HPLC纯化，得到白色固体。
LC-MS：418.4[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.62(s，2H)，8.28(s，1H)， 7.60(d，1H，J＝1.5Hz)，7.51(dd，1H，J＝8.5，1.7Hz)， 7.31(d，1H，J＝8.5Hz)，6.97(d，1H，J＝7.7Hz)，5.31(q， 1H，J＝6.7Hz)，5.08(t，1H，J＝5.9Hz)，4.11和4.01(AB， 2H，J＝15.5Hz)，3.88(s，3H)，3.85-3.67(m，2H)，3.48(t，2H， J＝5.7Hz)，2.91-2.78(m，2H)，2.30(s，3H)。
方法AA(化合物61)
2-{4-[(2-异丙基-嘧啶-5-基甲基)-氨基]-7，8-二氢-5H-吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

[00393]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(80mg，0.28mmol)和(2-异丙基嘧啶-5-基)甲胺(60mg，0.40 mmol)(根据与用于中间体13相似的方法制备)在乙腈(1mL)和N，N-二 异丙基乙胺(0.3mL，2mmol)中的反应混合物经历185℃的微波辐射 3小时。将反应混合物浓缩并通过半制备性HPLC纯化(100x 20.2mm， C18柱；40-60％CH3CN-水[10mM Et2NH])，得到浅黄色固体。
LC-MS：400.4[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.70(s，2H)，8.33(s，1H)， 7.59(d，1H，J＝1.5Hz)，7.53-7.45(m，2H)，7.23(d，1H，J＝ 8.5Hz)，4.60(d，2H，J＝5.6Hz)，4.00(s，2H)，3.49(t，2H， J＝5.6Hz)，3.18-3.03(m，1H)，2.84(t，2H，J＝5.5Hz)， 2.29(s，3H)，1.24(d，6H，J＝6.8Hz)。
方法AB(化合物64)
2-{4-[(R)-3-羟基-1-(6-三氟甲基-吡啶-3-基)-丙基氨基]-7，8- 二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

[00394]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(200mg，0.70mmol)和(R)-3-氨基-3-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基) 丙烷-l-醇(180mg，0.82mmol)在乙腈(2mL)和N，N-二异丙基乙胺 (0.7mL，4mmol)中的反应混合物经历185℃的微波辐射2.5小时。 将反应混合物浓缩并通过半制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm， C18柱；40-60％乙腈-水[10mM Et2NH])，得到灰白色固体。
LC-MS：469.4[M+H]+
1 H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.80(d，1H，J＝0.9Hz)， 8.23(8，1H)，8.05(dd，1H，J＝8.1，1.4Hz)，7.85(d，1H，J＝ 8.1Hz)，7.61(d，1H，J＝1.4Hz)，7.53(dd，1H，J＝8.5，1.6 Hz)，7.31(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(d，1H，J＝7.5Hz)， 5.52(q，1H，J＝5.7Hz)，4.69(t，1H，J＝4.7Hz)，4.13和 4.03(AB，2H，J＝15.5Hz)，3.60-3.40(m，4H)，2.83(m，2H)， 2.31(s，3H)，2.23-2.08(m，1H)，2.03-1.90(m，1H)。
方法AC(化合物66)
5-甲基-2-{4-[(R)-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00395]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(350mg，1.23mmol)和(R)-1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙胺(300mg， 2.19mmol)在乙腈(3mL)和N，N-二异丙基乙胺(0.86mL，4.9mmol) 中的反应混合物经历185℃的微波辐射3.5小时。将反应混合物浓缩 并通过半制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm，C18柱；30-55％ 乙腈-水[10mM Et2NH])，得到灰白色固体。
LC-MS：386.1[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.70(s，2H)，8.27(s，1H)， 7.59(d，1H，J＝1.5Hz)，7.51(dd，1H，J＝8.5，1.7Hz)， 7.30(d，1H，J＝8.4Hz)，7.13(d，1H，J＝7.4Hz)，5.39(m， 1H)，4.09和3.99(AB，2H，J＝15.5Hz)，3.55-3.20(m，2H)， 2.84(t，2H，J＝5.3Hz)，2.57(s，3H)，2.30(s，3H)，1.56(d， 3H，J＝7.1Hz)。
方法AD(化合物67)
5-甲基-2-{4-[(S)-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

[00396]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(60mg，0.21mmol)和(S)-1-(2-甲基嘧啶-5-基)乙胺(29mg， 0.21mmol)在乙腈(2mL)和N，N-二异丙基乙胺(74μL，0.42mmol) 中的反应混合物经历在180℃的微波辐射1小时。将反应混合物浓缩 并通过半制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm，C18柱；30-60％ 乙腈-水[10mM Et2NH])，得到灰白色固体。
LC-MS：385.9[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.70(s，2H)，8.26(s，1H)， 7.59(d，1H，J＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J＝8.4，1.6Hz)， 7.29(d，1H，J＝8.4Hz)，7.13(d，1H，J＝7.2Hz)，5.39(p， 1H，J＝7.2Hz)，4.09和3.99(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.48(m， 2H)，2.84(t，2H，J＝5.2Hz)，2.57(s，3H)，2.30(s，3H)， 1.55(d，3H，J＝7.2Hz)。
方法AE(化合物73)
5-氯-2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]- 7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈

A)(S）-2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(2-甲基嘧啶- 5-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-氯苄腈
[00397]5-氯-2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄 腈(150mg，0.49mmol)和(S)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1- (2-甲基嘧啶-5-基)乙胺(144mg，0.54mmol)在乙腈(2mL)和N，N- 二异丙基乙胺(0.5mL，3mmol)中的反应混合物经历185℃的微波辐 射3.5小时。将反应混合物浓缩并通过半制备性HPLC纯化残余物，得 到产物，为黄色固体。
LC-MS：536.7[M+H]+
B)5-氯-2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]- 7，8-二氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-苄腈
[00398]向(S)-2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(2-甲基 嘧啶-5-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-氯 苄腈(60mg，0.11mmol)的THF(10mL)溶液加入含1M TBAF的THF(5 mL)。将反应混合物在室温搅拌10分钟，然后用水和EtOAc处理。有 机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，并且浓缩。残余物用 乙醚和水洗涤(以便完全除去TBAF)并且干燥，得到最终产物，为浅色 固体。
LC-MS：422.5[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.70(s，2H)，8.27(s，1H)， 7.94(d，1H，J＝2.6Hz)，7.77(dd，1H，J＝8.9，2.6Hz)， 7.41(d，1H，J＝9.0Hz)，7.04(d，1H，J＝8.0Hz)，5.32(q， 1H，J＝6.8Hz)，5.12(t，1H，J＝5.9Hz)，4.18和4.08(AB， 2H，J＝15.5Hz)，3.88-3.68(m，2H)，3.57(t，2H，J＝5.6Hz)， 2.86(t，2H，J＝5.6Hz)，2.57(s，3H)。
方法AF(化合物74)
2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈

A)(S)-2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(2-甲基嘧啶- 5-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄 腈
[00399]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(420mg，1.48mmol)和(S)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1- (2-甲基嘧啶-5-基)乙胺(742mg，2.78mmol)在乙腈(8mL)和N，N- 二异丙基乙胺(1mL)中的反应混合物经历185℃的微波辐射3小时。 将反应混合物浓缩并通过硅胶柱纯化残余物，得到产物，为浅黄色固 体。
LC-MS：516.5[M+H]+
B)2-{4-[(S)-2-羟基-1-(2-甲基-嘧啶-5-基)-乙基氨基]-7，8-二 氢-5H-吡啶并[4，3-d]嘧啶-6-基}-5-甲基-苄腈
[00400]向(S)-2-(4-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-1-(2-甲基 嘧啶-5-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲 基苄腈(630mg，1.22mmol)的THF(10mL)溶液加入含1M TBAF的 THF(5mL)。将反应混合物在室温搅拌10分钟，然后用水和EtOAc处 理。有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，并且浓缩。残 余物用乙醚洗涤，得到浅色固体。
LC-MS：402.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.70(s，2H)，8.27(s，1H)， 7.60(d，1H，J＝1.4Hz)，7.51(dd，1H，J＝8.5，1.7Hz)， 7.32(d，1H，J＝8.4Hz)，7.02(d，1H，J＝7.6Hz)，5.32(q， 1H，J＝6.8Hz)，5.11(t，1H，J＝5.9Hz)，4.13和4.02(AB， 2H，J＝15.5Hz)，3.88-3.68(m，2H)，3.48(t，2H，J＝5.6Hz)， 2.92-2.75(m，2H)，2.57(s，3H)，2.30(s，3H)。
方法AG(化合物79)
5-甲基-2-(4-(喹喔啉-6-基甲基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d] 嘧啶-6(5H)-基)苄腈

