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含有水芹菜提取物作为有效成分的学习能力或记忆力障碍预防或治疗用组合物及其制造方法

阅读：163发布：2020-05-14

专利汇可以提供含有水芹菜提取物作为有效成分的学习能力或记忆力障碍预防或治疗用组合物及其制造方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及含有水芹菜提取物作为有效成分的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用组合物及其制造方法，更详细的涉及从用作食用香辛蔬菜中的一种的水芹菜中提取能够抑制乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性、预防或治疗学习能力或记忆力障碍的有效成分，用作药物组合物或健康功能食品。，下面是含有水芹菜提取物作为有效成分的学习能力或记忆力障碍预防或治疗用组合物及其制造方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物，其特征在于，以水芹菜提取物作为有效成分，
其中所述水芹菜为旱田水芹菜；
所述水芹菜提取物的制造方法是，将干燥水芹菜与其重量的20～200倍的碳原子数
1～4的低级醇水溶液混合，在50～90℃下提取4～20小时；
所述低级醇水溶液为50～80(v/v)％的乙醇水溶液，用所述乙醇溶液提取后，将提取物用乙酸乙酯或丁醇提取。
2.根据权利要求1所述的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物，其特征在于，该组合物为口服给药用组合物。
3.根据权利要求1所述的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物，其特征在于，所述提取物是可溶解于选自碳原子数1～4的低级醇或所述低级醇的水溶液中的溶剂的提取物。
4.根据权利要求3所述的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物，其特征在于，所述低级醇的水溶液是低级醇的混合比为10～95(v/v)％的醇水溶液。
5.一种学习能力或记忆力增进用健康功能食品，其特征在于，以水芹菜提取物作为有效成分，
其中所述水芹菜为旱田水芹菜；
所述水芹菜提取物的制造方法是，将干燥水芹菜与其重量的20～200倍的碳原子数
1～4的低级醇水溶液混合，在50～90℃下提取4～20小时；
所述低级醇水溶液为50～80(v/v)％的乙醇水溶液，用所述乙醇溶液提取后，将提取物用乙酸乙酯或丁醇提取。
6.根据权利要求5所述的学习能力或记忆力增进用健康功能食品，其特征在于，所述健康功能食品的形态为粉末、颗粒、片剂、胶囊或饮料形态。

说明书全文

含有水芹菜提取物作为有效成分的学习能力或记忆力障碍

预防或治疗用组合物及其制造方法

技术领域

[0001] 本发明涉及含有水芹菜提取物作为有效成分的学习能力或记忆力障碍预防或治疗用组合物及其制造方法，更详细的涉及从用作食用香辛蔬菜中的一种的水芹菜，尤其是从种旱田水芹菜中提取能够抑制乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性、预防或治疗学习能力或记忆力障碍的有效成分来用作药物组合物或健康功能食品。

背景技术

[0002] 水芹菜又称为芹菜、水芹、水英，是在韩国全部地区自然生长，在萨哈林岛、中国大陆、日本、东南亚、大洋洲等从亚寒带、温带到热带广泛分布的香辛蔬菜。

[0003] 水芹菜根据栽培方式分为水田水芹菜和旱田水芹菜，水田水芹菜是从开始到收获时为止，在田中灌溉水而栽培的水芹菜，将茎截断后可以看到茎空，组织柔软因而称为水芹菜，旱田水芹菜开始与水田水芹菜类似地通过水耕栽培，最后将水放干栽培，以旱田状态进行管理栽培，因此称为旱田水芹菜，茎内不空，充满内容物。

[0004] 通常称为水芹菜的是水田水芹菜，水芹菜在东医宝鉴中记载为对黄疸、妇科病、饮酒后的头痛或呕吐有效，近来的各种研究显示水芹菜中含有类黄酮（flavonods）、胆碱（cholin）精油，还含有作为喹啉（quinoline）系的生物碱（alkaloid）的如它明（rutamin）、r-帕加林（r-pagarin）、香豆素（cumarin）等，通过这些成分不仅具有保肝作用、抗突变及抗氧化作用、高血压治疗效果，还对饮酒后的宿醉消除具有卓越的效果。

