突触传递是细胞间通讯的复杂形式，它涉及在突触前末端和突触 后末端以及周围神经胶质细胞内的相当多的一批特异结构(Kanner 和Schuldiner，CRC Critical Reviews in Biochemistry，22， 1987：1032)。转运蛋白自突触螯合神经递质，从而调节突触内神经 递质的浓度，以及神经递质在突触中的持续时间，它们共同影响突 触传递的幅度。进一步地，通过预防神经递质传播到邻近突触，转 运蛋白保持突触传递的保真性。最后，通过将释放的神经递质螯合 至突触前末端，转运蛋白允许神经递质的再利用。
神经递质转运依赖于细胞外钠和跨膜的电势差；在强的神经元激 发(firing)情形下，例如当疾病发作期间，转运蛋白起相反的作用， 以独立于钙的非胞吐方式释放神经递质(Attwell等，Neuron，11， 1993：401-407)。因此神经递质转运蛋白的药理学调节提供了一种 突触活性的方式，它提供用于治疗神经紊乱和精神障碍的有效方法。
氨基酸甘氨酸是哺乳动物中枢神经系统内的主要神经递质，对抑 制性突触和兴奋性突触均起作用。所谓的神经系统，意在包括神经 系统的中枢和外周部分。甘氨酸的这些截然不同的功能通过两种不 同类型的受体介导，其中的每一种与不同类的甘氨酸主要蛋白有关。 甘氨酸的抑制作用由对引起惊厥的生物碱马钱子碱敏感的甘氨酸受 体介导，并且因此称为“对马钱子敏感的”。这类受体包含固有的 氯化物通道，它在甘氨酸与受体结合时开放；通过增加氯化物传导， 作用电位的激发阈值升高。发现对马钱子碱敏感的甘氨酸受体主要 位于脊髓和脑干，因此增强这类受体活化的药理学药剂会增加这些 区域内的抑制性神经传递。
甘氨酸通过调节谷氨酸盐(中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质) 的活动，也在兴奋传递中起作用(Johnson和Ascher，Nature，325， 1987：529-531；Fletcher等，Glycine Transmission，Otterson and Storm Mathisen，eds.，1990：193-219)。具体地，甘氨酸是 称为N-甲基-D-天冬氨酸盐(NMDA)受体的谷氨酸盐受体类的专性共激 动剂。NMDA增加了钠和钙的传导，这使神经元去极化，从而增加了激 发作用电位的可能性。
大脑海马区内的NMDA受体在突触可塑性模式中起所谓的长期增效 (LTP)的重要作用，它在某些类型的学习和记忆这是必需的(Hebb， D.O(1949)The Organization of Behavior，Wiley，NY；Bliss and Collingridge(1993)Nature 361：31-39；Morris等(1986)Nature 319：774-776)。选择的NMDA受体亚单位在转基因小鼠中的表达增强 导致NMDA受体介导的电流增大、LTP增强和在一些学习和记忆试验中 表现更佳(Tang等(1999)Nature 401：63)。
相反地，选择的NMDA受体亚单位在转基因小鼠中的表达减弱产生 类似于药理学优点的精神分裂症动物模型的行为，包括运动增加、刻板 症增强和社会/性相互影响的缺乏(Mohn等(1999)Cell 98： 427-436)。这些异常的行为可采用安定药氟哌啶醇和氯氮平缓解。
NMDA受体广泛分布于大脑中，在大脑皮质和海马结构中密度特别 高。
分子克隆已经揭示了哺乳动物大脑中称为GlyT-1和GlyT-2的两 类甘氨酸转运蛋白的存在。发现GlyT-1遍布大脑和脊髓，人们提出它 的分布对应于谷氨酸能通道和NMDA受体的分布(Smith等，Neuron，8， 1992：927-935)。分子克隆进一步揭示了三种GlyT-1变体的存在， 分别称为GlyT-1a、GlyT-1b、GlyT-1c和GlyT-1d。这些变体中的两 种(1a和1b)在啮齿动物中发现，其中每一种在大脑和外周组织中显示 独特的分布(Borowsky等，Neuron，10，1993：851-863；Adams等， J.Neuroscience，15，1995：2524-2532)。第三种变体1c仅仅在 人类组织检测到(Kim，等，Molecular Pharmacology，45，1994： 608-617)。在人体组织中鉴别出第四种变体(参见美国专利 No.6,008,015)。通过鉴别性剪接和外显子的使用发现了这些变体，并 且其区别在于它们的N-末端区。在脑干和脊髓中主要发现GlyT-2，并 且其分布与对马钱子碱敏感的甘氨酸受体的分布紧密对应(Liu等，J. Biological Chemistry，268，1993：22802-22808；Jursky和 Nelson，J.Neurochemistry，64，1995：1026-1033)。由GlyT-2 介导的甘氨酸转运蛋白的另一显著特征在于它不受肌氨酸抑制，这与 GlyT-1介导的甘氨酸转运蛋白一样。这些数据与这样的观点一致，即， 通过调节甘氨酸的突触水平，GlyT-1和GlyT-2分别选择性地影响 NMDA受体和对马钱子碱敏感的甘氨酸受体的活性。
因此希望抑制或激活甘氨酸转运蛋白的化合物改变受体功能，从而 为许多病症提供治疗效益。
譬如，抑制GlyT-1介导的甘氨酸转运蛋白的化合物增加NMDA受 体的甘氨酸浓度，该受体主要位于前脑。这种浓度的增加提高了NMDA 受体的活性，因此可以减轻精神分裂的症状和增强认知功能。换言之， 与NMDA受体的甘氨酸受体组元直接交互作用的化合物具有与分别与抑 制或增强GlyT-1活性引起的细胞外甘氨酸的可利用性的增加或减少同 样或类似的作用。参见，例如，Pitknen等，Eur.J.Pharmacol.， 253，125-129(1994)；Thiels等，Neuroscience，46， 501-509(1992)；和Kretschmer和Schmidt，J.Neurosci.，16， 1561-1569(1996)。
已经发现许多化合物有效结合和抑制GlyT-1转运蛋白，当体内给 药时还显示出毒性作用。虽然这些化合物是用于研究转运蛋白功能的有 效药学工具，但毒性限制它们作为药物的可利用性。
因此希望提供作用于甘氨酸转运蛋白的化合物。而且，希望提供作 用于甘氨酸转运蛋白但足够无毒适合作为药物组合物的化合物。
发明概述
本发明涉及已经发现能够有效抑制GlyT-1转运蛋白并足够无毒以 用于医学使用的化合物。更加具体地，本发明的化合物显示出比其它已 知GlyT-1抑制剂意外改进了的毒性性能。按照本发明的一个方面，提 供式I的化合物：

                             式I
其中：
Ar1是噻吩基，它可以是2或3个噻吩且选择性地被一个选自甲基或乙 基的取代基取代；和
Ar2选自噻吩、呋喃和取代的苯基，其中苯基上的取代基选自C1-6烷基、 卤素、C1-6卤代烷基、C1-6烷氧基、C1-6卤代烷氧基、氰基， 和其盐、溶剂化物和水合物。
按照本发明的另一方面提供化合物：(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯 基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸。
已经发现式(I)的化合物和(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯 基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，通过GlyT-1抑制甘氨酸 转运蛋白，或者是此类化合物的前体(例如前药)。GlyT-1转运蛋白抑 制剂适于治疗精神分裂症，以及其它CNS有关的疾病，例如认知机能障 碍、痴呆(包括涉及阿耳茨海默氏病的痴呆)、注意力缺乏、抑郁，和流 行性发育疾病例如孤独症、Rett氏疾病、儿童变性疾病、Asperger 氏病和没有另外指出的流行性发育疾病(例如非典型性孤独症)。