[00401]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(100mg，0.35mmol)和喹喔啉-6-基甲胺(150mg，0.94mmol) 在乙腈(1mL)和N，N-二异丙基乙胺(500μL，3mmol)中的反应混合物 经历185℃的微波辐射3.5小时。将反应混合物浓缩并通过制备性 HPLC纯化残余物(30-60％乙腈-水[10mM DEA])，得到浅黄色固体。
LC-MS：408.2[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.91和8.90(AB，2H，J＝1.8 Hz)，8.29(s，1H)，8.06(d，1H，J＝8.6Hz)，7.97(d，1H，J＝ 1.2Hz)，7.85(dd，1H，J＝8.6，1.9Hz)，7.71(t，1H，J＝5.8 Hz)，7.60(d，1H，J＝1.6Hz)，7.50(dd，1H，J＝8.6，1.8Hz)， 7.26(d，1H，J＝8.5Hz)，4.91(d，2H，J＝5.8Hz)，4.08(s， 2H)，3.53(t，2H，J＝5.6Hz)，2.87(t，2H，J＝5.5Hz)， 2.29(s，3H)。
方法AH(化合物80)
5-甲基-2-(4-(喹啉-2-基甲基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧 啶-6(5H)-基)苄腈

[00402]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(150mg，0.52mmol)和喹啉-2-基甲胺盐酸盐(206.0mg，1.058 mmol)在乙腈(1mL)和N，N-二异丙基乙胺(1mL，6mmol)中的反应混 合物经历185℃的微波辐射3.5小时。将反应混合物浓缩并通过制备 性HPLC纯化残余物(30-60％乙腈-水[10mM DEA])，得到浅黄色固 体。
LC-MS：407.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.55(s，1H)，8.16(d，1H，J＝ 8.4Hz)，8.08(d，1H，J＝8.5Hz)，7.84(d，1H，J＝8.1Hz)， 7.74(t，1H，J＝8.0Hz)，7.56(t，1H，J＝7.9Hz)，7.44(s，1H)， 7.41(d，1H，J＝8.4Hz)，7.35(dd，1H，J＝8.4，0.94Hz)， 7.05(d，1H，J＝8.4Hz)，6.72-6.65(m，1H)，4.97(d，2H，J＝ 4.0Hz)，4.24(s，2H)，3.65(t，2H，J＝5.6Hz)，3.03(t，2H， J＝5.5Hz)，2.34(s，3H)。
方法A I(化合物81)

2-(4-((1H-吲哚-6-基)甲基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶- 6(5H)-基)-5-甲基苄腈
[00403]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(100mg，0.35mmol)和1-(1H-吲哚-5-基)-甲基胺(139mg， 0.95mmol)在乙腈(1mL)和N，N-二异丙基乙胺(0.4mL，2mmol)中 的反应混合物经历185℃的微波辐射3小时。将反应混合物浓缩并通 过制备性HPLC纯化残余物(30-60％乙腈-水[10mM DEA])，得到浅 黄色固体。
LC-MS：395.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.56(s，1H)，8.48(b s，1H)， 7.61(d，1H，J＝8.1Hz)，8.39(s，1H)，8.38(s，1H)，7.28(dd， 1H，J＝8.4，1.6Hz)，7.21(t，1H，J＝2.8Hz)，7.10(dd，1H， J＝8.1，1.4Hz)，6.97(d，1H，J＝8.4Hz)，6.57-6.50(m，1H)， 4.82(d，2H，J＝5.2Hz)，4.69(t，1H，J＝5.1Hz)，3.96(s， 2H)，3.53(t，2H，J＝5.7Hz)，3.04(t，2H，J＝5.6Hz)， 2.29(s，3H)。
方法AJ(化合物82)
2-(4-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烷-5-基甲基氨基)-7，8-二氢吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈

[00404]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(100mg，0.35mmol)和胡椒基胺(120mg，0.79mmol)在乙腈(1 mL)和N，N-二异丙基乙胺(400μL)中的反应混合物经历185℃的微波 辐射3小时。将反应混合物浓缩并通过制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm，C18柱；30-60％乙腈-水[10mM Et2NH])，得到浅黄色固 体。
LC-MS：400.2[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.30(s，1H)，7.58(d，1H，J ＝1.5Hz)，7.49(dd，1H，J＝8.6，1.6Hz)，7.40(t，1H，J＝ 5.8Hz)，7.24(d，1H，J＝8.5Hz)，6.89(d，1H，J＝1.3Hz)， 6.88-6.75(m，2H)，5.96(s，2H)，4.55(d，2H，J＝5.8Hz)， 3.98(s，2H)，3.49(t，2H，J＝5.6Hz)，2.84(t，2H，J＝5.5 Hz)，2.29(s，3H)。
方法AK(化合物89和90)
(R)-2-(4-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烷-5-基)乙基氨基)- 7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈和(S)-2-(4-(1- (苯并[d][1，3]二氧杂环戊烷-5-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3- d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈

A)2-(4-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烷-5-基)乙基氨基)-7，8- 二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈
[00405]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(100mg，0.35mmol)和1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烷-5-基)乙 胺(150mg，0.91mmol)在乙腈(1mL)和N，N-二异丙基乙胺(400μL) 中的反应混合物经历185℃的微波辐射3小时。将反应混合物浓缩并 通过制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm，C18柱；30-60％乙腈- 水[10mM Et2NH])，得到浅黄色固体。
LC-MS：413.9[M+H]+；
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.25(s，1H)，7.59(d，1H，J ＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J＝8.6，1.8Hz)，7.32(d，1H，J＝ 8.4Hz)，7.00-6.77(m，4H)，5.95(d，2H，J＝6.6Hz)，5.40- 5.30(m，1H)，4.05和3.98(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.55-3.45(m， 2H)，2.83(t，2H，J＝5.5Hz)，2.30(s，3H)，1.47(d，3H，J＝ 7.0Hz)。
B)(R)-2-(4-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烷-5-基)乙基氨基)- 7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈和(S)-2-(4-(1- (苯并[d][1，3]二氧杂环戊烷-5-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3- d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈
[00406]外消旋的2-(4-(1-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烷-5-基)乙 基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈(70mg， 0.17mmol)通过手性HPLC拆分(CHIRALPAK AD-H柱，在0℃[冰浴]， 20x 250mm，己烷/EtOH/Et2NH[85∶15∶0.C 85]，流速20mL/min， UV 240nm)，得到标题化合物。
(R)-异构体：
LC-MS：414.4[M+H]+；
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.25(s，1H)，7.59(d，1H，J ＝1.6Hz)，7.51(dd，1H，J＝8.6，1.7Hz)，7.32(d，1H，J＝ 8.5Hz)，7.00-6.77(m，4H)，5.95(d，2H，J＝6.6Hz)，5.40- 5.30(m，1H)，4.05和3.98(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.55-3.45(m， 2H)，2.83(t，2H，J＝5.5Hz)，2.30(s，3H)，1.46(d，3H，J＝ 7.0Hz)。
(S)-异构体：
LC-MS：414.4[M+H]+；
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：8.25(s，1H)，7.59(d，1H，J＝ 1.6Hz)，7.51(dd，1H，J＝8.6，1.7Hz)，7.32(d，1H，J＝8.4 Hz)，7.00-6.77(m，4H)，5.95(d，2H，J＝6.6Hz)，5.40-5.30(m， 1H)，4.05和3.98(AB，2H，J＝15.6Hz)，3.55-3.45(m，2H)， 2.83(t，2H，J＝5.5Hz)，2.30(s，3H)，1.46(d，3H，J＝7.0 Hz)。
方法AL(化合物91)
5-甲基-2-(4-(1-(4-甲基-3-(甲基磺酰基)苯基)乙基氨基)-7，8- 二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈

