食欲素(食欲素A或OX-A以及食欲素B或OX-B)是由两个 研究组在1998年发现的新型神经肽，食欲素A是一种33氨基酸肽， 而食欲素B是一种28氨基酸肽(Sakurai T.等人.，Cell，1998，92， 573-585)。食欲素由外侧下丘脑的分离神经元生成，并结合至G-蛋 白-偶合的受体(OX1和OX2受体)。食欲素-1受体(OX1)对OX-A 具有选择性，而食欲素-2受体(OX2)能够结合OX-A和OX-B。据发 现食欲素能刺激大鼠体内的食物消耗，从而提示了这些肽作为调节 取食行为的中枢反馈机制的介质的生理作用(Sakurai T.等人.， Cell，1998，92，573-585)。另一方面，另有观察发现饮食素调节睡 眠和觉醒的状态，从而为嗜睡症以及失眠和其他睡眠障碍提供了潜 在的新型治疗方法(Chemelli R.M.等人，Cell，1999，98，437-451)。
食欲素受体发现于哺乳动物的脑部，且由文献可知，它在病理 学中具有多种含义。
本发明提供了取代的1，4，5，6，7，8-六氢-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃衍 生物，它是人食欲素OX1和OX2受体的非肽拮抗剂。这些化合物在 例如进食失调，饮水失调，睡眠障碍，或在精神和神经紊乱中的认 知功能障碍的治疗中具有特别的潜在用途。
到目前为止，已知一些低分子量化合物具有特异性拮抗OX1 或OX2，或者同时拮抗两种受体的潜力。在WO01/85693中，万有 制药(Banyu Pharmaceuticals)主张了对N-酰基四氢异喹啉衍生物 的权利。WO02/051838中披露了其它食欲素受体拮抗剂，例如新型 苯并氮杂衍生物。
此外，有报导(Chimia，2003，57，5，270-275)披露了液相化学在 以1，2，3，4-四氢异喹啉衍生物作为潜在食欲素受体拮抗剂的最佳化 合物设计中的用途。

本发明的第一方面为通式II的化合物，其手性如下所示，且

其中
Y代表-CH2-CH2-；
R1代表苯基基团，其中该苯基基团可被单、双或三取代，其中 该取代基独立地选自(C1-4)烷基，卤素和三氟甲基；
R2代表(C1-4)烷基；
R3代表(C1-4)烷基；
R4代表苯基基团，其中该苯基基团未被取代或独立地被单、双 或三取代，其中该取代基独立地选自(C1-4)烷基和卤素；
R5代表(C1-4)烷基。
本发明的另一部分是式(II)的化合物及其药学可接受的盐。
在本说明书中，术语“卤素”指氟、氯或溴，并优选氟或氯。在 本发明进一步的优选实施方式中，术语“卤素”指氟。
单独或结合使用的术语“(C1-4)烷基”指具有1至4个碳原子的直 链或支链烷基基团。(C1-4)烷基基团的范例为甲基，乙基，丙基，异 丙基，正丁基，异丁基，仲丁基或叔丁基。
对于取代基R2或R5，术语“(C1-4)烷基”优选指甲基。
对于取代基R3，术语“(C1-4)烷基”优选指甲基，乙基或丁基，更 优选指乙基。
本发明中所述的苯基基团可被独立地单、双或三取代，其中该 取代基独立地选自(C1-4)烷基，卤素和三氟甲基。其范例为苯基，3，5- 二氟-4-三氟甲基-苯基，二甲基-苯基(例如2，3-二甲基-苯基，2，4- 二甲基-苯基，3，4-二甲基-苯基)，3，5-二氟-4-甲基-苯基以及2-氟-4- 三氟甲基-苯基。
R1优选代表苯基基团，其独立地被单、双或三取代(优选双或 三取代)，其中该取代基独立地选自(C1-4)烷基，卤素和三氟甲基。 优选地，该取代基独立地选自甲基，乙基，异丙基，三氟甲基，氟 和氯。更优选地，该取代基独立地选自甲基，乙基，三氟甲基，氟 和氯。其范例为3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基，二甲基-苯基(例如2，3- 二甲基-苯基，2，4-二甲基-苯基，3，4-二甲基-苯基)，3，5-二氟-4-甲基 -苯基和2-氟-4-三氟甲基-苯基。
R4代表苯基基团，其未被取代或独立地被单、双或三取代，其 中该取代基独立地选自(C1-4)烷基和卤素。对于取代基R4，术语“酰 基”优选地指未取代的苯基。
术语“药学可接受的盐”指无毒性、无机或有机酸和/或碱加成 盐。参见＂Salt selection for basic drugs＂，Int.J.Pharm.(1986)，33， 201-217。
本发明进一步优选的实施方式为式II的化合物，其中
Y代表-CH2-CH2-；
R1代表苯基基团，其中该苯基基团可被单、双或三取代，其中 该取代基独立地选自甲基，乙基，氟，氯和三氟甲基；
R2代表(C1-4)烷基；
R3代表(C1-4)烷基；
R4代表苯基基团，其中该苯基基团未被取代或独立地被单、双 或三取代，其中该取代基独立地选自(C1-4)烷基和卤素；
R5代表(C1-4)烷基。
本发明进一步优选的实施方式为式II的化合物，其中
Y代表-CH2-CH2-；
R1代表苯基基团，其中该苯基基团可被单、双或三取代，其中 该取代基独立地选自甲基，乙基，氟，氯和三氟甲基；
R2代表甲基；
R3代表乙基；
R4代表苯基基团；
R5代表甲基。
式II的化合物可包含一个或多个立构(stereogenic)或不对称 (asymmetric)中心，例如一个或多个不对称碳原子。因此式II的化 合物可作为立体异构体的混合物存在，或者优选地作为纯立体异构 体存在。立体异构体的混合物可通过本领域技术人员已知的方法分 离。
上文特别提及的该化合物包含两个手性中心。
在优选的实施方式中，通式II的化合物显示了如下手性：(R)-2’ 和(S)-4或(R)-2’和(R)-4。
更优选的立体异构体显示了如下所示的手性：
        式II
特别优选的化合物列举如下：
(R)-2’-{(S)-4-[2-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺；
(R)-2’-{(S)-4-[2-(3，4-二甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺；
(R)-2’-{1-乙基-(S)-4-[2-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺；
(R)-2’-{(S)-4-[2-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3- 甲基-4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基- 乙酰胺；
式II的化合物及其药学可接受的盐可用作药剂，例如，作为可 进行肠内或肠胃外施用的药物组合物的形式。
该种通式II的化合物可用于治疗和/或预防此处所述的疾病。
在一个实施方式中，本发明涉及治疗和/或预防此处所述的疾病 的方法，所述方法包括向对象施用药学活性量的通式II的化合物。