按照本发明的另一方面提供一种含有式1的化合物或化合物 (Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3-基)肌 氨酸和载体的组合物。
按照本发明的另一方面，提供一种含有式I的化合物和药学可接受 载体的药物组合物。在本发明的又一方面提供含有有效抑制甘氨酸转运 量的式1的化合物和药学可接受载体的药物组合物。
在本发明的另一方面提供一种含有化合物(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩 基)苯基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸和药学可接受载体 的药物组合物。在本发明的另一方面提供一种含有有效一种甘氨酸转运 量的化合物(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-甲基苯基)丙-1- 烯-3-基)肌氨酸和药学可接受载体的药物组合物。
在本发明的另一方面，提供含有适合药用来治疗需要甘氨酸转运抑 制剂的医学病症的量的式1的化合物或化合物(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩 基)苯基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸。优选那些含有适合 医学病症治疗的化合物的组合物，此类医学病症需要GlyT-1介导的对 甘氨酸转运的抑制，例如精神分裂症或认知障碍的治疗。
式1的化合物或化合物(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-甲 基苯基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸可以用于治疗患有需要甘氨酸转运抑制 剂的医学病症的患者，适应征如上所述。优选的适应征是精神分裂症。 所述的化合物也可用于治疗患有需要甘氨酸转运抑制剂的医学病症的 患者的药物。
定义
本文使用的术语“烷基”是指直链和支链的具有1、2、3、4、5或 6个碳原子的含碳和氢基团并且包括甲基、乙基等。
本文使用的术语C1-6是指含有1、2、3、4、5或6个碳原子的烷基。
本文使用的术语“烷氧基”是指含有1、2、3、4、5或6个碳原子 的末端为氧基的直链和支链烷基并且包括甲氧基、乙氧基、叔丁氧基等。
本文使用的术语“卤素”是指卤素并包括氟、氯、溴等。
术语“卤代烷基”是指被一个或多个独立选择的卤素原子取代的烷 基，例如-CF3。
同样地，术语“卤代烷氧基”是指被一个或多个独立选择的卤素原 子取代的烷氧基，例如-OCF3。
优选实施方式
本发明的一个适当实施方式包括其中Ar1西藏选择性取代的2-噻吩 或3-噻吩的式1化合物。在本发明的一个适当实施方式中Ar1是2-噻 吩。在本发明的一个优选实施方式中Ar1是2-(3-烷基噻吩)，优选 2-(3-甲基噻吩)。在本发明的另一优选实施方式中Ar1是3-噻吩。在 另一优选实施方式中Ar1是3-(4-烷基噻吩)，优选3-(4-甲基噻吩)。
在本发明的一个适当实施方式中Ar2选自适当的苯基、噻吩和呋喃。 在本发明的一个更优选实施方式中Ar2是取代的苯基，其中此类取代基 是在3或4位，并且其中该取代基选自：C1-6烷基；卤素；C1-6卤代烷 基；C1-6烷氧基；C1-6卤代烷氧基；和氰基。在其它优选实施方式中，位 于3或4位的苯基取代基选自CF3、Me、iPr、MeO、CN和CF3O。在一 个优选实施方式中，Ar2是3-甲氧基苯基。在另一优选实施方式中，Ar2 是3-甲基苯基。在另一优选实施方式中，Ar2是3-三氟甲氧基苯基。 在另一实施方式中，Ar2是3-三氟甲基苯基。在另一优选实施方式中， Ar2是4-异丙基苯基，并且在又一优选实施方式中Ar2是3-氰基苯基。
在一个适当实施方式中Ar2是噻吩。在本发明的一个优选实施方式 中Ar2是2-噻吩。
在另一优选实施方式中Ar2是2-呋喃。
本发明的更优选实施方式包括：
(Z)-N-(1-(4-(4-异丙基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸，(化合物G(i))；
(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨 酸，(化合物G(ii))；
(Z)-N-(1-(4-(2-噻吩基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨 酸，(化合物G(iii))；
(Z)-N-(1-(4-(2-呋喃基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨 酸，(化合物G(iv))；
(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸，(化合物G(v))；
(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌 氨酸，(化合物G(vi))；
(Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲氧基)苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯 -3-基)肌氨酸，(化合物G(vii))；
(Z)-N-(1-(4-(3-氰基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌 氨酸，(化合物G(viii))；
(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨 酸，(化合物G(ix))；
(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基))丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，(化合物G(x))；
(Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲基)苯基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基))丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，(化合物G(xi))；
(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基))丙-1- 烯-3-基)肌氨酸，(化合物G(xii))；
(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(2-(3-甲基噻吩基))丙-1-烯 -3-基)肌氨酸，(化合物G(xiii))。
本发明的首选实施方式是(Z)-N-(1-(4-(2-呋喃基)苯基)-1-(3- 噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，(化合物G(iv))。
本发明的另一适当实施方式是化合物(Z)-N-(1-(4-(3-呋喃基)苯 基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，(化合物G(xiv))。
在本发明的另一实施方式中，式I的化合物是以标记形式提供，例 如放射标记的形式(例如通过在其结构内掺入3H或14C或通过偶联125I 标记)。在本发明的一个优选方面，优先结合GlyT-1的化合物可以用 于通过所属领域的常规技术鉴别GlyT-1受体配体。这可以通过将受体 或组织在配体候选物的存在下培养且随后将所得的标本与等摩尔量的 本发明放射标记化合物一起培养。由此显示出那些显著占据GlyT-1位 点且防止本发明的放射标记化合物的结合的GlyT-1受体配体。另外， 通过首先孵育本发明的化合物的放射标记形式、随后所得标本在候选配 体的存在下孵育可以简单出GlyT-1受体配体候选物。更有效的GlyT-1 受体配体应在等摩尔浓度下替代本发明的放射标记化合物。
