一种可用于急性肺损伤的药物组合物
阅读：895发布：2021-04-13
专利汇可以提供一种可用于急性肺损伤的药物组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 生物 制药领域，关于一种可用于 治疗 急性 肺 损伤的药物组合物，其有效成分包含 肿瘤 坏死 因子受 体－免疫球蛋白(TNFR－Ig)的融合蛋白。本发明的药物组合物在体内可以与细胞表面上的TNFR竞争性地结合周围的TNF，减少结合于细胞上TNFR的TNF的数目，从而减少或消除由TNF所引发的 炎症 反应，其对于治疗严重急性呼吸综合症是非常有效的。，下面是一种可用于急性肺损伤的药物组合物专利的具体信息内容。
1.一种可用于急性肺损伤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中包含 TNFR-Ig融合蛋白、海藻糖以及磷酸盐缓冲液。
2.根据权利要求1所述的可用于急性肺损伤的药物组合物，其特征在于，其中 含有TNFR-Ig融合蛋白30-70mg/ml，含有海藻糖30-70mg/ml，溶解在 100mM的磷酸盐缓冲液中。
3.根据权利要求2所述的可用于急性肺损伤的药物组合物，其特征在于，其中 含有TNFR-Ig融合蛋白50mg/ml，含有海藻糖50mg/ml，溶解在100mM的 磷酸盐缓冲液中。
4.权利要求1-3中任何一种可用于急性肺损伤的药物组合物，其特征在于， 可将液态的药物组合物制成冻干制剂，在施用时用蒸馏水重悬。
5.权利要求1-3中任何一种可用于急性肺损伤的药物组合物，其特征在于， 可采取肌内给药、静脉内给药、皮下给药或皮内给药。
6.根据权利要求5所述的可用于急性肺损伤的药物组合物，其特征在于，采用 静脉注射的方式给药。
技术领域
本发明涉及生物制药领域，涉及一种药物组合物，更特别的，本发明涉 及一种可用于治疗急性肺损伤的药物组合物。
背景技术
严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndromes，SARS)曾 波及全球30多个国家，总发病人数接近万人，其具有强烈的传染性，可迅速 向周边地区播散，死亡率超过10％。一旦再次爆发，将再一次严重危及整个人 类的健康，引起恐慌。
大部分SARS感染者病情恶化后会表现出急性呼吸困难综合症(ARDS， Acute Respiratory Distress Syndrome)和急性肺损伤(ALI，Acute Lung Injury)，一些重症的患者还会出现休克或多器官功能障碍综合征(MODS)。正 是这些肺部的急性病变和严重损伤导致了SARS患者的最终死亡。
因此，本领域迫切需要开发一种新的能够有效缓解和/或治疗急性肺损伤 的药物。
肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α)是机体内的一种 多功能免疫调节分子，它可以和细胞膜上的受体结合发挥作用，往往引起靶 细胞的死亡(它的名称即来源于此)或招引免疫效应细胞在局部的聚集，参 与多种生理、病理与免疫过程。
通过对肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α)与胸肺良 恶性疾病关系研究证明，TNF与胸肺良恶性疾病的发生、发展均有一定关系。 近年来，国内外研究表明，肺泡巨噬细胞可产生TNF，因此推测它可能与胸肺 疾病的发生、发展有着较为密切的关系。有研究揭示TNF在重症肺炎发病机理 中起重要作用，其可能的病理作用有：(1)参与内皮细胞的损害，促进微血 栓形成；(2)降低肌细胞跨膜电位，Na+、K+泵失效；(3)诱发其他炎性介 质释放，加重感染中毒反应。临床研究显示，通过对正常对照组、胸肺良性 病变组、恶性病变组同时检测血清和胸液中的TNF含量进行比较发现，良恶性 病变患者血清与胸液中的TNF均明显增高，与正常组中的含量水平存在着显著 的差异。