式(II)的化合物可用于制备药剂，并适用于预防或治疗选自以下 组合的疾病：心境恶劣障碍，包括抑郁症和循环性精神病，情感性 神经症，各类躁狂抑郁症，精神错乱，精神障碍，精神分裂症，紧 张性精神分裂症，幻觉妄想，调整紊乱和各种病态人格群；分裂情 感性疾患；焦虑障碍包括广泛性焦虑症，强迫症，创伤后应激障碍， 恐慌发作，各类恐怖性焦虑和回避；分离焦虑；所有的精神活性物 质使用，滥用，寻求和恢复；各类心理或生理成瘾，分离性障碍(包 括多重人格综合症和心因性遗忘)；性和生殖功能障碍；心理障碍 和成瘾；耐受麻醉药品或麻醉品戒断；增加的麻醉风险，麻醉剂响 应；下丘脑-肾上腺功能紊乱；不安生物和昼夜节律；与包括神经性 疼痛和不安腿综合症的神经系统疾病等疾病有关的睡眠障碍；睡眠 呼吸暂停；嗜睡症；慢性疲劳综合症；与精神病有关的失眠；各类 特发性失眠和深眠状态；睡眠—觉醒节律障碍，包括时差；所有健 康人群和精神和神经紊乱中的痴呆和认知功能障碍；老化引起心理 功能障碍；各类失忆症；严重的智力迟钝；运动障碍和肌肉疾病； 肌肉痉挛，震颤，运动失调；自发和药物引起的运动障碍；神经退 行性疾病，包括Huntington，Creutzfeld-Jacob，Alzheimer症和Tourette 综合症；肌萎缩侧索硬化症，Parkinson病；Cushing综合症；外伤 性病变；脊髓损伤；头部外伤；围产期缺氧；听力损失；耳鸣；脱 髓鞘疾病；脊髓和颅神经疾病；眼损害；视网膜病变；癫痫；癫痫 发作；失神发作，复杂部分性和全身发作；Lennox-Gastaut综合症； 偏头痛和头痛；疼痛障碍；麻醉和镇痛；增强或夸大对疼痛的敏感 性，如过敏，灼痛，并痛；急性疼痛；烧伤疼痛；非典型面部疼痛； 神经性疼痛；背部疼痛；复杂性区域疼痛综合症I和II；关节炎 疼痛；运动损伤疼痛；牙齿疼痛；疼痛有关的感染如艾滋病毒；化 疗后疼痛；卒中后疼痛；手术后疼痛；神经痛，骨关节炎；与例如 肠易激综合症等内脏痛相关的症状；饮食失调；糖尿病；毒性和代 谢异常疾病，包括脑缺氧，治疗糖尿病周围神经病变和酗酒；食欲， 口味，进食，或饮水障碍；躯体形式障碍，包括疑病症；呕吐/恶心， 呕吐，胃的运动障碍；胃溃疡；Kallman综合症(嗅觉丧失症)； 糖耐量受损；肠动力性运动障碍；下丘脑疾病；垂体疾病；高热症 状，发热，惊厥，特发性增长不足；侏儒症；巨人症，肢端肥大症； 嗜碱性粒细胞腺瘤；催乳素瘤；高泌乳素血症，脑肿瘤，腺瘤；良 性前列腺增生症，前列腺癌，子宫内膜，乳腺癌，结肠癌；各类睾 丸功能障碍，生育控制；生殖激素异常；潮热；下丘脑性腺机能减 退，心功能或闭经；膀胱尿失禁哮喘；过敏；各类皮炎，痤疮和囊 肿，皮脂腺功能紊乱；心血管疾病，心脏病和肺病的疾病，急性和 充血性心力衰竭；低血压；高血压；血脂障碍，高脂血症，胰岛素 抵抗；尿潴留；骨质疏松症；心绞痛；心肌梗死；心律不齐，冠状 动脉疾病，左心室肥大；缺血性或出血性中风；各类脑血管疾病， 包括蛛网膜下腔出血，缺血性和出血性中风和血管性痴呆；慢性肾 功能衰竭和其他肾脏疾病，痛风，肾脏肿瘤；尿失禁；以及其它与 一般食欲素系统功能紊乱有关的疾病。
式(II)的化合物可用于制备药剂，并适用于预防或治疗选自如下 组合的疾病：各类睡眠障碍，压力有关的综合症，精神活性物质的 使用和滥用，健康人群及精神和神经系统紊乱中的认知功能障碍， 进食或饮水失调的疾病或紊乱。进食失调可定义为包括代谢障碍； 错调食欲控制；强迫性肥胖；催吐贪食症(emeto-bulimia)或神经性 厌食症。病理改变食物摄入量可能造成的干扰的食欲(对食物的吸 引或厌恶)；改变能量平衡(摄入与消耗)；对食物品质的扰乱的感 知(高脂肪或碳水化合物，高适口性)；扰乱的食物可利用性(无 限制的节食或缺失)或破坏水平衡。饮水失调包括精神紊乱中的烦 渴以及所有其他类型的液体摄入量过多。睡眠障碍包括各类异态睡 眠，失眠症，嗜睡症以及其它过度嗜睡障碍，睡眠相关的张力失常； 不宁腿综合征；睡眠型呼吸暂停；时差综合征；倒班工作综合症， 睡眠时相后移或提前综合征或者与精神紊乱相关的失眠症。失眠症 定义为包括与老化有关的睡眠障碍；慢性失眠的间歇治疗；情景短暂 失眠(新的环境，噪音)或因压力、悲伤、疼痛或疾病而短期失眠。 失眠还包括压力有关的综合症，包括创伤后应激障碍以及其他类型 和亚型的焦虑症，如广泛性焦虑症，强制性障碍，惊恐发作和各类 恐惧焦虑和回避；精神活性物质使用，滥用，寻求和恢复被定义为各 类心理或生理成瘾及其相关耐受性和依赖性部分。认知功能障碍包 括正常，健康，青年，成年或老龄人群中短暂或长期的发生的，同 时还在精神，神经系统，心血管和免疫系统疾病中短暂或长期发生 的各类注意力，学习和记忆功能的缺陷。
在本发明进一步优选的实施方式中，式(II)的化合物可用于制备 药剂，并适用于预防或治疗选自以下组合的疾病：睡眠障碍，包括 各类异态睡眠，失眠症，嗜睡症以及其它过度嗜睡障碍，睡眠相关 的张力失常；不宁腿综合症；睡眠型呼吸暂停；时差综合症；倒班 工作综合症，睡眠时相后移或提前综合症或者与精神紊乱相关的失 眠症。
在本发明的另一优选的实施方式中，通式(II)的化合物可用于制 备药剂，并适用于预防或治疗选自以下组合的疾病：认知功能障碍， 包括正常，健康，青年，成年或老龄人群中短暂或长期的发生的， 同时还在精神，神经系统，心血管和免疫系统疾病中短暂或长期发 生的各类注意力，学习和记忆功能的缺陷。
在本发明的另一优选的实施方式中，通式(I)的化合物可用于制备药 剂，并适用于预防或治疗选自以下组合的疾病：进食失调，包括代 谢障碍；错调食欲控制；强迫性肥胖；催吐贪食症(emeto-bulimia) 或神经性厌食症。
在本发明的另一优选的实施方式中，通式(II)的化合物可用于制 备药剂，并适用于预防或治疗选自以下组合的疾病：精神活性物质 的使用和滥用，包括各类心理或生理成瘾及其相关耐受性和依赖性 部分。
该药物组合物可以本领域任意技术人员熟知的方式(例如参见 Mark Gibson，Editor，Pharmaceutical Preformulation and Formulation， IHS Health Group，Englewood，CO，USA，2001；Remington，The Science and Practice of Pharmacy，20th Edition，Philadelphia College of Pharmacy and Science；或者Remington，The Science and Practice of Pharmacy，21st Edition(2005)，Part 5，“Pharmaceutical Manufacturing”[由Lippincott Williams & Wilkins出版])进行生产， 其包括将所述的式(II)的化合物及其药学可接受的盐，可选地联合其 它有治疗价值的物质，连同适用的，无毒的，惰性的，治疗相容性 固体或液体载体材料以及根据需要选用的常用药物佐剂制成盖仑 制剂形式。
通式II的化合物的一般制备方法：

R1，R2，R3，R4，R5和Y如上文通式II所定义，X代表OH或Cl，Z代表Br或OTs； 中间体H的示范性制备方法可参见WO05/118548。