式I的化合物的碱加成盐最适合由药学可接受酸形成。另外包括在 本发明范围内的是本发明化合物的酸加成盐、溶剂化物和水合物。
给定的化合物盐向所需化合物盐的转化是利用所属领域技术人员 熟知的标准技术获得。
反应路线1

(a)：炔丙醇，Pd(PPh3)4，CuI，Et3N，r.t.，过夜；(b)：Red-Al， THF，0℃，1小时，随后EtOAc，I2，-78℃至r.t.，过夜；(c)NBS， PPh3，CH2Cl2，-40℃，1小时；(d)：叔丁基肌氨酸，K2CO3，KI，MeCN， r.t.，过夜；(e)：Ar1B(OH)2，Pd(PPh3)4，2M Na2CO3，DME，90℃， 4.5小时；(f)：Ar2B(OH)2，Pd(PPh3)4，2M Na2CO3，DME，Δ，3小 时；(g)：甲酸，40℃，过夜。
式1的化合物很容易通过上述反应路线1所示的方法制备。中间体 B通过4-溴碘苯与炔丙醇的钯催化反应制备。通过用二(2-甲氧基乙氧 基)氯氢化物(Red-Al)钠、随后用碘处理可以将化合物B转化为碘化物 C。由醇转化为溴化物的转化反应、随后用肌氨酸的置换组成的两步方 法得到中间体D。中间体D是特别有用的中间体，因为它能够制备许多 衍生物，其中芳基可以在完全立体化学控制下定向。譬如，普通中间体 D与多种烃基代硼酸类化合物反应生成式E的产物。
式E的产物也是有用的化学中间体。这些产物能够制备多种带有4’- 芳基(Ar2基团)的化合物。产物E与多种烃基代硼酸反应生成不同的式 F的产物，它们可以在最后步骤中用甲酸脱保护得到G类的最终化合物。
利用本文所述的反应制备下列本发明的化合物：


本发明的化合物可以通过口服、舌下、直肠、经鼻、阴道、局部(包 括使用贴剂或其它透皮给药装置)、使用气雾剂经肺部途径，或者非肠 道(包括，例如肌肉内、皮下、腹膜内、动脉内、静脉内或鞘内)给药。 给药可以借助于泵进行的周期性或连续输送。本发明的化合物可以单独 给药，或者按照标准制药实践结合药学可接受的载体或赋形剂给药。对 应经口给药方式，本发明的化合物以片剂、机能剂、锭剂、口香糖糖锭、 散剂、糖浆剂、酏剂、水溶液或混悬液等形式使用。在片剂的情况下， 使用的载体包括乳糖、柠檬酸钠或磷酸盐。通常在片剂中使用各种崩解 剂(例如淀粉)和乳化剂(例如硬脂酸镁和滑石)。对于胶案形式的口服 给药，有用的稀释剂是乳糖和高分子量的聚乙二醇。如果需要，加入某 些甜味剂和/或矫味剂。对于非肠道给药，通常制备本发明化合物的无 菌溶液，并适当地调节和缓冲溶剂的pH值。对于静脉内使用，应该控 制溶质的总浓度以使制剂等渗。对于眼部给药，可通过该领域已知的眼 部给药体系例如涂药器或滴眼瓶给用软膏或滴液。这类组合物可包含拟 粘液物(munomimetic)(例如透明质酸、硫酸软骨素、羟丙基甲基纤维 素或聚乙烯醇)，防腐剂(例如山梨酸、EDTA或氯化苄基铬 (Benzylchromium chloride))，以及常规量的稀释剂和/或载体。对 于经肺给药，选择适当的稀释剂和/或载体以形成气雾剂。
本发明化合物的栓剂形式用于阴道、尿道和直肠给药。这样的栓剂 通常由室温下为固体单体温下融化的物质的混合物组成。常用于构成此 类载体的物质包括可可油、甘油化明胶、氢化植物油、不同非离子的聚 乙二醇和聚乙二醇脂肪酸酯的混合物。对于栓剂剂型的进一步讨论参见 Remington’s Pharmaceutical Sciences，16版，Mack Publishing， Easton，PA，1980，1530-1533。类似的凝胶或霜剂可以用于阴道、 尿道和直肠给药。
许多给药载体对于本领域的普通技术人员是显而易见的，包括但不 限于缓释制剂、脂质体制剂和聚合物基质。
用于本发明的药学可接受盐的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸 例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸以及有机酸例如酒石酸、 醋酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、羟基乙酸、葡糖酸、 琥珀酸、对甲苯磺酸和芳基磺酸的那些盐。用于本发明的药学可接受的 碱加成盐的实例包括衍生自无毒金属(例如钠和钾)的盐、铵盐和有机氨 盐(例如三乙胺盐)。许多适当的此类盐对于普通技术人员来说是已知 的。
基于对象的体重、年龄和身体状况，主治医师或其它保健人员可选 择适当的剂量和治疗方案。通常选择保持本发明化合物的血清浓度在约 0.01μg/cc至约1000μg/cc之间的剂量，优选在0.1μg/cc至 100μg/cc之间。对于非肠道给药，可选择的优选剂量范围是约 0.001mg/kg至约10mg/kg(选择性地，约0.01mg/kg至约10mg/kg)， 更优选给用约0.01mg/kg至约1mg/kg(约0.1mg/kg至约1mg/kg)。 对于口服给药，可选择的优选给药量范围是约0.001mg/kg至约 10mg/kg(约0.1mg/kg至约10mg/kg)，更优选给用约0.01mg/kg至 约1mg/kg(约0.1mg/kg至约1mg/kg)。对于以栓剂形式给药，可选择 的优选给药量范围是约0.1mg/kg至约10mg/kg，更优选给用约 0.1mg/kg至约1mg/kg。
为用于分析抑制甘氨酸转运的活性，真核(eukaryokic)细胞，优 选源自鹌鹑成纤维细胞的QT-6细胞，业已被转染以表达三种已知的人 GlyT-1变体中的一种，即GlyT-1a、GlyT-1b、GlyT-1c或GlyT-1d， 或者人GlyT-2。Kim等在Molec.Pharm.45：608-617，1994中描 述了这些GlyT-1转运蛋白的序列，例外情况是编码GlyT-1a末端N 末端的序列仅仅由相应的大鼠起源的序列推定。现已确认这种N末端蛋 白编码序列符合Kim等的推论。美国专利No.6,008,015公开了 GlyT-1d的序列，其在此全文引入作为参考。美国专利No.5,919,653 中描述了人GlyT-2的序列，其在此全文引入作为参考。适当的表达载 体包括pRc/CMV(Invitrogen)，Zap表达载体(Stratagene Cloning Systems，LaJolla，CA；下文称作“Stratagene”)，pBk/CMV或 pBk-RSV载体(Stratagene)，Bluescript II SK+/-Phagemid Vectors(Stratagene)，LacSwitch(Stratagene)，pMAM和pMAM neo(Clontech)。适当的表达载体能够在适当的宿主细胞里培养包含的 GlyT DNA的表达，宿主细胞优选非哺乳动物宿主细胞，其可以是真核 细胞、真菌细胞或原核细胞。这些优选的宿主细胞包括两栖动物、鸟、 真菌、昆虫和爬行动物细胞。
实施例
实施例1：1-(4-溴苯基)-丙-1-炔-3-醇(中间体B)：
向4-溴碘苯(10.0g，35.3mmol)在三乙胺(Et3N，100mL)中的溶 液内加入炔丙醇(2.7mL，2.57g，45.9mmol)、CuI(0.81g，4.24mmol) 和Pd(PPh3)4(1.63g，1.41mmol)。将该混合物搅拌过夜，随后浓缩该 反应混合物。柱色谱(20-35％EtOAc/己烷)得到1-(4-溴苯基)-1-炔 丙-3-醇B(6.58g，88％)，其为黄色/橙色固体。1HNMR(300MHz， CDCl3)1.77(t，1H)，4.48(d，2H)，7.29(d，2H)，7.45(d，2H).