另外，TNF对继发性细胞因子的释放有重要作用。当各种TNF作用过重过 久，肺毛细血管内皮细胞、肺间质和肺泡上皮细胞严重损害，最终产生ARDS。 因此，调控体内TNF的水平对肺损伤的防治有重要作用。
基于TNF的以上特征，本申请人旨在提供一种药物组合物将TNFR-Ig融合 蛋白与其他生物可接受的制剂混合，制备出在治疗上有效的药物制剂。 TNFR-Ig融合蛋白作为一种半衰期长的能够结合TNF因子的物质，在体内可以 与细胞表面上的TNFR竞争性地结合周围的TNF，有效减少结合于细胞上TNFR的 TNF的数目，从而减少或消除由TNF所引发的炎症反应，达到抑制由SARS等因 素导致的急性肺损伤的目的。
对于TNFR-Ig融合蛋白的结构以及制备方法，可参见本申请人的中国专利 申请01132074.5(申请日：2001年10月31日)，其中有详细的描述。
除了在本发明中所特别描述的以外，其它一些涉及的药物制备技术、试 剂、检测方法等都是本领域中已知的，本领域中熟练的技术人员能够独立地 或者通过参阅公开文献或工具书加以重现。
大部分SARS感染者病情恶化后会表现出急性呼吸困难综合症(ARDS， Acute Respiratory Distress Syndrome)和急性肺损伤(ALI，Acute Lung Injury)，一些重症的患者还会出现休克或多器官功能障碍综合征(MODS)。正 是这些肺部的急性病变和严重损伤导致了SARS患者的最终死亡。
因此，本领域迫切需要开发一种新的能够有效缓解和/或治疗急性肺损伤 的药物。
肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α)是机体内的一种 多功能免疫调节分子，它可以和细胞膜上的受体结合发挥作用，往往引起靶 细胞的死亡(它的名称即来源于此)或招引免疫效应细胞在局部的聚集，参 与多种生理、病理与免疫过程。
通过对肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α)与胸肺良 恶性疾病关系研究证明，TNF与胸肺良恶性疾病的发生、发展均有一定关系。 近年来，国内外研究表明，肺泡巨噬细胞可产生TNF，因此推测它可能与胸肺 疾病的发生、发展有着较为密切的关系。有研究揭示TNF在重症肺炎发病机理 中起重要作用，其可能的病理作用有：(1)参与内皮细胞的损害，促进微血 栓形成；(2)降低肌细胞跨膜电位，Na+、K+泵失效；(3)诱发其他炎性介 质释放，加重感染中毒反应。临床研究显示，通过对正常对照组、胸肺良性 病变组、恶性病变组同时检测血清和胸液中的TNF含量进行比较发现，良恶性 病变患者血清与胸液中的TNF均明显增高，与正常组中的含量水平存在着显著 的差异。
另外，TNF对继发性细胞因子的释放有重要作用。当各种TNF作用过重过 久，肺毛细血管内皮细胞、肺间质和肺泡上皮细胞严重损害，最终产生ARDS。 因此，调控体内TNF的水平对肺损伤的防治有重要作用。
基于TNF的以上特征，本申请人旨在提供一种药物组合物将TNFR-Ig融合 蛋白与其他生物可接受的制剂混合，制备出在治疗上有效的药物制剂。 TNFR-Ig融合蛋白作为一种半衰期长的能够结合TNF因子的物质，在体内可以 与细胞表面上的TNFR竞争性地结合周围的TNF，有效减少结合于细胞上TNFR的 TNF的数目，从而减少或消除由TNF所引发的炎症反应，达到抑制由SARS等因 素导致的急性肺损伤的目的。
对于TNFR-Ig融合蛋白的结构以及制备方法，可参见本申请人的中国专利 申请01132074.5(申请日：2001年10月31日)，其中有详细的描述。
除了在本发明中所特别描述的以外，其它一些涉及的药物制备技术、试 剂、检测方法等都是本领域中已知的，本领域中熟练的技术人员能够独立地 或者通过参阅公开文献或工具书加以重现。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种可用于急性肺损伤的药物组合 物，所述药物组合物中包含TNFR-Ig融合蛋白、海藻糖以及磷酸盐缓冲液，以 适当的配比进行配制。