[00407]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(360mg，1.26mmol)和1-(4-甲基-3-(甲基磺酰基)苯基)乙胺 (400mg，1.88mmol)在乙腈(3mL)和N，N-二异丙基乙胺(1mL)中的 反应混合物经历185℃的微波辐射3.5小时。将反应混合物浓缩并通 过制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm，C18柱；30-60％乙腈-水 [10mM Et2NH])，得到浅黄色固体(290mg)。
LC-MS：462.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.25(s，1H)，7.94(d，1H，J ＝1.8Hz)，7.65-7.55(m，2H)，7.51(dd，1H，J＝8.7，1.8Hz)， 7.39(d，1H，J＝8.0Hz)，7.31(d，1H，J＝8.4Hz)，7.18(d， 1H，J＝7.6Hz)，5.52-5.42(m，1H)，4.06和4.01(AB，2H，J＝ 15.5Hz)，3.57-3.42(m，2H)，3.19(s，3H)，2.83(t，2H，J＝ 5.4Hz)，2.59(s，3H)，2.30(s，3H)，1.52(d，3H，J＝7.0 Hz)。
方法AM(化合物92)
5-甲基-2-(4-(喹啉-7-基甲基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧 啶-6(5H)-基)苄腈

[00408]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(480mg，1.69mmol)和喹啉-7-基甲胺(400mg，2.53mmol)在 乙腈(5mL)和N，N-二异丙基乙胺(1.5mL，8.6mmol)中的反应混合物 经历185℃的微波辐射3.5小时。将反应混合物浓缩并通过半制备性 HPLC纯化残余物(100x 20.2mm，C18柱；30-60％乙腈-水[10mM 二乙胺])，得到灰白色固体。
LC-MS：407.3[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.85(dd，1H，J＝4.0，1.6 Hz)，8.33(d，1H，J＝8.0Hz)，8.29(s，1H)，7.93(d，1H，J＝ 8.4Hz)，7.89(s，1H)，7.65(t，1H，J＝5.6Hz)，7.63-7.56(m， 2H)，7.52-7.45(m，2H)，7.26(d，1H，J＝8.4Hz)，4.87(d，2H， J＝5.6Hz)，4.07(s，2H)，3.53(t，2H，J＝5.6Hz)，2.86(t， 2H，J＝5.6Hz)，2.29(s，3H)。
方法AN(化合物93和94)
(R)-2-(4-(1-(4-氯-3-(甲基磺酰基)苯基)乙基氨基)-7，8-二氢 吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈和(S)-2-(4-(1-(4-氯-3- (甲基磺酰基)苯基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)- 基)-5-甲基苄腈

A)2-(4-(1-(4-氯-3-(甲基磺酰基)苯基)乙基氨基)-7，8-二氢吡 啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈
[00409]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(250mg，0.88mmol)和1-(4-氯-3-(甲基磺酰基)苯基)乙胺(300 mg，1.28mmol)在乙腈(2mL)和N，N-二异丙基乙胺(700μL)中的反 应混合物经历185℃的微波辐射3.5小时。将反应混合物浓缩并通过 制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm，C18柱；30-60％乙腈-水 [10mM Et2NH])，得到浅黄色固体。
LC-MS：482.2[M+H]+
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.25(s，1H)，8.08(d，1H，J ＝2.1Hz)，7.75(dd，1H，J＝8.3，2.1Hz)，7.67(d，1H，J＝ 8.2Hz)，7.60(d，1H，J＝1.6Hz)，7.52(dd，1H，J＝8.5，1.8 Hz)，7.30(d，1H，J＝8.5Hz)，7.23(d，1H，J＝7.4Hz)， 5.52-5.42(m，1H)，4.07和4.03(AB，2H，J＝15.5Hz)，3.57- 3.42(m，2H)，3.36(s，3H)，2.83(t，2H，J＝5.4Hz)，2.30(s， 3H)，1.53(d，3H，J＝7.1Hz)。
B)(R)-2-(4-(1-(4-氯-3-(甲基磺酰基)苯基)乙基氨基)-7，8-二 氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈和(S)-2-(4-(1-(4-氯- 3-(甲基磺酰基)苯基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶- 6(5H)-基)-5-甲基苄腈
[00410]外消旋的2-(4-(1-(4-氯-3-(甲基磺酰基)苯基)乙基氨 基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基苄腈(100mg， 0.21mmol)通过手性HPLC拆分(CHIRALPAK AD-H柱，室温，20x 250mm，己烷/EtOH/Et2NH[75∶25∶0.05]，流速20mL/min，UV 240 nm；将100mg样品溶解于3mL EtOH和3mL己烷；最大进样量3 mL)，得到标题化合物。
(R)-异构体：
LC-MS：482.3[M+H]+；
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.25(s，1H)，8.08(d，1H，J ＝2.1Hz)，7.75(dd，1H，J＝8.3，2.1Hz)，7.67(d，1H，J＝ 8.2Hz)，7.60(d，1H，J＝1.6Hz)，7.52(dd，1H，J＝8.5，1.8 Hz)，7.30(d，1H，J＝8.5Hz)，7.23(d，1H，J＝7.4Hz)， 5.52-5.42(m，1H)，4.07和4.03(AB，2H，J＝15.5Hz)，3.57- 3.42(m，2H)，3.36(s，3H)，2.83(t，2H，J＝5.4Hz)，2.30(s， 3H)，1.53(d，3H，J＝7.1Hz)。
(S)-异构体：
LC-MS：482.3[M+H]+；
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.25(s，1H)，8.08(d，1H，J ＝2.1Hz)，7.75(dd，1H，J＝8.3，2.1Hz)，7.67(d，1H，J＝ 8.2Hz)，7.60(d，1H，J＝1.6Hz)，7.52(dd，1H，J＝8.5，1.8 Hz)，7.30(d，1H，J＝8.5Hz)，7.23(d，1H，J＝7.4Hz)， 5.52-5.42(m，1H)，4.07和4.03(AB，2H，J＝15.5Hz)，3.57- 3.42(m，2H)，3.36(s，3H)，2.83(t，2H，J＝5.4Hz)，2.30(s， 3H)，1.53(d，3H，J＝7.1Hz)。
方法AO(化合物95和96)
(R)-5-甲基-2-(4-(1-(喹喔啉-6-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈和(S)-5-甲基-2-(4-(1-(喹喔啉-6-基) 乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈

A)5-甲基-2-(4-(1-(喹喔啉-6-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并 [4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00411]2-(4-氯-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)-5-甲基 苄腈(200mg，0.70mmol)和1-(喹喔啉-6-基)乙胺(150mg，0.87 mmol)在乙腈(2mL)和N，N-二异丙基乙胺(734μL，4.2mmol)中的反 应混合物经历185℃的微波辐射3.5小时。将反应混合物浓缩并通过 制备性HPLC纯化残余物(100x 20.2mm，C18柱；30-60％乙腈-水 [10mM Et2NH])，得到浅棕色固体(45mg)。
LC-MS：421.9[M+H]+；
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.91和8.89(AB，2H，J＝1.8 Hz)，8.23(s，1H)，8.06(d，1H，J＝8.8Hz)，8.04(d，1H，J＝ 1.6Hz)，7.94(dd，1H，J＝8.7，1.9Hz)，7.61(d，1H，J＝1.6 Hz)，7.53(dd，1H，J＝8.6，1.7Hz)，7.35(d，1H，J＝8.5Hz)， 7.30(d，1H，J＝7.6Hz)，5.80-5.55(m，1H)，4.16和4.07(AB， 2H，J＝15.5Hz)，3.57-3.42(m，2H)，2.86(t，2H，J＝4.8Hz)， 2.31(s，3H)，1.64(d，3H，J＝7.1Hz)。
B)(R)-5-甲基-2-(4-(1-(喹喔啉-6-基)乙基氨基)-7，8-二氢吡啶 并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈和(S)-5-甲基-2-(4-(1-(喹喔啉-6-基) 乙基氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈
[00412]外消旋的5-甲基-2-(4-(1-(喹喔啉-6-基)乙基氨基)-7，8- 二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5H)-基)苄腈(40mg，0.095mmol)通过手 性HPLC拆分(CHI RALPAK AD-H柱，室温，20x 250mm，己烷 /EtOH/MeOH[80∶10∶10]，流速20mL/min，UV 254nm；将40mg 样品溶解于2mL EtOH和2mL己烷；最大进样量1.8mL)，得到标 题化合物。
(R)-异构体：
LC-MS：422.5[M+H]+；
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.91和8.89(AB，2H，J＝1.8 Hz)，8.23(s，1H)，8.06(d，1H，J＝8.7Hz)，8.04(d，1H，J＝ 1.7Hz)，7.93(dd，1H，J＝8.7，2.0Hz)，7.61(d，1H，J＝1.6 Hz)，7.53(dd，1H，J＝8.6，1.7Hz)，7.34(d，1H，J＝8.5Hz)， 7.29(d，1H，J＝7.6Hz)，5.75-5.55(m，1H)，4.16和4.07(AB， 2H，J＝15.6Hz)，3.57-3.42(m，2H)，2.86(t，2H，J＝5.0Hz)， 2.31(s，3H)，1.64(d，3H，J＝7.1Hz)。
(S)-异构体：
LC-MS：422.5[M+H]+；
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)：δ8.91和8.89(AB，2H，J＝1.8 Hz)，8.23(s，1H)，8.06(d，1H，J＝8.8Hz)，8.04(d，1H，J＝ 1.5Hz)，7.94(dd，1H，J＝8.7，1.9Hz)，7.61(d，1H，J＝.6 Hz)，7.53(dd，1H，J＝8.6，1.7Hz)，7.34(d，1H，J＝8.5Hz)， 7.29(d，1H，J＝7.6Hz)，5.72-5.55(m，1H)，4.16和4.07(AB， 2H，J＝15.5Hz)，3.57-3.42(m，2H)，2.86(t，2H，J＝4.6Hz)， 2.31(s，3H)，1.64(d，3H，J＝7.1Hz)。
试验
[00413]本文中提供的化合物可以使用基于细胞的试验(例如钙流入 或电生理学试验)评价，使用生物化学试验(例如对P2X2和P2X3受体 的结合试验)评价，或可以在疼痛或排尿功能的动物模型中来评价。试 验的实施例描述如下。
[00414]嘌呤能受体P2X2和P2X3在包括各种感觉神经结和交感神 经节(例如后根神经结(DRG)、结节神经结(ND)、三叉神经结(TG)和颈 上神经节(SCG))以及平滑肌细胞在内的各种组织中表达。(Burnstock， Trends Pharmacol.Sci.27：166-76，2006)。在几个区域中，P2X2 和P2X3受体是共表达的，并且功能研究显示存在有在性能上与同聚体 受体(homomeric receptor)不同的异聚体P2X2/3受体。另外，已经 描述了包含与P2X3的第一跨膜结构域稠合的P2X2的N-末端胞质结构 域的嵌合P2X2/3受体，这些嵌合通道保持同聚体P2X3受体的药理学 特征，但是获得了同聚体P2X2受体的非脱敏表现型(Neelands等人， Br.J.Pharmacol.140：202-10，2003)。嵌合受体的非脱敏性能对 于筛选特别有用。
[00415]P2X家族的成员是配体门控的非选择性阳离子通道，其活性 可以通过使用电生理学方法或使用钙敏感性荧光染料通过测量钙离子 内流来表征。应用激动剂例如，ATP或ATP类似物(例如，α，β-亚甲 基腺苷5′-三磷酸(αβMeATP，Sigma-Aldrich))引起通道打开，导 致电流流动和钙流入(Bianchi等人，Eur.J.Pharmacol.376：127- 38，1999)。
[00416]可以通过测量本文中提供的化合物影响通道ATP、αβ MeATP或其它激动剂打开的能力来试验它们在P2X3和P2X2/3受体的 拮抗活性。受体活性的功能性试验包括但不限于：(i)通过钙敏感性染 料的荧光测量钙离子内流和；(ii)通过电生理学方法测量通道打开引 起的离子流动。这些方法可用于在相关受体在哺乳动物或两栖动物细 胞中异源表达时评价通道功能。这些方法还可以用于在通常表达所关 心的受体的啮齿动物初级神经元和其它哺乳动物初级细胞和细胞系中 评价本文中提供的化合物。
[00417]另外可以使用生物化学方法，通过化合物结合P2X3和 P2X2/3受体的能力来评价化合物。
[00418]还可以评价化合物修饰其中已知受体起作用的感觉神经系 统和自主神经系统信号传导(例如，膀胱传入信号传导、感觉神经的疼 痛感觉)的能力。最后，可以在本领域技术人员已知的适当的动物模型 中体内试验本文中提供的化合物，诸如例如，神经病性疼痛、炎症性 疼痛或内脏疼痛的模型或尿失禁模型。
[00419]提供以下生物学实施例用于举例说明本文中提供的化合 物、药物组合物和方法，但不应将其看作以任何方式限制其范围。
钙摄取试验
克隆和细胞系：
[00420]将人P2X3(Accession no.NM_002559)、P2X2(Accession no.NM_170682)和Rat P2X3(Accession no.NM_031075)和 P2X2(Accession no.NM_053656)克隆到哺乳动物表达载体中。(例如， peDNA5/TO或pcDNA3Invitrogen)。如Neelands等人所述产生人 P2X2/3嵌合体克隆，然后如上克隆到表达载体中。使用标准脂质介导 的转染通过瞬时转染在细胞(例如HEK293或1321N1(得自ECACC))中 表达受体，或通过产生每个受体的稳定转染子来表达受体。对于 P2X2/3异聚体受体的表达，将P2X3表达载体稳定地转染到已经稳定 表达P2X2的细胞系中。使用药理学方法分离P2X2/3异聚体功能。将 细胞系保持在DMEM+5％Glutamax、适当水平的选择性的抗生素和 10％的加热灭活的FBS中。
P2X拮抗试验：
[00421]通过测量它们抑制激动剂诱导的钙流入的能力测定化合物 在P2X受体处的功能性活性。试验化合物对P2X2/3嵌合体、P2X3同 聚体或P2X2/3异聚体的拮抗活性。在每个筛选当天开始时，测定激动 剂EC50。随后使用作为刺激物的预定的激动剂浓度(取决于细胞系，为 EC50-90)测定化合物抑制％或IC50。使用的激动剂是αβMeATP、ATP或其 它ATP类似物。化合物可以在1pM-10μM的浓度范围进行试验。
[00422]为了试验拮抗活性，在试验之前的18-24小时，将表达适 当受体的细胞接种在96孔板或384孔板上。在试验当天，为细胞加载 在Hank缓冲的盐溶液(HBSS)中的钙敏感性荧光染料(例如Fluo-4免 洗试剂-Invitrogen cat#F36206或BDTM PBX Calcium Assay Kit-BD cat#640175)，含最多10mM的补充的CaCl2。将板在37℃保温，然 后在室温下平衡。使用荧光成像板读取器(例如FLIPRTETRA，Molecular Devices，Sunnyvale，CA)测量对由激动剂诱导的钙流入的拮抗作 用。试验包括林格阶段：预处理阶段，随后是处理阶段。可以如下试 验化合物：对于预处理阶段，将50μL的在HBSS中3x浓度的试验化 合物添加到包含细胞的100μL的加载染料的培养基中，实现1x试验 化合物的最终浓度。对于处理阶段，在预处理之后的固定间隔(1-30 分钟)，加入50μL的1x试验化合物加上4x激动剂溶液，产生1X化 合物和1X激动剂的最终浓度。以0.1-3秒间隔测量荧光，激发波长为 494nM，发射波长为515nM。响应测量为(添加激动剂之后的峰值荧 光)减去(处理之前的基线荧光)。如下计算抑制百分比：