实施例2：(Z)-1-(4-溴苯基)-1-碘丙-1-烯-3-醇(中间体C)
在冰浴中冷冻1-(4-溴苯基)-1-炔丙-3-醇B(6.58g，31.2mmol) 在无水四氢呋喃(THF，66mL)中的溶液。在15分钟内滴加65％w/w的 Red-Al在甲苯中的溶液(PhMe，18/7mL，19.4g，62.4mmol)。1小 时后加入乙酸乙酯(EtOAc，3.0mmL，2.75g，31.2mmol)。该反应混合 物在干冰/丙酮浴中冷冻。滴加I2(12.7g，49.9mmol)在无水THF(66mL) 中的溶液。反应混合物缓慢升至室温过夜。反应用饱和Na2SO3终止且 经硅藻土过滤。滤饼用EtOAc充分洗涤。滤液用水和盐水洗涤，干燥 (MgSO4)，过滤，和浓缩。柱色谱(20％EtOAc/己烷)得到(Z)-1-(4- 溴苯基)-1-碘丙烯-3-醇C(8.82g，83％)，其为黄色固体。 1H NMR(300MHz，CDCl3)1.82(t，1H)，4.37(叠加，2H)，6.25(t，1H)， 7.34(d，2H)，7.44(d，2H).
实施例3：(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-碘丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁 酯(中间体D)：
在干冰/乙腈浴中氩气下冷冻(Z)-1-(4-溴苯基)-1-碘丙烯-3-醇 C(8.81g，26.0mmol)在CH2Cl2(220mL)中的溶液。加入PPh3(10.9g， 41.6mmol)和N-溴琥珀酰亚胺(NBS，7.40g，41.6mmol)。1小时后用 饱和NaHCO3终止该反应。混合物用饱和NaHCO3和盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤，和浓缩。残余物立刻溶解在无水乙腈(MeCN，104mL) 中，加入肌氨酸叔丁酯盐酸化物(5.20g，28.6mmol)，K2CO3(35.9g， 260mmol)和KI(21.6g，130mmol)。将该混合物搅拌过夜，随后过滤 且滤饼用EtOAc洗涤。滤液在EtOAc和水之间分配。有机相用盐水洗 涤，干燥(MgSO4)，过滤，和浓缩。柱色谱(20％EtOAc/己烷)得到 (Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-碘丙-1-烯-3-基)肌氨酸叔丁酯D(9.63g， 2步80％)，其为浅褐色油。
              1H NMR(300MHz，CDCl3)1.48(s，9H)，2.46(s，3H)，3.23(s， 2H)，3.43(d，2H)，6.12(t，1H)，7.34(d，2H)，7.43(d，2H).
实施例4-1：(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌 氨酸，叔丁酯(中间体E(i))：
向(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-碘丙-1-烯-3-基)肌氨酸叔丁酯 D(29.86g，64.06mmol)在二甲氧基乙烷(300mL)中的溶液内加入3- 噻吩硼酸(9.02g，70.47mmol)、Pd(PPh3)4(3.70g，3.20mmol)和2M Na2CO3(300mL)。反应升至90℃同时剧烈搅拌4.5小时。隆起该混合物， 并且在EtOAc和水之间分配。有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤， 和浓缩。柱色谱(2-5％丙酮/己烷)得到(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3- 噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯E(i)(27.06g，78％)，其为黄 色油。
                           1H NMR(300MHz，CDCl3)1.43(s，9H)， 2.36(s，3H)，3.14(s，2H)，3.28(d，2H)，6.16(7，1H)，6.86(d，1H)，7.12-7.14 (m，3H)，7.32(叠加，1H)，7.41(d，2H).
4-2：(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(2-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸， 叔丁酯(中间体E(ii))
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-碘丙-1-烯-3-基)肌氨 酸，叔丁酯D和2-噻吩硼酸制备(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(2-噻吩基) 丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯E(ii)得到243mg(52％)的黄色油。
    1H NMR(300MHz，CDCl3)1.43(s，9H)，2.39(s，3H)，3.16(s，2H)， 3.38(d，2H)，6.16(s，1H)，6.90(d，1H)，7.04(叠加，1H)，7.19(d，2H)， 7.35(d，1H)，7.42(d，2H).
4-3：(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸，叔丁酯(中间体E(iii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-碘丙-1-烯-3-基)肌氨 酸，叔丁酯D和3-甲基-4-噻吩硼酸制备(Z)-N-(1-(4-溴苯 基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯E(iii)得 到574mg(61％)的黄色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)1.42(s，9H)，1.85 (s，3H)，2.33(s，3H)，3.10-3.12(m，4H)，6.35(t，1H)，6.99(d，1H)，7.03(d， 1H)，7.10(d，2H)，7.38(d，2H).