进一步的，在本发明所述的可用于急性肺损伤的药物组合物中，含有 TNFR-Ig融合蛋白30-70mg/ml，含有海藻糖30-70mg/ml，溶解在100mM的磷酸 盐缓冲液中。更进一步的，在本发明所述的可用于急性肺损伤的药物组合物中， 含有TNFR-Ig融合蛋白50mg/ml，含有海藻糖50mg/ml，溶解在100mM的磷酸 盐缓冲液中。
在本发明的一个方面，可将以上所述的任何一种可用于急性肺损伤的药物 组合物制成冻干制剂，在施用时用注射用蒸馏水重悬。采用的冻干方法是本技术 领域研究人员常规使用的。
本发明所述的可用于急性肺损伤的药物组合物在施用时，可采取肌内给药、 静脉内给药、皮下给药或皮内给药的方式。进一步优选的，可采用静脉注射给 药的方式。
在本发明中，“本发明的药物组合物”指用于治疗急性肺损伤的，含有 TNFR-Ig融合蛋白和药学上可接受的载体的组合物。
在本发明中，“TNFR-Ig融合蛋白”指由肿瘤坏死因子受体的细胞外段与 免疫球蛋白的Fc片段所形成的融合蛋白。优选的TNFR是II型肿瘤坏死因子受 体。此外，在TNFR和Ig部分之间宜具有长度为10-30个氨基酸的肽接头。优选 的，本发明的药物组合物可采用本申请人在中国专利申请01132074.5中所提 供的TNFR-Ig融合蛋白。
海藻糖(α-D-吡喃葡糖基-(-吡喃葡糖苷))是天然存在的非还原型二 糖。海藻糖的形式包括结晶型的海藻糖二水合物(TD)，非结晶型海藻糖(AT)， 也可以是无水形式的海藻糖，即无水非晶型海藻糖(AAT)和无水结晶海藻糖 (ACT)。本发明中可使用任何物理形式的海藻糖，包括无水、部分水合、完 全水合的海藻糖。
在使用本发明的药物组合物时，是将安全有效量药物组合物用于哺乳动 物，其中该安全有效量通常至少约10μg TNFR-Ig融合蛋白/Kg体重，而且在 大多数情况下不超过约8mg TNFR-Ig融合蛋白/Kg体重，较佳地该剂量是约10 μg/千克体重-约1mg/Kg体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健 康状况、年龄等因素。
进一步的，在本发明所述的可用于急性肺损伤的药物组合物中，含有 TNFR-Ig融合蛋白30-70mg/ml，含有海藻糖30-70mg/ml，溶解在100mM的磷酸 盐缓冲液中。更进一步的，在本发明所述的可用于急性肺损伤的药物组合物中， 含有TNFR-Ig融合蛋白50mg/ml，含有海藻糖50mg/ml，溶解在100mM的磷酸 盐缓冲液中。
在本发明的一个方面，可将以上所述的任何一种可用于急性肺损伤的药物 组合物制成冻干制剂，在施用时用注射用蒸馏水重悬。采用的冻干方法是本技术 领域研究人员常规使用的。
本发明所述的可用于急性肺损伤的药物组合物在施用时，可采取肌内给药、 静脉内给药、皮下给药或皮内给药的方式。进一步优选的，可采用静脉注射给 药的方式。
在本发明中，“本发明的药物组合物”指用于治疗急性肺损伤的，含有 TNFR-Ig融合蛋白和药学上可接受的载体的组合物。
在本发明中，“TNFR-Ig融合蛋白”指由肿瘤坏死因子受体的细胞外段与 免疫球蛋白的Fc片段所形成的融合蛋白。优选的TNFR是II型肿瘤坏死因子受 体。此外，在TNFR和Ig部分之间宜具有长度为10-30个氨基酸的肽接头。优选 的，本发明的药物组合物可采用本申请人在中国专利申请01132074.5中所提 供的TNFR-Ig融合蛋白。
海藻糖(α-D-吡喃葡糖基-(-吡喃葡糖苷))是天然存在的非还原型二 糖。海藻糖的形式包括结晶型的海藻糖二水合物(TD)，非结晶型海藻糖(AT)， 也可以是无水形式的海藻糖，即无水非晶型海藻糖(AAT)和无水结晶海藻糖 (ACT)。本发明中可使用任何物理形式的海藻糖，包括无水、部分水合、完 全水合的海藻糖。
在使用本发明的药物组合物时，是将安全有效量药物组合物用于哺乳动 物，其中该安全有效量通常至少约10μg TNFR-Ig融合蛋白/Kg体重，而且在 大多数情况下不超过约8mg TNFR-Ig融合蛋白/Kg体重，较佳地该剂量是约10 μg/千克体重-约1mg/Kg体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健 康状况、年龄等因素。