以酰化的Meldrum酸衍生物A与单取代的肼B反应，通过多 步顺序(参见路线1和实验部分)以高度区域选择性的方式得到 3-(2，5-二取代的-2H-吡唑-3-基)-丙胺C。然后通过羧酸衍生物D酰 化伯胺C以得到非环酰胺E，后者通过Bischler-Napieralski反应被 转化为七元环状亚胺F。随后还原亚胺得到仲胺前体G，最后以亲 电试剂H进行N-烷基化以得到最终的食欲素受体拮抗剂II。

R1，R2，R3，R4，R5和Y如上文通式II所定义，Z代表Br或OTs；一般方 法还可参见WO00/168609，WO02/051838和WO04/085403。
在略微不同的路线中，该仲胺G可被酯衍生物J(而非酰胺衍 生物H)N-烷基化得到中间体K，K可通过与胺衍生物L反应直接 转化为最终化合物II，或者可先被水解得到相应的羧酸M，然后与 胺L反应得到最终化合物II。
总体而言，所有的化学转化均可参照文献或下文描述的步骤以 公知的标准方法进行。
通式II的化合物的制备：

路线1：吡唑前体的合成
3-(2，5-二取代-2H-吡唑-3-基)-丙胺衍生物的制备(路线1)起始 于在三乙胺存在下以双烯酮1酰化Meldrum酸2得到中间体3。在 三乙胺存在下将3的甲醇溶液与适当取代的肼衍生物(例如乙基肼 4)反应导致区域选择性形成吡唑衍生物5。酸性条件(含于甲醇的 p-TsOH)下水解形成甲酯6，以LiAlH4定量还原得到相应的醇衍生 物7。将伯醇7活化为相应的甲磺酸盐，然后在四丁基氰化铵介导 下进行亲核置换得到预期的腈衍生物8。在硼烷介导下还原腈8， 然后以苄氧羰基部分保护所得的伯胺，在快速层析后得到受保护的 化合物9。最后，使用钯碳氢解将氨基官能团脱保护得到预期的伯 胺10。
对于肉桂酸或氢化肉桂酸均未市场化的情况，可采用路线2所 示的途径进行制备。
方法A由苯甲醛衍生物通过Knoevenagel缩合制备氢化肉桂酸衍生物：

通过该顺序制备得到如下的氢化肉桂酸：

方法B由卤代芳烃通过Heck反应制备氢化肉桂酸衍生物：

通过该顺序制备得到如下的氢化肉桂酸：

路线2：氢化肉桂酸衍生物的制备
根据“方法A”，在哌啶存在下于吡啶中苯甲醛衍生物N和丙二 酸之间进行Knoevenagel缩合，酸化后得到肉桂酸衍生物O。在标 准条件(1 atm H2；10％ Pd-C；甲醇中；室温)下催化氢化得到相应的 氢化肉桂酸P。化合物11和12可通过该合成顺序制备得到。
根据“方法B”，以Pd(OAc)2/DABCO作为催化系统在卤代芳烃 Q和丁基丙烯酸酯之间进行Heck偶合，以得到预期的肉桂酸衍生 物R的丁酯。然后对R进行钯催化氢化，并对该丁酯进行皂化以 得到目标氢化肉桂酸衍生物S。化合物13和14可通过该合成途径 制备得到。
路线3总结了用于最终化合物制备的顺序(以Y＝-CH2CH2- 举例)。例如可在PyBOP存在下以氢化肉桂酸衍生物14酰化3-(2- 乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙胺10得到酰胺衍生物15。在 Bischler-Napieralski反应条件(POCl3，乙腈中；回流)下处理15， 以高产率得到环化亚胺16，后者可通过硼氢化钠还原得到相应的仲 胺17。在70℃下2-丁酮中与甲苯磺酸盐18进行反应(其描述可见 WO 2005/118548)，得到非对映异构体19的等摩尔混合物。最后 HPLC纯化分离纯非对映异构体20[具有(S；R)构型]和21[具有(R；R) 构型]。


路线3：最终化合物的合成(例如，20和21)
下列实施例阐述了本发明，但不限制其范围。所有的温度均以 ℃表示。
缩写(如此处所用)
AcOEt　　　　　　　　　　 　　　乙酸乙酯
aq.                            水性的
BH3.THF                        硼烷-四氢呋喃复合物
Boc                            叔丁氧基羰基
ClCO2Bn                        氯甲酸苄基酯
DABCO                          1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷
DCM                            二氯甲烷
DIPEA                          N-乙基二异丙胺
DMF                            N，N-二甲基甲酰胺
DMSO                           二甲亚砜
EDC                            N-(3-二甲基氨丙基)-N’-乙基碳二亚胺
ELSD                           蒸发光散射检测器
Et                             乙基

h　　小时
HPLC　高压液相色谱
HV　　高真空
K2CO3　碳酸钾
LiAlH4　氢化铝锂
LC-MS　液相色谱-质谱
MeCN　乙腈
MeOH　甲醇
MeSO2Cl　甲烷磺酰氯
min.　分钟
MS　　质谱
n-Bu4NCN　叔丁基氰化铵
NaBH4　硼氢化钠
NaOH　氢氧化钠
NEt3　三乙胺
PBS　磷酸盐缓冲液
Pd(C)　钯碳
Pd(OAc)2　醋酸钯(II)
POCl3　氯氧化磷
p-TsOH　对甲苯磺酸
PyBOP　六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基-三吡咯烷基磷
rt　室温
sat.　饱和的
TEA　三乙胺
TFA　三氟乙酸
THF　四氢呋喃
TLC　薄层层析
tR　保留时间
UV　紫外
Vis　可见
一般方法和实施例：
HPLC条件：
分析：Zorbax 59 SB水相柱，4.6 x 50mm，购自Agilent Technologies。洗脱液：A：乙腈；B：H2O+.04％ TFA。梯度：在 2分钟90％B→5％B。流速：4.5mL/min。检测：UV/Vis+MS。
制备：Waters Xterra RP18(大)，75 x 30mm。洗脱液：A：乙腈；B：H2O +0.05％氢氧化铵(25％aq.)。梯度：在6.5分钟90％B→10％B。
流速：75mL/min。检测：UV+ELSD。
前体和中间体的制备：
5-(1-羟基-3-氧代-亚丁烯)-2，2-二甲基-[1，3]二噁烷-4，6-二酮
将Meldrum酸(50.0g，346.9mmol)溶解于DCM(300ml)，并添 加NEt3(48.3ml；346.9mmol)。将所得的混合物冷却至0℃，然后逐 滴添加双烯酮(31.9ml；416.3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2 小时，再次冷却至0℃，然后缓慢添加1M盐酸水溶液(700ml)。分 层，用无水硫酸镁干燥有机层，过滤，并减压浓缩得到橙色固体状 的产物5-(1-羟基-3-氧代-亚丁烯)-2，2-二甲基-[1，3]二噁烷-4，6-二酮， 该产物在HV下进一步干燥(79.36g；100％)。LC-MS：tR＝0.55min； [M+H]+＝无电离。