4-4：(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(2-(3-甲基噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸，叔丁酯(中间体E(iv))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-碘丙-1-烯-3-基)肌氨 酸，叔丁酯D和3-甲基-2-噻吩硼酸制备(Z)-N-(1-(4-溴苯 基)-1-(2-(3-甲基噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯E(iv)得到 436mg(47％)的黄色油。
                          1H NMR(300MHz，CDCl3)1.43(s，9H)，1.97 (s，3H)，2.35(s，3H)，3.12(s，2H)，3.16(d，2H)，6.43(t，1H)，6.90(d，1H)，7.14 (d，2H)，7.26(d，1H)，7.40(d，2H).
4-5：(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸， 叔丁酯(中间体E(v))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-碘丙-1-烯-3-基)肌氨酸， 叔丁酯D和2-甲苯甲酰硼酸制备(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(2-甲基苯基) 丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯E(v)得到379mg(66％)的黄色油。
实施例5-1：(Z)-N-(1-(4-4-异丙基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1- 烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(i))：
向(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸， 叔丁酯E(i)(21.14g，50.05mmol)在二甲氧基乙烷(210mL)中的溶液 内加入4-异丙基苯硼酸(16.41g，100.1mmol)、Pd(PPh3)4(2.89g， 2.50mmol)和2M Na2CO3(210mL)。将剧烈搅拌的混合物加热回流2小 时。冷却该混合物，并且在EtOAc和水之间分配。有机相用盐水洗涤， 干燥(MgSO4)，过滤，和浓缩。柱色谱(2-5％丙酮/己烷)，随后二次色 谱(2-20％EtOAc/己烷)得到(Z)-N-(1-(4-4-异丙基苯基)苯 基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(i)(18.65g， 81％)，其为黄色油。                        1H NMR(300MHz，CDCl3) 1.29(d，6H)，1.44(s，9H)，2.39(s，3H)，2.95(hept，1H)，3.16(s，2H)，3.30(d， 2H)，6.26(t，1H)，6.93(d，1H)，7.1 8(d，1H)，7.26-7.35(m，5H)，7.50-7.54(m， 4H).
5-2：(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸，叔丁酯(中间体F(ii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯E(i)和3-噻吩硼酸制备(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基) 苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(ii)，得到 1.00g(50％)的黄色油。
5-3：(Z)-N-(1-(4-(2-噻吩基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸，叔丁酯(中间体F(iii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯E(i)和2-噻吩硼酸制备(Z)-N-(1-(4-(2-噻吩基) 苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(iii)，得到 300mg(64％)的黄色油。
5-4：(Z)-N-(1-(4-(2-呋喃基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸，叔丁酯(中间体F(iv))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯E(i)和2-呋喃硼酸制备(Z)-N-(1-(4-(2-呋喃基) 苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(iii)，得到 216mg(82％)的黄色油。
              1H NMR(300MHz，CDCl3)1.44(s，9H)，2.38(s，3H)，3.16(s， 2H)，3.30(d，2H)，6.23(t，1H)，6.48(d，1H)，6.64(d，1H)，6.90(d，1H)，7.16(d， 1H)，7.26-7.35(m，3H)，7.46(s，1H)，7.58(d，2H).
5-5：(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(v))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯E(i)和3-甲氧基硼酸制备(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧 基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(v)得 到241mg(99％)的黄色油。
                              1H NMR(300MHz，CDCl3)1.44(s， 9H)，2.39(s，3H)，3.1 7(s，2H)，3.30(d，2H)，3.86(s，3H)，6.26(t，1H)，6.88- 6.93(m，2H)，7.12(s，1H)，7.18-7.19(m，2H)，7.33-7.38(m，4H)，7.52(d，2H). 5-6：(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(vi))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯E(i)和3-甲基苯基硼酸制备(Z)-N-(1-(4-(3-甲 基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(vi)得 到150mg(64％)的黄色油。
                        1H NMR(300MHz，CDCl3)1.45(s，9H)，2.40 (s，3H)，2.42(s，3H)，3.17(s，2H)，3.32(d，2H)，6.26(t，1H)，6.94(d，1H)， 7.15-7.19(m，3H)，7.30-7.41(m，5H)，7.52(d，2H).
5-7：(Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲氧基)苯基基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(vii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯E(i)和3-(3-三氟甲氧基)苯基硼酸制备 (Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲氧基)苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯 -3-基)肌氨酸，叔丁酯F(vi)，得到127mg(51％)的黄色油。
5-8：(Z)-N-(1-(4-(3-氰基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(viii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯E(i)和3-氰基苯基硼酸制备(Z)-N-(1-(4-(3-噻 吩基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(viii)得 到57mg(77％)的黄色油。
5-9：(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸，叔丁酯(中间体F(ix))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(2-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯E(ii)和3-噻吩硼酸制备(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基) 苯基)-1-(2-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(ix)得到 152mg(76％)的黄色油。1H NMR(300MHz，CDCl3)1.44(s，9H)，2.40(s，3H)， 3.18(s，2H)，3.41(d，2H)，6.24(t，1H)，6.94(d，1H)，7.06(dd，1H)，7.35-7.39 (m，4H)，7.46(d，1H)，7.54(d，2H).
5-10：(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基))丙-1- 烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(x))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯E(iii)和3-噻吩硼酸制备 (Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基))丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯F(x)得到222mg(64％)的黄色油。
5-11：(Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲基)苯基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩 基))丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(xi))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯E(iii)和3-(三氟甲基)苯基硼酸制备 (Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲基)苯基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基))丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(xi)得到260mg(54％)的浅黄色油。 5-12：(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)) 丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(xii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯E(iii)和3-甲氧基硼酸制备 (Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基))丙-1- 烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(xii)得到193mg(69％)的黄色油。
5-13：(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(2-(3-甲基噻吩基))丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(xii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(2-(3-甲基噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯E(iv)和3-甲基苯基硼酸制备 (Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(2-(3-甲基噻吩基))丙-1-烯 -3-基)肌氨酸，叔丁酯F(xiii)得到176mg(73％)的黄色油。1HNMR (300MHz，CDCl3)1.44(s，9H)，2.02(s，3H)，2.37(s，3H)，2.41(s，3H)，3.14 (s，2H)，3.19(d，2H)，6.50(t，1H)，6.92(d，1H)，7.16(d，1H)，7.26-7.39(m， 6H)，7.50(d，2H).
5-14：(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸，叔丁酯(中间体F(xiv))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-溴苯基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯 -3-基)肌氨酸，叔丁酯E(v)和3-噻吩硼酸制备(Z)-N-(1-(4-(3-噻 吩基)苯基)-1-(2-甲基噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(xiv) 得到62mg(48％)的黄色油。
实施例6-1：(Z)-N-(1-(4-(4-异丙基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸(G(i))：
将(Z)-N-(1-(4-4-异丙基苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌 氨酸，叔丁酯F(i)(18.62g，40.3mmol)溶解在96％甲酸(200mL)中。 使该溶液升至40℃过夜，随后浓缩。残余物与CH2Cl2共蒸发2次。柱 色谱(2-15％MeOH/CH2Cl2)得到浅黄色固体。用甲醇(MeOH)研制得到纯 (Z)-N-(1-(4-(4-异丙基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸G(i)(11.38g，70％)，其为白色固体。
                   1H NMR(300MHz，甲醇-d4)1.23(d，6H)，2.47(s， 3H)，2.92(hept，1H)，3.26(s，2H)，3.50(d，2H)，6.22(t，1H)，6.94(d，1H)，7.32 (d，4H)，7.46(d，1H)，7.57-7.65(m，5H).
