1. 发明领域

本发明涉及采用NAALADase抑制物来治疗谷氨酸异常的 方法，在动物中产生神经元活性的方法，以及含有对治疗谷氨酸 异常和在动物中产生神经元活性为有效剂量的NAALADase抑制 物的组合物。

2. 本发明的现有技术

                   谷氨酸异常

谷氨酸涉及在众多的神经性疾病中，包括例如，癫痫、中 风、早老性痴呆、帕金森氏症、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、杭 廷顿氏疾病、精神分裂症、慢性疼痛、局部缺血、以及在患有了 氧不足、低血糖、局部缺血、昏迷和神经侵伤后的神经元损失中。 当神经元缺氧时，它们就大量释放谷氨酸，如中风或心脏病发作 等使脑局部缺血中。这些过量释放的谷氨酸会进而过分刺激 NMDA、AMPA、Kainate和MGR受体(兴奋性毒性， excitotoxicity)。当谷氨酸与这些受体结合后，神经元细胞膜的 离子通道就打开，使离子可以通过细胞膜，例如，Ca2+和Na+离 子进入细胞，而K+离子从细胞中出来。离子的这些流动，特别 是Ca2+离子的流入，对这些神经元造成过分刺激。被过分刺激的 神经元分泌更多的谷氨酸，造成多米诺连锁反应，最后通过产生 蛋白酶、脂肪酶、和游离基团等而导致细胞死亡。

已经证明的是，通过对MADA、AMPA、Kainate和MGR 受体的封闭来防止兴奋性毒性是很困难的，因为每一种受体都有 多个可以结合谷氨酸的位点。因此，迄今为止，还没有对谷氨酸 异常的有效治疗。

                NAALADase抑制物

NAAG和NAALADase已经牵连于一些人和动物的疾病。 例如，已经证实了在海马内注射NAAG可以引发长时间的癫痫。 最近，有报道说，遗传性易于发生癫痫的大鼠都具有NAALADase 基本水平的持续增高。这些现象提供了对突触间谷胺酸的提高可 以增加癫痫发生率这种假说的支持，并且建议NAALADase抑制 物可以提供抗癫痫的活性。

NAAG和NAALADase还牵连于ALS的病因以及在病理上 相似的称为遗传性犬牙脊柱肌肉萎缩症(Hereditary Canine Spinal Muscular Atrophy，HCSMA)的病因。已经证实的是，NAAG和 其代谢物如NAA、谷胺酸、天冬氨酸等的浓度在ALS患者和患 有HCSMA的狗的脑脊髓液中升高了2-3倍。此外，NAALADase 活性在死亡的ALS患者和患有HCSMA的狗的脊柱组织中被明 显地提高了(2-3倍)。因此，如果NAAG是对于这些酸性氨基 酸和肽的CSF水平的改变负有责任的话，则NAALADase抑制物 就可以用于临床限制ALS的发展。

在死亡的精神分裂症患者的脑子中的NAAG水平和 NAALADase活性的异常已经被报道了，特别是在额叶前部和缘 脑区域更是如此。

上述的发现都建议NAALADase抑制物可以用于治疗谷胺 酸异常。事实上，本发明的发明者们所进行的研究的结果确认了 NAALADase抑制物可以有效地治疗谷氨酸异常，特别是中风、 帕金森氏症、肌萎缩性侧索硬化和脊索损伤等。

虽然已经发现和鉴定了一些NAALADase抑制物，但是，它 们都仅仅用在非临床的研究中。这些抑制物的例子包括，常规金 属肽酶抑制物如o-菲咯啉、金属螯合物如EGTA和EDTA、肽的 类似物如使君子酸和β-NAAG等。因此，就存在着鉴定更多新的 NAALADase抑制物的需要，以及利用这些新的和已知的众多 NAALADase抑制物来治疗谷氨酸异常的药用组合物和方法。

本发明的概述

本发明涉及一种药用组合物，该组合物包括：

(i)对治疗谷氨酸异常或在动物中产生神经元活性为有效

   剂量的NAALADase抑制物；和

(ii)药理学可接受的载体。

本发明还涉及治疗动物的谷氨酸异常的方法，该方法包括给 所述的动物提供有效剂量的NAALADase抑制物。

本发明还涉及在动物中产生神经元活性的方法，该方法包括 给所述的动物提供有效剂量的NAALADase抑制物。

附图的简要说明

图1是条块图，以局部缺血(氰化钾和2-脱氧葡萄糖)的体 外毒性对各种剂量的2-(膦酰基甲基)戊二酸处理的皮层细胞培 养物作图。

图2是条块图，以体外毒性对各种剂量的NAAG处理的皮 层细胞培养物作图。

图3是条块图，以用2-(膦酰基甲基)戊二酸处理后的体外 毒性对用各种剂量的2-(膦酰基甲基)戊二酸处理的皮层细胞培 养物作图。

图4是条块图，以用局部缺血的体外毒性对用2-(膦酰基甲 基)戊二酸在不同的时间处理的皮层细胞培养物作图。

图5是条块图，显示体内皮层损伤体积对在经受了中脑动脉 阻塞后的大鼠以各种剂量的2-(膦酰基甲基)戊二酸处理作图。

图6是条块图，显示活体大鼠总脑梗死体积对经受了中脑动 脉阻塞后的大鼠在不同时间接受2-(膦酰基甲基)戊二酸处理作 图。

图7是条块图，以活体大鼠的纹状体内的细胞外谷氨酸的升 高对经受了中脑动脉阻塞后的大鼠在不同时间接受载体或2-(膦 酰基甲基)戊二酸处理作图。

图8是条块图，以活体大鼠的顶骨皮质的细胞外谷氨酸的升 高对经受了中脑动脉阻塞后的大鼠在不同时间接受载体或2-(膦 酰基甲基)戊二酸处理作图。

图9是条块图，以活体大鼠的额部皮质的细胞外谷氨酸的升 高对经受了中脑动脉阻塞后的大鼠在不同时间接受载体或2-(膦 酰基甲基)戊二酸处理作图。

图10(a)是在冷冻愈伤后以载体处理的小鼠坐骨神经的显 微照相。

图10(b)是在冷冻愈伤后以2-(膦酰基甲基)戊二酸处理 的小鼠坐骨神经的显微照相。

图11是条块图，以纹状体TH神经分布密度对用载体自身、 在MPTP后加载体、在MPTP后加2-(膦酰基甲基)戊二酸处 理的小鼠作图。

图12是条块图，以神经功能结对用强啡肽A自身、或2-(膦 酰基甲基)戊二酸和强啡肽A一起处理的大鼠作图。

图13是条块图，以大鼠脊索器官型培养物的ChAT活性对 用2-(膦酰基甲基)戊二酸自身、THA自身、或THA加2-(膦 酰基甲基)戊二酸处理的培养物作图。

图14是条块图，以大鼠脊索器官型培养物的ChAT活性对 用各种剂量的2-(膦酰基甲基)戊二酸处理的在有THA存在条 件下的培养物作图。

本发明的详细叙述

                       定义

“化合物3”指的是2-(膦酰基甲基)戊二酸(PMPA)。

“谷氨酸异常”指的是任何牵涉谷氨酸的疾病、紊乱、或病 状，包括涉及谷氨酸水平升高的病理状态。例如，谷氨酸异常包 括癫痫、中风、早老性痴呆、帕金森氏症、肌萎缩性侧索硬化 (ALS)、杭廷顿氏疾病、精神分裂症、慢性疼痛、局部缺血、 以及神经元损伤。

“谷氨酸调节剂”指的是那些自身或与其它的制剂一起可以 影响动物的谷氨酸水平的组合物。

“抑制”一词，在涉及酶的时候指的是可逆转酶抑制，例如 竞争性、不竞争性和非竞争性抑制。竞争性、不竞争性和非竞争 性可以是通过抑制物对酶的动力学反应的效果来区分。竞争性抑 制是在抑制物以与正常的底物竞争结合位点的方式与酶相结合 时发生。抑制物和酶之间的亲和性可以通过抑制物常数Ki来测 量，其定义是： $K_i=\frac{\left[E\right]\left[I\right]}{\left[\mathrm{EI}\right]}$ 其中[E]是酶的浓度，[I]是抑制物的浓度，[EI]是由酶与抑制物形 成的复合体的浓度。除非另有说明，Ki在本文中指的是本发明的 化合物与NAALADase之间的亲和性。“IC50”是用于定义引起 对靶标酶的50％抑制所需的化合物的浓度或数量的术语。

“局部缺血”一词指的是由于动脉血流的障碍而导致的局部 组织的贫血。当供应整个脑部的血流停止一定时间后，会发生全 面性缺血，例如，发生心动停止时。当一部分的脑子的供血达不 到正常的供血时，例如，在发生了脑血管的血栓、脑外伤、脑水 肿和脑瘤时，都可能发生病灶性局部缺血。虽然可能是暂时的， 但全面性和病灶性缺血都会造成广泛的神经元损伤。虽然神经组 织的损伤会在缺血发生后的数小时或数天后出现，但是，在脑部 供血被停止后的最初几分钟内，会发生一些神经组织的永久性损 伤。很多的这种损伤都牵连于谷氨酸毒性，组织的二次供血的结 果，如对内皮的损伤而使作用于血管的产物被释放，对组织的损 伤而造成细胞毒性物质的释放，如游离基团和白细胞三烯等。

“NAAG”指的是N-乙酰基-天冬氨酰基-谷胺酸，它是大脑 中的一种重要的肽，其水平相当于主要的抑制物神经递质γ-氨基 丁酸(GABA)。NAAG是神经元特异性的，存在于突触小泡内 并且在假定为谷胺酸型的神经系统中受到神经刺激时释放出 来。众多的研究表明NAAG可以作为神经递质和/或神经调控物 质存在于中枢神经系统，或者作为神经递质谷胺酸的前体。

“NAALADase”指的是N-乙酰化的α-连接的酸性二肽酶， 这是一种膜结合的金属肽酶，它将NAAG代谢为N-乙酰基天冬 氨酸(NAA)和谷胺酸：

          NAALADase对NAAG的代谢

NAALADase表现了对NAAG的高度亲和性，其Km为540 nM。如果NAAG是生物活性的肽，那么NAALADase就是可以 引发非活性的NAAG的突触的作用。另外，如果NAAG是起谷 胺酸的前体的作用，那么NAALADase的主要功能就可以是调节 突触性谷胺酸。

“神经功能”指的是神经系统的各种功能，它们的作用之 一是提供身体对内部和外部环境的认识，使有机体的各个结构单 元之间的自主性和反射性活动成为可能，平衡有机体对环境改变 的反应。

“神经侵伤”指的是对神经组织的任何损伤，以及由此而 造成的功能障碍和死亡。造成神经侵伤的原因可以是代谢、毒 性、神经毒性、医原性、热源或化学性的，包括但不限于局部缺 血、氧不足、脑血管损伤、外伤、手术、压力、团块效应、出血、 辐射、血管痉挛、神经降解疾病、神经降解过程、感染、帕金森 氏症、ALS、髓鞘形成/髓鞘去除过程、癫痫、识别障碍、谷氨酸 异常及其次级效应等。目前，还没有已知的对神经损伤的有效治 疗。

“神经组织”指的是构成神经系统的各种组分，包括但不 限于神经元、神经支持细胞、神经胶质、神经鞘细胞、这些结构 内含有的和供应给它们的脉管系统、中枢神经系统、脑子、脑干、 脊索、中枢神经系统与外周神经系统的交接、外周神经系统和有 关的结构。

“神经保护”指的是对神经侵伤的降低、终止、或缓解的 效应，和对已经受到神经侵伤的神经组织的保护、复苏、或恢复 的效应。

“药理学可接受的盐”指的是本发明的化合物的盐，它们具 有所期望的药理学活性并且不是生物学上或根据其它原因所排 斥的。这些盐可以由无机酸来形成，例如乙酸、己二酸、藻酸、 天冬氨酸、苯甲酸、苯磺酸、二硫丁酸、柠檬酸、樟脑酸、樟脑 磺酸、环戊丙酸、二葡糖酸、十二烷基硫酸、乙烷磺酸、富马酸、 葡庚糖酸、甘油磷酸、半硫酸庚酸、己酸、盐酸氢溴酸、碘酸、 2-羟基乙烷磺酸、乳酸、马来酸、甲烷磺酸、2-萘磺酸、烟酸、 草酸、硫代氰酸、甲苯磺酸、和十一烷酸。与碱形成的盐包括铵 盐、碱金属盐如钠盐和钾盐、碱土金属盐如钙盐和镁盐、与有机 碱形成的盐如二环己胺盐和N-甲基-D-葡糖胺、以及与氨基酸如 精氨酸或赖氨酸形成的盐类。碱性含氮基团可以是与各种试剂季 铵化的，这些试剂包括低级烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基、 或丁基的氯化物、溴化物或碘化物；二烷基硫酸盐例如二甲基、 二乙基、二丙基、二丁基或二戊基的硫酸盐；长链的卤化物如癸 基、月桂基、肉豆蔻基、或硬脂基的氯化物、溴化物或碘化物； 以及芳香基卤化物如苄基或苯乙基溴化物。 术语“治疗”指的是： (i)   在那些可能已经预先暴露于疾病、紊乱和/或病态但还

  没有被确诊的动物中防止疾病、紊乱或病态的发生； (ii)  抑制疾病、紊乱或病态，例如，终止其发展；以及 (iii) 消除疾病、紊乱或病态，例如，造成疾病、紊乱和/

  或病态的消退。

               本发明的药用组合物

本发明涉及的药用组合物包括：

(i)  对在动物中治疗谷氨酸异常或产生神经元活性为有

     效剂量的NAALADase抑制物；以及

(ii) 药理学可接受的载体。

这些药用组合物还可以进一步包括至少一种其它的药剂。

由于NAALADase是金属肽酶，本发明的药用组合物中可以 使用的NAALADase抑制物包括具有已知的抑制金属肽酶的功能 团的小分子化合物，例如，羟基氧膦基衍生物。

依据科技文献，在NAALADase对NAAG的识别中，谷氨酸 起着比天冬氨酸更为重要的作用。因此，优选的NAALADase抑 制物是谷氨酸衍生的羟基膦酰基衍生物，酸性肽类似物或其混合 物。

优选的酸性肽类似物选自Asp-Glu、Glu-Glu、Gly-Glu、γ- Glu-Glu和Glu-Glu-Glu。

优选的NAALADase抑制物是具有如下式I的谷氨酸衍生的 羟基膦酰基衍生物： 或其药理学可接受的盐、或其水合物，其中：

R1是选自氢、C1-C9直链或分支的烷基、C2-C9的直链或 分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、或Ar，其 中，所述的R1是取代的或未取代的，取代基为羧基、C3-C8 的环烷基、C5-C7环链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、 C1-C6直链或分支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、 C1-C9的烷氧基、C2-C9的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 Ar、或它们的混合物；