5-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-2，2-二甲基-[1，3]二噁烷-4，6-二 酮
将5-(1-羟基-3-氧代-亚丁烯)-2，2-二甲基-[1，3]二噁烷-4，6-二酮 (10.0g；43.8mmol)溶解于无水甲醇(140ml)并冷却至0℃，然后在15 分钟内逐滴加入含于无水甲醇(60ml)的乙基肼草酸酯(7.24g；48.2 mmol)和NEt3(13.4ml，96.4mmol)。添加完成后，将该混合物缓慢 升温至60℃，并搅拌90分钟。将反应混合物减压浓缩至干燥，并 在HV下进一步干燥以得到橙色油状的产物5-(2-乙基-5-甲基-2H- 吡唑-3-基)-2，2-二甲基-[1，3]二噁烷-4，6-二酮(11.05g，定量产率)， 其可不经纯化而直接用于下一步。LC-MS：tR＝0.52min；[M+H]+＝ 无电离。
(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-乙酸甲酯
将5-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-2，2-二甲基-[1，3]二噁烷-4，6- 二酮(11.05g；43.8mmol)溶解于无水甲醇(125ml)，然后添加 p-TsOH x H2O(36.68g；192.85mmol)。将所得反应混合物加热至 60℃，持续75分钟，冷却至0℃，然后在20分钟内逐滴加入三乙胺 (26.85ml，192.9mmol)。减压浓缩所得混合物。将残留物投入DCM (200ml)，并以水洗涤(2 x 75ml)，以无水硫酸镁干燥，过滤，并减 压浓缩。通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH＝30/1)纯化得到黄色 油状的纯产物(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-乙酸甲酯，该产物在 HV下进一步干燥(5.56g；70％)。LC-MS：tR＝0.62min；[M+H]+＝ 183.18g/mol。
2-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-乙醇
向冰冷THF(250ml)添加一份氢化铝锂(2.207g；58.171mmol)。 在0℃下和氮气下继续搅拌所得的灰色悬浮液，并在30分钟内逐滴 添加(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-乙酸甲酯(10.0g；54.878mmol) 的无水THF溶液(80ml)。将所得的混合物在0℃下搅拌1小时。然 后依次用水(2.2ml)、15％ NaOH水溶液(2.2ml)和水(6.6ml)处理该 冰冷反应混合物。再次室温下搅拌(30分钟)后，过滤所得的沉淀， 并以二乙醚洗涤。以硫酸镁干燥所的滤出液，过滤，减压浓缩至干 燥，并在HV下进一步干燥，以得到黄色油状的产物2-(2-乙基-5- 甲基-2H-吡唑-3-基)-乙醇(8.45g；100％)。LC-MS：tR＝0.36min.； [M+H]+＝155.16g/mol.
3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙腈
将甲烷磺酰氯(1.86ml；23.950mmol)的干THF溶液(10ml)逐滴 添加于2-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-乙醇(3.358g，21.775mmol) 和三乙胺(4.1ml；29.390mmol)的冰冷干THF溶液(100ml)。在0℃ 下和氮气下搅拌所得的混合物15分钟。过滤该反应混合物，并以 无水THF(60ml)洗涤该固体。然后在室温下添加一份叔丁基氰化铵 (14.611g；54.440mmol)。将所得的橙色溶液加热至75℃，维持1小 时。将反应混合物冷却至室温，然后顺序添加水(30ml)和二乙醚(100 ml)。分离后，用乙酸乙酯(3 x 100ml)萃取水层。以无水硫酸镁干燥 混合的有机层并，过滤，并减压浓缩。通过快速层析(硅胶； DCM/MeOH＝40/1)纯化得到黄色油状的纯产物3-(2-乙基-5-甲基 -2H-吡唑-3-基)-丙腈，该产物在HV下进一步干燥(3.07g；86％)。 LC-MS：tR＝0.57min.；[M+H]+＝164.39g/mol.
[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙基]-氨基甲酸苄酯
向3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙腈(3.070g；18.809mmol) 的冰冷无水THF溶液(100ml)缓慢添加1N BH3.THF复合物的THF 溶液(75ml；75mmol)。然后将所得的溶液加热至75℃，维持1小时。 冷却至0℃后，小心添加2N HCl水溶液(115ml；230mmol)。然后将 所得的溶液在50℃下搅拌1小时。冷却至0℃后，分批添加固体 K2CO3(20.794g；150.469mmol)，然后逐滴添加氯甲醛苄酯(3.07ml； 20.689mmol)。将所得的混合物在0℃下搅拌1小时，然后在室温下 过夜。然后添加二乙醚(100ml)和水(100ml)，进一步以二乙醚(2 x 100ml)萃取水层。合并有机层并以硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩。 通过快速层析(硅胶；乙酸乙酯/庚烷＝1/1＝>乙酸乙酯)纯化得 到无色油状的纯产物[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙基]-氨基甲 酸苄酯，该产物在HV下进一步干燥(4.21g；74％)。LC-MS：tR＝0.78 min.；[M+H]+＝302.51g/mol.
3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙胺
将[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙基]-氨基甲酸苄酯 (1.400g；4.645mmol)与活性炭上的10％钯(280mg)的混合物置于氮 气下，然后小心添加甲醇(25ml)。将悬浮液置于真空下，然后置于 氢气(1atm)中，并在室温下搅拌该反应混合物1小时。用C盐过滤 后，再次以甲醇洗涤C盐，将所得的滤出液减压浓缩至干燥。进一 步在HV下干燥后，所得的黄色油状的纯产物3-(2-乙基-5-甲基-2H- 吡唑-3-基)-丙胺(0.774g；100％)可不经附加纯化直接用于下一步 骤。LC-MS：tR＝0.21min.(宽峰)；[M+H]+＝168.39g/mol.
