宜肝乐片在制备抑制回盲肠腺癌细胞HCT-8细胞增殖药物中
的应用
技术领域
[0001] 本
发明属于中药技术领域,具体涉及一种
宜肝乐片在制备抑制回盲肠腺癌细胞HCT-8细胞增殖药物中的应用及宜肝乐片的制备方法。
背景技术
[0002] 宜肝乐颗粒标准号WS-10148(ZD-0148)-2002,记载于国家中成药标准汇编内科肝胆分册。由鸡矢藤200g、虎杖160g、
马鞭草200g、六月
雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功劳木100g、冷
水花70g作为
原料药制成,具有清
热解毒,利胆退黄的功效。用于肝胆湿热所致的急慢性乙型
肝炎。
[0003]
现有技术中,尚未有宜肝乐片在在制备抑制人回盲肠腺癌细胞HCT-8细胞增殖药物中的应用的报道,也未见有宜肝乐片提取制备方面采用超临界萃取的报道,而传统水煎煮、
乙醇回流提取的方法,工艺粗糙、落后,杂质多,导致患者用量过大,不方便服用,严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
[0004] 发明目的:本发明的目的在于提供一种宜肝乐片在制备抑制回盲肠腺癌细胞HCT-8细胞增殖药物中的应用。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种宜肝乐片的制备方法。
[0006] 本发明的目的是通过如下的方案实现的:宜肝乐片在制备抑制回盲肠腺癌细胞HCT-8细胞增殖药物中的应用,所述宜肝乐片由鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功劳木100g、冷水花70g作为原料药制成,所述宜肝乐片的制备方法包括如下步骤:取鸡矢藤
200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功劳木
100g、冷水花70g,加入到CO2超临界萃取器中,乙醇作为夹带剂,夹带剂占总萃取
溶剂的体积百分比为4-6%,萃取压
力15-30MPa,
温度30-50℃,CO2流量l-3ml/g生药·min,萃取时间
700-800min,得超临界萃取物,将超临界萃取物加入
淀粉,70%乙醇制颗粒,干燥,压片,制成
200片,每片重0.30g。
[0007] 优选的,上述的宜肝乐片在制备抑制回盲肠腺癌细胞HCT-8细胞增殖药物中的应用,所述宜肝乐片的制备方法包括如下步骤:取鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功劳木100g、冷水花70g,加入到CO2超临界萃取器中,乙醇作为夹带剂,夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%,萃取压力25MPa,温度40℃,CO2流量2ml/g生药·min,萃取时间750min,得超临界萃取物,将超临界萃取物加入淀粉,70%乙醇制颗粒,干燥,压片,制成200片,每片重0.30g。
[0008] 现有技术中,宜肝乐颗粒口服,一次10g,一日3-4次。宜肝乐颗粒服药量大。采用本发明方法制备成的宜肝乐片每片重0.30g,每次仅需2片,一日服用3-4次。在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。
[0009] 试验一、不同方法制备的宜肝乐片中大黄素含量的比较l、仪器及试药本发明宜肝乐片:按
实施例1方法制备,使用1500g原料药,经提取制成
200片,每片重0.30g。原宜肝乐颗粒,按照WS-10148(ZD-0148)-2002标准方法制备。
Agilent1200高效液相色谱仪;METTLERAE240
电子分析天平;大黄素对照品(中国药品
生物制品检定所)。
[0010] 2、方法照高效液相色谱法(中国药典2015年版第四部凡例十五)测定。
[0011] 色谱条件及系统适用性试验用十八烷基
硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.1%
磷酸溶液(80∶20)为流动相;检测
波长为437nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于4000。
[0012] 对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品适量,加甲醇制成每1ml含50µg的溶液,即得。
[0013] 本发明的宜肝乐片的供试品溶液的制备 取本发明的宜肝乐片5片,研细,取0.12g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加无水乙醇20ml,超声处理(功率250W,
频率25kHZ)1小时,放冷,滤过,药渣用无水乙醇洗涤4次,每次10ml,合并滤液与洗涤液,蒸干,残渣加稀
盐酸10ml使溶解,加氯仿20ml,加热回流30分钟,放冷,移至分液漏斗中,用少量氯仿洗涤容器,并入分液漏斗中;分取氯仿液,酸液加氯仿洗涤2次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣精密加入甲醇10ml,称定重量,微热使溶解,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
