小剂量丙泊酚在制备防治抗创伤后应激障碍产品中的用途
阅读：384发布：2020-05-15
专利汇可以提供小剂量丙泊酚在制备防治抗创伤后应激障碍产品中的用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了小剂量丙泊酚在制备 预防 或 治疗 应激性障碍产品中的用途。所述的应激性障碍及其相关 疾病 包括急性应激障碍、 创伤后应激障碍 。发明通过对创伤后应激障碍(Post‑traumatic stress disorder，PTSD)模型动物 腹腔 注射小剂量丙泊酚，显示小剂量丙泊酚具有减轻PTSD模型动物恐惧、焦虑、学习记忆损伤的作用，并可以减少强烈应激导致的诱导型一 氧 化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)、神经元型一氧化氮合酶(neurons nitric oxide synthase，nNOS)的表达，增加神经可塑性调节中发挥着重要作用的脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor，BDNF)的表达；研究还表明其显著降低模型胶质瘤细胞一氧化氮(nitric oxide，NO)的释放。丙泊酚具有起效快、代谢清除快无残留等优点，具有很好的应用前景。，下面是小剂量丙泊酚在制备防治抗创伤后应激障碍产品中的用途专利的具体信息内容。
小剂量丙泊酚在制备防治抗创伤后应激障碍产品中的用途
技术领域
[0001] 本发明涉及丙泊酚在应激性障碍及其相关疾病中的应用，特别涉及小剂量丙泊酚在制备预防、缓解和/或治疗创伤后应激障碍综合征(Post-traumatic stress disorder，PTSD)药物中的用途。
背景技术
[0003] PTSD最早在参战老兵中发现，但是严重的自然灾难、恐怖袭击、重大交通事故、暴力人身攻击和重大流行性传染病等事件均可导致PTSD的发生。2010年流行病学调查显示：美国国民PTSD发生率为7-8％，美军现役军人发病率为14-16％；目前我国的PTSD的流行病学调查仅限于严重的自然灾害，如唐山地震后260例孤儿PTSD的发生率为12％，汶川地震3个月后灾民PTSD发生率为14.7％。近几年来随着社会压力的增大、交通事故和自然灾难频发，PTSD的发生率逐年增长，严重影响社会的稳定。目前PTSD发生率高，临床治疗效果差，给个体和社会造成了沉重的负担，越来越受到社会的关注。
[0004] 最近研究表明：一氧化氮(nitric oxide，NO)及其信号通路是PTSD病理性恐惧记忆形成和海马退行性变的关键。研究发现捕食场景应激模型所致的焦虑样大鼠前额皮层和杏仁核脑区中神经元型一氧化氮合酶(neurons nitric oxide synthase，nNOS)表达增加，同时前额皮层脑区中NO的含量增加，分别阻断前额皮层和额杏仁核脑区中NO信号通路可导致实验性动物条件恐惧记忆缺失、线索性恐惧记忆障碍。另有研究发现，NO的过度释放与PTSD神经元的损伤密切相关。NO可以调节成人神经元的发生，尤其是海马齿状回颗粒层的nNos对神经元的发生起着关键性的作用，敲除nNos基因的小鼠神经元再生能力增强。综上所述NO信号通路与PTSD、神经元的可塑性密切相关。NO信号通路与PTSD、神经元的可塑性密切相关。
[0005] 对于PTSD的治疗仍然以药物治疗为主，但是临床上的一线用药(5-HT重吸收抑制剂类)普遍存在：(1)有效率不好；(2)起效延迟；(3)长期服用不良反应严重(性功能障碍和认知功能障碍)，因此迫切需要研发安全有效的创伤后应激障碍的治疗方法。
[0006] 丙泊酚，临床上常用的一种脂溶性高、短效的静脉麻醉药。由于其起效快、代谢迅速和长期输注无蓄积等优点，现在被广泛运用于临床。丙泊酚的临床麻醉诱导剂量为2-3mg/kg(静脉注射)，麻醉维持剂量为3-12mg/kg/h(静脉泵入)。研究发现丙泊酚除镇静作用外，还具有抗焦虑、抗惊厥、抗炎和脑保护等作用，丙泊酚可能具有潜在的抗PTSD的活性。
[0007] 截止到目前为止，未见丙泊酚用于防治PTSD的相关报道。