3-(3，4-二甲基-苯基)-丙烯酸
将3，4-二甲基苯甲醛(15.000g；111.793mmol)和丙二酸(22.103 g；212.410mmol)在吡啶(85ml)中的悬浮液在氮气下加热至50℃。然 后(在5分钟内)逐滴添加哌啶(8.5ml；86.079mmol)，并将所得的 悬浮液加热至75℃，维持2小时。将反应混合物冷却至0℃，并注 入冰冷浓盐酸(12N；96ml)水溶液(1200ml)。过滤沉淀的无色产物， 并以水洗涤(3 x 100ml)。将剩余的水减压蒸发，然后在HV下得到 无色固体状的产物3-(3，4-二甲基-苯基)-丙烯酸(19.23g；98％)。 LC-MS：tR＝0.88min；[M+H]+＝无电离。
3-(3，4-二甲基-苯基)-丙酸
将3-(3，4-二甲基-苯基)-丙烯酸(19.269g；109.355mmol)与活 性炭上的10％钯(1.920g)的混合物置于氮气下，然后小心添加甲醇 (300ml)。将所得的悬浮液置于真空下，然后置于氢气(1atm)中，并 在室温下剧烈搅拌该反应混合物4小时。用C盐垫过滤该反应混合 物，并减压浓缩得到灰色固体状的目标产物3-(3，4-二甲基-苯基)-丙 酸，该产物在HV下进一步干燥(19.070g；98％)。LC-MS：tR＝0.85 min；[M+H]+：无电离。
3-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-丙烯酸
将2-氟-4-(三氟甲基)苯甲醛(5.000g；26.027mmol)和丙二酸 (5.145g；49.451mmol)的吡啶悬浮液(20ml)在氮气下加热至50℃。 然后(在5分钟内)逐滴添加哌啶(2ml；20.040mmol)，并将所得的 悬浮液加热至75℃，维持3小时20分钟。将反应混合物冷却至0℃， 并注入冰冷浓盐酸(12N；32ml)水溶液(400ml)。过滤沉淀的无色产 物，并以水洗涤(3 x 100ml)。将剩余的水减压蒸发，然后在HV下 得到无色固体状的干燥产物3-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-丙烯酸(5.030 g；82.5％)。LC-MS：tR＝0.89min；[M+H]+＝无电离。
3-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-丙酸
将3-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-丙烯酸(5.937g；25.356mmol)与 活性炭上的10％钯(0.590g)的混合物置于氮气下，然后小心添加甲 醇(60ml)。将所得的悬浮液置于真空下，然后置于氢气(1atm)中， 并在室温下剧烈搅拌该反应混合物4小时。用C盐垫过滤该反应混 合物，并减压浓缩得到灰色固体状的目标产物3-(2-氟-4-三氟甲基- 苯基)-丙酸，该产物在HV下进一步干燥(4.590g；77％)。LC-MS：tR ＝0.88min；[M+H]+：无电离。
5-溴-1，3-二氟-2-甲基-苯
将甲烷磺酰氯(4.72ml；60.794mmol)的无水二氯甲烷溶液(10 ml)逐滴(在5分钟内)添加至4-溴-2，6-二氟苯甲醇(11.300g；50.669 mmol)和三乙胺(14.1ml；101.338mmol)的冰冷二氯甲烷溶液(200 ml)。将所得的溶液在0℃下和氮气下搅拌30分钟。用乙酸乙酯(200 ml)稀释该反应混合物，并添加水(100ml)。依次用1N盐酸水溶液 (100ml)、饱和NaHCO3水溶液(100ml)和盐水(100ml)洗涤该有机 层。然后以硫酸镁干燥有机层，过滤，并减压浓缩至干燥得到橙色 固体，并在HV下进一步干燥(15.170g；99.5％)。甲磺酸盐的LC-MS： tR＝0.92min；[M+H]+：无电离
向所得的甲磺酸盐衍生物(15.170g；50.381mmol)的冰冷无水 THF溶液(90ml)逐滴添加超氢化物(superhydride)LiEt3BH(1N含于 THF；106ml；106mmol)溶液。将所得的混合物在0℃下搅拌5分钟， 然后在室温下搅拌30分钟。将溶液冷却至0℃，然后逐滴添加水(100 ml)，并添加二乙醚(200ml)。用无水硫酸镁干燥该有机层，过滤， 并小心减压浓缩(注意！产物具有低沸点，因此请将旋转蒸发的加 热浴设定30℃！)。通过快速层析(CH2Cl2)纯化得到无色油状的纯产 物5-溴-1，3-二氟-2-甲基-苯(6.910g；66％)。LC-MS：tR＝1.00min； [M+H]+：无电离。
3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-丙烯酸丁酯
向5-溴-1，3-二氟-2-甲基-苯(6.910g；33.379mmol)的无水DMF 溶液(200ml)顺序添加丁基丙烯酸酯(7.15ml；50.062mmol)、 DABCO(157mg；1.333mmol)、碳酸钾(4.612g；33.379mmol)和醋 酸钯(150mg；0.669mmol)。然后将所得的棕色悬浮液在120℃下搅 拌1小时。将反应混合物冷却至室温，然后添加二乙醚(400ml)。 然后用水(2 x 200ml)洗涤该混合物，并以二乙醚(150ml)进一步萃 取该混合的水层。将混合的有机层以无水硫酸镁干燥，过滤，并减 压浓缩至干燥。通过快速层析(硅胶；DCM/庚烷＝1/1＝>DCM) 纯化得到黄色油状的纯产物3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-丙烯酸丁酯， 该产物在HV下进一步干燥(4.69g；55％)。LC-MS：tR＝1.10min； [M+H]+：无电离。
3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-丙酸丁酯
将3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-丙烯酸丁酯(7.651g；30.089mmol) 与活性炭上的10％钯(0.760g)的混合物置于氮气下，然后小心添加 甲醇(100ml)。将所得的悬浮液置于真空下，然后置于氢气(1atm) 中，并在室温下剧烈搅拌该反应混合物2小时45分钟。用C盐垫 过滤该反应混合物，并减压浓缩得到黄色油状的目标产物3-(3，5-二 氟-4-甲基-苯基)-丙酸丁酯，该产物在HV下进一步干燥(6.960g； 90％)。LC-MS：tR＝1.10min；[M+H]+：无电离。
3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-丙酸
向含于甲醇(150ml)和水(25ml)的3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-丙 酸丁酯(6.960g；27.157mmol)溶液在室温下添加1N NaOH水溶液 (68ml；68mmol)。然后将所得的溶液在室温下继续搅拌1小时。然 后减压去除甲醇。添加水(25ml)，并以1N HCl水溶液(68ml)酸化 该混合物至pH值为2。添加二氯甲烷(150ml)，振荡并分层。进 一步用二氯甲烷(50ml)萃取该水层。将混合的有机层以无水硫酸 镁干燥，过滤，并减压浓缩至干燥。获得浅黄色固体状的产物3-(3，5- 二氟-4-甲基-苯基)-丙酸，并在HV下进一步干燥(5.090g；94％)。 LC-MS：tR＝0.86min；[M+H]+：无电离。
3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-丙烯酸丁酯
向3，5-二氟-4-(三氟甲基)溴苯(10.000g；38.316mmol)的无水 DMF溶液(235ml)顺序添加丁基丙烯酸酯(8.2ml；57.474mmol)、 DABCO(172mg；1.533mmol)、碳酸钾(5.295g；38.316mmol)和醋 酸钯(II)(172mg；0.766mmol)。然后将所得的棕色悬浮液在120℃ 下搅拌2小时30分钟。将反应混合物冷却至室温，然后添加二乙 醚(500ml)。然后依次用水(1 x 400ml；1 x 200ml)和盐水(50ml)洗涤 该混合物，并以二乙醚(300ml)进一步萃取该混合的水层。将混合 的有机层以无水硫酸镁干燥，过滤，并减压浓缩至干燥。通过快速 层析(硅胶；DCM/庚烷＝1/1)纯化得到浅米黄色固体状的纯产 物3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-丙烯酸丁酯，该产物在HV下进一 步干燥(10.120g；86％)。LC-MS：tR＝1.12min；[M+H]+：无电离。
3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-丙酸丁酯
将3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-丙烯酸丁酯(8.849g；28.710 mmol)与活性炭上的10％钯(0.885g)的混合物置于氮气下，然后小 心添加甲醇(120ml)。将所得的悬浮液置于真空下，然后置于氢气(1 atm)中，并在室温下剧烈搅拌该反应混合物3小时30分钟。用C 盐垫过滤该反应混合物，并减压浓缩得到黄色油状的目标产物 3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-丙酸丁酯，该产物在HV下进一步干 燥(8.622g；97％)。LC-MS：tR＝1.11min；[M+H]+：无电离。