[00423]通过使用GraphPad Prizm以4参数逻辑拟合分析剂量响应 数据来测定IC50值。
电生理学实验
完整细胞膜片箝：
[00424]使用Multiclamp700A膜片箝增强器和Clampex获取程序 (Molecular Devices Corporation)进行完整细胞记录。完整细胞记 录得自用P2X3和/或P2X2表达载体稳定或瞬时转染的1321N1或HEK 细胞。溶液通过重力流动、8阀门递送系统施加1-3s的时间段，或者 使用速变的Dynaflow灌注系统(Cellectricon Inc.)施加数毫秒的时 间段。内部的移液管溶液可以包括140mM氯化铯、10mM EGTA和5 mM Hepes，pH 7.2；标准的外部溶液为140mM NaCl、5mM KCl、1 mM CaCl2、2mM MgCl2、25mM Hepes和10mM葡萄糖。通过记录响 应于以1-3分钟间隔短暂施加激动剂的电流获得浓度-反应曲线，其中 在所述间隔期间定期灌注外部溶液。为了得到抑制曲线，在短的激动 剂+拮抗剂施加之前的限定时间段为细胞预先施加拮抗剂。对于整个试 验浓度系列来说，拮抗剂预先施加和激动剂+拮抗剂施加的时间段是恒 定的。在-60或-80毫伏夹钳电压测量细胞中激动剂引起的电流。通过 使用GraphPad Prizm或Origin以4参数逻辑拟合分析剂量反应数据 来测定IC50值。
自动的二电极电压钳记录：
[00425]通过使用胶原酶(Worthington，2mg/ml}进行酶促解离分离 得到非洲蟾蜍属卵细胞(Nasco)。然后分别为卵细胞注射P2X3、P2X2 或P2X2和P2X3mRNA的组合物。每个卵细胞接受～64nL的浓度 为～0.01μg/μL的RNA水溶液。经过注射的卵细胞储存在16℃的 标准卵细胞培养溶液ND96中，包含(以mM计)96NaCl、2KCl、1 MgCl2、1-5CaCl2和50μg/mL庆大霉素。在注射之后的1-5天观察卵 细胞中的由P2X通道打开引起的激动剂诱导的电流。对于自动记录， 在记录室中放置8个卵细胞。每个卵细胞插有2个玻璃电极，所述电 极在充满3M KCl溶液时具有0.5-1MOhm的电阻。电极前进和卵细 胞穿刺在软件控制之下进行(OPUSXPRESS1.1，Molecular devices Corporation)。在96孔板中制备溶液并且借助机械手用8通道移液 器移液到卵细胞记录室中。通过与在单独的激动剂存在下的峰值电流 相比计算在试验化合物的存在下用激动剂刺激卵细胞时剩余的电流％来 测定拮抗剂引起的抑制。对卵细胞施加溶液的顺序如下：首先添加特 定浓度(例如EC50、EC80或EC90)的激动剂，以引起最大响应。在脉冲之 后，用ND96洗涤卵细胞几分钟。然后加入特定浓度的试验化合物，随 后与激动剂一起加入相同浓度的化合物。化合物的浓度可以为0.3- 10,000nM。通过使用GraphPad Prizm或Origin软件以4参数逻辑 拟合分析剂量反应数据来测定IC50值。
手动的二电极电压钳：
[00426]单独的卵细胞用2个电极手动穿刺，并且使用卵细胞箝位 放大器(Warner Instrument Corp.)和Clampex(Molecular Devices Corporation)采集软件测量激动剂引起的电流。使用重力流动递送溶 液并且如上所述来施加。在没有和有拮抗剂的存在下测量激动剂诱导 的电流。拮抗剂以浓度系列来试验，以便如上所述得到抑制曲线。
选择性筛选：
[00427]对抑制P2X3和/或P2X2/3活化的化合物试验对其它P2X受 体的活性，以便确定它们对于特定P2X家族成员的选择性。要试验的 受体列表包括但不限于P2X1、P2X2、P 2X4、P2X5、P2X6和P2X7。用 于选择性判断的试验类型包括：1)在异源表达相关受体的细胞中的激 动剂诱导的钙流入，2)在异源表达所关心的受体的哺乳动物细胞或非 洲蟾蜍属卵细胞中的受体抑制的电生理学确定。方法和数据分析与上 述对于P2X3和P2X2/3的那些相似。
放射性配体结合：
[00428]进行放射性配体实验来测定试验化合物对于P2X3同聚体受 体和P2X2/3异聚体受体的亲合力。这些研究还为拮抗剂的作用机制提 供有价值的理解。用于P2X3和P2X2/3受体的放射性配体结合实验的 一般方法由Jarvis等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.10：407-16， 2004描述。
[00429]简而言之，从瞬时或稳定表达P2X3或P2X2/3受体的细胞 制备细胞膜。使细胞生长到汇合，洗涤，分离，并以团粒形式在-80℃ 储存备用。一些研究可能需要在膜制备过程中添加腺苷三磷酸双磷酸 酶(Apyrase)或己糖激酶(Sigma-Aldrich)，以使膜制备期间的ATP介 导的受体脱敏最小化。如下制备细胞膜：将细胞团粒再悬浮在匀化作 用缓冲液中，匀化并且离心，得到膜的团粒。使用标准方法测定总蛋 白浓度。
[00430]使用从Jarvis等人改造得到的方法进行置换结合研究。在 优化的条件下，使用放射性配体([3H]A-317491，Abbott)或其它高亲 合力放射性配体和在结合缓冲液中的多个不同浓度的试验化合物进行 配体竞争实验。使用多个浓度的放射性配体进行配体饱和度研究。所 有的结合反应都是通过快速过滤通过玻璃纤维过滤器来终止。将细胞 膜洗涤，在闪烁体中培养，并在闪烁计数器中计数。使用四参数逻辑 Hill方程测定IC50值。
药物代谢和药代动力学
Caco-2渗透性：
[00431]如Yee，Pharm.Res.14：763-6，1997中所述的方法测量 Caco-2渗透性。使Caco-2细胞在滤网支撑器(Falcon HTS多孔插入 系统)上生长14天。从顶端和基底隔室除去培养基并将单层与预先温 热的0.3mL顶端缓冲液和1.0mL基底缓冲液在50循环/分钟的摇动 器水浴中在37℃预先培养0.75小时。顶端缓冲液包括Hanks平衡的 盐溶液、25mM D-葡萄糖一水合物、20mM MES生物学缓冲液、1.25 mM CaCl2和0.5mM MgCl2(pH 6.5)。基底缓冲液包括Hanks平衡的盐 溶液、25mM D-葡萄糖一水合物、20mM HEPES生物学缓冲液、1.25 mM CaCl2和0.5mM MgCl2(pH 7.4)。在预培养结束时，除去培养基并 将为顶端隔室添加试验化合物的缓冲液溶液(10μM)。将嵌入物转移到 包含新鲜的基底缓冲液的孔中并培养1小时。通过LC/MS分析测量缓 冲液中的药物浓度。
[00432]从接受器侧上的底物的累计出现的斜率计算通量率(F，质 量/时间)，并从以下方程计算表观渗透系数(Papp)：
Papp(cm/sec)＝(F*VD)/(SA*MD)
其中SA为转运的表面面积(0.3cm2)，VD为供体体积(0.3mL)， MD为t＝0时供体侧的药物总量。所有数据表示2个嵌入物的平均 值。通过萤光黄转运测定单层完整性。
人多非利特结合：
[00433]可以将表达HERG产物的HEK-293细胞的细胞糊状物悬浮在 10倍体积的50mM Tris缓冲液(用包含1mM MgCl2、10mM KCl的2 M HCl调节25℃的pH为7.5)中。使用Polytron匀化器将细胞匀化 (使用最大功率，进行20秒)并在4℃以48,000g离心20分钟。将团 粒再悬浮，同样再次匀化和离心。将得到的上层清液抛弃，并将最终 的团粒再悬浮(10倍体积的50mM Tris缓冲液)且以最大功率匀化20 秒。将膜匀浆等分并且在-80℃储存备用。使用Protein Assay Rapid Kit和ARVO SX读板器(Wallac)用等分样品进行蛋白质浓度测定。所 有的操作、储备溶液和设备都是一直保持在冰上。对于饱和度试验， 以200μL的总体积进行实验。通过分别用于总结合或非特异性结合的 在没有或有10μM最终浓度(20μL)的多非利特的存在下将20μL的 [3H]-多非利特和160μL的膜匀浆(20-30μg蛋白质/孔)在室温下培 养60分钟来测定饱和度。所有的培养如下终止：使用Skatron细胞收 集器快速真空过滤通过聚醚酰亚胺(PEI)浸泡的玻璃纤维过滤纸，随后 用50mM Tris缓冲液(在25℃的pH为7.5)洗涤两次。使用Packard LS计数器通过液体闪烁计数量化受体结合的放射性活度。