发明内容
[0008] 本发明要解决的技术问题是，提供一种小剂量丙泊酚在制备预防、缓解和/或治疗应激性障碍及其相关疾病产品中的应用。
[0009] 所述的小剂量为口服剂量0.3-1.0mg/kg之间。
[0010] 所述的应激性障碍及其相关疾病选自急性应激障碍、创伤后应激障碍、适应障碍。
[0011] 所述的产品包括药品、食品、保健品。
[0012] 本发明在动物模型上首次测试小剂量丙泊酚腹腔注射给药预防和治疗PTSD的药效学评价，发现：小剂量丙泊酚在PTSD模型动物中具有显著的抗焦虑的行为学效应；显著增加时间依赖敏化模型(Time-dependent sensitization，TDS)大鼠海马脑区磷酸化环磷酸腺苷反应元件(phospharylated cAMP response element bingding protein，P-CREB)和BDNF的表达、降低TDS大鼠海马脑区iNOS、nNOS的表达；降低短暂电击模型(foot-shock)小鼠海马、皮层脑区NO的含量。本申请所用丙泊酚剂量为0.3和1.0mg/kg、腹腔注射，折算为静脉注射，该剂量仅相当于临床麻醉剂量的0.5-1.0％，不会影响小鼠、大鼠的自发活动(即没有产生任何的镇静或麻醉作用)。
[0013] 本发明是通过如下技术方案来实现：应用TDS大鼠和foot-shock小鼠制备PTSD的动物模型，模型制备后第2天起开始给药(0.1、0.3、1.0mg/kg，腹腔注射，1次/天)，并于丙泊酚给药第9天进行相应动物的行为学监测和丙泊酚对PTSD防治作用的相关药理学研究。
[0015] 图1-1.丙泊酚在TDS模型大鼠的实验流程图。
[0016] 图1-2.丙泊酚对TDS模型大鼠自发活动(站立次数)的影响。
[0017] 图1-3.丙泊酚对TDS模型大鼠自发活动(跨格数)的影响。
[0018] 图1-4.丙泊酚对TDS模型大鼠僵住行为的影响。
[0019] 图1-5.丙泊酚对TDS模型大鼠高架十字迷宫行为(进入开臂次数)的影响。
[0020] 图1-6.丙泊酚对TDS模型大鼠高架十字迷宫行为(开臂滞留时间)的影响。
[0021] 图1-7.丙泊酚对TDS模型大鼠Morris水迷宫的影响。
[0022] 图1-8.丙泊酚对TDS大鼠海马区iNOS表达的影响。
[0023] 图1-9.丙泊酚对TDS大鼠海马区nNOS表达的影响。
[0024] 图1-10.丙泊酚对TDS大鼠海马区p-CREB表达的影响。
[0025] 图1-11.丙泊酚对TDS大鼠海马区BDNF表达的影响。
[0026] 图2-1.丙泊酚在短暂电击模型小鼠的实验流程图。
[0027] 图2-2.丙泊酚对短暂电击模型小鼠自发活动(站立次数)的影响。
[0028] 图2-3.丙泊酚对短暂电击模型小鼠自发活动(跨格数)的影响。
[0029] 图2-4.丙泊酚对短暂电击模型小鼠第15天僵住时间的影响。
[0030] 图2-5.丙泊酚对短暂电击模型小鼠高架十字迷宫行为(进入开臂次数)的影响。
[0031] 图2-6.丙泊酚对短暂电击模型小鼠高架十字迷宫行为(开臂滞留时间)的影响。
[0032] 图2-7.丙泊酚对短暂电击模型小鼠爬梯实验(爬梯数)的影响。
[0033] 图2-8.丙泊酚对短暂电击模型小鼠爬梯实验(站立次数)的影响。
[0034] 图2-9.丙泊酚对短暂电击模型小鼠皮层脑区表达NO的影响。
[0035] 图2-10.丙泊酚对短暂电击模型小鼠海马表达NO的影响。
[0036] 图3.丙泊酚对胶质瘤细胞表达NO的影响。
具体实施方式
[0037] 本发明公开了小剂量丙泊酚在制备预防或治疗创伤后应激性障碍产品中的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，通过适当改进而实现该发明。特别需要指出的是，所有类似的替换或改动对本领域技术人员来讲是显而易见的，本发明的方法及其应用已经通过较佳的实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0038] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。