3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-丙酸
向含于甲醇(168ml)和水(32ml)的3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯 基)-丙酸丁酯(7.658g；24.682mmol)溶液在室温下添加1N NaOH 水溶液(49.4ml；49.4mmol)。所得的溶液进一步在室温下搅拌45分 钟。然后减压去除甲醇。添加水(25ml)，并以1N HCl水溶液(50ml) 酸化该混合物至pH值为2。添加二氯甲烷(150ml)，振荡并分层。 进一步用二氯甲烷(50ml)萃取该水层。将混合的有机层以硫酸镁 干燥，过滤，并减压浓缩至干燥。获得无色固体状的产物3-(3，5-二 氟-4-三氟甲基-苯基)-丙酸，并在HV下进一步干燥(6.216g；99％)。 LC-MS：tR＝0.90min；[M+H]+：无电离。
3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3- 基)-丙基]-丙酰胺
向3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-丙酸(1.031g；4.056mmol)的 无水DMF溶液(17ml)依次添加PyBOP(2.322g；4.462mmol)、3-(2- 乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙胺(0.678g；4.056mmol)的无水DMF 溶液(5ml)以及N-乙基二异丙胺(1.74ml；10.140mmol)。然后将所 得的溶液在室温下和氮气下继续搅拌1小时。添加乙酸乙酯(100 ml)，并以盐水和水的1/1混合物(3 x 70ml)洗涤所得溶液。以无水 硫酸镁干燥所得的有机层，过滤，并减压浓缩至干燥。通过快速层 析(硅胶；DCM/MeOH＝20/1)纯化橙色油状的粗产物(2.737g)以 得到米黄色固体状的纯产物3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-N-[3-(2- 乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙基]-丙酰胺，并在HV下进一步干燥 (1.384g；85％)。LC-MS：tR＝0.84min.；[M+H]+＝404.53g/mol.
3-(3，4-二甲基-苯基)-N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙基]- 丙酰胺
向3-(3，4-二甲基-苯基)-丙酸(0.796g；4.470mmol)的无水DMF 溶液(15ml)依次添加PyBOP(2.558g；4.917mmol)、3-(2-乙基-5-甲 基-2H-吡唑-3-基)-丙胺(0.747g；4.470mmol)的无水DMF溶液(10 ml)以及N-乙基二异丙胺(1.91ml；11.175mmol)。然后将所得的溶 液在室温下和氮气下继续搅拌1小时。添加乙酸乙酯(100ml)，并 以盐水和水的1/1混合物(3 x 30ml)洗涤所得溶液，再以水(30ml) 洗涤。以无水硫酸镁干燥所得的有机层，过滤，并减压浓缩至干燥。 通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH＝15/1)纯化该粗产物以得到米 黄色固体状的纯产物3-(3，4-二甲基-苯基)-N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H- 吡唑-3-基)-丙基]-丙酰胺，并在HV下进一步干燥(1.250g；85％)。 LC-MS：tR＝0.82min.；[M+H]+＝328.24g/mol.
N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙基]-3-(2-氟-4-三氟甲基- 苯基)-丙酰胺
向3-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-丙酸(0.776g；3.286mmol)的无水 DMF溶液(15ml)依次添加PyBOP(1.880g；3.614mmol)、3-(2-乙 基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙胺(0.549g；3.286mmol)的无水DMF溶 液(10ml)以及N-乙基二异丙胺(1.40ml；8.215mmol)。然后将所得 的溶液在室温下和氮气下继续搅拌1小时。添加乙酸乙酯(100ml)， 并以盐水和水的1/1混合物(3x30ml)洗涤所得溶液。以无水硫酸镁 干燥所得的有机层，过滤，并减压浓缩至干燥。通过快速层析(硅胶； DCM/MeOH＝15/1)纯化该粗产物以得到米黄色固体状的纯产物 N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙基]-3-(2-氟-4-三氟甲基-苯 基)-丙酰胺，并在HV下进一步干燥(0.950g；75％)。LC-MS：tR＝0.83 min.；[M+H]+＝386.38g/mol.
3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)- 丙基]-丙酰胺
向3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-丙酸(0.928g；4.640mmol)的无水 DMF溶液(15ml)依次添加PyBOP(2.656g；5.104mmol)、3-(2-乙基 -5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙胺(0.776g；4.640mmol)的无水DMF溶液 (10ml)以及N-乙基二异丙胺(2.0ml；11.600mmol)。然后将所得的 溶液在室温下和氮气下继续搅拌1小时。添加乙酸乙酯(100ml)， 并以盐水和水的1/1混合物(3 x 30ml)洗涤所得溶液，再以水(30ml) 洗涤。以无水硫酸镁干燥所得的有机层，过滤，并减压浓缩至干燥。 通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH＝15/1)纯化该粗产物以得到无 色固体状的纯产物3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-N-[3-(2-乙基-5-甲基 -2H-吡唑-3-基)-丙基]-丙酰胺，并在HV下进一步干燥(1.320g； 81％)。LC-MS：tR＝0.81min.；[M+H]+＝350.53g/mol.
4-[2-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -1，4，5，6，7，8-六氢-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃
将3-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑 -3-基)-丙基]-丙酰胺(0.919g；2.278mmol)和氯氧化磷(1.05ml； 11.391mmol)的无水乙腈溶液(25ml)在氮气下加热回流(90℃)1小时 45分钟。将该黄色溶液冷却至室温，然后减压浓缩至干燥。将油 状残留物溶解于甲醇(5ml)，再次减压浓缩至干燥，重复两次与甲 醇的共蒸发(2 x 5ml MeOH)。将所得的亚胺粗产物(LC-MS：tR＝ 0.81min.；[M+H]+：386.42g/mol)还原至相应的胺，且不进行附加的 纯化。将该亚胺粗产物(0.882g；2.278mmol)的无水甲醇(18ml)溶液 冷却至0℃，然后分批添加硼氢化钠(0.431g；11.390mmol)。然后将 所得的黄色溶液在0℃和氮气下继续搅拌4小时。减压浓缩至干燥 后，依次添加二氯甲烷(75ml)和水(40ml)。进一步用二氯甲烷(2 x 20ml)萃取该水层。以无水硫酸镁干燥混合的有机层并，过滤，并 减压浓缩。通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH/25％aq.NH4OH＝15 /1/0.1＝>DCM/MeOH/aq.NH4OH＝9/1/0.1)纯化所得的粗产 物(黄色油状；0.919g)以得到米黄色固体状的纯产物4-[2-(3，5- 二氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-1，4，5，6，7，8-六氢-1，2，5- 三氮杂-甘菊环烃，并在HV下进一步干燥(0.473g；54％)。LC-MS：tR ＝0.79min.；[M+1]＝388.46g/mol.