X是CR3R4、O或NR1；

R3和R4是分别选自羟基、C1-C6直链或分支的烷基、 C2-C6的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链 烯基、Ar、卤素、或它们的混合物；

R2是C1-C9直链或分支的烷基、C2-C9的直链或分支的 链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、或Ar，其中，所 述的R2是被取代的或未被取代的，取代基是C3-C8的环烷 基、C5-C7环链烯基、Ar、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、 C1-C6直链或分支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、 C1-C6的烷氧基、C2-C6链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、 Ar或它们的混合物；

Ar选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚 基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、2-噻 吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、苄基或 苯基，其中所述的Ar是被取代的或未被取代的，取代基是 卤、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6的直链的或分支的烷基、 C2-C6的直链的或分支的链烯基、C1-C6的烷氧基、C2-C6的 链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、或它们的混合物。

优选的X是CH2。

较优选的是，R2被羧基取代。

更优选的是，R1是氢、C1-C4直链或分支的烷基、C2-C4的直 链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、苄基或苯 基，其中，所述的R1是被取代的或未被取代的，取代基为羧基、 C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、 C1-C6直链或分支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C4 烷氧基、C2-C4的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、苄基、苯 基、或它们的混合物；并且R2是C1-C2烷基。

特别优选的是，谷氨酸衍生的羟基膦酰基衍生物选自下组：

2-(膦酰基甲基)戊二酸；

2-(膦酰基甲基)琥珀酸；

2-{[(2-羧基乙基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(环己基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-{[(环己基)甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(苯基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-{[(苯甲基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯乙基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯丙基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯丁基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(五氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(甲氧基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2，3，4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯基丙-2-基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[[(羟基)苯基甲基]羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-氟代苯基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-三氟代甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；和

它们的药理学可接受的盐和水合物。

在其它的实施方案中，R2是C3-C9烷基；R1选自2-吲哚基、 3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、四氢 吡喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、 或是被取代的C1-C4的直链的或分支的烷基，取代基是苄基或苯 基，其中所述的Ar是被取代的或未被取代的，取代基是2-吲哚 基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2- 噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基；或R1 是、1-萘基、2-萘基、或被1-萘基或2-萘基取代的C1-C4的直链 的或分支的烷基。

这些实施方案中的优选的化合物包括：

2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]己二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]己二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]庚二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]庚二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]辛二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]辛二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]壬二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]壬二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]癸二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]癸二酸；

2-{[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(四氢呋喃)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(四氢呋喃)乙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(四氢呋喃)丙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-四氢吡喃)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-四氢吡喃)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-四氢吡喃)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-吡啶基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-吡啶基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-吡啶基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(四氢呋喃)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-吲哚基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-吲哚基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-吲哚基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-噻吩基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-噻吩基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-噻吩基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]甲基}戊二酸；和

它们的药理学可接受的盐和水合物。

在另一个优选实施方案中，X是CH2，且R2选自氢、C1-C9 直链或分支的烷基、C2-C9的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷 基、C5-C7环链烯基、苄基和苯基，其中，所述的R2是被取代的 或未被取代的，取代基是C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、C1- C6直链或分支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C4的烷 氧基、苯基、或它们的混合物。

较优选的是，R1是氢、C1-C4直链或分支的烷基、C2-C4的 直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、苄基或 苯基，其中，所述的R1是被取代的或未被取代的，取代基为羧 基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟 甲基、C1-C6直链或分支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、 C1-C4烷氧基、C2-C4的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、苄基、 苯基、或它们的混合物。

更优选地是，谷氨酸衍生的羟基氧膦基衍生物选自下组：

3-(甲基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(乙基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(丙基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(丁基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(环己基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-[(环己基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-(苯基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(苯基乙基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(苯基丙基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(苯基丁基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-[(2，3，4，-三甲氧基苯基)-3-羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-(苯基丙-2-基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-乙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-丙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-丁基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-环己基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(环己基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-苯基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-苄基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-苯基乙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-苯基丙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-苯基丁基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(2，3，4-三甲氧基苯基)丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-苯基丙-2-基丙酸；和

它们的药理学可接受的盐和水合物。

在其它的实施方案中，R1和R2中的至少一个是2-吲哚基、 3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、四氢 吡喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、 或是被取代的C1-C4的直链的或分支的烷基，取代基是2-吲哚 基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2- 噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、或4-吡啶基；或R1 是1-萘基、2-萘基、或被1-萘基或2-萘基取代的C1-C4的直链的 或分支的烷基。

这些实施方案的优选化合物包括：

3-[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(四氢呋喃)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(四氢呋喃)乙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(四氢呋喃)丙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(2-吡啶基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(3-吡啶基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(4-吡啶基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(3-吡啶基)乙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(3-吡啶基)丙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(四氢呋喃)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(四氢呋喃)乙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(四氢呋喃)丙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(2-吲哚基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(3-吲哚基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(4-吲哚基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(3-吲哚基)乙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(3-吲哚基)丙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(2-噻吩基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(3-噻吩基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(4-噻吩基)甲基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(3-噻吩基)乙基丙酸；

3-(苄基羟基氧膦基)-2-(3-噻吩基)丙基丙酸；

3-[(1-萘基)羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(2-萘基)羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；

3-[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]-2-苯基丙酸；和

它们的药理学可接受的盐和水合物。

当X是O时，R2优选被羧基取代。

该实施方案的化合物包括：

2-[(甲基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(乙基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(丙基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(丁基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(环己基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(环己基)甲基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(苯基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(苯基乙基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(苯基丙基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-[(苯基丁基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-{[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(4-氟代苄基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(五氟代苄基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(甲氧基苄基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2，3，4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(1-萘基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2-萘基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(苯基丙-2-基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]戊二酸；

2-{[[(羟基)苯基甲基]羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(4-氟代苯基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2-氟代苯基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-[(膦酰基)氧代]戊二酸；

2-{[(3-三氟甲基苄基)羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(乙基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(丙基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(丁基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(环己基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(环己基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯乙酸；

2-[(苯基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(苯基乙基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(苯基丙基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(苯基丁基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(2，3，4-三甲氧基苯基)-3-羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)甲基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)甲基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)乙基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)乙基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)丙基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)丙基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)丁基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)丁基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(苯基丙-2-基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氧代]己二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]己二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氧代]庚二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]庚二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氧代]辛二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]辛二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氧代]壬二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]壬二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氧代]癸二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]癸二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-丁基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-环己基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(环己基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-苯基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-苄基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-苯乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-苯丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-苯丁基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(2，3，4-三甲氧基苯基)乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(1-萘基)乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(2-萘基)乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(1-萘基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(2-萘基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(1-萘基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(2-萘基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(1-萘基)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(2-萘基)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(1-萘基)丁基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(2-萘基)丁基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-苯基丙-2-基乙酸；

2-{[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(四氢呋喃)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(四氢呋喃)乙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(四氢呋喃)丙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；

2-{[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]氧代}戊二酸；以及

它们的药理学可接受的盐和水合物。

在另一个优选的实施方案中，R2是选自氢、C1-C9直链或分 支的烷基、C2-C9的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5- C7环链烯基、苄基和苯基，其中，所述的R2是被取代的或未被 取代的，取代基是C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、C1-C6直链 或分支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C4的烷氧基、 苯基、或它们的混合物。

该实施方案的化合物的示例包括：

2-{[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(四氢呋喃)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(四氢呋喃)乙基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(四氢呋喃)丙基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]氧代}-2-苯基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(2-吡啶基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(3-吡啶基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(4-吡啶基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(3-吡啶基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(3-吡啶基)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(四氢呋喃)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(四氢呋喃)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(四氢呋喃)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(2-吲哚基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(3-吲哚基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(4-吲哚基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(3-吲哚基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(3-吲哚基)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(2-噻吩基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(3-噻吩基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(4-噻吩基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(3-噻吩基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氧代]-2-(3-噻吩基)丙基乙酸；以及

它们的药理学可接受的盐和水合物。

当X是NR1时，R2优选被羧基取代。

该实施方案中的化合物的示例包括：

2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-[(乙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-[(丙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-[(丁基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-[(环己基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-{[(环己基)甲基羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-[(苯基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-[(苯乙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-[(苯丙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-[(苯丁基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-{[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(4-氟代苄基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(五氟代苄基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(甲氧基苄基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(2，3，4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(2-萘基)丁基乙基羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(苯基丙-2-基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]氨基}-2-戊二酸；

2-{[[(羟基)苯甲基]羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-{[(4-氟代苯基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-[(膦酰基)氨基]戊二酸；

2-{[(3-三氟甲基苄基)羟基氧膦基]氨基}戊二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]己二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]己二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]庚二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]庚二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]辛二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]辛二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]壬二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]壬二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]癸二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]癸二酸；

3-{[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(四氢呋喃基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(四氢呋喃基)乙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(四氢呋喃基)丙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；

3-{[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；以及

它们的药理学可接受的盐和水合物。

在另一个优选的实施方案中，R2是选自氢、C1-C9直链或分 支的烷基、C2-C9的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5- C7环链烯基、苄基和苯基，其中，所述的R2是被取代的或未被 取代的，取代基是C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、C1-C6直链 或分支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C4的烷氧基、 苯基、或它们的混合物。

该实施方案的化合物的示例包括：

2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-[(乙基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-[(丙基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-[(丁基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-[(环己基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-{[(环己基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-[(苯基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-[(苯乙基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-[(苯丙基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-[(苯丁基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-{[(2，3，4-三甲氧基苯基)-3-羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-{[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]氨基}-2-苯乙酸；

2-[(苯基丙-2-基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-丁基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-环己基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(环己基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-苯基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-苄基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-苯乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-苯丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-苯丁基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(2，3，4-三甲氧基苯基)乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(1-萘基)乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(2-萘基)乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(1-萘基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(2-萘基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(1-萘基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(2-萘基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(1-萘基)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(2-萘基)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(1-萘基)丁基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(2-萘基)丁基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-苯基丙-2-基乙酸；

2-{[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(四氢呋喃)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(四氢呋喃)乙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(四氢呋喃)丙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-{[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]氨基}-2-苯基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(2-吡啶基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(3-吡啶基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(4-吡啶基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(3-吡啶基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(3-吡啶基)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(四氢呋喃基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(四氢呋喃基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(四氢呋喃基)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(2-吲哚基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(3-吲哚基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(4-吲哚基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(3-吲哚基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(3-吲哚基)丙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(2-噻吩基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(3-噻吩基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(4-噻吩基)甲基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(3-噻吩基)乙基乙酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]-2-(3-噻吩基)丙基乙酸；以及

它们的药理学可接受的盐和水合物。

             NAALADase抑制物的合成

本发明的通式I的NAALADase抑制物可以根据标准的有机 化学技术，使用常规的如下所示的合成途径(见图示I-IX)来制 备。化合物前体可以根据本领域熟知的方法来制备，参见Jackson 等人所揭示的方法[Jackson et al.( J.Med.Chem.39(2)，619-622， and Froestl et al.( J.Med.Chem.，1995，38，3313-3331，)]。

                     途径I

采用已知的方法可以制备出带有R基团取代物的化合物。进 一步的合成膦酸酯的方法可以参见在 J.Med.Chem，1988，31卷， 204-212页，并且可见于下述的途径II中。

                     途径II 方法A A.    R’＝(CH2)3Ph            H.   R’＝n-C7H15 B.         (CH2)4Ph            I.        n-C8H17 C.         (CH2)4Ph            J.        n-C9H19 D.         (CH2)4(P-F-Ph)      K.        CH2CHCH3C4H9 E.         (CH2)4-(3-pyridyl)  L.        CH2(CH3)C(CH3)2 F.         n-C5H11 G.         n-C6H13 方法B N.    R’＝n-C4H9O.         CHCH3C5H11

从前述的膦酸酯开始，有各种路径可以用来制备通式I的化 合物。例如，参见在 J.Med.Chem.，1996，39卷，619-622页中所 揭示的方法，即如下的途径III。

                      途径III

制备通式I的化合物的另外的途径在下面的途径IV和途径 V中给出。途径IV和途径V显示了用膦酸衍生物作为起始物来 制备本发明的化合物的方法，其中的R基团包括任何合理的化学 取代，并且非限制性地包括在途径II中所给出的具体的R基团 的各种情况。

                    途径IV

                      途径V

制备本发明化合物的另一种路径允许在R1上发生芳香取 代，具体见路径VI。

                    路径VI

制备本发明通式I化合物的另一种路径允许在R2上发生芳 香取代，具体见路径VII。

                    途径VII

制备其中X是NR1的本发明的通式I化合物的另一方法见 途径VIII。

                        途径VIII 制备其中X是氧的本发明通式I化合物的方法见途径IX。

                      途径IX

                   本发明的方法

虽然不限于某一具体理论，但是，据信的是，本发明的方 法中使用的NAALADase抑制物对谷氨酸水平的调节是通过对储 藏形式的谷氨酸而达到的，这些储藏形式的谷氨酸被假定为位于 NMDA受体调控的效果的上游方。

因此，本发明还进一步涉及治疗动物的谷氨酸异常的方 法，该方法包括给所述的动物提供有效剂量的NAALADase抑制 物。

谷氨酸异常可以是任何涉及谷氨酸的疾病、紊乱或病状， 包括谷氨酸升高的病理状态。谷氨酸异常的示例包括但不限于癫 痫、中风、早老性痴呆、帕金森氏症、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、 杭廷顿氏疾病、精神分裂症、慢性疼痛、局部缺血、外周神经疾 病、昏迷脑损伤、以及对脊索的物理损伤。在优选的实施方案中， 谷氨酸异常包括中风、帕金森氏症、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、 和脊索损伤。

NAALADase抑制物可以单独给药，也可以同其它的制剂结 合给药。

优选的NAALADase抑制物是谷氨酸衍生的羟基氧膦基衍 生物，其酸性肽类似物或它们的混合物。

优选的酸性肽类似物是选自Asp-Glu、Glu-Glu、Gly-Glu、 γ-Glu-Glu和Glu-Glu-Glu一组中的氨基酸序列。

优选的NAALADase抑制物是具有以下通式I的谷氨酸衍生 的羟基氧膦基衍生物： 或其药理学可接受的盐和水合物，其中：

R1是选自氢、C1-C9直链或分支的烷基、C2-C9的直链或分 支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、和Ar，其中， 所述的R1是取代的或未取代的，取代基为羧基、C3-C8的环烷基、 C5-C7环链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或分 支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C9的烷氧基、C2- C9的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、Ar、或它们的混合物；

X是CR3R4，O或NR1；

R3和R4分别各自选自氢、C1-C6直链或分支的烷基、C2-C6 的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、Ar、 卤素、和它们的混合物；