[0005] 另外，痴呆（dementia）是出现脑细胞死亡及记忆力减退等脑功能的整体性障碍为特征的退行性疾病，预测65岁以上的人群中约占10%，80岁以上的老年人中约占50%以上。进来随着老龄化人口的增加，预计其发病速度更加急速地增加，因此痴呆成为现代社会面临的严重的社会、经济问题。

[0006] 痴呆的原因有多种，分为阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease）、血管性痴呆、其他酒精中毒、外伤、帕金森病的后遗症导致的痴呆。痴呆患者的一半以上都出现阿尔茨海默病，因此对痴呆的研究以阿尔茨海默病为重点进行。

[0007] 阿尔茨海默病的发病机制虽然还不明确，但到目前为止已知与中枢神经系统中的乙酰胆碱功能减少、以β-淀粉样蛋白（amyloid beta,Aβ）为主成分的老年斑（senile plaque）的脑细胞内沉着、或细胞外部的以过磷酸化的Tau蛋白为主成分的神经原纤维缠结（Neurofibrillary tangle）的出现等有着密切的关联。

[0008] 以往有很多揭示上述原因中的胆碱性神经系的功能低下与记忆力低下之间相互关系的研究结果，因此人们一直努力对胆碱神经系进行补充和改善，由此治疗痴呆。

[0009] 因此，以往的痴呆治疗剂大部分是在脑中能够抑制作为乙酰胆碱分解酶的乙酰胆碱酯酶（AchE）的活性的乙酰胆碱分解抑制剂或能够将乙酰胆碱的浓度维持在一定水平的乙酰胆碱合成前体及乙酰胆碱受体激动剂（Receptor agonist）等物质。

[0010] 作为具体例子，乙酰胆碱分解抑制剂有得到FDA承认且在韩国也在市售使用中的他克林（tacrine）、安理申（aricept）及加兰他敏（galantamine）；乙酰胆碱合成前体有卵磷脂（lecitin）；此外乙酰胆碱受体激动剂有RS-86、尼古丁（nicotine）等。

[0011] 但是，随着痴呆的进行，不仅是乙酰胆碱性神经细胞，占据神经细胞绝大多数的谷氨酸神经细胞也会退化，因此重点放在乙酰胆碱的活性增进的上述方法只能获得暂时性的微弱的痴呆预防及治疗效果。此外，例如他克林的大部分药物具有严重的肝毒性、呕吐、恶心或腹泻等副作用，因此对于它们的使用与否还存在很多争议。

[0012] 此外，现代社会逐渐变得复杂化和专门化，随之也需要大量的信息量和学习量，因此需要有效的大脑活动。但是，很多人由于老化、疾病、药物或压力而受到记忆力减退的困扰，随着人类的寿命延长需要高度的精神活动。为了很好地应对这种状况，人们正在努力使大脑清醒，增加记忆力，以满足精神活动的需求等，同时在该领域需要开发能够有效增进这些功能的药品、功能食品等。

[0013] 因此，在以民间或韩方中广泛应用且额外的副作用小的天然物为对象进行具有能够有效增进学习能力及记忆力、预防或治疗学习障碍或记忆力障碍、抑制乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性的天然物的筛选的过程中，确认水芹菜提取物，尤其是旱田水芹菜提取物口服给药时明显显示出上述活性，由此完成了本发明。

发明内容

[0014] 本发明的目的在于提供由天然物得到的几乎没有毒性和副作用，具有强力的抗胆碱酯酶效果，能够预防或治疗学习能力或记忆力障碍的药物组合物。

[0015] 此外，本发明的目的还在于提供由水芹菜制造具有最佳的抗胆碱酯酶效果的提取物的方法。

[0016] 此外，本发明的又一目的是提供从天然物得到的几乎没有毒性和副作用，具有强力的抗胆碱酯酶效果，增进学习能力或记忆力的健康功能食品。

[0017] 本发明的特征是以水芹菜提取物作为有效成分的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物。

[0018] 本发明的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物的特征是所述水芹菜为旱田水芹菜。

[0019] 本发明的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物的特征是口服给药。

[0020] 本发明的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物，其中，所述提取物是可溶解于选自碳原子数1～4低级醇或所述低级醇的水溶液中的溶剂的提取物。