[0039] 实施例一：丙泊酚在TDS模型大鼠中的作用
[0040] 一、主要方法
[0041] 1.实验装置：
[0042] 电刺激幽闭箱(Med公司，型号：MED-VFC-NIR-M)
[0043] 自发活动箱
[0044] 高架十字迷宫
[0045] 水迷宫测试箱
[0046] 小鼠爬梯
[0047] Victor3多功能酶标仪(美国Perkin Elmer公司；型号：2104)
[0048] 电子分析天平(德国Sartrious公司)
[0051] 离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；型号：TDZ4-WS)
[0052] 倒置显微镜(重庆光学仪器厂；型号：S2-D2)
[0053] 恒温振荡器(太仓市实验设备厂；型号：THZ-C)
[0055] 手提式蒸汽灭菌器(合肥华泰医疗设备有限公司；型号：YX-2800)
[0056] Mill-Q超纯水系统(美国Millipore公司；型号：Mill-Q)
[0059] 超声细胞和组织破碎仪(美国Sonic公司；型号：VCX-130)
[0060] 冷冻型台式大容量高速离心机(德国EPPENDORF公司；型号：5810)
[0061] 蛋白电泳装置(美国Bio-Rad公司)
[0062] 水平摇床(北京市六一仪器厂；型号：WD-9405)
[0063] 垂直板电泳/电转仪(北京六一仪器厂；型号：DYY-7C)
[0064] 多功能酶标仪(美国PerkinElmer公司)
[0065] 2.药品和试剂
[0066] 2.1药品
[0067] 丙泊酚：购自北京费森尤斯卡比医药有限公司，批号：16EL201，规格：20ml、0.2g。盐酸舍曲林片：辉瑞制药有限公司，批号：国药准字H1098014，规格：50mg。
[0068] 2.2试剂
[0070] Western及IP细胞裂解液(碧云天生物科技有限公司；编号：P0013)
[0071] 丙泊酚(北京费森尤斯卡比医药有限公司；批号：16EL201；规格：20ml 0.2g)[0072] S-亚硝基乙酰青霉胺(SNAP；美国Sigma公司；货号：N3398)
[0073] 2.7-二氯氢化荧光素(DCFH-DA；美国Sigma公司；货号：D6883)
[0074] DMEM培养基(美国Gibco公司)
[0075] 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH试剂盒；碧云天生物技术研究所；货号：C0017
[0076] 胎牛血清(美国Gibco公司；货号：10099-141)
[0077] 胰蛋白酶(美国Sigma公司)
[0078] C6细胞(胶质瘤细胞)购自中国医学科学院基础研究所
[0079] Anti-iNos(美国abcam公司；货号：ab3523)
[0080] Anti-nNos(美国abcam公司；货号：ab16650)
[0081] Anti-CREB(美国Millipore公司；货号：06863)
[0082] Phospho-CREB(美国Cell Signaling公司；货号：9198s)
[0083] Anti-BDNF(美国abcam公司；货号：ab6201)
[0084] Anti-beta Actin(北京中杉金桥；货号：TA-09)
[0085] 辣根酶标记羊抗兔IgG(北京中衫金桥；货号：ZB-2301)
[0086] 辣根酶标记羊抗小鼠IgG(北京中衫金桥；货号：ZB-2305)
[0087] Immobilon Western(美国Millipore公司；货号：P36599)
[0088] 蛋白定量试剂盒(美国Thermo scientific；货号：23227)
[0089] 分子量预染蛋白Marker(美国Thermo scientific；货号：26616)
[0090] RIPA裂解缓冲液(普利莱基因技术有限公司；货号：C1053)
[0091] 3.实验动物