R2是选自氢、C1-C9直链或分支的烷基、C2-C9的直链或分 支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、和Ar，其中， 所述的R2是取代的或未取代的，取代基为羧基、C3-C8的环烷基、 C5-C7环链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或分 支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C6的烷氧基、C2- C6的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、Ar、或它们的混合物；

Ar是选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、 2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、2-噻吩基、3- 噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、苄基或苯基，其中所 述的Ar是被取代的或未被取代的，取代基是卤、羟基、硝基、 三氟甲基、C1-C6的直链的或分支的烷基、C2-C6的直链的或分支 的链烯基、C1-C6的烷氧基、C2-C6的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、 氨基、或它们的混合物。

优选地，X是CH2。

再优选的是，R2是被羧基取代的。

更为优选的是，R1是氢、C1-C4直链或分支的烷基、C2-C4 的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、苄基、 或苯基，其中，所述的R1是取代的或未取代的，取代基为羧基、 C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、 C1-C6直链或分支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C4 的烷氧基、C2-C4的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、苄基、 苯基、或它们的混合物；且R2是C1-C2的烷基。

更优选的是，谷氨酸衍生的羟基氧膦基衍生物选自下组：

2-(膦酰基甲基)戊二酸；

2-(膦酰基甲基)琥珀酸；

2-{[(2-羧基乙基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(环己基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-{[(环己基)甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(苯基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-{[(苯甲基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯乙基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯丙基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯丁基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(五氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(甲氧基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2，3，4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯基丙-2-基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[[(羟基)苯基甲基]羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-氟代苯基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-三氟代甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；和

它们的药理学可接受的盐和水合物。

可用于本发明方法的谷氨酸衍生的羟基氧膦基衍生物的其 它的示例已经在上边给出。

                 产生神经活性的方法

本发明人还发现对NAALADase的抑制可以促进神经的再 生和形成髓磷脂。

因此，本发明还涉及在动物中产生神经活性的方法，该方 法包括给所述的动物提供有效剂量的NAALADase抑制物。

由本发明的方法所产生的神经活性包括，对受损伤的神经 的刺激，促进神经元的再生，防止神经的衰退，以及对神经疾病 的治疗。

用本发明的方法可以治疗的神经疾病的例子包括但不限 于：三叉神经痛、舌咽痛、贝尔氏麻痹、重症肌无力、肌肉营养 障碍、肌萎缩性侧索硬化、渐进性肌肉硬化、渐进性延髓遗传肌 肉硬化、腰间盘突出、颈椎关节强硬、丛紊乱、胸口受损综合症、 外周神经病，例如由铅、达普宋、蜱等所引起的、卟啉症、格- 巴二氏综合症、早老性痴呆、帕金森氏症。

本发明的方法对治疗下述的的神经疾病特别有用，这些疾 病包括物理损伤造成的或疾病引起的外周神经疾病、昏迷性脑损 伤、脊椎的物理损伤、与中风相关的脑损伤、脱髓鞘疾病、与神 经退化有关的神经紊乱。脱髓鞘疾病的例子包括多重性硬化。与 神经退化有关的神经紊乱包括早老性痴呆、帕金森氏症、和萎缩 性侧索硬化。

NAALADase抑制物可以单独给药或与其它的制剂结合给 药。

优选的NAALADase抑制物是谷氨酸衍生的羟基氧膦基衍 生物，其酸性肽类似物，或它们的混合物。

优选的酸性肽类似物是选自Asp-Glu、Glu-Glu、Gly-Glu、 γ-Glu-Glu和Glu-Glu-Glu一组中的氨基酸序列。

优选的NAALADase抑制物是具有以下通式I的谷氨酸衍生 的羟基氧膦基衍生物： 或其药理学可接受的盐或水合物，其中：

R1是选自氢、C1-C9直链或分支的烷基、C2-C9的直链或分 支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、和Ar，其中， 所述的R1是取代的或未取代的，取代基为羧基、C3-C8的环烷基、 C5-C7环链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或分 支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C9的烷氧基、C2- C9的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、Ar、或它们的混合物；

X是CR3R4，O或NR1；

R3和R4分别各自选自氢、C1-C6直链或分支的烷基、C2-C6 的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、Ar、 卤素、和它们的混合物；

R2是选自氢、C1-C9直链或分支的烷基、C2-C9的直链或分 支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、和Ar，其中， 所述的R2是取代的或未取代的，取代基为羧基、C3-C8的环烷基、 C5-C7环链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或分 支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C6的烷氧基、C2- C6的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、Ar、或它们的混合物；

Ar是选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、 2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、2-噻吩基、3- 噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、苄基或苯基，其中所 述的Ar是被取代的或未被取代的，取代基是卤、羟基、硝基、 三氟甲基、C1-C6的直链的或分支的烷基、C2-C6的直链的或分支 的链烯基、C1-C6的烷氧基、C2-C6的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、 氨基、或它们的混合物。

优选地，X是CH2。

再优选的是，R2是被羧基取代的。

更为优选的是，R1是氢、C1-C4直链或分支的烷基、C2-C4 的直链或分支的链烯基、C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、苄基、 或苯基，其中，所述的R1是取代的或未取代的，取代基为羧基、 C3-C8的环烷基、C5-C7环链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、 C1-C6直链或分支的烷基、C2-C6的直链或分支的链烯基、C1-C4 的烷氧基、C2-C4的链烯氧基、苯氧基、苄氧基、氨基、苄基、 苯基、或它们的混合物；且R2是C1-C2的烷基。

更优选的是，谷氨酸衍生的羟基氧膦基衍生物选自下组：

2-(膦酰基甲基)戊二酸；

2-(膦酰基甲基)琥珀酸；

2-{[(2-羧基乙基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(环己基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-{[(环己基)甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(苯基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；

2-{[(苯甲基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯乙基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯丙基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯丁基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(五氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(甲氧基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2，3，4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(苯基丙-2-基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[[(羟基)苯基甲基]羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(4-氟代苯基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；

2-{[(3-三氟代甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸；和

它们的药理学可接受的盐和水合物。

可用于本发明方法的谷氨酸衍生的羟基氧膦基衍生物的其 它的示例已经在上边给出。

                      给药路径

在本发明的方法中，化合物的给药方式包括口服、肠胃道 外给药、喷雾、局部、结肠给药、鼻内给药、口内给药、阴道内 给药、或体内植入等方式。这些药物的制剂含有常规的无毒性的 药理学可接受的载体或赋形剂。在本文中所用的术语“肠胃道外 给药”包括皮下、静脉、肌肉内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨 内或颅内注射或点滴。优选侵入性给药方式，特别是直接对受损 的神经元组织给药。

为了对中枢神经系统内的靶标进行有效的治疗，本发明的 化合物在进行外周给药的时候应该可以透过血脑障碍。那些无法 透过血脑障碍的化合物可以采用心室内给药的路径发挥效力。

本发明的化合物还可以采用无菌注射剂的形式给药，例如无 菌注射水性悬浮液或油性悬浮液。这些悬浮液可以按照本领域所 熟知的技术并使用适宜的分散剂、润湿剂或悬浮剂来配置。所述 的无菌注射剂还可以是存在于无毒的、肠胃外可接受的稀释剂或 溶剂中的溶液或悬浮液，例如存在于1，3-丁二醇中的溶液。在可 以接受的载体和溶剂中，常用的有水、林格氏溶液和等渗氯化钠 溶液。此外，无菌的油液通常都用作溶剂或悬浮介质。对此而言， 任何温和的油剂，例如合成的单或二甘油，都可以被采用。脂肪 酸例如油酸和其甘油化衍生物包括橄榄油和蓖麻油，特别是它们 的聚氧乙基化的形式，特别适用于本发明的注射剂。这些油性的 溶液或悬浮液还可以含有长链的醇稀释剂或分散剂。

此外，用于口服的化合物还可以制备成胶囊、片剂、水性悬 浮液或水溶液。片剂可以含有载体，例如乳糖、玉米淀粉、和/ 或润滑剂，如硬脂酸镁。水性悬浮液可以包括将乳化剂和悬浮剂 与活性成分一起使用。口服的药剂还可以包括甜味剂和/或调味 剂/和或色素。

化合物还可以采用栓剂的形式结肠给药。这样的组合物可以 通过将药物与适宜的非刺激性的载体相混合而制备，该载体应该 是在室温下为固体但在结肠内温度下为液体的，这样，就可以在 结肠内融化而释放出药物。这样的载体包括可可油、蜂蜡和聚乙 二醇。

此外，化合物还可以采用局部给药，特别是在发病的地方适 宜进行局部给药时，包括眼睛、皮肤、肠道下部等地方的神经紊 乱。

在对眼睛局部给药时，或在用于眼部时，可以将化合物配制 成在等渗的pH被调节好的无菌盐水中的微化悬浮液，或者配制 成在等渗的pH被调节好的无菌盐水中的溶液，加入或不加入防 腐剂如苄基醇氯化物。另外，化合物还可以配制成膏剂，例如凡 士林软膏。

对皮肤局部用药时，可以配制成软膏，含有悬浮的化合物或 溶解的化合物，例如，配制在下述物质中的一种或一种以上的混 合物中：矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚乙烯聚氧 丙烯化合物，乳化性蜡和水。另外，化合物还可以配制成适宜的 洗剂或乳膏，含有悬浮或溶解在其中的活性化合物，例如，下述 物质中的一种或一种以上的混合物：矿物油、脱水山梨糖醇单硬 脂酸盐，聚山梨糖酯-60，鲸蜡、鲸蜡醇、2-辛基十二烷基醇、苄 基醇和水。

对下部肠道的局部用药可以将化合物配制成结肠栓剂或适 宜的其它形式。

本发明的NAALADase抑制物可以作为单独剂量给药、多重 分散剂或连续渗透剂给药。由于这些化合物是比较小的、易于渗 透和相对稳定的，它们完全适宜于连续渗透给药。对于连续渗透 给药，选用泵送式，特别是皮下泵送式。

                    剂量

用于治疗时，活性成分的化合物的剂量范围可以是约0.1mg -10,000mg，优选的剂量是约0.1mg-1,000mg。对于患者的具体 的剂量水平将要依据众多因素来决定，例如，所用化合物的活 性，患者的年龄，体重，健康状况，性别，饮食，给药的时间， 排泄率，药物的组合，患病的程度，以及给药的路径等。一般而 言，在体外所确定的剂量效果可以用作给药的常规指标。在动物 模型中的研究结果也是有用的。如何确定适宜的药剂量是本领域 的技术人员所熟知的。

在优选的实施方案中，NAALADase抑制物是冻干形式的。 此时，1-100mg的NAALADase抑制物以冻干的形式放在小瓶 中，同时配以载体和缓冲剂，例如，甘露醇和磷酸钠等。在给药 前，可以在小瓶内加入制菌水进行配制。

在治疗全面缺血时，NAALADase抑制物优选以口服、肠道、 肠胃外、和局部给药，每日至少1-6次，而且首次给药可以是较 高剂量的。

如前所述，在本发明的方法中使用的NAALADase抑制物可 以同一种或一种以上的其它的制剂结合给药。这些制剂的具体剂 量将根据上述对NAALADase抑制物的各种考虑来决定。

                     给药方案

对于本发明的方法而言，可以采用任何的给药的时间和频率 的控制方案，并且可以根据需要进行重复。所述的给药方案包括 预先治疗和/或与其它的制剂共同给药。

为了最大限度地保护神经组织不受侵害，NAALADase抑制 物应该尽早给予受损细胞。在预见会发生神经侵害时，则应该在 发生这种侵害之前给药。这些可能发生神经侵害的情况包括手术 (动脉内膜切除术、心脏、肌肉、主动脉、矫形外科)；血管内 治疗，例如，动脉插管(cartoid、脊椎、主动脉、心口、肾脏、 脊索、Adamkiewicz)；注射栓剂；安放止血装置；为了；治疗 脑损伤而中断供血；素因性治疗状态，例如，crescendo临时缺 血，栓塞性和连续性中风。在不可能和无法进行预先治疗的中风 和缺血的情况下，，那么，尽快地将NAALADase抑制物送到受 损细胞就是十分重要的。在发生中风后的诊断和治疗过程中，都 应该尽量避免对细胞的进一步损害。

               与其它药物的配合

在治疗神经侵害(特别是由于溺水和头部昏迷而造成的急 性缺血中风和全面缺血)的方法中，NAALADase抑制物可以同 一种或一种以上的其它的制剂结合给药，优选的制剂是可以降低 中风危险的制剂，更优选的是可以降低再次缺血的制剂(例如， ticlopidine)。

在与一种或一种以上的其它的制剂结合给药时， NAALADase抑制物可以(i)制成单一剂型；或(ii)分别为单 独剂型，为了是最好地释放它们各自的活性成分。每种剂型可以 含有约0.01％至约99.99％重量，优选约3.5％至约60％重量的 NAALADase抑制物，以及一种或一种以上的药用赋形剂，例如， 润湿剂，乳化剂，和pH缓冲剂。

            NAALADase抑制物的体内毒性研究

进行体内的NAALADase抑制物的毒性研究时，对分组的小 鼠注射2-(膦酰基甲基)戊二酸，这是一种活性很高的 NAALADase抑制物，剂量为每公斤体重1、5、10、30、100、 300和500毫克。然后，每日观察两次，共连续观察5天。下面 的表I给出了每种剂量的存活率。其中的结果表明，NAALADase 抑制物对小鼠是无毒的，并建议本发明的化合物在以治疗有效剂 量对人给药的时候也是无毒的。

                                   表I                              NAALADase抑制物的毒性   剂量(mg/kg)     1     5     10     30     100     300     500  5天后的存活率     (％)    100    100    100    100    100    100    66.7

             NAALADase活性的体外抑制

对下述的通式I的化合物进行了体外的NAALADase抑制活 性的检测。结果列于表II中。

           表II

  NAALADase活性的体外抑制     化合物     Ki(nM) 0.293±0.08 2-(膦酰基甲基)戊二酸 700.00±67.3 2-(膦酰基甲基)琥珀酸 1.89±0.19 2-{[(2-羧乙基)羟基氧膦基]-甲基}戊二酸

结果表明，2-(膦酰基甲基)戊二酸表现了很高的 NAALADase抑制活性，其Ki为0.293nM。这个化合物的活性比 以前的抑制物高出1000倍以上。

相比之下，2-(膦酰基甲基)琥珀酸的NAALADase抑制活 性就低很多，这就建议结合了膦酸的谷胺酸类似物对 NAALADase抑制活性有贡献。

这些结果还表明，2-{[(2-羧乙基)羟基氧膦基]-甲基}戊二 酸这种具有额外的与NAAG中的天冬氨酸残基类似的羧酸侧链 的化合物，具有比2-(膦酰基甲基)戊二酸低的NAALADase抑 制活性。