[0021] 本发明的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物，其中，所述醇水溶液为低级醇的混合比为10～95（v/v）%的醇水溶液。

[0022] 此外，根据本发明的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用水芹菜提取物的制造方法，将干燥水芹菜与其重量的20～200倍的碳原子数1～4的低级醇水溶液混合，在50～90℃下提取4～20小时。

[0023] 根据本发明的学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用水芹菜提取物的制造方法，其中，所述低级醇水溶液为50～80（v/v）%的乙醇水溶液，用所述乙醇水溶液提取后，其提取物用乙酸乙酯或丁醇提取。

[0024] 此外，本发明还提供以水芹菜提取物作为有效成分的学习能力或记忆力增进用健康功能食品。

[0025] 根据本发明的学习能力或记忆力增进用健康功能食品，其中，所述水芹菜为旱田水芹菜。

[0026] 根据本发明的学习能力或记忆力增进用健康功能食品，其中，所述健康功能食品的形态为粉末、颗粒、片剂、胶囊或饮料形态。

[0027] 根据本发明的水芹菜提取物是几乎没有副作用或毒性的天然物来源的提取物，能够显著抑制乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性，具有预防诱导痴呆或记忆力减退的药物东莨菪碱的使用导致的记忆力损伤的效果，对乙醇或应激导致的记忆力障碍也显示治疗效果。附图说明

[0028] 图1是比较以水芹菜为代表的各种天然物的乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性抑制率的图谱。

[0029] 图2是比较用不同溶剂重新提取水芹菜乙醇提取物而得到的细分馏分提取物的乙酰胆碱酯酶活性抑制率的图谱。

[0030] 图3是比较水田水芹菜提取物和旱田水芹菜提取物的乙酰胆碱酯酶活性抑制率的图谱。

具体实施方式

[0031] 本发明是从水芹菜中提取具有乙酰胆碱酯酶（AChE）活性抑制及学习能力或记忆力增进效果的组合物，并应用于学习障碍或记忆力障碍预防或治疗用药物组合物或者学习能力或记忆力增进用健康功能食品。

[0032] 在本发明中，水芹菜属于伞形花科（Umbelliferaceae）的水芹属的Ostericum coreanum、Oenanthe stonilifera、Oenanthe javanica等；优选韩国产水芹菜。

[0033] 水芹菜可以使用通常在水田中水耕栽培的称为水芹的水田水芹菜和在旱田栽培的称为火芹的旱田水芹菜，但是旱田水芹菜与水田水芹菜相比，乙酰胆碱酯酶（AChE）的抑制活性优异，对药物引起的记忆力损伤的预防效果优异，因此优选。

[0034] 本发明的用于水芹菜提取物制造的溶剂可以使用碳原子数1～4的低级醇，或上述低级醇的水溶液。碳原子数1～4的低级醇可以使用例如甲醇、乙醇、丁醇、丙醇、异丙醇等；优选使用乙醇。

[0035] 此外，作为用于水芹菜提取物的制造的溶剂而使用醇水溶液时，使用在水和醇混合的醇水溶液中醇的混合比例为10～95（v/v）%的醇水溶液；优选使用20～90（v/v）%的醇水溶液；更优选使用50～80（v/v）%的醇水溶液。

[0036] 最优选用50～80（v/v）%的醇水溶液提取物后，将该提取物用乙酸乙酯或丁醇提取而得到的馏分作为提取物时，在乙酰胆碱酯酶（AChE）的抑制活性优异的方面有利。

[0037] 本发明的水芹菜提取物可以通过使用上述溶剂进行搅拌提取、回流冷却提取、冷浸提取、超音波提取或超临界提取等提取方法制造，特别是，为了从水芹菜中有效地提取高浓度的有效成分，优选混合干燥水芹菜的重量的20～200倍的、优选为50～150倍的碳原子数1～4的低级醇水溶液，在50～90℃下提取4～20小时。

[0038] 本发明的包含水芹菜提取物作为有效成分的组合物可以用于阿尔茨海默病、血管性痴呆、其他醇中毒、外伤、帕金森病的后遗症引起的痴呆或认知功能障碍的预防及治疗，特别是适合阿尔茨海默病的治疗。