4-[2-(3，4-二甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-1，4，5，6，7，8-六氢 -1，2，5-三氮杂-甘菊环烃
将3-(3，4-二甲基-苯基)-N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙 基]-丙酰胺(1.250g；3.817mmol)和氯氧化磷(1.75ml；19.086 mmol)的无水乙腈溶液(40ml)在氮气下加热回流(90℃)1小时15分 钟。将所得的溶液冷却至室温，然后减压浓缩至干燥。将油状残 留物溶解于甲醇(5ml)，再次减压浓缩至干燥，重复两次与甲醇的 共蒸发(2 x 5ml MeOH)。将所得的亚胺粗产物(黄色油状；LC-MS：t R＝0.76min.；[M+H]+：310.47g/mol)还原至相应的胺，且不进行附加 的纯化。将该亚胺粗产物(1.181g；3.817mmol)的无水甲醇(45ml)溶 液冷却至0℃，然后分批添加硼氢化钠(0.752g；19.085mmol)。然后 将所得的溶液在0℃和氮气下继续搅拌1小时15分钟。减压浓缩至 干燥后，依次添加二氯甲烷(50ml)和水(50ml)。进一步用二氯甲烷 (25ml)萃取该水层。以无水硫酸镁干燥混合的有机层并，过滤，并 减压浓缩。通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH/25％aq.NH4OH＝9/ 1/0.1)纯化所得的粗产物以得到黄色油状的纯产物4-[2-(3，4-二甲 基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-1，4，5，6，7，8-六氢-1，2，5-三氮杂-甘菊环 烃，并在HV下进一步干燥(0.980g；82％)。LC-MS：tR＝0.76min.； [M+1]＝312.51g/mol.
1-乙基-4-[2-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-3-甲基-1，4，5，6，7，8- 六氢-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃
将N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3-基)-丙基]-3-(2-氟-4-三氟甲 基-苯基)-丙酰胺(1.020g；2.647mmol)和氯氧化磷(1.21ml；13.233 mmol)的无水乙腈溶液(40ml)在氮气下加热回流(90℃)1小时15分 钟。将所得的溶液冷却至室温，然后减压浓缩至干燥。将油状残 留物溶解于甲醇(5ml)，再次减压浓缩至干燥，重复两次与甲醇的 共蒸发(2 x 5ml MeOH)。将所得的亚胺粗产物(黄色固体状；LC-MS： tR＝0.79min.；[M+H]+：368.40g/mol)还原至相应的胺，且不进行附 加的纯化。将该亚胺粗产物(0.972g；2.647mmol)的无水甲醇(25ml) 溶液冷却至0℃，然后分批添加硼氢化钠(0.521g；13.228mmol)。然 后将所得的溶液在0℃和氮气下继续搅拌1小时15分钟。减压浓缩 至干燥后，依次添加二氯甲烷(50ml)和水(50ml)。进一步用二氯甲 烷(25ml)萃取该水层。将混合物的牛奶状有机萃取物直接减压浓 缩，所得的粗产物通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH/25％aq. NH4OH＝9/1/0.1)纯化以得到黄色油状的纯产物1-乙基-4-[2-(2- 氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-3-甲基-1，4，5，6，7，8-六氢-1，2，5-三氮杂-甘 菊环烃，并在HV下进一步干燥(0.453g；46％)。LC-MS：tR＝0.77min.； [M+1]＝370.50g/mol.
4-[2-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-1，4，5，6，7，8-六 氢-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃
将3-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-N-[3-(2-乙基-5-甲基-2H-吡唑-3- 基)-丙基]-丙酰胺(1.320g；3.778mmol)和氯氧化磷(1.73ml； 18.888mmol)的无水乙腈溶液(40ml)在氮气下加热回流(90℃)1小时 15分钟。将所得的溶液冷却至室温，然后减压浓缩至干燥。将油 状残留物溶解于甲醇(5ml)，再次减压浓缩至干燥，重复两次与甲 醇的共蒸发(2 x 5ml MeOH)。将所得的亚胺粗产物(黄色油状； LC-MS：tR＝0.76min.；[M+H]+：332.46g/mol)还原至相应的胺，且不 进行附加的纯化。将该亚胺粗产物(1.250g；3.772mmol)的无水甲醇 (45ml)溶液冷却至0℃，然后分批添加硼氢化钠(0.743g；18.859 mmol)。然后将所得的溶液在0℃和氮气下继续搅拌1小时15分钟。 减压浓缩至干燥后，依次添加二氯甲烷(50ml)和水(50ml)。进一步 用二氯甲烷(25ml)萃取该水层。将混合物的牛奶状有机萃取物直 接减压浓缩，所得的粗产物通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH/25％ aq.NH4OH＝9/1/0.1)纯化以得到黄色固体状的纯产物4-[2-(3，5- 二氟-4-甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-1，4，5，6，7，8-六氢-1，2，5-三氮 杂-甘菊环烃，并在HV下进一步干燥(0.958g；76％)。LC-MS：tR＝ 0.75min.；[M+1]＝334.50g/mol.
最终化合物的制备：
实例1：
2’-{4-[2-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺
向4-[2-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -1，4，5，6，7，8-六氢-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃(0.470g；1.213mmol)的2- 丁酮溶液(6ml)在室温下顺序添加(S)-甲苯-4-磺酸甲基氨甲酰基-苯 基-甲酯(0.426g；1.335mmol)和N-乙基二异丙胺(0.41ml；2.426 mmol)。将反应混合物在氮气下加热至70℃，维持23小时。然而将 该反应混合物冷却至室温，真空去除溶剂，添加二氯甲烷(80ml)， 并以盐水(2 x 80ml)洗涤该溶液。以无水硫酸镁干燥有机层，过滤 并减压浓缩。通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH＝20/1)纯化得到两 种差向异构体(R)-2’-{(S)-4-[2-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1- 乙基-3-甲基-4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基 -2’-苯基-乙酰胺和(R)-2’-{(R)-4-[2-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-乙 基]-1-乙基-3-甲基-4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N- 甲基-2’-苯基-乙酰胺的混合物(黄色固体状；0.450g；69％)。LC-MS： tR＝0.87min.；[M+H]+：535.57g/mol.
然后通过制备HPLC纯化两种差向异构体的混合物得到光学纯 异构体(R)-2’-{(S)-4-[2-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3- 甲基-4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基- 乙酰胺(83mg；无色固体状；LC-MS：tR＝0.87min.，[M+H]+＝ 535.57g/mol)和(R)-2’-{(R)-4-[2-(3，5-二氟-4-三氟甲基-苯基)-乙 基]-1-乙基-3-甲基-4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N- 甲基-2’-苯基-乙酰胺(75mg；无色固体状；LC-MS：tR＝0.87min.， [M+H]+＝535.56g/mol)。
实例2：
2’-{4-[2-(3，4-二甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-4，6，7，8-四氢 -1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰胺
向4-[2-(3，4-二甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-1，4，5，6，7，8-六氢 -1，2，5-三氮杂-甘菊环烃(0.980g；3.146mmol)的2-丁酮溶液(10ml) 在室温下顺序添加(S)-甲苯-4-磺酸甲基氨甲酰基-苯基-甲酯(1.105 g；3.461mmol)和N-乙基二异丙胺(1.07ml；6.293mmol)。将反应混 合物在氮气下加热至70℃，维持23小时。然而将该反应混合物冷 却至室温，真空去除溶剂，添加二氯甲烷(80ml)，并以盐水(2 x 80 ml)洗涤该溶液。以无水硫酸镁干燥有机层，过滤并减压浓缩。通过 快速层析(硅胶；DCM/MeOH＝20/1)纯化得到两种差向异构体 (R)-2’-{(S)-4-[2-(3，4-二甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-4，6，7，8-四氢 -1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰胺和 (R)-2’-{(R)-4-[2-(3，4-二甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-4，6，7，8-四 氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰胺的混合 物(黄色固体状；1.100g；76％)。LC-MS：tR＝0.84min.；[M+H]+： 459.62g/mol.