             NAALADase活性的体外检测程序

在50nM的Tris-Cl缓冲液中的[3H]NAAG释放的[3H]Glu的 数量用30-50μg的突触蛋白在37℃测定15分钟。底物和产物用 阴离子交换液色谱分开。进行双份检测，使被消化的NAAG不 高于20％，代表着肽酶的线性活性范围。在平行的检测中使用了 使君子酸(100μM)以确定检测的特异性。

         体外检测NAALADase抑制物对缺血的活性

为了检测NAALADase抑制物对局部缺血的效果，在局部缺 血侵害期间(氰酸钾和2-脱氧葡萄糖)以及其后的一小时用各种 浓度的通式I的混合物对皮质细胞培养物进行处理[具体参见 Vornov et al.，J.Neurochem，Vol.65，No.4，pp.1681-1691 (1995)]。

各种测试的化合物的神经保护效果都总结于表III(a)中。 神经保护效果表示为EC50，这是在发生局部缺血的侵害后降低 50％谷氨酸毒性所需的浓度。

          表III(a) 化合物                      EC50

对不同浓度的2-(膦酰基甲基)戊二酸测定的毒性％表达了 这种剂量依赖性的效果，具体数据见下表III(b)并在图1中给 出。

               表III(b)

    剂量                     毒性％

    对照                  100.00±9.0(n＝5)

    100pM                 66.57±4.38(n＝5)

    1nM                   42.31±9.34(n＝5)

    10nM                  33.08±9.62(n＝5)

    100nM                 30.23±9.43(n＝5)

    1μM                  8.56±8.22(n＝5)

结果表明随着2-(膦酰基甲基)戊二酸浓度的提高，毒性 就降低，这就建议NAALADase抑制物将可以对由于局部缺血造 成的神经元损伤有治疗效果。

这个检测的的具体描述在后面给出。具体地讲，细胞培养 物接触氰酸钾和2脱氧葡萄糖(2-DG)(10mM)，并检测对乳 糖脱氢酶(LDH)的释放。

                 NAAG的体外毒性

为了检测NAAG的体外毒性，用NAAG(浓度范围是3μM-3 mM)处理20分钟。各种测试的NAAG浓度的毒性见表IV并在 图2中给出。

              表IV      NAAG剂量      毒性％     3μM     3.51       (n＝1)     10μM     4.30±3.12 (n＝3)     30μM     11.40±6.17(n＝3)     100μM     12.66±5.50(n＝3)     300μM     13.50±4.0 (n＝3)     1mM     21.46±4.20(n＝3)     3mM     45.11±4.96(n＝3)

这些结果显示毒性随着NAAG浓度的增加而升高。毒性的 归因是当NAAG被NAALADase酶解时对谷氨酸的释放。

体外检测NAALADase抑制物对NAAG毒性的作用

为了检测NAALADase抑制物在体外对NAAG毒性的作 用，在皮质细胞培养物与NAAG接触时和其后的一小时用2(膦 酰基甲基)戊二酸(1μM)处理。各种浓度的NAAG的测定的 毒性见下表V并在图3中给出。

               表V      NAAG剂量      毒性％     3μM     -4.71      (n＝1)     10μM     -3.08±0.81(n＝3)     30μM     -4.81±1.13(n＝3)     100μM     -2.87±0.78(n＝3)     300μM     -2.09±0.48(n＝3)     1mM     0.26±1.11 (n＝3)     3mM     16.38±8.76(n＝3)

与图2/表IV的结果相比，图3/表V显示出在用NAALADase 抑制物处理后，毒性显著地降低，这就建议其在治疗谷氨酸异常 时是有效的。 体外检测在不同时间给予NAALADase抑制物对局部缺血的效果

为了体外检测在不同时间给予NAALADase抑制物对局部 缺血的效果，对皮质细胞培养物用2(膦酰基甲基)戊二酸处理 (i)在局部缺血期和其后的一小时(接触并恢复)；(ii)局部 缺血后一小时(仅仅恢复)；和(iii)由局部缺血侵害后的30 分钟起的一小时(延迟30分钟)。每个时间的毒性测定结果见 表VI和图4。

                表VI   相对于局部缺血的给药时间     毒性％     对照     100.00％     接触并恢复     2.54％     仅仅恢复     9.03％     延迟30分钟     31.49％

结果表明，在局部缺血侵害的接触和恢复期间，甚至在其 后30分钟用NAALADase抑制物治疗都可以获得对神经元的明 显的保护。

                 毒性体外检测的程序 a.细胞培养

离散的皮质细胞培养物按照Murphy and Baraban(1990)对 Heuttner and Baughman(1986)的改良方法用木瓜蛋白酶来制备。 此处所采用的离散培养程序见表VII。17天胚胎期的胎儿从怀孕 的大鼠体中取出(Harlan Sprague Dawley)。在Dulbecco’s磷酸 盐缓冲液中迅速地将皮质部分切下来，剥离脑膜，以37℃在木 瓜蛋白酶溶液中培养15分钟。然后进行机械研磨，并以500g (1000-2000rpm在Beckman摇震器)离心。离心物重悬浮于 DNAase溶液中，用10ml移液管(x15-20)将其加在含有白蛋 白酶和胰蛋白酶抑制物的“10×10”溶液的表面，再次离心，重 悬浮于含有10％小牛血清(HyClone A-1111-L)、5％热灭活的 马血清(HyClone A-3311-L)、以及带有高葡萄糖(4.5g/L)和 1g/L NaHC03的84％改良Earle’s基本培养基(MEM)(Gibco 51200-020)中。每个24孔的盘都用poly-D-赖氨酸(0.5ml/孔的 10μg/ml)预处理一小时，在加样之前，用水清洗。将培养物按 照2.5×106细胞/毫升加入到24孔的盘的每一个孔内，每个孔的 加入量为500μl/孔。另外的方法是，在35mm的培养皿中各加 入2毫升/皿，或在6孔的盘中每孔加入2毫升，或在12孔的盘 中每孔加入1毫升。加入完成后，每3-4天用生长血清更换50％ 的培养基，生长血清中含有5％热灭活马血清(HyClone A- 3311-L)、95％改良的Earle’s基本培养基(MEM)(Gibco 51200-020)、和1％的L-谷胺酰胺(Gibco 25030-081)。在培养 进行了21天时，进行该实验。培养物保持在37℃的5％CO2气 体中。这些方法的细节见下面的表VII。

                       表VII                       离散培养物的程序 I.溶液制备 母液/溶液 DNAase母液，1ml(100x) 5mg DNAase I(Worthington LS002004)； 1ml离散EBSS； 冷冻成50l等份试样。 Dulbecco’s PBS 500ml 4gm NaCl(J.T.Baker 3624-01)； 1.06gm Na2HPO4.7H2O(Fisher S373-3)； 100mg KCl(Fisher P217-500)； 100mg KH2PO4(Sigma P-0662)； 500ml dH2O； 调整到pH7.4并无菌过滤。 离散EBSS，500ml 1.1gm NaHCO3； 50ml EBSS母液(Gibco 14050-025)； 450ml dH2O； 无菌过滤。 EDTA母液，10ml 184.2mg EDTA钠盐(Sigma ED4S)； 10ml dH2O； 无菌过滤。 10and 10母液，10ml 100mg BSA(Sigma A-4919)； 100mg来自蛋白的胰蛋白酶抑 制物(Sigma T-2011)； 10ml离散的EBSS； 无菌过滤。 Poly-D-赖氨酸母液，5ml 5mg Poly-D-赖氨酸母液，100- 150K(Sigma P-6407)； 5ml无菌水； 保持冰冻。                             培养基 离散生长，500ml 500ml MEM(Gibco 51200- 020)，含有葡萄糖和NaHCO3 (2.25gm葡萄糖和0.5gm NaHCO3)； 25ml热灭活马血清(HyClone A-3311-L)； 5ml L-谷胺酰胺(200mM， 100x母液，Gibco 25030-081)； 无菌过滤。 15ml热灭活马血清(HyClone A-3311-L)； 3ml L-谷胺酰胺(200mM， 100x母液，Gibco 25030-081)； (Gibco 15140-015)； 1ml青霉素-链霉素母液。 加载培养基，300ml 250ml MEM含有葡萄糖和碳酸 氢钠(2.25gm葡萄糖和0.5gm NaHCO3在500ml的Gibco MEM 51200-020中)； 30ml小牛血清(HyClone A- 1111-L). 用于木瓜蛋白酶的解离： 4mg半胱氨酸(C-8277)； 25ml离散EBSS； 250μl木瓜蛋白酶母液 (Worthington LS003126)； 放置在37℃水浴中直至清晰。 用于DNAase处理： DNAase，5ml 4.5ml离散EBSS； 500μl“10 and 10”母液； 50μl DNAase母液。 “10 and 10”，5ml 4.5ml EBSS； 500μl“10 and 10”母液. II.包被培养皿 将Poly-D-赖氨酸母液按照1∶100稀释后用于包被24孔盘(0.5ml/ 孔)，或按照1∶10稀释来包被盖玻片(1.0ml/盖玻片)。 放置直至切除。 III.切除组织 使用了怀孕的Sprague-Dawley大鼠，到达时为怀孕第17天。 去头，用70％EtOH向下清洗腹部。 取出子宫并放置在无菌的dPBS中。 从胚胎中取出脑子并放置在dPBS中。 取脑：用镊子从人字形缝尖穿过颅骨和皮肤。向后拉，打开后窝。 然后将镊子向前移动来分开矢状的骨缝。可以自脑的底下从嗅球 向后取出脑子。 将脑子放入新鲜的dPBS中；随后，切除皮质。 IV.木瓜蛋白酶分解 将皮质等份转移到含有无菌木瓜蛋白酶溶液的保持在37℃的15 ml试管内。 用无菌的10ml移液管将其制备为x1。 在37℃下培养15分钟。 以500G离心5分钟(1000-2000rpm，Beckman摇震器)。 V.DNAase处理 从细胞沉淀中去除上清液和任何形成的DNA凝胶层(或用移液 管将细胞沉淀移出)。 将细胞沉淀加入到DNAase溶液中。 用10ml移液管制备为x15-20。 将细胞悬浮液用移液管贴着试管壁展层到“10and10”溶液上。 以500G离心5分钟(细胞将进入“10and10”溶液)。 用加载介质洗试管周围，但不搅动细胞沉淀物。 用移液管将清洗用的介质取出，并重复清洗。 VI.加入到培养盘 加入约4.5ml的加载介质到各个细胞沉淀中，使体积达到5ml。 用10ml移液管重悬浮。 将细胞集中在一个试管中。 将10μl悬浮细胞迅速加入到血细胞计数器上以使细胞不沉积。 计数大格内的细胞数，折算为10百万细胞/毫升。 将重悬浮的细胞加到较大的容器内使其为2.5百万细胞/毫升。 研磨至匀浆。 完成包被盘： 吸出或倒掉赖氨酸； 用无菌水洗x1并倒掉无菌水。 加入加载介质，加入细胞，具体结果如下： 35mm培养皿    2ml/培养皿 6孔培养盘     2ml/孔 12孔培养盘    1ml/孔 24孔培养盘    500μl/孔 VII.培养 一般在星期四制备培养物。 然后每周饲喂两次；从下一周的星期一开始，在星期一和星期五 添加营养。 每次移去50％体积的培养液，替换以新鲜的生长培养基。 b.用氰酸钾和2-脱氧葡萄糖进行局部缺血侵害

在将皮质细胞加入到培养盘后的第21-24天进行本实验。用 不含有磷酸盐的HEPES缓冲生理盐水溶液洗培养物三次。然 后，将培养物在37℃对氰酸钾(KCN，5mM)和2-脱氧葡萄糖 (2-DG，10mM)接触20分钟。已经证实这样的浓度产生最大 毒性[Vornov et al.，J.Neurochem，Vol.65，No.4，pp.1681-1691 (1995)]。在第24小时结束时，分析培养物对细胞溶解的乳酸脱 氢酶(LDH)的释放，即标准的对细胞溶胞的测定。LDH测定 按照Koh and Choi，J.Neuroscience Methods(1987)的方法进行。 c.NAAG诱导的神经毒性

在显微镜下观察培养物，将那些具有均匀神经元密度的用 于NAAG神经毒性试验。

进行试验时，培养物用HEPES缓冲生理盐水溶液(HBSS； NaCl 143.4mM，HEPES 5mM，KCl 5.4mM，MgSO4 1.2mM， NaH℃ PO4 1.2mM，CaCl2 2.0mM，D-葡萄糖10mM)洗一次 (Vornov et al.，1995)，然后，对各种浓度的NAAG在37℃下 暴露20分钟。NAAG的浓度范围是3μM-3mM，包括3μM、 10μM、30μM、100μM、300μM、1mM、和3mM。在暴露结 尾时，细胞用HEPES缓冲生理盐水洗一次，然后，替换为不含 血清的改良的Earle’s基本培养基。然后，将培养物放回到CO2培养箱中进行24小时的恢复。 d.乳酸脱氢酶检测

细胞溶解性乳酸脱氢酶(LDH)的释放是细胞溶胞的标准 测定，用于定量确定伤害程度(Koh and Choi，1987)。LDH活 性的测定被正常化，作为各种培养物之间的变化的对照(Koh and Choi，1987)。每个单独的试验都包括有对照，即不含有 NAALADase抑制物；在这些对照中只发现了微小的LDH活性。 这个对照数值从每个试验的结果中减去。将这些结果正常化，在 每个试验中表示为由NAAG/局部缺血所造成的损伤的百分数。 只考虑NAALADase抑制物的主要效果；剂量和实验条件之间的 相关性不进行统计学检验。

每种受试化合物的效力的测定是测定在暴露于NAAG/局部 缺血加NAALADase抑制物或NAAG/局部缺血加生理盐水(对 照)后释放到生长培养基中的LDH的百分数来完成的。由于高 浓度的谷氨酸在某些情况下对细胞有毒性，所以，对谷氨酸毒性 的测定就以对LDH的测定作为标准测定。

      在SHRSP大鼠中的MCAO后测定NAALADase

          抑制物对皮质损伤的活体检测

为了进行活体中NAALADase抑制物对皮质损伤的效果，测 量SHRSP大鼠的梗死体积，这些大鼠曾经患有中脑动脉阻塞 (MCAO)，并随后进行了下列治疗：(1)生理盐水；(2)10 mg/kg的2-(膦酰基甲基)-戊二酸，随后为2mg/kg/hr的2-(膦 酰基甲基)-戊二酸处理1小时；或(3)100mg/kg的2-(膦酰 基甲基)-戊二酸，随后为20mg/kg/hr的2-(膦酰基甲基)-戊二 酸处理1小时。

每组大鼠的皮质损伤体积在下面的表VIII和图5中给出。

                 表VIII          皮质损伤体积(mm3)±S.E.M.     对照     184.62±33.52(n＝10)     10mg/kg     135.00±32.18(n＝10)     100mg/kg     65.23±32.18(n＝10)     皮质损伤体积(损伤％)±S.E.M.     对照     34.44±6.53(n＝10)     10mg/kg3     29.14±7.68(n＝10)     100mg/kg3     13.98±6.64(n＝10)          皮质的保护(保护％)     对照     0％     10mg/kg     27％     100mg/kg     65％