[00434]对于竞赛试验，将化合物以半对数形式在96孔聚丙烯板中 稀释为4点稀释物。所有的稀释首先在DMSO中进行，然后转移到包含 1mM MgCl2、10mM KCl的50mM Tris缓冲液(在25℃为pH 7.5) 中，使得使最终的DMSO浓度等于1％。将化合物一式三份分配在试验 板(4μL)中。在6个孔中建立总结合和非特异性结合孔，分别为媒介 物和10μM最终浓度的多非利特。以5.6x最终浓度制备放射性配体， 并将这个溶液加入到每个孔中(36μL)。通过添加YS i聚-L-赖氨酸闪 烁亲近测定法(Scintillation Proximity Assay，SPA)小珠(50μL， 1mg/孔)和膜(110μL，20μg/孔)引发试验。在室温下继续培养60 分钟。将板在室温下培养另外的3小时，以便小珠沉降。通过使用 WALLAC MICROBETA读板器计数来量化受体结合的放射性活度。
HERG试验：
[00435]将稳定地表达HERG钾通道的HEK 293细胞用于电生理学研 究。在HEK细胞中稳定转染这个通道的方法可以在其它地方找到(Zhou 等人，Biophys.J.74：230-41，1998)。在实验当天之前，从培养瓶 收获细胞并在玻璃盖玻片上铺板在包含10％胎牛血清(FCS)的标准极限 必需培养基(MEM)中。将铺板的细胞在保持95％O2/5％CO2气氛的恒温箱 中在37℃储存。在收获之后的15-28小时之间对细胞进行研究。
[00436]使用完整细胞模式的标准膜片箝技术研究HERG电流。在实 验期间，细胞用以下组成(mM)的标准外部溶液溢流：NaCl，130；KCl， 4；CaCl2，2；MgCl2，1；Glucose，10；HEPES，5；用NaOH调节pH 7.4。使用膜片箝增强器和膜片移液管进行完整细胞记录，所述膜片移 液管在用以下组成(mM)的标准内部溶液填充时具有1-3MOhm的电阻： KCl，130；MgATP，5；MgCl2，1.0；HEPES，10；EGTA 5，用KOH调节 pH 7.2。只有进口电阻低于15MOhm和密封电阻＞1GOhm的那些细胞被 接受用于另外的实验。采用直到80％最大值的串联电阻补偿。未进行 泄漏减除。然而，可接受的进口电阻取决于记录的电流的大小和可以 安全地使用的串联电阻补偿的水平。在得到完整细胞结构和允许与移 液管溶液的细胞透渗析的充分时间(＞5分钟)之后，为细胞施加标准电 压流程，以引起膜电流。电压流程如下。将膜从-80mV的保持电位去 极化到+40mV，进行1000ms。随后使电压向下匀变(速率为0.5mV msec-1)返回到保持电位。在整个实验过程中连续地每4秒对细胞施加 电压流程(0.25Hz)。测量在约-40mV的匀变过程中引起的峰值电流的 振幅。一旦在外部溶液中得到稳定的唤起电流反应，通过蠕动泵施加 媒介物(含0.5％DMSO的标准外部溶液)10-20分钟。如果在媒介物对 照条件下唤起的电流响应的振幅有最小的变化，则施加0.3、1、3、 10mM的试验化合物10分钟。所述10分钟时间段包括通过泵提供溶 液流经管从溶液储存器到记录室的时间。在室中的药物浓度达到预期 浓度之后，使细胞对化合物溶液的暴露时间超过5分钟。随后洗涤 10-20分钟的时间段以评价可逆性。最后，细胞暴露于高剂量的多非 利特(5mM，为一种特异性I Kr阻断剂)，以评价不敏感的内源性电 流。
[00437]所有的实验都是在室温下进行的(23±1℃)。在计算机上在 线记录唤起的膜电流，以500-1KHz(Bessel-3dB)过滤，并在使用膜 片箝增强器和特定的数据分析软件以1-2KHz采样。在计算机上离线测 量在大约-40mV出现的峰值电流振幅。
[00438]在媒介物对照条件下和在药物的存在下计算振幅的十个数 值的算术平均。通过使用以下式通过归一化的电流数值得到每个实验 中的IN的降低百分比：IN＝(1-ID/IC)x100，其中ID为在药物存在 下的平均电流值，IC为在对照条件下的平均电流值。为每个药物浓度 或时间匹配对照进行单独的实验，并且每个实验的算术平均定义为研 究的结果。
在人肝微粒体(HLM)中的半衰期：
[00439]将试验化合物(1μM)与含3.3mM MgCl2和0.78mg/mL HLM(HL101)的100mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)在96孔深孔板上在37℃ 培养。将反应混合物分为两组，非P450组和P450组。仅向P450组的 反应混合物添加NADPH。P450组的样品的等分样品在0、10、30和60 分钟时间点收集，其中0分钟时间点表示将NADPH加入到P450组的反 应混合物中的时间。非P450组的样品的等分样品在-10和65分钟时 间点收集。收集的等分样品用包含内标的乙腈溶液提取。在离心器中 旋转使沉淀的蛋白质向下(2000rpm，15分钟)。通过LC/MS/MS系统 测量上层清液中的化合物浓度。通过将化合物/内标的峰面积比的自然 对数对时间绘图得到半衰期数值。通过各个点的最佳拟合的直线斜率 得到代谢速率(k)。使用以下方程式将其转化为半衰期数值：
半衰期＝ln2/k。
体内效力试验
[00440]P2X3、P2X2/3拮抗剂可以在人类疾病的不同动物模型中进 行试验，包括神经病性疼痛、炎症性疼痛和内脏疼痛的模型，以及膀 胱功能的模型。P2X3拮抗剂可以在模型的诱导之前或之后给予，取决 于特定的模型和化合物PK特征。给药途径可以包括腹膜内(i.p.)、皮 下(s.c.)、口服(p.o.)、静脉内(i.v.)、鞘内(i.t.)或跖肌内 (intraplantar)。如下所述，根据模型，这些研究的终端可以包括机 械痛觉异常、热痛觉过敏、冷痛觉异常、福尔马林诱导疼痛反应降 低、扭动和收缩减少或膀胱机械感觉改变。
福尔马林模型：
[00441]试验化合物在福尔马林的跖肌内(intraplantar)给药之前 的不同时间给药。在轻微的限制下s.c给予福尔马林的稀溶液(25-50 mL的1-2.5％甲醛/盐水)到左后爪的跖面中。在注射之后立即将动物置 于在足够大的透明观察室内部的网状架台上，以便允许动物在研究过 程中的自由运动。使用手动评分或自动评分为行为表现打分。
[00442]手动评分：使用三通道计时器，观察者记录时间(t，以秒 表示)，承重降低的时间(t1)、抬爪的时间(t2)和舔/咬/摇动的时间 (t3)。结果根据Dubuisson和Dennis，Pain，4：161-174，1977的方 法加权，使用式t1+2t2+3t3/180，其中180s为每个增量的评价时 间。以交替的3分钟增量获得行为表现，在时间＝0分钟开始(即0-3 分钟、6-9分钟等)并在60分钟时结束。
[00443]自动评分：将重量为0.5g的小的金属箍放在左爪上。给 予福尔马林并将动物不受限制地放置在电磁检测器系统(Automated Nociception Analyzer，University of California，San Diego) 上方的观察室中。电子记录爪退缩的次数。
ATP和αβ-亚甲基ATP(αβmeATP)-诱导的炎症性疼痛：
[00444]为大鼠皮下给予体积最多为100μL的最大1μMol的αβ MeATP、ATP、腺苷或PBS到后爪的背侧面中。在注射之后立即将动物 置于在足够大的透明观察室内部的架台上，以便允许动物在研究过程 中的自由运动。在20分钟间隔内记录退缩和舔爪的持续时间，以评价 防止伤害性的性能。使用上述对于福尔马林试验所述的手动或自动方 法测量反应。另外的行为试验可以包括评价机械痛觉异常和热痛觉过 敏。对于试验，化合物在激动剂注射给药之前给予。
完全弗氏佐剂模型(CFA)：
[00445]动物在异氟烷麻醉的情况下接受s.c.注射包含100μg结 核分枝杆菌H37Ra株的100μL的完全弗氏佐剂待右后爪的跖面中。 在给药之后的1小时内可以观察到肿胀和炎症。感受伤害试验可以在 CFA给予之后的24小时开始。化合物通常在试验之前的0.5-12小时 给予。
角叉菜胶诱导的急性疼痛：
[00446]动物在异氟烷麻醉的情况下接受皮下注射100μL的2％角叉 菜胶到右后爪的跖面中。在给药之后的1小时内可以观察到肿胀和炎 症。感受伤害试验可以在角叉菜胶给药之后的3-24小时开始 (Hargreaves等人，Pain，32：77-88，1988)。化合物通常在试验之前 的0.5-12小时给予。