6-2：(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸(G(ii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)1-(3-噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(ii)制备(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯 基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸G(ii)得到486mg(61％)的 白色粉末。
6-3：(Z)-N-(1-(4-(2-噻吩基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸(G(iii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(2-噻吩基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(iii)制备(Z)-N-(1-(4-(2-噻吩基) 苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸G(iii)得到145mg(53％) 的白色粉末。
6-4：(Z)-N-(1-(4-(2-呋喃基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸(G(iv))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(2-呋喃基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯 -3-基)肌氨酸，叔丁酯F(iv)制备(Z)-N-(1-(4-(2-呋喃基)苯基)-1-(3- 噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸G(iv)得到158mg(97％)的无色油。
        1H NMR(300MHz，甲醇-d4)2.74(s，3H)，3.63(s，2H)， 3.88(d，2H)，6.31(t，1H)，6.42(s，1H)，6.58(d，1H)，6.80(d，1H)，7.10(s，1H)， 7.25(d，2H)，7.31(叠加，1H)，7.41(s，1H)，7.52(d，2H).
6-5：(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸(G(v))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基) 丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(v)制备(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯 基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸G(v)得到156mg(74％) 的米色粉末。
1H NMR(300MHz，甲醇-d4)2.76(s，3H)，3.56(s，2H)，3.82(s，3H)，3.91 (d，2H)，6.36(t，1H)，6.82-6.88(m，2H)，7.06-7.11(m，3H)，7.26-7.32(m，4H)， 7.46(d，2H).
6-6：(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸(G(vi))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基) 丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(vi)制备(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基) 苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸G(vi)得到127mg(100％) 的无色油。
1H NMR(300MHz，甲醇-d4)2.38(s，3H)，2.76(s，3H)，3.56(s，2H)，3.90 (d，2H)，6.36(t，1H)，6.83(d，1H)，7.10-7.15(m，2H)，7.24-7.33(m，6H)，7.46 (d，2H).
6-7：(Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲氧基)苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸(G(vii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲氧基)苯基)苯基)-1-(3- 噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(vii)制备 (Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲氧基)苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯 -3-基)肌氨酸G(vii)得到80mg(78％)的白色粉末。
6-8：(Z)-N-(1-(4-(3-氰基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸(G(viii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-氰基苯基)苯基)-1-(3-噻吩基) 丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(viii)制备(Z)-N-(1-(4-(3-氰基苯 基)苯基)-1-(3-噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸G(viii)得到 48mg(84％)的白色粉末。
6-9：(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-噻吩基)丙-1-烯-3-基) 肌氨酸(G(ix))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-噻吩基)丙-1-烯 -3-基)肌氨酸，叔丁酯F(ix)制备(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基苯基)-1-(2-噻 吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸G(ix)得到108mg(59％)的白色粉末。
               1H NMR(3D0MHz，CDCl3)2.73(s，3H)，3.44(s，2H)，3.88(d， 2H)，6.14(t，1H)，6.90(d，1H)，7.04(dd，1H)，7.26-7.34(m，4H)，7.38-7.41(m， 2H)，7.48(d，2H).
6-10：(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)丙-1- 烯-3-基)肌氨酸(G(x))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻 吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(x)制备(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩 基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸G(x)得到 157mg(82％)的白色粉末。
6-11：(Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲基)苯基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩 基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸(G(xi))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲基)苯基)苯 基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(xi)制备 (Z)-N-(1-(4-(3-(三氟甲基)苯基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基)丙 -1-烯-3-基)肌氨酸G(xi)得到99mg(73％)的白色粉末。
6-12：(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-(4-甲基噻吩基) 丙-1-烯-3-基)肌氨酸(G(xii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-(4-甲 基噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(xii)制备 (Z)-N-(1-(4-(3-甲氧基苯基)苯基)-1-(3-(4-噻吩基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸G(xii)得到152mg(69％)的白色粉末。
6-13：(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(2-(3-甲基噻吩基))丙 -1-烯-3-基)肌氨酸(G(xiii))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(2-(3-甲基 噻吩基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(xiii)制备
(Z)-N-(1-(4-(3-甲基苯基)苯基)-1-(2-(3-甲基噻吩基))丙-1-烯 -3-基)肌氨酸G(xiii)得到129mg(99％)的白色粉末。
                     1H NMR(300MHz，甲醇-d4)1.97(s，3H)，2.38 (s，3H)，2.80(s，3H)，3.58(s，2H)，3.81(d，2H)，6.65(t，1H)，6.90(d，1H)，7.15 (叠加，1H)，7.26-7.38(m，6H)，7.48(d，2H).