结果表明，随着NAALADase抑制物的增高，皮质损伤体积 降低，皮质保护增高，这就进一步支持NAALADase抑制物的神 经保护效应。

活体检测NAALADase抑制物对皮质损伤作用的程序

从美国国家健康研究所(National Institutes of Health， Laboratory，Sciences Section，Veterinary Resources Program， National Center for Research Resources Bethesda，MD)获得三对雌 雄大鼠，在约翰-霍普金斯医学院饲养得到一窝SHRSP大鼠。将 所有的大鼠都保持在无病毒环境并定量喂食(NIH 31，Zeigler Bros，Inc.)、水和libitum。所有各组大鼠的喂食和喂水都一直进 行到开始试验前的早晨。

对中脑动脉(MCA)的临时阻塞是将4-0手术尼龙线放入 内颈动脉(ICA)封闭MCA的供血(Loizumi，1986；Longa，1989； Chen，1992)来产生的。用4％卤烷麻醉大鼠，并用面罩保持供给 含1.0％-1.5％卤烷的富氧空气。在整个手术过程中，用加热灯保 持肠道的温度在37.0±0.5℃。在局部缺血期间和其之前，在右骨 动脉插管来测量血液气体[pH，氧气张力(PO2)，二氧化碳张力 (PCO2)]，来监测手术期间的血压。右总颈动脉(CCA)通过 中线切开而被暴露；在二腹肌和乳突肌之间放置自锁牵引器，并 将肩胛舌骨肌分开。右外颈动脉(ECA)被切开并结扎。然后， 将ECA的枕部动脉分支分离并凝结。随后，将右内颈动脉(ICA) 分离直到翼突鄂动脉被暴露并与相邻的迷走神经分开时为止。用 4-0丝线将翼突鄂动脉在靠近其起源的地方结扎起来。

在用4-0丝线将CCA结扎后，用4-0丝线在开孔的地方结 扎来防止出血，开口的地方用于将2.5cm长的4-0单根尼龙手 术线(Ethilon)插入到ICA门腔，该手术线的端部被靠近电切刀 而加热钝化。用6-0手术线在腔内尼龙手术线位于分叉的部位扎 紧来防止出血，然后，将在CCA和ICA处的多余的手术线放开。 然后，让尼龙线向前轻轻移动约20mm。

在这两组中，都在MCA阻塞后约10分钟时终止麻醉，大 鼠在5分钟后苏醒。在发生局部缺血2小时后，再次进行麻醉， 将腔内的尼龙线被抽出到可以看见其在ICA处的起端位置来进 行灌注。

用自校正放射电极系统(Radiometer Electrode System，ABL3， Copenhagen，Denmark)来测量动脉的pH、PaCO2、和氧的分压 (PaO2)。血红蛋白和动脉氧气含量用血计量仪(Hemoximeter， Radiometer，Model OSM3；Copenhagen，Denmark)测定。血液葡 萄糖用葡萄糖分析仪(Model 2300A，Yellow Springs Instruments， Yellow Springs，OH)测定。

每一组都进行2小时的右MCA阻塞和22小时的再次灌 注。测定除了肠道温度以外的所有变量的基线值，分别在右MCA 阻塞的第15和45分钟进行测定。对肠道温度的测定分别在基 线、MCA阻塞的第0和第15分钟、再次灌注的第0和第22小 时进行。

      在Sprague-Dawley大鼠的MCAO后进行活体的

         NAALADase抑制物对脑损伤作用的测定

为了进行活体的NAALADase抑制物对脑损伤的神经保护 作用，将Sprague-Dawley大鼠在进行2小时临时中脑动脉阻塞 (MCAO)之前和之后，用载体或2-(膦酰基甲基)-戊二酸处 理。在对照组中(n＝8)，大鼠在阻塞后30分钟时接受生理盐水 的腹膜内注射，随后进行0.5ml/hr的静脉内生理盐水点滴。在药 物处理组内，大鼠接受了腹膜内的剂量为100mg/kg的2-(膦酰 基甲基)-戊二酸的注射，注射分别在阻塞前20分钟(n＝5)、 阻塞后30分钟(n＝9)、阻塞后60分钟(n＝7)、阻塞后120 分钟(n＝4)，随后接受4小时的20mg/kg/hr静脉内点滴(点滴 速率为0.5ml/hr)。对每只大鼠，在腹膜内和静脉内处理之间有 15分钟的间隔。再次灌注22小时后，大鼠被安死，取出它们的 脑子。取出7个头冠部分(2毫米厚)，用含有2，3，5-氯化三苯 基四唑(TTC)的1％溶液染色20分钟，用10％甲醛固定。对最 靠近嘴部的脑的前表面和后表面，以及其它的6个部分的后表面 照相。每个脑子的梗死的尺寸用计算机辅助的数字图象分析系统 (LOATS)定量化。根本没有TTC染色的脑部区域被定义为梗 死的组织。每只大鼠的总梗死体积根据每个脑区的数据统计得 到。

每组大鼠的总梗死体积在图6中给出。

用载体处理的大鼠表现了平均总脑梗死体积为293±26 mm3。在局部缺血之前和之后用2-(膦酰基甲基)-戊二酸处理 的大鼠表现了明显低的平均脑梗死体积，对处理前20分钟为122 ±26mm3(p＝0.003vs.载体)、对处理后30分钟为208±40mm3 (p＝0.2vs.载体)、对处理后60分钟为125±57mm3(p＝0.015 vs.载体)、对处理后120分钟为133±35mm3(p＝0.005vs.载 体)。这些结果表明，对于中风的MCAO大鼠，在阻塞发生2 小时给予2-(膦酰基甲基)-戊二酸，是具有神经保护作用的。

    活体检测NAALADase抑制物对脑损伤作用的程序

使用的是雄性Sprague-Dawley大鼠(260-320g)。试验之 前，对大鼠进行单笼饲养，自由取食和取水。每只大鼠接受两次 手术：在颈静脉插管进行静脉内点滴和MCAO。在手术期间， 大鼠用呼吸面罩给以含2％卤烷的氧气来麻醉。用血液加热系统 保持体温和监测体温在正常范围内。首先，在右颈静脉插入PE-50 聚乙烯导管。一小时后，对大鼠再次麻醉来进行MCAO手术。 MCAO是通过Long等人的方法[Long et al.，Stroke，Vol.20，pp. 84-91(1989)]进行血管内缝合而实现的。具体而言，右外颈动脉 (ECA)被暴露出来，凝结后被切开。带有钝端的3-0单纤维尼 龙手术线被通过动脉切开术插入到ECA的近端残根，并从颈交 叉前进20毫米直到其到达前脑动脉的近端区，从而阻塞MCA 的来源。让大鼠苏醒，2小时后，对大鼠再次麻醉来进行再次灌 注，在此期间，将尼龙手术线抽回到ECA的残根部，让血液流 到MCA。

      活体检测NAALADase抑制物对中风引起的

            脑谷氨酸水平升高的作用

为了进行活体的NAALADase抑制物对谷氨酸升高的作 用，对中风引起了脑谷氨酸水平升高的大鼠用载体或2-(膦酰基 甲基)-戊二酸进行处理。

结果在图7、8和9中给出。

这些结果表明，与用载体处理的大鼠相比(p＜0.05)，2- (膦酰基甲基)-戊二酸处理(100mg/kg/hr腹膜内注射，随后进 行20mg/kg/hr静脉内注射)可以显著地降低在纹状体的中风引 起的细胞外升高了的谷氨酸，并且能完全防止在顶骨皮质的谷氨 酸的变化(p＜0.01；图8)。相反，中风本身对前端皮质的谷氨酸 没有显著效应，并且，对随后的载体处理和2-(膦酰基甲基)- 戊二酸处理的各组也没有差异(图9)。各数据以对基线的百分 数表示，极限表示在中风前三个连续20分钟样品的平均值。谷 氨酸(平均值±SEM)的绝对基线值(预处理)在底部、顶部 和前部皮质中，在载体处理组中分别为0.25+0.1、1.1+0.3、和 0.6+0.1μM，在2-(膦酰基甲基)-戊二酸处理组中分别为 0.46+0.1、2.0+0.7、和0.9+0.3μM。

    NAALADase抑制物对中风引起的脑谷氨酸水平

           升高的作用的活体检测程序

按照与前述类似的方法[Britton et al.，J.Neurochem.，Vol.67， pp.324-329(1996)]，对雄性大鼠(270-330g，n＝5-6/组)植入同 心微透析探针。简单地说，在卤烷麻醉下，探针(用Cuprophane 毛细膜自己制备，10mw域限；2mm透析长度)被植入到前端 皮质(AP＝+3.5；ML＝3；DIV＝3)，尾状核(AP＝0；ML＝3； DV＝6.6)，顶部皮质(AP＝-2；ML＝5；DV＝3)(分别对应于前 囱和脑硬膜的毫米数)，这些区域据信代表了局部缺血引起的损 伤的核心和半影部分。透析物中的谷氨酸水平用前柱o-苯二醛衍 化并接着进行荧光检测的HPLC来确定。

植入探针后大约20小时，大鼠对灌注液(125mM NaCl，2.5 mM KCl，1.18mM MgCl2和1.26mM CaCl2)透析，速率为2.5 μl/min.)。在60分钟的稳定化期后，透析样品每20分钟收集一 次。收集了三份基线样品后，大鼠用卤烷麻醉，并使用MCAO 的丝线方法造成临时局部缺血[Britton et al.，Life Sciences，Vol. 60，No.20，pp.1729-1740(1997)]。简单地说，右外颈动脉(ECA) 被暴露出来，切断其各分支。将3-0单丝尼龙手术线通过在ECA 的动脉切开术放入到内颈动脉中，并向前推进直到其到达前脑动 脉的近端区，由此而阻塞ECA的来源。将血管内的手术线抽回 就可以在阻塞后进行2小时的重新灌注。

在整个中风手术和再灌注的过程中，始终保持体温在正常 范围。对大鼠在阻塞前20分钟给予腹膜内注射100mg/kg的2- (膦酰基甲基)-戊二酸，并在阻塞开始时给予20mg/kg/hr静脉 内点滴4小时。对未麻醉的大鼠，每20分钟收集透析样品一次。 再次灌注24小时后，杀死大鼠，取出脑子，取出7份头冠部分 (2毫米厚)，取自于前端的1毫米处直至皮质-脑子结合部分之 前的1毫米处。对局部缺血损伤的分析用TTC染色和计算机辅 助的图象分析来进行[如Britton et al.，(1997)，同上]。

       活体检测NAALADase抑制物对坐骨神经冻伤

                 形成的髓磷脂的作用

最近才证实了NAALADase胶质细胞中是有下调作用的，因 为他们开始形成髓磷脂并且在髓磷脂化的Schwann细胞中不存 在。根据这些数据，本发明人假定对NAALADase的抑制可以影 响轴索和Schwann细胞之间的信号机制，结果造成髓磷脂化的升 高。为了验证这个假设，本发明人检验了2-(膦酰基甲基)-戊 二酸对雄性大鼠的坐骨神经冻伤后的神经再生和髓磷脂化的效 果。

实验结果在下表IX和图10(a)和图10(b)中给出。

                    表IX

                       2-(膦酰基甲基)-    载体

                          戊二酸 髓磷脂化的轴索的数目         1.5 的比率(药物载体) 髓磷脂化的层的数目           16.53±0.65    13.77±0.09

(平均+SEM) 与载体相比增加的髓磷         20％

脂化的层的％数

T检验的显著性            p＜0.005

如在图10(a)和图10(b)中所详细表示的那样，与用载体处理 的动物的情况相比，用光和电镜(TEM)检验冻伤位点3毫米处 的神经都显示髓磷脂化的轴索的数目的增加(升高1.5倍)和髓 磷脂厚度的增加(增加20％，p＜0.005)。

图10(a)和图10(b)显示了这种效应的显微照相。用对髓磷脂 染色的甲苯胺蓝染色各个区域。含有植入体的用2-(膦酰基甲 基)-戊二酸处理的坐骨神经与含有植入体的用载体处理的坐骨 神经相比，表现了髓磷脂化的轴索数目的升高和髓磷脂厚度的增 加。

         NAALADase抑制物对冻伤的坐骨神经的

          髓磷脂形成的作用的活体检测程序

对小鼠坐骨神经冻伤按照Koenig等人的方法[Koenig et al.， Science，Vol.268，pp.1500-1503(1995年6月)]。简单地说，每只 小鼠被麻醉并将其坐骨神经在大腿上部暴露出来，用铜冷冻端子 (直径为0.5mm)冻伤，该冷冻端子先浸入液氮，然后重复地 接触神经的上部。冻伤的程度约1毫米。

根据Connold等人的方法[Connold et al.，Developmental Brain Res.，Vol.28，pp.99-104(1986)]将2-(膦酰基甲基)-戊二 酸加入到硅条中，然后在第0天植入冻伤位置，并在冻伤的第3、 6、9、和12天重复。大约2.5μg/天的2-(膦酰基甲基)-戊二酸 每天从硅条中释放出来。每只小鼠的左、右坐骨神经都进行冻 伤；右侧神经用仅仅含有载体的植入的硅条处理，而左侧的神经 用含有2-(膦酰基甲基)-戊二酸的植入的硅条处理。手术15天 后，杀死小鼠，收集它们的坐骨神经，用显微镜和TEM分析。 随机选取冻伤位置2-3毫米外的区域，在显微镜下对1-微米厚的 甲苯胺蓝染色的切面进行定量分析，获取图象。

   NAALADase抑制物对帕金森氏症的作用的活体检测

为了进行NAALADase抑制物对怕金森氏症的作用的活体 检测，对MPTP愈伤的小鼠用2-(膦酰基甲基)-戊二酸或载体 进行处理。

各组小鼠的多巴胺神经元的百分数在表X中给出，并在图 11中显示。

                    表X

   NAALADase抑制物对帕金森氏症的体内作用

                   神经分布密度百分数(平均

                       值±SEM)

载体/载体              24.74±1.03

MPTP/载体              7.82±0.68 MPTP/2-(膦酰基甲基)-戊二酸 16.28±0.98

与未经愈伤处理的小鼠相比，用MPTP和载体处理的小鼠 表现了功能性多巴胺化终端的显著降低(大约降低68％)。愈伤 的小鼠接受2-(膦酰基甲基)-戊二酸(10mg/kg)后表现了TH- 染色的多巴胺化神经元的显著恢复(p＜0.001)。这些结果表明 2-(膦酰基甲基)-戊二酸在小鼠中保护其不受MPTP毒性的侵 害。