具体实施方式
本发明的试验结果已经表明，本发明所述的药物组合物是一种对于治疗 急性肺损伤非常有效的药物。此外，通过有效中和体内过高的TNF，可大大缓 解SARS的临床病症，因此，应用重组人II型TNFR-Ig融合蛋白来治疗SARS，对 SARS的治疗大有裨益，有助于提高治疗效果，降低SARS患者死亡率。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于 说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实 验方法，通常按照现有技术中的常规条件进行。
实施例1 本发明的药物组合物的制备
首先配制100mM的磷酸盐缓冲液，并且调节缓冲液的PH值，使其在PH7.0 左右。在磷酸盐缓冲液中加入适量的海藻糖，使其达到50mg/ml，接着加入 TNFR-Ig融合蛋白，使其达到50mg/ml，获得的药剂可以直接施用于哺乳动物 (包括人)，如通过静脉注射的方式。
另外，也可将本发明的药物组合物制成冻干制剂，以便于运输和贮藏。在需 要施用时，可以用生理可用的溶剂将本发明的药物组合物进行重悬，比如可以使 用蒸馏水进行重悬。
实施例2 药代动力学研究
我们利用正常大鼠进行了本发明的药物组合物与进口对照药品 (ENBRELTM)的药代动力学比较研究。给予大鼠皮下一次注射本品或 ENBRELTM，然后于给药后不同时间采血，利用针对TNFR-Ig特异性的夹心ELISA 法检测大鼠血清中的药物浓度进行分析。
结果显示，本品与ENBRELTM的药-时曲线下面积、半衰期、峰值浓度等指 标上均无显著差异。该结果提示，本品药物动力学性质与ENBRELTM基本相同。 由于ENBRELTM已经是一种研制技术成熟且上市的药物，因此可见本发明的药 物组合物也达到了临床所需的目的。
实施例3 毒性研究
1.急毒
选择20只正常的小鼠，给予小鼠皮下一次性注射相当于推荐临床应用剂 量的400倍的研究药物，在14天的观察期内，全部动物存活且体重增加，无异 常毒性反应现象。
2.长毒
利用恒河猴进行了本品的4周长期毒性试验，以观察恒河猴皮下注射本发 明的药物组合物4周之后，对机体产生的毒性反应及其严重程度，提供毒性反 应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒性反应的剂量，为拟定人用安全剂 量提供参考。
结果显示，在给予剂量分别为0、1、5和15mg/kg，每周注射2次，连续注 射4周，动物的一般症状、血液学和血清生化指标、尿液分析、心电图和病理 检查等均未发现有明显异常，仅见给药2周后部分动物血清中抗体产生。
上述结果与美国FDA公布的关于ENBRELTM的猴4周长期毒性试验的结果非 常接近。因此，在本试验条件下，对恒河猴给药4周是较安全的，安全剂量为 15mg/kg。
实施例4 有效性试验
(1)急性肺损伤试验
对本发明的药物组合物进行临床前药效学研究。使用内毒素来诱导大鼠， 使之产生急性肺损伤症状，然后用本发明的药物组合物静脉注射大鼠。
试验结果表明，在本试验中，该药物最低在1mg/kg体重时可产生明显的 药效作用。
(2)小鼠注射致死剂量TNF-α和TNFR-Ig融合蛋白的试验
在本试验中，通过小鼠注射致死剂量TNF-α模型，研究了皮下注射本发明 的药物组合物的体内中和TNFα的情况。
结果显示，给予小鼠腹腔注射重组人TNF-α(R&D systems)10μg/只，小 鼠均在24h内死亡(20/20)。而24h前皮下注射本发明的药物组合物(500μg/只) 的一组小鼠中则无动物死亡(0/20)。该结果证明，本发明的药物组合物确实 可在体内起到中和TNF-α的作用，且该药物经皮下注射后，至少24h后仍有药 理作用。另外两组动物TNF-α给药剂量提高至20μg，结果使用本发明的药物 组合物的一组动物中死亡7只(存活率65％)，EnbrelTM组动物死亡8只(存活率 60％)；经x2检验，两组动物存活率无显著差异。