[0014] 对照产品供试品溶液的制备 取本品对照的宜肝乐颗粒20g,研细,取4g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加无水乙醇20ml,超声处理(功率250W,频率25kHZ)1小时,放冷,滤过,药渣用无水乙醇洗涤4次,每次10ml,合并滤液与洗涤液,蒸干,残渣加稀盐酸10ml使溶解,加氯仿20ml,加热回流30分钟,放冷,移至分液漏斗中,用少量氯仿洗涤容器,并入分液漏斗中;分取氯仿液,酸液加氯仿洗涤2次,每次10ml,合并氯仿液,蒸干,残渣精密加入甲醇10ml,称定重量,微热使溶解,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
[0015] 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5µl,注入液相色谱仪,测定,即得。
[0016] 3、结果结果表明,本发明宜肝乐片中大黄素的含量为0.95-1.86mg/片;而原宜肝乐颗粒中大黄素的含量为0.91mg/袋(每袋含颗粒剂10g),每次服用量2片的大黄素含量为原颗粒剂10g含量的2-4倍,在服用量减少的情况下,大黄素含量有很大提高。
[0017] 上述研究表明,采用本发明制备方法制备的宜肝乐片,有效成分含量远远高于WS-10148(ZD-0148)-2002标准记载的方法制备的宜肝乐颗粒。
具体实施方式
[0018] 下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明,以便本领域的技术人员更了解本发明,但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例,凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0019] 实施例1取鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草
170g、功劳木100g、冷水花70g,加入到CO2超临界萃取器中,乙醇作为夹带剂,夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%,萃取压力25MPa,温度40℃,CO2流量2ml/g生药·min,萃取时间
750min,得超临界萃取物,将超临界萃取物加入淀粉,70%乙醇制颗粒,干燥,压片,制成200片,每片重0.30g。
[0020] 经检测,成品中大黄素的含量为1.85mg/片。
[0021] 实施例2取鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草
170g、功劳木100g、冷水花70g,加入到CO2超临界萃取器中,乙醇作为夹带剂,夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%,萃取压力15MPa,温度30℃,CO2流量1ml/g生药·min,萃取时间
900min,得超临界萃取物,将超临界萃取物加入淀粉,70%乙醇制颗粒,干燥,压片,制成200片,每片重0.30g。
[0022] 经检测,成品中大黄素的含量为1.21mg/片。
[0023] 实施例3取鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草
170g、功劳木100g、冷水花70g,加入到CO2超临界萃取器中,乙醇作为夹带剂,夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%,萃取压力30MPa,温度60℃,CO2流量3ml/g生药·min,萃取时间
800min,得超临界萃取物,将超临界萃取物加入淀粉,70%乙醇制颗粒,干燥,压片,制成200片,每片重0.30g。
[0024] 经检测,成品中大黄素的含量为0.95mg/片。
[0025] 实施例4:宜肝乐片抑制人回盲肠腺癌细胞HCT-8细胞增殖的实验研究资料1.实验材料
1.1实验用细胞株
人回盲肠腺癌细胞HCT-8细胞,山东大学实验室细胞库,DMEM+10%FBS常规培养。
[0026] 1.2实验药物研究药物:本发明宜肝乐片:按实施例1方法制备。
[0027] 药液储液:称取100mg宜肝乐片,溶于5ml无水乙醇中,0.2µm滤器过滤,500µldoff管分装,-20℃存储,同时0.2µm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0028] 1.3实验
试剂DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137);胎
牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419);NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-
033Lot.No.1088387);Trypsin(AMRESCO公司);EDTA(AMRESCO公司);
PenicillinGSodiumSalt(AMRESCO公司1);StreptomycinSulfate(AMRESCO);无水乙醇(淄博亚杜兰经贸有限公司);MTT(Biosharp批号:0793):PBS(实验室自配);
1.4实验器材
莱卡倒置
显微镜(德国Leica型号:DMIL);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号:SPECTRAMAX190);C02
培养箱(FORMA型号:3111);超净台(苏净集团安泰公司制造型号:
SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Sprlng公司型号:S/N020579);精密移液器(法国吉尔森公司型