然后通过制备HPLC纯化两种差向异构体的混合物得到光学纯 异构体(R)-2’-{(S)-4-[2-(3，4-二甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺(76mg；无色固体状；LC-MS：tR＝0.84min.，[M+H]+＝459.62 g/mol)和(R)-2’-{(R)-4-[2-(3，4-二甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺(70mg；无色固体状；LC-MS：tR＝0.84min.，[M+H]+＝459.63 g/mol)。
实例3：
2’-{1-乙基-4-[2-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-3-甲基-4，6，7，8- 四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰胺
向1-乙基-4-[2-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-3-甲基 -1，4，5，6，7，8-六氢-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃(0.453g；1.226mmol)的2- 丁酮溶液(5ml)在室温下顺序添加(S)-甲苯-4-磺酸甲基氨甲酰基-苯 基-甲酯(0.430g；1.349mmol)和N-乙基二异丙胺(0.42ml；2.453 mmol)。将反应混合物在氮气下加热至70℃，维持24小时。然而将 该反应混合物冷却至室温，真空去除溶剂，添加二氯甲烷(50ml)， 并以盐水(50ml)洗涤该溶液。以无水硫酸镁干燥有机层，过滤并减 压浓缩。通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH＝20/1)纯化得到两种差 向异构体(R)-2’-{1-乙基-(S)-4-[2-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-3-甲 基-4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙 酰胺和(R)-2’-{1-乙基-(R)-4-[2-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-3-甲 基-4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙 酰胺的混合物(黄色固体状；0.343g；54％)。LC-MS：tR＝0.86min.； [M+H]+：517.62g/mol.
然后通过制备HPLC纯化两种差向异构体的混合物得到光学纯 异构体(R)-2’-{1-乙基-(S)-4-[2-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺(82mg；无色固体状；LC-MS：tR＝0.86min.，[M+H]+＝517.62 g/mol)和(R)-2’-{1-乙基-(R)-4-[2-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-乙基]-3-甲 基-4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙 酰胺(90mg；无色固体状；LC-MS：tR＝0.86min.，[M+H]+＝517.63 g/mol)。
实例4：
2’-{4-[2-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-4，6，7，8-四 氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰胺
向4-[2-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基-1，4，5，6，7，8- 六氢-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃(0.958g；2.873mmol)的2-丁酮溶液(10 ml)在室温下顺序添加(S)-甲苯-4-磺酸甲基氨甲酰基-苯基-甲酯 (1.009g；3.161mmol)和N-乙基二异丙胺(0.98ml；5.746mmol)。将 反应混合物在氮气下加热至70℃，维持23小时。然而将该反应混 合物冷却至室温，真空去除溶剂，添加二氯甲烷(80ml)，并以盐 水(2x80ml)洗涤该溶液。以无水硫酸镁干燥有机层，过滤并减压 浓缩。通过快速层析(硅胶；DCM/MeOH＝20/1)纯化得到两种差向 异构体(R)-2’-{(S)-4-[2-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺和(R)-2’-{(R)-4-[2-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺(黄色固体状；1.09g；79％)。LC-MS：tR＝0.84min.；[M+H]+： 481.62g/mol.
然后通过制备HPLC纯化两种差向异构体的混合物得到光学纯 异构体(R)-2’-{(S)-4-[2-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲基 -4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙酰 胺(83mg；无色固体状；LC-MS：tR＝0.84min.，[M+H]+＝481.62 g/mol)和(R)-2’-{(R)-4-[2-(3，5-二氟-4-甲基-苯基)-乙基]-1-乙基-3-甲 基-4，6，7，8-四氢-1H-1，2，5-三氮杂-甘菊环烃-5-基}-N-甲基-2’-苯基-乙 酰胺(76mg；无色固体状；LC-MS：tR＝0.85min.，[M+H]+＝481.64 g/mol)。
生物测定
体外测定
式(II)的化合物的食欲素受体拮抗剂活性可通过如下的实验方 法进行测定。
实验方法：
胞内钙离子测定
分别将表达人食欲素-1受体和人食欲素-2受体的中国仓鼠卵 巢(CHO)细胞培养于含300μg/ml G418，100 U/ml青霉素，100 μg/ml链霉素和10％灭活的胎牛血清(FCS)的培养基(具有L-谷氨 酰胺的Ham F-12)。将细胞以80’000细胞/微孔接种至96-孔黑色底 部洁净的无菌平板(Costar)上，该平板曾以含于Hank平衡盐溶液 (HBSS)的1％软明胶预涂覆。所有的试剂购自Gibco BRL。接种的 平板在37℃下5％ CO2中孵育过夜。
将作为激动剂的人食欲素-A在甲醇:水(1:1)中配制为1mM的储 备溶液，在含有0.1％牛血清白蛋白(BSA)和2mM HEPES的HBSS 中稀释为终浓度10nM以供测定。
拮抗剂配制为10mM的DMSO储备溶液，然后在96-孔板中稀 释，首先以DMSO稀释，然后以含有0.1％牛血清白蛋白(BSA)和 2mM HEPES的HBSS稀释。
在测定当日，向各个微孔添加装载培养基(含1％ FCS，2mM HEPES，5mM丙磺舒(Sigma)，和3μM荧光钙离子指示剂fluo-3 AM (1mM储备溶液含于具有10％普朗尼克酸的DMSO)(Molecular Probes)的HBSS)。
将96孔板在37℃下5％ CO2中孵育60分钟。然后吸取该装载 溶液并以含2.5mM丙磺舒，0.1％ BSA，2mM HEPES的200μl HBSS洗涤3次。在各微孔中剩余100μl相同的缓冲液。
在荧光成像平板读取器(FLIPR，Molecular Devices)中，向该平 板添加体积为50μl的拮抗剂，孵育20分钟并最终添加100μl激动 剂。以1秒的间隔检测各微孔的荧光，并将荧光峰的高度与用缓冲 液替代拮抗剂时10nM食欲素-A所诱导的荧光峰的高度相比较。检 测各种拮抗剂的IC50值(抑制50％的激动响应所需的化合物的浓 度)。化合物针对OX1和OX2受体的拮抗活性均在纳摩尔范围内。 表1显示了选定的化合物。
表1：
  产物编号 (绝对构型) IC50OX1(nM) IC50OX2(nM) 实例1(4S；2’R) 22 12 实例2(4S；2’R) 36 6 实例3(4S；2’R) 138 18 实例4(4S；2’R) 26 6