[0092] TDS模型：Wistar大鼠，雄性，SPF级，体重180-200g，60只，购自北京斯贝福实验动物科技有限公司，许可证号：SCXK(京)2011-0004。实验动物均分笼饲养于军事医学科学院动物中心，06：00-18：00光照，自由进食、水，温度18-24℃，湿度50±10％，动物适应饲养7天。
[0093] 4.实验分组和给药
[0094] 实验动物随机分成5组，每组12只，分为空白对照组(con)，模型对照组(ver)，模型+舍曲林(Ser，15mg/kg，灌胃，i.g.)，模型+丙泊酚(0.1、0.3、1.0mg/kg，腹腔注射，i.p.)，模型制备后第2天起开始给药，给药体积为0.2ml/100g，1次/天。丙泊酚：购自北京费森尤斯卡比医药有限公司，批号：16EL201，规格：20ml 0.2g。盐酸舍曲林片：辉瑞制药有限公司，批号：国药准字H1098014，规格：50mg。
[0095] 5.实验流程见图1-1。
[0096] 6.动物行为学表现及生化指标测定
[0097] (1)行为学表现包括：自发活动实验，僵住时间的测试(freezing time test)，高架十字迷宫实验(the elevated plus-maze test，EPM)。
[0098] (2)生化指标测定包括：TDS模型大鼠海马脑区NOS表达测定，TDS模型大鼠海马脑区iNOS表达测定。
[0099] 二、主要结果
[0100] 1.给药第9天进行自发活动测试，与对照组比较，模型组，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚治疗组的站立次数(实验结果见图1-2)和跨格数(实验结果见图1-3)均无显著性的差异：显示各处理因素无中枢兴奋或抑制作用，不影响后续的行为学分析。
[0101] 2.给药第11天进行僵住时间的测试，与模型组比较，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚(0.3和1.0mg/kg)治疗组显著缩短TDS大鼠的僵住时间(实验结果见图1-4，***表示与空白对照组比较统计学P值＜0.001，###表示与模型组比较统计学P值＜0.001)，表明丙泊酚对TDS大鼠的焦虑行为有治疗作用。
[0102] 3.给药第14天进行高架十字迷宫的测试，与模型组比较，舍曲(15mg/kg)和丙泊酚(0.3和1.0mg/kg)治疗组显著增加TDS大鼠进入开臂的次数(实验结果见图1-5，*表示与空白对照组比较统计学P值＜0.05，#表示与模型组比较统计学P值＜0.05，###表示与模型组比较统计学P值＜0.001)和在开臂滞留时间的百分比(实验结果见图1-6，*表示与空白对照组比较统计学P值＜0.05，#表示与模型组比较统计学P值＜0.05，###表示与模型组比较统计学P值＜0.001)，表明丙泊酚对TDS大鼠的焦虑行为有治疗作用。
[0103] 4.给药第15天Morris水迷宫测试，与对照组比较，模型组，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚治疗组大鼠的逃避潜伏期无显著性的差异，表明TDS、舍曲林和丙泊酚对大鼠的学习记忆均无显著显著影响，实验结果检图1-7。
[0104] 5.蛋白免疫印迹结果显示丙泊酚显著降低TDS大鼠海马脑区iNOS、nNOS的表达。与对照组比较，TDS大鼠海马脑区iNOS(实验结果见图1-8，*表示与空白对照组比较统计学P值＜0.05)和nNOS(实验结果见图1-9，*表示与空白对照组比较统计学P值＜0.05)的表达显著增加；与模型组比较，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚(0.1、0.3和1.0mg/kg)显著降低海马脑区iNOS(实验结果见图1-8，#表示与模型组比较统计学P值＜0.05)和nNOS的表达(实验结果见图1-9，#表示与模型组比较统计学P值＜0.05)，表明丙泊酚具有抑制TDS大鼠海马脑区iNOS、nNOS的表达的作用，从而调控NO信号通路发挥保护作用。