慢性收缩损伤模型(CCI或Bennett模型)：
[00447]根据由Bennett和Xie，Pain，33：87-107，1988中所述的 方法进行CCI模型。简而言之，在异氟烷麻醉的情况下，通过股二头 肌的钝器解剖法在大腿中间暴露的右侧坐骨神经。在坐骨神经的分叉 的近侧，将约7mm的神经去除附着组织宽松的并在神经周围结扎4.0 铬肠线的4个松散结扎线。结扎线之间的距离为大约1mm。在各个层 将伤口闭合，并用卡钉或非丝缝线靠近封闭皮肤。假装操作的动物同 样地进行处理，不同之处在于坐骨神经没有结扎。在手术后的7-21天 进行感受伤害试验。化合物通常在试验之前的0.5-12小时给予。
脊神经横行切开(SNT或Chung模型)：
[00448]在戊巴比妥麻醉(60mg/kg，i.p.)下，将大鼠以卧姿置于 平坦的无菌表面上。进行L4-S2的中线切口，并将左侧脊柱旁肌肉从 棘突分离。根据Kim和Chung，Pain，50：355-363，1992中所述的方 法，将L5和L6脊神经用4-0硅处理的丝缝线紧密地结扎。小心地防 止L4脊神经受到手术损伤。用创缘夹封闭皮肤并使动物返回其圈养笼 中。表现出长时间手术后神经病学缺陷或毛杂乱的大鼠被排除实验。 在手术之前评价动物的感受伤害反应(基线)，然后在给予试验化合物 之后的不同时间点评价感受伤害反应。在手术后的7-21天进行感受伤 害试验。化合物通常在试验之前的0.5-12小时给予。
化疗诱导的令人痛苦的神经病：
[00449]通过i.p.给予1mg/kg的Taxol诱导化疗神经病，所述 Taxol以4个交替的日子每天一次给药(总剂量＝4mg/kg)(Polomano 等人，Pain，94：293-304，2001)。在开始Taxol给药之后的9-30天 进行感受伤害试验。化合物通常在试验之前的0.5-12小时给予。
感受伤害试验：
[00450]机械痛觉异常：使用Dixon，Ann.Re v.Pharmacol. Toxicol.20：441-462，1980的上下颠倒法进行机械痛觉异常试验， 由Chaplan等人，J.Neurosci.Methods 53：55-63，1994进行了机 械阈限的改变。为了评价触觉痛觉异常，将大鼠置于具有金属丝网地 板的透明的有机玻璃隔室中，并允许其熟悉至少15分钟的时间段。在 习惯之后，为每个大鼠的左(手术的)脚的跖面单丝上放置一连串的 von Frey单丝。每次放置持续4-8秒的时间段或直到观察到感受伤害 性撤回行为。退缩、爪撤回或舔爪被认为是感受伤害性行为响应。使 用Chaplan等人，J.Neurosci.Methods 53：55-63，1994描述的方 法计算50％撤回阈值。
[00451]热痛觉过敏：根据Hargreaves等人，Pain 32：77-88， 1988所述的技术，使用跖试验装置(Ugo Basile)测定对有害的热刺激 的后爪撤回等待时间。辐射加热源聚焦在同侧爪的跖面上，并且测定 爪撤回等待时间。爪撤回等待时间的增加表示痛觉过敏的逆转。机械 痛觉过敏：使用爪压力试验来评价机械痛觉过敏。对于这个试验，如 Stein等人，Pharmacol.Biochem.Behav.31：451-455，1988所 述，使用痛觉计(analgesymeter)(Ugo Basile)测定对有害的机械刺 激的后爪撤回阈值(PWT)。
[00452]机械痛觉过敏：使用爪压力试验来评价机械痛觉过敏。对 于这个试验，如Stein等人，Pharmacol.Biochem.Behav.31：451- 455，1988所述使用痛觉计(analgesymeter)(Ugo Basile)测定对有 害的机械刺激的后爪撤回阈值(PWT)。可以施加在后抓上的最大重量设 置为250g，且终点为爪的完全撤回。在每个时间点为每只大鼠测定 PWT且只试验受到影响的(同侧的)爪。
[00453]冷痛觉异常：为了测量冷痛觉异常，使用50μL Hamilton 注射器通过在动物站立的架台的栅栏下面为爪的跖面施加一滴丙酮。 这个过程以3分钟间隔进行5次。将剧烈的摇动记录为阳性反应，并 且记录摇动持续时间。或者，可以使用冷水浴方法试验冷痛觉异常， 其中将动物置于冷水浴中，水深度为1.5-2.0cm，温度为3-4℃，且 计数抬爪的次数。
结直肠膨胀(CRD)：
[00454]在诱导模型之前的16小时，使动物得不到食物但是不限量 供给水。通过一段管子为由流量计和压力控制程序组成的恒压器系统 连接5cm胶乳气球。在异氟烷麻醉的情况下，通过肛门将气球插入到 远端结肠中距离肛门5cm的距离，并且用胶带固定在尾根部。在麻醉 作用之后，将动物不受限制地置于透明的聚丙烯笼中并使其适应30分 钟。使气球以每30秒进行5mm的增量逐渐从0mmHg膨胀到75 mmHg。结肠反应阈值定义为诱导第一次腹部收缩的压力。作为内脏疼 痛的指示的腹部收缩与鼓包、驼背姿势、舔下腹部、伴有同侧后肢内 向旋转的同侧斜肌肉系统收缩的重复波动、拉胀、抵靠地板挤压下腹 部有关(Wesselman，Neurosci.Lett.，246：73-76，1998)。或者， 可以将电极置于腹外斜肌肌肉系统来以肌电图记录腹部收缩。在这种 情况中，在结肠气球充气期间量化EMG活性。化合物通常在试验之前 的0.5-12小时给予。
乙酸扭动试验：
[00455]为大鼠i.p.给予0.6％的乙酸溶液(10mL/kg)，并且计数 30分钟内的腹部收缩次数。化合物通常在试验之前的0.5-12小时给 予。
膀胱传入神经记录：
[00456]为了测定P2X3和P2X2/3受体抑制在排尿响应中的确切作 用，考查了试验化合物调节来自膀胱的传入信号转导的能力。在如 Vlaskovska等人，J.NeuroscienGe，21：5670-7，2001；和 Cockayne等人，J.Physiol.567：621-39，2005描述的膀胱/骨盆神 经制备物中评价化合物。简而言之，整体分离连接于下部脊椎和周围 组织的完整的泌尿道并且在记录室中用氧化的(5％CO2和95％O2)Krebs 溢流。将膀胱插入导管通过尿道用于管腔内输注。将第二个双内腔导 管插入到膀胱中，用于测量管腔内压力和用于膀胱排泄。在膀胱经过 准备之后，将骨盆神经解剖到椎骨外，并用抽吸玻璃电极穿刺。使用 标准电生理学方法测量神经活动性。在60分钟的稳定期之后，进行重 复的匀变膨胀，直到传入响应稳定化。将这个稳定化的传入响应用来 比较不同处理组之间的膀胱传入的机械敏感性。
等容膀胱收缩试验：
[00457]将雌性Sprague-Dawley大鼠麻醉，切开气管，并在颈动脉 和股静脉中插套管。通过剖腹术取得膀胱并将输尿管结扎和横切。为 膀胱插套管用于液体输注和压力测量。
[00458]在手术之后，为膀胱输注盐水，直到引起稳定的体积诱导 的膀胱收缩。一旦获得稳定的阈值体积和收缩频率，为动物剂量给药 化合物并且测量收缩频率。
再填充和膀胱功能的膀胱炎模型：
[00459]将动物麻醉，并且如前所述进行经尿道的封闭膀胱内压测 量(Dmitrieva等人，Neuroscience 78：449-59，1997；Cockayne等 人，Nature 407：1011-5，2000)。为膀胱经尿道插入PE-10聚丙烯导 管。每个膀胱内压图包括通过经尿道的导管用生理盐水缓慢填充膀 胱，然后通过压力传感器记录与填充有关的压力。大于预定阈值的收 缩解释为排尿收缩。对于每个膀胱内压图，记录发生主动收缩(排尿阈 值)时的体积和每个膀胱内压图的收缩次数。然后测定化合物的作用。
[00460]还可以在动物膀胱炎模型中得到膀胱内压图，在动物膀胱 炎模型中，通过在膀胱内压测量之前24小时注射环磷酰胺(150mg/kg， i.p.)或在膀胱内压测量期间输注最多1％的乙酸来刺激膀胱。
[00461]本申请中所述的合成实施例和生物学实施例用于举例说明 本文中提供的化合物、药物组合物和方法，但不应将其看作以任何方 式限制其范围。在实施例中，所有的温度都是摄氏度(除非另有说 明)。可以根据本文中提供的方法制备的化合物以及其生物活性数据存 在于在以下表中提供。这些代表性化合物的合成根据上述方法进行。
示例性的本文中提供的化合物
[00462]以下化合物可以根据本文中提供的合成方法来制备。钙摄 取试验如上所述进行，且结果表示在表1中，其中每个化合物的活性 表示在如下表1中。
表1：示例性的2-氰基苯基稠合杂环化合物