[0039] 本发明的组合物，相对于组合物总重量，以固体成分为基准，含有水芹菜提取物0.1～50重量%。

[0040] 但上述组成并不限于此，根据患者的状态及疾病的种类及进行程度可以进行变更。

[0041] 本发明的含有水芹菜提取物作为有效成分的组合物还可以包含药物组合物的制造中通常使用的适合的载体、赋形剂及稀释剂。

[0042] 根据本发明的包含水芹菜提取物作为有效成分的组合物，根据通常的方法可制成散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬液、乳液、糖浆、气雾剂等口服型剂型、外用剂、栓剂及灭菌注射溶液的形态使用，可包含在含有提取物作为有效成分的组合物中的载体、赋形剂及稀释剂可举出乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯比咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油。制剂化时使用通常使用的填充剂、增量剂、结合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂制造。

[0043] 用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，这些固体制剂在上述提取物中添加至少一种以上的赋形剂，例如淀粉、碳酸钙(calcium carbonate)、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明胶等制造。此外，除了单纯的赋形剂之外，还使用例如硬脂酸镁、滑石等润滑剂。用于口服给药的液状制剂有混悬液、内用液剂、乳剂、糖浆剂等，除了通常使用的单纯的稀释剂水、液体石蜡之外，还可以包含各种赋形剂，例如湿润剂、香味剂、芳香剂、保存剂等。用于非口服给药的制剂包括灭菌水溶液、非水溶剂、混悬剂、乳剂、冻结干燥剂、栓剂。非水溶剂、混悬剂可以使用丙二醇（propylene glycol）、聚乙二醇、橄榄油之类的植物油、油酸乙酯等可注射的酯类等。栓剂的基质可以使用witepsol、聚多卡醇吐温（tween）61、可可豆脂月桂酸酯甘油明胶等。

[0044] 本发明的组合物的优选的给药量根据患者的状态及体重、疾病的程度、药物形态、给药途径及期间不同，但是本领域技术人员可适当地选择。但是为了理想的效果，本发明的组合物以水芹菜提取物的固体成分为基准，1日给药0.01mg/kg～10g/kg；优选1mg/kg～1g/kg。给药可以一天一次，也可以分多次给药。从而，上述给药量不管从哪个方面来讲都不限定本发明的范围。

[0045] 本发明的组合物可通过多种途径对大鼠、小鼠、家畜、人类进行给药。给药的所有方式均可使用，例如，可通过口服、直肠或静脉、肌肉、皮下、子宫内硬膜或脑血管内（intracerebroventricular）注射而给药。尤其是本发明的水芹菜提取物口服给药时相比腹腔给药对记忆力损伤预防效果优异。

[0046] 本发明还提供包含显示学习能力或记忆力增进效果的水芹菜提取物及食品学上可允许的食品辅助添加剂的健康功能食品。

[0047] 本发明的包含水芹菜提取物作为有效成分的组合物作为食品例如有各种食品类、饮料、口香糖、茶、维生素复合剂、健康辅助食品类等，能够以粉末、颗粒、片剂、胶囊或饮料的形态使用。

[0048] 本发明的水芹菜提取物本身几乎没有毒性及副作用，是作为预防的目的长期服用时也可以放心使用的药剂。

[0049] 本发明的上述水芹菜提取物为了学习能力或记忆力增进效果而添加到健康功能食品中时，所述提取物的量以固体成分为基准，通常用于本发明的粉末、颗粒、片剂、胶囊等形态的健康功能食品时，添加为总食品重量的0.01～15重量%；饮料形态的健康功能食品时，以饮料100ml为基准，添加0.02～10g，优选添加0.3～1g。

[0050] 本发明的饮料形态的健康功能食品以上述的比例作为必需成分含有提取物之外，对于液体成分没有特别的限制，可像通常的饮料一样含有各种香味剂及天然碳水化物等作为追加成分。上述天然碳水化物的例子有单糖，例如葡萄糖；果糖等二糖；例如麦芽糖、蔗糖等多糖；例如糊精、环糊精等普通的糖，以及木糖醇、山梨醇、赤藓糖醇等糖醇。除了上述之外的香味剂还可以使用天然香味剂（索马甜、甜菊叶提取物（例如莱苞迪苷A、甘草甜素）及合成香味剂（糖精、阿斯巴甜等）。所述天然碳水化物的比例以本发明的组合物100ml为基准含有约1～20g，优选约5～12g。