[0105] 6.TDS大鼠海马脑区行蛋白免疫印迹实验测定P-CREB和BDNF的表达，与对照组比较，TDS大鼠海马脑区P-CREB(实验结果见图1-10，*表示与空白对照组比较统计学P值＜0.05)和BDNF(实验结果见图1-11，*表示与空白对照组比较统计学P值＜0.05)的表达显著降低；与模型组比较，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚(0.1、1.0mg/kg)显著增加海马脑区P-CREB(实验结果见图1-10，#表示与模型组比较统计学P值＜0.05，##表示与模型组比较统计学P值＜0.01)和BDNF(实验结果见图1-11，#表示与模型组比较统计学P值＜0.05，##表示与模型组比较统计学P值＜0.01)的表达，表明丙泊酚通过对在神经元突触的可塑性调节中发挥着重要作用的脑源性神经营养因子(BDNF)发挥作用，从而减轻应激所致的海马神经元的再生障碍。实施例二：丙泊酚对foot-shock模型中的作用
[0106] 一、主要方法
[0107] 1.实验装置
[0108] 电刺激幽闭箱(Med公司，型号：MED-VFC-NIR-M)
[0109] 自发活动箱
[0110] 高架十字迷宫
[0111] 水迷宫测试箱
[0112] 小鼠爬梯
[0113] 2.药品和试剂
[0114] 2.1药品
[0115] 丙泊酚：购自北京费森尤斯卡比医药有限公司，批号：16EL201，规格：20ml 0.2g盐酸舍曲林片：辉瑞制药有限公司，批号：国药准字H1098014，规格：50mg
[0116] 2.2分子生物学药品和试剂
[0117] 一氧化氮检测试剂盒(碧云天生物科技有限公司；编号：S0021)
[0118] Western及IP细胞裂解液(碧云天生物科技有限公司；编号：P0013)
[0119] 丙泊酚(北京费森尤斯卡比医药有限公司；批号：16EL201；规格：20ml 0.2g)[0120] S-亚硝基乙酰青霉胺(SNAP；美国Sigma公司；货号：N3398)
[0121] 2.7-二氯氢化荧光素(DCFH-DA；美国Sigma公司；货号：D6883)
[0122] DMEM培养基(美国Gibco公司)
[0123] 乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH试剂盒；碧云天生物技术研究所；货号：C0017
[0124] 胎牛血清(美国Gibco公司；货号：10099-141)
[0125] 胰蛋白酶(美国Sigma公司)
[0126] C6细胞(胶质瘤细胞)购自中国医学科学院基础研究所
[0127] Anti-iNos(美国abcam公司；货号：ab3523)
[0128] Anti-nNos(美国abcam公司；货号：ab16650)
[0129] Anti-CREB(美国Millipore公司；货号：06863)
[0130] Phospho-CREB(美国Cell Signaling公司；货号：9198s)
[0131] Anti-BDNF(美国abcam公司；货号：ab6201)
[0132] Anti-beta Actin(北京中杉金桥；货号：TA-09)
[0133] 辣根酶标记羊抗兔IgG(北京中衫金桥；货号：ZB-2301)
[0134] 辣根酶标记羊抗小鼠IgG(北京中衫金桥；货号：ZB-2305)
[0135] Immobiion Western(美国Millipore公司：货号：P36599)
[0136] 蛋白定量试剂盒(美国Thermo scientific；货号：23227)
[0137] 分子量预染蛋白Marker(美国Thermo scientific；货号：26616)
[0138] RIPA裂解缓冲液(普利莱基因技术有限公司；货号：C1053)
[0139] 3.实验动物