    NAALADase抑制物对帕金森氏症的作用的活体检测程序

根据Steiner的描述[Steiner，Proc.Natl.Acad.Sci.，Vol.94， pp.2019-2024(March 1997)]，MPTP愈伤多巴胺神经元的小鼠被 用作帕金森氏症的动物模型。简单地说，对4周龄的雄性CD1 小白鼠给以腹膜内注射30mg/kg的MPTP共5天。这5天中， 还对小鼠皮下给以2-(膦酰基甲基)-戊二酸(10mg/kg)或载 体，并且在MPTP停止后，再继续给以5天。在MPTP处理后的 18天，杀死小鼠，取出脑子并分出各部分。在矢状面和冠脑部 分进行免疫染色，使用了抗-酪氨酸羟化酶(TH)抗体来定量存 活的和恢复的多巴胺化神经元。   NAALADase抑制物对强啡肽引起的脊髓损伤的作用的活体检测

为了活体检测NAALADase抑制物对激发毒性的脊髓损伤 的神经保护作用，对患有强啡肽引起的脊髓损伤的大鼠用载体或 2-(膦酰基甲基)-戊二酸处理。

结果在图12中给出。

与用载体处理的大鼠相比(p＜0.05，Kruskal-Wallis比较)， 与强啡肽A一起给予2-(膦酰基甲基)-戊二酸(4微摩尔)在 给药24小时后引起了对运动机能的显著的改进。大鼠根据它们 的神经学得分(0-4)而表示为可以走动或不可以走动。在给药 24小时后，用2-(膦酰基甲基)-戊二酸同时处理的15只大鼠中 的73％是可以走动的，而用载体处理的14只大鼠中只有14％是 可以走动的(p＜0.05)。这些结果表示2-(膦酰基甲基)-戊二 酸提供了对强啡肽引起的脊髓损伤的有效保护作用。

       NAALADase抑制物对强啡肽引起的脊髓损伤的

              作用的活体检测程序

强啡肽引起的脊髓损伤按照Long等人的方法进行[Long et al.，JPET，Vol.269，No.1，pp.358-366(1993)]。简单地说，用30 号注射针在雄性Sprague-Dawley大鼠(300-350g)的L4-L5脊 椎之间进行脊髓蛛网膜下注射。对大鼠用卤烷麻醉后，在腰带位 置进行背面中线切开。根据对脊椎动物的指导，将针头向前推 进，直到进入靠近马尾的蛛网膜下隙。用CSF流来决定针头的 正确位置。采用Hamilton微注射器给予总体积为20微升的注 射，其中含有强啡肽(20nmole)，插管洗液和2-(膦酰基甲基) -戊二酸或载体。注射后，切开部位用抗菌剂呋喃唑酮局部处理， 并用伤口夹关闭。由于可以迅速地从卤烷麻醉中苏醒过来，因而 可以在注射后的5分钟内进行神经学评价。 神经学评价

对神经学功能的评价采用常规的5等级标度，各级得分的 定义为：4＝正常运动功能；3＝轻微麻痹，但有不平衡的承重和行 走能力；2＝麻痹，但有在不承重的情况下行走的能力；1＝严重的 麻痹，大鼠有限地后肢运动，但不能行走；0＝麻痹迟缓，后肢完 全无法运动。在强啡肽A注射24小时后进行神经学评价。 统计学

受试组神经学得分之间的差异根据Mann-Whitney的U检验 或Kruskal-Wallis检验来确定。

       NAALADase抑制物对肌萎缩性侧索硬化(ALS)

               的作用的体外检测

为了检验NAALADase抑制物对肌萎缩性侧索硬化的神经 保护效果，脊髓器官型培养物用苏型羟基天冬氨酸(THA)、2- (膦酰基甲基)-戊二酸、或THA结合2-(膦酰基甲基)-戊二 酸来处理，并且检测胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性。

对脊髓器官型培养物的每种处理的ChAT活性在下表XI和 图13中给出。

                表XI NAALADase抑制物在ALS的脊髓培养物模型中的神经保护作用

处理                      ChAT活性(对照％)

对照                        100±22.1

2-(膦酰基甲基)-戊二酸       108±18.4

THA                         36±12.1

2-(膦酰基甲基)-戊二酸+THA   121±18.8

如图13所示，用100微摩尔THA处理脊髓器官型培养物 的结果是ChAT活性比对照培养物降低了约36％。将培养物与 THA和2-(膦酰基甲基)-戊二酸(100nM-10μM)共同培养 则显著地使培养物免受THA毒性。

这种效应的剂量依赖性在下面的表XII和图14中给出。

                表XII NAALADase抑制物在ALS的脊髓培养物模型中的神经保护作用

处理                          ChAT活性(对照％)

对照                          100.0

THA                           0

THA和1nM 2-(膦酰基甲基)-      -23.9±18.6

戊二酸

THA和10nM 2-(膦酰基甲基)-     23.1±12.5

戊二酸

THA和100nM 2-(膦酰基甲基)     87.5±21.7

-戊二酸

THA和1μM 2-(膦酰基甲基)-     187.7±32.8

戊二酸

THA和10μM 2-(膦酰基甲基)-    128.7±17.2

戊二酸

在有THA(100μM)存在的条件下，将脊髓培养物与各种剂 量的2-(膦酰基甲基)-戊二酸(1nM-10μM)培养14天。如 图14所示，2-(膦酰基甲基)-戊二酸表现了剂量依赖性的抵抗 THA引起的毒性，最大效应的剂量为1μM。

       NAALADase抑制物对肌萎缩性侧索硬化(ALS)

                的作用的活体检测程序 脊髓器官型培养物

根据Rothstein等人所述[Rothstein et al.，J.Neurochem.，Vol. 65，No.2(1995)，and Rothstein et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA， Vol.90，pp.6591-6595(July 1993)]，从8日龄大鼠的腰脊髓制备 器官型培养物。简单地说，取出腰脊髓并切成300μM厚度的背- 腹切片，将5片这样的切片放置在Millipore CM半透过性30毫 米直径的膜片上。将该膜片放置在1ml的在35毫米直径的培养 孔中的培养基上。培养基包括50％最基本培养基和不含磷酸盐的 HEPES(25mM)、25％热灭活的马血清、25％Hank’s平衡盐溶 液并补充以D-葡萄糖(25.6mg/ml)和谷氨酰胺(2mM)，最 终的pH值为7.2。没有使用抗生素或抗真菌素。在37℃含5％ 的CO2的湿润环境下进行培养(Forma Scientific)。每周两次更 换培养基和添加的药剂。 THA的慢性毒性模型

在各实验中，培养物在制备8天后用于实验，这时，向培 养基中加入苏型羟基天冬氨酸(TAH；100μM)、2-(膦酰基甲 基)-戊二酸(100pM-10μM)、或THA(100μM)±2-(膦 酰基甲基)-戊二酸(100pM-10μM)。药物与100μM THA一 起再培养13-20天。该阶段结束时，收集培养物并按照以下所述 检测ChAT。 ChAT活性

为了确定胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性，每个培养皿中的 脊髓组织(5片)被合并起来并冷冻(-75℃)直至使用。根据以 前的方法(Amersham；Fonnum，1975)用[3H]乙酰基-CoA进行放 射性测定。组织匀浆物的蛋白质含量用Coomassi蛋白质检测试 剂盒(Pierce，Rockford，IL)确定。

                  实施例

以下的实施例仅仅是为了说明本发明的，不从任何方面限 制本发明。除非另有说明，所有的百分数都是以最终组分的100％ 重量为基础的。

                  实施例1

    制备2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸 途径IV  R＝CH3，R1＝CH2Ph 甲基-O-苄基膦酸

二氯甲基亚磷酸盐(10.0g，77mmol)在80mL的干二乙醚 中于氮气条件下冷却到-20℃。在40毫升二乙醚中的苄基醇(23 g，213mmol)和三乙胺(10.2g，100mmol)的溶液被在1小时 内滴加进去，同时保持内部温度为0-10℃。一旦滴加完成后，将 该混合物升温到室温并搅拌过夜。对该混合物过滤，滤饼用200 毫升二乙醚洗两次。合并有机相，减压蒸发，得到25克清亮无 色的液体。对该液体用闪色谱纯化，用1∶1己烷/乙酸乙酯到完全 乙酸乙酯的梯度进行洗脱。收集所需要的洗脱组分，蒸发后得到 甲基-O-苄基膦酸(1，R＝CH3，R1＝CH2Ph，6.5g，50％)，是清亮无 色的油状物。Rf0.1(1∶1，己烷/EtOAc)。 1H NMR(d6-DMSO)：7.4ppm(m，5H)，7.1ppm(d，1H)，5.0ppm (dd，2H)，1.5ppm(d，3H) 2，4-二(苄氧基羰基)丁基(甲基)-o-苄基亚磷酸

甲基-O-苄基膦酸(3.53g，20.7mmol)于200毫升的二氯甲 烷中被在氮气条件下冷却到-5℃。用注射器加入三乙胺(3.2g，32 mmol)，随后再加入三甲基硅烷氯化物(2.9g，27mmol)。反 应混合物在1小时内搅拌升温到室温。加入处在10毫升的二氯 甲烷中的二苄基-2-亚甲基戊二酸盐(2，6.0g，18.5mmol)。搅拌 混合物并室温过夜。反应混合物冷却到0℃，加入三甲基铝(9mL， 18mmol，2.0M在二氯甲烷中)。将烧瓶保温搅拌72小时。清 亮的淡黄色溶液冷却到5℃，用缓慢加入5％氢氯酸来淬灭反应。 淬灭的混合物被升温到室温，移去有机层。有机层用5％盐酸和 水清洗，用硫酸镁干燥，减压蒸发得到8克的清亮淡黄色油状 物。该油状物用硅胶色谱纯化，用1∶1己烷/乙酸乙酯到100％乙 酸乙酯的梯度洗脱。收集所需要的洗脱组分，蒸发后得到2，4-二 (苄氧基羰基)丁基(甲基)-O-苄基亚磷酸(3，R＝CH3，R1＝CH2Ph， 0.8g，8％)，是清亮的无色油状物。Rf0.5(乙酸乙酯)。 1H NMR(CDCl3)：7.4ppm(m，15H)，5.1ppm(m，6H)，3.0ppm(m， 1H)，2.4ppm(m，3H)，2.1ppm(m，3H)，1.5ppm(dd，3H) 元素分析 计算为  C28H31O6P。0.5 H2O：C 68.01，H 6.32。 实际值：C 66.85，H 6.35。 2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸

2，4-二(苄氧基羰基)丁基(甲基)-O-苄基膦酸(0.8g，1.6 mmol)存在于含有100mg的10％Pd/C的20mL水中，在40psi 的压力下氢化4小时。用Celite垫过滤该混合物，高真空蒸发， 得到2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4，R＝CH3，0.28g，)， 是78％的清亮无色粘油。 1H NMR(D2O)：2.5ppm(m，1H)，2.2ppm(t，2H)，2.0ppm(m， 1H)，1.7ppm(m，3H)，1.3ppm(d，3H) 元素分析 计算值C7H13O6P.0.2 H2O：C 36.92 H 5.93 实际值：C 37.06  H 6.31

                   实施例2

       制备2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸 途径IV  R＝n-丁基，R1＝H丁基亚磷酸

二乙基氯代膦酸盐(25g，0.16mmol)存在于60毫升干醚 中，在氮气下冷却到0℃。丁基镁氯化物(80mL，0.16mol，2.0M 溶液在醚中)在两个小时内滴加进去，同时保持内部温度为0℃。 滴加完成后，将白色的浆液加热到30℃并保持1小时。氮气条 件下过滤该悬浮液，对滤出物减压蒸发。将得到的清亮的黄色液 体用水配制为15mL并在室温下搅拌。然后加入浓盐酸(0.5 mL)，进行放热反应。再搅拌该混合物15分钟，用75mL的乙 酸乙酯萃取两次。合并有机层，用硫酸镁干燥，蒸发后得到清亮 的无色液体。用氢氧化钠(40mL，20M)处理该液体，搅拌1小 时。然后将该混合物用二乙醚清洗，酸化到pH1.0。用两份100 毫升的乙酸乙酯从酸化的物质中萃取出所希望的物质。合并有机 物，用硫酸镁干燥，减压蒸发，得到丁基膦酸(1，R＝n-丁基， R1＝H，10g，51％)为清亮的无色液体。 1H NMR(d6-DMSO)：6.9ppm(d，1H)，1.6ppm(m，2H)，1.4ppm (m，4H)，0.9ppm(t，3H) 丁基[2，4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸

丁基膦酸(2.0g，16mmol)存在于80毫升干二氯甲烷中， 氮气下冷却到0℃。加入三乙胺(6.7g，66mmol)，然后加入三 甲基硅氧烷氯化物(58mL，58mmol，在1.0M二氯甲烷中)。 在0℃搅拌该混合物10分钟，加入在20毫升二氯甲烷中的二苄 基2-亚甲基戊二酸(2)(6.4g，20mmol)。移去冷却浴，将反 应物加温至室温，搅拌过夜。将该混合物冷却至0℃，加入5％ 的盐酸终止反应。移去二氯甲烷层，用5％的盐酸和盐水清洗。 对有机层用硫酸镁干燥，蒸发后得到清亮的淡金色液体。用闪色 谱纯化该液体，用3∶1的含5％乙酸的己烷/乙酸乙酯洗脱。合并 所需要的洗脱组分，蒸发后得到丁基[2，4-二(苄氧基羰基)丁基] 膦酸(3，R＝n-丁基，R1＝H)(2.9g，40％)为清亮的无色油。 Rf0.12(3∶1，Hex./EtOAc 5％AcOH). 1H NMR(d6-DMSO)：7.3ppm(m，10)，5.0ppm(s，4H)，2.7ppm(m， 1H)2.3ppm(y，2H)，1.8ppm(m，2H)，1.3ppm(m，4H)，0.8ppm(t， 3H) 2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸 丁基[(2，4-二(苄氧基羰基)丁基)膦酸(2.9g，6.5mmol)在 30mL的含有0.32g 10％Pd/C的水中，在40psi下的Parr氢化 器中氢化4.5小时。混合物通过Celite垫过滤该混合物，高真空 蒸发，得到2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4，R＝n-丁基)(0.75 g，43％)为清亮的无色粘油。 1H NMR(D2O)：2.4ppm(m，1H)，2.1ppm(t，2H)，1.9ppm(m，1H)， 1.6ppm(m，3H)，1.4ppm(m，2H)，1.1ppm(m，4H)，0.6ppm(t，3H) 元素分析 计算值C10H19O6P.0.5 H2O：C 43.64，H 7.32 实际值C 43.25，H 7.12