[0051] 上述之外本发明的组合物还可以含有各种营养剂、维生素、矿物（电解质）、合成风味剂及天然风味剂等风味剂、着色剂及填充剂（）（奶酪、巧克力等）、果胶酸及其盐、褐藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增粘剂、pH调节剂、稳定化剂、防腐剂、甘油、醇、碳酸饮料中使用的碳酸化剂等。除此之外，本发明的组合物还可以含有用于天然果汁及果汁饮料及蔬菜饮料的制造的果肉。这些成分可单独或组合使用。这些添加剂的比例虽然不是很重要，但是以本发明的组合物100重量份基准，一般在0至约20重量份的范围中选择。

[0052] 实施方式

[0053] 以下根据实施例及实验例详细说明本发明。

[0054] 但是，下列实施例及实验例只是例示本发明，本发明的范围并不由此限定。

[0055] 实验例1：各种天然物的乙酰胆碱酯酶（AChE）的抑制活性比较（Ellman’s method）

[0056] 分别制造仙人掌果实、石榴、柚子、无花果、明日叶（Angelica utilis makino）、大枣及水田水芹菜的70（v/v）%的乙醇水溶液提取物，比较了乙酰胆碱酯酶的抑制活性。

[0057] 各个乙醇水溶液提取物以干燥试料10g中添加酒精（乙醇含量70（v/v）%）600ml，在60℃下不回流的情况下提取8小时，过滤除去残渣，在50～60mmHg及30～40℃条件下蒸发浓缩，将由此得到的浓缩液进行热风干燥得到乙醇提取物粉末。

[0058] 上述各个乙醇提取物粉末溶解在二甲基亚砜（DMSO）中后，在100mM磷酸盐（pH8.0，称为“缓冲液I”）中以1000μg/ml的浓度稀释（DMSO时稀释为最终浓度10%）。在上述缓冲液I中混合稀释的提取物粉末1.5ml、100mM磷酸盐（pH7.0，称为“缓冲液II”）1.5ml、75mM的碘化硫代乙酰胆碱溶液20μl及缓冲Ellman’s 试剂[Buffered Ellman’sreagent；5,5-二硫双（2-硝基苯甲酸）10mM、NaHCO317.85mM]100μl，在25℃下静置10分钟。然后，加入AChE酶（20μl）摇匀，然后以30秒为间隔测定吸光度5分钟，确认是线性反应（linear reaction）。

[0059] 空白组（blank）中加入食盐水（saline）代替酶。另外，不加入碘化硫代乙酰胆碱溶液测定吸光度，确认乙醇提取物粉末和酶活性测定时是否出现略微的非特异性反应。

[0060] 另外，没有加入提取物的作为阴性对照组，将此时的AChE活性度作为100%时，将相对于各植物的乙醇提取物（500μg/ml）的AChE抑制活性度表示为“%抑制”并在图1中示出。AChE活性实验反复进行5次，结果的显著性用one-way ANOVA实验进行检验。

[0061] 根据图1，仙人掌果实、石榴及柚子提取物显示出8～11%的乙酰胆碱酯酶活性抑制率，但是水田水芹菜提取物显示出2倍以上的23.5%的活性抑制率，无花果、明日叶及大枣提取物的酶活性抑制率不足5%，效果甚微。

[0062] 实验例2：根据水芹菜提取方法的乙酰胆碱酯酶（AChE）的抑制活性比较[0063] 在干燥水田水芹菜10g中加入纯化水600ml，在100℃下热水提取8小时，过滤除去残渣后，在50～60mmHg及30～40℃的条件下蒸发浓缩，将由此得到的浓缩液热风干燥而得到热水提取物粉末。

[0064] 另外，在干燥水田水芹菜10g中加入酒精（乙醇含量75（v/v）%）600ml，在60℃下不进行回流的情况下提取8小时，过滤除去残渣后，在50～60mmHg及30～40℃的条件下蒸发浓缩，将由此得到的浓缩液热风干燥而得到醇提取物粉末。