[0140] ICR小鼠，雄性，SPF级，体重18-20g，60只，购自北京斯贝福实验动物科技有限公司，许可证号：SCXK(京)2011-0004。实验动物均分笼饲养于军事医学科学院动物中心，06：00-18：00光照，自由进食、水，温度18-24℃，湿度50±10％，动物适应饲养7天。
[0141] 4.实验分组和给药
[0142] 根据体重随机分为6组，每组10只，分为空白对照组(con)，模型对照组(ver)，模型+舍曲林(ser，15mg/kg，灌胃，i.g.)，模型+丙泊酚(0.1、0.3、1.0mg/kg，腹腔注射，i.p.)，第一天电击5min之后开始给药，给药体积为0.02ml/g，1次/天。丙泊酚：购自北京费森尤斯卡比医药有限公司，批号：16EL201，规格：20ml 0.2g。盐酸舍曲林片：辉瑞制药有限公司，批号：国药准字H1098014，规格：50mg。
[0143] 5.实验流程见图2-1。
[0144] 6.foot-shock模型小鼠行为学表现及生化指标测定。
[0145] (1)行为学表现包括：自发活动实验，僵住时间的测试(freezing time test)，高架十字迷宫实验(the elevated plus-maze test，EPM)，小鼠的爬梯实验(the staircase test)。
[0146] (2)生化指标测定包括：foot-shock模型小鼠海马和皮层脑区NO表达测定。
[0147] 二、主要结果
[0148] 1.给药第10天进行自发活动测试，与对照组比较，模型组，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚治疗组的站立次数(实验结果见图2-2)和跨格数(实验结果见图2-3)无显著性的差异，表明丙泊酚对foot-shock小鼠自发活动的无影响。
[0149] 2.给药第15天进行僵住时间的测试，与对照组比较，foot-shock小鼠的僵住时间显著增加(实验结果见图2-4，**表示与空白对照组比较统计学P值＜0.01＝表明foot-shock模型中，小鼠产生显著的恐惧，僵住时间的增加；与模型组比较，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚(0.3和1.0mg/kg)显著缩短foot-shock小鼠的僵住时间(实验结果见图2-4，#表示与模型组比较统计学P值＜0.05，##表示与模型组比较统计学P值＜0.01，###表示与模型组比较统计学P值＜0.001)，表明丙泊酚可以显著逆转上述小鼠的行为，表现为显著减轻动物的空间行为。
[0150] 3.给药第13天进行高架十字迷宫的实验，与模型组比较，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚(0.3和1.0mg/kg)显著增加foot-shock小鼠进入开臂的次数(实验结果见图2-5，**表示与空白对照组比较统计学P值＜0.01，##表示与模型组比较统计学P值＜0.01，###表示与模型组比较统计学P值＜0.001)和在开臂滞留时间的百分比(实验结果见图2-6，**表示与空白对照组比较统计学P值＜0.01，##表示与模型组比较统计学P值＜0.01)，表明丙泊酚现在境地了应激动物处于新异环境下时焦虑程度。
[0151] 4.给药第14天进行爬梯实验，各组之间的爬梯数(实验结果见图2-7)均无显著性的差异；与对照组比较，与模型组比较，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚(0.3和1.0mg/kg)显著降低foot-shock小鼠的站立次数(实验结果见图2-8，**表示与空白对照组比较统计学P值＜0.01，##表示与模型组比较统计学P值＜0.01，###表示与模型组比较统计学P值＜0.001)；
表明丙泊酚可以显著减轻了动物的恐惧行为。
表明丙泊酚可以显著减轻了动物的恐惧行为。