                  实施例3

      制备2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸 途径IV R＝CH2Ph，R1＝H 苄基膦酸

二乙基氯代亚磷酸盐(25g，0.16mol)在100mL的干二乙 醚中，氮气下冷却到0℃。滴加苄基镁氯化物(80mL，0.16mol， 2.0M溶液在Et2O中)并保持温度在10℃以下。形成了稠的白 色浆液，室温下连续搅拌1小时。氮气下过滤混合物并减压蒸 发，得到清亮的无色液体。搅拌该液体，加入15毫升水，再加 入0.5mL浓盐酸。此时发生放热反应，继续搅拌30分钟，用乙 酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水清洗，用硫酸镁干燥并蒸发。 将清亮的淡金色液体加入到氢氧化钠(50mL，2.0M NaOH)中， 搅拌1小时，用二乙醚清洗。用浓盐酸将水相酸化到pH1.0，用 乙酸乙酯萃取。合并有机层，用硫酸镁干燥，蒸发得到苄基膦酸 (1，R＝CH2Ph，R1＝H)(8g，32％)为清亮的淡金色油。 1H NMR(d6-DMSO)：7.3ppm(m，5H)，6.9ppm(d，1H)，3.1ppm (d，2H) 苄基[2，4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸

苄基膦酸盐(2.3g，15mmol)在150mL的干二氯甲烷中， 氮气下冷却到0℃。滴加三乙胺(6.5g，65mmol，)和三甲基硅氧 烷(5.8g，54mmol)并保持温度在0℃以下。30分钟后，加入 再20毫升二氯甲烷中的二苄基-2-亚甲基戊二酸(2)，历时5 分钟。反应物升温至室温并搅拌过夜。将清亮的溶液冷却到0℃， 用5％盐酸终止反应，用盐水清洗，用硫酸镁干燥，蒸发得到清 亮的黄色液体。用闪色谱提纯，用含有10％乙酸的1∶1的己烷/ 乙酸乙酯洗脱，得到2.0g(28％)的苄基[2，4-二(苄氧基羰基)丁 基]亚磷酸(3，R＝CH2Ph，R1＝H)为清亮的淡黄色油。Rf0.37(1∶1 Hex/EtOAc，10％AcOH) 1H NMR(d6-DMSO)：7.2ppm(m，15H)，5.0ppm(s，4H)，3.0ppm (d，2H)，2.8ppm(m，1H)，2.3ppm(t，2H)，1.9ppm(m，2H)，1.7ppm (t，1H) 2-[(苄氧基羟基氧膦基)甲基]戊二酸

苄基[2，4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸(0.5g，1.0mmol)在 20mL的含有120mg的10％Pd/C的水中，在Parr氢化器上以 40psi氢化6小时。用Celite垫过滤，高真空蒸发，得到0.17g(57％) 的2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4，R＝CH2Ph)为白色固 体。 1H NMR(D2O)：7.1ppm(m，5H)，2.9ppm(d，2H)，2.4ppm(m，1H)， 2.1ppm(t，2H)，1.8ppm(m，1H)，1.6ppm(m，3H) 元素分析 计算值C13H17O6P：C 52.00 H 5.71 实际值：C 51.48 H 5.70

                         实施例4

         制备2-[(苯乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸 途径IV  R＝CH2CH2Ph，R1＝H苯乙基膦酸

二乙基氯代亚磷酸盐(15.6g，0.1mol)在100mL的干二乙 醚中，氮气下冷却到5℃。历时2小时滴加苯乙基镁氯化物(100 mL，0.1mol，1.0M，在THF中)并保持温度在0-10℃范围内。 形成了稠的白色浆液，室温下搅拌过夜。氮气下过滤混合物并减 压蒸发，得到清亮的无色液体。搅拌该液体，加入15毫升水， 再加入0.5mL浓盐酸。此时发生放热反应，继续搅拌15分钟， 用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水清洗，用硫酸镁干燥并蒸 发。将清亮的液体加入到氢氧化钠(40mL，2.0M NaOH)中， 搅拌1小时，用二乙醚清洗一次。用浓盐酸将水相酸化到pH1.0， 用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用硫酸镁干燥，蒸发得到苯乙基 膦酸(1，R＝CH2CH2Ph，R1＝H)(9.8g，58％)为清亮的淡黄色油。 1H NMR(d6-DMSO)：7.2ppm(m，5H)，6.9ppm(d，1H)，2.8ppm (m，2H)，1.9ppm(m，2H) 2，4-(苄氧基羰基)丁基(苯乙基)膦酸

苯乙基膦酸(1.0g，5.9mmol)在50mL的干二氯甲烷中， 氮气下冷却到-5℃。滴加三乙胺(2.3g，23mmol)以及三甲氧基 硅烷氯化物(2.2g，21mmol)并保持温度在0℃。10分钟后，用 10分钟的时间将处于10毫升二氯甲烷中的苄基-2-亚甲基戊二酸 (2)加入到其中。反应混合物升至室温并搅拌过夜。将清亮的 溶液冷却至0℃，用5％盐酸终止反应，移去有机层。用盐水清 洗有机层，用硫酸镁干燥并蒸发，得到将清亮的淡金色液体。用 闪色谱纯化，用含有5％AcOH的1∶1的己烷/EtOAc洗脱，得到 2，4-(苄氧基羰基)丁基(苯乙基)膦酸为清亮的无色油。 1H NMR(d6-DMSO)：7.2ppm(m，15H)，5.0ppm(s，4H)，3.3ppm (m，1H)，2.8ppm(m 4H)，2.3ppm(m，2)，1.8ppm(m，4H) 2，4-[(苯乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸

2，4-二(苄氧基羰基)丁基(苯乙基)膦酸(1.1g，2.2mmol) 在20mL的含有120mg的10％Pd/C的水中，在Parr氢化器上 以40psi氢化过夜。用Celite垫过滤，高真空蒸发，得到0.8g (114％)的2-[(苯乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4，R＝ CH2CH2Ph)为白色固体。 1H NMR(D2O)：7.2ppm(m，5H)，2.7ppm(m，2H)，2.5ppm(m， 1H)，2.3ppm(t，2H)，1.9ppm(m，6H)，1.5ppm(t，1H) 元素分析 计算值C14H19O6P：0.75 H2O，0.5 AcOH：C 50.35 H 6.34 实际值：C 50.26；H 5.78

                实施例5

制备2-[(3-苯基丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸 途径IV  R＝CH2CH2CH2Ph，R1＝H3-苯基丙基膦酸

向在20毫升干二乙醚中的镁(2.44g，0.10mol)中，在氮 气下加入数粒晶体碘。用滴加漏斗将在80毫升二乙醚中的苯丙 基溴(20.0g，0.10mol)加入。所加入的溴溶液为约10毫升。几 分钟后，碘被消耗，在保持温度为35℃的条件下，加入另外的 苯丙基溴。加入完成后(约1.5小时)，将该混合物密封并保存 在5℃。

在50毫升二乙醚中的二乙基氯代亚磷酸盐(15.7g，0.1 mol)于氮气下冷却至5℃。用2小时的将苯丙基镁溴化物(100 mL，0.1mol，1.0M溶液，在Et2O中)滴加进去，并保持温度在 0-10℃。形成稠的白色浆液，搅拌30分钟。氮气下过滤混合物 并减压蒸发，得到清亮的无色液体。向该液体中加入20毫升水， 再加入0.5mL浓盐酸。此时发生放热反应，继续搅拌20分钟， 用乙酸乙酯萃取。合并有机层，用盐水清洗，用硫酸镁干燥并蒸 发。向该清亮的液体中加入氢氧化钠(40mL，2.0M NaOH)中， 搅拌1小时，用二乙醚清洗。用浓盐酸将水相酸化到pH1.0，用 乙酸乙酯萃取。合并有机层，用硫酸镁干燥，蒸发得到3-苯丙基 亚磷酸(1，R＝CH2CH2CH2Ph，R1＝H)(9.8g，53％)为清亮的无色 油。 1H NMR(d6-DMSO)：7.2ppm(m，5H)，6.9ppm(d，1H)，2.6ppm (t，2H)，1.7ppm(m，2H)，1.6ppm(m，2H) 2，4-二(苄氧基羰基)丁基(3-苯丙基)膦酸

3-苯丙基膦酸(1.0g，5.4mmol)在50mL的干二氯甲烷中， 氮气下冷却到-5℃。滴加三乙胺(2.2g，22mmol，)和三甲基硅 氧烷(2.1g，19mmol)并保持温度在0℃。10分钟后，加入在 10毫升二氯甲烷中的二苄基-2-亚甲基戊二酸盐(2)，历时10 分钟。反应物升温至室温并搅拌过夜。将清亮的溶液冷却到0℃， 用5％盐酸终止反应，移去有机层，用盐水清洗，用硫酸镁干燥， 蒸发得到清亮的黄色液体。用闪色谱提纯，用含有5％乙酸的4∶1 的己烷/乙酸乙酯洗脱，得到1.5g(56％)的2，4-二(苄氧基羰基) 丁基(3-苯丙基)亚磷酸(3，R＝CH2CH2CH2Ph，R1＝H)为清亮的 淡黄色油。Rf0.58(1∶1 Hex/EtOAc，5％AcOH) 1H NMR(d6-DMSO)：7.2ppm(m，15H)，5.0ppm(s，4H)，2.7ppm (m，1H)，2.5ppm(m，5H)，2.2ppm(m，2H)，1.8ppm(m，3H)，1.6 ppm(m，2H) 元素分析： 计算值C29H33O6P.  1.3 H2O：C 65.48 H 6.75 实际值C 65.24 H 6.39 2-[(3-苯丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸

2，4-二(苄氧基羰基)丁基(3-苯丙基)膦酸(15)(1.4g， 2.8mmol)在20mL的含有150mg的10％Pd/C的水中，在Parr 氢化器上以40psi氢化过夜。用Celite垫过滤，高真空蒸发，得 到0.8g(89％)的2-[(3-苯丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4， R＝CH2CH2CH2Ph)为淡黄色粘油。 1H NMR(D2O)：7.4ppm(m，5H)，2.7ppm(m，3H)，2.4ppm(t，3H)， 1.8ppm(m，7H) 元素分析 计算值C15H21O6P：0.75H2O，0.75 AcOH：C 51.23 H 6.64 实际值：C 50.85 H 6.02

                 实施例6

制备2-{[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸 途径V，化合物5，R＝4-甲基苄基

六甲基硅氮烷(21.1mL，100mmol)加入到剧烈搅拌的亚磷 酸铵(8.30g，100mmol)中，得到的悬浮液在105℃搅拌2小时。 然后在0℃下向该悬浮液滴加4-甲基苄基溴(5.00g，27.0mmol) 溶液。室温下搅拌该混合物19小时。用二氯甲烷(50毫升)稀 释该反应混合物，用1N HCl(50毫升)清洗。分出有机层，用 硫酸钠干燥，浓缩后得到4.72克白色固体。将其溶于50毫升的 二氯甲烷中，加入苄醇(3.24g，20mmol)。然后在0℃下向该 溶液加入二氯代己基碳化二亚胺(6.19g，30mmol)，室温下搅 拌14小时。减压去除溶剂，将残留物悬浮于EtOAc中。对得到 的悬浮液进行过滤，然后浓缩。对浓缩物用硅胶色谱纯化(己烷 /EtOAc，4∶1-1∶1)得到2.40g的4-甲基苄基-O-苄基亚磷酸(2，R＝4- 甲基苄基)为白色固体(34％产率)：Rf 0.42(EtOAc)； 1H NMR(DMSO-d6)δ2.30(s，3H)，3.29(d，J＝16.6Hz，2H)，5.2(m， 2H)，7.0(d，J＝543Hz，1H)，7.1-7.2(m，4H)，7.3-7.4(m，5H) 2，4-二(苄氧基羰基)-丁基(4-甲基苄基)-O-苄基膦酸

向4-甲基苄基-O-苄基膦酸(2，R＝4-甲基苄基)(2.16g，8.3 mmol)在THF(15mL)中加入氢化钠(0.10g，60％分散在油中)， 然后在0℃下加入二苄基2-亚甲基戊二酸盐，反应混合物用 EtOAc(50mL)稀释，加入到1N HCl(50mL)中。分出有机 层，用硫酸钠干燥，浓缩。用硅胶色谱提纯(己烷∶EtOAc，4∶1-1∶1) 得到3.41g的2，4-二(苄氧基羰基)丁基(4-甲基苄基)-O-苄基 膦酸(4，R＝4-甲基苄基)，为无色油(70％产率)：Rf0.61(EtOAc)； 1H NMR(CDCl3)δ1.6-1.8(m，1H)，1.9-2.0(m，2H)，2.1-2.4(m， 6H)，2.7-2.9(m，1H)，3.05(dd，J＝9.0，16.8Hz，2H)，4.8-5.1(m，6H)， 7.0-7.1(m，4H)，7.2-7.4(m，15H) 2-{[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸

向2，4-二(苄氧基羰基)丁基(4-甲基苄基)-O-苄基亚磷酸 (0.70g，1.2mmol)在乙醇(30mL)中加入Pd/C(5％，0.10g)， 然后在氢气(50psi)条件下摇动该悬浮液18小时。用Celite垫 过滤该悬浮液，减压浓缩。得到的残留物溶于蒸馏水(5mL)， 过AG 50W-X8树脂柱(H+形式)，冻干后得到0.21g的2-{[(4- 甲基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸(5，R＝4-甲基苄基)，为白 色固体(55％产率)：Rf0.62(I-PrOH∶H2O，7∶3)； 1H NMR(D2O)δ1.7-1.9(m，3H)，2.0-2.2(m，1H)，2.33(dt，J＝1.7 Hz，7.4Hz，2H)，2.55-2.70(m，1H)，3.12(d，J＝16.5Hz，2H)，7.0-7.1 (m，2H)，7.2-7.3(m，2H) 元素分析：计算值C13H17O6P，0.30 H2O：C 52.60；H 6.18. 实际值：C 52.60；H 6.28

                        实施例7

         制备2-{[(4-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸 途径V，R＝4-氟代苄基 具体的制备如上述其中R＝甲基苄基的实施例。 Rf 0.64(i-PrOH∶H2O，7∶3)；1H NMR(D2O)δ1.7-1.9(m，3H)， 2.0-2.2(m，1H)，2.3-2.4(m，2H)，2.55-2.70(m，1H)，3.12(d，J＝16.5 Hz，2H)，7.0-7.1(m，2H)，7.2-7.3(m，2H) 元素分析 计算值C13H16FO6P，0.25 H2O：C 48.38；H 5.15 实际值C 48.38；H 5.15.

                      实施例8

       制备2-{[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸 途径V：R＝4-甲氧基苄基 具体的制备如上述其中R＝甲基苄基的实施例。 Rf 0.56(i-PrOH∶H2O，7∶3)； 1H NMR(D2O)δ1.8-1.9(m，3H)，2.0-2.2(m，1H)，2.3-2.4(m，2H)， 2.55-2.70(m，1H)，3.16(d，2H)，3.81(s，3H)，6.98(d，2H)，7.25(d， 2H). 元素分析 计算值C14H19FO7P，0.30 H2O：C 50.09；H 5.89. 实际值C 49.98；H 5.80.