[0065] 按照实验例1的方法测定上述水田水芹菜热水提取物粉末和醇提取物粉末的乙酰胆碱酯酶活性抑制率，作为阳性对照组加入DHED37.8μM进行比较，并将其结果在表1中示出。AChE活性实验反复进行5次，结果的显著性用one-way ANOVA实验进行检验。

[0066] 表1

[0067] [表1]

[0068]区分浓度 AChE抑制活性度(%)
阳性对照组(DHED) 37.8μM 45.2±5.2
热水提取物粉末 500μg/ml 2.4±0.4
醇提取物粉末 500μg/ml 31.5±9.6

[0069] 实验例3：根据水芹菜提取物馏分方法的乙酰胆碱酯酶（AChE）的抑制活性比较[0070] 实验例2的干燥水田水芹菜10g中加入酒精（乙醇含量75（v/v）%）600ml，在60℃下不进行回流的情况下提取8小时，过滤除去残渣后，分别用己烷、氯仿、乙酸乙酯、丁醇及水提取得到各自的馏分提取物，将它们分别在50～60mmHg及30～40℃的条件下蒸发浓缩，将由此得到的浓缩液热风干燥而得到提取物粉末。

[0071] 各自的馏分提取物（500μg/ml）的乙酰胆碱酯酶活性抑制率通过实验例1的方法测定，并在图2中示出。各个馏分提取物中，乙酸乙酯和丁醇提取物的酶活性抑制率最大，因此判断醇提取的水芹菜提取物的抑制乙酰胆碱酯酶活性的有效成分存在于乙酸乙酯层或丁醇层。

[0072] 实验例4：旱田水芹菜和水田水芹菜的乙酰胆碱酯酶（AChE）的抑制活性比较[0073] 实验例2的干燥水田水芹菜替换为旱田水芹菜10g，加入酒精（乙醇含量75（v/v）%）600ml，在60℃下不进行回流的情况下提取8小时，过滤除去残渣后，在50～60mmHg及30～40℃的条件下蒸发浓缩，将由此得到的浓缩液热风干燥而得到提取物粉末。

[0074] 水田水芹菜提取物粉末及旱田水芹菜提取物粉末分别以500μg/ml浓度，作为阳性对照组以100μM的浓度加入DHED，按照实验例1的方法测定乙酰胆碱酯酶的活性抑制率，并将其结果在图3中示出。

[0075] 旱田水芹菜提取物虽然通过相同方法制造并使用的相同的浓度，但是可以确认与水田水芹菜提取物的酶活性抑制率相比提高了2倍以上，显示出与50μM浓度的DHED同等水平的酶活性抑制率。

[0076] 实验例5：根据被动回避反应的学习障碍及记忆力障碍预防效果确认[0077] 实验仪器使用穿梭箱（Shtuule box）（50×15×40cm），底板为电网地板（electric grid floor）。箱子由隔门分割为25×15cm的房间。该实验在噪音小于60dB、照明昏暗的房间中，观察大鼠因东莨菪碱（scopolamine）引起的学习和记忆力损伤是否能够由实验例4的水田水芹菜及旱田水芹菜提取物给药得到治疗。

[0078] 实验第一天，成为实验对象的所有的动物均实施了以下实验。将大鼠放入由隔门分割的2个房间中的光亮的房间中，以1500lux进行照明并打开隔门。大鼠会观察四周后进入无照明的对面的阴暗的房间，此时隔门会自动关闭。测定从开灯并打开隔门开始到隔门关闭期间的等待时间（latency），这种试验（trial）反复进行3～4次，从第4次开始几乎可以无一例外地在20秒之内从光亮的房间移动到阴暗的房间。

[0079] 实验第二天，对体重200～250g的大鼠口服给药实验例4的水田水芹菜提取物粉末及旱田水芹菜提取物粉末各10mg/kg，阳性对照组他克林口服给药1mg/kg。

[0080] 提取物及他克林给药1小时后，腹腔给药溶于生理盐水的东莨菪碱4.5mg/kg，再过1小时后，在穿梭箱（shuttle box）中通过如下方法给足部冲击（foot-shock）。大鼠从光亮的房间移动到阴暗的房间，就在灭灯的状态下通过房底的不锈钢电网（stainless grid）接通0.3mA的电流3秒钟，从而给大鼠足部冲击。大鼠会记住阴暗房间和足部冲击之间的关系，20小时后放入光亮房间，即使照射照明也会犹豫进入到阴暗房间。此时按照组别来比较等待时间，并在表2中示出。