[0152] 5.foot-shock小鼠皮层脑区行蛋白免疫印迹实验测定NO含量，与模型组比较，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚(0.3和1.0mg/kg)显著降低foot-shock小鼠皮层脑区中NO的含量(实验结果见图2-9，*表示与空白对照组比较统计学P值＜0.05，#表示与模型组比较统计学P值＜0.05)，表明丙泊酚具有抑制foot-shock小鼠皮层脑区NO的表达水平具有调节作用，从而通过降低NO的过度表达发挥保护作用。
[0153] 6.foot-shock小鼠海马脑区行蛋白免疫印迹实验测定NO含量，与模型组比较，舍曲林(15mg/kg)和丙泊酚(0.1、0.3和1.0mg/kg)显著降低foot-shock小鼠海马脑区中NO的含量(实验结果见图2-7，*表示与空白对照组比较统计学P值＜0.05，#表示与模型组比较统计学P值＜0.05)，表明丙泊酚具有抑制foot-shock小鼠皮层脑区NO的表达水平具有调节作用，从而通过降低NO的过度表达发挥保护作用。
[0154] 实施例三、丙泊酚对胶质瘤细胞NO含量的影响
[0155] (一)主要方法
[0156] 1、药物的配置
[0157] (1)丙泊酚：丙泊酚：10mg/ml，即0.01mg/ul，取4ul丙泊酚稀释到200ul为0.0002mg/ul(A)(以下是一个孔的剂量)。
[0158] (2)S-亚硝基乙酰青霉胺(SNAP)：SNAP25mg加入1.25ml的二甲基亚砜助溶再加入1.25ml水(A0.01mg/ul)。
[0159] (3)2.7-二氯氢化荧光素(DCFH-DA)：配成浓度0.1mmol/l的浓度，每个孔中的总体积为101ul，根据公式mmol/L＝mg/M可以得出每个孔中的DCFH-DA的剂量为0.0049216mg，如果这些剂量是取1ul得来，则DCFH-DA的浓度应为4.9216mg/ml，因此称取5mg的DCFH-DA溶于甲醇中。
[0160] 2.丙泊酚对胶质瘤细胞NO生成的测定
[0161] 细胞种板后，第二天换培养基(分别含有2.0、6.0、8.0、20ug/ml的丙泊酚)，放入培养箱中培养10-15min中换培养基(分别含有1.0mmol/LSNAP；1.0mmol/LSNAP+2.0ug/ml丙泊酚；1.0mmol/LSNAP+6.0ug/ml丙泊酚；1.0mmol/LSNAP+8.0ug/ml丙泊酚+1.0mmol/LSNAP；20ug/ml丙泊酚)100ul培养。18个小时之后，吸去96孔板中培养基，各孔再中加入含
100ummol/L 2.7-二氯氢化荧光素(DCFH-DA)的培养基101ul，放入培养箱中培养30min。然后吸去个孔中的培养基，用不含有药品的培养基清洗个孔2-3次之后，个孔中加入200ul的培养基后进行细胞的分光光度计照射。
100ummol/L 2.7-二氯氢化荧光素(DCFH-DA)的培养基101ul，放入培养箱中培养30min。然后吸去个孔中的培养基，用不含有药品的培养基清洗个孔2-3次之后，个孔中加入200ul的培养基后进行细胞的分光光度计照射。
[0162] (二)主要结果
[0163] 与对照组比较，SNAP(1.0mM)显著增加胶质瘤细胞生成NO的量，丙泊酚(6.0和8.0ug/ml)显著降低SNAP模型胶质瘤细胞生成NO的量，表明丙泊酚可以抑制胶质瘤细胞NO的释放(实验结果见图3，***表示与空白对照组比较统计学P值＜0.001，#表示与SNAP组比较统计学P值＜0.05，##表示与SNAP组比较统计学P值＜0.01)。
[0164] 综上所述，小剂量丙泊酚剂量为0.3-1.0mg/kg、腹腔注射，折算为静脉注射，该剂量仅相当于临床麻醉剂量的0.5-1.0％，不会影响小鼠、大鼠的自发活动(即没有产生任何的镇静或麻醉作用)。此种剂量丙泊酚具有减轻PTSD模型动物恐惧、焦虑、学习记忆损伤的作用，并可以减少强烈应激导致的iNOS、eNOS的表达，增加可塑性调节中发挥着重要作用的脑源性神经营养因子(BDNF)的表达，显著降低模型胶质瘤细胞NO的释放等特点。小剂量丙泊酚可用于预防、缓解和/或治疗应激障碍相关疾病如急性应激障碍、创伤后应激障碍等疾病。
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