综上所述，静脉注射TNFR-Ig融合蛋白可对内毒素诱导的大鼠急性肺损伤 起到防治作用，其作用与剂量呈正相关。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于 说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实 验方法，通常按照现有技术中的常规条件进行。
实施例1 本发明的药物组合物的制备
首先配制100mM的磷酸盐缓冲液，并且调节缓冲液的PH值，使其在PH7.0 左右。在磷酸盐缓冲液中加入适量的海藻糖，使其达到50mg/ml，接着加入 TNFR-Ig融合蛋白，使其达到50mg/ml，获得的药剂可以直接施用于哺乳动物 (包括人)，如通过静脉注射的方式。
另外，也可将本发明的药物组合物制成冻干制剂，以便于运输和贮藏。在需 要施用时，可以用生理可用的溶剂将本发明的药物组合物进行重悬，比如可以使 用蒸馏水进行重悬。
实施例2 药代动力学研究
我们利用正常大鼠进行了本发明的药物组合物与进口对照药品 (ENBRELTM)的药代动力学比较研究。给予大鼠皮下一次注射本品或 ENBRELTM，然后于给药后不同时间采血，利用针对TNFR-Ig特异性的夹心ELISA 法检测大鼠血清中的药物浓度进行分析。
结果显示，本品与ENBRELTM的药-时曲线下面积、半衰期、峰值浓度等指 标上均无显著差异。该结果提示，本品药物动力学性质与ENBRELTM基本相同。 由于ENBRELTM已经是一种研制技术成熟且上市的药物，因此可见本发明的药 物组合物也达到了临床所需的目的。
实施例3 毒性研究
1.急毒
选择20只正常的小鼠，给予小鼠皮下一次性注射相当于推荐临床应用剂 量的400倍的研究药物，在14天的观察期内，全部动物存活且体重增加，无异 常毒性反应现象。
2.长毒
利用恒河猴进行了本品的4周长期毒性试验，以观察恒河猴皮下注射本发 明的药物组合物4周之后，对机体产生的毒性反应及其严重程度，提供毒性反 应的靶器官及其损害的可逆性，确定无毒性反应的剂量，为拟定人用安全剂 量提供参考。
结果显示，在给予剂量分别为0、1、5和15mg/kg，每周注射2次，连续注 射4周，动物的一般症状、血液学和血清生化指标、尿液分析、心电图和病理 检查等均未发现有明显异常，仅见给药2周后部分动物血清中抗体产生。
上述结果与美国FDA公布的关于ENBRELTM的猴4周长期毒性试验的结果非 常接近。因此，在本试验条件下，对恒河猴给药4周是较安全的，安全剂量为 15mg/kg。
实施例4 有效性试验
(1)急性肺损伤试验
对本发明的药物组合物进行临床前药效学研究。使用内毒素来诱导大鼠， 使之产生急性肺损伤症状，然后用本发明的药物组合物静脉注射大鼠。
试验结果表明，在本试验中，该药物最低在1mg/kg体重时可产生明显的 药效作用。
(2)小鼠注射致死剂量TNF-α和TNFR-Ig融合蛋白的试验
在本试验中，通过小鼠注射致死剂量TNF-α模型，研究了皮下注射本发明 的药物组合物的体内中和TNFα的情况。
结果显示，给予小鼠腹腔注射重组人TNF-α(R&D systems)10μg/只，小 鼠均在24h内死亡(20/20)。而24h前皮下注射本发明的药物组合物(500μg/只) 的一组小鼠中则无动物死亡(0/20)。该结果证明，本发明的药物组合物确实 可在体内起到中和TNF-α的作用，且该药物经皮下注射后，至少24h后仍有药 理作用。另外两组动物TNF-α给药剂量提高至20μg，结果使用本发明的药物 组合物的一组动物中死亡7只(存活率65％)，EnbrelTM组动物死亡8只(存活率 60％)；经x2检验，两组动物存活率无显著差异。
综上所述，静脉注射TNFR-Ig融合蛋白可对内毒素诱导的大鼠急性肺损伤 起到防治作用，其作用与剂量呈正相关。
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