化合物在大鼠中在静脉内给药和口服给药之后的药代动力学评 价。
[00463]使雄性Sprague-Dawley大鼠在实验开始前适应至少24小 时。在适应期间，所有的动物不限量接受食物和水。然而，在开始试 验的至少12小时之前，将食物从动物笼中取出，水保留。在实验的前 3个小时期间，动物只接收不限量供应的水。对于静脉内剂量和口服 剂量分别试验至少三只动物。对于静脉内制剂，将化合物溶解在3％二 甲亚砜、40％PEG 400和余量为含40％(w/v)Captisol的水的混合物中 (0.25-1mg/mL)。在剂量给药之前将动物称重。测定的体重用于计算 每只动物的剂量体积。
剂量体积(mL/kg)＝1mg/kg/制剂浓度(mg/mL)
[00464]在其中制剂浓度低于0.5mg/mL的情况中，剂量体积为约2 mL/kg。
[00465]对于口服制剂，将本发明的化合物悬浮在5％的含10％吐温 80(v/v)的水和95％的含0.5％甲基纤维素(w/v)的水的混合物中(0.5 -0.75mg/mL)。PO大鼠典型地通过口服灌胃法剂量给药，随后I V剂 量给药相同的剂量体积制剂以实现1-5mg/kg的剂量水平。对于IV剂 量给药，在剂量给药后的2、5、15、30、60、120、180、300、480 和1440分钟通过颈静脉导管收集血液样品(使用预肝素化的注射器)。 对于PO剂量给药，在剂量给药之前和剂量给药后的5、15、30、60、 120、180、300、480和1440分钟通过颈静脉导管收集血液样品(使用 预肝素化的注射器)。在每个时间点从动物取得约250μL血液。代之 以等体积的0.9％生理盐水以防止脱水。在离心之前将全血样品保持在 冰上。然后将血液样品在4℃以14,000rpm离心10分钟并将上部的 血浆层转移到干净的小瓶中并且在-80℃储存。然后通过液相色谱串联 质谱分析得到的血浆样品。在测量血浆样品和剂量给药溶液之后，绘 制血浆浓度-时间曲线。血浆暴露计算为外推到时间无限大的浓度时间 曲线下面积(AUCinf)。将AUCinf取平均值并且如下计算单个动物的口服 生物利用度(％F)：
AUCinf(PO)/AUCinf(IV)，根据它们相应的剂量水平归一化。
[00466]％F可以报告为在具体说明的水平口服剂量给药本发明化合 物的所有动物的平均％F。
血浆蛋白结合
[00467]分别在人和大鼠血浆中测量本发明化合物的血浆蛋白结 合。在DMSO溶液中制备1mg/mL的试验化合物储备溶液。将储备溶液 掺入空白血浆中，得到用于试验的1μg/mL的最终的化合物浓度。对 于试验目的，使用平衡透析(平衡透析器-96TM MWCO 5K Daltons， Harvard Apparatus)方法。
[00468]分别为200μL的掺有化合物的血浆(1μg/mL)和磷酸盐缓 冲液(0.1M，pH 7.4)分别加入到96孔平衡透析器的膜的相对两侧 中。将透析器板覆盖并且在8板转子恒温箱(Big Shot III 8-板转 子，Harvard Apparatus)中在37℃培养过夜(16小时)。从血浆和缓 冲液隔室分别取得等分样品(100μL)。通过向从缓冲液隔室取得的样 品中添加相同体积的空白血浆和向从血浆隔室中取得的样品中添加相 同体积的磷酸盐缓冲液来消除基质效应。使用规则(3∶1)的蛋白质沉淀 提取操作(含内标的乙腈)提取样品。取得上层清液用于LC/MS/MS分 析。可以使用以下方法计算血浆-蛋白质结合的百分比：
％游离＝[游离药物/总药物]*100＝[(峰面积)缓冲液/(峰面积)血 浆]*100
％结合＝100-％游离。
[00469]通过前面的描述，本领域技术人员会想到本文中提供的组 合物和方法的各种改进和变化。意在权利要求包括落入其范围内的所 有的这种改进。
[00470]在本说明书中引用的所有出版物(包括但不限于专利和专利 申请)都被并入本文作为参考，如同每个单独的出版物被明确地和分别 地指出如同完全阐述那样被并入本文作为参考。
[00471]在本申请中给出和阐述的至少一些本发明化合物的化学名 称可能是通过使用商购的化学命名软件程序自动生成的，并且未独立 11地加以验证。执行这种功能的代表性的程序包括由Open Eye Software，Inc.销售的Lexichem命名工具和由MDL，Inc.销售的the Autonom软件工具。在其中指出化学名称和所示结构不同的情况中， 以表示的结构为准。
[00472]本文中表示的化学结构使用ISIS/DRAW制作。在本文中的 结构中的碳、氧或氮原子上出现的任何开放化合价表示存在氢原子。 在结构中存在手性中心而没有显示手性中心的特定立体化学时，与该 手性结构有关的两种对映异构体都被该结构所包括。