[0081] 表2

[0082] [表2]

[0083]区分等待时间(秒)
对照组(东莨菪碱非给药组) 260±39.6
东莨菪碱给药组 17±5.4
他克林给药后给药东朗胆碱的组 32±13.4
水田水芹菜给药后给药东莨菪碱的组 17±5.1
旱田水芹菜给药后给药东莨菪碱的组 44±7.2

[0084] 相比对照组，东莨菪碱给药组的记忆力下降显著。由东莨菪碱而下降的记忆力由抗胆碱酯酶且以往用作痴呆治疗药物的他克林恢复。另外，由东莨菪碱而下降的记忆力的恢复的效果，旱田水芹菜优于水田水芹菜，旱田水芹菜的记忆力恢复效果优于他克林。

[0085] 为了确认这种旱田水芹菜的记忆力恢复的效果，在腹腔给药时是否也和口服给药时显示相同的效果，将相同量的旱田水芹菜提取物粉末以相同浓度稀释，在上述方法中只变更了给药途径再次进行试验，并将结果在表3中示出。

[0086] 表3

[0087] [表3]

[0088]

[0089] 对于东莨菪碱给药造成的记忆力下降的恢复，旱田水芹菜提取物口服给药时与东莨菪碱给药组相比，等待时间（Latency time）增进了2.6倍，但在腹腔给药时没有看到记忆力下降的恢复效果。

[0090] 实验例6：由醇导致的记忆力下降的治疗效果确认

[0091] 由醇导致的记忆力下降的治疗效果经过4周时间来实施。醇以2.5g/kg用量每日腹腔给药。旱田水芹菜提取物的给药量以10mg/kg及阳性对照组亚油酸以10mg/kg口服给药4周。给药四周后进行了Y迷宫实验。

[0092] Y-迷宫实验是验证空间知觉的测试方法，由三个大小相同的臂组成的黑色塑料迷路。每个臂由80×35×15cm构成，每个臂都维持相同的角度。将大鼠放在臂的末端使它自由活动10分钟。记录大鼠进入各个臂的顺序。连续选择不同的三个臂时给打分。将它们的分数（交替的%）(% of alternation)按照组别在表4中示出。

[0093] 表4

[0094] [表4]

[0095]区分交替的%
对照组 66.8±3.5
对照组口服给药旱田水芹菜提取物 62.0±5.7
醇腹腔给药 42.9±5.2
醇腹腔给药及亚油酸口服给药 62.3±2.8
醇腹腔给药及旱田水芹菜提取物口服给药 62.2±4.6

[0096] 对照组腹腔给药醇4周后，相比对照组出现了显著的记忆力下降。这样通过醇下降的记忆力通过以往已知具有记忆力改善效果的亚油酸的给药得到回复，口服给药本发明的旱田水芹菜提取物时，显示出与亚油酸同等水平的由醇导致的记忆力损伤的恢复效果。

[0097] 实验例7：由应激导致的记忆力损伤的治疗效果确认

[0098] 由应激导致的记忆力下降的治疗实验经过4周时间来实施。为了应激实验，将大鼠在塑料盒子中每天禁闭6小时，由此给了固定应激。旱田水芹菜提取物的给药量为10mg/kg及阳性对照组亚油酸为10mg/kg口服给药4周。给药4周后按照与实验例6相同的方法进行Y-迷宫实验，并将其结果在表5中示出。

[0099] 表5

[0100] [表5]

[0101]区分交替的%
对照组 68.24±4.32
对照组口服给药旱田水芹菜提取物组 72.54±6.21
应激组 60.13±5.17
应激组口服给药亚油酸的组 67.53±4.94
应激组口服给药旱田水芹菜提取物的组 69.09±4.52

[0102] 给大鼠应激而相比对照组出现了显著的记忆力下降。通过这种应激导致的记忆力下降，由以往已知具有记忆力改善的亚油酸的给药而得到恢复，口服给药本发明的旱田水芹菜提取物时，显示出与亚油酸同等水平的对醇导致的记忆力损伤的恢复效果。