                      实施例9

      制备2-{[(2-氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸 途径V，R＝2-氟代苄基 具体的制备如上述其中R＝甲基苄基的实施例。 Rf 0.67(i-PrOH∶H2O，7∶3)； 1H NMR(D2O)δ1.8-1.9(m，3H)，2.0-2.2(m，1H)，2.3-2.4(m，2H)， 2.55-2.70(m，1H)，3.28(d，J＝16.6Hz，2H)，7.1-7.5(m，4H). 元素分析 计算值C13H16FO6P，0.10 H2O：C 48.79；H 5.10. 实际值C 48.84；H 5.14.

              实施例10

制备2-{[(五氟代苄基)羟基氧膦基]甲基}戊二酸 途径V，R＝4-五氟代苄基 具体的制备如上述其中R＝甲基苄基的实施例。 Rf 0.69(i-PrOH∶H2O，7∶3)。 1H NMR(D2O)δ1.8-2.0(m，3H)，2.1-2.3(m，1H)，2.3-2.5(m，2H)， 2.7-2.9(m，1H)，3.29(d，J＝15.4Hz，2H). 元素分析 计算值C13H12F5O6P，0.45 H2O：C 39.20；H 3.26. 实际值C 39.17；H 3.28.

                   实施例11

       制备2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸 途径VI，化合物9 2，4-二(苄氧基羰基)丁基膦酸(6)

亚磷酸铵(10g，0.12mol)放置在圆底烧瓶中，在氮气条件 下搅拌。加入六甲基乙硅烷(HMDS，25.5mL，0.12mol)并加 热到110℃。2小时后，将混合物冷却到0℃，加入二氯甲烷(120 ml)。然后，滴加入二苄基-2-亚甲基戊二酸盐(41g，0.13mol) 内氯仿并用三乙胺处理(155g，1.52mol)。将该混合物升至室 温，搅拌16小时。加入5％盐酸(75毫升)终止反应，移去有 机层。用硫酸镁干燥，减压蒸发得到42克(90％)清亮无色油。 1H NMR(CDCl3)7.36ppm(m，10H)，7.1ppm(d，1H)，5.19ppm(s， 2H)，5.15ppm(s，2H)，2.92ppm(m，1H)，2.21ppm(m，6H). 2，4-二(苄氧基羰基)丁基苄基膦酸(7)

向2，4-二-(苄氧基羰基)丁基膦酸(6)(19.3g，49.4mmol) 在四氢呋喃中，加入苄醇(5.3g，49.3mmol)，并且向在四氢呋 喃中的二甲胺加入苄醇(5.3g，49.3mmol)和二甲氨基吡啶(0.5 g)。然后加入二环己基碳化二亚胺(DDC，12g，58mmol)，得 到白色沉淀。30分钟后，过滤白色的悬浮液，减压蒸发。对清 亮的无色油用闪色谱纯化，用1∶1的Hex./EtOAc洗脱，得到2，4- 二(苄氧基羰基)丁基苄基膦酸(7)(11.5g，47％)，为清亮 的无色油。 Rf0.16(1∶1的Hex./EtOAc) 1H NMR(CDCl3)：7.3PPM(m，15H)，7.2ppm(d，1H)，5.0ppm(m， 6H)，2.9ppm(m，1H)，2.2ppm(m，3H)，1.9ppm(m，3H). 2，4-二(苄氧基羰基)丁基[羟基(苯基)甲基]苄基膦酸(8)

2，4-二(苄氧基羰基)丁基苄基膦酸(7)在5毫升的干THF 中，将其在搅拌冷却(0℃)的条件下滴加到氢化钠(0.09g，2.3 mmol)在15毫升的THF的混合物中。15分钟后，在保持温度 为0℃的条件下，用注射器加入苯甲醛(0.23g，2.2mmol)。30 分钟后，用水终止反应，用二氯甲烷萃取两次。合并有机层，蒸 发得到清亮的无色油。用硅胶色谱提纯该油，用1∶1的Hex./EtOAc 溶剂系统洗脱。收集所需要的组分，蒸发后得到0.4g(33％)的 2，4-二(苄氧基羰基)丁基[羟基(苯基)甲基]苄基膦酸(6)为 清亮的无色油。Rf0.18(1∶1Hex./EtOAc) 1H NMR(CDCl3)：7.3ppm(m，20H)，5.2ppm(m，1H)，4.9ppm(m， 6H)，2.8ppm(dm，1H)，2.2ppm(m，3H)，1.9ppm(m，3H) 2-{[羟基(苯基)甲基]羟基氧膦基甲基}戊二酸(9)

2，4-二(苄氧基羰基)丁基[羟基(苯基)甲基]苄基膦酸(6) (0.37g，0.6mmol)在25毫升的含有0.10g的10％Pd/C的水中， 在40psi下氢化6小时。用Celite垫过滤，冻干后得到2-{[羟基 (苯基)甲基]羟基氧膦基甲基}戊二酸(9)(0.14g，70％)为白 色固体。 1H NMR(D2O)：7.4ppm(m，5H)，5.0ppm(d，1H)，2.7ppm(m，1H)， 2.4ppm(m，2H)，2.2ppm(m，1H)，1.9ppm(m，3H) 元素分析： 计算值C13H17O7P，0.6 H2O：C 47.74 H 5.61 实际值C 47.73 H 5.68

                    实施例12

           用途径III制备二苄基2-亚甲基戊二酸

将苄基丙烯酸盐(500g，3mol)用油浴加热到100℃。停止 加热后，在保持内部温度低于140℃的条件下将HMPT(10g，61 mmol)滴加进去。加入完成后，搅拌将混合物冷却到室温。加 入硅胶与5∶1的Hex./EtOAc浆液。然后将该浆液转移到含有干 硅胶的柱子内。用1∶1的Hex./EtOAc洗柱，收集后蒸发，得到 450克的清亮金色液体，在高真空(200μHg)和185℃下蒸馏， 得到212克(42％)清亮的无色液体。 1H NMR(CDCl3)：7.3ppm(s，10H)，6.2ppm(s，1H)，5.6ppm(s， 1H)，5.2ppm(s，2H)，5.1ppm(s，2H)，2.6ppm(m，4H)

                      实施例13 采用途径III制备二苄基2-{[双(苄氧基)磷酰基]甲基}戊二酸

将二苄基亚磷酸盐(9.5g，36mmol)在350毫升二氯甲烷 中冷却到0℃。搅拌该溶液，并加入三甲基铝(18.2ml，2.0M，在 己烷中的溶液，36.4mmol)。30分钟后，用10分钟的时间滴加 在90毫升二氯甲烷中的1(6.0g，37mmol)。清亮的无色溶液 升温到室温，搅拌过夜。缓慢加入5％盐酸停止反应。再搅拌1.5 小时后，移去下部的有机层，用100毫升的二氯甲烷萃取水相一 次。合并有机层，用硫酸镁干燥，蒸发得到清亮的淡金色液体。 对该液体进行硅胶色谱提纯(4cm×30cm)，用梯度溶剂系统洗 脱(4∶1-1∶1的Hex./EtOAc)。合并含有所需要的产物的洗脱液， 蒸发后得到二苄基2-{[双(苄氧基)膦酰基]甲基}戊二酸(7.1g， 42％)为清亮的无色液体。然后在Kughleror装置上，在0.5mmHg 和195-200℃蒸馏该液体。残留的淡金色油经过硅胶色谱(1∶1 的Hex./EtOAc)得到2.9g二苄基2-{[双(苄氧基)膦酰基]甲基} 戊二酸，为清亮的无色油。TLC Rf 0.5(1∶1的Hex./EtOAc) 1H NMR(CDCl3)：7.1-7.4ppm(m，20H)，5.05ppm(s，2H)，4.8-5.03 ppm(m，6H)，2.8(1H)，2.22-2.40(m，3H)，1.80-2.02(m，3H)

                    实施例14

    采用途径III制备2-(磷酰基甲基)戊二酸(化合物3)

在含有0.29g(6mol％)的10％Pd/C的20毫升甲醇混合物 中加入苄基戊二酸盐2(2.9g，4.9mmol)。以40psi氢化24小 时，过滤，蒸发，得到3(1.0g，90％)为清亮的微带金色的粘油。 1H NMR(D2O)：2.6-2.78(m，1H)，2.25-2.40(m，2H)，1.75-2.15(m， 4H).

                     实施例15

患者是有局部缺血损伤危险的。对患者可以用有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物预处理。可以预计的 是，在预处理后，患者将可以避免由于局部缺血造成的损伤。

                   实施例16

患者正在经历局部缺血的伤害。在发病期间和之后，患者 可以接受有效剂量的NAALADase抑制物或本发明的药用组合物 的治疗。可以预计的是，经过治疗，患者将恢复或将不受任何显 著的局部缺血造成的损伤。

                   实施例17

患者经历了局部缺血的伤害。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将从局部缺血造成的损伤中恢复出来。

                   实施例18

患者正在经历谷氨酸异常。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不受谷氨酸异常的进一步损伤或将从谷氨 酸异常中恢复过来。

                   实施例19

患者经历了或正在经历神经侵害，例如，神经退化疾病或 神经退化病程所引起的侵害。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不受任何神经侵害的进一步伤害或从神经 侵害中恢复出来。

                  实施例20

患者经历了或正在经历帕金森氏症。患者可以接受有效剂 量的NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预 计的是，经过治疗，患者将不会发生任何进一步的神经退化，或 从帕金森氏症中恢复出来。

                  实施例21

患者正在经历肌萎缩性侧索硬化症(ALS)。患者可以接受 有效剂量的NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。 可以预计的是，经过治疗，患者将不会发生任何进一步的神经退 化，或从ALS中恢复出来。

                  实施例22

患者正在经历癫痫。患者可以接受有效剂量的NAALADase 抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的是，经过治 疗，患者将不会发生任何进一步的神经退化，或从癫痫中恢复出 来。

                  实施例23

患者正在经历髓磷脂化异常/脱髓磷脂化异常。患者可以接 受有效剂量的NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治 疗。可以预计的是，经过治疗，患者将不会发生任何进一步的神 经退化，或从髓磷脂化异常/脱髓磷脂化异常中恢复出来。

                  实施例24

患者正在经历或经历过脑血管发病，例如，中风。患者可 以接受有效剂量的NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的 治疗。可以预计的是，经过治疗，患者将不会发生任何进一步的 由脑血管发病而造成的损伤，或从这种损伤中恢复出来。

                  实施例25

患者正在经历头部外伤。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不会发生任何进一步的脑局部缺血、由头 部外伤引起的脊髓或外周损伤，或从这些损伤中恢复出来。

                  实施例26

患者正在经历脊髓外伤。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不会发生任何由脊髓外伤引起的局部缺血 的损伤，或从这些损伤中恢复出来。

                  实施例27

患者将要进行手术。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不会发生任何由手术引起的或相关的脑局 部缺血、脊髓或外周损伤。

                 实施例28

患者正在经历病灶性局部缺血，例如，与脑血管血栓、头 部外伤、水肿、脑瘤有关的局部缺血。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不会发生任何进一步的由于病灶性局部缺 血引起的对脑、脊髓或外周的损伤，或从这些损伤中恢复出来。

                 实施例29

患者正在经历全面性局部缺血。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不会发生任何进一步的由于全面性局部缺 血引起的对脑、脊髓或外周的损伤，或从这些损伤中恢复出来。

                 实施例30

患者正在经历心跳停止。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不会发生与心跳停止有关的脑局部缺血、 脊髓或外周的损伤，或从这些损伤中恢复出来。

                 实施例31

患者正在经历低氧、窒息、或产期窒息。患者可以接受有 效剂量的NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可 以预计的是，经过治疗，患者将不会发生与低氧、窒息、或产期 窒息有关的脑局部缺血、脊髓或外周的损伤，或从这些损伤中恢 复出来。

                 实施例32

患者正在经历大脑皮层损伤。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不会发生由于大脑皮层损伤引起的脑局部 缺血损伤，或从这些损伤中恢复出来。

                 实施例33

患者正在经历尾状核损伤。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不会发生任何由于尾状核损伤引起的脑局 部缺血损伤，或从这些损伤中恢复出来。

                 实施例34

患者被诊断为患有上述实施例中给出的疾病。患者可以接 受有效剂量的NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治 疗，可以采用静脉内、肌肉内、脑内、肠道内、皮下、鼻内、给 药，可以使用带有或不带有泵的插管，口服，皮肤帖，局部给药， 或通过植入性聚合物给药。经过治疗，患者的状态将得到改善。

                 实施例35

患者被诊断为患有上述实施例给出的疾病。患者可以接受 有效剂量的NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗， 给药的剂量是100mg/kg，还可以接着给予2小时的20mg/kg/hr 的静脉内点滴。经过治疗，患者的状态将得到改善。

                 实施例36

患者正在经历上述实施例所给出的疾病引起的皮层损 伤。患者可以接受有效剂量的NAALADase抑制物或本发明的药 用组合物的治疗。可以预计的是，经过治疗，患者将不会发生任 何进一步的损伤，或者表现出至少65％-80％的从皮层损伤中的 恢复。

                 实施例37

患者正在经历多重性硬化。患者可以接受有效剂量的 NAALADase抑制物或本发明的药用组合物的治疗。可以预计的 是，经过治疗，患者将不会发生任何进一步的脱髓磷脂化，或从 多重性硬化中恢复出来。

                 实施例38

患者正在经历格-巴二氏综合症引起的外周神经疾病。患者 可以接受有效剂量的NAALADase抑制物或本发明的药用组合物 的治疗。可以预计的是，经过治疗，患者将不会发生任何进一步 的脱髓磷脂化，或从外周神经疾病中恢复出来。

虽然上面对本发明进行了详细的描述，但是，应该理解的 是，本发明还存在有众多的变型。这些变型都不应该被认为是脱 离本发明的精神和发明范围的。而且，这些变型都是本发明的权 利要求书的范围所包括的。

相关申请

本申请是下述各申请的部分继续申请：1996年9月27日提 交的题目为“用NAALADase抑制物治疗全面性和病灶性局部缺 血的方法”的美国专利申请第08/665,775号申请；1997年4月 24日提交的题目为“膦酸衍生物”的美国专利申请第08/842,360 号申请；1997年5月27日提交的题目为“NAALADase抑制物” 的美国专利申请(申请序列号还未获知，代理人案卷号为 23029-X)；1997年5月27日提交的题目为“NAALADase抑制 物”的美国专利申请(申请序列号还未获知，代理人案卷号为 23029-X2)。这些申请的全部内容都通过在此引述而合并于本 文。 发明背景