6-14：(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3- 基)肌氨酸(G(xiv))：
以相似方式由(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基)苯基)-1-(2-甲基苯基) 丙-1-烯-3-基)肌氨酸，叔丁酯F(xiv)制备(Z)-N-(1-(4-(3-噻吩基) 苯基)-1-(2-甲基苯基)丙-1-烯-3-基)肌氨酸G(xiv)得到37mg(61％) 的白色粉末。
实施例7：经过GlyT-1的转运的鉴定
本实施例描述一种测量由转染培养细胞摄入的甘氨酸的方法。
用HEPES缓冲盐水(HBS)洗涤由GlyT-1C稳定转染的细胞(参见 Kim等，Molecular Pharmacology，45，1994：608-617)两次。随 后将细胞在37℃下温育10分钟，此后加入含有50nM[3H]甘氨酸 (17.5Ci/mmol)的溶液，以及(a)无潜在的竞争剂，(b)10mM非放射性 甘氨酸或者(c)一定浓度的候选药物。候选药物的浓度范围用于产生数 据，以便计算达到50％作用的浓度(例如IC50s，其是抑制半数甘氨酸 摄取时的浓度)。随后加入含有终浓度为50nM的[3H]甘氨酸 (17.5Ci/mmol)。此后细胞在37℃下继续温育并轻微振摇，之后抽吸 出反应混合物并用冰冷的HBS洗涤3次。细胞用闪烁体溶解并平衡。 用闪烁计数器测定细胞中的放射性。根据进行的分析，比较与候选药物 接触或未接触的同样细胞之间的数据。
本发明的化合物是活性GlyT-1抑制剂。
实施例8：结合NMDA受体有关甘氨酸结合位点的试验
本实施例描述一种用于测量化合物与NMDA受体上的甘氨酸位点的 相互作用。在这个试验中试验一种已知的NMDA甘氨酸位点结合剂(氚 代-MDL，105519，得自Amersham)结合大鼠海马组织。此后引入试验 化合物并允许替代强放射性配体(hot ligand)。试验化合物的结合将 强放射性配体且使放射性减小，由此可以定量。化合物一般是在两种浓 度下测试，如果观察到抑制作用就在数个浓度下重新试验该化合物得到 剂量反应曲线，由此可以测定IC50。
通过用50mM Tris醋酸盐缓冲液稀释制备试验用的试验化合物。试 验中使用的大鼠海马膜试样用冷的10mM Tris醋酸盐缓冲液洗涤2次 并在20,000rpm下超离心15分钟，并且在洗涤之间进行再均化。将最 后的沉淀团重新悬浮在50mM Tris醋酸盐缓冲液中提供浓度适合试验 的膜。在1mM甘氨酸的存在下确定非特应性结合。总的结合是在只有 Tris醋酸盐缓冲液的存在下确定。
通过将75μg含[3H]-MDL 105519至终浓度为5nM的匀浆海马膜标 本与甘氨酸或试验化合物的在Tris醋酸盐缓冲液中的溶液混合制备反 应混合物。振摇反应且在室温下温育30分钟。随后在GFC滤器上用48w Brandell收获器收获平板。该GFC用0.5％的BSA的蒸馏水溶液预处 理至少30分钟以减少强放射性配体与滤器的非特应性结合。平板孔用 4-5个体积的冷50mM Tris醋酸盐缓冲液洗涤。随后滤器转移到闪烁 瓶中并向各瓶中加入2mL闪烁体。允许瓶子放置过夜之后在Beckman β 计数器中计数。用Prism软件分析数据。
本发明的化合物显示对于NMDA受体有关甘氨酸结合位点没有显著 的结合作用。
实施例9：甘氨酸受体结合试验
本实施例描述一种用于测量所述化合物与甘氨酸受体的交叉反应 性的试验。在本试验中已知甘氨酸受体结合剂[3H]-马钱子碱用来结合 大鼠脊髓组织。随后引入试验化合物并允许替代强放射性配体并导致放 射性降低，由此可以定量。化合物一般是在两种浓度下测试，如果观察 到抑制作用就在数个浓度下重新试验该化合物得到剂量反应曲线，由此 可以测定IC50。
提供在磷酸钾缓冲液中稀释制备分析用的试验化合物。试验中使用 的大鼠脊髓膜的试样用2份的冷磷酸盐缓冲液洗涤，随后在洗涤之间在 4℃、14,000rpm下微量离心。将最终的沉淀团重新悬浮在一个体积的 磷酸盐缓冲液中达到适合分析条件的浓度。分别通过终浓度为10mM的 单用甘氨酸和磷酸盐缓冲液确定非特异性和总的结合。
将含有[3H]-马钱子碱至终浓度为7nM的150μg大鼠脊髓膜与甘氨 酸或试验化合物混合制备反应混合物。将反应混合物温育2小时同时在 冰上振摇。随后随后在GFC滤器上用48w Brandall收获器收获平板。 该GFC用0.5％的BSA的蒸馏水溶液预处理至少30分钟以减少强放射 性配体与滤器的非特应性结合。平板孔用4-5个体积的冷磷酸盐缓冲液 洗涤。随后滤器转移到闪烁瓶中并向各瓶中加入2mL闪烁体。允许瓶子 放置过夜之后在Beckman β计数器中计数。用Prism软件分析数据。
本发明的化合物证实对甘氨酸受体没有明显的结合作用。
实施例10：测量在小鼠中的毒性的试验
本实施例描述了对于GlyT-1抑制剂的5天慢性口服给药毒性研究。 化合物经口(P0)以40mg/kg/天施用给雄性CD-1小鼠5天。每天记录 所有被测化合物的行为观察(临床症状)和体重。雄性CD-1小鼠购自 Charles River Labs(Kingston，NY)。运抵时称量动物体重为 20-25g。试验之前5天使动物适应温度/湿度(72°±5°F/50％±5％)控制 的动物园地，以及常规的12小时光照/黑暗循环(在0700点照射)。所 有动物在适应期间和整个研究期间随意获得食物(Purina Labdiet Rodent chow#5001)和水(Elizabethtown Water Company提供)。 在试验开始前一天随机分为数组：试验选择的所有动物体重至少20g 且表现出良好的状况。各动物每天给药1次共5天。在长时间给药期之 后动物在原地保持共3天的恢复期。
各试验化合物的储备浓度是在研究开始的当天新制备。试样稀释至 每天给药所需的浓度。当不使用时储备溶液保存在冰箱中。将各化合物 溶解在少量的蒸馏水中。可以加入1当量的氢氧化钠(2N)协助各试验 试剂的溶解。此后加入能够达到最终体积量的载体。适当时调整最终体 积以反映出游离碱的百分比。本实施例使用的载体是羟丙基-β-环糊精 (HPCD)Aeros，批号011849601，其溶解在蒸馏水中达到10％重量/ 体积的浓度。用氢氧化钠(2N)调节pH，至等于试验试剂的pH(通常为 8-10)。
所有制备的试验化合物或者是溶液，并且澄清，或者是混悬液，并 且略微浑浊。混悬液在使用之前即刻混合。
所有动物经21规口饲管针经口(PO)给予用试验化合物或载体，给 予的体积为10.0mg/kg。每天的体重用于决定各自的给药体积。所有 试验化合物杂Denver Instruments分析天平(#A-250型)上称重。动 物在#LS2000型的顶部负载的Ohaus手提天平上称重。
给予试验试剂后立刻评估动物的外表行为(临床症状)，随后在4和 24小时时进行评估。动物评估下列27种独立临床症状：
活动：              如果动物异常描述为过度-或低度-活跃。
共济失调            不稳定步态，没有能量协调随意肌肉运动。
僵直症：            一种特征在于肢体的僵化的标准，它可以发生在
                    不同位置，其保持一段时间，缺乏对刺激的反应，
                    显示出脉搏和呼吸，并且皮肤苍白
色素尿：            尿中有微红的排出物。
血泪症：            眼中有微红的排出物
粪便的状况：        柔软且水样，硬且少
惊厥：              阵挛性：骨骼肌的弥散性间隙紧张和松弛
                    紧张性：弥散性不变肌肉紧张，常常伴随后和/
                    或前肢伸长
发绀：              外部组织(耳、趾、尾)的蓝色
死亡：              自发性的清晰特征，或安乐处死的
眼球内陷：          盐球向眼框内的异常缩回
鼻出血：            鼻中出现微红排出物
眼球突出：          眼球的异常前突
没气力：            骨骼肌似乎无法紧张
弯腰隆起姿态：      动物似乎高高行走离开地面
对触摸的过敏：      在处理过程中动物发声，或者变得过度活跃。
流泪(两只眼)：      分泌和排出眼泪
侧斜卧：            动物自发地仰卧
正位的丧失：        动物在以该体位放置时保持仰卧
缩瞳：              眼睛瞳孔过度收缩
瞳孔扩大：          眼睛瞳孔过度扩大
上眼睑下垂：        是指两只眼睛的上眼睑的垂下
立毛：              背部和颈部的毛发直立
罗音(湿或干性)：    湿性(粘膜)：在呼吸过程听到的水泡声
                    干性：呼吸过程中听到的刺耳或音乐性声音
呼吸(↑↓)          这种活动的异常增加或减弱
僵化：              蜡样：肢体保持在它们被放置的位置
                    铅管：肌肉强直，肢体难以移动。
流涎(增多)：        唾液的形成和过度分泌
镇静：              当被触摸或处理时动物反应缓慢
刻板症：            某些无意义活动的持续重复
震颤：              细：身体和/或四肢的持续快速振动。
                    粗：身体和/或四肢的快速收缩，它看似随时间增
                    加和减少
任何表现出1)体重损失，其数值连续2天减小至对照组平均值的 75％，或2)濒死状况的出现，使动物无法再正常进食或饮水，的动物 在研究结束之前处死。
通过上述试验获得的对于化合物Gi-Gxiv的毒性数据在表1-14中 给出。在给药后立刻观察动物并在4小时和24小时时重复观察。用下 表的代码数报告观察结果：
0表现正常       7鼻出血   14上睑下垂   21僵化
1活跃(增加/减少)8发绀     15正位的丧失 22共济失调
2镇静/昏睡      9没气力   16色素尿     23震颤
3立毛           10呼吸    17流涎       24惊厥
4刻板症         11弯腰隆起18流泪       25僵直症
            姿态
5软粪便    12眼球内陷 19缩瞳        26侧斜卧
6血泪症    13眼球突出 20瞳孔扩大    27死亡
表1：化合物G(iii) 4小时                     天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     14     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     14，10     0 24小时                      天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
表2：化合物G(viii) 4小时                   天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                     天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