[0103] 以下对含有本发明提取物的组合物的制剂例进行说明，但是只是为了具体说明本发明，并不限定本发明的范围。

[0104] 制剂例1.散剂的制造

[0105] 实验例4中得到的旱田水芹菜提取物粉末 20mg

[0106] 乳糖 100mg

[0107] 滑石 10mg

[0108] 将上述成分混合后填充到气密包中制造散剂。

[0109] 制剂例2.片剂的制造

[0110] 实验例4中得到的旱田水芹菜提取物粉末 10mg

[0111] 玉米淀粉 100mg

[0112] 乳糖 100mg

[0113] 硬脂酸镁 2mg

[0114] 将上述成分混合后通过通常的片剂的制造方法打片制造片剂。

[0115] 制剂例3.胶囊剂的制造

[0116] 实验例4中得到的旱田水芹菜提取物粉末 10mg

[0117] 结晶纤维素 3mg

[0118] 乳糖 14.8mg

[0119] 硬脂酸镁 0.2mg

[0120] 按照通常的胶囊剂的制造方法将上述成分混合，填充于明胶胶囊而制造了胶囊剂。

[0121] 制剂例4.注射剂的制造

[0122] 实验例4得到的旱田水芹菜提取物粉末 10mg

[0123] 甘露醇 180mg

[0124] 注射用灭菌蒸馏水 2974mg

[0125] Na2HPO4·12H2O 26mg

[0126] 按照通常的注射剂的制造方法，以每安瓿（2ml）上述成分含量制造。

[0127] 制剂例5.液剂的制造

[0128] 实验例4中得到的旱田水芹菜提取物粉末 20mg

[0129] 异构糖 10g

[0130] 甘露醇 5g

[0131] 纯化水适量

[0132] 按照通常的液剂制造方法，在纯化水中加入各个成分溶解，加入适量柠檬香后，将上述成分混合，然后加入纯化水，将加入纯化水后的总体积调节为100ml，填充于棕色瓶中进行灭菌制造液剂。

[0133] 制剂例6.健康功能食品的制造

[0134] 实验例4得到的旱田水芹菜提取物粉末 1000mg

[0135] 维生素混合物适量

[0136] 维生素A醋酸酯 70μg

[0137] 维生素E 1.0mg

[0138] 维生素B1 0.13mg

[0139] 维生素B2 0.15mg

[0140] 维生素B6 0.5mg

[0141] 维生素B12 0.2μg

[0142] 维生素C 10mg

[0143] 生物素 10μg

[0144] 烟酰胺 1.7mg

[0145] 叶酸 50μg

[0146] 泛酸钙 0.5mg

[0147] 无机质混合物适量

[0148] 磺酸亚铁 1.75mg

[0149] 氧化锌 0.82mg

[0150] 碳酸镁 25.3mg

[0151] 磷酸二氢钾 15mg

[0152] 磷酸氢钙 55mg

[0153] 枸橼酸钙 90mg

[0154] 碳酸钙 100mg

[0155] 氯化镁 24.8mg

[0156] 上述维生素及矿物质的混合物的组成比是将比较适合健康食品的成分按照优选实施例混合组成，但是其配比进行任意变形也无妨，按照通常的健康功能食品制造方法将上述成分混合后，制造颗粒，按照通常的方法用于健康功能食品组合物的制造。

[0157] 制剂例7.健康饮料的制造

[0158] 实验例4得到的旱田水芹菜提取物粉末 1000mg

[0159] 枸橼酸 1000mg

[0160] 寡糖 100g

[0161] 梅浓缩液 2g

[0162] 牛磺酸 1g

[0163] 添加纯化水至900ml

[0164] 按照通常的健康饮料的制造方法将上述成分混合后，在85℃下搅拌约1小时后，将得到的溶液过滤，装在灭菌的2L容器中密封进行灭菌后冷藏，然后用于本发明的健康饮料组合物的制造。

[0165] 工业利用性

[0166] 上述组成比将比较适合喜好饮料的成分按照优选实施例进行混合组成，但是根据需要阶层、需要国家、使用用途等地域性、民族性喜好度，将其配比进行任意变形也无妨。

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