表3：化合物G(xiv) 4小时                   天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                  天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
表4：化合物G(ix) 4小时                   天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                    天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
表5：化合物G(ii) 4小时                                   天  动物    #     剂量     (mg/kg)     1     2     3   4   5     1     40     0     0     0   1，22，26，15   1，H     2     40     0     0     0   1，22，24+，26，15，14   1，22，15，14     3     40     0     0     0   0   0  24小时                                         天  动物  #     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
H-头引起
+触摸激发的
表6：化合物G(x) 4小时                    天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                    天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     -     2     40     0     0     0     0     -     3     40     0     0     0     0     -
表7：化合物G(xii) 4小时                 天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                 天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     -     2     40     0     0     0     0     -     3     40     0     0     0     0     -
表8：化合物G(xi) 4小时                   天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                    天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     -     2     40     0     0     0     0     -     3     40     0     0     0     0     -
表9：化合物G(xiii) 4小时                 天   动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                   天   动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     -     2     40     0     0     0     0     -     3     40     0     0     0     0     -
表10：化合物G(i) 4小时                     天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                   天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
表11：化合物G(v) 4小时                  天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                    天   动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
表12：化合物G(vi) 4小时                    天   动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                   天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
表13：化合物G(vii) 4小时                   天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0  24小时                  天  动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
表14：化合物G(iv) 4小时                                                 天   动物   #     剂量     (mg/kg)     1     2     3    4     5     1     40     14     0     14    0     14     2     40     1，22，14，10，2     1，22，15，10     0    1，22，14，H，10，2     0     3     40     0     0     14    0     0  24小时                                            天   动物   #     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     0     0     0     0     0     2     40     0     0     0     0     0     3     40     0     0     0     0     0
H-头引起的
通过比较，式1的化合物比其它效价相似的GlyT1抑制剂低毒。例如 下列化合物H、I、J和K，证实局部比表15、16、17和18中的本发 明化合物具有更高的毒性性能。

表15：化合物H*                                                  天  动物  #    剂量    (mg/kg)  1   2     3  4     5     1     40  0   0     0  1，22，8，14，10，2     1，2     2     40  0   1，22，10，2     1，26，15，3，10，2  0     1，2     3     40  1，3，14，2   1，22，14，2     1，22，9，10，2  1，9，26，15，14，10，2     1，2
*在本实验中每天只记录一次行为结果。
表16：化合物I  4小时                                                    天   动物   #     剂量     (mg/kg)     1     2 3     4     5     16     40     ↓1，26，↓10     ↓1，22，26↓10 ↓1，22，↓10     ↓1，22，26，↓10，1 ↓1，22，↓10     17     40     ↓1，22，↓10     ↓1，22，↓10 ↓1，26，↓10     ↓1，26，15，↓10 ↓1，26，↓10     18     40     ↓1，22，26，↓10     ↓1，22，↓10 ↓1，22，26，↓10     ↓1，22，↓10 ↓1，22，↓10  24小时                                                           天   动物   #     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4    5     16     40     0     0     0     0    -     17     40     0     0     0     0    -     18     40     0     0     0     0    -
I＝严重瘙痒
表17：化合物J  4小时                                  天 动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     10     0     0     0     0     0     2     10     0     0     0     0     0     3     10     0     0     0     0     0  24小时                                    天 动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     25     0     1，2     1，9，18，26，15，14，10，2*     -     -     2     25     0     0     1，6，9，18，26，15，14，10，2*     -     -     3     25     0     0     1，9，18，26，15，14，10，2，23*     -     -
表18：化合物K  4小时     天 动物#     剂量     (mg/kg)     1     2     3     4     5     1     40     1     -     -     -     -     2     40     0     -     -     -     -     3     40     0     1，22，24，15，2     -     -     -  24小时     天 动物#     剂量     (mg/kg)  1  2     3     4     5     1     40  1，22，18，26，15，14，  10，23，27*  -     -     -     -     2     40  1，26，15，14，10，27*  -     -     -     -     3     40  1.26  1，22，24，15，14，10，23，27*     -     -     -
*动物由于濒死状况被处死。